JPH01221323A - 免疫調節剤 - Google Patents

Abstract

(57)【要約】本公報は電子出願前の出願データであるた
め要約のデータは記録されません。

Description

【発明の詳細な説明】 （イ）産業上の利用分野 この発明は、新規なムラミルペプチド誘導体の免疫調節
剤に関する。この発明のムラミルペプチド誘導体は、ヒ
ト及び家畜の生体内の免疫機構（ことに免疫応答に関連
する細胞）に作用し、免疫調節剤として有用である。

（ロ）従来の技術 ムラミルペプチド類は、実に多種類の生物活性を示す。

ｉｌ　ｖｉＬｒｏの作用として、１．免疫応答に関連す
る細胞（例えば単球又はマクロファージ、Ｂ細胞、Ｔ細
胞、ナチュラルキラー（ＮＫ）細胞等）に対する作用、
２．上記以外の細胞（例えば、血小板、内皮細胞、線維
芽細胞等）に対する作用、３．補体系を活性化する作用
などを有することが知られている。ｉｎ　ｖｉｖｏの作
用として、ｌ、免疫応答調節作用、２．自然抵抗力のの
強化などが知られている（最新医学　４３巻、６号、１
２６８〜１２７６頁（１９８８年）参照）。

ムラミルペプチド誘導体としては、例えば、８３０−ム
ラミルジペプチド（楠本ら、テトラヒドロンレターズ　
４９．４８９９〜４９０２　（１９７８）　）　、ムラ
ミルジペプチド−リジン（松本ら、イムノスティムラン
ツ（ｌ＋＋ｕ＋＋ｕｎｏｓｔｉｍｕｌａｎＬｓ）、　１
９８７．７９〜９７）、特開昭５８−１７２３９９号、
同５９−２０２９７号、同６１−２７５２９９号に記載
されたものがある。

（ハ）発明が解決しようとする課題 しかしながら、従来のムラミルジペプチド誘導体以外に
、より優れた活性を有し、毒性の少ない化合物の要望が
ある。

（ニ）課題を解決するための手段 この発明によれば、式（Ｉ）： Ｌ。

＾１ａ−１ｓＯＧＩｎ−ＯＲｔ （式中Ｒ１は水酸基、Ｒ２はメチル基、Ｒ５は３−ドデ
カノイルオキシテトラデカノイル基、３−テトラデカノ
イルオキシテトラデカノイル基または３−ヘキサデカノ
イルオキシテトラデカノイル基、Ｒ４はアセチル基、 ＣＨｌ 番 ＾１ａは−Ｎｌｌ−Ｃ１＋、−ＣＯ−１を意味する。） で表わされるムラミルペプチド誘導体と医薬的に受容な
賦形剤とからなる免疫調節剤が提供される。

この発明の式（ｆ）の化合物は次のように製造できる。

Ｎ−（２−０−（２−アセタミド−２，３−ジデオキシ
−Ｄ−グルコビラノース−３−イル）−Ｄ−ラクトイル
）−Ｌ−アラニル−Ｄ−イソグルタミンメチルエステル
の１位の水酸基をベンジル基もしくはフェナシル基等で
保護し、次いでこれを適当な縮合剤（例えばジシクロへ
キシルカルボイミド、Ｎ−シクロへキシル−Ｎ′−モル
ホリノエチルカルボジイミド、Ｎ−シクロへキシル−Ｎ
’−（４−ジエチルアミノシクロヘキシル）カルボジイ
ミド、又はＮ、Ｎ’−ジエチルカルボジイミド）の存在
下、３−ドデカノイルオキシテトラデカノイル酸、３−
テトラデカノイルオキシテトラデカノイル酸または、３
−ヘキサデカノイルオキシテトラデカノイル酸でアシル
化する。このアシル化の際、上記の酸のハライド、無水
物、活性エステルなとの反応性誘導体を用いてもよい。

得られた化合物から保護基を取り除くために、例えばア
ルコールとへキサンの混合溶液中でパラジウム−炭素触
媒を用い接触還元することにより目的とする式（１）の
化合物を得ることができる。

この発明の式（１）の化合物は、生体内における免疫応
答に関連する細胞の機能を増強する作用や前記細胞の数
を増加する作用を有し、免疫調節剤として有用である。

免疫調節剤としては、ＢＣＧワクチン、肝炎ワクチン、
インフルエンザウィルスワクチンのようなワクチン類の
作用の増強、ならびに各種抗菌剤または各種抗腫瘍剤の
生体内における作用の増強に利用できる。

この発明の免疫調節剤は式（１）の化合物と医薬的に受
容な賦形剤とからなる。これらは、経口投与用、非経口
投与用の何れであってもよい。

経口投与剤としては、通常、散剤、錠剤、乳剤、カプセ
ル剤、顆粒剤、液剤（流エキス剤、シロップ剤などを含
む）などの形態がある。

内服剤の賦形剤の具体例を挙げると、散剤、その他の内
服用粉末剤における賦形剤としては、乳糖、澱粉、デキ
ストリン、リン酸カルシウム、炭酸カルシウム、合成お
よび天然ケイ酸アルミニウム、酸化マグネシウム、乾燥
水酸化アルミニウム、ステアリン酸マグネンウム、重炭
酸ナトリウム、乾燥酵母などが挙げられる。液剤におけ
る賦形剤としては、水、グリセリン、単ンロップなどが
挙げられる。

非経口投与剤としては、注射剤が代表例である。

その場合の液体の賦形剤としては、滅菌蒸留水が挙げら
れる。なお、式（１）の化合物が水に溶は難い場合は適
当な溶解補助剤が用いられる。上記の各製剤は、常法に
従って調製することかできる。

この発明の式（１）の化合物を抗腫瘍剤の増強に用いる
場合は、通常大人に１５０〜２５０μＬｉ／　１＠／　
１［］か経口又は非経口的に投与される。ワクチン類の
増強に対して用いる場合は、通常大人に０５〜２．Ｏｍ
ｇ／目／１〜２（Ｒ投与されろ。肝炎治療に対しては、
大人に０５〜２．０Ｍｆｒ／１回を１〜３０／３ケ弓、
経口又は非経口的に投与される。さらに、抗菌剤の増強
には大人に２０〜１００νｙ／　Ｉ＠／　ＩＥＩ用いる
ことができる。

この発明の免疫調節剤は、通常上記のようにそれ自体単
独で製剤化して用いられる。しかし、増強の対象とする
薬剤を含何して製剤化することらできる。

なお、この発明の免疫調節剤は、ヒトのみならず、豚、
牛、ヒツジ、犬、猫などの他の吐乳動物にも用いること
ができる。

（ポ）実施例 次にこの発明を実施例によって説明する。

Ｌ。

＾１ａ　−１ｓｏＧｌｎ−ＯＲＢ 実施例　１　　：　　Ｎ−［［２−０−（２−７セタミ
Ｆ−２，３−ジデオＮシー６−０−　　［（３Ｒ）−３
−Ｆデカ／イルイＡシテトラｆカｌイル１−Ｄ−グルＩ
Ｅラノースー３−イル３ｐ−ラクトイル］］（−７ラニ
ルーＤ−イソグルタミン　メチルエステルの合成。

化合物［式（ｒ）、　Ｒ１−Ｃ６）１ｓｃＨ２０，Ｒ２
＝ＣＩ＋３゜Ｒ３＝Ｈ，Ｒ４＝ＣＨ３ＣＯコ１５０．Ｏ
ｘｙをノメチルホルアミド（ＤＭＦ）ＩＲＱ、ジオキサ
ン１．５ｘ（ｊに溶解し、（３Ｒ）−３−ドデカノイル
オキノテトラデカン酸１２８．８Ｒｇ、４−ジメチルア
ミノピリジン（ＤＭＡＰ）１５晃９、ジシクロへキシル
カルボジイミド（ＤＣＣ）１８ｒｔｒｇを加え、室温で
１６時間撹拌した。反応終了を薄層クロマトグラフィー
（Ｔ　Ｌ　Ｃ）　　（Ｃｌ１ｙＣ４’ｙ　：Ｍｅｒｉｔ
−５：　Ｉ　ｖ／ｖ）で確認後、メタノール１ｍρを加
え、減圧濃縮した。得られたシロップを、カラムクロマ
トグラフィー［シリカゲル（ワフーゲル＠Ｃ−２００、
和光純薬製）９９：溶離液（ａ）１５０　：　Ｉ　、　
（ｂ）７０：　Ｉ　、　（ｃ）４０：　ｌ　、　（ｄ）
３０：　１．　Ｃ１１ｔＣＩ２ｔ：ＭｅＯＨ。

ｖ／ｖ］に供し、溶出液（ｃ）を減圧濃縮し、ＤＭＡＰ
の混入したシロップを得た。そこでＤＭＡＰを取り除く
ために、得られたシロップをアルミナカラムクロマトグ
ラフィー溶離液（ａ）ＩＱＯ：　ｌ　、　（ｂ）５０　
：　１　。

Ｃ１１ｚＣ（Ｌ　　Ｍｅｒｉｔ、　ｖ／ｖ］に供し、後
者の溶出液より化合物［式（１）、　Ｒ，＝Ｃｅ１１５
ＣＩ！、０．　＋１．＝Ｃ１１３，Ｒ３−（３Ｒ）−３
−トデカノイルオキノテトラデカノイル、　Ｒ＝＝ＣＨ
３ＣＯ］　１１９．７ｍｙ　（４７，３％）を得た。

ｍ　ｐ　１５：（−１５４，０℃。

この化合物８３．１１ｇをメタノール２　ｘＱ、ヘキサ
ンＩｙＱに溶解し、予め予備還元を行なった１０％Ｐｄ
−Ｃ１００ｙを触媒として室温で４日間水素添加を行な
った。反応終了をＴＬＣ（ＣＨｚＣＩ２ｔ　：　ＭｅＯ
ｔｌ＝　６：　Ｉ　　ｖ／ｖ）で確認後、触媒を濾別し
、Ｃｌ１ｆＣＣ２：ＭｅＯＨ＝　１　：　Ｉ　（ｖ／ｖ
）の混合液で洗浄した。濾液と洗液とを合わせて減圧濃
縮し、標題化合物［式％式％ ］ 実施例２　　：　　Ｎ−［［２−０−［２−アセタミＦ
−２，３−ジデオキシ−６−０−［（３１？）−３−テ
トラｆカッイルｔ＋シテトラｆカノイルコー〇−グルコ
［ラノースー３−イル）０−ラクトイルコ］−Ｌ−７ラ
ニルーＤ−イソグルタミン　メチルエステルの合成： 実施例１の（３Ｒ）−３−ドテカノイルオキンテトラデ
力ノン酸の代わりに（３Ｒ）−３−テトラデカノイルオ
キンテトラデ力ノン酸１３７ＪＢを用いて、実施例１と
同様に反応を行なうと、中間化合物［式（Ｉ）、　’Ｒ
Ｉ＝Ｃ６＋１５ＣＩ（，０，Ｒ，＝ＣＬ、　Ｒ３＝（３
Ｒ）−３−テトラデカノイルオキンテトラデカノイル、
　Ｒ４＝ＣＨ３ＣＯ］　１２４．２ＪＩ９　（４７，８
％）、ｍｐ１５５．０〜１５６．０℃及び標題化合物［
式（１）、Ｒ，＝ＯＨ，Ｒｔ＝Ｃ１１３，Ｒ３＝（３Ｒ
）−３−テトラデカノイルオキシテトラデカノイル、　
Ｒ、＝　Ｃ１，ＣＯコ１１７．２１！９（定量的）を得
た。ｍ　ｐ１１５．０〜１１６．０℃実施例３　　：　
　Ｎ−［［２−０−［２−７セタミドー２．３−ジデオ
什−６−０−［（３Ｒ）−３−へキ号デカノイルオＮシ
テトラｆカッイル］−Ｄ−グルコ〔ラノースー３−イル
）−Ｄ−ラクトイル］］−Ｌ−７ラニルーＤ−イングル
タミン　メチルエステルの合成： 実施例１の（３Ｒ）−３−ドデカノイルオキシテトラデ
カン酸の代わりに、（３Ｒ）−３−ヘキサデカノイルオ
キシテトラデカン酸１９４４１１ｇ、及び化合物（１）
　２００．０ｍｇを用いて、実施例１と同様に反応を行
ない、中間化合物［式（＋）、Ｒ，＝Ｃ６■ｓｃＨ＊０
．　Ｒｔ＝ＣＨｓ、　Ｒｓ＝　（３Ｒ）　　３−ヘキサ
デカノイルオキシデカノイル］　１４７．７ｚｉＦ　（
４１，５％）、ｍ　ｐ　１５４．（１−１５５，０℃、
及び標題化合物［式（Ｉ）。

Ｒ＋　＝ＯＨ，Ｒｔ＝ｃＨｓ、　Ｒｓ＝　（３Ｒ）−３
−ヘキサデカノイルオキシデカノイル、　Ｒ，＝ＣＨ５
ＣＯ］　１０５．ｏｊ！９（９３，４％）を得た。ｍ　
ｐ　１１５．０〜１１６．０°Ｃ０次に、この発明の化
合物の薬理学的活性を示す。

（１）ＢＣＧワクチンの増強作用（アジュバント活性） ＢＣＧ死菌の生理食塩水溶液（１００μ９／ｊＩυと、
この発明の化合物のフロイド・インコンシリート・アジ
ュバント溶液（１０００μ９／ｊ１１２）との等量混液
０．２ｆｆｇを、ＩＣＲマウス（１群７匹）の背部に皮
下投与した。１４日後に、ツベルクリンｌＯμ９を後足
跡に皮内投与し、２４時間の足諺の腫れを測定した（２
４時間フットパットテスト）。対照として、上記混液か
ら、この発明の化合物を除いた液を用いた。

また、Ａ、Ｂ、Ｃの化合物は次の通りである。

Ａ：Ｎ−［［２−〇−（アセタミド−２，３−ジデオ香
ン−６一〇−［（３Ｒ）　−３−ドｆカノイルオ什テト
ラデカハル］−Ｄ−グルコビラノース−３−イル）ｆ）
−ラクトイル］］−り一７ラニルーＤ−イングルタミン
　メチルエステル（実施例１） Ｂ　　：　　Ｎ−［［２−０−（７セタミドー２゜３−
ジデオキシ−６−〇−［（３Ｒ）−３−ｉト１ｆｌｔ／
４ｋｔ’Ｆｔｉト１ｆｔｔ／４にコーＤ−ｆｌｙＥｉ／
−１−３−イル）−Ｄ−ラクトイル］］　−Ｌ−７ラニ
ルーＤ−イソグルタミン　メチルエステル（実施例２） Ｃ：　　Ｎ−［［２−０−（７セタミＦ−２，３−ジブ
オキ７−６−０−［（３Ｒ）−３−へ４号ｆカノイルオ
什テトラｆカ！イルコーＤ−グルコＥう！−λ−３−イ
ル）−Ｄ−ラクトイル］］−Ｌ−７ラニルーＤ−イソグ
ルタミン　メチルエステル（実施例３） フットパットテストの結果は次表の通りである。

第１表 （２）肝炎ワクチンの増強作用（アジュバント活性） この発明の化合物を、生理食塩水に溶解又は懸濁した（
１００ｕ９／ｘ（り。これをＢ型肝炎ワクチン（ｌｌＢ
ｓ　）の生理食塩水（１００μ９７肩ｅ）と同量混合し
てテスト液を調製した。一方、上記のテスト液からこの
発明の化合物を除いたものを対照とした。

テスト１ｆｆ１０．２ｉ１２を、ＣＤＦＩ？ウス（１群
１０匹）に腹腔内投与した。

投与３週間目に、各マウスの眼底静脈より採血し、血液
を遠心分離に付し、血清を得た（第１反応血清）。さら
に、各マウスに再びテスト液０．２１を腹腔内投与し、
２週間後に、同様に血清を得た（第２反応血清）。

得られた血清のＢ型肝炎ウィルスに対するＩｇＧ抗体を
ＥＬＩＳＡ法で測定した。

結果は次表の通りである。

（以下余白） 第２表 （３）インフルエンザＨＡワクチンの増強作用（アジュ
バント活性） この発明の化合物を生理食塩水に溶解又は懸濁した（１
００νｇ／ｘ（り。一方、インフルエンザＨＡワクチン
（Ａ／バンコ７り７１０７８３株、）ＩＩＮＩ）の生理
食塩水溶液を調製した（　１０ｆｌＣＣＡ／１１＆）。

これらの液を同量混合し、テスト液とした。一方、テス
ト液からこの発明の化合物を除いたものを対照とした。

上記のテスト液を、上記（２）の肝炎ワクチンの増強作
用のテストと同様にマウスに投与し、第１及び対２反応
血清を得た。

結果は次の通りである。

（４）マクロファージ活性化 この発明化合物を生理食塩水中で超音波処理により溶解
又は柱間し、５００μ７／肩ａとし、この０．２ｍ（１
をＣＤＦ、マウス（１群］Ｏ匹）の腹腔内に投与する。

４日後に得られた腹腔マクロファージと、Ｌ−１２１０
マウス白血病細胞とを２０：ｌの細胞数の割合で混合し
、９６穴マイクロプレートに、２００μσずつ蒔き、７
２時間後に、各式の細胞数をカウントし、Ｌ　−１２１
０のみの細胞数に比べ、Ｌ　−１２１０とマクロファー
ジの混合した場合の増殖抑制率を測定した。

第４表 （５）抗体産生細胞増加作用 ヒツジ白血球（ＳＲＢＣ）のリン酸緩衝食塩水溶液（５
Ｘ１０’セル／１１２）の０．２ｘＱを、ＩＣＲｖウス
（１群７匹）の尾静脈に注射した。同時にこの発明の化
合物の生理食塩水溶液（５０ｈ９／　ｙＱ　）　０．２
ｘＱを同様に注射した。投与４日後に、マウスの胛臓を
摘出し、脛細胞を得た。カニンガム法によりプラークの
数を測定した。

結果は次表の通りである。

第５表 （６）感染防御 この発明の化合物の生理食塩水溶液（５００μ９／３１
１２）　０．２ＲＱをＩＣＲマウス（１群２０匹）の腹
腔内に投与した。その１日後、エシェリヒア・コリ（Ｊ
Ｃ−２）、ンユードモナス・エルギリーサ（ＮＣＴＣ−
１０４９０）をＩｘｌＯ’／マウスの濃度になるように
、腹腔内に接種した。感染７日後のマウス生存率を測定
した。

（以下余白） 第６表 （７）抗腫瘍効果 メスＡフィブロザクローマをリン酸緩衝生理食塩水に懸
濁した（　Ｉ　Ｘ　１０’セル／ｍＯ）。一方、この発
明化合物を生理食塩水で一部超音波処理を行ない、１，
０００μｇｌ震（ｌに調製した。これらの等量混液０．
２ｍＱをＢ　Ａ　Ｌ　Ｂ／Ｃマウス（１群２０匹）の皮
下に０．２ｔｎＱづつ注射した。注射後３５日目の生存
率をそれぞれ測定した。

第７表 鷹 代理人　　弁理士　　野　河　信太部　　り讐 、１　　・；・

Claims (1)

1. 【特許請求の範囲】 １、式（ I ）： ▲数式、化学式、表等があります▼（ I ） （式中Ｒ＿１は水酸基、Ｒ＿２はメチル基、Ｒ＿３は３
   −ドデカノイルオキシテトラデカノイル基、３−テトラ
   デカノイルオキシテトラデカノイル基または３−ヘキサ
   デカノイルオキシテトラデカノイル基、Ｒ＿４はアセチ
   ル基、 Ａｌａは▲数式、化学式、表等があります▼、 ｉｓｏＧｌｎは▲数式、化学式、表等があります▼ を意味する。） で表わされるムラミルペプチド誘導体と医薬的に受容な
   賦形剤とからなる免疫調節剤。 ２、ＢＣＧ、肝炎またはインフルエンザウィルスのワク
   チンの生体内の作用増強用である免疫調節剤。 ３、抗菌剤の生体内の作用増強用である免疫調節剤。 ４、抗腫瘍剤の生体内の作用増強用である免疫調節剤。