JPH01201156A - 磁気的分離デバイスおよび不均質検定における使用法 - Google Patents

Abstract

(57)【要約】本公報は電子出願前の出願データであるた
め要約のデータは記録されません。

Description

【発明の詳細な説明】 ｉ呵み分で 本発明は不均質型検定を実施するのに有用なデバイスに
関するものであり、さらに特定的にいえば、微細磁性粒
子あるいは鉄質粒子を使用する免疫検定およびハイブリ
ダイゼーション型検定に関して使用するための新しい磁
気的分離デバイスを記述するものである。

九肌例賀遣 近年、健康管理は検定法の入手性および改善のために側
的に大きな尺度で進歩した。検定は各種の病気状態と相
関をもちあるいは関連する特定の化学的構成成分、すな
わちリガンドを検出する。

リガンドは、それへ選択的に結合しかつ検査されるべき
試料中に存在するかもしれない池の化学的構成成分へは
結合しないリガンド結合性特異物質との結合反応を通し
て主として検出される。各種の創意的技法により、その
ような結合反応の存在または欠如を検出することができ
、従って測定される試料中のリガンドの存在または欠如
を検出することができる。

ここで特許請求される発明が関係する二つ主な種類の検
定法が存在し、これらは免疫検定とハイブリダイゼーシ
ョン検定を含む。免疫検定は以前から存在しており、抗
体をその抗体が特異的である抗原との間の反応の特異性
に基づいている。はじめに用いられた抗体はポリクロー
ナル起源のものであり、例えば、抗体は、それが望まれ
る抗体による挑戦に続いて動物中でつくり出された。そ
の後は、コラ−とミルシュタインによる１９７５年（Ｎ
ａｔｕｒｅ２２５　：　１０６１　）の革新的開発に続
いて、モノクローナル抗体が好まれてきており、それは
、それらがより容易につくることができ、親和性および
結合活性による精巧な選択を可能にするからである。

さらには、抗体および／または抗原を標識化する各種の
技法が存在しており、それらには、同位元素標識、蛍光
性分子、化学発光分子、酵素、光散乱性粒子、エネルギ
ー転移、スペクトル的にマツチ＜　ｍａｔｃｈｅｄ　）
する分子の対の間の組立て（ｓｃｈｅｍｅ　＞、などの
採用が含まれる。これらの技法は実業においてよく知ら
れており、ここで詳細に見直して見る必要はない、しか
し、二つのかけはなれた種類の検定、すなわち、均質検
定と不均質検定と区別することは価値がある。均質は操
作上見地から最も望よまれ、何故ならば、その検定実施
のための反応全体および反応剤の添加か、敢終的な検出
段階とともに、単一溶液中でおこるからである。従って
、時間かかかりかつ誤差をひきおこし得る機械的操作が
回避されるが、しかし、所望の感度で以てその種の検定
法を開発することの技（Ａ、ｊ的側面は相当なものであ
る。対照的に、数多くの検定法が不均質系に基づいて実
施され、その場合には、−般的にはある型の固相装置３
含む一つの溶液の中でいくつかの段階が実施される。検
出されるべき反応は溶液中か固相上のいずれかにおいて
おこり、続いて分離段階が行なわれ、それによって未反
応成分、および汚染性影９物が効果的に除去され得る。

結果は一般的には、追加的な機械的操作を使用してより
高い７ｋ　イ舊の感度にある。慣用的な不拘τＩ検定は
溶液から手によって容易に除き得るデイツプスティック
（ｄｉｐｓｔｉｃｋ）　、あるいは同じように手軽な移
送を可能にする大きいビード３用いてきた。

ラテックスまたは類似物質から一般的には成るより小さ
いし−ｌｚは液体からの隔１ｉｉ１ｔ　Ｉ、ためにフィ
ルターおよび／または遠心法に頼ってきた。大きい磁性
粒子を用いる概念もまた開発されており、スミスらによ
り米国特許４，２７２，５１０および４，２９２，９２
０において記載される。特定的にいえば、スミスらはＢ
Ｂ型釉粒子使用、および容器から容器へ同相を取出すた
めの電磁的にエネルギーを与えられた釘（口ａｉｌ）を
用いることによって溶液から上記８８粒子を取出すこと
、を述べている。多少あかぬけしないけれども、スミス
らの方法は、汚染性影響をしばしば与える容器壁が、検
出可能反応が同相上でおこるともちろん仮定して、取除
かれるという利点を実際にもっている。しかしこれらの
方法は、すべての固相粒子を別の容器へ取出しそして／
あるいは移すことができない故に、特に微細な磁性また
は鉄質粒子の場合にそうであるように、正確さを損うと
いう実質的危険性に悩む方法である。そのような微細粒
子はスミスらによって記述されている大ビードよりも大
いに好まれるものであり、なぜならば、それらは反応が
おこり得るはるかに大きい表面積をもつからである。感
度は従って劇的に改善される。

コーニング社くロチェスタ）は磁気的分離デバイスを商
業的に人手可能なものとしたか、それは検定反応剤混合
物と磁性粒子固相成分とを含む大きい、例えは］　２ｍ
ｍＸ　７５ＩＩ１ｍの試＠管で以て使用するよう意図さ
れている。コーニングのデバイスは試験管３受入れるた
めの水平な成型されたうね部分をもち、それによって粒
子は試験管の片側へ引きつけられるようになって液の除
去を可能にする。コーニングのデバイスの設計はしかし
、小容積の試料について使用するのに最適化されておら
す、従ってその）うな応用については最適なものとなし
得す、従ってその利用性が制限されている。

本発明の一つの目的は、小容積の検定について便用可能
であり、あるいは−度に〉６０の検定に使用できる、磁
性微細粒子を用いる検定で使用するデバイスを提供する
ことである。

本発明のもう一つの目的は、マイクＴＶタイター型ｌ・
レーで以て用いることができ、それによって５数の検定
を１−時的に実施し得るデバイスを提供することである
。

本発明のさらにもう一つの目的は、鉄質固相物質と一緒
に使用する、オートクレーブ滅菌ができる分離デバイス
を提供することである。

本発明のさらにもう一つの目的は、自動化ピペット系へ
手軽に適合させ得る磁気的分離デバイスを提供すること
である。

本発明のさらにもう一つの目的は、各試料容器内で１個
、２個または４個の鉄質粒子引付は位置を提供するよう
適合させ得る、磁気的分離デバイスを提供することであ
る。

より最近に使われるに至ったもう一つの種類の検定法は
核酸プローブの標的核酸によるハイブリダイゼーション
に頼るものである。標的核酸は一般的には伝染性微生物
、例えばバクテリア、ビールスなどと関連するものであ
り、ただし、特異的細胞ゲノムの検出もまた期待される
。非常に単純化した説明によると、ハイブリダイゼーシ
ョン検定は相補的ヌクレオチド塩基の間の大いに好まし
いベアリング（ｐａｉｒｉｎｇｓ　）に依存している。

特定的にいえば、好ましいベアリングはアデニンと、チ
ミジン、グアニンおよびシチジンとの間である。

デオキシリボ核酸（Ｄ　Ｎ　Ａ　）の各類は一連の前記
塩基で構成され、一方、それの相補鎖は合致するが相補
的の系列のＤＮＡ塩基から成る。このように、二本鎖核
酸を一本鎖へ解離させることができ、そして相補的配列
をもつ核酸で構成されるプローブで以て、そのプローブ
が相補的位置においてのみ標的核酸へハイブリッドされ
る二本鎖核酸をつくり出し得る。

ＤＮＡはリボ核酸（ＲＮＡ）に転写され、それはウラシ
ルがチミジンに置換されること以外には同し四つの塩基
のりボヌクレオチドでまた構成される。その転写方式の
ゆえに、そのＲＮＡ配列はまたＤＮＡ配列に対して相補
的であり、従って同じ塩基確認情報を含む。このように
、微生物または細胞のＲＮＡを、標的ＲＮＡを相補的配
列３含むプローブへハイブリッドさせることによって、
同じようにして検出し得る。核酸プローブの生成と調合
は、比較的最近の発展であるが、よく知られた技術であ
りかつ文献中によく記載されている。

この点において助けになる文献はマニアチスらの、クロ
ーニング　マニュアルであり、それの関連部分は、ここ
で言及した文献とともに本明細害において参照して組入
れられている。

容易に測定し得るとおり、免疫検定に関して用いられる
同じ技法の多くは標識化であり、不均質／均質系をハイ
ブリダイゼーション検定へ適用できる。特に、不均質検
定における固相物質の使用はハイブリダイゼーション検
定を特別に有用にさせる技法である。微細磁性粒子の利
用はしかし、主として、現在の磁気的分離デバイスをハ
イブリダイゼーション検定へ適用できないことのために
、平凡なことではない。

そこで、本発明のもう一つの目的は、ハイブリダイゼー
ション検定と鉄貧固相粒子とに関して有用である、適切
な磁気的分離デバイスを提供することである。

九哩例製力 本発明の原理と目的によると、不均質の免疫検定および
／またはハイブリダイゼーション検定において使用する
ための磁気的分離デバイスが提供されるのであり、それ
は、試料と鉄質粒子を含めた検定成分（ａｓｓａｙ　ｃ
ｏｍｐｏｎｅｎＬ　）を保持する非鉄製容器を受け入れ
るための多数のオリフィスをもつベースから成り、上記
鉄質粒子は自然の磁性を示しても示さなくてもよい。こ
のオリフィスの各々は、好ましくは多数個、最も好まし
くは４個であって、かつ最も好ましくはオリフィス周囲
の周りに等距離で間隔を置いた磁石によってどっかこま
れている。各磁石の南北磁場方位は好ましくは、受入れ
用オリフィスを通る一つの断面平面と同一平面であり、
従って、容器の総体的に並んでいる縦軸に対して垂直で
ある方向においてその非鉄製容器の上に突き当るよう、
配向される。従って、この好ましい実施態様におけるす
べての磁石はベースとの関係において一つの単一特定方
向で一線に並んている。−層好ましくは受入れオリフィ
スの周囲の周りの磁石の南北磁場方位は１８０°方向か
変る。このように、各オリフィスの周囲の周りで一つの
共通の方向、例えば時計周りまたは反対側りですすむこ
とによって磁石の磁場方向を検査して見ると、第一の磁
石は次の磁石とは１８０″′反対にある南北磁場方向を
もち、その磁石はこんどはその次の磁石と１８０°反対
にある、等々、の結果となる。このようにして、周囲の
周りにある他の磁石はどれも実質的に同等の磁場配向を
もつ。

このデバイスの最も好ましくい実施態様はさらに、複数
の非鉄質容器へあるいはそれらから同時的に液３ピペン
トすることができる、室内装置付きピペット手段から成
る。その他の実施態様はさらに、非鉄製容器の各々の内
部で反応剤を撹拌しかつその非鉄製容器を保温するため
の手段、および、複数個の非鉄製容器を受入れ用オリフ
ィスへかみ合わせかつ取り出すためにベース手段をかみ
合わせるよう適合させた移送スライド、から成る。

本発明の他の実施態様は非鉄製容器内で１個または２個
のスポット引付は部位を与える受入れ用オリフィス−磁
石配向から成り、一方、４個の磁石によってかこまれた
受入れ用オリフィスをもつ最も好ましい上記実施態様は
４個のスポット引付は部位をもたらす。

液体試料中のリガンドについての免疫検定またはハイブ
リダイゼーション検定において、本発明の磁気的分離デ
バイスから成る新規の方法が提供されている。

１目配」口Ｊ１良五式 図１は本発明の磁気的分離デバイスの好ましい実施態様
を示している。それはミクロニック■型チューブのよう
なマイクロチューブを有利に収容し、最も好ましくは、
それは９６個のその種のチューブを同時に１２列×１２
列で収容するようつくられる。そのような配列は９６個
のウェルを提供するマイクロタイタープレトレーに関し
て普通に使用されているものと類似である。その池の製
造ｙ＋は、例えばカリホルニア、エメリービル、セタス
からのプロベト・ピペット系のようなその種のトレーと
一緒に使用するための付属デバイスをつくっている。９
６試料フオーマツトを有利に提供することによって、本
発明のデバイスは研究室においてすでに存在しているそ
の種の自動化デバイスと一緒に潜在的に使用できる。

図１はマイクロチューブ（図２を見よ。Ｎｏ、２０）を
受入れるための多数の受入れオリフィス３をもつ分離器
デバイスのベース１を示している。好ましくは、ベース
は非鉄物質または非磁性物質で構成され、アルミニウム
のような金属から機械製作されあるいは適当ブラスチン
クから成型されるのが有利であり得る。最も好ましいの
は、それらの物質はオートクレーブ殺菌のような代表的
滅菌手続に耐えるように選ばれるべきである。オリフィ
ス３の周囲をとっかこんで、磁石５を受入れるための機
緘加ニオリフイス６（あるいは成型オリフィス６）があ
り、その磁石はベース１の表面および受入れ用オリフィ
ス３の断面と同平面である。

ネオジム鉄硼素磁石がすべて図１の８に示されるのと同
じ「北」方向で並んでいる場合には、これが約５００−
６００ガウスの受入れ用オリフィス内の磁場強度をもた
らすことが発見された。しかし、磁石が図１の９に示す
とおりの別の「北」パターンをもち、例えば各オリフィ
スの周囲の時形回り方向ですすむように磁場が１８０°
方向を変える場合には、その種の配向が受入れオリフィ
ス内で磁場線を集中させることが驚いたことに発見され
、磁場は約１４００−１６００ガウスへ増加したにの驚
くべき配向の結果として、アドバンスト　マグネチック
ス社から入手し得るもののような、磁性微細粒子分離の
劇的増加が溶液内でおこる。明らかなように、分離はマ
イクロチューブ内での４領域または４スポツトの引付は
部位の局在化をもたらす。本発明の磁気的分離デバイス
のそれほど好ましくない実施態様では、ベース１中の受
入れ用オリフィス３の間で均等に分散された、２４個ま
たは５９個のようなより少ない数の磁石を利用するが、
それによって、それぞれ１個または２個のスポット引付
は部位が各マイクロチューブ内でおこる。

最も好ましくは、用いられる磁石５は永久磁石であり、
最も好ましくは、強力磁場を保有する。

磁場が強いほど、分離はより有効であり、かつその分離
が迅速である。最も好ましい磁石は、インデイアナ州パ
ルパライソのＩＧ・チクノロシーズから入手できる。稀
土類ネオジム−鉄硼素磁石である。０ｔ１３インチ×０
１３インチ×０，５インチの磁石が、商業的に入手でき
るマイクロチューブを収容する受入れオリフィス３の間
でオリフィス６中で適切に設置され得るよう、必要な強
度と寸法の要請事項を保持するものとして有利に使用さ
れる。マイクロタイタープレート幾何形体にあるオリフ
ィス６はマイクロタイタープレートの頂部あるいは底部
から設置されることができ、製造者のプレート幾何学に
基づいている。

磁石５は機械工作オリフィス６の中へ押しはめてよいが
、その他の技法を使用してもよい１例えば、ベース１を
インベストメント鋳型法によって製造することができ、
それによって磁石オリフィス６は磁石５とより密接に合
致する寸法と形状を保有する。また別に、ベース１は射
出成型法によるようにプラスチックから製造されてもよ
く、その方法はまた磁石受入れオリフィス６にはまりこ
む形態で精密な公差を可能にする。

図２は図１において示される磁気的分離デバイスと一緒
に使用するための移送トレーを示している。移送トレー
２１はマイクロチューブ２０を受入れるためのチューブ
受入れオリフィス２３を保持している。チューブ移送ト
レー２１はさらにトレー脚２２を含み、それは、移送ト
レー２１を、表面から十分な距離だけ支持してマイクロ
チューブ２０の装填を可能にするのに役立ち、かつまた
マイクロチューブ２０を受入れオリフィス３（図１）と
をかみ合わせる際にトレー脚で以て整列および垂直高の
調節を与えるのに役立つ。

受入れトレー２１はさらに、検討実施中の作業者が、分
離された微細粒子をそれらのスポット引付は部位から溶
液中へ物理的に押しやるための撹拌手段へ、マイクロチ
ューブ２０を移すのを助ける。このチューブ移送トレー
２１はさらにマイクロチューブを保温ブロックへ移して
特定的検定が実施されるのに必要とされるとおりに温度
制御環境を提供するのを助ける。

図３は最も好ましい実施態様の透視図を示しており、そ
の場合、アルミニウムのような非鉄金属からつくられた
受入れ用ベース３１はマイクロチューブを収容するよう
に寸法を与えられた、この場合も好ましくはアルミニウ
ムの、シリンダー３３を収容するように機械加工される
。受入れ用ベース３１の機械加工された領域はまた、各
々の受入れチューブ３３が４個の磁石３５によってとり
かこまれるように磁石３５を収容する寸法がまた与えら
れている。最も好ましくは、磁石３５の磁場方位が前に
論じたのとは別のパターンで配列される。磁石３５およ
びチューブ３３はベースのカバー３２によって所定の位
置に保持され、カバーはスクリュー、接着剤、リボンな
どによって受入れ用ベース３１へ永久的に固着されても
よい。この最も好ましい実施態様は９個の受入れ用オリ
フィス３７で以て示されているが、この構成の実施態様
は図１に示す９６個までの受入れ用オリフィス（必要な
らばより多くの）へ規模を大にすることができる。

図４は受入れ用ベース／分離器４１の透視図を示し、移
送トレー４２がそれとかみ合い状態にあり、マイクロチ
ューブ４３がその中に設置されている。案内装置付きチ
ャネル・ピペット４４が、マイクロチューブへかつ／ま
たはそれから液体連結チューブ４７を通して液体ポンプ
８１構（図示せず）へ液体をピペットするのに用いられ
る。特定の列または特定の欄の中にある各々のマイクロ
チューブについての個別ピペットをもつピペッタ−４４
は心合せ脚４５と心合せ穴４６とのかみ合せによって、
受入れ用ペース／分離器４１とかみ合う。

図５は分光光度計中で測定される光強度によって決定さ
れるときの、粒子移動速度対磁気方位の測定に向けた実
験の結果を示す０図を検討すると明らかに理解されると
おり、すばらしい、驚くべき、そして予想外の粒子移動
速度の増加が本発明のデバイスにおいて、交番磁極を用
いるときに観察されるのは明らかである。単一方向性の
極が一般的にはたいていの試料について適切であるにも
かかわらず、交番径は血液などを含む試料のような粘性
試料に関して明瞭に好ましい。従って、本発明の好まし
い実施態様は図１の領域９において示すとおり交番磁極
を利用する。

本発明はマイクロニック■型のマイクロチューブを引用
して特定的に記述してきたが、本発明の原理はマイクロ
タイター型トレイの実施態様へ容易に適用され得る。特
定的にいえば、図において示される実施態様に対する明
瞭な機械的変更はマイクロタイタートレーを適切に受入
れかつ磁石をウェルと並置して置くために必要とされる
であろう。好ましくは、その配置は少くとも４個の磁石
を利用することを含み、各ウェルの周囲の周りで均等に
間隔がとられることが有利である。最も好ましくは、地
場方位が、オリフィスの周囲あるいはマイクロタイター
・トレーのウェルを受入れる他の領域の周りにおいて時
計回りまたは反対回りの方向で磁石を用いるときに、各
磁石とほぼ１８０°変る。マイクロタイター・トレイを
受入れるためのベースの実際の物理的具体化はｙｉ覆さ
れた磁石の露出を含んでいてよく、それによって、ベー
ス上面上でのマイクロタイタートレーの配置は磁石をマ
イクロタイター　トレーのウェルの間で上向きに突出さ
せる。あるいは別に、そして、固体底（ｓｏｌｉｄ　ｂ
ｏｔｔｏｍ）をもつタイプのマイクロタイター　トレー
に関して持に、ベースは単純にマイクロタイター　トレ
ーを収容し、下向きに突出した磁石を３むカバーかマイ
クロタイター　）・レーとかみ合い、それによって、磁
石がマイクロタイター　ウェルの間で下向きに突出す。

）α木取出しのために頂部プレート中に穴が設けられる
。

この開示と、そして特に付属図面から与えられると、適
業熟練者は最もよいマイクロタイター・トレーを収容す
るための適当な物理的構造を容易に決定するであろう。

このデバイスの採用は以下のバイブリダイゼーション検
定試料におけるその使用を見直すことによって明らかに
なるであろう、この実施例を前記の開示と付図と一緒に
検討することにより、免疫検定におけるそれと類似の採
用は適業熟練者にとって明らかとなり、彼らの技能の範
囲内に十分にあることになる。

」工但シ）についてのＤＮＡプローブ検出を、０．５−
１．５μの直径の磁性粒子（アドパンストマダイ・チッ
クス社）をその磁性粒子の表面へ共有的に結合させたオ
リゴｄＴ１４と一緒に使って実施した。ベースは選択さ
れたマイクロタイタープレー１−　（タイターチク７９
５個ウェルのプレート）とかみ合っているプレートの中
へ接着させた１１７個の磁石で構成されていた。この検
定のマイクロタイター　プレートをベースとがみ合わせ
るとき、そのマイクロタイター・プレート中の各ウェル
は各四分円において１個の磁石をもち、それによって前
述のとおりに上澄液からの磁性粒子の分離を行なわせた
。

リステリアの一晩培養体を３７°Ｃにおいて、プレイン
ハート・インフュージョン・ブロス（ｂｒａｉｎｈｅａ
ｒｔ　１ｎｆｕｓｉｏｎ　ｂｒｏｔｈ）の中で増殖させ
、この試料培養体の１＠１を下に規定するとおりのプロ
セシング（ｐｒｏｃｅｓｓ　ｉ　ｎＢ　）緩衝液の１−
へ添加し、合計７０μｇの混合物を各マイクロタイター
・プレート　　ウェルへ添加した。

プロセシングＦ１衝液 ５　ＭＧｕＳＣＮ　（グアニジンインチオシアネート）
０．３０Ｍ　　トリス川１ｃＮ　、ｐＨ７，５（）−リ
ス−〔ヒドロキシメチル〕アミノメタン） ０　、１０　Ｍ　Ｎａ２ＥＤＴ＾（エチレンジアミンテ
トラ酢酸）２０％デキストランサルフェート（分子ｆｉ
５０００）（重量／容積） １６０ｄＡの残基（ｒｅｓｉｄｕｅ）を湿部にもつＤＮ
Ａの３５＋ＩＩｅｒのオルゴヌクレオチドの２．０μ！
（２，５Ｍ（：ｕＳＣＮ中で３５ｎｇ／μｆ、１０Ｊ　
ＥＤＴＡ、ｐＨ７，５）を各ウェルへ添加し、３７°Ｃ
で１５分間保温した、 ビード反応剤緩衝剤（以下で規定するとおりの）中の１
４０μ！のｄＴ１４誘導磁性ビードく５μｇ　／　ｍｌ
のｄＡ５０結合能力）を各ウェルへ添加した。

ビード反応剤緩衝剤 トリス−）１ｃｌ　０．ＩＭ、ｐＨ７，４アセチル化Ｂ
ＳＡ　　０．５％く牛血清アルブミン）１００μｇ７ｍ
ｌ　　超音波処理・子牛胸腺ＤＮＡ１０ｍＭ　　ＥＤＴ
Ａ ４％　サポニン ０．５％　サルコシル ０　、５　Ｍ　　ＮａＣ１ ０，１％　アザイド ００１％　シリコン消泡剤 磁性ビートをマイクロタイター・プレートを１１７個の
磁石を古むベースとがみ合わせることによって分離し、
上澄準を取出し、０　、１　ｍｌの洗ｉ　緩ｍ液（ｗａ
ｓｈ　ｂｕｆｆｅｒ）　１を各ウェルへ室温で添加し、
プレートを１１７個の磁石を含むベースから切り雛した
のちに、ビードを再懸濁させた。

洗滌緩衝液１ １　Ｍ　　ＧｕＳＣＮ トリス−ＨＣＮ　、○　ＬＭ、ｐＨ７，４アセチル化　
ＢＳＡ　　０．５％ １０ｕｇ／ｍＮ　　子牛胸腺ＤＮＡ ＥＤＴＡ　　ｌｏｍＭ ０１％　ナトリウムアザイド サルコシル　０．５％ サポニン　１％ 消泡剤 磁性ヒートを、マイクロタイター　プレートを１１７個
の磁石を含むベースとかみ合わせることによって再度分
離し、上澄液を取出し、０　、１　Ｊの洗滌ｉｌｌ液］
を室温において添加し、プレートを１１７個の磁石を含
むベースから切り離したのちに再度懸濁させた。

６５μ！の化学的溶離剤（ｃｈｅｍｉｃａｌ　ｅｌｕａ
ｎｔ）く次に規定する）を各ウェルへ添加し、構成体を
混合し、３７°Ｃで２分間保温した。

化学的溶離剤 ２　、５　Ｍ　　ＧｕＳＣＮ トリス−１１ｃ１．０．１Ｍ、ｐＨ７，４１０μｇ／社
　超音波処理した子牛胸腺ＤＮＡアセチル化　ＢＳＡ　
　０．５％ ＥＤＴＡ　　１０ｍＭ １０％　サポニン ０５％　サルコシル 磁性ビードを、マイクロタイター・プレー１へを１１７
個の磁石を含むベースとかみ合わせることによって分離
し、各ウェルからの溶離剤を、旦、ｃｏｌｌの３′一端
からクローンされたｐｆｆ２リボプローブの１４ｎｇ／
ｍｌ濃度の５μｒを含む新鮮なウェルへ移した。混合物
を３７℃で４分間保温しＳ６ 反応剤中の１４０μＮのビード（＞５％ｇ／ｍ＆のｄＡ
５０結合能力）を各ウェルへ添加し、３７°Ｃで２分間
保温し、ビードはマイクロタイター　プレートを１１７
個の磁石を含むベースと３７°Ｃにおいてかみ合わせる
ことによって、磁気的に分離した。

上澄液を取出し、０．１ｍｆの洗滌緩衝剤２（以下で規
定する）を各ウェルへ添加し、ビートを３７°Ｃにおい
て、ベースをマイクロタイター・プレートから切りはな
したのちに、再分散させた。

洗滌緩衝液２ トリス　０．ＩＭ、ｐＨ７，４ １００μｇ／−旦、蜆旦、ＤＮＡまたはｔ−ＲＮＡＥＤ
ＴＡ　　１０ｍＭ アセチル化　ＢＳＡ　　０．５％ ０．５Ｍ　　Ｎａｌ！’ ０５％　サルコシル 磁性ビードはマイクロタイターを１１７個の磁石を含む
ベースとかみ合わせることによって分離され、上澄液を
取出し、０．１社の洗滌緩ｉ液２を３７℃において添加
し、プレートを１１７個の磁石を含むベースと切りはな
したのちに、ビードを再懸濁させた。

マイクロタイター・プレートを１１７個の磁石を含むベ
ースとかみ合わせることによって磁性ビードを分離し、
上澄液を取出し、０　、１　ｍｌの洗滌緩衝液２を３７
℃において添加し、プレートを１１７個の磁石を含むベ
ースから切りはなしたのちにビードを再懸濁させた。

磁性ビートを、マイクロタイター・プレートを１１７個
の磁石を含むベースとかみ合わせことによって分離し、
上澄液を取出し、０　、１　ｍｌの洗滌Ｍ澄液２を３７
℃において添加し、プレートを１１７個の磁石を含むベ
ースから切り離したのちに再懸濁させた。

マイクロタイター・プレートトを１１７個の磁石を含む
ベースとかみ合わせることによって磁性ビードを分離し
、上澄液を取出し、０　、１　ｔＪの洗滌緩衝液２を３
７℃において添加し、そして、プレーｌ−３１１７個の
磁石を含むベースから切りはなしたのちに、ビードを再
懸濁させた。

マイクロタイター・プレートを１１７個の磁石を含むベ
ースとかみ合わせることによって磁性ビードを分離し、
上澄液を取出し、０　、１　ｌ１ｌｅの洗滌緩衝液２を
３７℃において添加し、そして、プレートを１１７個の
磁石を含むベースから切りはなしたのちにビードを再懸
濁させた。

磁性ビートを、マイクロタイター・プレートを１１７個
の磁石を含むベースとかみ合わせることによって分離し
、上澄液を取り出し、０１ｍｌの洗滌緩衝剤２を３７℃
において添加し、そして、プレートを１１７個の磁石を
含むベースから切りはなしたのちにビードを再懸濁させ
た。

磁性ビードを、マイクロタイター　プレートを１１７個
の磁石を含むベースとかみ合わせることによって分離し
、上澄液を取り出し、０　、１　ｍｌの洗滌！！衝澄液
を３７℃で添加し、そして、プレートを１１７個の磁石
を含むベースから切りはなしたのちにビードを再懸濁さ
せた。

１００μ！の洗滌緩衝液２を各ウェルについて添加し、
６８℃において２分間保温した。

マイクロタイター　プレートを１１７個の磁石を＆むベ
ースとかみ合わせることによってビードを磁気的に分離
し、上澄液を取出し、シンチレーション液体へ移し、次
に各バイアル中のｐ３２ｉｉをベックマン１８００シン
チレーシヨン・カウンターを使用して測定しな、火んえ
又１の存在は、それが対照標準フェル中で存在しないと
きより一桁大きいｐ３２カウント数によって確認された
。

【図面の簡単な説明】

図１は磁気的汁離デバイスの平面図であり、］ＡＩＡは
磁石の段重を示している。 図２はマイクロ−ｙ−ユーブを磁気的分離デバイスへお
よびそれから、移動させるための移送トレーの透視図で
ある。 図３は磁気約分Ｍ器デバイスの一つの好ましい実施１Ｔ
５様を示し、ている。 図４は磁気的分離器デバイス上に案内装置付きの８チヤ
ンネル型のアスピレータ／ピペッタ−で以て取りつけら
れたマイクロチューブ・トレーの透視図を示す。 図５は単一方向磁極の場合と比べて、交番磁極をもつ分
離器において得られる、驚異的でかつ予想外の速度利点
を示している。 図６は廃液の除去を容易にするための関連する８チヤン
ネル型の真空ヘッドを備えた磁気的分離器デバイスの透
視図を示している。 （外４名） 支　瞳人 ５色支譚没１ｎ

Claims (1)

1. 【特許請求の範囲】 １、磁性粒子から成る固相を用いる検定法において使用
   するための磁気的分離装置であつて、ａ）上記の磁性粒
   子を含むよう適合させた非鉄製容器を受け入れるための
   多数のオリフィスをもつベース手段； ｂ）各々の受入れ用オリフィスの周囲の周りで間隔が置
   かれた、上記ベース上で取付けられる多数個の磁石手段
   であって、該磁石手段の各々が上記受入れオリフィスを
   通る断面平面と同一平面である一つの方向において南北
   磁場方位をもち、かつ、上記磁石手段の上記南北磁場の
   各々が一つの共通方向において配向される、磁石手段；
   から成る装置。 ２、上記の受入れ用オリフィスが４個の磁石手段により
   周囲の周りでかこまれている、請求項１記載の装置。 ３、磁性粒子から成る固相を用いる検定法において使用
   するための磁気的分離装置であって、ａ）上記の磁性粒
   子を含有するよう適合させた非鉄製容器を受入れるため
   の多数個のオリフィスをもつベース手段； ｂ）各々の受入れ用オリフィスの周囲の周りで間隔をと
   って上記ベース上にとりつけられる多数個の磁石手段で
   あって、該磁石手段の各々が上記受入れ用オリフィスを
   通る一つの断面平面と同平面である方向において南北磁
   場方位を保有し、かつ、その南北磁場方向配列上記受入
   れ用オリフィスの各々の周囲の周りで一つの共通方向で
   動いて、その前にある磁石の南北磁場方位からほぼ１８
   ０゜変る、磁石手段； から成る装置。 ４、上記の磁石手段が稀土類コバルト磁石である、請求
   項１記載の装置。 ５、上記磁石手段が稀土類コバルト磁石である、請求項
   ３記載の装置。 ６、上記磁石手段が３３Ｈネオジム鉄硼素磁石である、
   請求項４記載の装置。 ７、上記磁石手段が３３Ｈネオジム鉄硼素磁石である、
   請求項５記載の装置。 ８、上記ベース手段が９６個の受入れオリフィスをもち
   、上記装置が１１７個の３３Ｈネオジム鉄硼素磁石から
   成り、そして、上記ベース手段がアルミニウムとプラス
   チックから成る群から選ばれる物質でつくられる、請求
   項７記載の装置。 ９、上記磁石が約０．１３×０．１３×０．５インチの
   寸法をもつ、請求項８記載の装置。 １０、非鉄質マイクロチューブ容器を受け入れかつ上記
   ベース手段とかみ合わせるよう適合させたチューブ移送
   手段からさらに成り、それによって、各々の非鉄質マイ
   クロチューブ容器が一つの受入れオリフィスによって受
   取られかつ多数個の磁場によってとりかこまれる、請求
   項１記載の装置。 １１、非鉄質マイクロチューブ容器を受取りかつ上記ベ
   ース手段とかみ合うよう適合させたチューブ移送手段か
   らさらに成り、それによって、各々の非鉄質マイクロチ
   ューブ容器が一つの受入れオリフィスによって受取られ
   、かつ多数個の磁石によってとりかこまれる、請求項３
   記載の装置。 １２、鉄質固相マイクロ粒子を利用する、リガンド特異
   的結合性物質による免疫検定またはハイブリダイゼーシ
   ョンによって液体試料中でリガンドを検出する方法であ
   って、その際その改良が、固相結合リガンドあるいはリ
   ガンド特異的結合性物質を上記液体試料中に存在する未
   結合のリガンドまたはリガンド特異的結合性物質から分
   離するために、請求項１記載の磁気的分離装置を用いる
   ことから成る、方法。 １３、鉄質固相微細粒子を利用する、リガンド特異的結
   合性物質による免疫検定またはハイブリダイゼーション
   によって液体試料中でリガンドを検出する方法であって
   、その際その改良が、固相結合リガンドまたはリガンド
   特異的結合性物質を上記液体試料中に存在する未結合の
   リガンドまたはリガンド特異的結合性物質から分離する
   ために、請求項３記載の磁気的分離装置を用いることか
   ら成る、方法。 １４、磁性粒子から成る固相を用いる検定法において使
   用するための磁気的分離装置であって、ａ）上記磁性粒
   子を含有するよう適合させた非鉄質組成物のマイクロウ
   ェル・トレー手段を受入れるよう適合させたベース手段
   ； ｂ）上記マイクロウェル・トレー手段と間隔を置いて並
   んで上記ベース上に取りつけられる多数個の磁石手段で
   あって、それにより、上記マイクロウェル・トレー中の
   各々のウェルがそれに隣接して、該ウェルを通る一つの
   断面平面と同平面である一つの方向において南北磁場方
   位を保有する少くとも一つの磁石手段をもち、そして、
   その場合に、上記磁石手段の上記南北磁場の各々が一つ
   の共通方向において配向されている、磁石手段；から成
   る装置。 １５、磁性粒子から成る固相を用いる検定法において使
   用するための磁気的分離装置であつて、ａ）上記磁性粒
   子を含有するよう適合させた非鉄質容器を受入れるため
   の多数個のオリフィスをもつベース手段； ｂ）各々の受入れオリフィスの周囲の周りで間隔をとっ
   て置かれた、上記ベース上で取つけられた多数個の磁石
   であって、その場合、該磁石の各々は上記受入れ用オリ
   フィスを通る一つの断面平面と同平面である一つの方向
   で南北磁場方位を保有し、そして、方位の南北磁場方向
   は、上記受入れ用オリフィスの各々の周囲の周りの一つ
   の共通方向で動いて、前にある磁石の南北磁場方位の配
   向からほぼ１８０゜変る、複数個の磁石；から成る装置
   。 １６、上記ウェルの各々が４個の磁石手段によって周囲
   の周りでとりかこまれている、請求項１３記載の １７、上記ウェルの各々が４個の磁石手段により周囲の
   周りでとりかこまれる、請求項１３記載の装置。 １８、上記の磁石手段が稀土類コバルト磁石である、請
   求項１６記載の装置。 １９、上記の磁石手段が稀土類コバルト磁石である、請
   求項１８記載の装置。 ２０、磁性粒子から成る固相を用いる検定法において使
   用するための磁気的分離装置であって、ａ）上記磁性粒
   子を含有するよう適合させた多数個のマイクロウェルを
   含む非鉄質トレーを受入れるためのベース手段； ｂ）液体取出し穴から成るカバー手段および該カバー上
   で間隔を置いて該カバー上にとりつけられた多数個の磁
   石手段であって、それによって、上記カバーと上記ベー
   スおよび上記トレーとのかみ合せが各ウェル周囲の周り
   の多数個の磁石手段と各ウェルと並ぶ液体取出し穴との
   並置をもたらし、その際、上記磁石手段が上記ウェルを
   通る一つの断面平面と同平面である一つの方向で南北磁
   場方位を保有し、そして、上記磁石手段の上記の南北磁
   場の各々が一つの共通方向において配向される、カバー
   手段と磁石手段； から成る装置。 ２１、磁性粒子から成る固相を用いる検定法において使
   用するための磁気的分離装置であって、ａ）上記磁性粒
   子を含有するよう適合させた複数個のマイクロウェルを
   含む非鉄質トレーを受入れるためのベース手段； ｂ）上記ベース上で間隔がとられ上記ベース上にとりつ
   けられた多数個の磁石手段から成り、それによって上記
   ベースと上記トレーとのかみ合せが各ウェル周囲の周り
   で多数個の磁石手段の並置をもたらすベース手段であっ
   て、その場合、上記ウェルの各々が４個の磁石手段によ
   って周囲の周りでとりかこまれ、かつ、南北磁場方位は
   、上記ウェルの各々の周囲の周りの一つの方向で動いて
   、前にある磁石の南北磁場方位からほぼ約１８０゜変る
   、ベース手段； から成る装置。