JP3055907B2 - 免疫組織学的方法のための複数標本スライド - Google Patents

免疫組織学的方法のための複数標本スライド

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Description

【発明の詳細な説明】 （産業上の利用分野） 本発明は免疫組織学的手法に有用な複数の標本を乗せ
たスライドに関する。より詳細には、本発明は複数の標
本を自動画像分析に適切な間隔をあけた配列で乗せたス
ライド、およびそのようなスライドに密接に関係する技
術に関する。
（従来技術） さまざまな複数標本スライドが知られている。複数の
組織標本をそれぞれ含むパラフィンブロック切片は、リ
リエ（Lillie）“ヒストパソロジック テクニック ア
ンド プラクテイカル ヒストケミストリー（Histopat
holegic Technic and Practical Histochemistry）”、
マックグローヒル社（McGraw Hill Inc.）、ニューヨー
ク市、ニューヨーク州（1965）、74−77頁に記載されて
いる。自己免疫学の診断に用いるためにスライド上に固
定したいろいろな要素を含む急速凍結させた組織断片に
ついては、ナイルン（Nairn）、“フルオレセント プ
ロテイン トレーシング（Fluorescent Protein Tracin
g）、第４版、チャーチル（Churchill）、リビングスト
ン（Livingston）、ロンドン、131−138頁（1976）に記
載されている。ジョンソン（Johnson）ら、“ハンドブ
ック オブ エキスペリメンタル イムノロジー（Hand
book of Experimental Immanology）”、第３版、ブラ
ックウェル サイエンティフィック パブリケーション
ズ（Blackwell Scientific Publications）、オックス
フォード、英国（1978）は、自己免疫試験のために有効
であるいろいろな要素を含んだ凍結組織について、「満
足できる切断を得るためには、組織断片は断片間の間隔
をあけずに一緒に凍結させねばならない」（154頁）と
いう忠告付で記載している。メイソン（Mason）ら、イ
ン ブルロック（In Bullock）ら、“テクニックス オ
ブ イムノサイトケミストリー（Techniques of Immuno
cytochemistry）、第２巻、アカデミック プレス（Aca
demic Press）、ロンドン、175−216頁（1983）は、組
織培養上澄液はパラフィンに埋込まれた切片あるいは急
速凍結組織のクリオスタット（Cryostat）による切片の
どちらか一方として試験されるであろうと述べている。
クリオスタット切片はマルチテスト スライド（multit
est slide）の穴の中に置かれるであろう（192−193
頁）。またメイソンは、ハイブリドーマ上澄液は空気乾
燥した細胞のなすりつけ標本として試験されるであろう
（192頁）と述べている。バッチホラ（Buttifora）は、
ラボラトリ−インベスティゲーション（Laboratory Inv
estigation）、55、244−248（1986）の中で免疫組織化
学的抗体試験法にとって有効な複数の腫瘍組織ブロック
について記載している。さまざまな複数の組織をのせた
スライスが、ストッカー（Stocker）、米国特許第4,64
7,543号明細書に記載されている。
本発明の間隔をあけた標本配列のスライドを分析する
ために有用なコンピューター制御の自動画像分析器は、
これに適切なソフトウェアと共に商品として入手可能で
ある。代表的な器械には、レコグニション コンセプト
社（Recognition Concepts,Inc.）ゴールド デアンザ
社（Gould Deanza,Inc.）およびメガベシオン社（Megab
esion,Inc.）のものが含まれる。
（発明が解決しようとする課題） 本発明はコンピュータ制御の自動画像分析に適切な間
隔をおいた配列で多数の標本断片を乗せたスライドを提
供する。標本断片はどのような種類のものであっても良
いであろう。固定化した、または凍結しているが未固定
の組織の標本および細胞培養標本が望ましい。また本発
明は、そのようなスライドの作製および使用に密接に関
連する技術を包含する。
（課題を解決するための手段） 本発明によるスライドは、複数の標本断片を間隔のあ
いた配列で乗せている。配列模様は、コンピューター制
御の画像分析に適応するように選択されるであろう。四
角形、即ち正方形または方形の模様が望ましい。
特に、本発明は免疫組織学的手法に有用なスライドに
関する。典型的には、そのようなスライドはスライド上
に固定された組織または細胞培養の標本断片を保持して
いる。固定または未固定のいずれの凍結組織標本も用い
られ得る。多くの目的のために、凍結組織のスライドは
抗原のような実質上未修飾の組織成分が確実に保存され
ていることが望ましい。組織標本は既知の方法で染色さ
れ得る。
第１図は、複数の組織標本断片11を実質上等間隔の方
形の配列で乗せたスライド10を示す。実際問題として、
間隔は自動画像分析に応答するように配置されるであろ
う。例えば25倍拡大で512×512の配列（array）におい
ては標識間間隔が最少で３素画または約75〜100ミクロ
ンであることが望ましい。
本発明によるスライドは複数の比較的大きな各種の組
織または細胞培養の標本からの断片と共に提供されるこ
とが望ましい。それぞれの比較的大きな標本は任意の適
切な方法、例えば、第２図に示すような多数の刃をもつ
切断装置、で細幅ストリップに切断される。第２図に示
す装置は、所望の細幅の標識ストリップを提供するため
に、適切な寸法のスペーサー手段13によって隔てられた
一連の刃12を有する。この切断装置の刃およびスペーサ
ーは取りはずし可能な保持手段15をそれぞれがもつ支持
手段14上に固定されている。
細幅のストリップに細別される比較的大きな組織標本
は検死解剖または手術のような任意の入手可能な出所か
ら得られるであろう。例えば、細胞培養サンプルはゲル
内に懸濁し、ゲルを平板上に注ぎ、適切な厚さ、好適に
は約0.5〜1.5mm、の層を提供するために乾燥させ、そう
した後層を平板から取りはずして、さらに第２図に示す
ような装置を用いて細幅のストリップに切断される。既
知の方法で作られた細胞培養のなすりつけ標本（メイソ
ン、上記文献の193頁を参照されたい）は、標本ストリ
ップの別の供給源である。
固定化した、あるいは未固定で凍結した組織、または
細胞培養液のストリップ16は、第３図に示す型18のよう
な型の平行の溝17の中へ置かれる。適切な埋込み媒質、
例えば寒天ゲルを標本ストリップを含む型に添加し、凝
固させて、型18からとりはずし、第４図に示したような
凝固した埋込み媒質構築物19を作成する。
構築物19は実質上平面である表面21,およびそれから
伸びた複数の間隔のあいたうね23をもつ反対表面22をも
つ基礎部分20の形の埋込み媒質からなる。それぞれのう
ね23は標本ストリップ16を包含している。
複数の構築物19は第５図に示すように積重ねる。積重
ね構築物では、それぞれのうね23の末端表面24がすぐ下
に位置する構築物の平面表面に接触している。うねの間
の空間は、固定液のような液体がうねの中に存在する標
本ストリップに接近するための流路25を提供する。
積重ね構築物は第６図に示されるような容器26の中に
置かれる。容器の壁には洗浄剤および脱水剤のような流
体の進入および排出を可能にするあき穴27が含まれる。
固定液は標本ストリップをさらに化学的に加工処理す
るために流路25の中に取り入れられさらに通り抜けるで
あろう。
固定化後、積重ね構築物19は容器26から取り出し、最
終埋込みを行なうための深型内に置かれ、複数標本をも
つブロックが形作られる。最終埋込媒質は慣用的には例
えばパラフィンあるいは他のワックス、高分子量のポリ
エチレングリコールあるいはポリビニルアルコール，ニ
トロセルロース，メタクリレート樹脂またはエポキシ樹
脂であろう。
ブロックは、第７図に示されるような間隔をあけて配
列された標本切片をそれぞれが含む複数の切片28を提供
するために、ミクロトームまたはその類似装置によって
切断される。間隔をあけて配列された流路25は最終埋込
み物質によって満たされる。
ブロック切片は、通常第１図のスライド10によって示
された種類のスライドを提供するために、既知の方法で
スライド上に載せられる。
未固定ではあるが凍結した組織または凍結培養細胞の
断片をもつ本発明のスライドを提供するためには、急速
凍結した未固定の、望ましくは別々の標本を細幅ストリ
ップに切断し、凍結状態の間に型18のような型の平行溝
18の中に置き、さらに凍結乾燥法に用いるのに適切なOC
Tのような埋込み媒質内に埋込み、第４図に示す種類の
凍結した構築物が提供される。凍結している間にそれら
の構築物を積重ね、さらにこの積重ね構築物は通常第７
図に示されるような複数の間隔のあいた平行の標本スト
リップをもつ凍結ブロックを提供するために、最終埋込
み媒質内に埋込まれる。ブロックは第７図に示されるよ
うに間隔をあけて配列された複数の標本断片を含む切片
を提供するために、例えばクリオスタットによって薄断
片にされる。切片は既知の方法で、凍結している間にス
ライド上に載せられ、さらにそうした後凍結乾燥しても
よい。
本発明のスライド上の標本断片は限定された区分内に
配置され、限定区分内では、関連する標本断片が自動画
像処理を幾分か容易にするために、グループ化または連
合させられるであろう。例えば、それぞれ異なってはい
るが特徴が分かっている一列の標本が標準として提供さ
れるために、スライドを横切る位置、例えば最上列に置
かれるであろう。未知標本の縦列はそれぞれの標準を含
むその上または下に提供されるであろう。
【図面の簡単な説明】
第１図は本発明によるスライドを説明する略図である。 第２図は標本をストリップに切断するための複数の刃を
もつ装置の斜視図である。 第３図は標本ストリップを受け入れるための平行溝をも
つ型の斜視図である。 第４図は第３図の型から形作られた型のうねに含まれる
標本ストリップをもつ埋込み媒質構築物の斜視図であ
る。 第５図は第４図に示す構築物の積重ねの斜視図である。 第６図は第５図に示した積重ね構築物を受け入れるため
の穴のあいた壁をもつ容器の斜視図である。 第７図はミクロトームまたは第６図に示したブロック類
似物によって作製された切片の斜視図である。 10……スライド、11……組織標本断片 12……刃、13……スペーサー手段 14……支持手段、15……保持手段 16……標本ストリップ、17……平行溝 18……型、19……構築物 23……うね、24……末端表面 25……流路、26……容器
───────────────────────────────────────────────────── フロントページの続き (56)参考文献 特開 昭59−210364（ＪＰ，Ａ) 実開 昭58−184646（ＪＰ，Ｕ) 欧州特許出願公開238190（ＥＰ，Ａ ２) (58)調査した分野(Int.Cl.7，ＤＢ名) G01N 1/28 G01N 1/36

Claims (12)

    (57)【特許請求の範囲】
  1. 【請求項１】（ｉ）少なくとも１個の標本を複数の細幅
    ストリップ（strip）に切断すること； （ii）該複数ストリップを標本ストリップのグループに
    分離すること； （iii）該グループからのストリップを型内の平行溝の
    中へ分離して置くこと； （iv）向かい合った第一および第二表面をもつ基部から
    なる構築物であって、該第一表面は実質上平面であり、
    そして第二表面はそこから隆起した標本ストリップを包
    含するうねをもつ構築物を提供するために、該型内の該
    ストリップを第一の埋込み媒質内に埋込むこと； （ｖ）上に位置する構築物の該うねの末端表面と、この
    構築物のすぐ下に位置する構築物の実質上平面である第
    一表面とを接触させることによって積重ね構築物であっ
    て、該うね間の空間は流体を受入れるための流路を形成
    する積重ね構築物を形成すること； （vi）間隔をあけた配列で平行に中に埋込まれた標本ス
    トリップを保持するブロックであって、ストリップをそ
    のように配列すると該ブロックの切片は間隔のあいた配
    列の該埋込み標本ストリップの各々の断面を含むブロッ
    クを形成するために、該積重ね構築物を第二の埋込み媒
    質内に埋込むこと； （vii）該ブロックを、間隔をあけて配列されたそれぞ
    れの該埋込み標本ストリップの断面を含むそれぞれの切
    片に分割すること；および （viii）少なくとも１個のそのようなブロック切片をス
    ライド上に保持すること； からなる、間隔をあけて配列された標本断片を載せたス
    ライドの作製法。
  2. 【請求項２】請求項１記載の方法で作製したスライド。
  3. 【請求項３】標本が固定化された組織、凍結した未固定
    の組織、または培養細胞である、請求項１記載の方法。
  4. 【請求項４】（ｉ）標本が保存のために固定化された組
    織であり、 （ii）前記第一埋込み媒質が寒天ゲルまたはゼラチンで
    あり、 （iii）段階（ｖ）で形成された積重ね構築物が、該構
    築物のうねの間の空間によって規定される流路に存在す
    る固定液と接触する位置に置かれ、そして （iv）前記第二埋込み媒質がパラフィン、ポリエチレン
    グリコール、メタクリレート樹脂またはエポキシ樹脂で
    ある、 請求項１記載の方法。
  5. 【請求項５】請求項４記載の方法で作製したスライド。
  6. 【請求項６】（ｉ）未固定の凍結組織標本を複数の細幅
    ストリップに切断すること； （ii）該複数ストリップを凍結ストリップのグループに
    分離すること； （iii）各々の該グループからのストリップを型内の平
    行溝の中へ分離して置くこと； （iv）向かい合った第一および第二表面をもつ基礎部分
    からなる凍結した構築物であって、該第一表面は実質上
    平面であり、そして該第二表面はそこから隆起した標本
    ストリップを含む複数のうねをもつ構築物を提供するた
    めに、該型内に上記のように位置する該ストリップを冷
    凍用の埋込み媒質内に埋込むこと； （ｖ）上に位置する積重ね構築物の該うねの末端表面と
    この構造物のすぐ下に位置する構築物の平面表面とを接
    触させた、積重ね凍結構築物を形成すること； （vi）間隔をあけた配列で平行に中に埋込まれた標本ス
    トリップを保持する凍結した埋込み媒質ブロックであっ
    て、該ストリップをそのように配列すると該ブロックの
    切片は間隔をあけて配列された該標本ストリップそれぞ
    れの断面を含むブロックを作製するために、凍結した積
    重ね構築物を冷凍用埋込み媒質内に埋込むこと； （vii）該凍結ブロックを、間隔をあけて配列されたそ
    れぞれの該ストリップの凍結した断面を含むそれぞれの
    切片に分割すること；および （viii）少なくとも１個の凍結切片をスライド上に保持
    すること； からなる、間隔のあいた配列をもつ未固定で凍結しまた
    は凍結乾燥した組織標本を載せたスライドの作製法。
  7. 【請求項７】埋込み媒質で形成された基礎部分であっ
    て、該基礎部分に向かい合った第一および第二表面をも
    ち、該第一表面は実質上平面であり、そして該第二表面
    はそこから隆起した複数の間隔のあいた平行のうねをも
    つ基礎部分；および 少なくとも数個の該うね内の標本ストリップ； 積重ねにおいて上に位置する構築物のうねの末端表面が
    すぐ下に位置する積重ね構築物の実質上平面な第一表面
    に接触し、 該うね間に存在する空間が平行な流路を規定する； からなる積重ね構築物。
  8. 【請求項８】前記標本ストリップが固定化した組織、凍
    結した未固定の組織、または細胞培養物のストリップで
    ある、請求項７記載の積重ね構築物。
  9. 【請求項９】前記うねが実質上平面の末端表面をもつ、
    請求項７または８に記載の積重ね構築物。
  10. 【請求項１０】前記標本ストリップが固定化した組織の
    ストリップであり、かつ埋込み媒質が寒天ゲルまたはゼ
    ラチンである、請求項７記載の積重ね構築物。
  11. 【請求項１１】前記標本ストリップが凍結した未固定組
    織のストリップであり、かつ埋込み媒質が冷凍剤であ
    る、請求項７記載の積重ね構築物。
  12. 【請求項１２】積重ねからなる構築物のうねの中に存在
    する組織標本と接触させるために、請求項７記載の積重
    ね構築物の流路内に固体液を導入することからなる、複
    数の組織標本を実質上同時に固定化するための方法。
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