JPH01502117A

JPH01502117A - プロスタグランジンの硫化誘導体を含む治療用組成物、新規な硫化誘導体及びそれらの製造方法

Info

Publication number: JPH01502117A
Application number: JP88500743A
Authority: JP
Inventors: ドレイ，フェルナンド; ヴィリー・ル・ノーマン・ブリギット; グエット，アラン
Original assignee: アンスティテュ・パストール; アンスティテュ・ナシュナル・ド・ラ・サント・エ・ド・ラ・リセルシェ・メディカル　（イエヌエスエエールエム）
Priority date: 1986-12-29
Filing date: 1987-12-29
Publication date: 1989-07-27
Also published as: FR2608924B1; EP0295284A1; WO1988005042A1; FR2608924A1

Abstract

(57)【要約】本公報は電子出願前の出願データであるため要約のデータは記録されません。

Description

【発明の詳細な説明】プロスタグランジンの硫化誘導体を含む治療用組成物、新規な硫化誘導体及びそれらの製造方法本発明は、特に抗腫瘍活性を有するプロスタグランジン誘導体又はプロスタグランジン同族体を活性成分として含有する治療用組成物に関する。

抗腫瘍活性を有するプロスタグランジンは、既に文献により公知である。ツクシマ・マサノリ氏及びカトウ・タカトシ氏はプロスタグランジン、特にＰＧＡ１、 Δ’−ＰＧ、Ａ＋　、１２−ｅｐｉ−Δ’−ＰＧＡ、、ＰＧＪ２、Δ１２−　Ｐ　Ｇ　Ｊ２及びΔ′２・ｌ４−ＰＧＪ２の抗腫瘍活性（エイチ・サーラーーダオ民地「イコサノイド（Ｉｃｏｓａｎｏｉｄｓ）と癌」　；ニューヨーク州う−ベン・プレス社発行“癌研究（［：ａｎｃｅｒ　Ｒｅ５ｅａｒｃｈ）”誌１９８６年４６号３５−３８頁所載）、並びにクラブロン（ｃｌａｖｕｌｏｎｅｓ）及びプナグランジン（ｐｕｎａｇｌａｎｄ　１ｎｓ）の抗腫瘍活性（オー・マヤルシ氏及びニス・ヤマモト氏「プロスタグランジンの進歩」；ニューヨーク州う−ベン・プレス社発行”トロンボキサン及びロイコトリエン研究（Ｔｈｒｏｍｂｏｘａｎｅ　ａｎｄ　Ｌｅｕｋｏｔｒｉｅｎｅ　Ｒｅ５ｅａｒｃｈ）”第１５巻所載）について記載している。これらの著者らは、抗腫瘍活性がこれらの組成物のシクロベンテノン環におけるα、β不飽和に結びついていると考えていた。

現在では、チオールとプロスタグランジン又はプロスタグランジン同族体の付加生成物であってシクロペンテン環を有するものが抗腫瘍活性を有することが見出されている。

従って本発明の主題とするところは、活性成分として以下の式；（式中、２１及びＺ２はプロスタグランジン又はプロスタグランジン同族体の鎖に属する二つの鎖であり、Ｒは任意に−又は二辺上のＮＨ２基によって置換された炭化水素基又は式（式中、ｎ＝１又は２であり、Ｗｌは水素原子、アミノ酸残基又はアミノ酸連鎖から誘導された残基であり、ｗ２は水酸基、アミノ酸残基又はアミノ酸連鎖から誘導された残基である）の基であり、Ｒ８は水素原子、炭化水素基又はハロゲン原子であり、及びＲ２は水素原子、水酸基又はアルコキシ基である）から選択された化合物を含有することを特徴とする治療用組成物である。

鎮Ｚ、は、特に次式の鎮であることができる！へ、７／＼、７ｔ８．２Ｃ［１０ＨＰ　Ｇ　Ａ　１又はＰＧＪ、の鎮ｚ、に対応Ｐ　Ｇ　Ａ　２又はＰＧＪ、の鎖Ｚｌに対応／＼！−ν／＼Ｃ００）ｌ鎖Ｚ２は、特に次式の鎮及び相当するケトン鎖であることができる。

これらの鎖はまた、これらの鎖を短縮又は延長したもの、或いは還元又は酸化反応により得られた鎖に相当するものであることができる。そのような鎖の例としては、Ｚ２について以下の式の鎖に言及することができる：＼、／＼＼／６＼鎖Ｚ、及びＺ２はまた、クラブロン（ｃｌａｖｕｌｏｎｅｓ）及びプナグランジン（ｐｕｎａｇｌａｎｄｉｎｓ）　（ｒプロスタグラン、ジンの進歩」における既述の文献を参照のこと）に見られる鎖をも含むものである。

式Ｉ及び■の幾つかの化合物は公知である。即ちイー・ニー・ハム民地は、システィン及びグルタチオンのＰＧＡ、との付加生成物に言及している（プロスタグランジン１０．２１７．１９７５）。カエン民地はさらに、グルタチオンとＰＧＡ、との付加生成物の還元生成物について記載している（Ｊ、Ｂｉｏｌ、Ｃｈｅｍ、２５１．６５５０．１９７６）。

式Ｉ及び■の化合物は、式及びを有する対応するシクロベンテノンから、式Ｒ３Ｈ■ のチオールとの反応によって得ることができる。

反応は、中性付近にある水性媒体中（例えばｐＨ７，４のトリス−塩酸緩衝液）において行われるであろう。

使用可能なチオールの例として、次のものに言及しておこう二次式のシスティン次式のシステイニルグリシン次式のグルタチオン次式のシステアミンＨＳ　ＣＨ２ＣＨ２ＮＨ２式■及び■の化合物は、それぞれ式■及び■の化合物を、特に水素化ホウ素ナトリウムで還元することにより得ることができる。

変形例として、式■の化合物の多くのものを試験管内で得ることができる。すなわち９−ヒドロキシ−１１−システイニル−ＰＧＡ及び９−ヒドロキシ−１１− システイニルグリシル−Ｐ　Ｇ　Ａ　ｌという化合物を、ラットの腫瘍細胞、特にＢ　１０４神経芽腫細胞及びｃ６神経膠腫細胞によるプロスタグランジンＰ　Ｇ　Ａ　＋の培養、および代謝産物の分離によって得ることができる。

以下に述べる実施例は、本発明において用いられる化合物の調製を例示するものである。

実施例　１システィン及びシステイニルグリシンと９−ヒドロキシ−ＰＧＡ。

との付加生成物の試験管内での製造。

ａ）　重炭酸塩で緩衝されたＤｕｌｂｅｃｃｏ（７）改良イーグル培地（Ｄｕｌｂｅｃｃｏ’　ｓｍｏｄｉｆｉｅｄ　Ｅａｇｌｅ’ｓ　ｍｅｄｉｕｍ：口Ｍ！ＥＭ）とハムのＦ　１２培地（Ｈａｎｄ’ｓ　Ｆ１２ｍｅｄ　ｉｕｍ）との１：１の混合物からなり、熱で不活性化された胎児牛血清（Ｆｅ２．２．５％）及び馬血清（ＨＳ、　５％）、１５ｍ　ＭのＨｅｐｅｓ　、　１００Ｕ／ｒＩ１１のペニシリン、５０μｇ／ｒｎｌのストレプトマイシン及び０．２５μｇ／ｄのフンギソン（Ｐｕｎｇｉｚｏｎｅ：抗生物質アンフォテリシンの商品名）で補完された完全培地（２ｒｎ１）に、２Ｘ１０’個の８１０４神経芽腫細胞を植え、２４時間培養した。次いで５μｇ／ｍｌのインシュリンと、１００μｇ／ｍｌのトランスフェリンと、２０μＭのプロゲステロンと、１００μｇのプトレッシン及び３０μＭのセレン化ナトリウムによって血清が置換されていることを除いては上記の完全培地と同じ成分を含む培地上において、５％のｃｏ２を有する加湿された培養器内で３７℃において培養を行った。

追跡子として使用される１０−’Ｍの量のプロスタグランジンＰＧＡ＋と（’Ｈ）　−Ｐ　Ｇ　Ａ　、の混合物を添加して、この混合物を培養するよう放置した。

細胞を遠心分離によって取り除き、事前に２−のメタノールと１０ｍｆの水で洗浄して置いたＳｅｐ　Ｐａｋ　Ｃｕｅ（水）カートリッジに上清を入れた。

このサンプルを１０ｒＩＬｌの水で洗浄し、次いで６ｒｎｌのメタノールにより溶出を行った。

メタノールのフラクションを乾燥し、ｐＨ７，４の１０−”Ｍリン酸塩緩衝液に再度溶解し、そしてこの溶液を商品名５ｅｐｈａｄｅｘＧ−１０というデキストランのゲル濾過クロマトグラフィー用カラム（１，８Ｘ　２５１）へと導入した。溶出は同じ緩衝液で行われた。

塩の除去はＳｅｐ　Ｐａｋ　Ｃ＋ｓカートリッジで行われ、次いで商品名Ｎｕｃｌｅｏｓｉｌ　Ｃｕｅというカラム上で逆相高性能液体クロマトグラフィー（ｒｐＨＰＬＣ）を行った。溶出は１ｍｊ２／分の流量で二つの溶媒：Ａ（水分含有０．２％酢酸）及びＢ（メタノール）の混合物により、次のように行われた＝１０分間でＢの４７から５７％の直線勾配＝４０分の間、Ｂの５７％：２０分間でＢの５７から８０％の直線勾配。

集められたフラクションは、シンチグラフィー・カウンタによって分析した。

結果は第１図に記録されている。これは、４つのＰ　Ｇ　Ａ　ｒ代謝産物（代謝産物■、■、■及び■）に対応する放射能の４つのピークを明らかにしているものである。

対照として、細胞をなしにして同じ培地に対して３日間３７℃で加えたＰＧＡ、を、同じクロマトグラフィー的方法により精製した。７１分間という保持時間を有するただ一つのピークのみが観察された。

ｂ）　この手順はａ）と同様であるが、Ｃ６膠腫細胞を使用し、且つ次の培地を使用した：すなわち１０％の胎児牛血清（Ｆｅ２）、１００Ｕ／ｍｆのペニシリン及び５０μｇ／Ｈのストレプトマイシンで補完されたＤｕｌｂｅｃｃｏの改良イーグル培地である。

これによる結果は第２図に記録されている。これもまた、４つのピークを示している。

Ｃ）質量分析法による得られた生成物の定量（ＦＡＢ法）。

ａ）及びｈ）に従って得られた代謝産物は同じであった：代謝産物Ｉ及び■ 分子質量　５１６元素組成　Ｃ２５Ｈ，、Ｎ２０．Ｓこれらの代謝産物は、９　０ＨＰＧＡＩ　Ｃｙｓ　Ｇｌｙと略される、システイニルグリシンと９−ヒドロキシＰＧＡ、との「付加」生成物に対応する二つの異性体である。

内部標準としてＴＭＳを使用し、ＣＤ３ＯＤ内の溶液中においてＢｒｕｃｋｅｒの３００ＭＨｚの装置に記録された’ＨＮＭＲ（核磁気共鳴）スペクトルは、下記の特徴を示した：ＰＧＦ１ｔｘ（比較スペクトル＞（Ｈｓ：　４．１０　ｐｐｍ；　Ｈ＋＋　：　３．８１　ＰＰｍ；ＨＩ３−１４　：　５．５０　ｐｐｍ；　Ｈａｓ　：　３．９９　ｐｐｍ）。

代謝産物Ｌ　ＣＨ（ａ、システィン）　：　４．６２　ｐｐｍ５Ｓ　ＣＨ２：３．０７　ｐｐｍ、　Ｈｓ　：　４．１８　ｐｐｍ、　Ｈ＋＋　：　３．７５　ｐｐｍ、　ＨＩ３−＋４　：　５．５１　ｐｐｍ。

及びＨ＋ｓ　：　４．０５　ｐｐｍ。

代謝産物■、ＣＨ（α、システィン）　：　４．６０　ｐｐｍ５ＳＣＨ２：３．０７　ｐｐｍ５Ｈｓ　：　３．６５　ｐｐｍ、　Ｈ＋＋　：　３．８８　ｐｐｍ、　Ｈ１３−１４：　５．５２　ｐｐｍ１及びＨ＋ｓ　：　４．０２　ｐｐｍ０これより、これら二つの異性体に対しては次の構造式が与えら代謝産物Ｉ代謝産物■ 代謝産物■及び■ 分子質量　４５９元素組成　Ｃ２３Ｈ４１Ｎ　Ｏｓ　Ｓこれらの代謝産物は、９−０Ｈ−ＰＧＡ、−Ｃｙｓと略される、システィンと９ −ヒドロキシＰＧＡ、との「付加」生成物の二つの異性体に対応する。

核磁気共鳴スペクトルを分析することにより、以下の構造式をこれら二つの代謝産物異性体に対して与えることが可能となった。

ＦＩ２代謝産物■ 代謝産物■ 実施例　２１ミリモルのＰＧＡＩと１ミリモルのシスティンを、ｐＨ７，４であり０．２モルのトリス−塩酸緩衝液において、３７℃で１時間反応させた。

付加生成物Ｐ　Ｇ　Ａ　＋　Ｃｙ　ｓが得られた。

実施例　３手順は実施例２におけると同様にして、チオールとしてシステイニルグリシンを使用した。

次式を有する付加生成物ＰＧＡ＋−Ｃｙｓ−Ｇｌ　ｙが得られた。

しかしながら、この付加生成物は１１αの配置であると考えられる。

実施例　４手順は実施例２におけると同様にして、チオールとしてグＪレタチオン（ＧＳＨと略される）を使用した。

付加生成物ＰＧＡ、−３Ｇが得られた。

実施例　５実施例２で得られた溶液に対して、水素化ホウ素ナトリウムを添加した。次いで、蟻酸によりｐＨを３．５に調節した。この混合物をエチルアセテートで抽出する。次に生成物をＳｅｐ　Ｐａｋ　Ｃｐｓカートリッジを介して通し、Ｎｕｃｌｅｏｓｉｌ　Ｃ＋ｓカラム上における液体クロマトグラフィーを、実施例１と同様に行った。

これにより、、　０Ｈ−ＰＧＡ、−Ｃｙｓの二つの異性体が分離手順は実施例５におけると同様にして、実施例３の溶液を使用した。

最終的に、９　０ＨＰＧＡＩ　Ｃｙｓ　Ｇｌｙの二つの異性体が分離された。

以下の試験は、これらの化合物の抗腫瘍活性を例証するためのものである。

試験生成物を添加した後の初期濃度が２Ｘ１０’細胞／Ｗ１１であるようにして、Ｂ１０４神経芽腫の増殖阻止が、実施例１ａ）におけると同じ培地において測定された。培養は２４時間にわたって実施され、細胞の数は２４時間後にクールター計数器を使用して測定された。

対照培地に比較しての阻止百分率を計算した。

その結果を以下の表に示す。

代謝産物　Ｉ　２８±３　２６±２代謝産物　ｎ　４９±１　４１±３代謝産物　ＩＩＩ　１９±９　１７±３代謝産物　ＴＶ　１３±１０　１０±４ＰＧＡ、−ＧＳＨ２３±１１　１３±１０ＰＧＡ、−Ｃｙｓ　５１±１０　４３ ±８ＰＧ、Ａ＋−Ｃｙ　ｓ　−Ｇ　ｌ　ｙ　４６±１０　１８±１９９−［１Ｂ −ＰＧＡ　、　−Ｃｙｓ　（異性体１）　２４±８９−０Ｈ−ＰＧＡ　ｌ　−（：ｙｓ　（異性体２）　３４±８　２６±１９−ロ）ｌ−ＰＧＡ　１−Ｃｙｓ− Ｇ　Ｉｙ　（異性体１）　５４±２３　２６±２３９−ＤＨ−ＰＧＡ＋−Ｃｙｓ −Ｇｌｙ（異性体２）　４９±６　３０±１２本発明による治療用組成物は、患者に対して経口的又は非経口的に投与することができる。使用される化合物の水溶性が高いということを考慮に入れると、本発明の組成物は一般的に、水溶液の形態において投与され得るものである。

使用される成分の量は、一般的に言って患者及び疾病の重さに依存する。体重７０ｋｇの男性の場合には、通常は５０から５００■７日を非経口的に投与することができる。

さらに本発明の組成物は、式Ｉから■の活性成分を数種、及び抗腫瘍活性を有する他の化合物をも含むこと力（できる。

請求の範囲１　次の式の化合物（式中、Ｚｌ及びＺ２はプロスタグランジン又はプロスタグランジン同族体の鎖に属する二つの鎖であり、Ｒは式（式中、ｎ＝１又は２であり、Ｗｌは水素原子、アミノ酸残基又はアミノ酸連鎖から誘導された残基であり、Ｗ　２１＝’を水酸基、アミノ酸残基又はアミノ酸連鎖から誘導された残基である）の基であり、Ｒ２は水素原子、炭化水素基又はハロゲン原子であり、及びＲ２は水素原子、水酸基又はアルコキシ基である）から選択された化合物を活性成分として含有することを特徴とする治療用組成物。

Ｈ２の化合物から選択された９−０Ｈ−ＰＧＡ１−Ｃｙｓを含有することを特徴とする請求項１記載の組成物。

３　次の式の化合物から選択された９　０ＨＰＧ、Ａ＋　Ｃｙｓ　Ｇｌｙを含有することを特徴とする請求項１記載の組成物。

４　ＰＧＡ＋　Ｃｙｓを含有することを特徴とする請求項１記載の組成物。

５　ＰＧＡ＋　Ｃｙｓ　Ｇｌｙを含有することを特徴とする請求項１記載の組成物。

６　次の式を有する化合物。

７　次の式を有する化合物。

Ｈ２８次の式を有する化合物。

Ｈ２９次の式を有する化合物。

１０　９　０ＨＰＧ、Ａ＋　Ｃｙｓ及び９　０ＨＰＧＡＩ　Ｃｙｓ−Ｇｌ）ｒの調製方法であって、プロスタグランジンＰＧＡＩがラットの腫瘍細胞で培養され、代謝産物が分離されることを特徴とする方法。

１１　ラットの腫瘍細胞が８１０４神経芽腫細胞又はＣ６神経膠腫細胞であることを特徴とする請求項８記載の方法。

１２　次の式を有するＰＧＡＩ−Ｃｙｓ−Ｇｌｙ。

１３　次の式の化合物（式中、Ｚｌ及びＺ２はプロスタグランジン又はプロスタグランジン同族体の鎖に属する二つの鎖であり、Ｒは任意に−又は二辺上のＮＨ２基によって置換された炭化水素基又は式（式中、ｎ＝１又は２であり、Ｗ、は水素原子、アミノ酸残基又はアミノ酸連鎖から誘導された残基であり、Ｗ２は水酸基、アミノ酸残基又はアミノ酸連鎖から誘導された残基である）の基であり、Ｒ９は水素原子、炭化水素基又はハロゲン原子であり、及びＲ２は水素原子、水酸基又はアルコキシ基である）から選択された化合物の、抗腫瘍薬剤の製造のための使用。

国際調査報告一一噸一一〜−−−ｅｈＰＣＴ／ＦＲ８７１００５１Ｂ国際調査報告

Claims

【特許請求の範囲】１．次の式の化合物 ▲数式、化学式、表等があります▼Ｉ ▲数式、化学式、表等があります▼ＩＩ▲数式、化学式、表等があります▼ＩＩＩ▲数式、化学式、表等があります▼ＩＶ（式中、Ｚ１及びＺ２はブロスタグランジン又はプロスタグランジン同族体の鎖に属する二つの鎖であり、Ｒは任意に一文は二以上のＮＨ２基によって置換された炭化水素基又は式▲数式、化学式、表等があります▼ （式中、ｎ＝１又は２であり、Ｗ１は水素原子、アミノ酸残基又はアミノ酸連鎖から誘導された残基であり、Ｗ２は水酸基、アミノ酸残基又はアミノ酸連鎖から誘導された残基である）の基であり、Ｒ１は水素原子、炭化水素基又はハロゲン原子であり、及びＲ２は水素原子、水酸基又はアルコキシ基である）から選択された化合物を活性成分として含有することを特徴とする治療用組成物。２．次の式 ▲数式、化学式、表等があります▼ ▲数式、化学式、表等があります▼ の化合物から選択された９−ＯＨ−ＰＧＡ１−Ｃｙｓを含有することを特徴とする、請求項１記載の組成物。３．次の式 ▲数式、化学式、表等があります▼ の化合物から選択された９−ＯＨ−ＰＧＡ１−Ｃｙｓ−Ｇｌｙを含有することを特徴とする、請求項１記載の組成物。４．ＰＧＡ１−Ｃｙｓを含有することを特徴とする、請求項１記載の組成物。５．ＰＧＡ１−Ｃｙｓ−Ｇｌｙを含有することを特徴とする、請求項１記載の組成物。６．次の式を有する化合物。７．次の式を有する化合物。 ▲数式、化学式、表等があります▼ ▲数式、化学式、表等があります▼ ８．次の式を有する化合物。９．次の式を有する化合物。 ▲数式、化学式、表等があります▼ １０９−ＯＨ−ＰＧＡ１−Ｃｙｓ及び９−ＯＨ−ＰＧＡ１−Ｃｙｓ−Ｇｌｙの調製方法であって、プロスタグランジンＰＧＡ１がラットの腫瘍細胞で培養され、代謝産物が分離されることを特徴とする方法。１１．ラットの腫瘍細胞がＢ１０４神経芽腫細胞又はＣ６神経膠腫細胞であることを特徴とする、請求項８記載の方法。１２．次の式を有するＰＧＡ１−Ｃｙｓ−ＧＩｙ。 ▲数式、化学式、表等があります▼ １３．次の式の化合物 ▲数式、化学式、表等があります▼Ｉ ▲数式、化学式、表等があります▼ＩＩ▲数式、化学式、表等があります▼ＩＩＩ▲数式、化学式、表等があります▼ＩＶ（式中、Ｚ１及びＺ２はプロスタグランジン又はプロスタグランジン同族体の鎖に属する二つの鎖であり、Ｒは任意に一又は二以上のＮＨ２基によって置換された炭化水素基又は式▲数式、化学式、表等があります▼ （式中、ｎ＝１又は２であり、Ｗ１は水素原子、アミノ酸残基又はアミノ酸連鎖から誘導された残基であり、Ｗ２は水酸基、アミノ酸残基又はアミノ酸連鎖から誘導された残基である）の基であり、Ｒ１は水素原子、炭化水素基又はハロゲン原子であり、及びＲ２は水素原子、水酸基又はアルコキシ基である）から選択された化合物の、抗腫瘍薬剤の製造のための使用。