JPH01252299A - 飲料水、浴用水及び排水、食品及び飲物中の腸内バクテリアの確認方法 - Google Patents
飲料水、浴用水及び排水、食品及び飲物中の腸内バクテリアの確認方法Info
- Publication number
- JPH01252299A JPH01252299A JP63329505A JP32950588A JPH01252299A JP H01252299 A JPH01252299 A JP H01252299A JP 63329505 A JP63329505 A JP 63329505A JP 32950588 A JP32950588 A JP 32950588A JP H01252299 A JPH01252299 A JP H01252299A
- Authority
- JP
- Japan
- Prior art keywords
- beta
- culture medium
- nitrophenyl
- useful amount
- water
- Prior art date
- Legal status (The legal status is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the status listed.)
- Pending
Links
- XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N water Substances O XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N 0.000 title claims description 18
- 239000002351 wastewater Substances 0.000 title claims description 9
- 239000003651 drinking water Substances 0.000 title claims description 8
- 235000020188 drinking water Nutrition 0.000 title claims description 8
- 235000013361 beverage Nutrition 0.000 title claims 2
- 241000305071 Enterobacterales Species 0.000 title description 3
- 238000012360 testing method Methods 0.000 claims abstract description 47
- 239000001963 growth medium Substances 0.000 claims abstract description 24
- KUWPCJHYPSUOFW-YBXAARCKSA-N 2-nitrophenyl beta-D-galactoside Chemical compound O[C@@H]1[C@@H](O)[C@@H](O)[C@@H](CO)O[C@H]1OC1=CC=CC=C1[N+]([O-])=O KUWPCJHYPSUOFW-YBXAARCKSA-N 0.000 claims abstract description 5
- 241000894006 Bacteria Species 0.000 claims description 37
- 238000000034 method Methods 0.000 claims description 30
- 239000002609 medium Substances 0.000 claims description 26
- 230000000968 intestinal effect Effects 0.000 claims description 14
- 239000002253 acid Substances 0.000 claims description 11
- GUBGYTABKSRVRQ-QKKXKWKRSA-N Lactose Natural products OC[C@H]1O[C@@H](O[C@H]2[C@H](O)[C@@H](O)C(O)O[C@@H]2CO)[C@H](O)[C@@H](O)[C@H]1O GUBGYTABKSRVRQ-QKKXKWKRSA-N 0.000 claims description 10
- 230000002550 fecal effect Effects 0.000 claims description 10
- 239000008101 lactose Substances 0.000 claims description 10
- 239000000758 substrate Substances 0.000 claims description 9
- 238000003287 bathing Methods 0.000 claims description 8
- 239000007788 liquid Substances 0.000 claims description 8
- IFBHRQDFSNCLOZ-RMPHRYRLSA-N 4-nitrophenyl beta-D-glucoside Chemical compound O[C@@H]1[C@@H](O)[C@H](O)[C@@H](CO)O[C@H]1OC1=CC=C([N+]([O-])=O)C=C1 IFBHRQDFSNCLOZ-RMPHRYRLSA-N 0.000 claims description 6
- 230000002255 enzymatic effect Effects 0.000 claims description 5
- 239000000463 material Substances 0.000 claims description 4
- WQZGKKKJIJFFOK-GASJEMHNSA-N Glucose Chemical compound OC[C@H]1OC(O)[C@H](O)[C@@H](O)[C@@H]1O WQZGKKKJIJFFOK-GASJEMHNSA-N 0.000 claims description 3
- 239000011521 glass Substances 0.000 claims description 3
- CWRWJDAEKWYUJT-CGKXPTHNSA-N 1-(9S,13S,12-oxophytodienoyl)-2-(7Z,10Z,13Z)-hexadecatrienoyl-3-(beta-D-galactosyl)-sn-glycerol Chemical compound C([C@H](OC(=O)CCCCC\C=C/C\C=C/C\C=C/CC)COC(=O)CCCCCCC[C@@H]1[C@@H](C(=O)C=C1)C\C=C/CC)O[C@@H]1O[C@H](CO)[C@H](O)[C@H](O)[C@H]1O CWRWJDAEKWYUJT-CGKXPTHNSA-N 0.000 claims description 2
- 102000053187 Glucuronidase Human genes 0.000 claims description 2
- 108010060309 Glucuronidase Proteins 0.000 claims description 2
- 102000005936 beta-Galactosidase Human genes 0.000 claims description 2
- 108010005774 beta-Galactosidase Proteins 0.000 claims description 2
- WQZGKKKJIJFFOK-SVZMEOIVSA-N (+)-Galactose Chemical compound OC[C@H]1OC(O)[C@H](O)[C@@H](O)[C@H]1O WQZGKKKJIJFFOK-SVZMEOIVSA-N 0.000 claims 1
- QSUILVWOWLUOEU-GOVZDWNOSA-N 4-nitrophenyl beta-D-glucuronide Chemical compound O1[C@H](C(O)=O)[C@@H](O)[C@H](O)[C@@H](O)[C@@H]1OC1=CC=C([N+]([O-])=O)C=C1 QSUILVWOWLUOEU-GOVZDWNOSA-N 0.000 abstract 1
- 239000000126 substance Substances 0.000 abstract 1
- 229920001817 Agar Polymers 0.000 description 8
- 239000008272 agar Substances 0.000 description 8
- 102000004190 Enzymes Human genes 0.000 description 3
- 108090000790 Enzymes Proteins 0.000 description 3
- 238000004458 analytical method Methods 0.000 description 3
- 238000011161 development Methods 0.000 description 3
- 229930182470 glycoside Natural products 0.000 description 3
- 150000002338 glycosides Chemical class 0.000 description 3
- 239000007640 basal medium Substances 0.000 description 2
- 238000012790 confirmation Methods 0.000 description 2
- 238000011534 incubation Methods 0.000 description 2
- KWGKDLIKAYFUFQ-UHFFFAOYSA-M lithium chloride Chemical compound [Li+].[Cl-] KWGKDLIKAYFUFQ-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 2
- 239000000203 mixture Substances 0.000 description 2
- 230000005855 radiation Effects 0.000 description 2
- 230000001105 regulatory effect Effects 0.000 description 2
- 241000894007 species Species 0.000 description 2
- 238000010561 standard procedure Methods 0.000 description 2
- 102100037293 Atrial natriuretic peptide-converting enzyme Human genes 0.000 description 1
- 101710133555 Atrial natriuretic peptide-converting enzyme Proteins 0.000 description 1
- 229920000742 Cotton Polymers 0.000 description 1
- PEDCQBHIVMGVHV-UHFFFAOYSA-N Glycerine Chemical compound OCC(O)CO PEDCQBHIVMGVHV-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 239000003708 ampul Substances 0.000 description 1
- 238000001514 detection method Methods 0.000 description 1
- 239000012153 distilled water Substances 0.000 description 1
- 230000000694 effects Effects 0.000 description 1
- 230000002349 favourable effect Effects 0.000 description 1
- 238000000855 fermentation Methods 0.000 description 1
- 230000004151 fermentation Effects 0.000 description 1
- 238000001914 filtration Methods 0.000 description 1
- 239000008103 glucose Substances 0.000 description 1
- 210000003127 knee Anatomy 0.000 description 1
- 238000011005 laboratory method Methods 0.000 description 1
- 235000015097 nutrients Nutrition 0.000 description 1
- 239000008363 phosphate buffer Substances 0.000 description 1
- 238000000053 physical method Methods 0.000 description 1
- 239000000725 suspension Substances 0.000 description 1
- 229920003002 synthetic resin Polymers 0.000 description 1
- 239000000057 synthetic resin Substances 0.000 description 1
- 238000012795 verification Methods 0.000 description 1
Classifications
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12Q—MEASURING OR TESTING PROCESSES INVOLVING ENZYMES, NUCLEIC ACIDS OR MICROORGANISMS; COMPOSITIONS OR TEST PAPERS THEREFOR; PROCESSES OF PREPARING SUCH COMPOSITIONS; CONDITION-RESPONSIVE CONTROL IN MICROBIOLOGICAL OR ENZYMOLOGICAL PROCESSES
- C12Q1/00—Measuring or testing processes involving enzymes, nucleic acids or microorganisms; Compositions therefor; Processes of preparing such compositions
- C12Q1/02—Measuring or testing processes involving enzymes, nucleic acids or microorganisms; Compositions therefor; Processes of preparing such compositions involving viable microorganisms
- C12Q1/04—Determining presence or kind of microorganism; Use of selective media for testing antibiotics or bacteriocides; Compositions containing a chemical indicator therefor
- C12Q1/10—Enterobacteria
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12Q—MEASURING OR TESTING PROCESSES INVOLVING ENZYMES, NUCLEIC ACIDS OR MICROORGANISMS; COMPOSITIONS OR TEST PAPERS THEREFOR; PROCESSES OF PREPARING SUCH COMPOSITIONS; CONDITION-RESPONSIVE CONTROL IN MICROBIOLOGICAL OR ENZYMOLOGICAL PROCESSES
- C12Q2334/00—O-linked chromogens for determinations of hydrolase enzymes, e.g. glycosidases, phosphatases, esterases
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12Q—MEASURING OR TESTING PROCESSES INVOLVING ENZYMES, NUCLEIC ACIDS OR MICROORGANISMS; COMPOSITIONS OR TEST PAPERS THEREFOR; PROCESSES OF PREPARING SUCH COMPOSITIONS; CONDITION-RESPONSIVE CONTROL IN MICROBIOLOGICAL OR ENZYMOLOGICAL PROCESSES
- C12Q2334/00—O-linked chromogens for determinations of hydrolase enzymes, e.g. glycosidases, phosphatases, esterases
- C12Q2334/10—O-linked chromogens for determinations of hydrolase enzymes, e.g. glycosidases, phosphatases, esterases p-Nitrophenol derivatives
Landscapes
- Chemical & Material Sciences (AREA)
- Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
- Organic Chemistry (AREA)
- Health & Medical Sciences (AREA)
- Engineering & Computer Science (AREA)
- Zoology (AREA)
- Wood Science & Technology (AREA)
- Proteomics, Peptides & Aminoacids (AREA)
- Molecular Biology (AREA)
- Toxicology (AREA)
- Immunology (AREA)
- Microbiology (AREA)
- Biophysics (AREA)
- Analytical Chemistry (AREA)
- Physics & Mathematics (AREA)
- Biotechnology (AREA)
- Biochemistry (AREA)
- Bioinformatics & Cheminformatics (AREA)
- General Engineering & Computer Science (AREA)
- General Health & Medical Sciences (AREA)
- Genetics & Genomics (AREA)
- Apparatus Associated With Microorganisms And Enzymes (AREA)
- Measuring Or Testing Involving Enzymes Or Micro-Organisms (AREA)
- Saccharide Compounds (AREA)
Abstract
(57)【要約】本公報は電子出願前の出願データであるた
め要約のデータは記録されません。
め要約のデータは記録されません。
Description
【発明の詳細な説明】
本発明は飲料水、浴用水及び排水中における全腸内バク
テリア及び糞便性腸内バクテリアの存在を酵素的試験に
より確認する新規方法、及び該方法を実行するための装
置に関する。
テリア及び糞便性腸内バクテリアの存在を酵素的試験に
より確認する新規方法、及び該方法を実行するための装
置に関する。
本発明の一つの目的は酵素的試験によって探知する簡単
且つ迅速な方法により、腸内バクテリアの存在を確認す
ることである。
且つ迅速な方法により、腸内バクテリアの存在を確認す
ることである。
本発明の他の目的は知時間内に且つ経済的にイｊ利な方
式で上記方法を実行することがてきる装置を提供するこ
とである。
式で上記方法を実行することがてきる装置を提供するこ
とである。
本発明の他の目的は本特許出願の開示に基ついて、当業
者には明白となるであろう。
者には明白となるであろう。
腸内バクテリアの探索及び計数くコリン１〜リー［ｃｏ
ｔ ｉｍｅｔｒｙ］法）は水の飲用適性を確認し、浴用
水及び排水、食品及び飲物の衛生的な認証を提供する普
通の実験室的な手法である。
ｔ ｉｍｅｔｒｙ］法）は水の飲用適性を確認し、浴用
水及び排水、食品及び飲物の衛生的な認証を提供する普
通の実験室的な手法である。
スカラー（ｓｃａｌａｒ）量の水、食物の懸濁物又は飲
物をＭ Ｐ Ｎ （ｆｉ多確率数［Ｍ ｏｓｌ、 Ｐ
ｒｏｌ）ａｂｌｃ Ｎ ｕＩｎｂ ｅ ｒ ｌ法）
として知られている多数試験管法（＋ｎｕｌｔｉｐｌｅ
ｔｕｂｅ ｍｅｔ、ｌ＋ｏｄ）に従って、液状の
ラクトース培地を用いて試験管中に接種することに、ｊ
：るコリメ１〜り一法は、以前から総ての水質分析実験
室で広く行なわれている。話方法は米国標準法（用水及
び排水試験標準法［Ｓ ｔａｎｄａｒｄ Ｍ ｅｔｌ
＋ｏｄ ｆｏｒ−３＝ ｔｈｅ Ｅｘａｍｉｎａｔｉｏｎ ｏｆ
Ｗａｔｅｒ ａｎｄ ＷａｓｔｅＷａｔｃｒｌ
、 Ａ Ｆ’ＨＡ 、 ＡＷＷＡ 、 ＷＰＣＦ
、 ワシ・ントン、１９８０）に記載されており、イ
タリアの法律（省令、１９８３年、２月１５日、官報、
１９８３年、３月２６日、８４号、首相布告、１９８５
年、２月８日、官報、１９８５年、５月９日、１０８号
）による公式の水質分析法の−っである。
物をＭ Ｐ Ｎ （ｆｉ多確率数［Ｍ ｏｓｌ、 Ｐ
ｒｏｌ）ａｂｌｃ Ｎ ｕＩｎｂ ｅ ｒ ｌ法）
として知られている多数試験管法（＋ｎｕｌｔｉｐｌｅ
ｔｕｂｅ ｍｅｔ、ｌ＋ｏｄ）に従って、液状の
ラクトース培地を用いて試験管中に接種することに、ｊ
：るコリメ１〜り一法は、以前から総ての水質分析実験
室で広く行なわれている。話方法は米国標準法（用水及
び排水試験標準法［Ｓ ｔａｎｄａｒｄ Ｍ ｅｔｌ
＋ｏｄ ｆｏｒ−３＝ ｔｈｅ Ｅｘａｍｉｎａｔｉｏｎ ｏｆ
Ｗａｔｅｒ ａｎｄ ＷａｓｔｅＷａｔｃｒｌ
、 Ａ Ｆ’ＨＡ 、 ＡＷＷＡ 、 ＷＰＣＦ
、 ワシ・ントン、１９８０）に記載されており、イ
タリアの法律（省令、１９８３年、２月１５日、官報、
１９８３年、３月２６日、８４号、首相布告、１９８５
年、２月８日、官報、１９８５年、５月９日、１０８号
）による公式の水質分析法の−っである。
ＭＰＮ法によるコリメトリー的分析は最初の推定試験及
び二つの確認試験から成り、一つは全腸内バクテリア、
及び他方は糞便性腸内バクテリアの試験である。推定試
験は、腸内バクテリアが存在するとずれば、ラクトース
培地中に成長した該バクテリアによるラクトースの発酵
によって、試験中の試料を接種された試験管中に含まれ
た培地からガスの発生がある場合、潜在的に陽性と考え
られる試験である。ガスの発生をみた各試験管は次いで
更に、一方は例えは“ラフ１ヘースー胆汁−ブリリアン
トクリーン培地″を含み、他方は゛’ｌ乙Ｃ培地″を含
む二本の試験管に再接種し、前者は３６℃で２４−４８
時間、後者は４４５℃て培養することにより、確認試験
を被検しなければならい。
び二つの確認試験から成り、一つは全腸内バクテリア、
及び他方は糞便性腸内バクテリアの試験である。推定試
験は、腸内バクテリアが存在するとずれば、ラクトース
培地中に成長した該バクテリアによるラクトースの発酵
によって、試験中の試料を接種された試験管中に含まれ
た培地からガスの発生がある場合、潜在的に陽性と考え
られる試験である。ガスの発生をみた各試験管は次いで
更に、一方は例えは“ラフ１ヘースー胆汁−ブリリアン
トクリーン培地″を含み、他方は゛’ｌ乙Ｃ培地″を含
む二本の試験管に再接種し、前者は３６℃で２４−４８
時間、後者は４４５℃て培養することにより、確認試験
を被検しなければならい。
ラフ１〜−スー胆汁−ブリリアントグリーン培地中にお
ける最初の確認試験は、推定試験の試験管中に成長した
総ての腸内バクテリア（全腸内バクテリア）を明らかに
する目的を持っている。“′全腸内バクテリア°′とい
う定義には、ＰｉＬＪ！３Ｕ１青（旦」おハ□仕すセ猛
用視峠科の各種の属（Ｂｎｕｓ）の部類に入る数種の細
菌、即ち入ン、二刃□す］月面ヅ−１−ｃ ｂ ｉ−ｎ
、）、れる。それらは他の酵素の中でもとりわけヘータ
ーカラクトシダーゼを持っているので、共通してラクト
−スを発酵する性質を有している。
ける最初の確認試験は、推定試験の試験管中に成長した
総ての腸内バクテリア（全腸内バクテリア）を明らかに
する目的を持っている。“′全腸内バクテリア°′とい
う定義には、ＰｉＬＪ！３Ｕ１青（旦」おハ□仕すセ猛
用視峠科の各種の属（Ｂｎｕｓ）の部類に入る数種の細
菌、即ち入ン、二刃□す］月面ヅ−１−ｃ ｂ ｉ−ｎ
、）、れる。それらは他の酵素の中でもとりわけヘータ
ーカラクトシダーゼを持っているので、共通してラクト
−スを発酵する性質を有している。
ＥＣ培地中における第二の確認、試験は糞便性腸内バク
テリアを明らかにする目的を持っている。
テリアを明らかにする目的を持っている。
これらは本来エシャＩＬ屋Ｊ−ユ辺−（模μ五旺則舅道
ｃｏｌｉ）種に属［７、ラクトースを発酵し、他の腸内
バクテリアのようにベータ−ガラクトシダーセを有する
が、他の総ての腸内バクテリアには存在しない酵素ヘー
ターグルクロニターセを持っている。
ｃｏｌｉ）種に属［７、ラクトースを発酵し、他の腸内
バクテリアのようにベータ−ガラクトシダーセを有する
が、他の総ての腸内バクテリアには存在しない酵素ヘー
ターグルクロニターセを持っている。
本発明の方法は二種の市販の合成りル：２シト、即ちｏ
−二１−ロフェニルーベーター〇−カラク１ヘピラノジ
ド（ＯＮＰＣ）及びｐ−ニトロンエニルーノ＼−ターＤ
−カラクトピラノシ１ヘウロン１（ＰＮＰ Ｇ Ｕ ）
、又は他の有用な基質を用いることにより、ヘーターカ
ラクトシダーゼ及びベータ−グルクロニダーゼの酵素を
証明することから成る。
−二１−ロフェニルーベーター〇−カラク１ヘピラノジ
ド（ＯＮＰＣ）及びｐ−ニトロンエニルーノ＼−ターＤ
−カラクトピラノシ１ヘウロン１（ＰＮＰ Ｇ Ｕ ）
、又は他の有用な基質を用いることにより、ヘーターカ
ラクトシダーゼ及びベータ−グルクロニダーゼの酵素を
証明することから成る。
二種の別個の反応性媒地を得るために、二種の各クルコ
ジドを基本栄養媒地（トリ１■・−スー寒天又は類似物
）中に混和する。適当な基本培地の必須の必要条件は （ａ）腸内バクテリアの成長に好都合な性質及び （ｂ）陽性反応の場合にも色の発現（上記のクルコジタ
ーゼか使用されるならば黄色）が観察できるように、そ
れ自身の色がないことである。何等本発明を限定するも
のではない一例を挙げれば、適当な基本培地の組成は以
下に示すようなものである ■・リプドース ２０ ｇ グルコース １ｇ 塩化す１〜リウム ５ｇ 寒天 １５ ｇ 蒸留水 １０００肩！ 二種のグリコシド溶液を燐酸緩衝液中で別個に製造し、
濾過により滅菌する。
ジドを基本栄養媒地（トリ１■・−スー寒天又は類似物
）中に混和する。適当な基本培地の必須の必要条件は （ａ）腸内バクテリアの成長に好都合な性質及び （ｂ）陽性反応の場合にも色の発現（上記のクルコジタ
ーゼか使用されるならば黄色）が観察できるように、そ
れ自身の色がないことである。何等本発明を限定するも
のではない一例を挙げれば、適当な基本培地の組成は以
下に示すようなものである ■・リプドース ２０ ｇ グルコース １ｇ 塩化す１〜リウム ５ｇ 寒天 １５ ｇ 蒸留水 １０００肩！ 二種のグリコシド溶液を燐酸緩衝液中で別個に製造し、
濾過により滅菌する。
グリコシド溶液を予め滅菌された基本培地中に混和し、
５５℃に冷却する。
５５℃に冷却する。
溶液中のクリコシドの濃度は特に重要な問題てはないが
、それらは０．１ないし１．０重量％の濃度で存在する
ことが好都合であることが立証された。ＯＮ Ｐ Ｇの
濃度はＰＮＰＧＴＪの濃度よりは幾分か高い方が好まし
い。例えば反応性培地中にＯＮ Ｐ Ｇ カ０ 、３５
重量％、及びＰＮＰＧＵが０２５重呈火の最終濃度であ
る時に、最適の結果が得られることが認められた。しか
しこれらの濃度は本性の効果を損なうことなく広い範囲
内で変えることができる。
、それらは０．１ないし１．０重量％の濃度で存在する
ことが好都合であることが立証された。ＯＮ Ｐ Ｇの
濃度はＰＮＰＧＴＪの濃度よりは幾分か高い方が好まし
い。例えば反応性培地中にＯＮ Ｐ Ｇ カ０ 、３５
重量％、及びＰＮＰＧＵが０２５重呈火の最終濃度であ
る時に、最適の結果が得られることが認められた。しか
しこれらの濃度は本性の効果を損なうことなく広い範囲
内で変えることができる。
本発明の方法は、コリメトリーの迅速な実行を＝Ｊ’能
とする装置を利用することによって有利に行なわれる。
とする装置を利用することによって有利に行なわれる。
特に上記に指示されたように製造された二種のグリコシ
ド溶液の各／Ｚは、例えば一端が開口している試験管又
はアンプルであって、その中にカスの発生があった推定
試験がら由来する、所与量の液状ラクトース培地が装入
されるような適当な形状及び寸法の容器によって形成さ
れた装置中に入れることかできる。次いで二種の装置を
３０−４０°Ｃで１８−２４時間培養する。両方の装置
の反応性培地を注入した部分に色が発現すれば糞便性腸
内バクテリアの存在を確証し、○ＮＰＧ−寒天培地を入
れた装置内にのみ色が発現ずれは、全腸内バクテリアの
存在を確証する。
ド溶液の各／Ｚは、例えば一端が開口している試験管又
はアンプルであって、その中にカスの発生があった推定
試験がら由来する、所与量の液状ラクトース培地が装入
されるような適当な形状及び寸法の容器によって形成さ
れた装置中に入れることかできる。次いで二種の装置を
３０−４０°Ｃで１８−２４時間培養する。両方の装置
の反応性培地を注入した部分に色が発現すれば糞便性腸
内バクテリアの存在を確証し、○ＮＰＧ−寒天培地を入
れた装置内にのみ色が発現ずれは、全腸内バクテリアの
存在を確証する。
試験を行うのに特に適当な装置が第１図に示されている
。この装置は一端がキャップ〈２）に溶接され、他の端
に反応性培地のための支持体を備えな林く１）により構
成されている。該支持体は反応性培地の薄い層が載せら
れる、棒の偏平部分（３）であってもよく、又は多孔質
な部分、例えは反応性培地を含浸した綿又は吸取り紙の
小さな栓であってもよい。使用前に装置全体を物理的方
法、例えば使用する材料によって、熱、ＵＶ、ガンマ−
線により滅菌しなければならない。こうして製造された
装置は滅菌した円筒形のプラスチック又はガラスの容器
（４〉中に無菌的に導入される。全体の試験装置は、一
方は○ＮＰＧ−寒天を装入され、他方はＰＮＰＧＵ−寒
天を装入された一対の」二記の装置により構成され、カ
スが発生した推定コリ７Ｉ〜り一試験の試験管中に含ま
れた培地中の腸内バクテリアの存在を確証する目的を有
している。
。この装置は一端がキャップ〈２）に溶接され、他の端
に反応性培地のための支持体を備えな林く１）により構
成されている。該支持体は反応性培地の薄い層が載せら
れる、棒の偏平部分（３）であってもよく、又は多孔質
な部分、例えは反応性培地を含浸した綿又は吸取り紙の
小さな栓であってもよい。使用前に装置全体を物理的方
法、例えば使用する材料によって、熱、ＵＶ、ガンマ−
線により滅菌しなければならない。こうして製造された
装置は滅菌した円筒形のプラスチック又はガラスの容器
（４〉中に無菌的に導入される。全体の試験装置は、一
方は○ＮＰＧ−寒天を装入され、他方はＰＮＰＧＵ−寒
天を装入された一対の」二記の装置により構成され、カ
スが発生した推定コリ７Ｉ〜り一試験の試験管中に含ま
れた培地中の腸内バクテリアの存在を確証する目的を有
している。
確認試験を行うために、各棒は容器から抜き取られ、反
応性培地を持った棒の末端部分を確認すべき試験管の液
状培地中に浸漬し、次いて棒を容器中に再度挿入する。
応性培地を持った棒の末端部分を確認すべき試験管の液
状培地中に浸漬し、次いて棒を容器中に再度挿入する。
ＯＮ ｌ） Ｇ−寒天及びｌ） Ｎ ＰＧＬＪ−寒天を
備えた二つの装置は、３５−３７℃て１．８−２４時間
培養される。両方の装置の反応性培地を含浸した部分に
色が発現ずれは、糞便性腸内バクテリアの存在を確証し
、ＯＮ Ｐ Ｇ−寒天培地を入れた装置内にのみ色が発
現ずれは、全腸内バクテリアの存在を確証する。
備えた二つの装置は、３５−３７℃て１．８−２４時間
培養される。両方の装置の反応性培地を含浸した部分に
色が発現ずれは、糞便性腸内バクテリアの存在を確証し
、ＯＮ Ｐ Ｇ−寒天培地を入れた装置内にのみ色が発
現ずれは、全腸内バクテリアの存在を確証する。
明らかに、これまで記載された装置は、上記のＯＮ Ｐ
Ｑ−寒天及びＰ Ｎ Ｐ Ｇ Ｕ−寒天と異なった基
質を使用する時にも、異なった基質が腸内バクテリアの
存在を解明するのに同じ役割を果なずならば利用できる
。
Ｑ−寒天及びＰ Ｎ Ｐ Ｇ Ｕ−寒天と異なった基
質を使用する時にも、異なった基質が腸内バクテリアの
存在を解明するのに同じ役割を果なずならば利用できる
。
本発明の方法及び装置の利点は、確認試験を行うのに時
間及び材料が節約されるので、経済的な性格のものであ
る。実際に 一腸内バクチリアの存在を確認すべき培地を含む試験管
（試験管の数は数百のこともある）中に二本の棒を浸漬
する時間は、確認すべき試験管から数滴をピペットで取
り、それを確認用試験管中に導入する既知の方式を用い
る時に必要な時間よりも短いニ ーピペットは必要ないニ ー既知の方式で必要であるような夫々３６℃及び４４５
°Ｃに調節された二つの温度調節装置の代わりに、３０
−４０℃に調節された単一の温度調節装置のみが必要で
ある； 一培養時間は既知の方式で必要な２４−４８時間の代わ
りに３．８−２４時間である。
間及び材料が節約されるので、経済的な性格のものであ
る。実際に 一腸内バクチリアの存在を確認すべき培地を含む試験管
（試験管の数は数百のこともある）中に二本の棒を浸漬
する時間は、確認すべき試験管から数滴をピペットで取
り、それを確認用試験管中に導入する既知の方式を用い
る時に必要な時間よりも短いニ ーピペットは必要ないニ ー既知の方式で必要であるような夫々３６℃及び４４５
°Ｃに調節された二つの温度調節装置の代わりに、３０
−４０℃に調節された単一の温度調節装置のみが必要で
ある； 一培養時間は既知の方式で必要な２４−４８時間の代わ
りに３．８−２４時間である。
−第１図に示された方式は商業的に製造し、各種の実験
室に配布することができるが、既知の方式による確認用
培地を持った試験管は夫々の実験室で臨時に製造しなけ
ればならない。
室に配布することができるが、既知の方式による確認用
培地を持った試験管は夫々の実験室で臨時に製造しなけ
ればならない。
以上本発明を説明してきたが、本特許出願がその範囲内
とする事項は、特許請求の範囲に記載する通りである。
とする事項は、特許請求の範囲に記載する通りである。
本発明の主なる特徴及び態様は以下の通りである。
１ 予備推定試験により腸内バクテリアの存在の可能性
か示された飲料水、浴用水及び排水、食品及び飲物中に
おける全腸内バクテリア及び糞便性腸内バクテリアの存
在を酵素的試験により確認する方法であって、該方法が
該予備推定試験から採取した培地の二つの試料を夫々別
個に（ａ）有用な量のｏ−ニトロフェニル−ベータ−Ｄ
−ガラクトビラノシドを含む適当な培養基及び（１〕）
有用な量のｐ−ニトロフェニル−ベータ−Ｄ−タルコビ
ラノシドウロン酸を含む適当な培養基と接触させ、該培
養基を３０°ないし４０℃の温度で１８−２４時間培養
することから成る方法。
か示された飲料水、浴用水及び排水、食品及び飲物中に
おける全腸内バクテリア及び糞便性腸内バクテリアの存
在を酵素的試験により確認する方法であって、該方法が
該予備推定試験から採取した培地の二つの試料を夫々別
個に（ａ）有用な量のｏ−ニトロフェニル−ベータ−Ｄ
−ガラクトビラノシドを含む適当な培養基及び（１〕）
有用な量のｐ−ニトロフェニル−ベータ−Ｄ−タルコビ
ラノシドウロン酸を含む適当な培養基と接触させ、該培
養基を３０°ないし４０℃の温度で１８−２４時間培養
することから成る方法。
２、夫々の培養基中のｏ−ニトロフェニル−ベータ−Ｄ
−カラクトピラノシト及びｐ〜ニトロフェニル−ベータ
ーＤ−グルコピラノシドウロン酸の有用な量が０．１な
いし１０重量％である」１記１に記載の方法。
−カラクトピラノシト及びｐ〜ニトロフェニル−ベータ
ーＤ−グルコピラノシドウロン酸の有用な量が０．１な
いし１０重量％である」１記１に記載の方法。
３、培養基中００−二トロフェニル−ベータ−Ｄ−ガラ
クトピラノシドの有用な量が０．３５重量％である上記
１及び２に記載の方法。
クトピラノシドの有用な量が０．３５重量％である上記
１及び２に記載の方法。
４、培養基中のｐ−ニド１コフェニルーベータ−Ｄ−グ
ルコピラノシドウロン酸の有用な量が０゜２５重量％で
ある一Ｉ−記１及び２に記載の方法。
ルコピラノシドウロン酸の有用な量が０゜２５重量％で
ある一Ｉ−記１及び２に記載の方法。
５、飲料水、浴用水及び排水、食品及び飲物中における
腸内バクテリアの存在に対し陽性である予備推定試験か
ら採取し２か液状ラクトース培地の試料を、（ａ）有用
な量の。−二トロフェニルーベ一ターＤ−ガラクトピラ
ノシド、又ｊＪ：（１））有用な量のｐ−二トロフェニ
ル−ベーターＤ−グルコピラノシドウロン酸、又は（ｃ
）有用な量の他の任意の基質のいずれかを含む培養基と
接触させ、該水中に該腸内バクテリアが存在することを
確認するための装置であって、該装置は第１図に示され
るように、一端がキャップ（２）に溶接され、他の末端
が支持体を備えた棒（１）により構成されており、該支
持体は腸内バクテリアの存在に対し陽性である予備推定
試験から液状ラフ１〜−ス培地の試料を採取するのに適
当である棒の偏平部分（３）又は任意の他の手段であり
、該棒はそれが溶接されているキャップ（２）によって
、適当なガラス又はプラスチック材料の円筒形の容器（
４）に取り付けが可能であり、該円筒形の容器の長さは
、棒の偏平な末端（３）又は試料採取用の他の手段が、
陽性な予備推定試験から採取した液状ラクトース培地を
、有用な量のｏ−ニトロフェニル−ベータ−Ｄ−力うク
トピラノジド、又は有用な量のｐ−ニトロフェニル−ベ
ータ−Ｄ−グルコピラノシドウロン酸、又は有用な量の
他の適当な基質を含む培養基と接触させるようなもので
ある装置。
腸内バクテリアの存在に対し陽性である予備推定試験か
ら採取し２か液状ラクトース培地の試料を、（ａ）有用
な量の。−二トロフェニルーベ一ターＤ−ガラクトピラ
ノシド、又ｊＪ：（１））有用な量のｐ−二トロフェニ
ル−ベーターＤ−グルコピラノシドウロン酸、又は（ｃ
）有用な量の他の任意の基質のいずれかを含む培養基と
接触させ、該水中に該腸内バクテリアが存在することを
確認するための装置であって、該装置は第１図に示され
るように、一端がキャップ（２）に溶接され、他の末端
が支持体を備えた棒（１）により構成されており、該支
持体は腸内バクテリアの存在に対し陽性である予備推定
試験から液状ラフ１〜−ス培地の試料を採取するのに適
当である棒の偏平部分（３）又は任意の他の手段であり
、該棒はそれが溶接されているキャップ（２）によって
、適当なガラス又はプラスチック材料の円筒形の容器（
４）に取り付けが可能であり、該円筒形の容器の長さは
、棒の偏平な末端（３）又は試料採取用の他の手段が、
陽性な予備推定試験から採取した液状ラクトース培地を
、有用な量のｏ−ニトロフェニル−ベータ−Ｄ−力うク
トピラノジド、又は有用な量のｐ−ニトロフェニル−ベ
ータ−Ｄ−グルコピラノシドウロン酸、又は有用な量の
他の適当な基質を含む培養基と接触させるようなもので
ある装置。
６、飲料水、浴用水及び排水、食品及び飲物中における
全腸内バクテリア及び糞便性腸内ハクデリアの存在を確
認するための装置てあって、該装置は一対の上記５に記
載の装置により構成され、夫々ヘーターガラクトシター
セ及びヘータークルクロニターゼを検出するために、一
方は適当な培養基中に有用な量の０−二ｌ〜ロフェニル
ーヘーターＤ−カラクトピラノシトのン容ン夜を含み、
他方は適当な培養基中に有用な量の１〕−二１へロフェ
ニルーヘーターＤ−グルコピラノシドウロン酸の溶液を
含むか、又（」両名共他の適当な基質を含んでいる装置
。
全腸内バクテリア及び糞便性腸内ハクデリアの存在を確
認するための装置てあって、該装置は一対の上記５に記
載の装置により構成され、夫々ヘーターガラクトシター
セ及びヘータークルクロニターゼを検出するために、一
方は適当な培養基中に有用な量の０−二ｌ〜ロフェニル
ーヘーターＤ−カラクトピラノシトのン容ン夜を含み、
他方は適当な培養基中に有用な量の１〕−二１へロフェ
ニルーヘーターＤ−グルコピラノシドウロン酸の溶液を
含むか、又（」両名共他の適当な基質を含んでいる装置
。
添付図面は本発明による腸内バクテリアの存在を酵素的
試験により確認する方法を実行するための装置を示す。
試験により確認する方法を実行するための装置を示す。
Claims (1)
- 【特許請求の範囲】 １）予備推定試験により腸内バクテリアの存在の可能性
が示された飲料水、浴用水及び排水、食品及び飲物中に
おける全腸内バクテリア及び糞便性腸内バクテリアの存
在を酵素的試験により確認する方法であって、該方法が
該予備推定試験から採取した培地の二つの試料を夫々別
個に（ａ）有用な量のｏ−ニトロフェニル−ベータ−Ｄ
−ガラクトピラノシドを含む適当な培養基、及び（ｂ）
有用な量のｐ−ニトロフェニル−ベータ−Ｄ−グルコピ
ラノシドウロン酸を含む適当な培養基と接触させ、該培
養基を３０°ないし４０℃の温度で１８−２４時間培養
することから成る方法。 ２）飲料水、浴用水及び排水、食品及び飲物中における
腸内バクテリアの存在に対し陽性である予備推定試験か
ら採取した液状ラクトース培地の試料を、（ａ）有用な
量のｏ−ニトロフェニル−ベータ−Ｄ−ガラクトピラノ
シド、又は（ｂ）有用な量のｐ−ニトロフェニル−ベー
タ−Ｄ−グルコピラノシドウロン酸、又は（ｃ）有用な
量の他の任意の基質のいずれかを含む培養基と接触させ
、該水中に該腸内バクテリアが存在することを確認する
ための装置であって、該装置は第１図に示されるように
、一端がキャップ（２）に溶接され、他の末端が支持体
を備えた棒（１）により構成されており、該支持体は腸
内バクテリアの存在に対し陽性である予備推定試験から
液状ラクトース培地の試料を採取するのに適当である棒
の偏平部分（３）又は任意の他の手段であり、該棒はそ
れが溶接されているキャップ（２）によって、適当なガ
ラス又はプラスチック材料の円筒形の容器（４）に取り
付けが可能であり、該円筒形の容器の長さは、棒の偏平
な末端（３）又は試料採取用の他の手段が、陽性な予備
推定試験から採取した液状ラクトース培地を、有用な量
のｏ−ニトロフェニル−ベータ−Ｄ−ガラクトピラノシ
ド、又は有用な量のｐ−ニトロフェニル−ベータ−Ｄ−
グルコピラノシドウロン酸、又は有用な量の他の適当な
基質を含む培養基と接触させるようなものである装置。 ３）飲料水、浴用水及び排水、食品及び飲物中における
全腸内バクテリア及び糞便性腸内バクテリアの存在を確
認するための装置であって、該装置は一対の特許請求の
範囲２項記載の装置により構成され、夫々ベータ−ガラ
クトシダーゼ及びベータ−グルクロニダーゼを検出する
ために、一方は適当な培養基中に有用な量のｏ−ニトロ
フェニル−ベータ−Ｄ−ガラクトピラノシドの溶液を含
み、他方は適当な培養基中に有用な量のｐ−ニトロフェ
ニル−ベータ−Ｄ−グルコピラノシドウロン酸の溶液を
含むか、又は両者共他の適当な基質を含んでいる装置。
Applications Claiming Priority (2)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| IT8819006A IT1215713B (it) | 1988-01-05 | 1988-01-05 | Procedimento per la conferma dei batteri coliformi nelle acque potabili, di balneazione e di scarico. |
| IT19006A/88 | 1988-01-05 |
Publications (1)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| JPH01252299A true JPH01252299A (ja) | 1989-10-06 |
Family
ID=11153789
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| JP63329505A Pending JPH01252299A (ja) | 1988-01-05 | 1988-12-28 | 飲料水、浴用水及び排水、食品及び飲物中の腸内バクテリアの確認方法 |
Country Status (3)
| Country | Link |
|---|---|
| EP (1) | EP0332752A1 (ja) |
| JP (1) | JPH01252299A (ja) |
| IT (1) | IT1215713B (ja) |
Families Citing this family (8)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| US5429933A (en) * | 1986-06-30 | 1995-07-04 | Edberg; Stephen C. | Detection of first generation environmental sourced microbes in an environmentally-derived sample |
| US5527667A (en) * | 1993-05-25 | 1996-06-18 | Virginia Polytechnic Institute And State University | Water sample viral contamination detection system |
| DE4324392A1 (de) * | 1993-07-21 | 1995-01-26 | Merck Patent Gmbh | Kulturmedium für den gleichzeitigen Nachweis von coliformen Bakterien und Escherichia coli |
| US5610029A (en) * | 1994-11-04 | 1997-03-11 | Idexx Laboratories, Inc. | Medium for detecting target microbes in a sample |
| US5985594A (en) | 1995-11-14 | 1999-11-16 | Idexx Laboratories, Inc. | Method for quantification of biological material in a sample |
| US5700655A (en) * | 1995-11-14 | 1997-12-23 | Idexx Laboratories, Inc. | Method for quantification of biological material in a sample |
| US7122338B2 (en) | 1995-11-14 | 2006-10-17 | Biocontrol Systems, Inc. | Method for quantification of biological material in a sample |
| EP1021558A1 (en) | 1997-10-10 | 2000-07-26 | President And Fellows Of Harvard College | Surface-bound, double-stranded dna protein arrays |
Family Cites Families (3)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| US3870601A (en) * | 1973-05-04 | 1975-03-11 | Schering Corp | Novel diagnostic system for differentiation of enterobacteriaceae |
| US4184483A (en) * | 1973-05-08 | 1980-01-22 | U.S. Medical Research & Development, Inc. | Method of and apparatus for collecting cultures |
| JPS60234597A (ja) * | 1984-05-09 | 1985-11-21 | Terumo Corp | β−ガラクトシダ−ゼ試験用培地 |
-
1988
- 1988-01-05 IT IT8819006A patent/IT1215713B/it active
- 1988-12-09 EP EP88120589A patent/EP0332752A1/en not_active Withdrawn
- 1988-12-28 JP JP63329505A patent/JPH01252299A/ja active Pending
Also Published As
| Publication number | Publication date |
|---|---|
| IT1215713B (it) | 1990-02-22 |
| IT8819006A0 (it) | 1988-01-05 |
| EP0332752A1 (en) | 1989-09-20 |
Similar Documents
| Publication | Publication Date | Title |
|---|---|---|
| EP0470172B1 (en) | Precipitate test for microorganisms | |
| Tramer et al. | Estimation of nisin in foods | |
| Jabra-Rizk et al. | Coaggregation of Candida dubliniensis with Fusobacterium nucleatum | |
| Walsh et al. | Growth of Saccharomyces cerevisiae and Saccharomyces uvarum in a temperature gradient incubator | |
| CA1136031A (en) | Analysis unit for antibiotics and sulphas | |
| Chao et al. | Evaluation of Colilert-18 for detection of coliforms and Eschericha coli in subtropical freshwater | |
| Kistner | An improved method for viable counts of bacteria of the ovine rumen which ferment carbohydrates | |
| Chao | Evaluation of Colilert‐18 for the detection of coliforms and Escherichia coli in tropical fresh water | |
| JPH01252299A (ja) | 飲料水、浴用水及び排水、食品及び飲物中の腸内バクテリアの確認方法 | |
| Turco | Coliform bacteria | |
| CA2182511C (en) | Microbiological culture bottle, and method of making and using same | |
| GB2059990A (en) | Enhancement of the sensitivity of viable microbial cell count by bioluminescent assay of ATP and its use for identification of microbes by means of a short incubation in nutrient media | |
| FR2556741B1 (fr) | Procede et dispositif de detection de l'activite d'une substance sur un micro-organisme ou sur un melange de micro-organismes | |
| Rashtchian et al. | Immunological capture of nucleic acid hybrids and application to nonradioactive DNA probe assay. | |
| Jousimies-Somer et al. | Problems encountered in clinical anaerobic bacteriology | |
| Walker et al. | The Language of Biotechnology: A Dictionary of Terms. | |
| Dixon et al. | Isolation of tubercle bacilli from uncentrifuged sputum on pyruvic acid medium | |
| Hows et al. | In vitro stability of cyclosporin A. | |
| Saxholm | Experiments with a new culture method for tubercle bacilli | |
| US20010051354A1 (en) | Method for detecting microorganisms and a support which can be used in such a method | |
| US3925161A (en) | Fecal streptococci speciating media | |
| RU2027996C1 (ru) | Способ определения степени тяжести дисбактериоза кишечника у детей | |
| JPH07194394A (ja) | 乳酸菌含有物中の酵母類の検査用培地及び検査方法 | |
| WO2002073154A2 (en) | Method and the detection of bacteria and bacterial groups | |
| Weiss et al. | Simplified bacteriological examination of water |