JPH02138978A - 新型蛋白質、該遺伝子を含有する配列、ベクター、製造方法及び用途 - Google Patents
新型蛋白質、該遺伝子を含有する配列、ベクター、製造方法及び用途Info
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- JPH02138978A JPH02138978A JP1120229A JP12022989A JPH02138978A JP H02138978 A JPH02138978 A JP H02138978A JP 1120229 A JP1120229 A JP 1120229A JP 12022989 A JP12022989 A JP 12022989A JP H02138978 A JPH02138978 A JP H02138978A
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Abstract
(57)【要約】本公報は電子出願前の出願データであるた
め要約のデータは記録されません。
め要約のデータは記録されません。
Description
本発明は新型粘装ポリペプブド、このポリペプチドの製
造方法、この蛋白質に対りる抗体、上記ポリペプチド中
に存在する抗原決定基に対重る抗体の存在を生物標本で
検出づるための検定、及びウィルス複製に及ぼり−この
蛋白質の？イプス効果に対する検定に間型る。 ヒト免疫不全ウィルス（ｒ−Ｉ Ｉ Ｖ −１、ｌ」−
ｌ’１−ＶＩＩ［、Ｌ−△■又はｌ−１’ｌ−Ｌ−Ｖ
、−、Ｉ［［／ Ｌ Ａ Ｖとも言われる）は後大竹免
疫不全症候群（ＡＩＤＳ）及び関連疾患の病因である［
１３ ａｒｒｅ−Ｓ １ｎｏｕｓｓｉ等。 Ｃ！ＱｎＣｅ ２２０ ： ８６８”□８７１（１９
８３） ： Ｇａ１ｌｏ等。 ’Ｃｉ助Ｃｅ ２２４： ５００＝５０３（１９８４
） ： １ａｎｅ等。 ｌ ｅｖｙ等、 ５ｃｉｅｎＣｅ ２２！ｉ： ８４
０−８４２（１９８４） ；ｐｏｐｏｖｉｃ雪、 ３Ｃ
１ｅｎＣｅ ２２４： ４９７− ！１ｏｏ（１９８
４） ：３ ａｒｎｇａｄｈａｒａｎ等、 ５ｃｉｅｎ
ｃｅ ２２４： ５０６−５０８（１９８４） ；
Ｓｉｅｇａｌ 等’、 Ｎ、 ［ｎｏｌ 、
Ｊ９Ｍｃｄユ匹： １４３９へ、１４４４（１９８１
） ］。長期無症候明間とその後の免疫系及び中枢神軽
系の進行竹変ゼ１が本疾患の特徴である。本ウィルスの
研究から、複製は高度に調節されており、口つ］リンパ
球のＣＤ４陽性ヘルパーザブレツｉ・の潜伏感染と溶菌
感染とが組織培養中で起ることが示されている［ Ｚａ
ｇｕｒｙ 智、 ５ｃｉｅｎｃｅ ２３１ ： ８５
０〜８！１３（１９８６） ］。感染患石にＪ３けるウ
ィルス発現もまた、感染ウィルスの力価が本疾患経過を
通じてずつと低い場合は調節されるものと思われる。 ｔｌ ｌ Ｖ−１の複製及σゲノム構成の分子的研究か
らは、それが少なくとも８個の遺伝子を−１−ド化する
ことが示され−Ｕ イる［ １’＜ ａｔｎｅｒ等、１
０’、ｕ ｒ ｃ−３１３： ２７７〜２８４（１９
８５） ： ５ａｎＣ１ＩＱ７− Ｐｅ５ｃａｄｏｒ
等、 ５ｃｉｅｎｃｅ ２２７： ４８４〜４９２（
１９８！ｉ） ： Ｍｕｃｓｉｎｇ等、 Ｎａｔｕｒｅ
３１３： ４！１０〜４ｈ７（１９８５） ；Ｗ
ａｉｎ１−１ ｏｂｓｏｎ ｆｆ、 □ ： ９−−
１７ （１９８５） ］ 、 ３種類の遺伝子、１なわ
ち１旦１道伝子、ｐ」ｙ」−遺伝子及びｅｎｖｉ伝子は
Ｊべ（のレト［−１ウイルスに共通している。しかしな
がら、そのゲノムはまた、大半のしし・１」ウィルスに
共通しく認められるわりではない別のｂつの遺伝ｆ１す
なわらｓｏｒ遺伝子、ｔａｔ：ｉ伝ｊ、ａｒｔ−３ｐ仏
子、３’ｏｒ７３ＭＩ仏子及びＲ遺伝子をもコード化す
る。 ［Ｓ ０ｄｒｏｓｋｉ 等、３ Ｃｉ（！ｎＣｅ
２３１ ： １！ｉ４９〜１！１５３（１９８６）
： Ａ ｒ’ Ｖ ａ等、 ３ ｃｉｅｎｃｅ ２２９
： Ｇ９〜７３（１９８５） ： ５ＯｄｒＯ３
ｋｉ 等 、 ５ｃｉｅｎｃｅ ２２７： １
７１〜１７３（１９８５） ： ３ｏｄｒｏｓｋｉ
等、 ＮａｔｌｌｒＯ３２１： ４１２〜４
１７（１９８６） ； ｒ−ｃｉｎｂｃｒｏ ’
、Ｌ Ｃａ１ｌ ４６： ８０７〜８１７（１
９８６） ； Ｗｏｎｇ−８ｔａａｌ’：ｒ７： 、
Ｊ’ −ａｓａｎｄ ｕｍａｎ ｅｔ
ｒｏｖｉｒｕｓｃｓ ３：３３−３９（１９８７）；
これらは号べで参照にＪ、り木明細書中に含めるものと
する。］ その他のし［・１−１ウイルス、すなわ１う１−ＩＩＶ
−ＩＴ及び３１ｍ１ａｎ免疫不全ウイルス（ＳＩＶ）（
従来ＳＴ’１Ｖ−Ｉと呼んでいた）のウィルスゲノム由
来のヌクレオブト配列もまた１′ａシ調節配列及びａｒ
ｔ調節配列を含み、４Ｍ造遺伝子の含有に加えてトラン
スアクヂベーションを示す［Ｇｕｙａｄｃｒｉ 。 ａｔｕｒｅ ３２６： ６６２〜６６９（１９８７
） ； （Ｃｈａｋｒａｂａｒｔ等、 Ｎ、ａｔｕｒｅ
３２８： ５４３〜５４７ （１９８７） ］。 ＨＩＶ−１と、ｌ−１１Ｖ 、−Ｈのような他のし１−
１コウイルスとを容易に区別できるブノ法があれば役に
立つと思われる。 ＡＩＤＳウィルスに対するワクチンの開発に付随する問
題の１つは、ＨＩ Ｖの種々の株が高度に保存されてい
るわけではないことである。また、で多大の変安性が認
められる。しＩこがって、細胞表面に吸着し且゛つ安な
るＨＩＶ株で高度に保存される別の蛋白質がある場合に
それはイｊ用であると思われる。 ウィルス複製にマイブス効果（負の作用）を示すｌ−Ｉ
Ｉ Ｖ産物はどれも、治療に用いる可能性を評価する
必要がある。特に、負の作用を増強又は模倣する作因ど
しての薬剤の有用性を評価するために、この負の作用を
検定することが必要である。 発明の要約 １−１Ｉ■−１感染細胞により発現される蛋白質をわれ
われは見出した。その蛋白質は分子ｉが約１６ｋＤであ
るが、しかし１５ｋＤ型に開裂する。この蛋白質し１抗
原決定基を有し、ＡＩＤＳ感染患者から得た患者抗血清
はこの蛋白質の両型を認識するが一方、正常思召の抗血
清はそれを認識しない。 この蛋白質は培養ヒｌ−ＣＤ ４＋クリンパにおりるｌ
−１１Ｖ−１ウイルス複製に負の作用を及ばずど考えら
れる。 光Ｊ［医道」Ｉ ＨＩ Ｖ−１が付加的蛋白質を１−ド［）、またこの蛋
白質にり・１する抗体がＨＩＶ、−１感染名の血清中に
検出されることが判明した。さらに、ＨＩＶ−１単離物
質と他のヒト及び１ノル免疫不全ウイルスとを区別する
ためにこの蛋白質を用いることが（゛きる［ Ｑ ｕｙ
ａｄｅｒ、 Ｍ 、等、 Ｎａｔｕｒｅ３２６：上記（
１９８７） ： １−１ｉｒｓｃｈ 、 Ｖ 、等、
Ｃａｌ＋４９： ３０７−３１９（１９８７） ；
Ｃｈａｋｒａｂａｒｔｉ、 Ｌ−、等。 Ｎ ａｔｌｌｒｅ ３２８ ：上記コ。くれは後者ウ
ィルスが同様の蛋白質をコードし４ｆいことも判明し゛
（いるからである。 この蛋白質は、）−１１Ｖ−１ゲノムのヌクレオブト５
５４１〜８０１７に対応りる十分な数のヌクレフ１ｆド
を含むｌ）ＮΔ断片により発現されるが、この場合ΔＵ
Ｇ ：］トンがこの領域のりぐト流に適切な読み枠（
゛挿入され′Ｃおリポリベブブドを発現づることができ
る。この領域は典型的にばＵ開放読み枠（ｏｐｅｎ ｒ
ｅａｄｉｎｇ ｆｒａｍｅ）に対応覆るト１ Ｔ Ｖ−
１のｆ−ａ ｔ Ｍ包子及びａ ｒ シＭ伝了の第一二
］−ド化エキソンど外膜〈■ンベローブ）糖蛋白質遺伝
ｒとの間の領域からのこの開放読み枠の模式図を図１八
に承り−ｏしかしながら、多数の株は適当な読み枠中に
Ａ Ｕ Ｇ−コドンを酋まない。ＬＩ Ｉ Ｖｌの［ｌ
ｉ株にはこのような配置が含まれている。図１△は、Ｓ
Ｉ Ｖ （２０，２１）及びＩ−Ｉ Ｔ Ｖ −２（
［マＯＤ甲離物、１９）ど比較した場合の１−１１ Ｖ
ｌ（Ｅｌｉ中頭物、２４）の中心領域の遺伝Ｐ面構成を
示（）でいる。矢印はウィルス遺伝子におけるイニシＴ
−タＡ Ｕ Ｇコドンを指しでいる。多数の１−Ｉ Ｉ
Ｖ −、１株（５１、アミノ酸艮が約８０へ・８２で
あつＣΔＵＧ−コドンにより開始された場合にこの領域
から合成されるこの蛋白ｖ′［を二１− ド化する能力
があ１す る。図Ｉ Ｂ ＋；１種々の株間のこの蛋白ｖ１配列を
並、；ｄして示したものである。［ｌｉ株を参照の１．
ｌ：めに挙げる。標準的プノ法を用いて空所（）を導入
し、比較し易くした。Ｖ印は同一アミノ酸を示１Ｊ、。 比較したＩＩＩＶ甲離物とし−（は、ｌ′：ｌｉ、Ｍａ
［、Ａ１１ｚｏｎ 、 Ｍ、、等、 （’：：Ｃｌｌ
４６： ６３−７４（１９８６） Ｊ 、 ＨＸＢＣ２
，１３１−１−１０，［３１Ｎ３゜＋）ｌｌＸＤ３ ［
Ｒａｔｎｅｒ 、 ｌ−、等、 Ｎａｔｕｒｅ ３１
３：２７７〜２８３（１９８！ｉ） Ｊ 、 Ｂ
ＲＬノ ［Ｗａｉｎ−１１ｏｂｓｏｎ 。 Ｓ等、 Ｃｅ１ｌ ４０： ９□−１７（１９８！ｉ
） ］及びＵＳ１２［３ａｎｃｈｃｚ−１）ｃｓｃａｄ
ｏｒ 、 ＲＣ”ｌ、 ３ｃｉｃｎｃｃ ２２７：４８
４・〜４９２（１９８！］） ］が挙げら札る。 これらの株を一般的に人ｒ′Ｃきる。ｔＪｓ１２は３９
番目に終止コドンを右Ｊ−るが、１ノかしながら、単一
点ル−ムシフｌ−Ｌ；Ｌ、［゛１１谷照配列に比し゛（
Ｊ：＜保存されるアミノ酸長４３だ６１人いい蛋白質を
生じる。この新（）い蛋白質は疎水性リーダー配列を含
有する（図１ｃ）が、これ
造方法、この蛋白質に対りる抗体、上記ポリペプチド中
に存在する抗原決定基に対重る抗体の存在を生物標本で
検出づるための検定、及びウィルス複製に及ぼり−この
蛋白質の？イプス効果に対する検定に間型る。 ヒト免疫不全ウィルス（ｒ−Ｉ Ｉ Ｖ −１、ｌ」−
ｌ’１−ＶＩＩ［、Ｌ−△■又はｌ−１’ｌ−Ｌ−Ｖ
、−、Ｉ［［／ Ｌ Ａ Ｖとも言われる）は後大竹免
疫不全症候群（ＡＩＤＳ）及び関連疾患の病因である［
１３ ａｒｒｅ−Ｓ １ｎｏｕｓｓｉ等。 Ｃ！ＱｎＣｅ ２２０ ： ８６８”□８７１（１９
８３） ： Ｇａ１ｌｏ等。 ’Ｃｉ助Ｃｅ ２２４： ５００＝５０３（１９８４
） ： １ａｎｅ等。 ｌ ｅｖｙ等、 ５ｃｉｅｎＣｅ ２２！ｉ： ８４
０−８４２（１９８４） ；ｐｏｐｏｖｉｃ雪、 ３Ｃ
１ｅｎＣｅ ２２４： ４９７− ！１ｏｏ（１９８
４） ：３ ａｒｎｇａｄｈａｒａｎ等、 ５ｃｉｅｎ
ｃｅ ２２４： ５０６−５０８（１９８４） ；
Ｓｉｅｇａｌ 等’、 Ｎ、 ［ｎｏｌ 、
Ｊ９Ｍｃｄユ匹： １４３９へ、１４４４（１９８１
） ］。長期無症候明間とその後の免疫系及び中枢神軽
系の進行竹変ゼ１が本疾患の特徴である。本ウィルスの
研究から、複製は高度に調節されており、口つ］リンパ
球のＣＤ４陽性ヘルパーザブレツｉ・の潜伏感染と溶菌
感染とが組織培養中で起ることが示されている［ Ｚａ
ｇｕｒｙ 智、 ５ｃｉｅｎｃｅ ２３１ ： ８５
０〜８！１３（１９８６） ］。感染患石にＪ３けるウ
ィルス発現もまた、感染ウィルスの力価が本疾患経過を
通じてずつと低い場合は調節されるものと思われる。 ｔｌ ｌ Ｖ−１の複製及σゲノム構成の分子的研究か
らは、それが少なくとも８個の遺伝子を−１−ド化する
ことが示され−Ｕ イる［ １’＜ ａｔｎｅｒ等、１
０’、ｕ ｒ ｃ−３１３： ２７７〜２８４（１９
８５） ： ５ａｎＣ１ＩＱ７− Ｐｅ５ｃａｄｏｒ
等、 ５ｃｉｅｎｃｅ ２２７： ４８４〜４９２（
１９８！ｉ） ： Ｍｕｃｓｉｎｇ等、 Ｎａｔｕｒｅ
３１３： ４！１０〜４ｈ７（１９８５） ；Ｗ
ａｉｎ１−１ ｏｂｓｏｎ ｆｆ、 □ ： ９−−
１７ （１９８５） ］ 、 ３種類の遺伝子、１なわ
ち１旦１道伝子、ｐ」ｙ」−遺伝子及びｅｎｖｉ伝子は
Ｊべ（のレト［−１ウイルスに共通している。しかしな
がら、そのゲノムはまた、大半のしし・１」ウィルスに
共通しく認められるわりではない別のｂつの遺伝ｆ１す
なわらｓｏｒ遺伝子、ｔａｔ：ｉ伝ｊ、ａｒｔ−３ｐ仏
子、３’ｏｒ７３ＭＩ仏子及びＲ遺伝子をもコード化す
る。 ［Ｓ ０ｄｒｏｓｋｉ 等、３ Ｃｉ（！ｎＣｅ
２３１ ： １！ｉ４９〜１！１５３（１９８６）
： Ａ ｒ’ Ｖ ａ等、 ３ ｃｉｅｎｃｅ ２２９
： Ｇ９〜７３（１９８５） ： ５ＯｄｒＯ３
ｋｉ 等 、 ５ｃｉｅｎｃｅ ２２７： １
７１〜１７３（１９８５） ： ３ｏｄｒｏｓｋｉ
等、 ＮａｔｌｌｒＯ３２１： ４１２〜４
１７（１９８６） ； ｒ−ｃｉｎｂｃｒｏ ’
、Ｌ Ｃａ１ｌ ４６： ８０７〜８１７（１
９８６） ； Ｗｏｎｇ−８ｔａａｌ’：ｒ７： 、
Ｊ’ −ａｓａｎｄ ｕｍａｎ ｅｔ
ｒｏｖｉｒｕｓｃｓ ３：３３−３９（１９８７）；
これらは号べで参照にＪ、り木明細書中に含めるものと
する。］ その他のし［・１−１ウイルス、すなわ１う１−ＩＩＶ
−ＩＴ及び３１ｍ１ａｎ免疫不全ウイルス（ＳＩＶ）（
従来ＳＴ’１Ｖ−Ｉと呼んでいた）のウィルスゲノム由
来のヌクレオブト配列もまた１′ａシ調節配列及びａｒ
ｔ調節配列を含み、４Ｍ造遺伝子の含有に加えてトラン
スアクヂベーションを示す［Ｇｕｙａｄｃｒｉ 。 ａｔｕｒｅ ３２６： ６６２〜６６９（１９８７
） ； （Ｃｈａｋｒａｂａｒｔ等、 Ｎ、ａｔｕｒｅ
３２８： ５４３〜５４７ （１９８７） ］。 ＨＩＶ−１と、ｌ−１１Ｖ 、−Ｈのような他のし１−
１コウイルスとを容易に区別できるブノ法があれば役に
立つと思われる。 ＡＩＤＳウィルスに対するワクチンの開発に付随する問
題の１つは、ＨＩ Ｖの種々の株が高度に保存されてい
るわけではないことである。また、で多大の変安性が認
められる。しＩこがって、細胞表面に吸着し且゛つ安な
るＨＩＶ株で高度に保存される別の蛋白質がある場合に
それはイｊ用であると思われる。 ウィルス複製にマイブス効果（負の作用）を示すｌ−Ｉ
Ｉ Ｖ産物はどれも、治療に用いる可能性を評価する
必要がある。特に、負の作用を増強又は模倣する作因ど
しての薬剤の有用性を評価するために、この負の作用を
検定することが必要である。 発明の要約 １−１Ｉ■−１感染細胞により発現される蛋白質をわれ
われは見出した。その蛋白質は分子ｉが約１６ｋＤであ
るが、しかし１５ｋＤ型に開裂する。この蛋白質し１抗
原決定基を有し、ＡＩＤＳ感染患者から得た患者抗血清
はこの蛋白質の両型を認識するが一方、正常思召の抗血
清はそれを認識しない。 この蛋白質は培養ヒｌ−ＣＤ ４＋クリンパにおりるｌ
−１１Ｖ−１ウイルス複製に負の作用を及ばずど考えら
れる。 光Ｊ［医道」Ｉ ＨＩ Ｖ−１が付加的蛋白質を１−ド［）、またこの蛋
白質にり・１する抗体がＨＩＶ、−１感染名の血清中に
検出されることが判明した。さらに、ＨＩＶ−１単離物
質と他のヒト及び１ノル免疫不全ウイルスとを区別する
ためにこの蛋白質を用いることが（゛きる［ Ｑ ｕｙ
ａｄｅｒ、 Ｍ 、等、 Ｎａｔｕｒｅ３２６：上記（
１９８７） ： １−１ｉｒｓｃｈ 、 Ｖ 、等、
Ｃａｌ＋４９： ３０７−３１９（１９８７） ；
Ｃｈａｋｒａｂａｒｔｉ、 Ｌ−、等。 Ｎ ａｔｌｌｒｅ ３２８ ：上記コ。くれは後者ウ
ィルスが同様の蛋白質をコードし４ｆいことも判明し゛
（いるからである。 この蛋白質は、）−１１Ｖ−１ゲノムのヌクレオブト５
５４１〜８０１７に対応りる十分な数のヌクレフ１ｆド
を含むｌ）ＮΔ断片により発現されるが、この場合ΔＵ
Ｇ ：］トンがこの領域のりぐト流に適切な読み枠（
゛挿入され′Ｃおリポリベブブドを発現づることができ
る。この領域は典型的にばＵ開放読み枠（ｏｐｅｎ ｒ
ｅａｄｉｎｇ ｆｒａｍｅ）に対応覆るト１ Ｔ Ｖ−
１のｆ−ａ ｔ Ｍ包子及びａ ｒ シＭ伝了の第一二
］−ド化エキソンど外膜〈■ンベローブ）糖蛋白質遺伝
ｒとの間の領域からのこの開放読み枠の模式図を図１八
に承り−ｏしかしながら、多数の株は適当な読み枠中に
Ａ Ｕ Ｇ−コドンを酋まない。ＬＩ Ｉ Ｖｌの［ｌ
ｉ株にはこのような配置が含まれている。図１△は、Ｓ
Ｉ Ｖ （２０，２１）及びＩ−Ｉ Ｔ Ｖ −２（
［マＯＤ甲離物、１９）ど比較した場合の１−１１ Ｖ
ｌ（Ｅｌｉ中頭物、２４）の中心領域の遺伝Ｐ面構成を
示（）でいる。矢印はウィルス遺伝子におけるイニシＴ
−タＡ Ｕ Ｇコドンを指しでいる。多数の１−Ｉ Ｉ
Ｖ −、１株（５１、アミノ酸艮が約８０へ・８２で
あつＣΔＵＧ−コドンにより開始された場合にこの領域
から合成されるこの蛋白ｖ′［を二１− ド化する能力
があ１す る。図Ｉ Ｂ ＋；１種々の株間のこの蛋白ｖ１配列を
並、；ｄして示したものである。［ｌｉ株を参照の１．
ｌ：めに挙げる。標準的プノ法を用いて空所（）を導入
し、比較し易くした。Ｖ印は同一アミノ酸を示１Ｊ、。 比較したＩＩＩＶ甲離物とし−（は、ｌ′：ｌｉ、Ｍａ
［、Ａ１１ｚｏｎ 、 Ｍ、、等、 （’：：Ｃｌｌ
４６： ６３−７４（１９８６） Ｊ 、 ＨＸＢＣ２
，１３１−１−１０，［３１Ｎ３゜＋）ｌｌＸＤ３ ［
Ｒａｔｎｅｒ 、 ｌ−、等、 Ｎａｔｕｒｅ ３１
３：２７７〜２８３（１９８！ｉ） Ｊ 、 Ｂ
ＲＬノ ［Ｗａｉｎ−１１ｏｂｓｏｎ 。 Ｓ等、 Ｃｅ１ｌ ４０： ９□−１７（１９８！ｉ
） ］及びＵＳ１２［３ａｎｃｈｃｚ−１）ｃｓｃａｄ
ｏｒ 、 ＲＣ”ｌ、 ３ｃｉｃｎｃｃ ２２７：４８
４・〜４９２（１９８！］） ］が挙げら札る。 これらの株を一般的に人ｒ′Ｃきる。ｔＪｓ１２は３９
番目に終止コドンを右Ｊ−るが、１ノかしながら、単一
点ル−ムシフｌ−Ｌ；Ｌ、［゛１１谷照配列に比し゛（
Ｊ：＜保存されるアミノ酸長４３だ６１人いい蛋白質を
生じる。この新（）い蛋白質は疎水性リーダー配列を含
有する（図１ｃ）が、これ
【ま膜輸送配列と似ている。
このことは、細胞膜を通つ゛（該蛋白質が輸送されるこ
とを示唆づる。さらに、ウィルスゲノム内のＵ読み枠の
位置は、該蛋白質が外膜糖蛋白質に関する交互的リーダ
ー配列を形成り−ることを示唆する。イ立ｌｘでのＵ蛋
白質のスジライジングイベント及び翻訳時のフレームシ
フトの発生により、外膜糖蛋白質との融合蛋白質がり−
じる３、このような場合は、（Ｊ？５白質は外膜糖蛋白
質のアミノ末端にイ」着しＣ新しいアミン末端を形成Ｊ
るＪ、うになる。 分子量が約１６１：ｊｉｌＴ：Ｉダル１ヘン（ｋ ｌ）
）の蛋白質を開裂しく、分子置駒１５ｋＤの短い蛋白
質を作ることができる。 この蛋白質に関する遺伝子は（Ｊと呼ばれている開放読
み枠中に存在りるためｌ’、 Ｗ ａ ｉ ｎ −ｌ−
１ｏｂｓｏｎ 。 Ｓ舌、（ト）吐Ｖ並： ９−・１７ （１９８！ｉ）
Ｊ 、ウィルス蛋白質Ｕ及びウィルス蛋白質（」に関す
る遺伝子ｌと叶ぶよう提案する。 この蛋白質の特性をさらに訂しく調べる！、：めに、ア
ミノ酸配列組成物を基１ｉ！ｉ’として蛋白質の峠水性
領域に対づ−る配列に対応さＩＣ２つのオリゴペプチド
を作つＩ（。ペプチド１ど呼ばれる第１のＡリボペプチ
ドはアミノ酸２９〜４１にえ１応し−Ｃおり、方ペブヂ
ド２ど呼ばれる第２のＡり了ペブブードは、）′ミノ酸
７３・〜８１に対応しｌこ（図１１３．ＩＣ）。 標準技法を用いてこれらのペプチドをｋｅｙ＋１０１８
＋ ｉｍｐｅｔヘモシアーンに接合し、これを用いて、
例えば第３番のウサギに抗体を産η−した９、抗ｊ京を
何度か注射しｌこ後、つ１ナギは免疫に用いたオリゴペ
プチドを認識する抗体を産生じた。 図２は竺且ユ’ｒ’ｔｌ包子産物のｉｎ ＶｉｔｒＯ特
性を示り−９１５に＋、）ウィルス蛋白質とＩＧｋＤウ
ィルス蛋白質は１／１ ともに、ペプチド２に対するウリギ抗血清によっＣ沈陪
す−る（図２Δ、レーン４参照）。ペプチド１に対りる
抗血清もこれらの蛋白質を沈降させるが、しかしその程
度は弱い。これに対して、これらの蛋白で１は免疫前ウ
リ１゛血清から得Ｉご血清（・・は沈降しなかったく図
２Ａ、レーン３）。図２１）のデータはＨＩ Ｖ血清陽
性患者抗血清も１！ｉｋＤ蛋白質と１６ｋ Ｄ蛋白？４
＋とを認識することを立訓している（レーン２）。２つ
の蛋白質を沈降りる患者抗血清のこの能力は一部はペプ
チド２で競合される（レーン３参照）。切断外膜産物を
免疫沈降するト１１Ｖ−１感染患者の１９種の血清のす
べてがまた、１５ｋｌ）蛋白質と１６ｋＤ蛋白質とを沈
降づ−ることが判明した。正常患者抗血清はこれらの蛋
白質を認識しなかった（レーン１）。 これらの蛋白質はＨｒ Ｖ −１プ［」ウィルス株の間
（・高度に保存されるどぢえられる。１５実、甲離した
全トＩ Ｉ Ｖ −１ブ１コウイルス株にＬユ１に対応
リ−る領域に開放ＩＪｃみ枠が含、１、れる。しかしな
がら、ｎ ｖｉｔｒｏで診査した多数の個々のプロウィ
ルス株は、Ｌ立退発現を防１１−する甲−点突然変位の
Ｉ、−めにこの領域から蛋白質を産生′Ｃ−さないとに
えられる。実際、同一ウィルス単離物から甲離された責
なるプロウィルス株はＶ ｐ ＬＪを」−ド化する能力
に関し。てはへテロぐある１１例えば、Ｉ ］ Ｉ Ｆ
３！１１離物の個々のプ［１ウィルス株１−ＩＸＢｃ
２． Ｂ１−１１０゜Ｂ Ｈ−８及び１３ ＋−１−、
３はこれに関しては胃な−］でいる（図ＩＢ参照）。個
々の独立したブｌウイルスク【］−ンが他のウィルス蛋
白質、狛に３′ｏ ｒ ｆ Ｐ７．物を一コード化Ｊる
能力にお（）る同様の変異も注目されでいる。例えば、
３’ｏｒｆに関りるＩＩＩＢの単離物の場合、蛋白質産
物を切断Ｊる突然変ｂｔにより野牛型より迅速に１６養
内で少賀するウィルスが生じる。 ＬＴｅｒｗｉｌｌｉｇｅｒ、 Ｌ 、等、 Ｊ 、 Ｖ
１ｏｒｏｌ 、 ６０ニア５４〜７６０（１９８６）
］ 。■且退を発現できないプロウィルスは、例えば
１１１ウイルスＬＩ Ｘ １３ ｃ ２による１〜ラン
スフＪクシ−１ンで産生され、培養内の１−細胞中で成
ｒ７リーるウィルスの能力によって実証される通り、複
製可能であるが、しかしこれはｆｆｌ欠失ウィルス−Ｃ
ある。しかしながら、これは、ｖｐｕ産物がウィルス複
製又は病因の調１１）に重要な役割を演じる可能性を除
外づ−るものではない。 実際、ｐ１５Ｖｗ−及びＬ−） １６虱に類似の゛蛋白
質に関する」ンピ１−夕の助りを（ｌｕ、りた研究によ
り、１−１１ Ｖ −、２及びＳＩＶが同様の蛋白質を
コード化しないことが判明した。（Ｊ読み枠に匹敵り゛
る開放読み枠を含有Ｊる株はなかった。Ｈ］Ｖ−２株と
ＳＩＶ株はどもに、ｌ−＋ １ Ｖ −１甲離物の場合
に欠けている開放読み枠、（Ｊ−なわちＸ開放読み枠を
含有する［ Ｇ ｕＶａｄｅｒ、 Ｍ ０等、 ａｔ
ｕｒｅ ３２６．上記（１９８７） ］が、しかしＵ
蛋白質どＸ開放読み枠から形成されるｉｉＪ能↑ηがあ
る（Ｊべ（の蛋白質との間には検出−ｎｌ能な類似性【
ま認められｔ【い。ざ、らに、検査したｌ−Ｉ Ｉ Ｖ
−２感染患者の血清ｌｉｔどれもＬＨに対する抗体を含
有しＣＪ３らず、叉、ＳＩＶ感染サルすｂｅｓｕｓ ｍ
ａＣａ ｕｅｓニおいｃもＶ ｐ ｌ産物に対伏る抗体
は検出されなか−）た、。 したがって、ｐ１５Ｖ１１１１＝及びｐ１６道四−に対
り−る抗血清を用イー（’ ＩＩＩ Ｖ −１とＳ Ｉ
Ｖ又に；ＬＨ［Ｖ−２との感染を区別できる。 さらに、ｌ産物に対りる患に抗体の滴定を用いて疾ｊυ
を誘発φるｌ−１１Ｖ １０段階を８１１１定するこ
とも＜”きる。調節蛋白で１を−１−ドするのに用いる
ウィルス伝令ＩＩ Ｎ Ａ ｓの研究により１−Ｍｅｕ
ｓｉｎｇ、 Ｍ、 Ａ、 舌、 ａｔｕｒｅ ３１
３： ４！＋０−・４５８（１９８！ｉ） 、 Ａｒ
ｙａ 、 Ｓ、 Ｋ、 舌、 ３ＣＩＱｎＣｅ２２９：
６９へ、 ７３ （１９８５） 、及び３ｏｄｒｏｓｋ
ｉ 、 Ｊ 、等。 叱■肛虹３２１ ＋ ４１３−・４１７（１９８６）
］ 、ｖ ｐ ＬＪがスプライシングに、につてこの
にうなウィルスｍ＋＜ Ｎ Ａ Ｓから除外されること
は明らかＣある１゜１ノだがつ−（、竺且旦は、完全に
一スプライシングされたｍＲＮＡ５のみがａ ｒＴ、
ｌＪ伝ｒ不イＩｌ ”ｌ’ ”ＣＷｉ 積するので、こ
の産物不在下では作られないとにえられる［ ３ ｏｄ
ｒｏｓｋｉ 、 Ｎ ａｔｕｒｃ ３２１． ｌ−記
；「ｅ＋ｎｂｅｒｏ 、 Ｍ 、 ｌ−３、笠、 Ｃｅ
１ｌ ４６． 上記＜１９８６） ］ 、、での結宋、
ｖ ｐ ＬＪ ’Ｑ白買１；Ｌ、他のピリオン蛋白質の
ように、感染後期に合成されるので、患者抗体を滴定づ
ることににつ℃疾患の段階を測定することがｑ能（”あ
る。 （〕蛋白質の発現は、本明細ｌ）に基づいた標準的り法
を用い−Ｃ１当業界の当業者にＪ、り迅速に実施［■能
Ｃある。例えば、ヌクレオチド５５４１〜８０１７由来
の−１分な数のヌクレオブトに対応するヌクレオブト配
列であるｙ−ｐ」↓遺伝子を含むｌ）ＮΔ断片を作成で
きるが、この場合この領域のＭぐ」−流にこの領域に対
して適当な読み枠にＡ ｔＪ Ｇコドンを挿入し、Ｕ蛋
白質を発現覆る。典型的にはこのＤＮＡ断ｊ）をその断
片の、１流にプロし一タ好ましくはウィルスブ【１モー
タを含有（Ｊるベクターに挿入づる。ベクターは好まし
くはＴンハンリ及びポリアデニル化ジグプルをも含む。 ＨＩ Ｖプ１］ウィルスにおけるＵ開放読み枠に３・１
応りるヌクレオチド配列を用いることがＩｆましいが、
しがしながら、ＨＸＢｃ２のようなＡＵＧ開始−１トン
を含まイ１い株を用いる場合は、）−１１Ｖ株［１１で
生じ−Ｃいるように、イニシェータ配列ＡＵＧを適当ｔ
【あ“じみ粋に付加り−ることが保証されるＪ：）注意
しな（）ればなら１．すい。よって、Ｕ開放読み枠に対
応する配列の使用が最−す好ましい。 例えばトＩＸＢｃ２株から得た１ノ開放読み枠にλｊ応
する株を使用すべきである場合は、ヌクレオチド配列５
５４１の直前に対ＩＩｓりるヌクレオチドに、Ｕ開放読
み枠のりぐ」−流でこれに対ｌノ“（適当な読み枠内に
Ａ ＬＪ Ｇ Ｉトンを挿入するか、又はこのような配
列を生成覆るための点突然変異を作るかしなければなら
ない。しかしながら、当業界で十分公知の標準的方法に
よりこれを行′うことがぐきる。 当業界ぐ十分公知の方法を用いて、標準発現ベクター、
例えばＳ１〕６ブラスミドにｖ ｐ ＬＪ ’Ｑ伝包子
挿入り゛ることにより（プラスミドｐＥＵの作製を示す
−図４を参照されたい）、このプラスミドを用イテ、ａ
Ｑ’ ！、Ａ Ｔｌｉ ニヨリｐ １ ！ｌ Ｖ”’
Ｌ−及ヒｐ １６ｖＪＬヲ合成り−ることができる。 この蛋白質を使用ｌノで抗原を調製し、ワクチン、例え
ば１弱毒化ワクチンをイ）ることができる。この蛋白質
を用いで、蛋白で（に対する抗原反応を起こすことがで
きるし、また蛋白質がウィルス感染細胞の表面に見出さ
れるという前記特性にＪ、す、且つこの蛋白質が種々の
ＨＩＶ、、、１株に＾磨に関係があると思われるために
、製造されＩＣワクチンは特に有用であると考えられる
。 上記の通り、それは高度に保存される抗原決定基を含有
し、■」つＨＩＶ−１感染細胞に特異的て゛あると思わ
れるため、この蛋白質は、う−物検体を検定してそれら
が）−ＩＩＶ−１感染細胞を含イｊづるか否かを測定す
る診断手段として特に有用である。 標準技法を用いてこれらの検定を埠゛備て・きる。例え
ば、所定の標本、すなわら検査１べさ！１物椋木を採取
し、抗イデイオタイプ抗体又は免疫学的にｐ１５■児及
びｐｌＧ■Ｌの抗原部位に類似のものを付加し得る。例
えば、本明細占に記載の、アミノ酸７８−８１に対応Ｊ
るぺ−Ｉチド２（図１１３．ＩＣ）は、このＪにうな抗
原部位を反映している。好ましくはモノクローナル抗イ
デイオタイプ抗体を使用する。 次いでこの標本をスクリーニングして反応が認められる
か、Ｊなわち複合体が抗体と抗原の間に形成されるか否
かを測定づる。そうする代わりに、公知の免疫検定方法
、例えば競合免疫検定又は免疫測定（サンドイッチ）検
定を用いて、ウィルス蛋白質イれ自体の抗原決定Ｉｔに
夕・１りる１−ツク［−１ノール又は多価抗体により検
定可能である。 この蛋白質はｊ８養中のト１１Ｖ感染の伝染速度に弱几
化作用を及ぼすと考えられるため、それは、この現象を
模倣又は増強１」るＪ、う企画された薬剤又はその伯の
化合物のスクリーニングｔ１画に関する基礎を形成する
ものＣあると４＞ｒＪえられる。例えば、その蛋白質を
発現しない１１ＴＶ−１株感染ｔ８養物に蛋白′１１を
添加し、褐製の弱ｆ）ノ化程麿を測定し、次いで標準的
技法によりこの弱毒化作用を増強づる薬剤をスクリーニ
ングすることができる。 ｖ ｐ ｕ遺伝子含有発現ベクターで細胞をトランスフ
１クトすることを含む当業界で十分公知のいｆれかの技
法により蛋白質を添加可能ｃＬＪｙ）る３、シたがって
、それら独自ではウィルス複製に対しく臨床的に有効で
ない薬剤は、Ｕ蛋白質ど杉（用すると弱毒化作用を増強
づるのに有用となる可能性がある。 以下の実施例により本発明をさらに詳しく説明覆る。こ
れらの実施例は本発明を理解する際の助けどなるべく提
示するが、本発明はこれに限定されるものＣはない。 実施例 ｖｐｕ遺伝子、すなわちＡ Ｕ Ｇ開始Ｚ］トンを金石
するｌ−Ｉ Ｔ Ｖゲノムの５５４１から８０１７まで
の−１−分数のメクレＡブトに対応りる１、 ａ ｌ遺
伝ｊ′メクレＡチド配列どＣｎｖ３１伝子ヌクレオヂド
配ダ１のｆｌｕ初の゛コード化工４ソン間の領域の蛋白
ｖｉ］−ド化能力を、Ｍｅｌｔｏｎ ％の方法（Ｍｅｌ
ｔｏｎ 、 ｆ）、△、舌。 Ｎｕｃｌ、 △ｃｉｄ 、 ＲｅＳ、 １２
： ７０３５ へ−７０５６（１９８４）ノを用いて
団Ｖｉｔｒｏで合成しＩＥ二ＲＮ Ａを使用しく、ｉｎ
ｖｉｔｒｏ赤血球翻訳溶ｉ産物を１１］グラミングす
ることにより調べた［ １）ｅｌｈａｍ 、 ｔ（、Ｐ
、 Ｂ 、等。 Ｆｎｒ Ｊ、 Ｂｉｏｃｈｅｍ、６７： ２４７−
２！ｉ６ （１９８６）ＪｏるＨ Ｉ Ｖプ［］ウィ
ルスのメクレオブド長２２３１の制限部ｊ１からＲＮＡ
を作製した。 実験用アンプレートはＳＰ６バクテリオフアージＲＮＡ
ボリメラーげプ【］］Ｌ−−−タＪ４ｅｌｔｏｎ 、
Ｄ。 Δ等９．Ｌ起］にス）Ｉ シー（’ ３’側にあるｌ−
１１Ｖ−１の１−１１株の１１−１ウイルスの断ハ［△
１ｉｚｏｎ 、 Ｍ。 等、１吋り郵、上記］より得た。図４はｍＲＮ Ａ合成
に用いるＳＰ６プラスミドを示す。ｔａｔ遺伝子、ａｒ
ｔｇ仏子及び一部のＯｎＶ遺伝子の第一二］−ド化］ニ
ー１−ソン間の領域に、したがる１−ＩＴＶつへ Ｆ１１ブ〔１ウイルスから臂たヌクレＡブト長２２３１
ファージＲＮＡポリメラーゼプロし一タの：３′側をり
１コーン化したものであっｌｃｏプラスミドをｉ＋線化
するのに用いる内部制限部位が示され（いる。この株は
、△Ｕ Ｇ ７−１トンにＪ、り開始づ−るこの領域に
開放読み枠を有する（図１Ｂ）［Δｌ１ｚｏｎ 。 Ｍｌ等、 Ｃｅ１１４６．上記］。図４に示づ通り、こ
のＲＮＡ転写に際して認められるウィルス配列は、ｔ
ａ １： （Ｂ ａｎＮＩ １部位）の第一：１−ド化
１：１−ソンの５′末端からｅｎｖ内の１８３９ヌクレ
Ａヂド（［３（］ｌＩ［部位）にまぐ及／ｖぐいる。１
． ａ １逍仏子に関する開始」トン番よ、使用制限酵
素すイｆわｌ）Ｂ ａ ｍ ｌ（Ｉ ｈ＜ Ｅ Ｌ 、
ＺゾＩＪウィルス株’ｋ ” ａｊ 間Ｑｆ３コドンの
゛「とＧの間Ｃ開裂するので、このＲＮＡに４３いては
無傷ではない。 この１Ｌ１ウ−イルス断ハ山来のｌ’＜ ＮΔを用いて
ｉｎ ＶｉｔｒＯ溶解産物中で産生きれた蛋白ｖ１を３
５３メヂオニンでラベルし、硫酸ドデシルプトリウム（
ＳＯ８）−ポリアクリルアミドゲル電気泳動（ｆ” Ａ
Ｇ Ｅ ）を用いて人きさにより分離した３２図２Ａ
参照のこと。ＨＩＶ［ｌｉ挿入物に対してポリリンカー
３′に荀ビづるｌ” ｃ ｏ Ｒ１部位で消化して Ｉ
ＩＦ：Ｕ７″ラスミドを直線化し、報告の通り［１）ｃ
ｌｌｅｔｉｃｒ Ｊ、 ＆ 、５ｏｎｅｎｂｅｒｏ、
Ｎ、、Ｃｅ１１４０： ！ｉ１５〜５２６（１９Ｂ
５） ］ 、 Ｓ Ｐ ６ ＲＮ△ポポリ−ノーじに
よるｉｎ ｖ＋ｔｒｏ転写用のテンプレートどして用い
たが、但し、Ｇ −１−Ｐ及びｃａｐ類似体ｒｎ ７Ｇ
ＩＤ１１）Ｇ（７）ｌｉ１度はそれぞれ０２および１
、０ＩＩＩＭに１胃さｌ！ ７ｊ 。報＜１．の通り（
２７）、伝令ＲＮ Ａ ｓを、−３ ［５Ｉｔ］ＣＴＰでラベルし、精製した。等モル桁のＲ
ＮＡ （古いの放射能）のｉｎ ｖ：ｔｒｏ翻訳を赤血
球溶Ｗ？産物中で・実施しＩｓ ［Ｐｅｌｈａｍ 、
Ｈ，ｌ〕。 Ｂ 、 秀、 Ｉ−１１ｒ、 Ｊ、 ｌ−３ｉ
ｏｃｈｅｍ、Ｇ７： ２４７−２５６（１９８Ｅｉ）
］ 、イラン１ベージ」ンは、３５Ｓ−メブーＡニン
存在下で、３０℃で３０分間行イ； −、＞ Ｌ： 、
、 １５％５ＤＳ−ＰＡＧＩＥ （レーン２）にＪ、り
直接、あるいは免疫前つ＋Ｊ１゛血清（レーン３）；抗
ベ−１”ｆド２血清（レーン４）：５００１１１Ｍのペ
プチド２存在ド（・・の抗ペブブド２血：ｉ’ｉ （レ
ーン５）；ペゾブ＝ド１（レーン６）、又は無関係なペ
プチド Ｑ Ｆ Ｉ−ΔＦ １−Ａ１’に１−８ＳＣ（レー・ン
７）で予め免疫沈降させて、標識化産物を分析した。レ
ーン１は、ＩＩＩＲＮ Ａを加えない全翻訳反応を表ね
り。ξの系で合成される蛋白質はレーン２に示されるつ
」ツギ抗ペプブド２面清により沈降される蛋白Ｔ（も示
めされている。分子量的１！１ｋＬ）及びＩＧｋ［）の
２つの蛋白質は非分画化抽出物中で明らかＣあ−）Ｃ１
つ１ツギ抗血清により沈降される。１５ｋ Ｄ蛋白質ど
１６ｋＤ蛋白？°１は、免疫前ウリ１゛血Ｆ？１からの
１ｆｌ目１１ににっＣは沈降しない（レーン３）１、ペ
プチド２に対づる３つの抗血清はり−べて、ペブヂード
１に対する抗血清と同様に両蛋白質を認識Ｊ−る（レー
ン４）が、その程度はさらに弱い（う−タは示していな
い）。 図２△の−ｆ−タｂま７ｊ 、ペプチド２が抗血清によ
る１５ｋＤ蛋白質と１６ｋＤ蛋白質の認識に競合１゛る
ことを示ずくレーン５）。しかしながら、ペプチド１（
レーン６）又は無関係ペプチドは抗ペブヂド２血清どは
競合しない（レーン７）。 ｎＶｉｔｒｏ翻訳産物を分析づる／、：め（Ｊ他のブ［
１ウィルス断片由来のＲＮＡを調製した。１組の実験に
おい（−１ＲＮＡ合成に使用づるランブレー１〜を制限
Ｍ県開裂により、予定の△ＵＧＩトン（ＲＳ ａ ］一
部位）に対し−Ｃ’ ５’ 側の７ヌクレＡ−ザドか又
は予定の△ＵＯのヨドン（ＢｂｖＩ部位）に対１ノで
３′側の３０ヌクレオブトを切断した（図４参照）。抗
ペプヂド２抗面清にＪ、り認識される１２［定の蛋白質
１＋ｒ物【よこれらの実験（：１．ｌ：観察されなかっ
た（図２１）、レーン１及び２）。ＲＮ八へ成用に使用
するテンプレートを予定の停止」トン（ＮｄｅＩ部位）
に対して ３′側の１０２ヌクレオヂで開裂し、抗ベプ
ヂド２血清を用いて１ｈ ｋ Ｉ−） ＩＪ３白質と１
６ｋＤ蛋白質を検出したく図２１’３）（ラン３及び４
）。以下の制限Ｍ素、ＲｓａＩ（レーン１）：ＢｂｖＩ
（レーン２）及びＮｄｃＩ＜レーン３及ペプヂド２血清
を用いて標識化産物に関して免疫沈降を実施したくレー
ン１，２及び４）。レーン３は全ｉｎ ｖｉｔｒｏ翻訳
反応を表わづ。 １１１１３単離物のｌｌＸ１３ｃ２り１−１−ンの配列
は、前記の通り、この領域由来のＲＮＡが開放読み枠の
５′末端に開始］トンを欠Ｊ／ＶＣいるため蛋白質を産
生できないであろうことを示唆１ノている１゜１−、
ａ を遺伝ｚ、ａ ｒ ｔ： 遺伝ｒ及び一部のｃ ｒ
）ｖ ’ｒ’Ａ仏子の第一］−ド化］−ギソン間の領装
置）−Ｂａｍｌ−１１（８０１７位置）制限１ｔＪｉ
片ヲ含ｂ フ（Ｂ ａ ｍ ＬＩ １部位：ヌクレオチ
ド８０１７） ニマタｌｆｉす、Ｅ ＬＪ ５二存イ１
するＦｌｉｔ！ｉｊ“１に対応するｌ−Ｉ Ｘ ［（ｃ
２プ１−１ウイルスク１１−ンの断片を１ｎＶｉｔｒ
ｏ転写してＲＮＡを調製し／ｊ 。このＲＮΔを用い−
（、上記と同様の方法（・赤血球溶解産物を企画した。 ｒ−１ｉプ［１ウイルスＲＮ△の場合と同様、ｔ ａ
ｉ−の開始＝１トンをＲＮＡから欠失した１゜１５ｋＤ
産物及び１６ｋＤ産物に対応する蛋白質は前３！＋ｓ−
メＦオニン標識化抽出物又は抗ペゾヂド２血清を用いて
得られた沈降物中には、ネめられなかった（図２Ｃ，レ
ーン１，２）。Ｓ Ｐ ６ ＲＮ ＡポリメノーゼＪ【
ｌモータ［Ｍｅｌｔｏｎ 、 Ｄ、Δ、舌。 Ｎｕｃｌ 、 Ａｃ１ｄ 、 Ｒｅｓ、 １２： ７（
１３ｈ−７０５６（１９８４）］の３′側ニアルＬＩ
Ｘ Ｉ−３Ｃ２Ｄ ｔ ａ ’ｌニー１．７’ ［：Ｉ
ウィルスｌ） ＮΔ９１−１−ン［□ ａｙｌｏｎ
、△、 Ｉ 、、Ｃ０１１４４： ９４１−９／１
７１から得られたＳａ ｌ Ｉ （５４４１位Ｆｃ ｏ
Ｒ１をｐＸＬＪを直線化し、ｉｎ ｖｉｔｒｏ転η゛
用Ｉンブレ−１゛・とじ−（用いＩこ３゜Ｉｎ Ｖｉｔ
ｒＯ翻訳後、標準化産物を１５％５ＤＳＰＡＧＦＩレー
ン１）土で直接的に、あるいは抗ペブブド２血清くレー
ン２）、又はＩＩＩＶ−１感染息者血消（レーン３）′
ｃ予め免疫沈降させ（゛分析しｌこ。 しかしながら、ト１１■−１感染患者血消にＪ、る免疫
沈降からは、切断外膜産物の存在は明瞭には示されなか
った（レーン３）。 図２Ｄは、この蛋白質とＨＩ Ｖ−２及びＳＩＶウィル
スとの交叉反応性を示’７１ｏ ｐＥＵ ＲＮＡ生成
ＳＰ６のｉｎ ｖｉｔｒｏ翻訳後、標識化産物を正常ヒ
ト血清（レーン１）：ｌ−１１Ｖ−１感染ヒ１〜血ｈ−
（レーン２）；５００１＋１ＭのベゾＪ−ド２存イ１１
・（゛のＨＩ Ｖ −１感染息者血清くレーン３）：１
ｌＩＶ−２感染ヒト自消（レーン４）；又はＳＩＶ・感
染サルｈｅｓｕｓ ｍａｃａ ｕａｓ血清（レーン５）
を用い（免疫沈降した。その免疫沈降物を１５％５ＤＳ
−ＰＡＧＥ」Ｃ分析しＩご、１５ｋｌ）蛋白質及び１６
ｋｌ）蛋白質を認識りる抗ペプー１ド２血消の能力を、
本ウィルスづるレト【１ウイルスベクター″Ｃ感染後に
、ｔａ１次 遺伝産物の椙迫的発現のためになめ選択された［Ｒｏｓ
ａｎ、 Ｃ，Ａ、等、 Ｊ 、 ’Ｊ １ｒｏ１． ！
ｉ７： ３７９”−３８４（１９８５）。参照にＪ、
り木明細用中に含めるものとゴる」。論文中に報？１の
通りｌ： １． ｃｅ、王、Ｈ。 等、ｌ〕ｒｏｃ 、Ｎａｔｌ 、Δｃａｄ 、 Ｓｃｉ
、 ＵＳΔ ８１ニア５７９〜７５８３（１９８４）］
、細胞を１３”８１メーｆＡ−ンに記載の通りにこれ
らの細胞株を調製した。これは参照により本明細−）中
に含めるものとする１゜ａｒｔ遺伝子と、しつかり統合
されたｌ−＋ １ Ｖのプ［１ウィルスＥｌｉ、ＨＸＢ
Ｃ２及びＭａ１株［△１ｉｚｏｎ 、 Ｍ、 舌、、
（’ａｌｌ郵、］記］の３’ Ｌ Ｔ’ Ｒどの間の
領域を右するクローン化Ｈｅ Ｌ ａ細胞株を作製し、
次いＣ゛標準技法を用い（Ｊ ？１ｊ、 ＃ｔ ＬＪ
ｔこ１．これらの細胞株を中側Ｊるために用いた親細胞
は、ｔ ａ ’ｌ−コード化配列を運搬′λ ｑ とｅｎｖｉ伝子産物子産物η−する。これらの細胞株の
作製に用いＩＣ１ラスミドは、ａ ｒ’ １−遺伝ｒの
開始１．１トンの５′側に並列するト１１ Ｖ ｌ−
、Ｔ Ｒを含有した。ｔａｔ遺伝子産物は１．ｒａｎＳ
に供給された。図３△は、抗ペプチド２血清（レーン１
）又は１−１１ Ｖ −１感染息者血清（レーン２）で
免疫沈降ＬＪ／＝ １−１０ Ｌ−ａ １： ａ を
細胞株溶解産’ＩＩＩ ヲｉｔ＜ １ 、 図３Ｂは免
疫前ウリギ血循（レーン１）：抗ペブブド２血清（レー
ン３） ： ！３００μＭのべ１゛ｆド２存右下での抗
ペプチド２血清（レーン４）；正常ヒト血１１１１（レ
ー・ン５） ； ｔｌｌ Ｖ−１感染患考血Ｆ＋ （レ
ーン６）ニヨリ免疫沈降すレｔ、ニドＩ Ｑ ＋−，ａ
ｔ ａ １： ｌ′Ｆ溶解産物を示Ｊ。レーン２
は、抗ペブブド２血清にＪ：る、ｐｌ−ＵＲＮΔから得
られた標識化１ｎＶｉｔｒＯ翻訳化産物の免疫沈降を表
ね１ｏ図３Ｃは、免疫前ウザギ自消（レーン１）；抗ベ
ゾチド２面清（レーン２）；正常ヒト面清（レーン３）
及びｌ−Ｉ Ｔ Ｖ１感感染者血消（レーン４）により
免疫沈降されたｌ−１ｅ １． ａ １．’ ａ ’
ｌ’、 Ｍ ａ ｌ溶解ρｒ−物を示１゜図３［）は
、免疫曲つリーギ血清（レーン１）；抗ペプチド２面滴
（レーン２）：正常じＩ・面精（レーン３）及びｌ−１
１Ｖ−１感染患者血清（レーン４）により免疫沈降した
Ｈ Ｏｌ ａ ｔ ａ １． １１ Ｉ Ｂ溶解産物
を承り一１１図３のデータは、抗ペプｆ−ド２抗血浩が
、ｉｎ ｖｉｔｒｏで負られｌこ１！ｉｋ［）蛋白質と
一緒に移躬Ｊ−Ｊる１−１１ブ［二１ウィルス由来の細
胞株にＪ′３ＬＪる１５ｋＤ（レーン３）を特異的に；
認識り−ることをＸ″）証する。同じ抗血浩が、ＭＡＬ
（図３０）プ［１ウイルス又はｔｌＸ［３ｃ２（図３Ｄ
）プ［−１ウイルス由来の蛋白質を発現覆る細胞株の蛋
白質を認識しない３゜これは予測通りの結果であり、ｌ
−Ｉ Ｘ Ｂ ｃ ２プ１−１ウイルス又はＭａ１ブ［
レンイルスは適当に位置号る開始］トンを含有しない（
図２Ｂ）ためである。 Ｅ１１プ【］ウィルス由来の細胞株に＋１３りるｌＩ［
Ｖ１患者抗而清により１５ｋＤ蛋白質が検出されないの
は、明らかに、使用１）だ患古抗血桔におりる抗−ｖｐ
ｕ滴定が低かつｋことと、細胞株中の１５ｋＤ蛋白質昂
がｉｎ ｖｉｔｒｏ翻訳Ｊ）γ物に比してＪ１常に少量
で・あ−】だためＣある。 ウィルス生活環にお（）るＵ蛋白ｙ′１の機能を調べる
ために、５３３２位置での５ａｌＩ部位と８０１７位置
での１３ ａ ｍ ｌ−ｌ １部位との間のＬＩ Ｘ
Ｆ３ ｃ ２の配列（４−１が転写開始部位）がくれに
え１応するり［Ｊン［３１−１１０からの配列に１１′
１“換される組み換えゾ１］ウィルスを作製しＩＣ。 トＩＸＢｃ２とは異なり、Ｂ１−１１０はＵ蛋白質に関
するＡ ＬＪ Ｇ ｌ１ｉｌ始二］トンを有りる。他の
点で【よｅｎｖｌ伝子産物子産物る少数の保存アミノ酸
変化以外はＨＸＢｃ２に非常（−よく似ＩＣプロウイル
スク［Ｊ−ンを生成りることであり、Ｕ間放読み枠を利
用する能力を生成することであった。 ＨＸＢｃ２及び組換えＢｌ−＋１０り【］−ンによるＪ
ｕｒｋａｔ細胞の１〜ノンスフエクシ５１ンの結果、ウ
ィルス産生が起きたが、ｌノかし細胞を通じてのウィル
ス由来Ｂ ｌ−１１０の蔓延はｌ−Ｉ Ｘ Ｂ ｃ ２
山来ウイルスにすｌ） ４：Ｉｆ：：ｊに低か・＞ １
４ 、。 各１？’？ ｈの部分標本は、３１１Ｓ−シスライン及
び３：）Ｓ−メヂＡニンでトランスフ−ｒり１〜後、２
．／Ｉ及び７ Ｅｌ目に代謝的に標識された９１次い（
・細胞抽出物をＡＩＤＳ患者抗血清で免疫沈降し、１２
；−％ポリアクリルアミドゲルにかけた。そのゲルのオ
ートラジオグラムを図５Ｂに示す。ここｅレーン１．４
及び７はそれぞれトランスフ」クシ」ン後２゜４及び７
日目の対照細１抱である。レーン２．５及び８はそれぞ
れ２．４及び７ ＬＩ目のＩ」Ｘ Ｂ ｃ ２−ｃ ｌ
・ランスノエクトされた細胞である。レーン３６．９は
それぞれ２．４．７日目のＢＨｉｏの組換えプ［ｌウィ
ル・トランスフ１クト細胞である。 上記明細書を利するものであれば、本発明の精神に沿う
ものである限りいかなる変更を加えてもよく、本明細書
に記載の特定の実施例に背反し【
とを示唆づる。さらに、ウィルスゲノム内のＵ読み枠の
位置は、該蛋白質が外膜糖蛋白質に関する交互的リーダ
ー配列を形成り−ることを示唆する。イ立ｌｘでのＵ蛋
白質のスジライジングイベント及び翻訳時のフレームシ
フトの発生により、外膜糖蛋白質との融合蛋白質がり−
じる３、このような場合は、（Ｊ？５白質は外膜糖蛋白
質のアミノ末端にイ」着しＣ新しいアミン末端を形成Ｊ
るＪ、うになる。 分子量が約１６１：ｊｉｌＴ：Ｉダル１ヘン（ｋ ｌ）
）の蛋白質を開裂しく、分子置駒１５ｋＤの短い蛋白
質を作ることができる。 この蛋白質に関する遺伝子は（Ｊと呼ばれている開放読
み枠中に存在りるためｌ’、 Ｗ ａ ｉ ｎ −ｌ−
１ｏｂｓｏｎ 。 Ｓ舌、（ト）吐Ｖ並： ９−・１７ （１９８！ｉ）
Ｊ 、ウィルス蛋白質Ｕ及びウィルス蛋白質（」に関す
る遺伝子ｌと叶ぶよう提案する。 この蛋白質の特性をさらに訂しく調べる！、：めに、ア
ミノ酸配列組成物を基１ｉ！ｉ’として蛋白質の峠水性
領域に対づ−る配列に対応さＩＣ２つのオリゴペプチド
を作つＩ（。ペプチド１ど呼ばれる第１のＡリボペプチ
ドはアミノ酸２９〜４１にえ１応し−Ｃおり、方ペブヂ
ド２ど呼ばれる第２のＡり了ペブブードは、）′ミノ酸
７３・〜８１に対応しｌこ（図１１３．ＩＣ）。 標準技法を用いてこれらのペプチドをｋｅｙ＋１０１８
＋ ｉｍｐｅｔヘモシアーンに接合し、これを用いて、
例えば第３番のウサギに抗体を産η−した９、抗ｊ京を
何度か注射しｌこ後、つ１ナギは免疫に用いたオリゴペ
プチドを認識する抗体を産生じた。 図２は竺且ユ’ｒ’ｔｌ包子産物のｉｎ ＶｉｔｒＯ特
性を示り−９１５に＋、）ウィルス蛋白質とＩＧｋＤウ
ィルス蛋白質は１／１ ともに、ペプチド２に対するウリギ抗血清によっＣ沈陪
す−る（図２Δ、レーン４参照）。ペプチド１に対りる
抗血清もこれらの蛋白質を沈降させるが、しかしその程
度は弱い。これに対して、これらの蛋白で１は免疫前ウ
リ１゛血清から得Ｉご血清（・・は沈降しなかったく図
２Ａ、レーン３）。図２１）のデータはＨＩ Ｖ血清陽
性患者抗血清も１！ｉｋＤ蛋白質と１６ｋ Ｄ蛋白？４
＋とを認識することを立訓している（レーン２）。２つ
の蛋白質を沈降りる患者抗血清のこの能力は一部はペプ
チド２で競合される（レーン３参照）。切断外膜産物を
免疫沈降するト１１Ｖ−１感染患者の１９種の血清のす
べてがまた、１５ｋｌ）蛋白質と１６ｋＤ蛋白質とを沈
降づ−ることが判明した。正常患者抗血清はこれらの蛋
白質を認識しなかった（レーン１）。 これらの蛋白質はＨｒ Ｖ −１プ［」ウィルス株の間
（・高度に保存されるどぢえられる。１５実、甲離した
全トＩ Ｉ Ｖ −１ブ１コウイルス株にＬユ１に対応
リ−る領域に開放ＩＪｃみ枠が含、１、れる。しかしな
がら、ｎ ｖｉｔｒｏで診査した多数の個々のプロウィ
ルス株は、Ｌ立退発現を防１１−する甲−点突然変位の
Ｉ、−めにこの領域から蛋白質を産生′Ｃ−さないとに
えられる。実際、同一ウィルス単離物から甲離された責
なるプロウィルス株はＶ ｐ ＬＪを」−ド化する能力
に関し。てはへテロぐある１１例えば、Ｉ ］ Ｉ Ｆ
３！１１離物の個々のプ［１ウィルス株１−ＩＸＢｃ
２． Ｂ１−１１０゜Ｂ Ｈ−８及び１３ ＋−１−、
３はこれに関しては胃な−］でいる（図ＩＢ参照）。個
々の独立したブｌウイルスク【］−ンが他のウィルス蛋
白質、狛に３′ｏ ｒ ｆ Ｐ７．物を一コード化Ｊる
能力にお（）る同様の変異も注目されでいる。例えば、
３’ｏｒｆに関りるＩＩＩＢの単離物の場合、蛋白質産
物を切断Ｊる突然変ｂｔにより野牛型より迅速に１６養
内で少賀するウィルスが生じる。 ＬＴｅｒｗｉｌｌｉｇｅｒ、 Ｌ 、等、 Ｊ 、 Ｖ
１ｏｒｏｌ 、 ６０ニア５４〜７６０（１９８６）
］ 。■且退を発現できないプロウィルスは、例えば
１１１ウイルスＬＩ Ｘ １３ ｃ ２による１〜ラン
スフＪクシ−１ンで産生され、培養内の１−細胞中で成
ｒ７リーるウィルスの能力によって実証される通り、複
製可能であるが、しかしこれはｆｆｌ欠失ウィルス−Ｃ
ある。しかしながら、これは、ｖｐｕ産物がウィルス複
製又は病因の調１１）に重要な役割を演じる可能性を除
外づ−るものではない。 実際、ｐ１５Ｖｗ−及びＬ−） １６虱に類似の゛蛋白
質に関する」ンピ１−夕の助りを（ｌｕ、りた研究によ
り、１−１１ Ｖ −、２及びＳＩＶが同様の蛋白質を
コード化しないことが判明した。（Ｊ読み枠に匹敵り゛
る開放読み枠を含有Ｊる株はなかった。Ｈ］Ｖ−２株と
ＳＩＶ株はどもに、ｌ−＋ １ Ｖ −１甲離物の場合
に欠けている開放読み枠、（Ｊ−なわちＸ開放読み枠を
含有する［ Ｇ ｕＶａｄｅｒ、 Ｍ ０等、 ａｔ
ｕｒｅ ３２６．上記（１９８７） ］が、しかしＵ
蛋白質どＸ開放読み枠から形成されるｉｉＪ能↑ηがあ
る（Ｊべ（の蛋白質との間には検出−ｎｌ能な類似性【
ま認められｔ【い。ざ、らに、検査したｌ−Ｉ Ｉ Ｖ
−２感染患者の血清ｌｉｔどれもＬＨに対する抗体を含
有しＣＪ３らず、叉、ＳＩＶ感染サルすｂｅｓｕｓ ｍ
ａＣａ ｕｅｓニおいｃもＶ ｐ ｌ産物に対伏る抗体
は検出されなか−）た、。 したがって、ｐ１５Ｖ１１１１＝及びｐ１６道四−に対
り−る抗血清を用イー（’ ＩＩＩ Ｖ −１とＳ Ｉ
Ｖ又に；ＬＨ［Ｖ−２との感染を区別できる。 さらに、ｌ産物に対りる患に抗体の滴定を用いて疾ｊυ
を誘発φるｌ−１１Ｖ １０段階を８１１１定するこ
とも＜”きる。調節蛋白で１を−１−ドするのに用いる
ウィルス伝令ＩＩ Ｎ Ａ ｓの研究により１−Ｍｅｕ
ｓｉｎｇ、 Ｍ、 Ａ、 舌、 ａｔｕｒｅ ３１
３： ４！＋０−・４５８（１９８！ｉ） 、 Ａｒ
ｙａ 、 Ｓ、 Ｋ、 舌、 ３ＣＩＱｎＣｅ２２９：
６９へ、 ７３ （１９８５） 、及び３ｏｄｒｏｓｋ
ｉ 、 Ｊ 、等。 叱■肛虹３２１ ＋ ４１３−・４１７（１９８６）
］ 、ｖ ｐ ＬＪがスプライシングに、につてこの
にうなウィルスｍ＋＜ Ｎ Ａ Ｓから除外されること
は明らかＣある１゜１ノだがつ−（、竺且旦は、完全に
一スプライシングされたｍＲＮＡ５のみがａ ｒＴ、
ｌＪ伝ｒ不イＩｌ ”ｌ’ ”ＣＷｉ 積するので、こ
の産物不在下では作られないとにえられる［ ３ ｏｄ
ｒｏｓｋｉ 、 Ｎ ａｔｕｒｃ ３２１． ｌ−記
；「ｅ＋ｎｂｅｒｏ 、 Ｍ 、 ｌ−３、笠、 Ｃｅ
１ｌ ４６． 上記＜１９８６） ］ 、、での結宋、
ｖ ｐ ＬＪ ’Ｑ白買１；Ｌ、他のピリオン蛋白質の
ように、感染後期に合成されるので、患者抗体を滴定づ
ることににつ℃疾患の段階を測定することがｑ能（”あ
る。 （〕蛋白質の発現は、本明細ｌ）に基づいた標準的り法
を用い−Ｃ１当業界の当業者にＪ、り迅速に実施［■能
Ｃある。例えば、ヌクレオチド５５４１〜８０１７由来
の−１分な数のヌクレオブトに対応するヌクレオブト配
列であるｙ−ｐ」↓遺伝子を含むｌ）ＮΔ断片を作成で
きるが、この場合この領域のＭぐ」−流にこの領域に対
して適当な読み枠にＡ ｔＪ Ｇコドンを挿入し、Ｕ蛋
白質を発現覆る。典型的にはこのＤＮＡ断ｊ）をその断
片の、１流にプロし一タ好ましくはウィルスブ【１モー
タを含有（Ｊるベクターに挿入づる。ベクターは好まし
くはＴンハンリ及びポリアデニル化ジグプルをも含む。 ＨＩ Ｖプ１］ウィルスにおけるＵ開放読み枠に３・１
応りるヌクレオチド配列を用いることがＩｆましいが、
しがしながら、ＨＸＢｃ２のようなＡＵＧ開始−１トン
を含まイ１い株を用いる場合は、）−１１Ｖ株［１１で
生じ−Ｃいるように、イニシェータ配列ＡＵＧを適当ｔ
【あ“じみ粋に付加り−ることが保証されるＪ：）注意
しな（）ればなら１．すい。よって、Ｕ開放読み枠に対
応する配列の使用が最−す好ましい。 例えばトＩＸＢｃ２株から得た１ノ開放読み枠にλｊ応
する株を使用すべきである場合は、ヌクレオチド配列５
５４１の直前に対ＩＩｓりるヌクレオチドに、Ｕ開放読
み枠のりぐ」−流でこれに対ｌノ“（適当な読み枠内に
Ａ ＬＪ Ｇ Ｉトンを挿入するか、又はこのような配
列を生成覆るための点突然変異を作るかしなければなら
ない。しかしながら、当業界で十分公知の標準的方法に
よりこれを行′うことがぐきる。 当業界ぐ十分公知の方法を用いて、標準発現ベクター、
例えばＳ１〕６ブラスミドにｖ ｐ ＬＪ ’Ｑ伝包子
挿入り゛ることにより（プラスミドｐＥＵの作製を示す
−図４を参照されたい）、このプラスミドを用イテ、ａ
Ｑ’ ！、Ａ Ｔｌｉ ニヨリｐ １ ！ｌ Ｖ”’
Ｌ−及ヒｐ １６ｖＪＬヲ合成り−ることができる。 この蛋白質を使用ｌノで抗原を調製し、ワクチン、例え
ば１弱毒化ワクチンをイ）ることができる。この蛋白質
を用いで、蛋白で（に対する抗原反応を起こすことがで
きるし、また蛋白質がウィルス感染細胞の表面に見出さ
れるという前記特性にＪ、す、且つこの蛋白質が種々の
ＨＩＶ、、、１株に＾磨に関係があると思われるために
、製造されＩＣワクチンは特に有用であると考えられる
。 上記の通り、それは高度に保存される抗原決定基を含有
し、■」つＨＩＶ−１感染細胞に特異的て゛あると思わ
れるため、この蛋白質は、う−物検体を検定してそれら
が）−ＩＩＶ−１感染細胞を含イｊづるか否かを測定す
る診断手段として特に有用である。 標準技法を用いてこれらの検定を埠゛備て・きる。例え
ば、所定の標本、すなわら検査１べさ！１物椋木を採取
し、抗イデイオタイプ抗体又は免疫学的にｐ１５■児及
びｐｌＧ■Ｌの抗原部位に類似のものを付加し得る。例
えば、本明細占に記載の、アミノ酸７８−８１に対応Ｊ
るぺ−Ｉチド２（図１１３．ＩＣ）は、このＪにうな抗
原部位を反映している。好ましくはモノクローナル抗イ
デイオタイプ抗体を使用する。 次いでこの標本をスクリーニングして反応が認められる
か、Ｊなわち複合体が抗体と抗原の間に形成されるか否
かを測定づる。そうする代わりに、公知の免疫検定方法
、例えば競合免疫検定又は免疫測定（サンドイッチ）検
定を用いて、ウィルス蛋白質イれ自体の抗原決定Ｉｔに
夕・１りる１−ツク［−１ノール又は多価抗体により検
定可能である。 この蛋白質はｊ８養中のト１１Ｖ感染の伝染速度に弱几
化作用を及ぼすと考えられるため、それは、この現象を
模倣又は増強１」るＪ、う企画された薬剤又はその伯の
化合物のスクリーニングｔ１画に関する基礎を形成する
ものＣあると４＞ｒＪえられる。例えば、その蛋白質を
発現しない１１ＴＶ−１株感染ｔ８養物に蛋白′１１を
添加し、褐製の弱ｆ）ノ化程麿を測定し、次いで標準的
技法によりこの弱毒化作用を増強づる薬剤をスクリーニ
ングすることができる。 ｖ ｐ ｕ遺伝子含有発現ベクターで細胞をトランスフ
１クトすることを含む当業界で十分公知のいｆれかの技
法により蛋白質を添加可能ｃＬＪｙ）る３、シたがって
、それら独自ではウィルス複製に対しく臨床的に有効で
ない薬剤は、Ｕ蛋白質ど杉（用すると弱毒化作用を増強
づるのに有用となる可能性がある。 以下の実施例により本発明をさらに詳しく説明覆る。こ
れらの実施例は本発明を理解する際の助けどなるべく提
示するが、本発明はこれに限定されるものＣはない。 実施例 ｖｐｕ遺伝子、すなわちＡ Ｕ Ｇ開始Ｚ］トンを金石
するｌ−Ｉ Ｔ Ｖゲノムの５５４１から８０１７まで
の−１−分数のメクレＡブトに対応りる１、 ａ ｌ遺
伝ｊ′メクレＡチド配列どＣｎｖ３１伝子ヌクレオヂド
配ダ１のｆｌｕ初の゛コード化工４ソン間の領域の蛋白
ｖｉ］−ド化能力を、Ｍｅｌｔｏｎ ％の方法（Ｍｅｌ
ｔｏｎ 、 ｆ）、△、舌。 Ｎｕｃｌ、 △ｃｉｄ 、 ＲｅＳ、 １２
： ７０３５ へ−７０５６（１９８４）ノを用いて
団Ｖｉｔｒｏで合成しＩＥ二ＲＮ Ａを使用しく、ｉｎ
ｖｉｔｒｏ赤血球翻訳溶ｉ産物を１１］グラミングす
ることにより調べた［ １）ｅｌｈａｍ 、 ｔ（、Ｐ
、 Ｂ 、等。 Ｆｎｒ Ｊ、 Ｂｉｏｃｈｅｍ、６７： ２４７−
２！ｉ６ （１９８６）ＪｏるＨ Ｉ Ｖプ［］ウィ
ルスのメクレオブド長２２３１の制限部ｊ１からＲＮＡ
を作製した。 実験用アンプレートはＳＰ６バクテリオフアージＲＮＡ
ボリメラーげプ【］］Ｌ−−−タＪ４ｅｌｔｏｎ 、
Ｄ。 Δ等９．Ｌ起］にス）Ｉ シー（’ ３’側にあるｌ−
１１Ｖ−１の１−１１株の１１−１ウイルスの断ハ［△
１ｉｚｏｎ 、 Ｍ。 等、１吋り郵、上記］より得た。図４はｍＲＮ Ａ合成
に用いるＳＰ６プラスミドを示す。ｔａｔ遺伝子、ａｒ
ｔｇ仏子及び一部のＯｎＶ遺伝子の第一二］−ド化］ニ
ー１−ソン間の領域に、したがる１−ＩＴＶつへ Ｆ１１ブ〔１ウイルスから臂たヌクレＡブト長２２３１
ファージＲＮＡポリメラーゼプロし一タの：３′側をり
１コーン化したものであっｌｃｏプラスミドをｉ＋線化
するのに用いる内部制限部位が示され（いる。この株は
、△Ｕ Ｇ ７−１トンにＪ、り開始づ−るこの領域に
開放読み枠を有する（図１Ｂ）［Δｌ１ｚｏｎ 。 Ｍｌ等、 Ｃｅ１１４６．上記］。図４に示づ通り、こ
のＲＮＡ転写に際して認められるウィルス配列は、ｔ
ａ １： （Ｂ ａｎＮＩ １部位）の第一：１−ド化
１：１−ソンの５′末端からｅｎｖ内の１８３９ヌクレ
Ａヂド（［３（］ｌＩ［部位）にまぐ及／ｖぐいる。１
． ａ １逍仏子に関する開始」トン番よ、使用制限酵
素すイｆわｌ）Ｂ ａ ｍ ｌ（Ｉ ｈ＜ Ｅ Ｌ 、
ＺゾＩＪウィルス株’ｋ ” ａｊ 間Ｑｆ３コドンの
゛「とＧの間Ｃ開裂するので、このＲＮＡに４３いては
無傷ではない。 この１Ｌ１ウ−イルス断ハ山来のｌ’＜ ＮΔを用いて
ｉｎ ＶｉｔｒＯ溶解産物中で産生きれた蛋白ｖ１を３
５３メヂオニンでラベルし、硫酸ドデシルプトリウム（
ＳＯ８）−ポリアクリルアミドゲル電気泳動（ｆ” Ａ
Ｇ Ｅ ）を用いて人きさにより分離した３２図２Ａ
参照のこと。ＨＩＶ［ｌｉ挿入物に対してポリリンカー
３′に荀ビづるｌ” ｃ ｏ Ｒ１部位で消化して Ｉ
ＩＦ：Ｕ７″ラスミドを直線化し、報告の通り［１）ｃ
ｌｌｅｔｉｃｒ Ｊ、 ＆ 、５ｏｎｅｎｂｅｒｏ、
Ｎ、、Ｃｅ１１４０： ！ｉ１５〜５２６（１９Ｂ
５） ］ 、 Ｓ Ｐ ６ ＲＮ△ポポリ−ノーじに
よるｉｎ ｖ＋ｔｒｏ転写用のテンプレートどして用い
たが、但し、Ｇ −１−Ｐ及びｃａｐ類似体ｒｎ ７Ｇ
ＩＤ１１）Ｇ（７）ｌｉ１度はそれぞれ０２および１
、０ＩＩＩＭに１胃さｌ！ ７ｊ 。報＜１．の通り（
２７）、伝令ＲＮ Ａ ｓを、−３ ［５Ｉｔ］ＣＴＰでラベルし、精製した。等モル桁のＲ
ＮＡ （古いの放射能）のｉｎ ｖ：ｔｒｏ翻訳を赤血
球溶Ｗ？産物中で・実施しＩｓ ［Ｐｅｌｈａｍ 、
Ｈ，ｌ〕。 Ｂ 、 秀、 Ｉ−１１ｒ、 Ｊ、 ｌ−３ｉ
ｏｃｈｅｍ、Ｇ７： ２４７−２５６（１９８Ｅｉ）
］ 、イラン１ベージ」ンは、３５Ｓ−メブーＡニン
存在下で、３０℃で３０分間行イ； −、＞ Ｌ： 、
、 １５％５ＤＳ−ＰＡＧＩＥ （レーン２）にＪ、り
直接、あるいは免疫前つ＋Ｊ１゛血清（レーン３）；抗
ベ−１”ｆド２血清（レーン４）：５００１１１Ｍのペ
プチド２存在ド（・・の抗ペブブド２血：ｉ’ｉ （レ
ーン５）；ペゾブ＝ド１（レーン６）、又は無関係なペ
プチド Ｑ Ｆ Ｉ−ΔＦ １−Ａ１’に１−８ＳＣ（レー・ン
７）で予め免疫沈降させて、標識化産物を分析した。レ
ーン１は、ＩＩＩＲＮ Ａを加えない全翻訳反応を表ね
り。ξの系で合成される蛋白質はレーン２に示されるつ
」ツギ抗ペプブド２面清により沈降される蛋白Ｔ（も示
めされている。分子量的１！１ｋＬ）及びＩＧｋ［）の
２つの蛋白質は非分画化抽出物中で明らかＣあ−）Ｃ１
つ１ツギ抗血清により沈降される。１５ｋ Ｄ蛋白質ど
１６ｋＤ蛋白？°１は、免疫前ウリ１゛血Ｆ？１からの
１ｆｌ目１１ににっＣは沈降しない（レーン３）１、ペ
プチド２に対づる３つの抗血清はり−べて、ペブヂード
１に対する抗血清と同様に両蛋白質を認識Ｊ−る（レー
ン４）が、その程度はさらに弱い（う−タは示していな
い）。 図２△の−ｆ−タｂま７ｊ 、ペプチド２が抗血清によ
る１５ｋＤ蛋白質と１６ｋＤ蛋白質の認識に競合１゛る
ことを示ずくレーン５）。しかしながら、ペプチド１（
レーン６）又は無関係ペプチドは抗ペブヂド２血清どは
競合しない（レーン７）。 ｎＶｉｔｒｏ翻訳産物を分析づる／、：め（Ｊ他のブ［
１ウィルス断片由来のＲＮＡを調製した。１組の実験に
おい（−１ＲＮＡ合成に使用づるランブレー１〜を制限
Ｍ県開裂により、予定の△ＵＧＩトン（ＲＳ ａ ］一
部位）に対し−Ｃ’ ５’ 側の７ヌクレＡ−ザドか又
は予定の△ＵＯのヨドン（ＢｂｖＩ部位）に対１ノで
３′側の３０ヌクレオブトを切断した（図４参照）。抗
ペプヂド２抗面清にＪ、り認識される１２［定の蛋白質
１＋ｒ物【よこれらの実験（：１．ｌ：観察されなかっ
た（図２１）、レーン１及び２）。ＲＮ八へ成用に使用
するテンプレートを予定の停止」トン（ＮｄｅＩ部位）
に対して ３′側の１０２ヌクレオヂで開裂し、抗ベプ
ヂド２血清を用いて１ｈ ｋ Ｉ−） ＩＪ３白質と１
６ｋＤ蛋白質を検出したく図２１’３）（ラン３及び４
）。以下の制限Ｍ素、ＲｓａＩ（レーン１）：ＢｂｖＩ
（レーン２）及びＮｄｃＩ＜レーン３及ペプヂド２血清
を用いて標識化産物に関して免疫沈降を実施したくレー
ン１，２及び４）。レーン３は全ｉｎ ｖｉｔｒｏ翻訳
反応を表わづ。 １１１１３単離物のｌｌＸ１３ｃ２り１−１−ンの配列
は、前記の通り、この領域由来のＲＮＡが開放読み枠の
５′末端に開始］トンを欠Ｊ／ＶＣいるため蛋白質を産
生できないであろうことを示唆１ノている１゜１−、
ａ を遺伝ｚ、ａ ｒ ｔ： 遺伝ｒ及び一部のｃ ｒ
）ｖ ’ｒ’Ａ仏子の第一］−ド化］−ギソン間の領装
置）−Ｂａｍｌ−１１（８０１７位置）制限１ｔＪｉ
片ヲ含ｂ フ（Ｂ ａ ｍ ＬＩ １部位：ヌクレオチ
ド８０１７） ニマタｌｆｉす、Ｅ ＬＪ ５二存イ１
するＦｌｉｔ！ｉｊ“１に対応するｌ−Ｉ Ｘ ［（ｃ
２プ１−１ウイルスク１１−ンの断片を１ｎＶｉｔｒ
ｏ転写してＲＮＡを調製し／ｊ 。このＲＮΔを用い−
（、上記と同様の方法（・赤血球溶解産物を企画した。 ｒ−１ｉプ［１ウイルスＲＮ△の場合と同様、ｔ ａ
ｉ−の開始＝１トンをＲＮＡから欠失した１゜１５ｋＤ
産物及び１６ｋＤ産物に対応する蛋白質は前３！＋ｓ−
メＦオニン標識化抽出物又は抗ペゾヂド２血清を用いて
得られた沈降物中には、ネめられなかった（図２Ｃ，レ
ーン１，２）。Ｓ Ｐ ６ ＲＮ ＡポリメノーゼＪ【
ｌモータ［Ｍｅｌｔｏｎ 、 Ｄ、Δ、舌。 Ｎｕｃｌ 、 Ａｃ１ｄ 、 Ｒｅｓ、 １２： ７（
１３ｈ−７０５６（１９８４）］の３′側ニアルＬＩ
Ｘ Ｉ−３Ｃ２Ｄ ｔ ａ ’ｌニー１．７’ ［：Ｉ
ウィルスｌ） ＮΔ９１−１−ン［□ ａｙｌｏｎ
、△、 Ｉ 、、Ｃ０１１４４： ９４１−９／１
７１から得られたＳａ ｌ Ｉ （５４４１位Ｆｃ ｏ
Ｒ１をｐＸＬＪを直線化し、ｉｎ ｖｉｔｒｏ転η゛
用Ｉンブレ−１゛・とじ−（用いＩこ３゜Ｉｎ Ｖｉｔ
ｒＯ翻訳後、標準化産物を１５％５ＤＳＰＡＧＦＩレー
ン１）土で直接的に、あるいは抗ペブブド２血清くレー
ン２）、又はＩＩＩＶ−１感染息者血消（レーン３）′
ｃ予め免疫沈降させ（゛分析しｌこ。 しかしながら、ト１１■−１感染患者血消にＪ、る免疫
沈降からは、切断外膜産物の存在は明瞭には示されなか
った（レーン３）。 図２Ｄは、この蛋白質とＨＩ Ｖ−２及びＳＩＶウィル
スとの交叉反応性を示’７１ｏ ｐＥＵ ＲＮＡ生成
ＳＰ６のｉｎ ｖｉｔｒｏ翻訳後、標識化産物を正常ヒ
ト血清（レーン１）：ｌ−１１Ｖ−１感染ヒ１〜血ｈ−
（レーン２）；５００１＋１ＭのベゾＪ−ド２存イ１１
・（゛のＨＩ Ｖ −１感染息者血清くレーン３）：１
ｌＩＶ−２感染ヒト自消（レーン４）；又はＳＩＶ・感
染サルｈｅｓｕｓ ｍａｃａ ｕａｓ血清（レーン５）
を用い（免疫沈降した。その免疫沈降物を１５％５ＤＳ
−ＰＡＧＥ」Ｃ分析しＩご、１５ｋｌ）蛋白質及び１６
ｋｌ）蛋白質を認識りる抗ペプー１ド２血消の能力を、
本ウィルスづるレト【１ウイルスベクター″Ｃ感染後に
、ｔａ１次 遺伝産物の椙迫的発現のためになめ選択された［Ｒｏｓ
ａｎ、 Ｃ，Ａ、等、 Ｊ 、 ’Ｊ １ｒｏ１． ！
ｉ７： ３７９”−３８４（１９８５）。参照にＪ、
り木明細用中に含めるものとゴる」。論文中に報？１の
通りｌ： １． ｃｅ、王、Ｈ。 等、ｌ〕ｒｏｃ 、Ｎａｔｌ 、Δｃａｄ 、 Ｓｃｉ
、 ＵＳΔ ８１ニア５７９〜７５８３（１９８４）］
、細胞を１３”８１メーｆＡ−ンに記載の通りにこれ
らの細胞株を調製した。これは参照により本明細−）中
に含めるものとする１゜ａｒｔ遺伝子と、しつかり統合
されたｌ−＋ １ Ｖのプ［１ウィルスＥｌｉ、ＨＸＢ
Ｃ２及びＭａ１株［△１ｉｚｏｎ 、 Ｍ、 舌、、
（’ａｌｌ郵、］記］の３’ Ｌ Ｔ’ Ｒどの間の
領域を右するクローン化Ｈｅ Ｌ ａ細胞株を作製し、
次いＣ゛標準技法を用い（Ｊ ？１ｊ、 ＃ｔ ＬＪ
ｔこ１．これらの細胞株を中側Ｊるために用いた親細胞
は、ｔ ａ ’ｌ−コード化配列を運搬′λ ｑ とｅｎｖｉ伝子産物子産物η−する。これらの細胞株の
作製に用いＩＣ１ラスミドは、ａ ｒ’ １−遺伝ｒの
開始１．１トンの５′側に並列するト１１ Ｖ ｌ−
、Ｔ Ｒを含有した。ｔａｔ遺伝子産物は１．ｒａｎＳ
に供給された。図３△は、抗ペプチド２血清（レーン１
）又は１−１１ Ｖ −１感染息者血清（レーン２）で
免疫沈降ＬＪ／＝ １−１０ Ｌ−ａ １： ａ を
細胞株溶解産’ＩＩＩ ヲｉｔ＜ １ 、 図３Ｂは免
疫前ウリギ血循（レーン１）：抗ペブブド２血清（レー
ン３） ： ！３００μＭのべ１゛ｆド２存右下での抗
ペプチド２血清（レーン４）；正常ヒト血１１１１（レ
ー・ン５） ； ｔｌｌ Ｖ−１感染患考血Ｆ＋ （レ
ーン６）ニヨリ免疫沈降すレｔ、ニドＩ Ｑ ＋−，ａ
ｔ ａ １： ｌ′Ｆ溶解産物を示Ｊ。レーン２
は、抗ペブブド２血清にＪ：る、ｐｌ−ＵＲＮΔから得
られた標識化１ｎＶｉｔｒＯ翻訳化産物の免疫沈降を表
ね１ｏ図３Ｃは、免疫前ウザギ自消（レーン１）；抗ベ
ゾチド２面清（レーン２）；正常ヒト面清（レーン３）
及びｌ−Ｉ Ｔ Ｖ１感感染者血消（レーン４）により
免疫沈降されたｌ−１ｅ １． ａ １．’ ａ ’
ｌ’、 Ｍ ａ ｌ溶解ρｒ−物を示１゜図３［）は
、免疫曲つリーギ血清（レーン１）；抗ペプチド２面滴
（レーン２）：正常じＩ・面精（レーン３）及びｌ−１
１Ｖ−１感染患者血清（レーン４）により免疫沈降した
Ｈ Ｏｌ ａ ｔ ａ １． １１ Ｉ Ｂ溶解産物
を承り一１１図３のデータは、抗ペプｆ−ド２抗血浩が
、ｉｎ ｖｉｔｒｏで負られｌこ１！ｉｋ［）蛋白質と
一緒に移躬Ｊ−Ｊる１−１１ブ［二１ウィルス由来の細
胞株にＪ′３ＬＪる１５ｋＤ（レーン３）を特異的に；
認識り−ることをＸ″）証する。同じ抗血浩が、ＭＡＬ
（図３０）プ［１ウイルス又はｔｌＸ［３ｃ２（図３Ｄ
）プ［−１ウイルス由来の蛋白質を発現覆る細胞株の蛋
白質を認識しない３゜これは予測通りの結果であり、ｌ
−Ｉ Ｘ Ｂ ｃ ２プ１−１ウイルス又はＭａ１ブ［
レンイルスは適当に位置号る開始］トンを含有しない（
図２Ｂ）ためである。 Ｅ１１プ【］ウィルス由来の細胞株に＋１３りるｌＩ［
Ｖ１患者抗而清により１５ｋＤ蛋白質が検出されないの
は、明らかに、使用１）だ患古抗血桔におりる抗−ｖｐ
ｕ滴定が低かつｋことと、細胞株中の１５ｋＤ蛋白質昂
がｉｎ ｖｉｔｒｏ翻訳Ｊ）γ物に比してＪ１常に少量
で・あ−】だためＣある。 ウィルス生活環にお（）るＵ蛋白ｙ′１の機能を調べる
ために、５３３２位置での５ａｌＩ部位と８０１７位置
での１３ ａ ｍ ｌ−ｌ １部位との間のＬＩ Ｘ
Ｆ３ ｃ ２の配列（４−１が転写開始部位）がくれに
え１応するり［Ｊン［３１−１１０からの配列に１１′
１“換される組み換えゾ１］ウィルスを作製しＩＣ。 トＩＸＢｃ２とは異なり、Ｂ１−１１０はＵ蛋白質に関
するＡ ＬＪ Ｇ ｌ１ｉｌ始二］トンを有りる。他の
点で【よｅｎｖｌ伝子産物子産物る少数の保存アミノ酸
変化以外はＨＸＢｃ２に非常（−よく似ＩＣプロウイル
スク［Ｊ−ンを生成りることであり、Ｕ間放読み枠を利
用する能力を生成することであった。 ＨＸＢｃ２及び組換えＢｌ−＋１０り【］−ンによるＪ
ｕｒｋａｔ細胞の１〜ノンスフエクシ５１ンの結果、ウ
ィルス産生が起きたが、ｌノかし細胞を通じてのウィル
ス由来Ｂ ｌ−１１０の蔓延はｌ−Ｉ Ｘ Ｂ ｃ ２
山来ウイルスにすｌ） ４：Ｉｆ：：ｊに低か・＞ １
４ 、。 各１？’？ ｈの部分標本は、３１１Ｓ−シスライン及
び３：）Ｓ−メヂＡニンでトランスフ−ｒり１〜後、２
．／Ｉ及び７ Ｅｌ目に代謝的に標識された９１次い（
・細胞抽出物をＡＩＤＳ患者抗血清で免疫沈降し、１２
；−％ポリアクリルアミドゲルにかけた。そのゲルのオ
ートラジオグラムを図５Ｂに示す。ここｅレーン１．４
及び７はそれぞれトランスフ」クシ」ン後２゜４及び７
日目の対照細１抱である。レーン２．５及び８はそれぞ
れ２．４及び７ ＬＩ目のＩ」Ｘ Ｂ ｃ ２−ｃ ｌ
・ランスノエクトされた細胞である。レーン３６．９は
それぞれ２．４．７日目のＢＨｉｏの組換えプ［ｌウィ
ル・トランスフ１クト細胞である。 上記明細書を利するものであれば、本発明の精神に沿う
ものである限りいかなる変更を加えてもよく、本明細書
に記載の特定の実施例に背反し【
図１Δは、ＩＩ Ｉ Ｖ−２のＳＩＶ株及びＲＯＤ株と
比較した揚台のＨＩＶ−１のＥｌｉ株の中心領域の遺伝
子構成を示す。図１８はｌ遺伝子蛋白質配列を直線−（
゛示し１．：らのである。図１Ｃは９測されるｖ ｐ
ｕ 遺伝子産物の昧水竹を示している。 図２八〜Ｄは、ｖｐｕ３１１伝子産物のｉｎ ｖｉｔｒ
ｏ特ｆ１を示すラジＡグラムである。 ルスの模式図である、１ 図５１３は、ｙ Ｆ） ＩＪ 遺伝ｒ ｒ＋’ｒ物ヲ産
牛’産生Ｉ （ｉｔｓ ’、ｒ ソＩ：ウイルスブラス
ミドか又はくれ４Ｒ生でさむいプロウィルスプラスミド
によるリンパ球のトランスフ」クシニ１ン後に生じるウ
ィルス産物の産生に、ｌ１３りる差を示ツオートラジオ
グラムである。 づる細胞系にお（〕る竺且ＭＷ伝ｒ産物の同定を示づラ
ジオゲノムＣ゛ある。。 図４は伝令ＲＮ Ａの合成に使用されるプラスミドｐＥ
’Ｕの模式図Ｃある。 図！′３△は、竺旦曳Ｍ仏子産物を産生Ｊることがでさ
るウィルスとてれを作ることができないウィルスどの比
較の！、：めに作製される絹換えブ［ｌウイＵ ＥＬ
Ｉ Ｕ）ｌＸＢ２ ＢＨＩＯ ＢＨ８ ＨＸＢ３ ＭＡＬ ＢＲＵ ５Ｆ２ ＭＱＰＬＧＩＩＡＩＡ Ｔ★☆ＩＰ＊Ｖ＊★Ｖ Ｍ＊＊ＩＱ＊−責＊Ｖ Ｍ＊責ＩＰ＊ＶＴ”Ｖ Ｍ☆責ｉＱ＊−＊＊ｖ Ｉ＊☆★ｖ＊Ｌ責★Ｖ Ｍ肯☆工Ｑ＊−★責★ Ｍ＊Ｓ＊Ｑ＊Ｌ＊＊Ｖ ＡＬＶＶＡＩＩＬＡＩ 責★＊☆★＊＊Ｉ＊責 責＊＊＊＊＊＊１＊責 ★＊Ａ＊★責★Ｉ＊責 灼ｉ★★＊女工＊責 責★★★ＴＬ”Ｉ☆責 責★＊女★☆責工★責 Ｓ＊＊＊ＶＡ＊Ｉ＊責 ＶＶＷＴＩＶＦＩＥＹ 責★★Ｓ＊責■＊＊責 ＊費★に＊責■＊＊責 ＊＊女に＊☆■＊＊☆ ★責＊に＊＊Ｉ＊＊責 ＊＊＊＊＊責★☆★工 ＊＊女に女女工＊☆☆ 女☆責☆責＊Ｌ＊☆☆ ＲＲＩＫＫＱＲＲＩＤ ＊に＊ＬＲ＊＊に＊責 ★に＊ＬＲ＊＊に＊責 ＊に＊ＬＲ＊＊に＊★ ＊に＊ＬＲ＊＊に＊★ 責に＊ＲＲ＊☆に★☆ 責に＊ＬＲ＊＊に★★ ＊に＊ＬＲ＊＊に国★ ＣＬＬＤＲＩＴＥＲＡ Ｒ＊工責★ＬＩ★☆★ Ｒ＊■責★１１☆★★ Ｒ＊Ｉ＊＊ＬＩ＊＊☆ Ｒ＊Ｉ＊責し■＊嚢★ Ｒ★Ｉ＊＊ＩＲ＊★責 Ｒ＊工☆★ＬＩ＊☆★ Ｒ＊Ｉ☆☆＊Ｒ＊に★ ｔＪ ＥＬＩ ＪＨＸＢ２ Ｂ８１０ ０Ｂ）＋８ ＨＸＢ３ ＭＡＬ ＢＲＬＩ ５Ｆ２ ＥＤＳＧＮＥＳＥＧＤ 責★責★★★★＊＊Ｅ 責責＊☆責＊＊大責Ｅ ＊＊＊＊＊＊＊責責Ｅ ＊☆★☆★＊責★★Ｅ 責☆責★★☆★大★☆ ★★★★★★責★＊Ｅ 責★責責★★責＊＊責 ＲＥＫＬＳＫＬ−一− 一−−Ｉ”Ａ”ＶＥＭ −−−Ｉ”Ａ＊ＶＥＭ −−−Ｉ”Ａ＊ＶＥＭ −−−Ｉ＊Ａ＊ＶＥＭ ＴＥＥ＊責★★−−一 一−−Ｉ＊Ａ＊ＶＥＭ ＱＥＥＫ＊Ａ＊ＶＥＭ ７１ ８〇 −ＶＥＭＧＨＨＡＰＷ Ｇ★☆責★責責☆責★ Ｇ＊責★責★責責★責 Ｇ＊☆１け☆★☆☆ Ｇ＊＊大☆★責＊＊☆ 一＊＊＊＊＊Ｄ＊＊倉 Ｇ＊＊嚢−＊＊＊＊責 Ｇ−一−＊＊１＊★☆ ＩＤＤＬ 責ｖ＊＊責 ＊Ｖ＊＊☆ ★Ｖ＊★責 責Ｖ☆★責 ＊ｖ＊☆責 ★Ｉ＊＊責 ★Ｖ＊責★ ＦＩＧ、２Ａ ＦＩＧ、２８ ＦＩＧ、２ＣＦＩ
Ｇ、２ＤＦＩＧ、 ３Ａ ＦＩＧ、３８ Ｆｌ（ ８Ｋｄ− １５Ｋｄ→ ■ｒ ・、 、ｑ−Ｍ・、 ；− Ｓａｌ ｌ ＢａｍＨＩ 呼欄
比較した揚台のＨＩＶ−１のＥｌｉ株の中心領域の遺伝
子構成を示す。図１８はｌ遺伝子蛋白質配列を直線−（
゛示し１．：らのである。図１Ｃは９測されるｖ ｐ
ｕ 遺伝子産物の昧水竹を示している。 図２八〜Ｄは、ｖｐｕ３１１伝子産物のｉｎ ｖｉｔｒ
ｏ特ｆ１を示すラジＡグラムである。 ルスの模式図である、１ 図５１３は、ｙ Ｆ） ＩＪ 遺伝ｒ ｒ＋’ｒ物ヲ産
牛’産生Ｉ （ｉｔｓ ’、ｒ ソＩ：ウイルスブラス
ミドか又はくれ４Ｒ生でさむいプロウィルスプラスミド
によるリンパ球のトランスフ」クシニ１ン後に生じるウ
ィルス産物の産生に、ｌ１３りる差を示ツオートラジオ
グラムである。 づる細胞系にお（〕る竺且ＭＷ伝ｒ産物の同定を示づラ
ジオゲノムＣ゛ある。。 図４は伝令ＲＮ Ａの合成に使用されるプラスミドｐＥ
’Ｕの模式図Ｃある。 図！′３△は、竺旦曳Ｍ仏子産物を産生Ｊることがでさ
るウィルスとてれを作ることができないウィルスどの比
較の！、：めに作製される絹換えブ［ｌウイＵ ＥＬ
Ｉ Ｕ）ｌＸＢ２ ＢＨＩＯ ＢＨ８ ＨＸＢ３ ＭＡＬ ＢＲＵ ５Ｆ２ ＭＱＰＬＧＩＩＡＩＡ Ｔ★☆ＩＰ＊Ｖ＊★Ｖ Ｍ＊＊ＩＱ＊−責＊Ｖ Ｍ＊責ＩＰ＊ＶＴ”Ｖ Ｍ☆責ｉＱ＊−＊＊ｖ Ｉ＊☆★ｖ＊Ｌ責★Ｖ Ｍ肯☆工Ｑ＊−★責★ Ｍ＊Ｓ＊Ｑ＊Ｌ＊＊Ｖ ＡＬＶＶＡＩＩＬＡＩ 責★＊☆★＊＊Ｉ＊責 責＊＊＊＊＊＊１＊責 ★＊Ａ＊★責★Ｉ＊責 灼ｉ★★＊女工＊責 責★★★ＴＬ”Ｉ☆責 責★＊女★☆責工★責 Ｓ＊＊＊ＶＡ＊Ｉ＊責 ＶＶＷＴＩＶＦＩＥＹ 責★★Ｓ＊責■＊＊責 ＊費★に＊責■＊＊責 ＊＊女に＊☆■＊＊☆ ★責＊に＊＊Ｉ＊＊責 ＊＊＊＊＊責★☆★工 ＊＊女に女女工＊☆☆ 女☆責☆責＊Ｌ＊☆☆ ＲＲＩＫＫＱＲＲＩＤ ＊に＊ＬＲ＊＊に＊責 ★に＊ＬＲ＊＊に＊責 ＊に＊ＬＲ＊＊に＊★ ＊に＊ＬＲ＊＊に＊★ 責に＊ＲＲ＊☆に★☆ 責に＊ＬＲ＊＊に★★ ＊に＊ＬＲ＊＊に国★ ＣＬＬＤＲＩＴＥＲＡ Ｒ＊工責★ＬＩ★☆★ Ｒ＊■責★１１☆★★ Ｒ＊Ｉ＊＊ＬＩ＊＊☆ Ｒ＊Ｉ＊責し■＊嚢★ Ｒ★Ｉ＊＊ＩＲ＊★責 Ｒ＊工☆★ＬＩ＊☆★ Ｒ＊Ｉ☆☆＊Ｒ＊に★ ｔＪ ＥＬＩ ＪＨＸＢ２ Ｂ８１０ ０Ｂ）＋８ ＨＸＢ３ ＭＡＬ ＢＲＬＩ ５Ｆ２ ＥＤＳＧＮＥＳＥＧＤ 責★責★★★★＊＊Ｅ 責責＊☆責＊＊大責Ｅ ＊＊＊＊＊＊＊責責Ｅ ＊☆★☆★＊責★★Ｅ 責☆責★★☆★大★☆ ★★★★★★責★＊Ｅ 責★責責★★責＊＊責 ＲＥＫＬＳＫＬ−一− 一−−Ｉ”Ａ”ＶＥＭ −−−Ｉ”Ａ＊ＶＥＭ −−−Ｉ”Ａ＊ＶＥＭ −−−Ｉ＊Ａ＊ＶＥＭ ＴＥＥ＊責★★−−一 一−−Ｉ＊Ａ＊ＶＥＭ ＱＥＥＫ＊Ａ＊ＶＥＭ ７１ ８〇 −ＶＥＭＧＨＨＡＰＷ Ｇ★☆責★責責☆責★ Ｇ＊責★責★責責★責 Ｇ＊☆１け☆★☆☆ Ｇ＊＊大☆★責＊＊☆ 一＊＊＊＊＊Ｄ＊＊倉 Ｇ＊＊嚢−＊＊＊＊責 Ｇ−一−＊＊１＊★☆ ＩＤＤＬ 責ｖ＊＊責 ＊Ｖ＊＊☆ ★Ｖ＊★責 責Ｖ☆★責 ＊ｖ＊☆責 ★Ｉ＊＊責 ★Ｖ＊責★ ＦＩＧ、２Ａ ＦＩＧ、２８ ＦＩＧ、２ＣＦＩ
Ｇ、２ＤＦＩＧ、 ３Ａ ＦＩＧ、３８ Ｆｌ（ ８Ｋｄ− １５Ｋｄ→ ■ｒ ・、 、ｑ−Ｍ・、 ；− Ｓａｌ ｌ ＢａｍＨＩ 呼欄
Claims (18)
- （１）（ａ）ウィルス蛋白質を発現すべくＡＵＧコドン
がすぐ上流に適切な読み枠で挿入されているＨＩＶ−１
ゲノムの５５４１〜８０１７領域のヌクレオチドに対応
す十分な数のヌクレオチドを含有するＤＮＡ断片であつ
て、全ＨＩＶゲノムを含有しないもの；及び （ｂ）該ＤＮＡ断片の上流にあるプロモータを含有する
ベクター。 - （２）￥ｖｐｕ￥遺伝子を含有するが、全ＨＩＶ−１ゲ
ノムを含むわけではないＤＮＡ断片。 - （３）十分な数のヌクレオチドがＨＩＶ−１のＥｌｉ株
のＵ開放読み枠に対応する特許請求の範囲第１項に記載
のベクター。 - （４）（ａ）特許請求の範囲第２項記載のＤＮＡ断片、
及び （ｂ）該ＤＮＡ断片上流のプロモータを含有するベクタ
ー。 - （５）プロモータがウィルスプロモータであって、ベク
ターがまたエンハンサー及びポリアデニル化配列を含む
特許請求の範囲第４項記載のベクター。 - （６）￥ｖｐｕ￥遺伝子により産生される実質的に純粋
な蛋白質。 - （７）特許請求の範囲第２項記載のＤＮＡ断片の￥ｖｐ
ｕ￥遺伝子により産生される蛋白質。 - （８）蛋白質の分子量が約１６ｋＤである特許請求の範
囲第７項記載の蛋白質。 - （９）蛋白質の分子量が約１５ｋＤである特許請求の範
囲第７項記載の蛋白質。 - （１０）開裂して１５ｋＤ蛋白質を形成する特許請求の
範囲第８項記載の蛋白質。 - （１１）特許請求の範囲第７項記載の蛋白質の抗原決定
基と免疫学的に交叉反応する抗原決定基を有するポリペ
プチド。 - （１２）￥ｖｐｕ￥遺伝子産物の７３〜８１番目アミノ
酸と免疫学的に交叉反応する特許請求の範囲第１１項記
載のポリペプチド。 - （１３）ウィルス蛋白質Ｕに対して生じる抗体の存在の
検定方法であって、 （ａ）所定の標本を採取し、 （ｂ）特許請求の範囲第１１項のポリペプチドを該標本
に添加して、 （ｃ）該ポリペプチドにより複合体が形成されたか否か
を測定することより成る方法。 - （１４）ウィルス蛋白質Ｕの存在に関する検定方法であ
つて、 （ａ）所定の標本を採取し、 （ｂ）抗体を特許請求の範囲第７項記載の蛋白質に添加
して、 （ｃ）該抗体により複合体が形成されたか否かを測定す
ることより成る方法。 - （１５）十分量の特許請求の範囲第７項記載の蛋白質を
該蛋白質を構成的に発現しないＨＩＶ−１株感染ウィル
ス細胞に投与することより成るＨＩＶウィルス複製の弱
毒化方法。 - （１６）さらに、特許請求の範囲第７項記載の蛋白質の
弱毒化作用と類似の作用を示す化合物を前記ウィルス細
胞に十分量添加することより成る特許請求の範囲第１５
項記載の方法。 - （１７）さらに、特許請求の範囲第７項記載の蛋白質の
弱毒化作用を増強する化合物を前記ウィルス細胞に十分
量添加することより成る特許請求の範囲第１５又は１６
項記載の方法。 - （１８）増強が相乗的である特許請求の範囲第１７項記
載の方法。
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