JPH01139533A - ビルハルツ住血吸虫に対する活性を有する免疫抗原フラクション、その製造方法及び該フラクションを含有する免疫剤 - Google Patents
ビルハルツ住血吸虫に対する活性を有する免疫抗原フラクション、その製造方法及び該フラクションを含有する免疫剤Info
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Abstract
(57)【要約】本公報は電子出願前の出願データであるた
め要約のデータは記録されません。
め要約のデータは記録されません。
Description
【発明の詳細な説明】
１９８６年４月３０日付のフランス特許出願第８６０６
２８１号は、メガトゥーラ クレヌラータ（Ｍｅｇａｔ
ｈｕｒａ ｃｌｅｎｕｌａｔａ）の如き軟体動物のヘ
モシアニンから抽出された“ＫＬＨ“と略称されるグリ
コプロティン及びそのオリゴサツカライドエピトープを
記述している。
２８１号は、メガトゥーラ クレヌラータ（Ｍｅｇａｔ
ｈｕｒａ ｃｌｅｎｕｌａｔａ）の如き軟体動物のヘ
モシアニンから抽出された“ＫＬＨ“と略称されるグリ
コプロティン及びそのオリゴサツカライドエピトープを
記述している。
この特許出願においては、該グリコプロティンが、幼若
マンソン住血吸虫の表面から分離された３８ＫＤ抗原と
同じ抗原特製を有していること、及び該幼若虫の３８Ｋ
Ｄ抗原とメガトゥーラ クレヌラータのヘモシアニンと
がともに前記オリゴサツカライド性のエピトープである
同一のオリゴサツカライドを含有しており、これが、該
幼虫の３８ＫＤ抗原及びＫＬＨの抗原特性の発揮原因と
なるエピトープとして、保護性モノクローナル抗体によ
り認識されることが示されている。又、この保護性モノ
クローナル抗体が、該フランス特許において同定されて
いるＩＰＬ Ｓｍｌ ハイブリドーマから得られる
ことも明らかにされている。
マンソン住血吸虫の表面から分離された３８ＫＤ抗原と
同じ抗原特製を有していること、及び該幼若虫の３８Ｋ
Ｄ抗原とメガトゥーラ クレヌラータのヘモシアニンと
がともに前記オリゴサツカライド性のエピトープである
同一のオリゴサツカライドを含有しており、これが、該
幼虫の３８ＫＤ抗原及びＫＬＨの抗原特性の発揮原因と
なるエピトープとして、保護性モノクローナル抗体によ
り認識されることが示されている。又、この保護性モノ
クローナル抗体が、該フランス特許において同定されて
いるＩＰＬ Ｓｍｌ ハイブリドーマから得られる
ことも明らかにされている。
本発明の目的は、前記フランス特許に開示されたグリコ
プロティン及びそのオリゴサツカライド性エピトープの
化学的構造を決定し、且つその合成を可能ならしめるこ
とにある。
プロティン及びそのオリゴサツカライド性エピトープの
化学的構造を決定し、且つその合成を可能ならしめるこ
とにある。
本発明によれば、ＫＬＨ（メガトゥーラ クレヌラータ
のヘモシアニン）から抽出されたグリコプロティンであ
って、そのグルシド性フラクション（ｇｌｕｃｉｄｉｃ
ｆｒａｃｔｉｏｎ）がグリコプロティン分子の５〜
５．２５％を占め、３マンノース残基を基準とする該グ
ルシド性フラクションのモル組成（ｍｏｌａｒ ｃｏ
ｍｐｏｓｉｔｉｏｎ）が実質的に下記の通りであるグリ
コプロティンが得られる： 単糖残渣 マンノース ３ ガラクトース ３〜４フコース
２〜３グルコース
２±０．２キシロース ０．５
〜ＩＮ−アセチルグルコサミン ３〜４Ｎ−アセチ
ルガラクトサミン ２±０．３ＫＬＨのグルシド性フ
ラクションを構成するモノサッカライド類は、ガスクロ
マトグラフィーと質量分析とを組み合わせることにより
、同定及び測定され、該グルシド性フラクション中には
、〇−メチルモノサッカライド類は存在しないことが明
らかとなった。
のヘモシアニン）から抽出されたグリコプロティンであ
って、そのグルシド性フラクション（ｇｌｕｃｉｄｉｃ
ｆｒａｃｔｉｏｎ）がグリコプロティン分子の５〜
５．２５％を占め、３マンノース残基を基準とする該グ
ルシド性フラクションのモル組成（ｍｏｌａｒ ｃｏ
ｍｐｏｓｉｔｉｏｎ）が実質的に下記の通りであるグリ
コプロティンが得られる： 単糖残渣 マンノース ３ ガラクトース ３〜４フコース
２〜３グルコース
２±０．２キシロース ０．５
〜ＩＮ−アセチルグルコサミン ３〜４Ｎ−アセチ
ルガラクトサミン ２±０．３ＫＬＨのグルシド性フ
ラクションを構成するモノサッカライド類は、ガスクロ
マトグラフィーと質量分析とを組み合わせることにより
、同定及び測定され、該グルシド性フラクション中には
、〇−メチルモノサッカライド類は存在しないことが明
らかとなった。
本発明によれば、更に、プロナーゼを使用する蛋白質分
解によりＫＬＨから抽出され且つゲル濾過クロマトグラ
フィーにより主ピーク生成物を収得すべく行なう加水分
解生成物の精製により得られる前記グリコプロティンか
ら単離されるグリカン性フラクション（ｇｌｙｃａｎｉ
ｃ ｆｒａｃｔｉｏｎ）が得られ、そのグリシドとし
ての実質的な組成（３マンノース残基を基準として）は
、以下の通りである： 単糖残渣 マンノース ３ ガラクトース ４ フコース １．６グルコース
４ キシロース ０．２３Ｎ−アセチル
グルコサミン 、３．３Ｎ−アセチルガラクトサミン
２ 本発明によれば、更に、ＫＬＨがら抽出されたグリカン
及びマンソン住血吸虫の３８ＫＤ抗原のグリカンに実質
的に等しい合成グリカンであって、下記に示す一次構造
の少なくとも一つを含むことを特徴とする合成グリカン
が得られる：（Ｉ） ０−グリコジルプロティンのグリカン類（νＩ ＫＬＨから単離された又は合成されたグリカンは、３８
ＫＤ分子の特異的モノクローナル プローブ、即ち前述
のフランス特許出願で使用されたＩＰＬ Ｓｍｌ抗体
を使用して、評価された。より詳細には、ＫＬＨから抽
出されたグリコプロティン及び本発明による合成グリカ
ンに対する、ヨード１２５でラベルされたＩＰＬ、Ｓｍ
ｌの固定に際しての、ＫＬＨで免疫された動物血清の抑
制により評価された。得られた結果は、第１図に示され
ており、この様な免疫過程において形成された抗体が、
感染血清、冷“（ｃ ｏ １ ｄ）” ＩＰＬＳｍｌ抗
体、精製ＫＬＨ及びターゲット抗原３８ＫＤの夫々につ
いて観察されると同等のレベルの阻害を引き起こすこと
を明らかにしている。
解によりＫＬＨから抽出され且つゲル濾過クロマトグラ
フィーにより主ピーク生成物を収得すべく行なう加水分
解生成物の精製により得られる前記グリコプロティンか
ら単離されるグリカン性フラクション（ｇｌｙｃａｎｉ
ｃ ｆｒａｃｔｉｏｎ）が得られ、そのグリシドとし
ての実質的な組成（３マンノース残基を基準として）は
、以下の通りである： 単糖残渣 マンノース ３ ガラクトース ４ フコース １．６グルコース
４ キシロース ０．２３Ｎ−アセチル
グルコサミン 、３．３Ｎ−アセチルガラクトサミン
２ 本発明によれば、更に、ＫＬＨがら抽出されたグリカン
及びマンソン住血吸虫の３８ＫＤ抗原のグリカンに実質
的に等しい合成グリカンであって、下記に示す一次構造
の少なくとも一つを含むことを特徴とする合成グリカン
が得られる：（Ｉ） ０−グリコジルプロティンのグリカン類（νＩ ＫＬＨから単離された又は合成されたグリカンは、３８
ＫＤ分子の特異的モノクローナル プローブ、即ち前述
のフランス特許出願で使用されたＩＰＬ Ｓｍｌ抗体
を使用して、評価された。より詳細には、ＫＬＨから抽
出されたグリコプロティン及び本発明による合成グリカ
ンに対する、ヨード１２５でラベルされたＩＰＬ、Ｓｍ
ｌの固定に際しての、ＫＬＨで免疫された動物血清の抑
制により評価された。得られた結果は、第１図に示され
ており、この様な免疫過程において形成された抗体が、
感染血清、冷“（ｃ ｏ １ ｄ）” ＩＰＬＳｍｌ抗
体、精製ＫＬＨ及びターゲット抗原３８ＫＤの夫々につ
いて観察されると同等のレベルの阻害を引き起こすこと
を明らかにしている。
マンソン住血吸虫の３８ＫＤ抗原及びメガトゥーラ ク
レヌラータに対するモノクローナル抗体に関して、本発
明により同定されたグリカンフラクションの阻害活性の
呈示は、ｒ３８ＫＤの表面抗原のエピトープの少なくと
も一部は、グリカン性のものである」というこれまでの
研究を明確に裏付けている（Ｆ Ｅ Ｂ Ｓ レター
ズ、ディス−及びカプロン、１６２ （１９８３）ｐ、
３５５−３５９並びに、モレキュラー アンド バイオ
ケミカル パラシトロジー、ディス−他、１６ （１９
８５）、ｐ、２７７−２８８）。
レヌラータに対するモノクローナル抗体に関して、本発
明により同定されたグリカンフラクションの阻害活性の
呈示は、ｒ３８ＫＤの表面抗原のエピトープの少なくと
も一部は、グリカン性のものである」というこれまでの
研究を明確に裏付けている（Ｆ Ｅ Ｂ Ｓ レター
ズ、ディス−及びカプロン、１６２ （１９８３）ｐ、
３５５−３５９並びに、モレキュラー アンド バイオ
ケミカル パラシトロジー、ディス−他、１６ （１９
８５）、ｐ、２７７−２８８）。
従って、本発明によれば、更に、その活性成分が前述の
ようにして同定されたグリコプロティン及び／又はグリ
カンであることを特徴とするマンソン住血吸虫に対する
感染防御血清、免疫組成物、ワクチン、免疫感作剤、及
び診断剤が得られる。
ようにして同定されたグリコプロティン及び／又はグリ
カンであることを特徴とするマンソン住血吸虫に対する
感染防御血清、免疫組成物、ワクチン、免疫感作剤、及
び診断剤が得られる。
本発明によれば、更に、前述のグリコプロティンの製造
方法であって、メガトゥーラ クレヌラータのヘモシア
ニンを少なくとも一回のプロナーゼによる蛋白質分解処
理に供し、分解生成物をエタノールの如き適切な析出材
を使用する析出処理により単離する前記グリコプロティ
ンの製造方法が得られる。
方法であって、メガトゥーラ クレヌラータのヘモシア
ニンを少なくとも一回のプロナーゼによる蛋白質分解処
理に供し、分解生成物をエタノールの如き適切な析出材
を使用する析出処理により単離する前記グリコプロティ
ンの製造方法が得られる。
本発明方法の好ましい一実施態様においては、析出によ
って単離された分解生成物は、適切な精製処理、好まし
くはゲル濾過クロマトグラフィーに供され、次いで、主
ピークを有する溶出フラクションが析出により単離され
、精製されたグリコペプチドフラクションが得られる。
って単離された分解生成物は、適切な精製処理、好まし
くはゲル濾過クロマトグラフィーに供され、次いで、主
ピークを有する溶出フラクションが析出により単離され
、精製されたグリコペプチドフラクションが得られる。
この様にして単離されたグリコシド類の組成は、既に述
べたように、ガスクロマトグラフィーと質量分析法とを
組み合わせて、定性的及び定量的に決定された。
べたように、ガスクロマトグラフィーと質量分析法とを
組み合わせて、定性的及び定量的に決定された。
本発明によれば、０−グリコシドで結合されたグリカン
は、β脱離法によりオリゴサツカライド−糖アルコール
（ｏｌ ｉｇｏｓａｃｃｈａｒｉｄｅ−ａｌｄｉｔｏｌ
ｓ）の形態で解放され、Ｎ−グリコシド結合は、影響さ
れない。
は、β脱離法によりオリゴサツカライド−糖アルコール
（ｏｌ ｉｇｏｓａｃｃｈａｒｉｄｅ−ａｌｄｉｔｏｌ
ｓ）の形態で解放され、Ｎ−グリコシド結合は、影響さ
れない。
反応は、プロナーゼ性グリコペプチド（ｐ ｒ 。
ｎａｓＬｃ ｇｌｙｃｏｐｅｐｔｉｄｅｓ）９３ｍｇ
上で行われる。
上で行われる。
β脱離法により最終的に得られる溶液は、水中で平衡化
されたバイオゲル（Ｂｉｏｇｅｌ） Ｐ２ カラム上
で分画される。バイオゲル Ｐ２の排除分子量、１８０
０Ｄを超えるアルカリ安定糖ペプチドは、カラムの死容
積で溶出され、一方０−グリカン類は、溶出遅れとなる
。
されたバイオゲル（Ｂｉｏｇｅｌ） Ｐ２ カラム上
で分画される。バイオゲル Ｐ２の排除分子量、１８０
０Ｄを超えるアルカリ安定糖ペプチドは、カラムの死容
積で溶出され、一方０−グリカン類は、溶出遅れとなる
。
溶出フラクションの決定は、薄層クロマトグツフィーに
より行われる。この様にして、４つのフラクションが単
離され、その内のフラクションＡは、主たる部分を占め
、アルカリ安定オリゴペプ千ド類に対応する。
より行われる。この様にして、４つのフラクションが単
離され、その内のフラクションＡは、主たる部分を占め
、アルカリ安定オリゴペプ千ド類に対応する。
このフラクションＡは、Ｃｏｎ Ａ ５ｅｐｈａｒ
ｏｓｅ ４Ｂのカラム上で３つのサブフラクションＡ
１、Ａ２及びＡ３に分離され、この内でサブフラクショ
ンＡ１のみが、フラクションＡに匹敵する生物学的活性
を維持している。メガトゥーラ クレヌターラのヘモシ
アニンから単離されたこのサブフラクションＡ１は、以
下の式により示される： ＜ リ ： 口 一 リ ゴ 前記の如く同定されたメガトゥーラ クレヌターラのヘ
モシアニンから抽出されたグリコペプチド性のフラクシ
ョンの抗原活性並びに、式Ｉ〜■の一次構造のいずれか
一つに対応する合成グリカン類の抗原活性を前述の阻害
テスト法により評価した。
ｏｓｅ ４Ｂのカラム上で３つのサブフラクションＡ
１、Ａ２及びＡ３に分離され、この内でサブフラクショ
ンＡ１のみが、フラクションＡに匹敵する生物学的活性
を維持している。メガトゥーラ クレヌターラのヘモシ
アニンから単離されたこのサブフラクションＡ１は、以
下の式により示される： ＜ リ ： 口 一 リ ゴ 前記の如く同定されたメガトゥーラ クレヌターラのヘ
モシアニンから抽出されたグリコペプチド性のフラクシ
ョンの抗原活性並びに、式Ｉ〜■の一次構造のいずれか
一つに対応する合成グリカン類の抗原活性を前述の阻害
テスト法により評価した。
前述の用途以外にも、本発明のＫＬＨの蛋白質分解生成
物から単離されたグリコペプチド類、ＫＬＨの化学的又
は酵素的加水分解により放出された或いは有機合成によ
り製造されたグリカン類は、これらグリコペプチド類又
はグリカン類と天然または合成ペプチドとの縮合による
新たな糖蛋白質（ネオグリコプロティン）の製造に使用
可能である。
物から単離されたグリコペプチド類、ＫＬＨの化学的又
は酵素的加水分解により放出された或いは有機合成によ
り製造されたグリカン類は、これらグリコペプチド類又
はグリカン類と天然または合成ペプチドとの縮合による
新たな糖蛋白質（ネオグリコプロティン）の製造に使用
可能である。
上記方法の好ましい実施態様においては、グリコペプチ
ド類またはグリカン類と適当なペプチド類との縮合は、
オリゴサツカライドと蛋白質とのカプリングにより行わ
れる。
ド類またはグリカン類と適当なペプチド類との縮合は、
オリゴサツカライドと蛋白質とのカプリングにより行わ
れる。
上記方法の他の好ましい実施態様においては、ネオグリ
コプロティンの製造は、グリコペプチド類と蛋白質との
カプリングにより、行われる。
コプロティンの製造は、グリコペプチド類と蛋白質との
カプリングにより、行われる。
本発明方法によりグリカン類と縮合され得るペプチドと
しては、破傷風 アナトキシン（ｔｅｔａｎｉｃ ａ
ｎａｔｏｘｉｎ）及び／又は２８ＫＤａ蛋白質から得ら
れる合成ペプチドが挙げられる。
しては、破傷風 アナトキシン（ｔｅｔａｎｉｃ ａ
ｎａｔｏｘｉｎ）及び／又は２８ＫＤａ蛋白質から得ら
れる合成ペプチドが挙げられる。
この様にして得られるネオグリコプロティンは、単一の
化学構造中に二つの相補的抗原活性、即ち、本発明によ
るグリカンの抗原活性と該グリカンと組み合わされたペ
プチドフラクションの抗原活性とを兼ね備えているとい
う利点を有する。
化学構造中に二つの相補的抗原活性、即ち、本発明によ
るグリカンの抗原活性と該グリカンと組み合わされたペ
プチドフラクションの抗原活性とを兼ね備えているとい
う利点を有する。
本発明は以下の記載からよりよく理解されるであろう。
以下の記載は、ＫＬＨからの抽出による本発明のグリカ
ンの製造例、該グリカンの抗原活性の試験例及び本発明
のネオグリコプロティンの製造例を示すものである。
ンの製造例、該グリカンの抗原活性の試験例及び本発明
のネオグリコプロティンの製造例を示すものである。
しかしながら、これ等製造例、試験例は、本発明を説明
するためのものであって、本発明を限定するものではな
い。
するためのものであって、本発明を限定するものではな
い。
実施例 Ｉ
ＫＬＨからの抽出による本発明のグリコペプチドの製造
１、メガトウーラ・クレヌラータのヘモニジアン（Ｋ
Ｌ Ｈ）とプロナーゼとを酵素／基質比が１１５０のオ
ーダーとなるように接触させ、該ＫＬＨの蛋白質加水分
解（ｐｒｏｔｅｏｌｙｓｉｓ ）を行なう。
Ｌ Ｈ）とプロナーゼとを酵素／基質比が１１５０のオ
ーダーとなるように接触させ、該ＫＬＨの蛋白質加水分
解（ｐｒｏｔｅｏｌｙｓｉｓ ）を行なう。
該反応は、４０℃の温度下、ｐＨ８，２にて４８時間行
なう。加水分解生成物をエタノールによる沈澱により単
離する。
なう。加水分解生成物をエタノールによる沈澱により単
離する。
上記蛋白質加水分解に続いて沈澱させる操作を２回繰り
返す。
返す。
２、第３回目の蛋白質加水分解終了後に得られた最終生
成物を、［バイオゲル（Ｂｉｏｇｅｌ ） Ｊ Ｐ−２
上でのゲル濾過クロマトグラフィーにより精製する。
成物を、［バイオゲル（Ｂｉｏｇｅｌ ） Ｊ Ｐ−２
上でのゲル濾過クロマトグラフィーにより精製する。
３、主ピーク（ｍａｊｏｒ ｐｅａｋ）として溶出され
た生成物には、単ペプチド鎖に尚結合している活性グリ
カンが含まれている。
た生成物には、単ペプチド鎖に尚結合している活性グリ
カンが含まれている。
そのグルシド組成をガスクロマトグラフィー及びマスス
ペクトロメトリーにて測定する。
ペクトロメトリーにて測定する。
また、その抗原活性を、前記フランス国特許出願第８６
０６２８１号記載のＫＬＨ及び抗原３８ＫＤについての
方法に従い、グリカンへのモノクローナル抗体ＩＰＬ
Ｓｍｌの固定の阻害についての放射免疫手法により測
定する。
０６２８１号記載のＫＬＨ及び抗原３８ＫＤについての
方法に従い、グリカンへのモノクローナル抗体ＩＰＬ
Ｓｍｌの固定の阻害についての放射免疫手法により測
定する。
実施例 ２
ＫＬＨからのまたはＫＬＨグリコペプチドからの抽出に
よる本発明のグリカンの製造 Ｎ−グリコシド的（Ｎ −ｇｌｙｃｏｓｉｄｌｃａｌｌ
ｙ）に結合したグリカンを、リー（Ｌ ｅｅ）及びスコ
ツ力（Ｓ ｃｏｃｃａ ）の方法〔ジャーナル・オブ・
バイオロジカル・ケミストリー（Ｊ、 Ｂｉｏｌ 、
Ｃｈｅｍ、、 ）２４７ （１９７２）５７５３−
５７５８）により遊離させる： ＫＬＨまたはそのグリ
コペプチドのＮａＯＨＭ ＫＢＨｚ溶液を１００℃に
６時間保持する。該反応を、ｐＨ４となるまでギ酸を０
℃にて添加することによって停止させる。グルシド フ
ラクション（ｇｌｕｃｉｄｉｃ ｆｒａｃｔｉｏｎ）
をバイオゲル（Ｂｉｏｇｅｔ ） Ｐ−２上でのゲル濾
過により精製する。溶出は水により行なう。飽和重炭酸
ナトリウム溶液中でのオリゴサツカライドのＮ−再アセ
チル化を、無水酢酸を用いてこれを２時間作用させるこ
とにより行なう。次いでグルシドフラクションを、バイ
オゲルＰ−２上でのクロマトグラフィーにて精製する。
よる本発明のグリカンの製造 Ｎ−グリコシド的（Ｎ −ｇｌｙｃｏｓｉｄｌｃａｌｌ
ｙ）に結合したグリカンを、リー（Ｌ ｅｅ）及びスコ
ツ力（Ｓ ｃｏｃｃａ ）の方法〔ジャーナル・オブ・
バイオロジカル・ケミストリー（Ｊ、 Ｂｉｏｌ 、
Ｃｈｅｍ、、 ）２４７ （１９７２）５７５３−
５７５８）により遊離させる： ＫＬＨまたはそのグリ
コペプチドのＮａＯＨＭ ＫＢＨｚ溶液を１００℃に
６時間保持する。該反応を、ｐＨ４となるまでギ酸を０
℃にて添加することによって停止させる。グルシド フ
ラクション（ｇｌｕｃｉｄｉｃ ｆｒａｃｔｉｏｎ）
をバイオゲル（Ｂｉｏｇｅｔ ） Ｐ−２上でのゲル濾
過により精製する。溶出は水により行なう。飽和重炭酸
ナトリウム溶液中でのオリゴサツカライドのＮ−再アセ
チル化を、無水酢酸を用いてこれを２時間作用させるこ
とにより行なう。次いでグルシドフラクションを、バイ
オゲルＰ−２上でのクロマトグラフィーにて精製する。
０−グリコシド的（０−ｇｌｙｃｏｓｌｄｉｃａｌ Ｉ
ｙ）に結合したグリカンは、０．１Ｍ ＮａＯＨ−Ｉ
ＭＫＢＨ，の存在下、４５℃にて２４時間行なわれるナ
トリウム攻撃（ｓｏｄｉｃ ａｔｔａｃｋ）の条件を用
いる以外は前記と同様の方法に従いＫＬＨ又はそれから
誘導されたグリコペプチドを処理することによりβ−説
離により特異的に遊離される。
ｙ）に結合したグリカンは、０．１Ｍ ＮａＯＨ−Ｉ
ＭＫＢＨ，の存在下、４５℃にて２４時間行なわれるナ
トリウム攻撃（ｓｏｄｉｃ ａｔｔａｃｋ）の条件を用
いる以外は前記と同様の方法に従いＫＬＨ又はそれから
誘導されたグリコペプチドを処理することによりβ−説
離により特異的に遊離される。
実施例 ３
本発明のグリカンの抗原活性特性試験
この固相での放射線免疫的手法は、異なる抗体又は抗原
性組成物により、ヨウ素１２５で標識化されたＩ ＰＬ
Ｓｍｌ抗体のその標的抗原への固定を阻害することに基
づくものである。
性組成物により、ヨウ素１２５で標識化されたＩ ＰＬ
Ｓｍｌ抗体のその標的抗原への固定を阻害することに基
づくものである。
ａ）固相の製造
各ポリビニルプレート槽（ａｌｖｅｏｌｅ 、以下「ウ
ェル」という）を、Ｃ３１０９モノクローナル抗体（Ｉ
ＰＬＳｍｌ抗体のエピトープと交差反応しないＩｇＭア
イソタイプの抗マンソン住血吸虫抗体）の１０μｇ／ｍ
Ｑ溶液１００μＱで処理する。
ェル」という）を、Ｃ３１０９モノクローナル抗体（Ｉ
ＰＬＳｍｌ抗体のエピトープと交差反応しないＩｇＭア
イソタイプの抗マンソン住血吸虫抗体）の１０μｇ／ｍ
Ｑ溶液１００μＱで処理する。
この方法によって、その後の３”８ Ｋ Ｄ抗原の固定
が可能になる。２０℃で２時間接触させた後、プレート
をウシ血清アルブミン（ＢＳＡ）０．１％を含有する１
０ｍＭ燐酸緩衝液２００μＱで３回洗い、燐酸緩衝液中
の２％ＢＳＡ溶液２００μＱにより２０℃で３０分間飽
和させる。次にプレートを０．１％ＢＳＡ含有１０ｍＭ
燐酸緩衝溶液で３回洗い、７’イス−（ＤＩ ５ＳＯＵ
Ｓ）らがＭｏｌ 、 Ｂ １ｏｃｈｅｍ。
が可能になる。２０℃で２時間接触させた後、プレート
をウシ血清アルブミン（ＢＳＡ）０．１％を含有する１
０ｍＭ燐酸緩衝液２００μＱで３回洗い、燐酸緩衝液中
の２％ＢＳＡ溶液２００μＱにより２０℃で３０分間飽
和させる。次にプレートを０．１％ＢＳＡ含有１０ｍＭ
燐酸緩衝溶液で３回洗い、７’イス−（ＤＩ ５ＳＯＵ
Ｓ）らがＭｏｌ 、 Ｂ １ｏｃｈｅｍ。
Ｐ ａｒａｓｉｔｏｌ、（１９８１年）、３巻２１５〜
２２５頁に記載している方法で得た幼若住血吸虫の膜抽
出液１００μＱで処理する（各ウェル当り１００μｇ
／ ｍＱの抗原溶液１００μΩ）。３７℃で２時間培養
し、０．１％ＢＳＡ含有１０ｍＭ燐酸緩衝液２００μＱ
で３回洗ったのち、プレートを阻害反応に供する。
２２５頁に記載している方法で得た幼若住血吸虫の膜抽
出液１００μＱで処理する（各ウェル当り１００μｇ
／ ｍＱの抗原溶液１００μΩ）。３７℃で２時間培養
し、０．１％ＢＳＡ含有１０ｍＭ燐酸緩衝液２００μＱ
で３回洗ったのち、プレートを阻害反応に供する。
ｂ）阻害反応
＋２５Ｉ標識ＩＰＬＳｍｌ抗体５０ｔｔＱ （５０ｔｔ
Ｑ中１０１０００００ｃｐと、ＫＬＨオリゴサツカラ
イド、天然ＫＬＨの各種抗原性フラクション（０，０２
℃ｇ／ウェルで５０）又は脱グリコジル化ＫＬＨ対照物
（ＤＫＬＨ） 、冷Ｉ ＰＬＳｍ１抗体（ｃｏｌｄ
Ｉ Ｐ Ｌ Ｓ ｍ １ ａｎｔｉｂｏｄｙ）を３７
℃で１時間、次いで４°Ｃで一夜インキユベートする。
Ｑ中１０１０００００ｃｐと、ＫＬＨオリゴサツカラ
イド、天然ＫＬＨの各種抗原性フラクション（０，０２
℃ｇ／ウェルで５０）又は脱グリコジル化ＫＬＨ対照物
（ＤＫＬＨ） 、冷Ｉ ＰＬＳｍ１抗体（ｃｏｌｄ
Ｉ Ｐ Ｌ Ｓ ｍ １ ａｎｔｉｂｏｄｙ）を３７
℃で１時間、次いで４°Ｃで一夜インキユベートする。
次いで、プレートを０．１％ＢＳＡ含有１０ｍＭ燐酸緩
衝液で３回洗い、それぞれのウェルをガンマ−カウンタ
ーでカウントした。
衝液で３回洗い、それぞれのウェルをガンマ−カウンタ
ーでカウントした。
Ｃ）結果の表現
抗体ＩＰＬＳｍｌ固定阻害率（％）を、０．１％ＢＳＡ
含有１０ｍＭ燐酸緩衝液５０μΩの存在下に標識ＰＩＬ
Ｓｍｌ ５０μＱを培養した陰性対照と比較して評価
する。結果を第１図に示す。
含有１０ｍＭ燐酸緩衝液５０μΩの存在下に標識ＰＩＬ
Ｓｍｌ ５０μＱを培養した陰性対照と比較して評価
する。結果を第１図に示す。
この固相での放射線免疫的手法は、Ｉ ＰＬＳｍ１抗体
のその３８ＫＤ抗原標的への固定阻害を評価する方法に
直接ヒントを得てのものである。この特別な場合には、
固相は、前も、ってＫＬＨで処理されたポリビニルプレ
ートによって構成される。
のその３８ＫＤ抗原標的への固定阻害を評価する方法に
直接ヒントを得てのものである。この特別な場合には、
固相は、前も、ってＫＬＨで処理されたポリビニルプレ
ートによって構成される。
ａ）固相
ポリビニルプレートの各ウェルを、０．１％ＢＳ’Ａ含
有１０ｍＭ燐酸緩衝液中の１ＯｕＱ／ｍｆ２ＫＬＨ溶液
１００μＱにより２０℃で２時間処理する。次にプケレ
ートを０．１％ＢＳＡ含有１０ｍＭ燐酸緩衝液で３回洗
い、１０ｍＭ燐酸緩衝液中の２％ＢＳＡ溶液で２０℃に
て３０分間飽和させる（ウェル当り２００μＱ）。０．
１％ＢＳＡ含有１０ｍＭ燐酸緩衝液（ウェル当り２００
μＱ）で３回洗って過剰のＢＳＡを除去する。
有１０ｍＭ燐酸緩衝液中の１ＯｕＱ／ｍｆ２ＫＬＨ溶液
１００μＱにより２０℃で２時間処理する。次にプケレ
ートを０．１％ＢＳＡ含有１０ｍＭ燐酸緩衝液で３回洗
い、１０ｍＭ燐酸緩衝液中の２％ＢＳＡ溶液で２０℃に
て３０分間飽和させる（ウェル当り２００μＱ）。０．
１％ＢＳＡ含有１０ｍＭ燐酸緩衝液（ウェル当り２００
μＱ）で３回洗って過剰のＢＳＡを除去する。
ｂ）阻害反応
本実施例の上記１に記載したＩＰＬＳｍｌ抗体のその３
８ＫＤ抗原への固定阻害試験の場合と同一の条件下に行
ない、その結果を第２図に示す。
８ＫＤ抗原への固定阻害試験の場合と同一の条件下に行
ない、その結果を第２図に示す。
実施例 ４
本発明のネオグリコプロティンの製造
■ オリゴサツカライドと蛋白質とのカップリングによ
る方法 オリゴサツカライド−蛋白質カップリング反応は、下記
実験操作により行なうことができ、使用蛋白質はテタヌ
ス性アナトキシン（ｔｅｔａｎｉｃａｎａｔｏｘｉｎ）
であってもよいし、また３８ＫＤ抗原の合成ペプチドフ
ラグメントであってもよい。
る方法 オリゴサツカライド−蛋白質カップリング反応は、下記
実験操作により行なうことができ、使用蛋白質はテタヌ
ス性アナトキシン（ｔｅｔａｎｉｃａｎａｔｏｘｉｎ）
であってもよいし、また３８ＫＤ抗原の合成ペプチドフ
ラグメントであってもよい。
１）グレイ（Ｇｒａｙ）の方法〔グレイ・ジー・アール
（Ｇｒａｙ ｃ、Ｒｏ） 、メゾッズ・イン・エンザイ
モロジ−（Ｍｅｔｈｏｄｓ ｉｎ Ｅｎｚｙｍｏｌｏｇ
ｙ ）、１９７９、コロウィック（Ｃｏｌｏｗｉｃｋ
）及びカブラン（Ｋａｐｌａｎ ）編、アカデミツク・
プレス（Ａ ｃａｄ、 Ｐ ｒｅｓｓ） 、第１５５−
１６２頁〕本方法の原理は、ナトリウム シアノボロハ
イドライドが、オリゴサツカライドと第一級アミンとの
縮合により生ずるシッフ塩基を容易に還元する一方でカ
ルボニル官能基に影響を与えないという事実に基づくも
のである。
（Ｇｒａｙ ｃ、Ｒｏ） 、メゾッズ・イン・エンザイ
モロジ−（Ｍｅｔｈｏｄｓ ｉｎ Ｅｎｚｙｍｏｌｏｇ
ｙ ）、１９７９、コロウィック（Ｃｏｌｏｗｉｃｋ
）及びカブラン（Ｋａｐｌａｎ ）編、アカデミツク・
プレス（Ａ ｃａｄ、 Ｐ ｒｅｓｓ） 、第１５５−
１６２頁〕本方法の原理は、ナトリウム シアノボロハ
イドライドが、オリゴサツカライドと第一級アミンとの
縮合により生ずるシッフ塩基を容易に還元する一方でカ
ルボニル官能基に影響を与えないという事実に基づくも
のである。
ＲＩ ＣＨ２ＮＨＲ２
実験プロトコールは、下記工程を含む：０．５μモルの
蛋白質（ｐｒｏｔｌｄｅ ） 、１５０ ａモルのオリ
ゴサツカライド及び０．８ミリモルのナトリウム シア
ノボロハイドライドを０．２Ｍリン酸カリウム緩衝液（
ｐＨ８）２．’５ｍ１２に溶解させ、この溶液を３７℃
に１０日間保持する。
蛋白質（ｐｒｏｔｌｄｅ ） 、１５０ ａモルのオリ
ゴサツカライド及び０．８ミリモルのナトリウム シア
ノボロハイドライドを０．２Ｍリン酸カリウム緩衝液（
ｐＨ８）２．’５ｍ１２に溶解させ、この溶液を３７℃
に１０日間保持する。
次いで、該溶液を蒸留水に対し透析し、次いでバイオゲ
ル（Ｂｉｏ−ｇｅｌ ） Ｐ−６上でのクロマトグラフ
ィーに付す。
ル（Ｂｉｏ−ｇｅｌ ） Ｐ−６上でのクロマトグラフ
ィーに付す。
蛋白質に結合したオリゴサツカライド残基の数を、比色
定量分析により測定する。その数は、−般に、蛋白質分
子当り１５〜２０グリカンのオーダーで得る。
定量分析により測定する。その数は、−般に、蛋白質分
子当り１５〜２０グリカンのオーダーで得る。
２）ゾップフ（Ｚｏｐｆ）らの方法〔ゾップフ・デイ−
・ニー（Ｚｏｐｆ 、 Ｄ、Ａ、） 、ツァイ・シー・
エム（Ｔｓａｉ Ｃ−Ｍ）及びギンスバーグ・ヴイ（Ｇ
ｉｎｓｂｕｒｇ、Ｖ、 ） 、メソッズ・イン・エンザ
イモロジー（Ｍｅｔｈｏｄｓ ｉｎ Ｅｎｚｙｍｏ
ｌｏｇｙ）１９７８ ：ｌＣ７ウィック（Ｃｏｌｏｗ
ｌｃｋ ）及びカブラン（Ｋａｐｌａｎ ） ’Ｉｌａ
、アカデミツク・プレス（Ａｃａｄ 、 Ｐｒｅｓｓ）
、第１６３−１６９頁〕この方法は、基質が少量の場
合に適用できるという利点がある。オリゴサツカライド
は、まず、ナトリウム ボロハイドライドの存在下にβ
−（ｐ−アミノフェニル）エチルアミンに結合される。
・ニー（Ｚｏｐｆ 、 Ｄ、Ａ、） 、ツァイ・シー・
エム（Ｔｓａｉ Ｃ−Ｍ）及びギンスバーグ・ヴイ（Ｇ
ｉｎｓｂｕｒｇ、Ｖ、 ） 、メソッズ・イン・エンザ
イモロジー（Ｍｅｔｈｏｄｓ ｉｎ Ｅｎｚｙｍｏ
ｌｏｇｙ）１９７８ ：ｌＣ７ウィック（Ｃｏｌｏｗ
ｌｃｋ ）及びカブラン（Ｋａｐｌａｎ ） ’Ｉｌａ
、アカデミツク・プレス（Ａｃａｄ 、 Ｐｒｅｓｓ）
、第１６３−１６９頁〕この方法は、基質が少量の場
合に適用できるという利点がある。オリゴサツカライド
は、まず、ナトリウム ボロハイドライドの存在下にβ
−（ｐ−アミノフェニル）エチルアミンに結合される。
得られるオリゴサツカライド−フェネチルアミンは、次
にジアゾ化合物により蛋白質に結合される。
にジアゾ化合物により蛋白質に結合される。
ａ）オリゴサツカライド−フェネチルアミンの製造
オリゴサツカライド１０ｍｇをβ−（ｐ−アミノフェニ
ル）エチルアミン０． １１１１１２に添加し、得られ
た溶液を封管中室温下で１５時間攪拌する。
ル）エチルアミン０． １１１１１２に添加し、得られ
た溶液を封管中室温下で１５時間攪拌する。
ナトリウム ボロハイドライド３ｍｇを含有するアルコ
ール０．２−を添加してアルキルグリコシドを得、次い
で、これをバイオゲルＰ−２上でのクロマトグラフィー
により単離する。
ール０．２−を添加してアルキルグリコシドを得、次い
で、これをバイオゲルＰ−２上でのクロマトグラフィー
により単離する。
水２戒中に１０μモルのオリゴサツカライド−フェネチ
ルアミンを溶解させた溶液に、０．ＩＮＨＣＱｏ、８ｍ
Ｑ及び亜硝酸ナトリウム２ｍｇ／ｍ１２の溶液０．６−
を順次添加する。
ルアミンを溶解させた溶液に、０．ＩＮＨＣＱｏ、８ｍ
Ｑ及び亜硝酸ナトリウム２ｍｇ／ｍ１２の溶液０．６−
を順次添加する。
３０分間反応後、混合物を、０．０５ＮＮａＯＨ中に蛋
白質を溶解させた溶液（０，８μモル）６醇に徐々に添
加する。４時間反応後、カップリング生成物を透析し、
次いでバイオ−ゲルＰ−６上で精製する。
白質を溶解させた溶液（０，８μモル）６醇に徐々に添
加する。４時間反応後、カップリング生成物を透析し、
次いでバイオ−ゲルＰ−６上で精製する。
糖：蛋白質比は、１５〜２０となる。
■、グリコペプチドと蛋白質とのカップリングによる方
法 蛋白質１００ｍｇをｐＨ９，５のホウ酸塩緩衝液１０ｍ
Ｑに溶解させる。０℃に冷却後、この溶液にトルエン−
２，４−ジイソシアネート（ＴＤ Ｉ Ｃ）０、 ２１
１１Ｑを添加する。この混合物を０℃にて３０分間攪拌
し、４℃で一夜放置し、遠心分離により過剰のＴＤＩＣ
を沈澱させる。
法 蛋白質１００ｍｇをｐＨ９，５のホウ酸塩緩衝液１０ｍ
Ｑに溶解させる。０℃に冷却後、この溶液にトルエン−
２，４−ジイソシアネート（ＴＤ Ｉ Ｃ）０、 ２１
１１Ｑを添加する。この混合物を０℃にて３０分間攪拌
し、４℃で一夜放置し、遠心分離により過剰のＴＤＩＣ
を沈澱させる。
上清を集め、更に０℃で１時間攪拌し、必要に応じ遠心
分離し、次いでグリコペプチド１０〜２０マイクロモル
を含有するｐＨ９，５のホウ酸塩緩衝液１０或に添加す
る。この混合物を３７℃にて１時間攪拌し、０．１Ｍ炭
酸アンモニウムに対して透析しく４８時間）、次いで蒸
留水に対して透析し、凍結乾燥する。
分離し、次いでグリコペプチド１０〜２０マイクロモル
を含有するｐＨ９，５のホウ酸塩緩衝液１０或に添加す
る。この混合物を３７℃にて１時間攪拌し、０．１Ｍ炭
酸アンモニウムに対して透析しく４８時間）、次いで蒸
留水に対して透析し、凍結乾燥する。
蛋白質に結合したグリコペプチドの量をグリシドの比色
定量分析により測定する。
定量分析により測定する。
この方法は、シック・ニー・エフ（Ｓｃｈｉｃｋ Ａ。
Ｆ、）及びシンガー・ニス・ジエイ（Ｓｉｎｇｅｒ Ｓ
。
。
Ｊ、）〔ジャーナル・オブ・バイオロジカル・ケミスト
リー（Ｊ、 Ｂｉｏｌ、Ｃｈｅｍ、） ２３６ （１
９６１） 、２４７７−２４８５３の方法から採用され
たものである。
リー（Ｊ、 Ｂｉｏｌ、Ｃｈｅｍ、） ２３６ （１
９６１） 、２４７７−２４８５３の方法から採用され
たものである。
第１図は、実施例３で得られた各生成物による抗体３８
ＫＤ抗原に対する抗体Ｉ ＰＬＳｍｌの固定阻害能（％
）を示すグラフ、第２図は、ＫＬＨに対する同様の結果
を示すグラフである。 （以 上）
ＫＤ抗原に対する抗体Ｉ ＰＬＳｍｌの固定阻害能（％
）を示すグラフ、第２図は、ＫＬＨに対する同様の結果
を示すグラフである。 （以 上）
Claims (19)
- （１）メガトウーラクレヌラータの如き軟体動物のヘモ
シアニン（ＫＬＨ）から抽出されたグリコプロテインで
あって、そのグルシド性フラクションがグリコプロテイ
ン分子の５〜５．２５％を占め、該グルシド性フラクシ
ョンのモル組成（３マンノース残基を基準として）が実
質的に下記の通りであるグリコプロテイン： ▲数式、化学式、表等があります▼ ▲数式、化学式、表等があります▼ - （２）特許請求の範囲第１項に記載のグリコプロテイン
から単離されたグリコペプチドフラクションであって、
蛋白質分解によりＫＬＨから抽出された後、ゲル濾過ク
ロマトグラフィーによる加水分解生成物の精製により得
られ、そのグルシドとしての組成（３マンノース残基を
基準として）が実質的に以下の通りであるグリコペプチ
ドフラクション： ▲数式、化学式、表等があります▼ ▲数式、化学式、表等があります▼ - （３）特許請求の範囲第１項に記載のＫＬＨから単離さ
れたグリカン性フラクションであって、ＫＬＨまたはそ
のグリコペプチドのアルカリ処理及びＮ−アセチル化並
びにバイオゲルＰ−２上での精製により得られるグリカ
ン性フラクション。 - （４）特許請求の範囲第３項に記載のグリカン性フラク
ション及びマンソン住血吸虫の３８ＫＤ抗原のグリカン
に実質的に等しく、下記に示す一次構造の少なくとも一
つを含むことを特徴とする合成グリカン： ￥Ｎ−グリコシル蛋白質のグリカン類￥ ▲数式、化学式、表等があります▼（ I ） ▲数式、化学式、表等があります▼（II） ▲数式、化学式、表等があります▼（III） ▲数式、化学式、表等があります▼（IV） ▲数式、化学式、表等があります▼（Ｖ） - （５）フコース、ガラクトース、キシロース、マンノー
ス、Ｎ−アセチルグルコサミン及びＮ−アセチルガラク
トサミンからなり、下記の一次構造を有するグリカン： ▲数式、化学式、表等があります▼（VI） - （６）３８ＫＤ分子の特異的モノクローナル抗体により
認識される特許請求の範囲第１項に記載のグリカン。 - （７）特許請求の範囲第１項に記載のグリコプロテイン
フラクション又は特許請求の範囲第２項乃至第６項のい
づれかに記載のグリカン性エピトープにより免疫化され
た動物の血清により構成されるマンソン住血吸虫に対す
る感染防御血清。 - （８）活性物質として、特許請求の範囲第１項に記載の
グリコプロテインフラクション又は特許請求の範囲第２
項乃至第６項のいづれかに記載のグリカン性エピトープ
の有効量を含有し、好ましくは適当なアジュバントを更
に含有する免疫源。 - （９）活性物質として、特許請求の範囲第１項に記載の
グリコプロテインフラクション又は特許請求の範囲第２
項乃至第６項のいづれかに記載のグリカン性エピトープ
の有効量を含有するビルハルツ住血吸虫に対するワクチ
ン。 - （１０）特許請求の範囲第１項に記載のグリコプロテイ
ンフラクション又は特許請求の範囲第２項乃至第４項の
いづれかに記載のグリカンエピトープに対する、モノク
ローナル抗マンソン住血吸虫の特異的抗イディオタイプ
抗体のカプリングにより形成された免疫源。 - （１１）特許請求の範囲第１項に記載のグリコプロテイ
ン又は特許請求の範囲第２項乃至第４項のいずれかに記
載のそのグリカン性エピトープを有効成分とするビルハ
ルツ住血吸虫症診断試薬。 - （１２）特許請求の範囲第１項に記載のグリコプロテイ
ン又は特許請求の範囲第２項乃至第４項のいずれかに記
載のそのグリカン性エピトープを使用するネオグリコプ
ロテインの製造方法。 - （１３）メガトウーラクレヌラータのヘモニシアンをプ
ロナーゼを使用する少なくとも１回の蛋白質分解に供し
た後、析出剤を使用する析出処理により分解生成物を精
製する特許請求の範囲第１項に記載のグリコプロテイン
の製造方法。 - （１４）特許請求の範囲第１３項に記載の方法により精
製された分解生成物をゲル濾過クロマトグラフィーによ
る精製工程に供した後、主ピークを有する溶出フラクシ
ョンを析出せしめて、精製されたグリコペプチド性フラ
クションを得る特許請求の範囲第２項に記載のグリコペ
プチドの製造方法。 - （１５）ＫＬＨ又はそのグリコペプチドのアルカリ加水
分解を行なった後、Ｎ−アシル化及びモレキュラーシー
ブを使用するクロマトグラフィーによる精製を行なう特
許請求の範囲第３項に記載のグリカンの製造方法。 - （１６）特許請求の範囲第２項、第３項又は第４項に記
載のグリコペプチド又はグリカンをこれ等の活性と相補
性のある抗原活性を有する天然又は合成ペプチドと縮合
させる特許請求の範囲第１２項に記載のネオグリコプロ
テインの製造方法。 - （１７）グリコペプチド又はグリカンとペプチドとの縮
合をカプリングにより行なう特許請求の範囲第１６項に
記載の方法。 - （１８）ペプチドが、破傷風アナトキシン及びプロテイ
ン２８ＫＤから得られた合成ペプチドの少くとも１つで
ある特許請求の範囲第１６項又は第１７項に記載の方法
。 - （１９）特許請求の範囲第１６項乃至第１８項に記載の
方法のいずれかを使用して特許請求の範囲第１２項の方
法により得られたネオグリコプロテイン。
Applications Claiming Priority (2)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| FR8609842 | 1986-07-07 | ||
| FR8609842A FR2601021B2 (fr) | 1986-07-07 | 1986-07-07 | Fraction immunogene active a l'egard des bilharzioses, sa preparation, compositions immunisantes la contenant |
Publications (1)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| JPH01139533A true JPH01139533A (ja) | 1989-06-01 |
Family
ID=9337146
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| JP62170820A Pending JPH01139533A (ja) | 1986-07-07 | 1987-07-07 | ビルハルツ住血吸虫に対する活性を有する免疫抗原フラクション、その製造方法及び該フラクションを含有する免疫剤 |
Country Status (10)
| Country | Link |
|---|---|
| US (1) | US5021560A (ja) |
| EP (1) | EP0252829A1 (ja) |
| JP (1) | JPH01139533A (ja) |
| KR (1) | KR880001703A (ja) |
| AU (1) | AU7528087A (ja) |
| DK (1) | DK347987A (ja) |
| FR (1) | FR2601021B2 (ja) |
| OA (1) | OA08630A (ja) |
| PT (1) | PT85278B (ja) |
| ZA (1) | ZA874920B (ja) |
Cited By (1)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| JP2002538220A (ja) * | 1999-03-12 | 2002-11-12 | ユニバーシティー オブ マサチューセッツ | リポグリカン組成物、および寄生生物感染症の治療方法 |
Families Citing this family (5)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| US6929807B1 (en) * | 1996-08-09 | 2005-08-16 | Mannatech, Inc. | Compositions of plant carbohydrates as dietary supplements |
| CA2365451A1 (en) | 1999-03-17 | 2000-09-21 | Biosyn Arzneimittel Gmbh | Nucleic acid molecule comprising a nucleic acid sequence coding for a hemocyanin |
| DE19939578A1 (de) | 1999-08-20 | 2001-02-22 | Biosyn Arzneimittel Gmbh | Nukleinsäuremolekül, umfassend eine für ein Hämocyanin kodierende Nukleinsäuresequenz |
| US7999003B2 (en) | 2003-08-26 | 2011-08-16 | Mannatech, Incorporated | Antioxidant compositions and methods thereto |
| KR101245004B1 (ko) * | 2010-10-14 | 2013-03-19 | 원광대학교산학협력단 | 주혈흡충증 진단에 유용한 합성 주혈흡충 특이항원 및 이를 포함하는 주혈흡충증의 검출을 위한 진단 키트 |
Family Cites Families (2)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| DE2644149C3 (de) * | 1976-09-30 | 1979-04-12 | Behringwerke Ag, 3550 Marburg | Neue Parasiten-Antigene |
| US4384992A (en) * | 1981-01-27 | 1983-05-24 | Andre Capron | Novel peptide from cultures of Schistosoma mansoni, a process for producing it and pharmaceutical compositions containing the same |
-
1986
- 1986-07-07 FR FR8609842A patent/FR2601021B2/fr not_active Expired
-
1987
- 1987-07-06 AU AU75280/87A patent/AU7528087A/en not_active Abandoned
- 1987-07-06 EP EP87401574A patent/EP0252829A1/fr not_active Withdrawn
- 1987-07-06 DK DK347987A patent/DK347987A/da not_active Application Discontinuation
- 1987-07-07 PT PT85278A patent/PT85278B/pt not_active IP Right Cessation
- 1987-07-07 US US07/072,656 patent/US5021560A/en not_active Expired - Fee Related
- 1987-07-07 OA OA59158A patent/OA08630A/xx unknown
- 1987-07-07 ZA ZA874920A patent/ZA874920B/xx unknown
- 1987-07-07 KR KR1019870007268A patent/KR880001703A/ko not_active Application Discontinuation
- 1987-07-07 JP JP62170820A patent/JPH01139533A/ja active Pending
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| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
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| JP2002538220A (ja) * | 1999-03-12 | 2002-11-12 | ユニバーシティー オブ マサチューセッツ | リポグリカン組成物、および寄生生物感染症の治療方法 |
Also Published As
| Publication number | Publication date |
|---|---|
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