JPH02161334A - 免疫組織学的方法のための複数標本スライド - Google Patents
免疫組織学的方法のための複数標本スライドInfo
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Abstract
め要約のデータは記録されません。
Description
スライドに関する。より詳細には、本発明は複数の標本
を自動画像分析に適切な間隔をあけた配列で乗せたスラ
イド、およびそのようなスライドに密接に関係する技術
に関する。
は、リリエ(Lillie)“″ヒスドパソロシックテ
クニック アンド プラクティカル ヒストケミストリ
ー(Hrstopatho1eg4c Technic
andPractical旧stochemistr
y)”、マツフグローヒル社(McGraw 1lil
l Inc、)、ニューヨーク市、ニューヨーク州(1
965)、74−77頁に記載されている。自己免疫学
の診断に用いるためにスライド上に固定したいろいろな
要素を含む急速凍結させた組織断片については、ナイル
ン(Nairn) 、“フルオレセント プロティン
トレーシング(FluorescentProtefn
Tracing)、第4版、チャーチル(Churc
h i I 1)、リビングストン(Livingst
on)、ロンドン、131138頁(1976)に記載
されている。ジョンソン(Johnson)ら、 ハン
ドブック オブ エキスペリメンタル イムノロジー(
Handbook ofExperimental I
mmanology)” 、第3版、ブラックウェル
サイエンティフィック バプリケ1シロンズ(Blac
kwell 5cientific Publicat
ions) 、オックスフォード、英国(1978)は
、自己免疫試験のために有効であるいろいろな要素を含
んだ凍結組織について、「満足できる切断を得るために
は、組織断片は断片間の間隔をあけずに一緒に凍結させ
ねばならない、 (154頁)という忠告材で記載し
ている。メイソン(Mason)ら、イン プルロック
(In Bullock)ら、“テクニックス オブ
イムノサイトケミストリー(Techniques o
f Im+wunocyto−chemistry)、
第2巻、アカデミツク プレス(Acade+wic
Press)、ロンドン、175−216頁(1983
)は、組織培養上澄液はパラフィンに埋込まれた切片あ
るいは急速凍結組織のクリオスタット(Cryos t
a t)による切片のどちらか一方として試験されるで
あろうと述べている。クリオスタット切片はマルチテス
ト スライド(multieest 5lide)の穴
の中に置かれるであろう(192−193頁)。
細胞のなすりつけ標本として試験されるであろう(19
2頁)と述べている。パッチホラ(、Buttifor
a)は、ラボラトリーインベスティゲーシツン(Lab
oratory Investigation)、蓮、
244−248(1986)の中で免疫組織化学的抗体
試験法にとって有効な複数の腫瘍組織ブロックについて
記載している。さまざまな複数の組織をのせたスライス
が、ストッカー(S tocker)、米国特許第4,
647゜543号明細書に記載されている。
めに有用なコンピューター制御の自動画像分析器は、こ
れに適切なソフトウェアと共に商品として入手可能であ
る。代表的な器械には、レコグニション コンセプト社
(RecognitionConcepts、 Inc
、)ゴールド デアンザ社(GouldDeanza+
Inc、)およびメガベシオン社(Megabesi
on。
をおいた配列で多数の標本断片を乗せたスライドを提供
する。標本断片はどのような種類のものであっても良い
であろう、固定化した、または凍結しているが未固定の
組織の標本および細胞培養標本が望ましい、また本発明
は、そのようなスライドの作製および使用に密接に関連
する技術を包含する。
た配列で乗せている。配列模様は、コンピューター制御
の画像分析に適応するように選択さるであろう。四角形
、即ち正方形または方形の模様が望ましい。
する。典型的には、そのようなスライドはスライド上に
固定された組織または細胞培養の標本断片を保持してい
る。固定または未固定のいずれの凍結組織標本も用いら
れ得る。多(の目的のために、凍結組織のスライドは抗
原のような実質上未修飾の組織成分が確実に保存されて
いることが望ましい。組織標本は既知の方法で染色され
得る。
形の配列で乗せたスライド10を示す、実際問題として
、間隔は自動画像分析に応答するように配置されるであ
ろう。例えば25倍拡大で512×512の配列(ar
ray)においては標識量間隔が最少で3素画または約
75〜100ミクロンであることが望ましい。
織または細胞培養の標本からの断片と共に提供されるこ
とが望ましい。それぞれの比較的大きな標本は任意の適
切な方法、例えば、第2図に示すような多数の刃をもつ
切断装置、で細幅ストリップに切断される。第2図に示
す装置は、所望の細幅の標識ストリップを提供するため
に、適切な寸法のスペーサー手段13によって隔てられ
た一連の刃12を有する。この切断装置の刃およびスペ
ーサーは取りはずし可能な保持手段15をそれぞれがも
つ支持手段14上に固定されている。
検死解剖または手術のような任意の入手可能な出所から
得られるであろう9例えば、細胞培養サンプルはゲル内
に懸濁し、ゲルを平板上に注ぎ、適切な厚さ、好適には
約0.5〜1.5mm、の層を提供するために乾燥させ
、そうした後層を平板から取りはずして、さらに第2図
に示すような装置を用いて細幅のストリップに切断され
る。既知の方法で作られた細胞培養のなすりつけ標本(
メイソン、上記文献の193頁を参照されたい)は、標
本ストリップの別の供給源である。
胞培養液のストリップ16は、第3図に示す型18のよ
うな型の平行の溝17の中へ置かれる。
含む型に添加し、凝固させて、型18からとりはずし、
第4図に示したような凝固した埋込み媒質構築物19を
作成する。
ら伸びた複数の間隔のあいたうね23をもつ反対表面2
2をもつ基礎部分20の形の埋込み媒質からなる。それ
ぞれのうね23は標本ストリップ16を包含している。
がすぐ下に位置する構築物の平面表面に接触している。
在する標本ストリップに接近するための流路25を提供
する。
置かれる。容器の壁には洗浄剤および脱水剤のような流
体の進入および排出を可能にするあき穴27が含まれる
。
ために流路25の中に取り入れられさらに通り抜けるで
あろう。
最終埋込みを行なうための深型内に置かれ、複数標本を
もつブロックが形作られる。Jl柊埋込媒質は慣用的に
は例えばパラフィンあるいは他のワックス、高分子量の
ポリエチレングリコールあるいはポリビニルアルコール
、ニトロセルロース。
された標本切片をそれぞれが含む複数の切片28を提供
するために、ミクロトームまたはその類似装置によって
切断される0間隔をあけて配列された流路25は最終埋
込み物質によって満たされる。
された種類のスライドを提供するために、既知の方法で
スライド上に載せられる。
片をもつ本発明のスライドを提供するためには、急速凍
結した未固定の、望ましくは別々の標本を細幅ストリッ
プに切断し、凍結状態の間に型18のような型の平行溝
18の中に置き、さらに凍結乾燥法に用いるのに適切な
OCTのような埋込み媒質内に埋込み、第4図に示す種
類の凍結した構築物が提供される。凍結している間にそ
れらの構築物を積重ね、さらにこの積重ね構築物は通常
第7図に示されるような複数の間隔のあいた平行の標本
ストリップをもつ凍結ブロックを提供するために、最終
埋込み媒質内に埋込まれる。ブロックは第7図に示され
るように間隔をあけて配列された複数の標本断片を含む
切片を提供するために、例えばクリオスタットによって
薄断片にされる。切片は既知の方法で、凍結している間
にスライド上に載せられ、さらにそうした後凍結乾燥し
てもよい。
置され、限定区分内では、関連する標本断片が自動画像
処理を幾分か容易にするために、グループ化または連合
させられるであろう。例えば、それぞれ異なってはいる
が特徴が分かっている一列の標本が標準として提供され
るために、スライドを横切る位置、例えば最上列に置か
れるであろう。未知標本の縦列はそれぞれの標準を含む
その上または下に提供されるであろう。
もつ装置の斜視図である。 第3図は標本ストリップを受は入れるための平行溝をも
つ型の斜視図である。 第4図は第3図の型から形作られた型のうねに含まれる
標本ストリップをもつ埋込み媒質構築物の斜視図である
。 第5図は第4図に示す構築物の積重ねの斜視図である。 第6図は第5図に示した積重ね構築物を受は入れるため
の穴のあいた壁をもつ容器の斜視図である。 第7図はミクロトームまたは第6図に示したブロック類
偵物によって作製された切片の斜視図である。 10・・・スライド 11・・・組織標本断片
12・・・刃 14・・・支持手段 16・・・標本ストリップ 18・・・型 23・・・うね 25・・・流路 13・・・スペーサー手段 15・・・保持手段 17・・・平行溝 19・・・構築物 24・・・末端表面 26・・・容器 図面の浄吉(内容に変更なし) FIG、 4 FIG。 手 続 補 正 書(其 1、事件の表示 平成1年特許願第176999号 2、発明の名称 免疫組織学的方法のための複数標本スライド3゜ 補正をする者 事件との関係 特許出願人 住所 名 称 シティ・オブ・ホープ 4、代理人 住所 東京都千代田区大手町二丁目2番1号 新大手町ビル 206区 5、補正命令の日付 6、補正の対象 平成 1年10月31日 06苦日)
Claims (1)
- 【特許請求の範囲】 1、(i)少なくとも1個の標本を複数の細幅ストリッ
プ(strip)に切断すること; (ii)該複数ストリップを標本ストリップのグループ
に分離すること; (iii)該グループからのストリップを型内の平行溝
の中へ分離して置くこと; (iv)向かい合った第一および第二表面をもつ基部か
らなる構築物を提供するために、該型内の該ストリップ
を第一の埋込み媒質内に埋込むこと(該第一表面は実質
上平面であり、そして該第二表面はそこから隆起した標
本ストリップを包含するうねをもつ); (v)上に位置する構築物の該うねの末端表面と、この
構築物のすぐ下に位置する構築物の実質上平面である第
一表面とを接触させることによって積重ね構築物を形成
すること(該うね間の空間は流体を受入れるための流路
を形成する);(vi)間隔をあけた配列で平行に中に
埋込まれた標本ストリップを保持するブロックを形成す
るために、該積重ね構築物を第二の埋込み媒質内に埋込
むこと(ストリップをそのように配列すると該ブロック
の切片は間隔のあいた配列の該埋込み標本ストリップの
各々の断面を含む);(vii)該ブロックを、間隔を
あけて配列されたそれぞれの該埋込み標本ストリップの
断面を含むそれぞれの切片に分割すること;および (viii)少なくとも1個のそのようなブロック切片
をスライド上に保持すること; からなる、間隔をあけて配列された標本断片を載せたス
ライドの作製法。 2、請求項1記載の方法で作製したスライド。 3、標本が固定化された組織、凍結した未固定の組織、
または培養細胞である、請求項1記載の方法。 4、(i)標本が保存のために固定化された組織であり
、 (ii)前記第一埋込み媒質が寒天ゲルまたはゼラチン
であり、 (iii)段階(v)で形成された積重ね構築物が、該
構築物のうねの間の空間によって規定される流路に存在
する固定液と接触する位置に置かれ、そして (iv)前記第二埋込み媒質がパラフィン、ポリエチレ
ングリコール、メタクリレート樹脂またはエポキシ樹脂
である、 請求項1記載の方法。 5、請求項4記載の方法で作製したスライド。 6、(i)未固定の凍結した組織標本を複数の細幅スト
リップに切断すること; (ii)該複数ストリップを凍結ストリップのグループ
に分離すること; (iii)各々の該グループからのストリップを型内の
平行溝の中へ分離して置くこと; (iv)向かい合った第一および第二表面をもつ基礎部
分からなる凍結した構築物を提供するために、該型内に
上記のように位置する該ストリップを冷凍用の埋込み媒
質内に埋め込むこと(該第一表面は実質上平面であり、
そして該第二表面はそこから隆起した標本ストリップを
含む複数のうねをもつ); (v)上に位置する積重ね構築物の該うねの末端表面と
この構造物のすぐ下に位置する構築物の平面表面とを接
触させた、積重ね凍結構築物を形成すること; (vi)間隔をあけた配列で平行に中に埋込まれた標本
ストリップを保持する凍結した埋込み媒質ブロックを作
製するために、凍結した積重ね構築物を冷凍用埋込み媒
質内に埋込むこと(該ストリップをそのように配列する
と該ブロックの切片は間隔をあけて配列された該標本ス
トリップそれぞれの断面を含む); (vii)該凍結ブロックを、間隔をあけて配列された
それぞれの該ストリップの凍結した断面を含むそれぞれ
の切片に分割すること;および(viii)少なくとも
1個の該凍結切片をスライド上に保持すること; からなる、間隔のあいた配列をもつ未固定で凍結したま
たは凍結乾燥した組織標本を載せたスライドの作製法。 7、標本断片を自動画像分析に適切な間隔をあけた配列
で載せたスライド。 8、凍結した未固定の組織断片を自動画像分析に適切な
間隔をあけた配列で載せたスライド。 9、組織断片が凍結乾燥したものである、請求項8記載
のスライド。 10、固定化した組織断片を自動画像分析に適切な間隔
をあけた配列で載せたスライド。 11、埋込み媒質で形成された基礎部分(該基礎部分に
向かい合った第一および第二表面をもち、該第一表面は
実質上平面であり、そして該第二表面はそこから隆起し
た複数の間隔のあいた平行のうねをもつ);および 少なくとも数個の該うね内の標本ストリップ;からなる
構築物。 12、前記標本ストリップが固定化した組織、凍結した
未固定の組織、または細胞培養物のストリップである、
請求項11記載の構築物。 13、前記標本ストリップが固定化した組織のストリッ
プであり、かつ埋込み媒質が寒天ゲルまたはゼラチンで
ある、請求項11記載の構築物。 14、前記標本ストリップが凍結した未固定組織のスト
リップであり、かつ埋込み媒質が冷凍剤である、請求項
11記載の構築物。 15、前記うねが実質上平面の末端表面をもつ、請求項
11または12に記載の構築物。 16、積重ねにおいて上に位置する構築物のうねの末端
表面がすぐ下に位置する積重ね構築物の実質上平面であ
る第一表面に接触し、そして該うね間に存在する空間が
平行の流路を規定する、請求項11または12記載の積
重ね構築物。 17、積重ねからなる構築物のうねの中に存在する組織
標本と接触させるために、請求項11記載の積重ね構築
物の流路内に固定液を導入することからなる、複数の組
織標本を実質上同時に固定化するための方法。 18、間隔のあいた配列で中に埋込まれた標本ストリッ
プを保持する埋込み媒質ブロックであって;該ストリッ
プの長軸に垂直な該ブロックの切片は間隔のあいた配列
をもつそれぞれの該埋込みストリップの断面を含む;上
記のブロック。 19、標本ストリップが固定化組織、未固定の凍結組織
、または細胞培養物からなる、請求項18記載のブロッ
ク。 20、標本ストリップが細胞培養物からなる、請求項1
8記載のブロック。 21、1個の既知の標本および複数の未知の標本を含む
少なくとも1つの縦列を提供するために、一列の特徴の
わかった種々の異なる標本、および該列内に少なくとも
1個存在する既知標本の上または下に位置する複数の未
知標本からなる、複数標本のスライド。 22、前記の既知および未知の標本が細胞培養物または
固定化した組織の標本である、請求項21記載の複数標
本スライド。
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