JP7844591B2 - バイパラトピックＦＲ－α抗体及びイムノコンジュゲート - Google Patents

バイパラトピックＦＲ－α抗体及びイムノコンジュゲート

Info

Publication number
JP7844591B2
JP7844591B2 JP2024193434A JP2024193434A JP7844591B2 JP 7844591 B2 JP7844591 B2 JP 7844591B2 JP 2024193434 A JP2024193434 A JP 2024193434A JP 2024193434 A JP2024193434 A JP 2024193434A JP 7844591 B2 JP7844591 B2 JP 7844591B2
Authority
JP
Japan
Prior art keywords
cancer
antibody
frα
seq
antigen
Prior art date
Legal status (The legal status is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the status listed.)
Active
Application number
JP2024193434A
Other languages
English (en)
Other versions
JP2025023994A (ja
JP2025023994A5 (ja
Inventor
アブ，オルガ
コーリ，ニーラジ
チッテンデン，トーマス
セティアーディー，ジュリアント
Original Assignee
イミュノジェン， インコーポレイテッド
Priority date (The priority date is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the date listed.)
Filing date
Publication date
Application filed by イミュノジェン， インコーポレイテッド filed Critical イミュノジェン， インコーポレイテッド
Publication of JP2025023994A publication Critical patent/JP2025023994A/ja
Publication of JP2025023994A5 publication Critical patent/JP2025023994A5/ja
Application granted granted Critical
Publication of JP7844591B2 publication Critical patent/JP7844591B2/ja
Active legal-status Critical Current
Anticipated expiration legal-status Critical

Links

Classifications

    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K45/00—Medicinal preparations containing active ingredients not provided for in groups A61K31/00 - A61K41/00
    • A61K45/06—Mixtures of active ingredients without chemical characterisation, e.g. antiphlogistics and cardiaca
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K31/00—Medicinal preparations containing organic active ingredients
    • A61K31/33—Heterocyclic compounds
    • A61K31/395—Heterocyclic compounds having nitrogen as a ring hetero atom, e.g. guanethidine or rifamycins
    • A61K31/535—Heterocyclic compounds having nitrogen as a ring hetero atom, e.g. guanethidine or rifamycins having six-membered rings with at least one nitrogen and one oxygen as the ring hetero atoms, e.g. 1,2-oxazines
    • A61K31/5365—Heterocyclic compounds having nitrogen as a ring hetero atom, e.g. guanethidine or rifamycins having six-membered rings with at least one nitrogen and one oxygen as the ring hetero atoms, e.g. 1,2-oxazines ortho- or peri-condensed with heterocyclic ring systems
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K39/00—Medicinal preparations containing antigens or antibodies
    • A61K39/0005—Vertebrate antigens
    • A61K39/0011—Cancer antigens
    • A61K39/001102—Receptors, cell surface antigens or cell surface determinants
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K39/00—Medicinal preparations containing antigens or antibodies
    • A61K39/395—Antibodies; Immunoglobulins; Immune serum, e.g. antilymphocytic serum
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K47/00—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient
    • A61K47/50—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates
    • A61K47/51—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates the non-active ingredient being a modifying agent
    • A61K47/68—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates the non-active ingredient being a modifying agent the modifying agent being an antibody, an immunoglobulin or a fragment thereof, e.g. an Fc-fragment
    • A61K47/6801—Drug-antibody or immunoglobulin conjugates defined by the pharmacologically or therapeutically active agent
    • A61K47/6803—Drugs conjugated to an antibody or immunoglobulin, e.g. cisplatin-antibody conjugates
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K47/00—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient
    • A61K47/50—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates
    • A61K47/51—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates the non-active ingredient being a modifying agent
    • A61K47/68—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates the non-active ingredient being a modifying agent the modifying agent being an antibody, an immunoglobulin or a fragment thereof, e.g. an Fc-fragment
    • A61K47/6801—Drug-antibody or immunoglobulin conjugates defined by the pharmacologically or therapeutically active agent
    • A61K47/6803—Drugs conjugated to an antibody or immunoglobulin, e.g. cisplatin-antibody conjugates
    • A61K47/68033—Drugs conjugated to an antibody or immunoglobulin, e.g. cisplatin-antibody conjugates the drug being a maytansine
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K47/00—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient
    • A61K47/50—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates
    • A61K47/51—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates the non-active ingredient being a modifying agent
    • A61K47/68—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates the non-active ingredient being a modifying agent the modifying agent being an antibody, an immunoglobulin or a fragment thereof, e.g. an Fc-fragment
    • A61K47/6835—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates the non-active ingredient being a modifying agent the modifying agent being an antibody, an immunoglobulin or a fragment thereof, e.g. an Fc-fragment the modifying agent being an antibody or an immunoglobulin bearing at least one antigen-binding site
    • A61K47/6849—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates the non-active ingredient being a modifying agent the modifying agent being an antibody, an immunoglobulin or a fragment thereof, e.g. an Fc-fragment the modifying agent being an antibody or an immunoglobulin bearing at least one antigen-binding site the antibody targeting a receptor, a cell surface antigen or a cell surface determinant
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K47/00—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient
    • A61K47/50—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates
    • A61K47/51—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates the non-active ingredient being a modifying agent
    • A61K47/68—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates the non-active ingredient being a modifying agent the modifying agent being an antibody, an immunoglobulin or a fragment thereof, e.g. an Fc-fragment
    • A61K47/6835—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates the non-active ingredient being a modifying agent the modifying agent being an antibody, an immunoglobulin or a fragment thereof, e.g. an Fc-fragment the modifying agent being an antibody or an immunoglobulin bearing at least one antigen-binding site
    • A61K47/6875—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates the non-active ingredient being a modifying agent the modifying agent being an antibody, an immunoglobulin or a fragment thereof, e.g. an Fc-fragment the modifying agent being an antibody or an immunoglobulin bearing at least one antigen-binding site the antibody being a hybrid immunoglobulin
    • A61K47/6879—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates the non-active ingredient being a modifying agent the modifying agent being an antibody, an immunoglobulin or a fragment thereof, e.g. an Fc-fragment the modifying agent being an antibody or an immunoglobulin bearing at least one antigen-binding site the antibody being a hybrid immunoglobulin the immunoglobulin having two or more different antigen-binding sites, e.g. bispecific or multispecific immunoglobulin
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P35/00—Antineoplastic agents
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K16/00—Immunoglobulins [IG], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies
    • C07K16/18—Immunoglobulins [IG], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies against material from animals or humans
    • C07K16/28—Immunoglobulins [IG], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies against material from animals or humans against receptors, cell surface antigens or cell surface determinants
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K39/00—Medicinal preparations containing antigens or antibodies
    • A61K2039/505—Medicinal preparations containing antigens or antibodies comprising antibodies
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K2317/00—Immunoglobulins specific features
    • C07K2317/30—Immunoglobulins specific features characterized by aspects of specificity or valency
    • C07K2317/31—Immunoglobulins specific features characterized by aspects of specificity or valency multispecific
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K2317/00—Immunoglobulins specific features
    • C07K2317/50—Immunoglobulins specific features characterized by immunoglobulin fragments
    • C07K2317/52—Constant or Fc region; Isotype
    • C07K2317/526—CH3 domain
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K2317/00—Immunoglobulins specific features
    • C07K2317/50—Immunoglobulins specific features characterized by immunoglobulin fragments
    • C07K2317/55—Fab or Fab'
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K2317/00—Immunoglobulins specific features
    • C07K2317/50—Immunoglobulins specific features characterized by immunoglobulin fragments
    • C07K2317/56—Immunoglobulins specific features characterized by immunoglobulin fragments variable (Fv) region, i.e. VH and/or VL
    • C07K2317/569—Single domain, e.g. dAb, sdAb, VHH, VNAR or nanobody®
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K2317/00—Immunoglobulins specific features
    • C07K2317/60—Immunoglobulins specific features characterized by non-natural combinations of immunoglobulin fragments
    • C07K2317/62—Immunoglobulins specific features characterized by non-natural combinations of immunoglobulin fragments comprising only variable region components
    • C07K2317/622—Single chain antibody (scFv)
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K2317/00—Immunoglobulins specific features
    • C07K2317/70—Immunoglobulins specific features characterized by effect upon binding to a cell or to an antigen
    • C07K2317/73—Inducing cell death, e.g. apoptosis, necrosis or inhibition of cell proliferation
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K2317/00—Immunoglobulins specific features
    • C07K2317/90—Immunoglobulins specific features characterized by (pharmaco)kinetic aspects or by stability of the immunoglobulin
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K2317/00—Immunoglobulins specific features
    • C07K2317/90—Immunoglobulins specific features characterized by (pharmaco)kinetic aspects or by stability of the immunoglobulin
    • C07K2317/92—Affinity (KD), association rate (Ka), dissociation rate (Kd) or EC50 value
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K2317/00—Immunoglobulins specific features
    • C07K2317/90—Immunoglobulins specific features characterized by (pharmaco)kinetic aspects or by stability of the immunoglobulin
    • C07K2317/94—Stability, e.g. half-life, pH, temperature or enzyme-resistance

Landscapes

  • Health & Medical Sciences (AREA)
  • Chemical & Material Sciences (AREA)
  • Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
  • Medicinal Chemistry (AREA)
  • General Health & Medical Sciences (AREA)
  • Bioinformatics & Cheminformatics (AREA)
  • Engineering & Computer Science (AREA)
  • Pharmacology & Pharmacy (AREA)
  • Veterinary Medicine (AREA)
  • Animal Behavior & Ethology (AREA)
  • Public Health (AREA)
  • Immunology (AREA)
  • Epidemiology (AREA)
  • Organic Chemistry (AREA)
  • General Chemical & Material Sciences (AREA)
  • Chemical Kinetics & Catalysis (AREA)
  • Nuclear Medicine, Radiotherapy & Molecular Imaging (AREA)
  • Biochemistry (AREA)
  • Biophysics (AREA)
  • Genetics & Genomics (AREA)
  • Molecular Biology (AREA)
  • Proteomics, Peptides & Aminoacids (AREA)
  • Cell Biology (AREA)
  • Mycology (AREA)
  • Microbiology (AREA)
  • Oncology (AREA)
  • Peptides Or Proteins (AREA)
  • Medicines Containing Antibodies Or Antigens For Use As Internal Diagnostic Agents (AREA)
  • Preparation Of Compounds By Using Micro-Organisms (AREA)
  • Micro-Organisms Or Cultivation Processes Thereof (AREA)
  • Medicinal Preparation (AREA)
  • Medicines That Contain Protein Lipid Enzymes And Other Medicines (AREA)
  • Pharmaceuticals Containing Other Organic And Inorganic Compounds (AREA)
  • Medicines Containing Material From Animals Or Micro-Organisms (AREA)

Description

本開示の分野は、一般的に、ヒト葉酸受容体１（ＦＲα）に結合するバイパラトピック抗体及びイムノコンジュゲートに関する。
がんは先進国の主要な死因の１つであり、米国だけで１００万人超ががんと診断され、年間５０万人が死亡している。全体として、３人に１人を超えて生涯に何らかの形のがんを発症すると推定されている。
腫瘍関連抗原に結合する抗体にコンジュゲートした細胞毒性の高い薬剤で構成される抗体薬物コンジュゲート（ＡＤＣ）は、腫瘍標的抗体の効力を高めるための有望な治療戦略である。ＡＤＣは、抗体の好ましい薬物動態、生体内分布、及び腫瘍標的化特性を、付着した小分子またはペイロードによって提供される強力な細胞殺傷メカニズムと組み合わせる可能性を提供する。
葉酸受容体－α（ＦＲαまたはＦＯＬＲ１）は、葉酸に対して高い親和性を持つグリコシルホスファチジルイノシトール結合細胞表面糖タンパク質である。正常組織及びがん性組織におけるその生理学的役割は、まだ完全には解明されていない。ほとんどの正常組織はＦＲαを発現せず、ほとんどの細胞への生理的葉酸の輸送は、他のいくつかのタンパク質、特に還元型葉酸担体によって媒介されると考えられている。高レベルのＦＲαは、漿液性及び類内膜上皮性卵巣癌、子宮内膜腺癌、及び腺癌サブタイプの非小細胞肺癌で発見されている。重要なことに、ＦＲαの発現は、卵巣癌患者の転移性病巣及び再発がん、ならびに上皮性卵巣癌及び子宮内膜癌の化学療法後に維持される。これらの特性は、正常組織でのＦＲαの高度に制限された発現と共に、ＦＲαをＡＤＣなどの標的療法の非常に有望な標的にする。
強力なチューブリン作用性マイタンシノイドであるＤＭ４にコンジュゲートしたＦＲα標的抗体を含む葉酸標的化ＡＤＣであるミルベツキシマブソラブタンシン（ＩＭＧＮ８５３）は、最近、中程度及び高程度のＦＲαレベルを示すプラチナ抵抗性卵巣癌患者の診療所において評価された。ＦＯＲＷＡＲＤ Ｉ第３相試験では３６６人の患者を２：１で無作為化し、ミルベツキシマブソラブタンシンまたは医師が選択した単剤化学療法（ペグ化リポソームドキソルビシン、トポテカン、または毎週のパクリタキセル）のいずれかを投与した。試験は無増悪生存期間（ＰＦＳ）の改善という主要評価項目を満たさなかったが（全体的な集団ハザード比（ＨＲ）＝０．９８、ｐ＝０．８９７）、事前に指定された高ＦＲα亜集団（２１８／３６６）が、ＩＭＧＮ８５３治療で２４％の全奏効率を示したのに対し、標準治療化学療法では１０％であった。さらに、事前に指定された高ＦＲα亜集団では、化学療法と比較して、ＩＭＧＮ８５３を投与された患者のＰＦＳが長く（ＨＲ＝０．６９、ｐ値＝０．０４９）、化学療法と比較して、ＩＭＧＮ８５３を投与された患者の全生存期間は長かった（ＨＲ＝０．６２、ｐ値＝０．０３３）。これらの結果は、高レベルのＦＲαを発現している患者にとって有望であるが、結果はまた、より広い患者集団にわたって無増悪生存期間を改善する上でのＩＭＧＮ８５３の限界を示した。
したがって、さらに効果的な治療とより高いＡＤＣ送達をもたらし得る、さらなる葉酸を標的化するＡＤＣを特定する必要性が残っている。
本明細書で提供されるのは、ヒト葉酸受容体１（ＦＲα）に特異的に結合するバイパラトピック抗体またはその抗原結合断片であって、抗体またはその抗原結合断片は、（ａ）第１の可変重鎖（ＶＨ）及び第１の可変軽鎖（ＶＬ）を含み、ＦＲαの第１のエピトープに結合する第１のＦＲα結合ドメインと、（ｂ）第２のＶＨ及び第２のＶＬを含み、ＦＲαの第２のエピトープに結合する第２のＦＲα結合ドメインと、を含む、抗体またはその抗原結合断片である。
いくつかの実施形態では、第１のＦＲα結合ドメインは、配列番号２４、２５、及び２６からなる群から選択されるＶＨアミノ酸配列と、配列番号１９、２０、及び２１からなる群から選択されるＶＬアミノ酸配列と、を含む抗体と同じＦＲαのエピトープに特異的に結合する。いくつかの実施形態では、第１のＦＲα結合ドメインは、配列番号２４、５７、及び２６からなる群から選択されるＶＨアミノ酸配列と、配列番号１９、２０、及び２１からなる群から選択されるＶＬアミノ酸配列と、を含む抗体と同じＦＲαのエピトープに特異的に結合する。いくつかの実施形態では、第１のＦＲα結合ドメインは、配列番号２４、２５、及び２６からなる群から選択されるＶＨアミノ酸配列と、配列番号１９、２０、及び２１からなる群から選択されるＶＬアミノ酸配列と、を含む抗体と同じＦＲαのエピトープへの結合を競合的に阻害する。いくつかの実施形態では、第１のＦＲα結合ドメインは、配列番号２４、５７、及び２６からなる群から選択されるＶＨアミノ酸配列と、配列番号１９、２０、及び２１からなる群から選択されるＶＬアミノ酸配列と、を含む抗体と同じＦＲαのエピトープへの結合を競合的に阻害する。いくつかの実施形態では、第２のＦＲα結合ドメインは、配列番号２２または２３のＶＨアミノ酸配列と、配列番号１７または１８のＶＬアミノ酸配列と、を含む抗体と同じＦＲαのエピトープに特異的に結合する。いくつかの実施形態では、第２のＦＲα結合ドメインは、配列番号２２または２３のＶＨアミノ酸配列と、配列番号１７または１８のＶＬアミノ酸配列と、を含む抗体と同じＦＲαのエピトープへの結合を競合的に阻害する。
いくつかの実施形態では、第１のＶＨは、それぞれ（ａ）配列番号１０～１２または（ｂ）配列番号１５、１６、及び１２のアミノ酸配列を含むＶＨ ＣＤＲ１～３を含み、第１のＶＬは、それぞれ配列番号４～６のアミノ酸配列を含むＶＬ ＣＤＲ１～３を含む。いくつかの実施形態では、第１のＶＨは、配列番号２４、２５、及び２６からなる群から選択されるアミノ酸配列を含み、及び／または第１のＶＬは、配列番号１９、２０、及び２１からなる群から選択されるアミノ酸配列を含む。いくつかの実施形態では、第１のＦＲα結合ドメインは、配列番号２４、５７、及び２６からなる群から選択されるＶＨアミノ酸配列と、配列番号１９、２０、及び２１からなる群から選択されるＶＬアミノ酸配列と、を含む抗体と同じＦＲαのエピトープへの結合を競合的に阻害する。いくつかの実施形態では、第２のＶＨは、それぞれ（ａ）配列番号７～９または（ｂ）配列番号１３、１４、及び９のアミノ酸配列を含むＶＨ ＣＤＲ１～３を含み、第２のＶＬは、それぞれ配列番号１～３のアミノ酸配列を含むＶＬ ＣＤＲ１～３を含む。いくつかの実施形態では、第２のＶＨは、配列番号２２もしくは２３のアミノ酸配列を含み、及び／または第２のＶＬは、配列番号１７もしくは１８のアミノ酸配列を含む。
いくつかの実施形態では、第１のＶＨとＶＬの対及び／または第２のＶＨとＶＬの対は、マウス、非ヒト、ヒト化、キメラ、表面再構成（ｒｅｓｕｒｆａｃｅｄ）、またはヒトである。いくつかの実施形態では、抗体またはその抗原結合断片は、ヒトＦＲαに結合するが、ＦＯＬＲ２またはＦＯＬＲ３に結合しない。いくつかの実施形態では、第１のＦＲα抗原結合ドメインは、単鎖可変断片（ｓｃＦｖ）である。いくつかの実施形態では、第１のＦＲα結合ドメインのｓｃＦｖは、ＶＨ－リンカー－ＶＬのペプチドの配向を有する。いくつかの実施形態では、第１のＦＲα結合ドメインのｓｃＦｖは、ＶＬ－リンカー－ＶＨのペプチドの配向を有する。いくつかの実施形態では、第２のＦＲα結合ドメインは、単鎖可変断片（ｓｃＦｖ）である。いくつかの実施形態では、第２のＦＲα結合ドメイ
ンのｓｃＦｖは、ＶＨ－リンカー－ＶＬのペプチド配向を有する。いくつかの実施形態では、第２のＦＲα結合ドメインのｓｃＦｖは、ＶＬ－リンカー－ＶＨのペプチドの配向を有する。いくつかの実施形態では、リンカーは、グリシン－セリンリンカーである。
いくつかの実施形態では、第２のＦＲα結合ドメインは、配列番号２７～２９から選択されるアミノ酸配列を含む。いくつかの実施形態では、第１のＦＲα結合ドメインは、配列番号３０～３２から選択されるアミノ酸配列を含む。いくつかの実施形態では、本明細書で開示されるバイパラトピック抗体またはその抗原結合断片は、（ｉ）配列番号３３及び３４、（ｉｉ）配列番号３５及び３６、（ｉｉｉ）配列番号３７及び３８、または（ｉｖ）配列番号３９及び４０のアミノ酸配列を含む。
いくつかの実施形態では、バイパラトピック抗体またはその抗原結合断片は、配列番号４１～４３のアミノ酸配列を含む。
いくつかの実施形態では、バイパラトピック抗体またはその抗原結合断片は、配列番号４４～４６のアミノ酸配列を含む。
いくつかの実施形態では、バイパラトピック抗体またはその抗原結合断片は、４価のバイパラトピック抗体またはその抗原結合断片である。いくつかの実施形態では、バイパラトピック抗体またはその抗原結合断片は、２価のバイパラトピック抗体またはその抗原結合断片である。いくつかの実施形態では、バイパラトピック抗体またはその抗原結合断片は、タンデムｓｃＦｖ、ダイアボディ、トリアボディ、テトラボディ、及びノブインホール構造からなる群から選択されるＦＲα結合ドメインを含む。いくつかの実施形態では、バイパラトピック抗体またはその抗原結合断片は、ノブインホール（ＫＩＨ）構造を有する。
いくつかの実施形態では、バイパラトピック抗体またはその抗原結合断片は、ＦＲα結合ドメインを含み、ＦＲα結合ドメインは、配列番号１～３及び７～９を含み、ＫＩＨ構造のノブ側にある。いくつかの実施形態では、ＦＲα結合ドメインは、配列番号１～３及び７～９を含み、ＫＩＨ構造のホール側にある。いくつかの実施形態では、ＦＲα結合ドメインは、配列番号４～６及び１０～１２を含み、ＫＩＨ構造のノブ側にある。いくつかの実施形態では、ＦＲα結合ドメインは、配列番号４～６及び１０～１２を含み、ＫＩＨ構造のホール側にある。
いくつかの実施形態では、バイパラトピック抗体またはその抗原結合断片は、全長抗体を含む。いくつかの実施形態では、バイパラトピック抗体またはその抗原結合断片は第１のＦＲα結合ドメインを含み、第１のＦＲα結合ドメインは、全長抗体である。いくつかの実施形態では、バイパラトピック抗体またはその抗原結合断片は第２のＦＲα結合ドメインを含み、第２のＦＲα結合ドメインは、全長抗体である。いくつかの実施形態では、バイパラトピック抗体またはその抗原結合断片は、抗原結合断片を含む。いくつかの実施形態では、バイパラトピック抗体またはその抗原結合断片は第１のＦＲα結合ドメインを含み、第１のＦＲα結合ドメインは、抗原結合断片である。いくつかの実施形態では、バイパラトピック抗体またはその抗原結合断片は第２のＦＲα結合ドメインを含み、第２のＦＲα結合ドメインは、抗原結合断片である。いくつかの実施形態では、バイパラトピック抗体またはその抗原結合断片は、配列番号４１～４３のアミノ酸配列を含む。
いくつかの実施形態では、本明細書で提供されるのは、本明細書で開示されるバイパラトピック抗体またはその抗原結合断片をコードする単離された核酸分子の組み合わせである。
いくつかの実施形態では、本明細書で提供されるのは、本明細書で開示される核酸分子のうちの１つを含む単離されたベクターである。
いくつかの実施形態では、本明細書で提供されるのは、本明細書で開示される単離された核酸分子、または本明細書で開示される単離されたベクターの組み合わせを含む宿主細胞である。いくつかの実施形態では、宿主細胞は、Ｅ．ｃｏｌｉ、Ｐｓｅｕｄｏｍｏｎａｓ、Ｂａｃｉｌｌｕｓ、Ｓｔｒｅｐｔｏｍｙｃｅｓ、酵母、ＣＨＯ、ＹＢ／２０、ＮＳ０、ＰＥＲ－Ｃ６、ＨＥＫ－２９３Ｔ、ＮＩＨ－３Ｔ３、ＨｅＬａ、ＢＨＫ、Ｈｅｐ Ｇ２、ＳＰ２／０、Ｒ１．１、Ｂ－Ｗ、Ｌ－Ｍ、ＣＯＳ １、ＣＯＳ ７、ＢＳＣ１、ＢＳＣ４０、ＢＭＴ１０細胞、植物細胞、昆虫細胞、及び組織培養におけるヒト細胞からなる群から選択される。
いくつかの実施形態では、本明細書で提供されるのは、本明細書で開示されるバイパラトピック抗体または抗原、本明細書で開示される核酸分子（複数可）、本明細書で開示されるベクター、または本明細書で開示される宿主細胞の組み合わせ、及び薬学的に許容される担体または賦形剤を含む医薬組成物である。いくつかの実施形態では、本明細書で提供される医薬組成物は、本明細書で開示されるバイパラトピック抗体、及び医薬担体または賦形剤を含む。いくつかの実施形態では、医薬組成物は、抗体またはその抗原結合断片あたり平均１～１０の薬物を含む。いくつかの実施形態では、医薬組成物は、抗体またはその抗原結合断片あたり平均２～５の薬物を含む。いくつかの実施形態では、医薬組成物は、抗体またはその抗原結合断片あたり平均３～４の薬物を含む。
いくつかの実施形態では、本明細書で提供されるのは、本明細書で開示されるバイパラトピック抗体を作製する方法であって、（ａ）抗体を発現する細胞を培養することと、（ｂ）培養された細胞から抗体を単離することと、を含む方法である。いくつかの実施形態では、培養される細胞は、真核生物である。
いくつかの実施形態では、本明細書で提供されるのは、以下の式によって表されるイムノコンジュゲート：
またはその薬学的に許容される塩であって、式中、
ＣＢは、本明細書で提供される任意のバイパラトピック抗体またはその抗原結合断片であり、
Ｌ２は、以下の式のうちの１つによって表され：
式中、
Ｒｘ、Ｒｙ、Ｒｘ’、及びＲｙ’は、それぞれの存在について、独立してＨ、－ＯＨ、ハロゲン、－Ｏ－（Ｃ１－４アルキル）、－ＳＯ３Ｈ、－ＮＲ４０Ｒ４１Ｒ４２ ＋、または任意選択で－ＯＨ、ハロゲン、ＳＯ３Ｈ、もしくはＮＲ４０Ｒ４１Ｒ４２ ＋によって置換されたＣ１－４アルキルであり、ここで、Ｒ４０、Ｒ４１、及びＲ４２は、それぞれ独立してＨまたはＣ１－４アルキルであり；
ｌ及びｋは、それぞれ独立して、１～１０の整数であり；
ｌ１は、２～５の整数であり；
ｋ１は、１～５の整数であり；
ｓ１は細胞結合剤ＣＢに接続された部位を示し、ｓ３はＡ基に接続された部位を示し；
Ａは、アミノ酸残基または２～２０個のアミノ酸残基を含むペプチドであり；
Ｒ１及びＲ２は、それぞれ独立して、ＨまたはＣ１－３アルキルであり；
Ｌ１は、以下の式によって表され：
－ＣＲ３Ｒ４－（ＣＨ２）１－８－Ｃ（＝Ｏ）－
式中、Ｒ３及びＲ４は、それぞれ独立してＨまたはＭｅであり、Ｌ１の－Ｃ（＝Ｏ）－部分は、Ｄに接続されており；
Ｄは以下の式で表され：
ｑは、１～２０の整数である。いくつかの実施形態では、ｑは、１～１０の整数である。いくつかの実施形態では、ｑは２～５の整数である。いくつかの実施形態では、ｑは３～４の整数である。
いくつかの実施形態では、イムノコンジュゲートのＲｘ、Ｒｙ、Ｒｘ’、及びＲｙ’は全てＨであり；ｌ及びｋは、それぞれ独立して２～６の整数整数である。いくつかの実施形態では、イムノコンジュゲートのＡは、２～５個のアミノ酸残基を含むペプチドである。
いくつかの実施形態では、イムノコンジュゲートのＡは、Ｇｌｙ－Ｇｌｙ－Ｇｌｙ、Ａｌａ－Ｖａｌ、Ｖａｌ－Ａｌａ、Ｄ－Ｖａｌ－Ａｌａ、Ｖａｌ－Ｃｉｔ、Ｄ－Ｖａｌ－Ｃｉｔ、Ｖａｌ－Ｌｙｓ、Ｐｈｅ－Ｌｙｓ、Ｌｙｓ－Ｌｙｓ、Ａｌａ－Ｌｙｓ、Ｐｈｅ－Ｃｉｔ、Ｌｅｕ－Ｃｉｔ、Ｉｌｅ－Ｃｉｔ、Ｐｈｅ－Ａｌａ、Ｐｈｅ－Ｎ９－トシル－Ａｒｇ、Ｐｈｅ－Ｎ９－ニトロ－Ａｒｇ、Ｐｈｅ－Ｐｈｅ－Ｌｙｓ、Ｄ－Ｐｈｅ－Ｐｈｅ－Ｌｙｓ、Ｇｌｙ－Ｐｈｅ－Ｌｙｓ、Ｌｅｕ－Ａｌａ－Ｌｅｕ、Ｉｌｅ－Ａｌａ－Ｌｅｕ、Ｖａｌ－Ａｌａ－Ｖａｌ、Ａｌａ－Ａｌａ－Ａｌａ、Ｄ－Ａｌａ－Ａｌａ－Ａｌａ、Ａｌａ－Ｄ－Ａｌａ－Ａｌａ、Ａｌａ－Ａｌａ－Ｄ－Ａｌａ、Ａｌａ－Ｌｅｕ－Ａｌａ－Ｌｅｕ（配列番号５４）、β－Ａｌａ－Ｌｅｕ－Ａｌａ－Ｌｅｕ（配列番号５５）、Ｇｌｙ－Ｐｈｅ－Ｌｅｕ－Ｇｌｙ（配列番号５６）、Ｖａｌ－Ａｒｇ、Ａｒｇ－Ａｒｇ、Ｖａｌ－Ｄ－Ｃｉｔ、Ｖａｌ－Ｄ－Ｌｙｓ、Ｖａｌ－Ｄ－Ａｒｇ、Ｄ－Ｖａｌ－Ｃｉｔ、Ｄ－Ｖａｌ－Ｌｙｓ、Ｄ－Ｖａｌ－Ａｒｇ、Ｄ－Ｖａｌ－Ｄ－Ｃｉｔ、Ｄ－Ｖａｌ－Ｄ－Ｌｙｓ、Ｄ－Ｖａｌ－Ｄ－Ａｒｇ、Ｄ－Ａｒｇ－Ｄ－Ａｒｇ、Ａｌａ－Ａｌａ、Ａｌａ－Ｄ－Ａｌａ、Ｄ－Ａｌａ－Ａｌａ、Ｄ－Ａｌａ－Ｄ－Ａｌａ、Ａｌａ－Ｍｅｔ、Ｇｌｎ－Ｖａｌ、Ａｓｎ－Ａｌａ、Ｇｌｎ－Ｐｈｅ、Ｇｌｎ－Ａｌａ、Ｄ－Ａｌａ－Ｐｒｏ、及びＤ－Ａｌａ－ｔＢｕ－Ｇｌｙからなる群から選択され、それぞれのペプチドの最初のアミノ酸はＬ２基に接続され、それぞれのペプチドの最後のアミノ酸は－ＮＨ－ＣＲ１Ｒ２－Ｓ－Ｌ１－Ｄに接続されている。いくつかの実施形態では、イムノコンジュゲートのＲ１とＲ２は両方ともＨである。いくつかの実施形態では、イムノコンジュゲートのＬ１は、－（ＣＨ２）４－６－Ｃ（＝Ｏ）－である。
いくつかの実施形態では、イムノコンジュゲートのＤは、以下の式によって表される：
いくつかの実施形態では、イムノコンジュゲートは、以下の式：
またはその薬学的に許容される塩によって表され、式中、
は、Ｌｙｓのアミン基を介してＬ２基に接続される、本明細書で提供される任意のバイパラトピック抗体またはその抗原結合断片であり；
は、Ｃｙｓのチオール基を介してＬ２基に接続される、本明細書で提供される任意のバイ
パラトピック抗体またはその抗原結合断片であり；
Ｒ３及びＲ４は、それぞれ独立してＨまたはＭｅであり；
ｍ１、ｍ３、ｎ１、ｒ１、ｓ１、及びｔ１は、それぞれ独立して１～６の整数であり；
ｍ２、ｎ２、ｒ２、ｓ２、及びｔ２は、それぞれ独立して、１～７の整数であり；
ｔ３は、１～１２の整数であり；
Ｄ１は以下の式で表される：
いくつかの実施形態では、イムノコンジュゲートは、以下の式で表され：
式中：
ｍ１及びｍ３は、それぞれ独立して、２～４の整数であり；
ｍ２は、２～５の整数であり；
ｒ１は、２～６の整数であり；
ｒ２は、２～５の整数である。
いくつかの実施形態では、イムノコンジュゲートのＡは、Ａｌａ－Ａｌａ－Ａｌａ、Ａｌａ－Ｄ－Ａｌａ－Ａｌａ、Ａｌａ－Ａｌａ、Ｄ－Ａｌａ－Ａｌａ、Ｖａｌ－Ａｌａ、Ｄ
－Ｖａｌ－Ａｌａ、Ｄ－Ａｌａ－Ｐｒｏ、またはＤ－Ａｌａ－ｔＢｕ－Ｇｌｙである。
いくつかの実施形態では、イムノコンジュゲートは、以下の式：
またはその薬学的に許容される塩によって表され、式中、
Ａは、Ａｌａ－Ａｌａ－Ａｌａ、Ａｌａ－Ｄ－Ａｌａ－Ａｌａ、Ａｌａ－Ａｌａ、Ｄ－Ａｌａ－Ａｌａ、Ｖａｌ－Ａｌａ、Ｄ－Ｖａｌ－Ａｌａ、Ｄ－Ａｌａ－Ｐｒｏ、またはＤ－Ａｌａ－ｔＢｕ－Ｇｌｙであり；
Ｄ１は以下の式で表される：
いくつかの実施形態では、イムノコンジュゲートは、以下の式で表され：
式中、Ｄ１は以下の式で表される：
いくつかの実施形態では、イムノコンジュゲートは、以下の式で表され：
式中、
ＣＢＡは、本明細書で提供される任意のバイパラトピック抗体またはその抗原結合断片であり、
ｑは、１～１０の整数、例えば、１または１０であり；
Ｄ１は以下の式で表される：
いくつかの実施形態では、ｑは、２～５の整数である。いくつかの実施形態では、ｑは、３～４の整数である。
いくつかの実施形態では、イムノコンジュゲートは、以下の式：
またはその薬学的に許容される塩で表され、式中、
ＣＢＡは、配列番号４１～４３のアミノ酸配列を含むバイパラトピック抗体または抗原結合断片であり；
Ｄ１は、以下の式で表され：
ｑは、１～１０の整数である。いくつかの実施形態では、ｑは、２～５の整数である。いくつかの実施形態では、ｑは、３～４の整数である。
いくつかの実施形態では、本明細書で開示されるのは、式（Ａ）－（Ｌ）－（Ｃ）を有するイムノコンジュゲートであって、式中、
（Ａ）は、本明細書で提供される任意のバイパラトピック抗体または抗原結合断片であり、
（Ｌ）は、リンカーであり；
（Ｃ）は細胞傷害性薬剤であり、リンカー（Ｌ）は（Ａ）を（Ｃ）に連結する。
いくつかの実施形態では、本明細書で開示されるイムノコンジュゲートのリンカーは、切断可能なリンカー、切断不可能なリンカー、親水性リンカー、及びジカルボン酸ベースのリンカーからなる群から選択される。いくつかの実施形態では、リンカーは、Ｎ－（γマレイミドブトリルオキシ）スルホスクシンイミドエステル（スルホ－ＧＭＢＳまたはｓＧＭＢＳ）、γマレイミド酪酸Ｎ－スクシンイミジルエステル（ＧＭＢＳ）、Ｎ－スクシンイミジル４－（２－ピリジルジチオ）－２－スルホブタノエート（スルホ－ＳＰＤＢ）；Ｎ－スクシンイミジル４－（２－ピリジルジチオ）ペンタノエート（ＳＰＰ）またはＮ－スクシンイミジル４－（２－ピリジルジチオ）－２－スルホペンタノエート（スルホ－ＳＰＰ）；Ｎ－スクシンイミジル４－（２－ピリジルジチオ）ブタノエート（ＳＰＤＢ）、Ｎ－スクシンイミジル４－（マレイミドメチル）シクロヘキサンカルボキシレート（ＳＭＣＣ）；Ｎ－スルホスクシンイミジル４－（マレイミドメチル）シクロヘキサンカルボキシレート（スルホＳＭＣＣ）；Ｎ－スクシンイミジル－４－（ヨードアセチル）－アミノ安息香酸（ＳＩＡＢ）；及びＮ－スクシンイミジル－［（Ｎ－マレイミドプロピオンア
ミド）－テトラエチレングリコール］エステル（ＮＨＳ－ＰＥＧ４－マレイミド）からなる群から選択される。
いくつかの実施形態では、リンカーは、スルホ－ＧＭＢＳである。
いくつかの実施形態では、リンカーはＧＭＢＳである。
いくつかの実施形態では、リンカーはスルホ－ＳＰＤＢである。
いくつかの実施形態では、本明細書で開示されるイムノコンジュゲートの細胞傷害性薬剤は、マイタンシノイド、マイタンシノイド類似体、ベンゾジアゼピン、タキソイド、ＣＣ－１０６５、ＣＣ－１０６５類似体、デュオカルマイシン、デュオカルマイシン類似体、カリチアマイシン、ドラスタチン、ドラスタチン類似体、アウリスタチン、トメイマイシン誘導体、及びレプトマイシン誘導体または薬剤のプロドラッグからなる群から選択される。いくつかの実施形態では、細胞傷害性薬剤は、マイタンシノイドである。
いくつかの実施形態では、イムノコンジュゲートは、第２の（Ｃ）をさらに含む。いくつかの実施形態では、イムノコンジュゲートは、第３の（Ｃ）をさらに含む。いくつかの実施形態では、イムノコンジュゲートは、第４の（Ｃ）をさらに含む。
いくつかの実施形態では、本明細書で提供されるのは、本明細書で開示される少なくとも１つのイムノコンジュゲートを含む組成物であり、イムノコンジュゲートは、Ａあたり平均３～４個のＣを含む。
いくつかの実施形態では、本明細書で提供されるイムノコンジュゲートと、薬学的に許容される担体とを含む、医薬組成物が提供される。いくつかの実施形態では、医薬組成物は、抗体またはその抗原結合断片あたり平均１～１０の薬物を含む。いくつかの実施形態では、医薬組成物は、抗体またはその抗原結合断片あたり平均２～５の薬物を含む。いくつかの実施形態では、医薬組成物は、抗体またはその抗原結合断片あたり平均３～４の薬物を含む。
いくつかの実施形態では、本明細書で提供されるのは、対象においてがんを治療する方法であって、治療有効量の本明細書で開示される抗体もしくはその抗原結合断片、本明細書で開示されるイムノコンジュゲート、または本明細書で開示される医薬組成物を対象に投与することを含む、方法である。
いくつかの実施形態では、本明細書で提供されるのは、がんを治療する方法である。いくつかの実施形態では、がんは、卵巣癌、子宮癌、腹膜癌、卵管癌、子宮内膜癌、肺癌、または脳癌である。いくつかの実施形態では、がんは、卵巣癌である。いくつかの実施形態では、卵巣癌は、プラチナ抵抗性上皮性卵巣癌である。いくつかの実施形態において、卵巣癌は、再発した上皮性卵巣癌である。特定の実施形態では、卵巣癌は、プラチナ不応性上皮卵巣癌である。いくつかの実施形態では、がんは、子宮癌である。いくつかの実施形態では、がんは、腹膜癌である。いくつかの実施形態では、がんは卵管癌である。いくつかの実施形態では、がんは、子宮内膜癌である。いくつかの実施形態では、がんは、肺癌である。いくつかの実施形態では、がんは、脳癌である。いくつかの実施形態では、がんは、ＩＭＧＮ８５３耐性である。
いくつかの実施形態では、方法は、ステロイドの投与をさらに含む。
ｈｕＭｏｖ１９－ビオチンと葉酸受容体抗体ＦＲ５７；ＦＲα抗体Ａ（「ＦＲα－Ａ」）；ＦＲα抗体Ｂ（「ＦＲα－Ｂ」）；ＦＲα抗体Ｃ（「ＦＲα－Ｃ」）；及び非ビオチン化ｈｕＭｏｖ１９（「ｈｕＭｏｖ１９」）との結合競合をＦＡＣＳにより示す。（実施例１を参照されたい。） 従来の単一特異性抗体（ｈｕＭｏｖ１９及びＦＲ５７など）、２価のバイパラトピックノブインホール（ＫＩＨ）抗体、ならびに４価のバイパラトピック（Ｍｏｒｒｉｓｏｎ）抗体の例示的な分子、特性、及び概略図を示す。（実施例１を参照されたい。） 非対称Ｆｃベースの分子を生成するために使用されたいくつかの重鎖と軽鎖のプラスミドのトランスフェクション比のゲルを示す。Ｌ１：ＦＲ５７ｓｃＦｖ－ノブのみによるトランスフェクション；Ｌ２：４：４：１でのＭｏｖ１９ＬＣ：Ｍｏｖ１９ＨＣ－ホール：ＦＲ５７ｓｃＦｖ－ノブのトランスフェクション；Ｌ３：６：２：１でのＭｏｖ１９ＬＣ：Ｍｏｖ１９ＨＣ－ホール：ＦＲ５７ｓｃＦｖ－ノブのトランスフェクション；Ｌ４：６：６：１でのＭｏｖ１９ＬＣ：Ｍｏｖ１９ＨＣ－ホール：ＦＲ５７ｓｃＦｖ－ノブのトランスフェクション；Ｌ５：９：３：１でのＭｏｖ１９ＬＣ：Ｍｏｖ１９ＨＣ－ホール：ＦＲ５７ｓｃＦｖ－ノブのトランスフェクション；Ｌ６：２：３：１でのＭｏｖ１９ＬＣ：Ｍｏｖ１９ＨＣ－ホール：ＦＲ５７ｓｃＦｖ－ノブのトランスフェクション；Ｌ７：１：１：１でのＭｏｖ１９ＬＣ：Ｍｏｖ１９ＨＣ－ホール：ＦＲ５７ｓｃＦｖ－ノブのトランスフェクション；Ｌ８：３：１でのＭｏｖ１９ＬＣ：Ｍｏｖ１９－ホールのトランスフェクション；Ｌ９：アイソタイプヒトＩｇＧ１トランスフェクション。（実施例１を参照されたい。） 競合ＦＡＣＳによるＭｏｒｒｉｓｏｎの抗体またはその断片の結合活性を示す。（実施例２を参照されたい。）特に、Ｍｏｖ１９－Ｇ１－ＦＲ５７ｓｃＦｖ１（Ｍ９３４６Ａ－ＦＲ５７ｓｃＦｖ）の結合活性を示す。 競合ＦＡＣＳによるＭｏｒｒｉｓｏｎの抗体またはその断片の結合活性を示す。（実施例２を参照されたい。）特に、ＦＲ５７－Ｇ１－Ｍｏｖ１９ｓｃＦｖ１（ＦＲ５７－Ｍ９３４６ＡｓｃＦｖ）の結合活性を示す。 競合ＦＡＣＳによるＭｏｒｒｉｓｏｎの抗体またはその断片の結合活性を示す。（実施例２を参照されたい。）特に、Ｍｏｖ１９－Ｇ１－ＦＲα抗体－Ａ－ｓｃＦｖ１（Ｍ９３４６Ａ－ＦＲ－α－Ａ：ｓｃＦｖ）の結合活性を示す。 競合ＦＡＣＳによるＭｏｒｒｉｓｏｎの抗体またはその断片の結合活性を示す。（実施例２を参照されたい。）特に、ＦＲα抗体－Ａ－Ｇ１－Ｍｏｖ１９ｓｃＦｖ１（ＦＲ－α－Ａ：Ｍ９３４６ＡｓｃＦｖ）の結合活性を示す。 競合ＦＡＣＳによるＭｏｒｒｉｓｏｎの抗体またはその断片の結合活性を示す。（実施例２を参照されたい。）特に、ＦＲα抗体－Ａ－ｓｃＦｖ２－Ｇ１－Ｍｏｖ１９（ＦＲ－α－Ａ：ｓｃＦｖ－Ｍ９３４６Ａ）の結合活性を示す。 競合ＦＡＣＳによるＭｏｒｒｉｓｏｎの抗体またはその断片の結合活性を示す。（実施例２を参照されたい。）特に、ＦＲα抗体－Ｂ－ｓｃＦｖ２－Ｇ１－Ｍｏｖ１９（ＦＲ－α－Ｂ：ｓｃＦＶ－Ｍ９３４６Ａ）の結合活性を示す。 競合ＦＡＣＳによるＭｏｒｒｉｓｏｎの抗体またはその断片の結合活性を示す。（実施例２を参照されたい。）特に、ＦＲα抗体－Ｃ－ｓｃＦｖ２－Ｇ１－Ｍｏｖ１９（ＦＲ－α－Ｃ：ｓｃＦｖ－Ｍ９３４６Ａ）の結合活性を示す。 競合ＦＡＣＳによるＭｏｒｒｉｓｏｎの抗体またはその断片の結合活性を示す。（実施例２を参照されたい。）特に、ＦＲ５７ｓｃＦｖ２－Ｇ１－Ｍｏｖ１９（ＦＲ５７ｓｃＦｖ－Ｍ９３４６Ａ）の結合活性を示す。 非還元及び還元条件下でのＦＲ５７ｓｃＦｖ２－ノブ－Ｍｏｖ１９－ホール抗体の３つの精製された調製物（Ｐ１、Ｐ２、及びＰ３）のＳＤＳ ＰＡＧＥゲルを示す。ＦＲ５７ｓｃＦｖ２－ノブ－Ｍｏｖ１９－ホール抗体は、ノブインホール（ＫＩＨ）フォーマットのバイパラトピック抗体であり、抗体のノブ側にＦＲ５７ ｓｃＦｖがあり、抗体のホール側にｈｕＭｏｖ１９抗体配列がある。（実施例２を参照されたい。） ＦＲ５７ｓｃＦｖ２－ノブ－Ｍｏｖ１９－ホール抗体の０日目と１４日目の試料から得られたサイズ排除クロマトグラフィーの結果のオーバーレイを示す。ｍＡＵ：ミリ吸光度単位。（実施例２を参照されたい。） ｈｕＭｏｖ１９（「親」）抗体と比較した、ノブインホール（ＫＩＨ）バイパラトピック抗体（Ａ、Ｃ、及びＥ）、または４価のバイパラトピック抗体（Ｂ、Ｄ、及びＦ）の、結合（Ａ及びＢ）、内在化及びプロセシング（Ｃ及びＤ）、ならびに分解（Ｅ及びＦ）を示す。（実施例２を参照されたい。） ビヒクル、４価のバイパラトピック抗体を含むイムノコンジュゲート（「４価－ｓ－ＳＰＤＢ－ＤＭ４」）、またはｈｕＭｏｖ１９抗体を含むイムノコンジュゲート（「Ｍ－ｓ－ＳＰＤＢ－ＤＭ４」）の投与後の、ＯＶ－９０異種移植モデルにおける腫瘍体積の中央値を示す。（実施例４を参照されたい。） ビヒクル、４価－ｓ－ＳＰＤＢ－ＤＭまたはＭ－ｓ－ＳＰＤＢ－ＤＭ４の投与後の、Ｉｇｒｏｖ－１異種移植モデルにおける腫瘍体積の中央値を示す。（実施例４を参照されたい。） ビヒクル、ノブインホールのバイパラトピック抗体を含むイムノコンジュゲート（「ＫＩＨ－ｓ－ＳＰＤＢ－ＤＭ４」）、またはＭ－ｓ－ＳＰＤＢ－ＤＭ４の投与後の、ＯＶ－９０異種移植モデルにおける腫瘍体積の中央値を示す。（実施例４を参照されたい。） ＫＢ細胞に対するＦＲ５７抗体を含むイムノコンジュゲート（ＦＲ５７－Ｌ－ＤＭ２１）またはｈｕＭｏｖ１９抗体を含むイムノコンジュゲート（Ｍ－Ｌ－ＤＭ２１）の細胞傷害性活性を示す。（実施例５を参照されたい。） ＫＢ細胞（Ａ）、Ｉｇｒｏｖ－１細胞（Ｂ）、ＪＥＧ－３細胞（Ｃ）、Ｔ４７Ｄ細胞（Ｄ）、及びＪＨＯＳ－４細胞（Ｅ）を含む、ＦＲα陽性細胞株のパネルに対する、バイパラトピックＫＩＨ－ＤＭ２１イムノコンジュゲート、ｈｕＭｏｖ１９イムノコンジュゲートＭ－ＤＭ２１、及びｈｕＭｏｖ１９イムノコンジュゲートＭ－ｓ－ＳＰＤＢ－ＤＭ４の細胞傷害活性を示す。（実施例５を参照されたい。） ＫＢ細胞（Ａ）、Ｉｇｒｏｖ－１細胞（Ｂ）、ＪＥＧ－３細胞（Ｃ）、及びＴ４７Ｄ細胞（Ｄ）と混合された標的陰性細胞Ｎａｍａｌｗａ／ｌｕｃにおける、バイパラトピックＫＩＨ－Ｌ－ＤＭ２１イムノコンジュゲート、ｈｕＭｏｖ１９イムノコンジュゲートＭ－Ｌ－ＤＭ２１、及びｈｕＭｏｖ１９イムノコンジュゲートＭ－ｓ－ＳＰＤＢ－ＤＭ４のインビトロバイスタンダー殺傷活性を示す。（実施例５を参照されたい。） ＯＶ－９０異種移植モデルに対する、バイパラトピックイムノコンジュゲートＫＩＨ－Ｌ－ＤＭ２１及びｈｕＭｏｖ１９イムノコンジュゲートＭ－Ｌ－ＤＭ２１の投与後の腫瘍体積の中央値を示す。（実施例６を参照されたい。） ＯＶ－９０異種移植モデルに対する、バイパラトピックイムノコンジュゲートＫＩＨ－ｓ－ＳＰＤＢ－ＤＭ４及びｈｕＭｏｖ１９イムノコンジュゲートＭ－ｓ－ＳＰＤＢ－ＤＭ４の投与後の腫瘍体積の中央値を示す。（実施例６を参照されたい。） Ｉｓｈｉｋａｗａ異種移植モデルに対する、ビヒクル、ｈｕＭｏｖ１９イムノコンジュゲートＭ－Ｌ－ＤＭ２１、またはｈｕＭｏｖ１９イムノコンジュゲートＭ－ｓ－ＳＰＤＢ－ＤＭ４（「ＩＭＧＮ８５３」）と比較された、バイパラトピックイムノコンジュゲートＫＩＨ－Ｌ－ＤＭ２１イムノコンジュゲートの投与後の腫瘍体積の中央値を示す。（実施例６を参照されたい。） Ｉｇｒｏｖ－１異種移植モデルに対する、ビヒクル、ｈｕＭｏｖ１９イムノコンジュゲートＭ－Ｌ－ＤＭ２１、またはｈｕＭｏｖ１９イムノコンジュゲートＩＭＧＮ８５３と比較された、バイパラトピックＫＩＨ－Ｌ－ＤＭ２１イムノコンジュゲートの投与後の腫瘍体積の中央値を示す。（実施例６を参照されたい。） ＫＢ異種移植モデルに対する、ビヒクル、ｈｕＭｏｖ１９イムノコンジュゲートＭ－Ｌ－ＤＭ２１、またはｈｕＭｏｖ１９イムノコンジュゲートＭ－ｓ－ＳＰＤＢ－ＤＭ４と比較された、バイパラトピックＫＩＨ－Ｌ－ＤＭ２１イムノコンジュゲートの投与後の腫瘍体積の中央値を示す。（実施例７を参照されたい。） Ａ及びＢは、全抗体（ＴＡｂ：全抗体、コンジュゲート及び非コンジュゲート）と比較した、バイパラトピックＫＩＨ－ｓＳＰＤＢ－ＤＭ２１イムノコンジュゲート（Ａ）及びｈｕＭｏｖ１９イムノコンジュゲートＭ－ｓ－ＳＰＤＢ－ＤＭ４（「ＩＭＧＮ８５３」）（Ｂ）の毒性を示す。（実施例７を参照されたい。） ＩＭＧＮ８５３耐性ＫＢヒト子宮頸癌異種移植モデルに対する、ビヒクル、ｈｕＭｏｖ１９イムノコンジュゲートＭ９３４６Ａ－ＤＭ２１－Ｌ、またはｈｕＭｏｖ１９イムノコンジュゲートＩＭＧＮ８５３と比較された、バイパラトピックＫＩＨ－Ｌ－ＤＭ２１イムノコンジュゲートの投与後の腫瘍体積の中央値を示す。（実施例６を参照されたい。）
Ｉ．定義
本開示の理解を促すために、いくつかの用語及び語句を以下に定義する。
特に断りのない限り、「ヒト葉酸受容体１」、「ＦＲα」、「葉酸受容体アルファ（ＦＲ－α）」、または「ＦＯＬＲ１」という用語は、本明細書で使用される場合、任意の天然のヒトＦＲαポリペプチドを指す。「ＦＲα」という用語は、「全長」の未処理のＦＲαポリペプチド、ならびに細胞内の処理から生じるＦＲαポリペプチドの任意の形態を包含する。この用語はまた、ＦＲαの天然に存在するバリアント、例えば、スプライスバリアント及び対立遺伝子バリアントによってコードされるものを包含する。本明細書に記載されるＦＲαポリペプチドは、ヒト組織型から、もしくは別の供給源からなど、多様な供給源から単離され得るか、または組換えまたは合成法によって調製され得る。具体的に示される場合、「ＦＲα」は、ＦＲαポリペプチドをコードする核酸を指すために使用され得る。ヒトＦＲα配列は公知であり、例えば、（アイソフォームを含む）ＵｎｉＰｒｏｔＫＢアクセッション番号Ｐ１５３２８で公的に入手可能である配列を含む。本明細書で使用される場合、「ヒトＦＲα」という用語は、配列番号５３の配列を含むＦＲαを指す。
「抗ＦＲα抗体」または「ＦＲαに結合する抗体」という用語は、抗体がＦＲαを標的化する点において診断剤及び／または治療剤として有用になるように、十分な親和性でＦＲαに結合することができる抗体を指す。本明細書で使用される場合、そのような抗体には、例えば、二重特異性（例えば、バイパラトピック）抗体が含まれる。別段の定めがない限り、抗ＦＲα抗体の、無関係の非ＦＲαタンパク質への結合の程度は、例えばラジオイムノアッセイ（ＲＩＡ）により測定されたときに、抗体の、ＦＲαへの結合の約１０％未満である。ＦＲα抗体の例は当該技術分野で知られており、米国公開出願番号２０１２／０００９１８１及び同２０１２／０２８２１７５、ならびに米国特許第９，２００，０７３Ｂ２号、及びＰＣＴ公開ＷＯ２０１１／１０６５２８Ａ１に開示されており、これらのそれぞれは、その全体が参照により本明細書に組み込まれる。例示的な抗ＦＲα抗体及びその抗原結合断片の配列は、表１～８において提供される。
「ＩＭＧＮ８５３」（「ミルベツキシマブソラブタンシン」としても知られる）という用語は、ｈｕＭｏｖ１９（またはＭ９３４６Ａ）抗体、スルホＳＰＤＢリンカー、及びＤＭ４マイタンシノイドを含む本明細書に記載のイムノコンジュゲートを指す。「ｈｕＭｏ
ｖ１９」（または「Ｍ９３４６Ａ」）抗体は、配列番号４７の全長重鎖（以下の配列番号４７に関連して下線が付されている、可変重鎖配列配列番号２４を含む）及び配列番号４８の全長軽鎖（以下の配列番号４８に関連して下線が付されている、可変軽鎖配列配列番号１９を含む）を含む抗ＦＲα抗体である。
ｈｕＭｏｖ１９（Ｍ９３４６Ａ）抗体は、ブダペスト条約の条項に基づいて２０１０年４月７日に１０８０１ Ｕｎｉｖｅｒｓｉｔｙ Ｂｏｕｌｅｖａｒｄ，Ｍａｎａｓｓａｓ，ＶＡ ２０１１０にあるＡｍｅｒｉｃａｎ Ｔｙｐｅ Ｃｕｌｔｕｒｅ Ｃｏｌｌｅｃｔｉｏｎ（ＡＴＣＣ）に寄託されたプラスミドによってコードされており、ＡＴＣＣ寄託番号ＰＴＡ－１０７７２及びＰＴＡ－１０７７３または１０７７４を有している。ＤＭ４は、Ｎ２’－デアセチル－Ｎ２’－（４－メルカプト－４－メチル－１－オキソペンチル）マイタンシノイドを指す。「スルホＳＰＤＢ」は、Ｎ－スクシンイミジル４－（２－ピリジルジチオ）－２－スルホブタノエート）リンカーを指す。
特定の腫瘍、組織、細胞試料における「上昇した」ＦＲα、ＦＲαの「増加した発現」、またはＦＲαの「過剰発現」という用語は、同じ種類または起源の健常または非疾患（天然、野生型）の組織または細胞に存在するレベルよりも高いレベルで存在するＦＲα（ＦＲαポリペプチドまたはそのようなポリペプチドをコードする核酸）を指す。そのような増加した発現または過剰発現は、例えば、変異、遺伝子増幅、増加した転写、増加した翻訳、または増加したタンパク質の安定性によって引き起こされ得る。
ＦＲα発現は、免疫組織化学的に測定することができ、定義されたスコアを示す較正対照と比較して「染色強度スコア」または「染色均一性スコア」を与えることができる（例えば、強度がレベル３の較正対照と同等であれば強度スコア３が試験試料に与えられ、強度がレベル２の較正対照と同等であれば強度スコア２が試験試料に与えられる）。例えば、１、２、または３のスコアは、好ましくは、免疫組織化学によって２または３のスコアが、ＦＲαの増加した発現を示している。不均一または均一である染色の均一性はまた、ＦＲα発現を示す。染色強度及び染色均一性スコアは、単独で使用することも、組み合わせて使用することもできる（例えば、２ ｈｏｍｏ、２ ｈｅｔｅｒｏ、３ ｈｏｍｏ、
３ ｈｅｔｅｒｏなど）。染色の均一性は、特定の強度で染色された細胞のパーセンテージ（％）で表すこともできる（例えば、２５％の細胞が１、２、または３の強度で染色される；５０％の細胞が１、２、または３の強度で染色される；７０％の細胞が１、２、または３の強度で染色される）。別の例では、ＦＲα発現の増加は、対照の値（例えば、がんのない、またはＦＲα値が上昇していないがんのある対象からの組織または細胞における発現レベル）と比較して、少なくとも２倍、少なくとも３倍、または、少なくとも５倍の増加の検出によって決定することができる。ＦＲα発現は、免疫組織化学によって測定することができ、視覚的なスコアが与えられ、ＦＲα陽性は、１０倍以下の顕微鏡対物レンズでＦＲαの膜の染色が可視化される腫瘍細胞が５０％以上あることを指す。
「抗体」という用語は、標的、例えば、タンパク質、ポリペプチド、ペプチド、炭水化物、ポリヌクレオチド、脂質、またはこれらの組み合わせを、免疫グロブリン分子の可変領域内の少なくとも１つの抗原認識部位を介して認識しこれに特異的に結合する免疫グロブリン分子を意味する。本明細書で使用される場合、「抗体」という用語は、無傷のポリクローナル抗体、無傷のモノクローナル抗体、キメラ抗体、ヒト化抗体、ヒト抗体、抗体を含む融合タンパク質、及び抗体が所望の生物活性を示す限り任意の他の改変された免疫グロブリン分子を包含する。本明細書で使用される場合、そのような抗体には、例えば、二重特異性（例えば、バイパラトピック）抗体が含まれる。抗体は、それぞれ、アルファ、デルタ、イプシロン、ガンマ、及びミューと呼ばれる重鎖定常ドメインの識別性に基づいて、５つの主な免疫グロブリンクラス、すなわち、ＩｇＡ、ＩｇＤ、ＩｇＥ、ＩｇＧ、及びＩｇＭ、またはそれらのサブクラス（アイソタイプ）（ＩｇＧ１、ＩｇＧ２、ＩｇＧ３、ＩｇＧ４、ＩｇＡ１、及びＩｇＡ２）のいずれかであり得る。異なるクラスの免疫グロブリンは、異なるよく知られたサブユニット構造及び３次元構成を有する。抗体は、ネイキッドであるか、または毒素、放射性同位体等の他の分子にコンジュゲートすることができる。
「抗体断片」または「その抗体断片」という用語は、無傷の抗体の一部を指す。「抗原結合断片」とは、抗原に結合する無傷の抗体の一部を指す。抗原結合性断片は、無傷の抗体の抗原決定可変領域を含み得る。抗体断片の例としては、Ｆａｂ、Ｆａｂ’、Ｆ（ａｂ’）２、及びＦｖ断片、直線状抗体、及び一本鎖抗体が挙げられるがこれらに限定されない。抗体断片は、ネイキッドであるか、または毒素、放射性同位体等の他の分子にコンジュゲートすることができる。
「モノクローナル」抗体またはその抗原結合断片とは、単一の抗原決定基、すなわち、エピトープの抗原特異性の高い認識及び結合に関与する均一な抗体または抗原結合断片の集団を指す。これは、通常は異なる抗原決定基に対する異なる抗体を含むポリクローナル抗体とは対照的である。「モノクローナル」抗体またはその抗原結合断片という用語は、無傷かつ全長のモノクローナル抗体、ならびに抗体断片（例えば、Ｆａｂ、Ｆａｂ’、Ｆ（ａｂ’）２、Ｆｖ）、一本鎖（ｓｃＦｖ）変異体、抗体部分を含む融合タンパク質、及び抗原認識部位を含む任意の他の改変された免疫グロブリン分子を包含する。さらに、「モノクローナル」抗体またはその抗原結合断片は、ハイブリドーマ、ファージ選択、組換え発現、及びトランスジェニック動物が挙げられるがこれらに限定されないあらゆる方法で作製される抗体及びその抗原結合断片を指す。
「ヒト化」抗体またはその抗原結合断片という用語は、最小限の非ヒト（例えば、マウス）配列を含む特定の免疫グロブリン鎖、キメラ免疫グロブリン、またはそれらの断片である非ヒト（例えば、マウス）抗体または抗原結合断片の形態を指す。通常、ヒト化抗体またはその抗原結合断片は、ヒト免疫グロブリンであって、その相補性決定領域（ＣＤＲ）由来の残基が、所望の特異性、親和性、及び機能を有する非ヒト種（例えば、マウス、ラット、ウサギ、ハムスター）のＣＤＲ由来の残基で置き換えられている（「ＣＤＲグラ
フト化」）（Ｊｏｎｅｓ ｅｔ ａｌ．，Ｎａｔｕｒｅ ３２１：５２２－５２５（１９８６）；Ｒｉｅｃｈｍａｎｎ ｅｔ ａｌ．，Ｎａｔｕｒｅ ３３２：３２３－３２７（１９８８）；Ｖｅｒｈｏｅｙｅｎ ｅｔ ａｌ．，Ｓｃｉｅｎｃｅ ２３９：１５３４－１５３６（１９８８））。場合によっては、ヒト免疫グロブリンのＦｖフレームワーク領域（ＦＲ）残基は、所望の特異性、親和性、及び機能を有する非ヒト種由来の抗体または断片における対応する残基で置き換えられる。ヒト化抗体またはその抗原結合断片を、Ｆｖフレームワーク領域及び／または置き換えられた非ヒト残基内のいずれかでのさらなる残基の置換によってさらに改変し、抗体またはその抗原結合断片の特異性、親和性、及び／または機能を改善及び最適化することができる。一般に、ヒト化抗体またはその抗原結合断片は、非ヒト免疫グロブリンに対応するＣＤＲ領域の全てまたは実質的に全てを含む、少なくとも１つ、典型的には２つまたは３つの可変ドメインの実質的に全てを含むが、ＦＲ領域の全てまたは実質的に全ては、ヒト免疫グロブリンコンセンサス領域のものである。ヒト化抗体またはその抗原結合断片は、典型的にはヒト免疫グロブリンのものである免疫グロブリン定常領域またはドメイン（Ｆｃ）の少なくとも一部も含むことができる。ヒト化抗体を生成するために使用される方法の例は、米国特許第５，２２５，５３９号、Ｒｏｇｕｓｋａ ｅｔ ａｌ．，Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．，ＵＳＡ，９１（３）：９６９－９７３（１９９４）、及びＲｏｇｕｓｋａ ｅｔ ａｌ．，Ｐｒｏｔｅｉｎ Ｅｎｇ．９（１０）：８９５－９０４（１９９６）に記載されている。いくつかの実施形態では、「ヒト化抗体」は、表面再構成抗体である。
抗体の「可変領域」とは、抗体軽鎖の可変領域または抗体重鎖の可変領域を単独でまたは組み合わせて指す。重鎖及び軽鎖の可変領域はそれぞれ、超可変領域としても知られる３つの相補性決定領域（ＣＤＲ）によって接続された４つのフレームワーク領域（ＦＲ）からなる。それぞれの鎖内のＣＤＲは、ＦＲにより極めて近接して一緒に保持され、もう一方の鎖由来のＣＤＲと共に、抗体の抗原結合部位の形成に寄与する。ＣＤＲを決定するための技法が少なくとも２つ存在する：（１）種間の配列変化に基づくアプローチ（すなわち、Ｋａｂａｔ ｅｔ ａｌ．，Ｓｅｑｕｅｎｃｅｓ ｏｆ Ｐｒｏｔｅｉｎｓ ｏｆ
Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｉｃａｌ Ｉｎｔｅｒｅｓｔ，（５ｔｈ ｅｄ．，１９９１，Ｎａｔｉｏｎａｌ Ｉｎｓｔｉｔｕｔｅｓ ｏｆ Ｈｅａｌｔｈ，Ｂｅｔｈｅｓｄａ Ｍｄ．），「Ｋａｂａｔ」）、及び（２）抗原抗体複合体の結晶学的研究に基づくアプローチ（Ａｌ－ｌａｚｉｋａｎｉ ｅｔ ａｌ，Ｊ．Ｍｏｌｅｃ．Ｂｉｏｌ．２７３：９２７－９４８（１９９７））。さらに、当該技術分野ではこれら２つの方法の組み合わせを用いてＣＤＲを決定することもある。
「定常」領域は、抗体を抗原に結合することに直接関与はしないが、抗体依存性の細胞傷害性における抗体の関与などのさまざまなエフェクター機能を示す。
Ｋａｂａｔナンバリングシステムは、一般に、可変ドメイン内の残基（大まかに、軽鎖の１～１０７残基及び重鎖の１～１１３残基）に言及する際に使用される（例えば、Ｋａｂａｔ ｅｔ ａｌ．，Ｓｅｑｕｅｎｃｅｓ ｏｆ Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｉｃａｌ Ｉｎｔｅｒｅｓｔ．５ｔｈ Ｅｄ．，１９９１，Ｎａｔｉｏｎａｌ Ｉｎｓｔｉｔｕｔｅｓ ｏｆ Ｈｅａｌｔｈ，Ｂｅｔｈｅｓｄａ，Ｍｄ．）（「Ｋａｂａｔ」）。
Ｋａｂａｔのアミノ酸位置のナンバリングとは、Ｋａｂａｔ ｅｔ ａｌ．（Ｓｅｑｕｅｎｃｅｓ ｏｆ Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｉｃａｌ Ｉｎｔｅｒｅｓｔ．５ｔｈ Ｅｄ．，１９９１，Ｎａｔｉｏｎａｌ Ｉｎｓｔｉｔｕｔｅｓ ｏｆ Ｈｅａｌｔｈ，Ｂｅｔｈｅｓｄａ，Ｍｄ．）、（「Ｋａｂａｔ」）における抗体の編成の重鎖可変ドメインまたは軽鎖可変ドメインに使用されるナンバリングシステムを指す。このナンバリングシステムを使用すると、実際の直鎖状アミノ酸配列は、可変ドメインのＦＲもしくはＣＤＲの短縮、またはそれへの挿入に対応するより少ないアミノ酸または追加のアミノ酸を含み得る。例
えば、重鎖可変ドメインは、Ｈ２の残基５２の後に単一のアミノ酸挿入（Ｋａｂａｔに従う残基５２ａ）、ならびに重鎖ＦＲ残基８２の後に挿入された残基（例えば、Ｋａｂａｔに従う残基８２ａ、８２ｂ、及び８２ｃなど）を含み得る。残基のＫａｂａｔナンバリングは、「標準の」Ｋａｂａｔナンバリング配列との抗体の配列の相同性領域でのアラインメントによって所与の抗体について決定され得る。一方、Ｃｈｏｔｈｉａは構造ループの位置に言及する（Ｃｈｏｔｈｉａ ａｎｄ Ｌｅｓｋ，Ｊ．Ｍｏｌ．Ｂｉｏｌ．１９６：９０１－９１７（１９８７））。Ｋａｂａｔナンバリング規則を用いてナンバリングした場合、Ｃｈｏｔｈｉａ ＣＤＲ－Ｈ１ループの末端は、ループの長さに応じてＨ３２とＨ３４の間で異なる（これは、ＫａｂａｔナンバリングスキームがＨ３５ＡとＨ３５Ｂに挿入を置くためであり、３５Ａも３５Ｂも存在しない場合、このループは３２で終わり、３５Ａのみが存在する場合、このループは３３で終わり、３５Ａ及び３５Ｂの両方が存在する場合、このループは３４で終わる）。ＡｂＭ超可変領域は、ＫａｂａｔのＣＤＲとＣｈｏｔｈｉａの構造的ループとの折衷物を表し、Ｏｘｆｏｒｄ ＭｏｌｅｃｕｌａｒのＡｂＭ抗体モデリングソフトウェアによって使用されている。
「ヒト」抗体またはその抗原結合断片という用語は、ヒトによって産生される抗体もしくはその抗原結合断片、当該技術分野で知られている任意の技術を使用して作製された、ヒトによって産生される抗体もしくはその抗原結合断片に対応するアミノ酸配列を有する抗体もしくはその抗原結合断片を意味する。ヒト抗体またはその抗原結合断片のこの定義には、無傷または全長の抗体及びその断片が含まれる。
「キメラ」抗体またはその抗原結合断片という用語は、アミノ酸配列が２つ以上の種に由来する抗体またはその抗原結合断片を指す。典型的には、軽鎖と重鎖の両方の可変領域は、所望の特異性、親和性、及び機能を有する哺乳動物の一種（例えば、マウス、ラット、ウサギ等）由来の抗体またはその抗原結合断片の可変領域に対応し、その定常領域は、別の種（通常はヒト）由来の抗体またはその抗原結合断片の配列に対して相同であり、その種での免疫応答の誘発を回避する。
「エピトープ」または「抗原決定基」という用語は、本明細書では互換的に使用され、特定の抗体によって認識され特異的に結合されることが可能な抗原の部分を指す。抗原がポリペプチドの場合、エピトープは、連続アミノ酸とタンパク質の三次フォールディングによって並置された非連続アミノ酸の両方から形成し得る。連続アミノ酸から形成されたエピトープは、典型的には、タンパク質変性の際に保持されるが、三次フォールディングによって形成されたエピトープは、典型的には、タンパク質変性の際に失われる。エピトープは、典型的には、固有の空間立体配座内に、少なくとも３個、より一般的には、少なくとも５個、または８～１０個のアミノ酸を含む。
「結合親和性」とは、概して、分子（例えば、抗体）の単一の結合部位とその結合パートナー（例えば、抗原）との間の非共有相互作用の合計の強度を指す。別段示されない限り、本明細書において使用される場合、「結合親和性」は、結合対のメンバー（例えば、抗体と抗原）の間の１：１相互作用を反映する固有の結合親和性を指す。分子ＸのそのパートナーＹに対する親和性は、一般的に解離定数（Ｋｄ）によって表すことができる。親和性は、本明細書に記載される方法を含む、当該技術分野で既知の一般的な方法によって測定することができる。低親和性抗体は、一般に、抗原にゆっくり結合し、容易に解離する傾向があるが、高親和性抗体は、一般に、抗原により早く結合し、より長く結合したままである傾向がある。結合親和性を測定するさまざまな方法が当該技術分野で既知であり、これらのいずれも、本開示の目的のために使用することができる。
結合親和性に言及するために本明細書で使用される場合の「またはそれよりよい」とは、分子とその結合パートナーとの間のより強い結合を指す。本明細書で使用される場合の「またはそれよりよい」とは、より小さい数値のＫｄ値によって表されるより強い結合を指す。例えば、抗原に対する親和性が「０．６ｎＭまたはそれよりよい」抗体は、抗原に対する抗体の親和性は、＜０．６ｎＭ、すなわち、０．５９ｎＭ、０．５８ｎＭ、０．５７ｎＭなど、または０．６ｎＭ未満の任意の値である。
「特異的に結合する」とは、一般に、抗体がその抗原結合ドメインを介してエピトープに結合すること、及び結合が抗原結合ドメインとエピトープとの間にある程度の相補性を伴うことを意味する。この定義によれば、抗体は、それがランダムな無関係のエピトープに結合するよりも容易にその抗原結合ドメインを介してそのエピトープに結合する場合、エピトープに「特異的に結合する」と言われる。「特異性」という用語は、本明細書では、特定の抗体が特定のエピトープに結合する相対的親和性を限定するために使用される。例えば、抗体「Ａ」は、所与のエピトープに対して抗体「Ｂ」よりも高い特異性を有するとみなされ得るか、または抗体「Ａ」は、関連するエピトープ「Ｄ」に対するよりも高い特異性でエピトープ「Ｃ」に結合すると言われ得る。
「優先的に結合する」とは、抗体が、関連する、同様の、同種の、または類似のエピトープに対して結合するよりも容易にあるエピトープに特異的に結合することを意味する。したがって、所与のエピトープに「優先的に結合する」抗体は、そのような抗体が関連するエピトープに交差反応する場合があるとしても、関連するエピトープに対するよりもそのエピトープに対して結合する可能性が高い。
ある抗体は、参照抗体がエピトープに結合するのをある程度ブロックする程度まで、そのエピトープ、または重複エピトープに優先的に結合する場合、所与のエピトープに対する参照抗体の結合を「競合的に阻害する」と言われる。競合的阻害は、当該技術分野で既知の任意の方法、例えば、競合ＥＬＩＳＡアッセイによって測定され得る。ある抗体は、所与のエピトープに対する参照抗体の結合を、少なくとも９０％、少なくとも８０％、少なくとも７０％、少なくとも６０％、または少なくとも５０％競合的に阻害すると言われ得る。
本明細書で使用される場合、「実質的に同様の」または「実質的に同じ」という語句は、２つの数値（概して、一方は本開示の抗体に関連し、他方は参照／比較抗体に関連する）間の十分に高い類似度を表し、これは、当業者が、２つの値の間の差異を、当該値（例えば、Ｋｄ値）によって測定される生物学的特徴において生物学的及び／または統計的有意性がほとんどないものとみなすようなものである。当該２つの値の差は、参照／比較抗体の値に応じて、約５０％未満、約４０％未満、約３０％未満、約２０％未満、または約１０％未満とすることができる。
「ポリペプチド」、「ペプチド」、及び「タンパク質」という用語は、本明細書では互換的に使用され、任意の長さのアミノ酸のポリマーを指す。ポリマーは、直鎖状であっても分岐鎖状であってもよく、修飾アミノ酸を含んでもよく、非アミノ酸によって中断されていてもよい。この用語は、天然にまたは介入によって修飾されたアミノ酸ポリマーも包含し、例えば、ジスルフィド結合形成、グリコシル化、脂質化、アセチル化、リン酸化、または標識成分とのコンジュゲーションなどの任意の他の操作または修飾を包含する。この定義に同様に含まれるのは、例えば、アミノ酸（例えば、非天然アミノ酸等を含む）の１つ以上の類似体を含むポリペプチド、及び当該技術分野で既知の他の修飾である。本開示のポリペプチドは抗体に基づいているため、ある特定の実施形態では、ポリペプチドは、一本鎖または結合鎖として存在し得ることが理解される。
本明細書において互換的に用いられる、「ポリヌクレオチド」または「核酸」という用語は、任意の長さのヌクレオチドのポリマーを指し、ＤＮＡ及びＲＮＡを含む。ヌクレオチドは、デオキシリボヌクレオチド、リボヌクレオチド、修飾ヌクレオチドもしくは塩基、及び／またはそれらの類似体、またはＤＮＡポリメラーゼまたはＲＮＡポリメラーゼによってポリマーに組み込まれ得る任意の基質であり得る。ポリヌクレオチドは、メチル化ヌクレオチド及びそれらの類似体などの修飾ヌクレオチドを含んでよい。存在する場合、ヌクレオチド構造への修飾は、ポリマーの組立て前または後に付与され得る。ヌクレオチドの配列は、非ヌクレオチド構成要素によって中断され得る。ポリヌクレオチドは、標識構成要素とのコンジュゲーション等によって、重合後にさらに修飾することができる。他のタイプの修飾としては、例えば、その他の修飾としては、例えば、「キャップ」、天然に存在するヌクレオチドのうちの１つ以上を類似体で置換したもの、ヌクレオチド間の修飾として、例えば、非電荷の結合を有するもの（メチルホスホネート、ホスホトリエステル、ホスホアミデート、カバメートなど）や電荷の結合を持つもの（ホスホロチオエート、ホスホロジチオエートなど）、ペンダント部位を含むもの、例えば、タンパク質（例えば、ヌクレアーゼ、毒素、抗体、シグナルペプチド、プライ－Ｌ－リジンなど）、インターカレーターを有するもの（例えば、アクリジン、プソラレンなど）、キレーターを含むもの（例えば、金属、放射性金属、ホウ素、酸化性金属など）、アルキル化剤を含むもの、修飾された結合を有するもの（例えば、αアノメリック核酸など）、ならびにポリヌクレオチド（複数可）の未修飾の形態などがある。さらに、糖内に通常存在するヒドロキシル基のうちのいずれかは、例えば、ホスホン酸基、リン酸基により置換されるか、標準保護基により保護されるか、または活性化されて追加のヌクレオチドへの追加の結合を調製し得るか、または固体支持体にコンジュゲートされてもよい。５’及び３’末端ＯＨをリン酸化するか、またはアミンもしくは１～２０個の炭素原子の有機キャッピング基部分と置換することができる。他のヒドロキシルは、標準保護基に誘導体化されてもよい。ポリヌクレオチドは、例えば、２’－Ｏ－メチル－、２’－Ｏ－アリル、２’－フルオロ－もしくは２’－アジド－リボース、炭素環式糖類似体、α－アノマー糖、エピマー糖、例えば、アラビノース、キシロース、もしくはリキソース、ピラノース糖、フラノース糖、セドヘプツロース、非環式類似体、及び脱塩基ヌクレオシド類似体、例えば、メチルリボシドを含む、一般に当該技術分野において既知のリボースまたはデオキシリボース糖の類似形態を含むこともできる。１つ以上のホスホジエステル結合は、代替連結基に置き換えられてもよい。これらの代替連結基としては、非限定的に、リン酸塩がＰ（Ｏ）Ｓ（「チオエート」）、Ｐ（Ｓ）Ｓ（「ジチオエート」）、″（Ｏ）ＮＲ２（「アミデート」）、Ｐ（Ｏ）Ｒ、Ｐ（Ｏ）ＯＲ’、ＣＯ、またはＣＨ２（「ホルムアセタール」）に置き換えられる実施形態を含み、それぞれのＲまたはＲ’は、独立してＨであるか、または置換もしくは非置換アルキル（１～２０Ｃ）（任意選択でエーテル（－－Ｏ－－）結合を含む）、アリール、アルケニル、シクロアルキル、シクロアルケニル、またはアラルジルである。ポリヌクレオチドの全ての結合が同一である必要はない。前述の説明は、ＲＮＡ及びＤＮＡを含む、本明細書で言及される全てのポリヌクレオチドに適用される。
「ベクター」という用語は、宿主細胞において目的の１つ以上の遺伝子（複数可）または配列（複数可）を送達し、任意選択で発現することができる構築物を意味する。ベクターの例としては、ウイルスベクター、ネイキッドＤＮＡまたはＲＮＡ発現ベクター、プラスミド、コスミドまたはファージベクター、カチオン性縮合剤に結合するＤＮＡまたはＲＮＡ発現ベクター、リポソームにカプセル化されたＤＮＡまたはＲＮＡ発現ベクター、及びプロデューサー細胞などの特定の真核細胞が挙げられるが、これらに限定されない。
「単離された」ポリペプチド、抗体、ポリヌクレオチド、ベクター、細胞、または組成物は、天然には見られない形態のポリペプチド、抗体、ポリヌクレオチド、ベクター、細胞、または組成物である。単離されたポリペプチド、抗体、ポリヌクレオチド、ベクター、細胞、または組成物には、もはやそれらが天然に見られる形態ではない程度まで精製されたものが含まれる。いくつかの実施形態では、単離された抗体、ポリヌクレオチド、ベクター、細胞、または組成物は、実質的に純粋である。
本明細書で使用される場合、「実質的に純粋」とは、少なくとも５０％純粋（すなわち、汚染物質を含まない）、少なくとも９０％純粋、少なくとも９５％純粋、少なくとも９８％純粋、または少なくとも９９％純粋である物質を指す。
２つ以上の核酸またはポリペプチドの文脈における「同一」または「同一性パーセント」という用語は、配列同一性の一部としていずれかの保存的アミノ酸置換を考慮せずに、最大の対応のために比較及び整列された場合（必要に応じてギャップを導入）に、同一であるか、または同一であるヌクレオチドまたはアミノ酸残基の特定のパーセンテージを有する２つ以上の配列またはサブ配列を指す。同一性パーセントは、配列比較ソフトウェアまたはアルゴリズムを使用して、または目視検査によって測定できる。アミノ酸またはヌクレオチド配列のアラインメントを得るために使用することができるさまざまなアルゴリズム及びソフトウェアが当該技術分野で知られている。配列アラインメントアルゴリズムのそのような非限定的な例の１つは、Ｋａｒｌｉｎ ｅｔ ａｌ，Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．，８７：２２６４－２２６８（１９９０）に記載され、Ｋａｒｌｉｎ
ｅｔ ａｌ．，Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．，９０：５８７３－５８７７（１９９３）において改変され、ＮＢＬＡＳＴ及びＸＢＬＡＳＴプログラムに組み込まれている（Ａｌｔｓｃｈｕｌ ｅｔ ａｌ．，Ｎｕｃｌｅｉｃ Ａｃｉｄｓ Ｒｅｓ．，２５：３３８９－３４０２（１９９１））アルゴリズムである。特定の実施形態では、ギャップ付きＢＬＡＳＴは、Ａｌｔｓｃｈｕｌ ｅｔ ａｌ．，Ｎｕｃｌｅｉｃ Ａｃｉｄｓ
Ｒｅｓ．２５：３３８９－３４０２（１９９７）に記載されているように使用され得る。ＢＬＡＳＴ－２、ＷＵ－ＢＬＡＳＴ－２（Ａｌｔｓｃｈｕｌ ｅｔ ａｌ．，Ｍｅｔｈｏｄｓ ｉｎ Ｅｎｚｙｍｏｌｏｇｙ，２６６：４６０－４８０（１９９６））、ＡＬＩＧＮ、ＡＬＩＧＮ－２（Ｇｅｎｅｎｔｅｃｈ，Ｓｏｕｔｈ Ｓａｎ Ｆｒａｎｃｉｓｃｏ，Ｃａｌｉｆｏｒｎｉａ）、またはＭｅｇａｌｉｇｎ（ＤＮＡＳＴＡＲ）は、配列を整列させるために使用できる追加の公的に利用可能なソフトウェアプログラムである。特定の実施形態では、２つのヌクレオチド配列間の同一性パーセントは、ＧＣＧソフトウェアのＧＡＰプログラムを使用して決定される（例えば、ＮＷＳｇａｐｄｎａ．ＣＭＰマトリックスで、４０、５０、６０、７０、または９０のギャップウェイト、及び１、２、３、４、５、または６の長さのウェイトを使用して）。特定の代替的な実施形態では、Ｎｅｅｄｌｅｍａｎ ａｎｄ Ｗｕｎｓｃｈ（Ｊ．Ｍｏｌ．Ｂｉｏｌ．（４８）：４４４－４５３（１９７０））のアルゴリズムを組み入れた、ＧＣＧソフトウェアパッケージのＧＡＰプログラムは、２つのアミノ酸配列間の同一性パーセントを決定するのに使用できる（例えば、Ｂｌｏｓｓｕｍ ６２マトリックスまたはＰＡＭ２５０マトリックスのいずれかで、１６、１４、１２、１０、８、６、または４のギャップウェイト、及び１、２、３、４、または５の長さのウェイトを使用して）。代替的に、特定の実施形態では、ヌクレオチドまたはアミノ酸配列間の同一性パーセントは、Ｍｙｅｒｓ ａｎｄ Ｍｉｌｌｅｒ（ＣＡ
ＢＩＯＳ，４：１１－１７（１９８９））のアルゴリズムを使用して決定される。例えば、同一性パーセントは、ＡＬＩＧＮプログラム（バージョン２．０）を使用し、残基表、１２のギャップ長ペナルティ、４のギャップペナルティと共にＰＡＭ１２０を使用して決定できる。特定のアラインメントソフトウェアによる最大アラインメントの適切なパラメーターは、当業者によって決定できる。特定の実施形態では、アラインメントソフトウェアのデフォルトパラメーターが使用される。特定の実施形態では、第２の配列アミノ酸に対する第１のアミノ酸配列の同一性パーセント「Ｘ」は、１００×（Ｙ／Ｚ）として計算され、式中、Ｙは第１と第２の配列のアラインメントで同一の一致としてスコア付けされたアミノ酸残基の数（目視検査または特定の配列アラインメントプログラムによってアラインメントされた場合の）であり、Ｚは第２の配列の残基の総数である。第１の配列の長さが第２の配列よりも長い場合、第２の配列に対する第１の配列の同一性パーセントは、第１の配列に対する第２の配列の同一性パーセントよりも長くなる。
非限定的な例として、特定のポリヌクレオチドが、参照配列に対して、特定のパーセンテージの「配列同一性」を有するかどうか（例えば、少なくとも８０％同一、少なくとも８５％同一、少なくとも９０％同一、及びいくつかの実施形態では、少なくとも９５％、９６％、９７％、９８％、または９９％同一）は、特定の実施形態では、Ｂｅｓｔｆｉｔプログラム（Ｗｉｓｃｏｎｓｉｎ Ｓｅｑｕｅｎｃｅ Ａｎａｌｙｓｉｓ Ｐａｃｋａｇｅ，Ｖｅｒｓｉｏｎ ８ ｆｏｒ Ｕｎｉｘ（登録商標），Ｇｅｎｅｔｉｃｓ Ｃｏｍｐｕｔｅｒ Ｇｒｏｕｐ，Ｕｎｉｖｅｒｓｉｔｙ Ｒｅｓｅａｒｃｈ Ｐａｒｋ，５７５ Ｓｃｉｅｎｃｅ Ｄｒｉｖｅ，Ｍａｄｉｓｏｎ，ＷＩ ５３７１１）を使用して決定できる。Ｂｅｓｔｆｉｔは、Ｓｍｉｔｈ ａｎｄ Ｗａｔｅｒｍａｎ（Ａｄｖａｎｃｅｓ ｉｎ Ａｐｐｌｉｅｄ Ｍａｔｈｅｍａｔｉｃｓ ２：４８２－４８９（１９８１））のローカル相同性アルゴリズムを使用して、２つの配列間の相同性の最良のセグメントを見つける。Ｂｅｓｔｆｉｔまたは任意の他の配列アライメントプログラムを使用して、特定の配列が、例えば本開示による参照配列と９５％同一であるかどうかを決定するとき、パラメーターは、同一性のパーセンテージが参照ヌクレオチド配列の全長にわたって計算され、参照配列内のヌクレオチドの総数の最大５％の相同性のギャップが許容されるように設定される。
「保存的アミノ酸置換」とは、１つのアミノ酸残基が、類似の側鎖を有する別のアミノ酸残基に置き換えられている置換である。類似の側鎖を有するアミノ酸残基のファミリーは、当該技術分野において定義され、塩基性側鎖（例えば、リジン、アルギニン、ヒスチジン）、酸性側鎖（例えば、アスパラギン酸、グルタミン酸）、非荷電極性側鎖（例えば、グリシン、アスパラギン、グルタミン、セリン、スレオニン、チロシン、システイン）、非極性側鎖（例えば、アラニン、バリン、ロイシン、イソロイシン、プロリン、フェニルアラニン、メチオニン、トリプトファン）、β分岐側鎖（例えば、スレオニン、バリン、イソロイシン）、及び芳香族側鎖（例えば、チロシン、フェニルアラニン、トリプトファン、ヒスチジン）を有するアミノ酸残基を含む。例えば、チロシンをフェニルアラニンに置換することは、保存的置換である。いくつかの実施形態では、本開示のポリペプチド及び抗体の配列における保存的置換は、ポリペプチドまたは抗体が結合する抗原（複数可）、すなわち、ＦＲαに対する、アミノ酸配列を含むポリペプチドまたは抗体の結合を阻害しない。抗原結合を排除しないヌクレオチド及びアミノ酸の保存的置換を同定する方法は、当該技術分野で周知である（例えば、Ｂｒｕｍｍｅｌｌ ｅｔ ａｌ．，Ｂｉｏｃｈｅｍ．３２：１１８０－１ １８７（１９９３）；Ｋｏｂａｙａｓｈｉ ｅｔ ａｌ．Ｐｒｏｔｅｉｎ Ｅｎｇ．１２（１０）：８７９－８８４（１９９９）；及びＢｕｒｋｓ ｅｔ ａｌ．Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ ９４：．４１２－４１７（１９９７）を参照されたい）。
「二重特異性抗体」は、２つの異なるエピトープに結合する抗体を指す。エピトープは
、同じ標的抗原上にあってもよく、異なる標的抗原上にあってもよい。
「バイパラトピック抗体」は、同じ標的抗原（例えば、ＦＲα）上の２つの異なる重複しないエピトープに結合する二重特異性抗体である。
いくつかの実施形態では、本明細書で開示されるＦＲα抗体またはその抗原結合断片は、多価分子である。本出願内で使用される場合、「価」という用語は、抗体分子内に特定の数の結合部位が存在することを意味する。例えば、本発明による天然の抗体または全長抗体は、２つの結合部位を有し、「２価」である。「４価」という用語は、抗原結合タンパク質中の４つの結合部位が存在することを意味する。「３価」という用語は、抗体分子内に３つの結合部位が存在することを意味する。本明細書で使用される場合、「二重特異性、４価」という用語は、少なくとも１つが第１の抗原に結合し、少なくとも１つが第２の抗原または抗原の別のエピトープに結合する４つの抗原結合部位を有する本発明による抗原結合タンパク質を意味する。
本明細書で使用される場合、「イムノコンジュゲート」または「コンジュゲート」という用語は、細胞結合剤に連結され、一般式：Ｃ－Ｌ－Ａによって定義される化合物またはその誘導体を指し、式中、Ｃ＝細胞毒素、Ｌ＝リンカー、及びＡ＝抗体またはその抗原結合断片（例えば、抗ＦＲα抗体または抗体断片）である。イムノコンジュゲートは、逆の順序：Ａ－Ｌ－Ｃの一般式によって定義することもできる。
「リンカー」は、化合物、通常はマイタンシノイドなどの薬物である化合物を、例えば、抗ＦＲα抗体またはその抗原結合断片などの細胞結合剤に、安定した共有結合で連結することができる任意の化学的部分である。リンカーは、化合物または抗体が活性を維持する条件下で、切断（例えば、酸誘導性の切断、光誘導性の切断、ペプチダーゼ誘導性の切断、エステラーゼ誘導性の切断、またはジスルフィド結合の切断）に対して感受性であっても実質的に耐性であってもよい。適切なリンカーは当該技術分野で周知であり、例えば、ジスルフィド基及びチオエーテル基が含まれる。
本明細書で使用される場合、「細胞傷害性薬剤」という用語は、１つ以上の細胞機能を阻害するかもしくは阻止する、及び／または細胞死を引き起こす、物質を指す。いくつかの実施形態では、細胞傷害性薬剤は、マイタンシノイド、例えば、ＤＭ２１である。ＤＭ２１を含むイムノコンジュゲートはＷＯ２０１８／１６０５３９Ａ１に開示されており、参照によりその全体が本明細書に組み込まれる。
イムノコンジュゲートは、以下の構造式によって表される「ＤＭ２１Ｃ」の部位特異的ＤＭ２１結合を含むことができる：
式中Ｄ１は：
である。
イムノコンジュゲートはまた、以下の構造式によって表される、リジン結合ＤＭ２１「Ｌ－ＤＭ２１」、「ＤＭ２１－Ｌ」、または「ＤＭ２１Ｌ」を含み得：
式中、Ｄ１は上に示され、リンカー、例えば、γ－マレイミド酪酸Ｎ－スクシンイミジルエステル（ＧＭＢＳ）またはＮ－（γ－マレイミドブトリルオキシ）スルホスクシンイミドエステル（スルホ－ＧＭＢＳまたはｓＧＭＢＳ）リンカーによって抗体に結合されている。ＧＭＢＳ及びスルホ－ＧＭＢＳ（またはｓＧＭＢＳ）リンカーは当該技術分野で知られており、以下の構造式で表すことができる：
「任意選択的な」または「任意選択的で」は、引き続いて記載された状況が起こっても起こらなくてもよいこと、そのため本出願が、その状況が起こる場合及びそれが起こらない場合を含むことを意味する。例えば、「任意選択で置換された」という語句は、非水素置換基が所与の原子上に存在しても、存在しなくてもよいことを意味し、したがって、本出願は、非水素置換基が存在する構造及び非水素置換基が存在しない構造を含む。
「がん」及び「がん性」という用語は、細胞集団の制御されていない細胞増殖を特徴とする哺乳動物における生理学的状態を指すか、または説明する。がんの例としては、がん腫、リンパ腫、芽細胞腫、肉腫、及び白血病が含まれるが、これらに限定されない。そのようながんのさらに特定の例としては、卵管癌、扁平上皮細胞癌、小細胞肺癌、非小細胞肺癌、肺腺癌、肺の扁平上皮癌、腹膜癌、肝細胞癌、消化器癌、膵臓癌、神経膠腫、子宮頸癌、卵巣癌、肝臓癌、膀胱癌、肝細胞腫、乳癌、結腸癌、結腸直腸癌、子宮内膜または子宮癌、唾液腺癌、腎臓癌、肝臓癌、前立腺癌、外陰部癌、甲状腺癌、肝臓癌、及び種々の種類の頭頸部癌が挙げられる。がんは、ＦＲαを発現するがんであってよい（「ＦＲα発現がん」）。
「がん細胞」、「腫瘍細胞」という用語、及び文法上の同等物は、腫瘍細胞集団の大部分を構成する非腫瘍形成細胞と腫瘍形成性幹細胞（がん幹細胞）の両方を含む、腫瘍または前がん病変に由来する細胞の総集団を指す。本明細書で使用される場合、「腫瘍細胞」という用語は、それらの腫瘍細胞をがん幹細胞から区別するために再生及び分化する能力を欠く腫瘍細胞のみを指す場合、「非腫瘍形成性」という用語によって修飾される。
「進行」がんとは、元の部位または器官の外に、局所浸潤または転移のいずれかによって広がったがんである。「進行」がんという用語は、局所的に進行した疾患と転移性疾患の両方を含む。
「転移性」がんは、身体の１つの部分から身体の別の部分へ広がっているがんを指す。
「不応性」がんとは、化学療法剤などの抗腫瘍剤ががん患者に投与されているにもかかわらず進行するがんである。
「再発性」がんとは、初期療法に応答した後に、初期の部位または遠位部位で再増殖したがんである。
「再発」患者は、寛解後にがんの兆候または症状を有する者である。任意選択で、患者は、アジュバントまたはネオアジュバント療法後に再発した。
「維持療法」という用語は、最初の治療後にがんが消失した後にがんが再発するのを防ぐための一助として行われる療法を指す。
「対象」という用語は、特定の治療を受けることになる、ヒト、非ヒト霊長類、齧歯類などを含むがこれらに限定されない任意の動物（例えば、哺乳動物）を指す。「対象」及び「患者」という用語は、本明細書では、ヒト対象に言及して互換的に使用される。
「医薬製剤」という用語は、活性成分の生物学的活性が有効になるような形態であり、かつ製剤が投与される対象に許容できない程度に毒性のさらなる成分を含まない製剤を指す。製剤は無菌にすることができる。
本明細書で開示される抗体、イムノコンジュゲート、または他の薬物の「有効量」は、具体的に述べられた目的を実行するのに十分な量である。
「治療有効量」という用語は、対象または哺乳動物の疾患または障害を「治療」するのに有効な抗体、イムノコンジュゲート、または他の薬物の量を指す。がんの場合、治療有効量の薬物はがん細胞の数を減らすことができ、腫瘍サイズまたは腫瘍量を軽減することができ、末梢器官へのがん細胞の浸潤を阻害する（すなわち、ある程度遅くし、特定の実
施形態では停止する）ことができ、腫瘍転移を阻害する（すなわち、ある程度遅くし、特定の実施形態では停止する）ことができ、腫瘍増殖をある程度阻害することができ、がんに関連する１つ以上の症状をある程度緩和することができ、及び／または無増悪生存期間（ＰＦＳ）、無病生存期間（ＤＦＳ）、または全生存期間（ＯＳ）の増加、完全奏効（ＣＲ）、部分奏効（ＰＲ）、場合によっては安定疾患（ＳＤ）の増加、進行性疾患（ＰＤ）の減少、進行までの時間（ＴＴＰ）の短縮、またはそれらの任意の組み合わせなどの良好な奏効をもたらす。本明細書の「治療すること」の定義を参照されたい。薬物が増殖を妨げ及び／または既存のがん細胞を殺傷し得る限りにおいて、それは細胞増殖抑制性及び／または細胞傷害性であり得る。
「治療すること」または「治療」または「治療する」または「緩和すること」または「緩和する」などの用語は、診断された病的状態または障害の症状を治癒、減速、軽減、及びまたはその進行を停止する治療手段を指す。したがって、治療が必要なものには、すでに障害があると診断されたもの、またはその疑いがあるものが含まれる。特定の実施形態では、患者が以下のうちの１つ以上を示す場合、対象は、本開示の方法に従ってがんについて首尾よく「治療されている」：がん細胞の数の減少または完全な欠如；腫瘍サイズの縮小；例えば、軟部組織及び骨へのがんの広がりを含む、末梢器官へのがん細胞浸潤の阻害または欠如；腫瘍転移の阻害または欠如；腫瘍増殖の阻害または欠如；特定の癌に関連する１つ以上の症状の緩和；罹患率と死亡率の低下；生活の質の向上；腫瘍の腫瘍形成性、腫瘍形成頻度、または腫瘍形成能の低下；腫瘍内のがん幹細胞の数または頻度の減少；腫瘍形成性細胞の非腫瘍形成性状態への分化；無増悪生存期間（ＰＦＳ）、無病生存期間（ＤＦＳ）、または全生存期間（ＯＳ）の増加、完全奏効（ＣＲ）、部分奏効（ＰＲ）、安定疾患（ＳＤ）、進行性疾患（ＰＤ）の減少、進行までの時間（ＴＴＰ）の短縮、またはそれらの任意の組み合わせ。
本明細書で使用される場合、「投与する」、「投与すること」、「投与」などの用語は、所望の生物作用部位へのイムノコンジュゲートの送達を可能にするために使用され得る方法を指す。本明細書に記載の薬剤及び方法と共に使用することができる投与技術は、例えば、Ｇｏｏｄｍａｎ ａｎｄ Ｇｉｌｍａｎ，Ｔｈｅ Ｐｈａｒｍａｃｏｌｏｇｉｃａｌ Ｂａｓｉｓ ｏｆ Ｔｈｅｒａｐｅｕｔｉｃｓ，ｃｕｒｒｅｎｔ ｅｄ．；Ｐｅｒｇａｍｏｎ；及びＲｅｍｉｎｇｔｏｎ’ｓ，Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ Ｓｃｉｅｎｃｅｓ（ｃｕｒｒｅｎｔ ｅｄｉｔｉｏｎ），Ｍａｃｋ Ｐｕｂｌｉｓｈｉｎｇ Ｃｏ．，Ｅａｓｔｏｎ，ＰＡにおいて見出される。一態様では、イムノコンジュゲートは静脈内投与される。
「指示すること」という用語は、適用可能な治療、投薬、治療、治療レジメンなどの指示を、任意の手段によって、例えば、添付文書または他の書面による販促資料の形で、書面で提供することを意味する。
「前処理する」及び「前処理」という用語は、治療用抗体、その抗原結合断片、またはイムノコンジュゲートの投与前に行われる治療手段を指す。例えば、本明細書でより詳細に記載されるように、ステロイド（例えば、コルチコステロイド）は、予防薬として、イムノコンジュゲートの投与の、約１週間、約５日、約３日、約２日、または約１日、または２４時間前に投与することができる。ステロイドはまた、イムノコンジュゲートと同じ日において、イムノコンジュゲートの前に投与することができる。
特に述べられていないか、または文脈から明らかでない限り、本明細書において使用されるとき、用語「約」は、当該技術分野において通常の許容範囲内、例えば、平均の２標準偏差内であると理解される。約は、述べられた値の、１０％、９％、８％、７％、６％、５％、４％、３％、２％、１％、０．５％、０．１％、０．０５％、または０．０１％
内として理解することができる。別段文脈から明らかでない限り、本明細書において提供される全ての数値は、約という用語によって修飾される。
本明細書の変数の任意の定義の中の化学基のリストの列挙は、任意の単一の基または列挙した基の組み合わせとしてその変数の定義を含む。本明細書の変数または態様についての実施形態の列挙は、任意の単一の実施形態として、または任意の他の実施形態もしくはその一部と組み合わせてその実施形態を含む。
本開示及び特許請求の範囲で使用される場合、単数形「ａ」、「ａｎ」、及び「ｔｈｅ」は、文脈が明らかに他を示していない限り、複数形を含む。
本明細書で「含むこと（ｃｏｍｐｒｉｓｉｎｇ）」という文言で実施形態が記載されている場合は常に、「からなる」及び／または「から本質的になる（ｃｏｎｓｉｓｔｉｎｇ
ｅｓｓｅｎｔｉａｌｌｙ ｏｆ）」という用語で記載されている類似の実施形態も提供されていることを理解されたい。本開示において、「含む（ｃｏｍｐｒｉｓｅｓ）」、「含むこと（ｃｏｍｐｒｉｓｉｎｇ）」、「含むこと（ｃｏｎｔａｉｎｉｎｇ）」、及び「有すること」などは、米国特許法に帰属するそれらの意味を有し得、「含む（ｉｎｃｌｕｄｅｓ）」、「含むこと（ｉｎｃｌｕｄｉｎｇ）」、などを意味し得、「から本質的になる（ｃｏｎｓｉｓｔｉｎｇ ｅｓｓｅｎｔｉａｌｌｙ ｏｆ）」、または「から本質的になる（ｃｏｎｓｉｓｔｓ ｅｓｓｅｎｔｉａｌｌｙ）」などは、同様に米国特許法に帰属する意味を有し得、用語はオープンエンドであり、列挙されているものを超えるものの存在によって列挙されているものの基本的または新規の特性が変化しない限り、列挙されているものを超えるものの存在を許容するが、従来技術の実施形態を排除する。
特に述べられていないか、または文脈から明らかでない限り、本明細書において使用されるとき、「または」という用語は、両立的であると理解されるべきである。本明細書で「Ａ及び／またはＢ」等の語句で使用される場合、「及び／または」という用語は、「Ａ及びＢ」、「ＡまたはＢ」、「Ａ」、及び「Ｂ」を含むことを意図する。同様に、「Ａ、Ｂ、及び／またはＣ」等の語句で使用されるとき、「及び／または」という用語は、次の実施形態の各々を包含することを意図する：Ａ、Ｂ、及びＣ；Ａ、Ｂ、またはＣ；ＡまたはＣ；ＡまたはＢ；ＢまたはＣ；Ａ及びＣ；Ａ及びＢ；Ｂ及びＣ；Ａ（単独）；Ｂ（単独）；ならびにＣ（単独）。
本明細書で提供する任意の組成物または方法は、本明細書で提供する任意の他の組成物及び方法のうちの１つ以上と組み合わせることができる。
ＩＩ．バイパラトピック抗体
本明細書で提供されるのは、バイパラトピック抗ＦＲα抗体及びその抗原結合断片である。これらのバイパラトピック抗体及びその抗原結合断片は、ＦＲαの第１のエピトープに結合する第１のＦＲα結合ドメインと、ＦＲαの第２のエピトープに結合する第２のＦＲα結合ドメインと、を含む。ＦＲαの第１のエピトープと第２のエピトープは重複しないエピトープである。これらのバイパラトピックの抗体及び抗原結合断片は、追加のＦＲα結合ドメインを含むことができる。例えば、四価バイパラトピック抗体またはその抗原結合断片は、第１のエピトープに結合する２つのＦＲα結合ドメインと、第２のエピトープに結合する２つのＦＲα結合ドメインと、を有することができる。例示的なバイパラトピック抗体及びその抗原結合断片を図１に示す。
Ａ．ＦＲα結合ドメイン
バイパラトピック抗体またはその抗原結合断片を組み立てるために使用することができるＦＲα結合ドメインが、本明細書で開示される。ＦＲα結合ドメインは、６つの相補性
決定領域（ＣＤＲ）、すなわち、可変重鎖（ＶＨ）ＣＤＲ１、ＶＨ ＣＤＲ２、ＶＨ ＣＤＲ３、可変軽鎖（ＶＬ）ＣＤＲ１、ＶＬ ＣＤＲ２、及びＶＬ ＣＤＲ３を含むことができる。ＦＲα抗原結合ドメインは、可変重鎖（ＶＨ）と可変軽鎖（ＶＬ）とを含むことができる。ＶＨとＶＬは、別個のポリペプチドであり得るか、または同じポリペプチドの一部であり得る（例えば、ｓｃＦｖにおいて）。
ＦＲα抗体及びその抗原結合断片は、当該技術分野で既知であり、例えば、ＰＣＴ出願公開番号ＷＯ２０１１／１０６５２８Ａ１；ＷＯ２０１２／１３５６７５Ａ３；ＷＯ２０１２／１３８７４９Ａ１；ＷＯ２０１４／０３６４９５Ａ３；及びＷＯ２０１５／０３１８１５Ａ２に開示されており、これらのそれぞれは、参照によりその全体が本明細書に組み込まれる。追加のＦＲα抗体は、米国特許第８，５５７，９６６Ｂ２号、同第８，７０９，４３２Ｂ２号、同第９，７０２，８８１Ｂ２号；及び同第９，６３７，５４７Ｂ２号；ならびに米国特許出願公開第ＵＳ－２０１２－０２８２２８２Ａ１号に開示されており、これらのそれぞれは、参照によりその全体が本明細書に組み込まれる。さらに、ＦＲα抗体ｈｕＭｏｖ１９（Ｍ９３４６Ａ）抗体は、ブダペスト条約の条項に基づいて２０１０年４月７日に１０８０１ Ｕｎｉｖｅｒｓｉｔｙ Ｂｏｕｌｅｖａｒｄ，Ｍａｎａｓｓａｓ，ＶＡ ２０１１０にあるＡｍｅｒｉｃａｎ Ｔｙｐｅ Ｃｕｌｔｕｒｅ Ｃｏｌｌｅｃｔｉｏｎ（ＡＴＣＣ）に寄託されたプラスミドによってコードされており、ＡＴＣＣ寄託番号ＰＴＡ－１０７７２及びＰＴＡ－１０７７４を有している。本明細書で提供される場合、ＦＲα結合ドメインは、これらの抗体またはその抗原結合断片のいずれかのＦＲα結合ドメイン（例えば、６つのＣＤＲまたはＶＨ及びＶＬ）とすることができる。
一例として、ＦＲα結合ドメインは、ｈｕＭｏｖ１９抗体及び／またはＦＲ５７抗体の、ＣＤＲ配列、ＶＨ配列、及び／またはＶＬ配列を含むことができる。ｈｕＭｏｖ１９及びＦＲ５７抗体のＣＤＲ配列を以下の表１及び２に示す。
いくつかの実施形態では、本明細書で開示されるＦＲα結合ドメインは、本明細書に記載のＣＤＲ配列の１つ以上を含む１つ以上のポリペプチドを含む。例えば、ＦＲα結合ドメインは、以下の表１及び２に示された、軽鎖ＣＤＲ配列（すなわち、ＬＣ ＣＤＲ１、ＬＣ ＣＤＲ２、及びＬＣ ＣＤＲ３）のうちの１つ以上、及び／または重鎖ＣＤＲ配列（すなわち、ＨＣ ＣＤＲ１、ＨＣ ＣＤＲ２、及びＨＣ ＣＤＲ３）のうちの１つ以上を含むことができる。
いくつかの実施形態では、ＦＲα結合ドメインは、（ａ）それぞれ配列番号１～３のアミノ酸配列を含む、ＶＬ ＣＤＲ１、ＶＬ ＣＤＲ２、及びＶＬＣＤＲ３と、（ｂ）それぞれ配列番号７～９のアミノ酸配列を含むＶＨ ＣＤＲ１、ＶＨ ＣＤＲ２、及びＶＨ ＣＤＲ３と、を含む。いくつかの実施形態では、ＦＲα結合ドメインは、（ａ）それぞれ配列番号１～３のアミノ酸配列を含む、ＶＬ ＣＤＲ１、ＶＬ ＣＤＲ２、及びＶＬＣＤＲ３と、（ｂ）それぞれ配列番号１３、１４、及び９のアミノ酸配列を含むＶＨ ＣＤＲ１、ＶＨ ＣＤＲ２、及びＶＨ ＣＤＲ３と、を含む。いくつかの実施形態では、ＦＲα結合ドメインは、（ａ）それぞれ配列番号４～６のアミノ酸配列を含む、ＶＬ ＣＤＲ１、ＶＬ ＣＤＲ２、及びＶＬＣＤＲ３と、（ｂ）それぞれ配列番号１０～１２のアミノ酸配列を含むＶＨ ＣＤＲ１、ＶＨ ＣＤＲ２、及びＶＨ ＣＤＲ３と、を含む。いくつかの実施形態では、ＦＲα結合ドメインは、（ａ）それぞれ配列番号４～６のアミノ酸配列を含む、ＶＬ ＣＤＲ１、ＶＬ ＣＤＲ２、及びＶＬＣＤＲ３と、（ｂ）それぞれ配列番号１５、１６、及び１２のアミノ酸配列を含むＶＨ ＣＤＲ１、ＶＨ ＣＤＲ２、及びＶＨ ＣＤＲ３と、を含む。
一例として、ＦＲα結合ドメインは、ｈｕＭｏｖ１９抗体及び／またはＦＲ５７抗体の、ＣＤＲ配列、ＶＨ配列、及び／またはＶＬ配列を含むことができる。ｈｕＭｏｖ１９及びＦＲ５７のＣＤＲ配列を以下の表１及び２に示す。
いくつかの実施形態では、本明細書で開示されるＦＲα結合ドメインは、本明細書に記載のＣＤＲ配列の１つ以上を含む１つ以上のポリペプチドを含む。例えば、ＦＲα結合ドメインは、以下の表１及び２に示された、軽鎖ＣＤＲ配列（すなわち、ＬＣ ＣＤＲ１、ＬＣ ＣＤＲ２、及びＬＣ ＣＤＲ３）のうちの１つ以上、及び／または重鎖ＣＤＲ配列（すなわち、ＨＣ ＣＤＲ１、ＨＣ ＣＤＲ２、及びＨＣ ＣＤＲ３）のうちの１つ以上を含むことができる。
いくつかの実施形態では、ＦＲα結合ドメインは、ｈｕＭｏｖ１９抗体及び／またはＦＲ５７抗体の軽鎖可変配列及び／または重鎖可変配列を含む。ｈｕＭｏｖ１９及びＦＲ５７の軽鎖可変配列及び重鎖可変配列を以下の表３及び４に示す。
いくつかの実施形態では、ＦＲα結合ドメインは、配列番号１７に対して、少なくとも７０％、少なくとも約７５％、少なくとも約８０％、少なくとも約８５％、少なくとも約９０％、少なくとも約９５％、少なくとも約９６％、少なくとも約９７％、少なくとも約９８％、少なくとも約９９％、または１００％の配列同一性を有するＶＬを含み、任意選択で、ＶＬは、それぞれ配列番号１～３のＶＬ ＣＤＲ１、ＶＬ ＣＤＲ２、及びＶＬ ＣＤＲ３の配列を含む。いくつかの実施形態では、ＦＲα結合ドメインは、配列番号１９に対して、少なくとも７０％、少なくとも約７５％、少なくとも約８０％、少なくとも約８５％、少なくとも約９０％、少なくとも約９５％、少なくとも約９６％、少なくとも約９７％、少なくとも約９８％、少なくとも約９９％、または１００％の配列同一性を有するＶＬを含み、任意選択で、ＶＬは、それぞれ配列番号４～６のＶＬ ＣＤＲ１、ＶＬ ＣＤＲ２、及びＶＬ ＣＤＲ３の配列を含む。
いくつかの実施形態では、ＦＲα結合ドメインは、配列番号２２に対して、少なくとも７０％、少なくとも約７５％、少なくとも約８０％、少なくとも約８５％、少なくとも約９０％、少なくとも約９５％、少なくとも約９６％、少なくとも約９７％、少なくとも約９８％、少なくとも約９９％、または１００％の配列同一性を有するＶＨを含み、任意選択で、ＶＨは、それぞれ配列番号７～９、またはそれぞれ配列番号１３、１４、及び９のＶＨ ＣＤＲ１、ＶＨ ＣＤＲ２、及びＶＨ ＣＤＲ３の配列を含む。いくつかの実施形態では、ＦＲα結合ドメインは、配列番号２４に対して、少なくとも７０％、少なくとも約７５％、少なくとも約８０％、少なくとも約８５％、少なくとも約９０％、少なくとも約９５％、少なくとも約９６％、少なくとも約９７％、少なくとも約９８％、少なくとも
約９９％、または１００％の配列同一性を有するＶＨを含み、任意選択で、ＶＨは、それぞれ配列番号１０～１２、またはそれぞれ配列番号１５、１６、及び１２のＶＨ ＣＤＲ１、ＶＨ ＣＤＲ２、及びＶＨ ＣＤＲ３の配列を含む。
いくつかの実施形態では、ＦＲα結合ドメインは、ＶＬとＶＨとを含み、（ｉ）ＶＬは、配列番号１７に対して、少なくとも７０％、少なくとも約７５％、少なくとも約８０％、少なくとも約８５％、少なくとも約９０％、少なくとも約９５％、少なくとも約９６％、少なくとも約９７％、少なくとも約９８％、少なくとも約９９％、または１００％の配列同一性を有し、任意選択で、ＶＬは、それぞれ配列番号１～３のＶＬ ＣＤＲ１、ＶＬ
ＣＤＲ２、及びＶＬ ＣＤＲ３の配列を含み、（ｉｉ）ＶＨは、配列番号２２に対して、少なくとも７０％、少なくとも約７５％、少なくとも約８０％、少なくとも約８５％、少なくとも約９０％、少なくとも約９５％、少なくとも約９６％、少なくとも約９７％、少なくとも約９８％、少なくとも約９９％、または１００％の配列同一性を有し、任意選択で、ＶＨは、それぞれ配列番号７～９、またはそれぞれ配列番号１３、１４、及び９のＶＨ ＣＤＲ１、ＶＨ ＣＤＲ２、及びＶＨ ＣＤＲ３の配列を含む。
いくつかの実施形態では、ＦＲα結合ドメインは、ＶＬとＶＨとを含み、（ｉ）ＶＬは、配列番号１９に対して、少なくとも７０％、少なくとも約７５％、少なくとも約８０％、少なくとも約８５％、少なくとも約９０％、少なくとも約９５％、少なくとも約９６％、少なくとも約９７％、少なくとも約９８％、少なくとも約９９％、または１００％の配列同一性を有し、任意選択で、ＶＬは、それぞれ配列番号４～６のＶＬ ＣＤＲ１、ＶＬ
ＣＤＲ２、及びＶＬ ＣＤＲ３の配列を含み、（ｉｉ）ＶＨは、配列番号２４に対して、少なくとも７０％、少なくとも約７５％、少なくとも約８０％、少なくとも約８５％、少なくとも約９０％、少なくとも約９５％、少なくとも約９６％、少なくとも約９７％、少なくとも約９８％、少なくとも約９９％、または１００％の配列同一性を有し、任意選択で、ＶＨは、それぞれ配列番号１０～１２、またはそれぞれ配列番号１５、１６、及び１２のＶＨ ＣＤＲ１、ＶＨ ＣＤＲ２、及びＶＨ ＣＤＲ３の配列を含む。
いくつかの実施形態では、ＦＲα結合ドメインは、ＶＬとＶＨとを含む。ＶＬとＶＨは別個のポリペプチドにすることができる。ＶＬ及びＶＨは、同じポリペプチド、例えば、ＶＬ、リンカー、及びＶＨを含むポリペプチドの一部であってもよい。ＶＬ、リンカー、及びＶＨを含むポリペプチドは、ＶＬ－リンカー－ＶＨの配向またはＶＨ－リンカー－ＶＬの配向であってよい。
したがって、いくつかの実施形態では、ＦＲα結合ドメイン（例えば、ｓｃＦｖ）は、Ｎ末端からＣ末端に向けて、配列番号１７のアミノ酸配列を含むＶＬ、リンカー（例えば、グリシン－セリンリンカー）、及び配列番号２２のアミノ酸配列を含むＶＨを含む。いくつかの実施形態では、ＦＲα結合ドメインは、Ｎ末端からＣ末端に向けて、配列番号２２のアミノ酸配列を含むＶＨ、リンカー（例えば、グリシン－セリンリンカー）、及び配列番号１７のアミノ酸配列を含むＶＬを含む。
いくつかの実施形態では、ＦＲα結合ドメイン（例えば、ｓｃＦｖ）は、Ｎ末端からＣ末端に向けて、配列番号１９のアミノ酸配列を含むＶＬ、リンカー（例えば、グリシン－セリンリンカー）、及び配列番号２４のアミノ酸配列を含むＶＨを含む。いくつかの実施形態では、ＦＲα結合ドメインは、Ｎ末端からＣ末端に向けて、配列番号２４のアミノ酸配列を含むＶＨ、リンカー（例えば、グリシン－セリンリンカー）、及び配列番号１９のアミノ酸配列を含むＶＬを含む。
ＶＨ及びＶＬを接続するために使用することができるリンカーは、当該技術分野で知られている。例えば、リンカーはグリシン－セリンリンカーにすることができる。いくつか
の実施形態では、リンカーは任意の長さのものであってよく、少なくとも１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０、１１、１２、１３、１４、１５、１６、１７、１８、１９、２０、２５、３０、３１、３２、３３、３４、３５、３６、３７、３８、３９、４０、５０、もしくは６０、またはそれ以上のアミノ酸を含むことができる。他の実施形態では、本開示に有用なリンカーは、少なくとも１つのアミノ酸及び１００未満のアミノ酸、９０未満のアミノ酸、８０未満のアミノ酸、７０未満のアミノ酸、６０未満のアミノ酸、５０未満のアミノ酸、４０未満のアミノ酸、３０未満のアミノ酸、２０未満のアミノ酸、１９未満のアミノ酸、１８未満のアミノ酸、１７未満のアミノ酸、１６未満のアミノ酸、１５未満のアミノ酸、１４未満のアミノ酸、１３未満のアミノ酸、または１２未満のアミノ酸を有する。いくつかの実施形態では、リンカー配列は、グリシンアミノ酸残基を含む。他の例では、リンカー配列は、グリシンとセリンのアミノ酸残基の組み合わせを含む。
いくつかの実施形態では、ＦＲα結合ドメインは、ＶＨとＶＬとの間でインフレームで融合されたリンカーを含む。いくつかの実施形態では、そのようなグリシン／セリンリンカーは、ペプチドＧＧＧＳ（配列番号４９）もしくはＧＧＧＧＳ（配列番号５０）、またはそれらの所与のペプチドの１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０、もしくはそれ以上の反復を含む、それらの反復を含むがこれらに限定されないアミノ酸残基の任意の組み合わせを含む。本明細書で開示されるグリシン／セリンリンカーは、（ＧＳ）ｎ、（ＧＧＳ）ｎ、（ＧＧＧＳ）ｎ、（ＧＧＧＧＳ）ｎ、または（ＧＧＧＧＳ）ｎのアミノ酸配列を含み、式中、ｎは、１、２、３、４、５、６、７、８、９、または１０の整数である。一実施形態では、リンカー配列はＧＧＧＧＳＧＧＧＧＳＧＧＧＧＳ（配列番号５１）（Ｇｌｙ４Ｓｅｒ）３とも呼ばれる）である。別の実施形態では、リンカー配列はＧＧＧＧＳＧＧＧＧＳＧＧＧＧＳＧＧＧＧＳ（配列番号５２）（Ｇｌｙ４Ｓｅｒ）４とも呼ばれる）である。
いくつかの実施形態では、ＦＲα結合ドメインは、ｓｃＦｖである。例示的なｓｃＦｖのＦＲα結合ドメインを以下の表５に示す。
いくつかの実施形態では、ＦＲα結合ドメインは、配列番号２７、２８、または２９に対して、少なくとも７０％、少なくとも約７５％、少なくとも約８０％、少なくとも約８
５％、少なくとも約９０％、少なくとも約９５％、少なくとも約９６％、少なくとも約９７％、少なくとも約９８％、少なくとも約９９％、または１００％の配列同一性であるアミノ酸配列を含むｓｃＦｖを含み、任意選択で、ｓｃＦｖは、それぞれ配列番号１～３のＶＬ ＣＤＲ１、ＶＬ ＣＤＲ２、及びＶＬ ＣＤＲ３の配列と、それぞれ配列番号７～９、またはそれぞれ配列番号１３、１４、及び９のＶＨ ＣＤＲ１、ＶＨ ＣＤＲ２、及びＶＨ ＣＤＲ３の配列と、を含む。
いくつかの実施形態では、ＦＲα結合ドメインは、配列番号３０、３１、または３２に対して、少なくとも７０％、少なくとも約７５％、少なくとも約８０％、少なくとも約８５％、少なくとも約９０％、少なくとも約９５％、少なくとも約９６％、少なくとも約９７％、少なくとも約９８％、少なくとも約９９％、または１００％の配列同一性であるアミノ酸配列を含むｓｃＦｖを含み、任意選択で、ｓｃＦｖは、それぞれ配列番号４～６のＶＬ ＣＤＲ１、ＶＬ ＣＤＲ２、及びＶＬ ＣＤＲ３の配列と、それぞれ配列番号１０～１２、またはそれぞれ配列番号１５、１６、及び１２のＶＨ ＣＤＲ１、ＶＨ ＣＤＲ２、及びＶＨ ＣＤＲ３の配列と、を含む。
特定の実施形態では、ＦＲα結合ドメインは、配列番号１７及び配列番号２２のアミノ酸配列を含む抗体と同じＦＲαのエピトープに結合する。
特定の実施形態では、ＦＲα結合ドメインは、配列番号１９及び配列番号２４のアミノ酸配列を含む抗体と同じＦＲαのエピトープに結合する。
特定の実施形態では、ＦＲα結合ドメインは、マウス、キメラ、またはヒト化ＦＲα結合ドメインである。本明細書で使用される場合、ヒト化ＦＲα結合ドメインは、表面再構成ＦＲα結合ドメインであってよい。
特定の実施形態では、ＦＲα結合ドメインは、ヒトＦＲαに結合するが、ＦＯＬＲ２またはＦＯＬＲ３に結合しない。
Ｂ．バイパラトピック抗体フォーマット
バイパラトピック抗ＦＲα抗体またはその抗原結合断片は、上述のＦＲα結合ドメインの組み合わせを含んでもよく、ＦＲα結合ドメインは、ＦＲαの重複していないエピトープに結合する。
二重特異性構築物の多くの異なる種類が当該技術分野で知られており、本明細書に提供されるバイパラトピック抗ＦＲα抗体またはその抗原結合断片で使用することができる。
二重特異性抗体構築の初期の試みは、化学的架橋またはハイブリッドハイブリドーマまたはクアドローマのいずれかを利用して、２つの異なる抗体の２つの半分を一緒に結合した。これらの技術は二重特異性抗体の作製に役立つが、抗原結合部位のさまざまな組み合わせを含む混合集団の産生、タンパク質発現の困難さ、目的の二重特異性抗体の精製の必要性、低収量、産生の費用などの産生の問題に関連している。
より最近のアプローチは、不要な副産物を除去するための大規模な精製を必要とせずに、単一の二重特異性抗体の均一な産物を産生することができる遺伝子操作された構築物を利用している。このような構築物には、タンデムｓｃＦｖ、ダイアボディ、タンデムダイアボディ、二重可変ドメイン抗体、及びＣｈ１／ＣｋドメインまたはＤＮＬ（登録商標）のようなモチーフを使用したヘテロ二量体化が含まれる（Ｃｈａｍｅｓ ＆ Ｂａｔｙ，２００９，Ｃｕｒｒ Ｏｐｉｎ Ｄｒｕｇ Ｄｉｓｃｏｖ Ｄｅｖｅｌ １２：２７６－８３；Ｃｈａｍｅｓ ＆ Ｂａｔｙ，ｍＡｂｓ １：５３９－４７）。ＢＩＴＥ（登録商
標）は、短いペプチドリンカーによって連結されているタンデムｓｃＦｖを指す（Ｃｈａｍｅｓ ＆ Ｂａｔｙ，ｍＡｂｓ １：５３９－４７）。二重特異性抗体産生に対する他のアプローチには、４価のＩｇＧ－ｓｃＦｖ融合体（Ｄｏｎｇ ｅｔ ａｌ．，２０１１，ＭＡｂｓ ３：２７３－８８）；二重作用Ｆａｂ（ＤＡＦ）抗体（Ｂｏｓｔｒｏｍ ｅｔ ａｌ．，２００９，Ｓｃｉｅｎｃｅ ３２３：１６１０－１４）；Ｉｇｇ様二重可変ドメイン抗体（ＤＶＤ－Ｉｇ）（Ｗｕ ｅｔ ａｌ．，２００７，Ｎａｔ Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌ ２５：１２９０－９７）；及びＩｇＧ４分子間の動的交換の使用（ｖａｎ ｄｅｒ Ｎｅｕｔ Ｋｏｌｆｓｃｈｏｔｅｎ ｅｔ ａｌ．，２００７，Ｓｃｉｅｎｃｅ ３１７：１５５４－５７）が含まれる。
ＤＯＣＫ－ＡＮＤ－ＬＯＣＫ（登録商標）（ＤＮＬ（登録商標））複合体（例えば、米国特許第７，５２１，０５６号；同第７，５２７，７８７号；同第７，５３４，８６６号；同第７，５５０，１４３号；同第７，６６６，４００号；同第７，９０１，６８０号；同第７，９０６，１１８号；同第７，９８１，３９８号；同第８，００３，１１１号を参照されたい）は、別の二重特異性抗体フォーマットを表す。標準的なＤＮＬ（登録商標）複合体は、１つのＡＤ連結分子に結合した２つのＤＤＤ連結分子を有するトリマーを含むが、複雑な構造のバリエーションは、ダイマー、トリマー、テトラマー、ペンタマー、ヘキサマー、及び他の多量体の形成を可能にする。
いくつかの実施形態では、本明細書で開示されるのは、「ノブインホール」構造を含む、非対称Ｆｃ分子を有するバイパラトピック構築物である。Ｋｏｎｔｅｒｍａｎｎ，ＭＡｂｓ．，４（２）：１８２－９７（２０１２）を参照されたい。ノブイントゥホール（ＫＩＨ）テクノロジーでは、ＣＨ３ドメインを操作して、各重鎖に「ノブ」または「ホール」のいずれかを作成し、ヘテロ二量体化を促進する。ＫＩＨテクノロジーは、例えば、Ｒｉｄｇｗａｙ ｅｔ ａｌ．，Ｐｒｏｔｅｉｎ Ｅｎｇｉｎｅｅｒｉｎｇ ９（７）：６１７－７２１（１９９６）；ＵＳ５，７３１，１６８；ＵＳ５，８０７，７０６；ＵＳ５，８２１，３３３に記載され、これらのそれぞれは、参照によりその全体が本明細書に組み込まれる。「ＣｒｏｓｓＭａｂ」技術はさらに、二重特異性抗体の半分のＦａｂ内で重鎖ドメインと軽鎖ドメインを交換することを含み、２つのアームを非常に異なるものにして、軽鎖－重鎖の誤対形成が発生しないようする（Ｓｃｈａｅｆｅｒ ｅｔ ａｌ．，２０１１，Ｐｒｏｃ Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ Ｓｃｉ ＵＳＡ １０８：１１１８７－９２）。ノブイントゥホールアプローチは、一方の重鎖のＣＨ３ドメインに、もう一方の重鎖のＣＨ３ドメインの適切に設計された空洞に適合するかさばる側鎖を持つアミノ酸を導入する。アプローチの組み合わせは、重鎖と重鎖と、重鎖と軽鎖との両方の相互作用のミスマッチを防ぎ、主に単一の製品をもたらす。
いくつかの実施形態では、バイパラトピック抗ＦＲα抗体またはその抗原結合断片は、２価（例えば、図１に示された「ノブインホール」の例を参照されたい）である。２価のバイパラトピック抗ＦＲα抗体またはその抗原結合断片は、例えばｓｃＦｖを含む２つのＦＲα結合ドメイン、別個のポリペプチド鎖上にＶＨとＶＬを含む２つのＦＲα結合ドメイン、または、ｓｃＦｖを含む１つのＦＲα結合ドメイン及び別個のポリペプチド鎖上にＶＨとＶＬを含む１つのＦＲα結合ドメインを含むことができる。
いくつかの実施形態では、バイパラトピック抗ＦＲα抗体またはその抗原結合断片は、３価である。
いくつかの実施形態では、バイパラトピック抗ＦＲα抗体またはその抗原結合断片は、３価（例えば、図１に示された「Ｍｏｒｒｉｓｏｎ」の例を参照されたい）である。４価抗体は、例えば、Ｍ．Ｊ．Ｃｏｌｏｍａ，Ｓ．Ｌ．Ｍｏｒｒｉｓｏｎ，Ｎａｔ．Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌ．，１５（２）：１５９－６３（１９９７）に記載され、これは、その全体
が参照により本明細書に組み込まれる。
いくつかの実施形態では、バイパラトピック抗ＦＲα抗体またはその抗原結合断片は、ｓｃＦｖであるＦＲα結合ドメインを含む。いくつかの実施形態では、バイパラトピック抗ＦＲα抗体またはその抗原結合断片は、別個のポリペプチド上のＶＨ及びＶＬを含むＦＲα結合ドメインを含む。いくつかの実施形態では、バイパラトピック抗ＦＲα抗体またはその抗原結合断片は、ｓｃＦｖであるＦＲα結合ドメインと、別個のポリペプチド上のＶＨ及びＶＬを含むＦＲα結合ドメインと、を含む。
いくつかの実施形態では、２価のバイパラトピック抗ＦＲα抗体またはその抗原結合断片は、ｓｃＦｖである単一のＦＲα結合ドメインと、別個のポリペプチド上のＶＨ及びＶＬを含む単一のＦＲα結合ドメインを含む。そのような実施形態では、ｓｃＦｖは重鎖定常領域に融合することができ、ＶＨは重鎖定常領域に融合することができる。いくつかの実施形態では、定常領域は「ノブアンドホール」配列を有する。「ノブ」配列は、ｓｃＦｖに融合した重鎖定常領域にあり得、「ホール」配列は、ＶＨに融合した定常領域に融合し得る。代替的に、「ホール」変異は、ｓｃＦｖに融合した重鎖定常領域にあり得、「ノブ」配列は、ＶＨに融合された定常領域に融合され得る。そのようなフォーマットの例示的バイパラトピック抗ＦＲα抗体またはその抗原結合断片の配列は、表７に見出される。
いくつかの実施形態では、４価のバイパラトピック抗ＦＲα抗体またはその抗原結合断片は、ｓｃＦｖである２つのＦＲα結合ドメインと、別個のポリペプチド上のＶＨ及びＶＬを含む２つのＦＲα結合ドメインと、を含む。そのような実施形態では、ｓｃＦｖは、ＶＨを含むポリペプチドのＮ末端またはＣ末端に融合され得る。ｓｃＦｖは、ＶＬを含むポリペプチドのＮ末端またはＣ末端に融合させることもできる。
４価のバイパラトピック抗ＦＲα抗体またはその抗原結合断片は、２つのポリペプチドを含み得、第１のポリペプチドは、重鎖定常領域、ＶＨ、及びｓｃＦｖを含み、第２のポリペプチドは、軽鎖定常領域及びＶＬを含む。４価のバイパラトピック抗ＦＲα抗体またはその抗原結合断片はまた、２つのポリペプチドを含み得、第１のポリペプチドは、重鎖定常領域、及びＶＨを含み、第２のポリペプチドは、軽鎖定常領域、ＶＬ、及びｓｃＦｖを含む。そのようなフォーマットの例示的バイパラトピック抗ＦＲα抗体またはその抗原結合断片の配列は、表６に見出される。
いくつかの実施形態では、バイパラトピック抗ＦＲα抗体またはその抗原結合断片は、二重特異性ヘテロダイマーダイアボディ、例えば、テトラマー二重特異性ヘテロダイマーダイアボディである。本明細書で使用される場合、「二重特異性ヘテロダイマーダイアボディ」という用語は、２つ以上のポリペプチド鎖またはタンパク質の複合体を指し、それぞれが少なくとも１つの抗体のＶＬ及び１つの抗体のＶＨドメインを含むことができ、それぞれのポリペプチド鎖のＶＬ及びＶＨドメインは、異なる抗体に由来する。
いくつかの実施形態では、本明細書で開示されるバイパラトピック抗体またはその抗原結合断片は、１つ以上の表面再構成ＦＲα結合ドメインを含む。いくつかの実施形態では、バイパラトピック抗体またはその抗原結合断片のＦＲα結合ドメインの全ては、表面再構成されている。
いくつかの実施形態では、バイパラトピック抗体またはその抗原結合断片は、ヒト免疫グロブリンであって、その相補性決定領域（ＣＤＲ）由来の残基が、所望の特異性、親和性、及び機能を有する非ヒト種（例えば、マウス、ラット、ウサギ、ハムスター）のＣＤＲ由来の残基で置き換えられている（「ＣＤＲグラフト化」）（Ｊｏｎｅｓ ｅｔ ａｌ．，Ｎａｔｕｒｅ ３２１：５２２－５２５（１９８６）；Ｒｉｅｃｈｍａｎｎ ｅｔ
ａｌ．，Ｎａｔｕｒｅ ３３２：３２３－３２７（１９８８）；Ｖｅｒｈｏｅｙｅｎ ｅｔ ａｌ．，Ｓｃｉｅｎｃｅ ２３９：１５３４－１５３６（１９８８））。
さらなる実施形態では、バイパラトピック抗体またはその抗原結合断片は、少なくとも１つの重鎖可変領域及び少なくとも１つの軽鎖可変領域を含むＣＤＲグラフト化抗体または表面再構成抗体であり、上記重鎖可変領域は、それぞれ配列番号７～９で表されるアミノ酸配列を有する３つの相補性決定領域を含み、上記軽鎖可変領域は、それぞれ配列番号１～３で表されるアミノ酸配列を有する３つの相補性決定領域を含む。
さらなる実施形態では、バイパラトピック抗体またはその抗原結合断片は、少なくとも１つの重鎖可変領域及び少なくとも１つの軽鎖可変領域を含むＣＤＲグラフト化抗体または表面再構成抗体であり、上記重鎖可変領域は、それぞれ配列番号１３、１４、及び９で表されるアミノ酸配列を有する３つの相補性決定領域を含み、上記軽鎖可変領域は、それぞれ配列番号１～３で表されるアミノ酸配列を有する３つの相補性決定領域を含む。
さらなる実施形態では、バイパラトピック抗体またはその抗原結合断片は、少なくとも１つの重鎖可変領域及び少なくとも１つの軽鎖可変領域を含むＣＤＲグラフト化抗体または表面再構成抗体であり、上記重鎖可変領域は、それぞれ配列番号１０～１２で表されるアミノ酸配列を有する３つの相補性決定領域を含み、上記軽鎖可変領域は、それぞれ配列番号４～６で表されるアミノ酸配列を有する３つの相補性決定領域を含む。
さらなる実施形態では、バイパラトピック抗体またはその抗原結合断片は、少なくとも１つの重鎖可変領域及び少なくとも１つの軽鎖可変領域を含むＣＤＲグラフト化抗体または表面再構成抗体であり、上記重鎖可変領域は、それぞれ配列番号１５、１６、及び１２で表されるアミノ酸配列を有する３つの相補性決定領域を含み、上記軽鎖可変領域は、それぞれ配列番号４～６で表されるアミノ酸配列を有する３つの相補性決定領域を含む。
さらなる実施形態では、配列番号２２～２６に対応するアミノ酸配列と少なくとも９０％の配列同一性、より好ましくは、配列番号２２～２６と９５％の配列同一性、最も好ましくは、配列番号２２～２６と１００％の配列同一性を共有するヒト化（例えば、表面再構成、ＣＤＲグラフト化）重鎖可変領域を有する抗体またはその抗原結合断片が提供される。特定の実施形態では、抗体は、ＣＤＲの外側のフレームワーク領域に保存的変異を含む。
同様に、配列番号１７～２１に対応するアミノ酸配列と少なくとも９０％の配列同一性、より好ましくは、配列番号１７～２１と９５％の配列同一性、最も好ましくは、配列番号１７～２１と１００％の配列同一性を共有するヒト化（例えば、表面再構成、ＣＤＲグラフト化）軽鎖可変領域を有する抗体が提供される。特定の実施形態では、抗体は、ＣＤＲの外側のフレームワーク領域に保存的変異を含む。
いくつかの実施形態では、バイパラトピック抗ＦＲα抗体またはその抗原結合断片は、重鎖定常領域、例えばＩｇＧ１、ＩｇＧ２、ＩｇＧ３、ＩｇＧ４、ＩｇＡ、ＩｇＥ、ＩｇＭ、またはＩｇＤの定常領域を含む。いくつかの実施形態では、重鎖定常領域は、ＩｇＧ１重鎖定常領域またはＩｇＧ４重鎖定常領域である。さらに、いくつかの実施形態では、バイパラトピック抗ＦＲα抗体またはその抗原結合断片は、カッパ軽鎖定常領域またはラムダ軽鎖定常領域のいずれかである、軽鎖定常領域を含むことができる。いくつかの実施形態では、軽鎖定常領域は、カッパ軽鎖定常領域である。
いくつかの実施形態では、バイパラトピック抗ＦＲα抗体またはその抗原結合断片は、それぞれ配列番号１９と２４；２０と２５；及び２１と２６からなる群から選択される、
ＶＬとＶＨとの配列を含む、第１のＦＲα結合ドメインと、ＦＲαへの結合についてｈｕＭｏｖ１９と競合しない第２のＦＲα結合ドメインと、を含む。いくつかの実施形態では、バイパラトピック抗ＦＲα抗体またはその抗原結合断片は、それぞれ配列番号２０と５７の、ＶＬとＶＨとの配列を含む、第１のＦＲα結合ドメインと、ＦＲαへの結合についてｈｕＭｏｖ１９と競合しない第２のＦＲα結合ドメインと、を含む。
いくつかの実施形態では、バイパラトピック抗ＦＲα抗体またはその抗原結合断片は、それぞれ配列番号１７と２２；及び１８と２３からなる群から選択される、ＶＬとＶＨとの配列を含む、第１のＦＲα結合ドメインと、ＦＲαへの結合についてＦＲ５７と競合しない第２のＦＲα結合ドメインと、を含む。
いくつかの実施形態では、バイパラトピック抗ＦＲα抗体またはその抗原結合断片は、配列番号２２のＶＨアミノ酸配列と、配列番号１７のＶＬアミノ酸配列とを含む抗体と、同じＦＲαエピトープへの結合について、競合的に阻害する、ＦＲα結合ドメインを含む。
いくつかの実施形態では、バイパラトピック抗ＦＲα抗体またはその抗原結合断片は、配列番号２４のＶＨアミノ酸配列と、配列番号１９のＶＬアミノ酸配列とを含む抗体と、同じＦＲαエピトープへの結合を競合的に阻害する、ＦＲα結合ドメインを含む。
いくつかの実施形態では、バイパラトピック抗ＦＲα抗体またはその抗原結合断片は、（ｉ）配列番号２２のＶＨアミノ酸配列と、配列番号１７のＶＬアミノ酸配列とを含む抗体と、同じＦＲαエピトープへの結合を競合的に阻害する、第１のＦＲα結合ドメインと、（ｉｉ）配列番号２４のＶＨアミノ酸配列と、配列番号１９のＶＬアミノ酸配列とを含む抗体と、同じＦＲαエピトープへの結合を競合的に阻害する、第２のＦＲα結合ドメインと、を含む。
いくつかの実施形態では、バイパラトピック抗ＦＲα抗体またはその抗原結合断片は、配列番号２２のＶＨアミノ酸配列と、配列番号１７のＶＬアミノ酸配列とを含む抗体と、同じＦＲαエピトープに結合するＦＲα結合ドメインを含む。
いくつかの実施形態では、バイパラトピック抗ＦＲα抗体またはその抗原結合断片は、配列番号２４のＶＨアミノ酸配列と、配列番号１９のＶＬアミノ酸配列とを含む抗体と、同じＦＲαエピトープに結合するＦＲα結合ドメインを含む。
いくつかの実施形態では、バイパラトピック抗ＦＲα抗体またはその抗原結合断片は、（ｉ）配列番号２２のＶＨアミノ酸配列と、配列番号１７のＶＬアミノ酸配列とを含む抗体と、同じＦＲαエピトープへの結合に結合する第１のＦＲα結合ドメインと、（ｉｉ）配列番号２４のＶＨアミノ酸配列と、配列番号１９のＶＬアミノ酸配列とを含む抗体と、同じＦＲαエピトープへの結合に結合する第２のＦＲα結合ドメインと、を含む。
いくつかの実施形態では、本開示のバイパラトピック抗体またはその抗原結合断片は、ＦＲ５７の可変軽鎖及び／または可変重鎖（例えば、それぞれ配列番号１７及び／または２２）と、ｈｕＭＯＶ１９の可変軽鎖及び／または可変重鎖（例えば、それぞれ配列番号１９及び／または２４）と、を含む。
いくつかの実施形態では、本開示のバイパラトピック抗体またはその抗原結合断片は、ＦＲ５７の可変軽鎖及び／または可変重鎖（例えば、それぞれ配列番号１７及び／または２２）と、ｈｕＭＯＶ１９の可変軽鎖及び／または可変重鎖（例えば、それぞれ配列番号１９及び／または２５）と、を含む。いくつかの実施形態では、本開示のバイパラトピッ
ク抗体またはその抗原結合断片は、ＦＲ５７の可変軽鎖及び／または可変重鎖（例えば、それぞれ配列番号１７及び／または２２）と、ｈｕＭＯＶ１９の可変軽鎖及び／または可変重鎖（例えば、それぞれ配列番号１９及び／または５７）と、を含む。
いくつかの実施形態では、本開示のバイパラトピック抗体またはその抗原結合断片は、ＦＲ５７の可変軽鎖及び／または可変重鎖（例えば、それぞれ配列番号１７及び／または２２）と、ｈｕＭＯＶ１９の可変軽鎖及び／または可変重鎖（例えば、それぞれ配列番号１９及び／または２６）と、を含む。
いくつかの実施形態では、本開示のバイパラトピック抗体またはその抗原結合断片は、ＦＲ５７の可変軽鎖及び／または可変重鎖（例えば、それぞれ配列番号１７及び／または２２）と、ｈｕＭＯＶ１９の可変軽鎖及び／または可変重鎖（例えば、それぞれ配列番号２０及び／または２４）と、を含む。
いくつかの実施形態では、本開示のバイパラトピック抗体またはその抗原結合断片は、ＦＲ５７の可変軽鎖及び／または可変重鎖（例えば、それぞれ配列番号１７及び／または２２）と、ｈｕＭＯＶ１９の可変軽鎖及び／または可変重鎖（例えば、それぞれ配列番号２０及び／または２５）と、を含む。いくつかの実施形態では、本開示のバイパラトピック抗体またはその抗原結合断片は、ＦＲ５７の可変軽鎖及び／または可変重鎖（例えば、それぞれ配列番号１７及び／または２２）と、ｈｕＭＯＶ１９の可変軽鎖及び／または可変重鎖（例えば、それぞれ配列番号２０及び／または５７）と、を含む。
いくつかの実施形態では、本開示のバイパラトピック抗体またはその抗原結合断片は、ＦＲ５７の可変軽鎖及び／または可変重鎖（例えば、それぞれ配列番号１７及び／または２２）と、ｈｕＭＯＶ１９の可変軽鎖及び／または可変重鎖（例えば、それぞれ配列番号２０及び／または２６）と、を含む。
いくつかの実施形態では、本開示のバイパラトピック抗体またはその抗原結合断片は、ＦＲ５７の可変軽鎖及び／または可変重鎖（例えば、それぞれ配列番号１７及び／または２２）と、ｈｕＭＯＶ１９の可変軽鎖及び／または可変重鎖（例えば、それぞれ配列番号２１及び／または２４）と、を含む。
いくつかの実施形態では、本開示のバイパラトピック抗体またはその抗原結合断片は、ＦＲ５７の可変軽鎖及び／または可変重鎖（例えば、それぞれ配列番号１７及び／または２２）と、ｈｕＭＯＶ１９の可変軽鎖及び／または可変重鎖（例えば、それぞれ配列番号２１及び／または２５）と、を含む。いくつかの実施形態では、本開示のバイパラトピック抗体またはその抗原結合断片は、ＦＲ５７の可変軽鎖及び／または可変重鎖（例えば、それぞれ配列番号１７及び／または２２）と、ｈｕＭＯＶ１９の可変軽鎖及び／または可変重鎖（例えば、それぞれ配列番号２１及び／または５７）と、を含む。
いくつかの実施形態では、本開示のバイパラトピック抗体またはその抗原結合断片は、ＦＲ５７の可変軽鎖及び／または可変重鎖（例えば、それぞれ配列番号１７及び／または２２）と、ｈｕＭＯＶ１９の可変軽鎖及び／または可変重鎖（例えば、それぞれ配列番号２１及び／または２６）と、を含む。
いくつかの実施形態では、本開示のバイパラトピック抗体またはその抗原結合断片は、ＦＲ５７の可変軽鎖及び／または可変重鎖（例えば、それぞれ配列番号１７及び／または２３）と、ｈｕＭＯＶ１９の可変軽鎖及び／または可変重鎖（例えば、それぞれ配列番号１９及び／または２４）と、を含む。
いくつかの実施形態では、本開示のバイパラトピック抗体またはその抗原結合断片は、ＦＲ５７の可変軽鎖及び／または可変重鎖（例えば、それぞれ配列番号１７及び／または２３）と、ｈｕＭＯＶ１９の可変軽鎖及び／または可変重鎖（例えば、それぞれ配列番号１９及び／または２５）と、を含む。いくつかの実施形態では、本開示のバイパラトピック抗体またはその抗原結合断片は、ＦＲ５７の可変軽鎖及び／または可変重鎖（例えば、それぞれ配列番号１７及び／または２３）と、ｈｕＭＯＶ１９の可変軽鎖及び／または可変重鎖（例えば、それぞれ配列番号１９及び／または５７）と、を含む。
いくつかの実施形態では、本開示のバイパラトピック抗体またはその抗原結合断片は、ＦＲ５７の可変軽鎖及び／または可変重鎖（例えば、それぞれ配列番号１７及び／または２３）と、ｈｕＭＯＶ１９の可変軽鎖及び／または可変重鎖（例えば、それぞれ配列番号１９及び／または２６）と、を含む。
いくつかの実施形態では、本開示のバイパラトピック抗体またはその抗原結合断片は、ＦＲ５７の可変軽鎖及び／または可変重鎖（例えば、それぞれ配列番号１７及び／または２３）と、ｈｕＭＯＶ１９の可変軽鎖及び／または可変重鎖（例えば、それぞれ配列番号２０及び／または２４）と、を含む。
いくつかの実施形態では、本開示のバイパラトピック抗体またはその抗原結合断片は、ＦＲ５７の可変軽鎖及び／または可変重鎖（例えば、それぞれ配列番号１７及び／または２３）と、ｈｕＭＯＶ１９の可変軽鎖及び／または可変重鎖（例えば、それぞれ配列番号２０及び／または２５）と、を含む。いくつかの実施形態では、本開示のバイパラトピック抗体またはその抗原結合断片は、ＦＲ５７の可変軽鎖及び／または可変重鎖（例えば、それぞれ配列番号１７及び／または２３）と、ｈｕＭＯＶ１９の可変軽鎖及び／または可変重鎖（例えば、それぞれ配列番号２０及び／または５７）と、を含む。
いくつかの実施形態では、本開示のバイパラトピック抗体またはその抗原結合断片は、ＦＲ５７の可変軽鎖及び／または可変重鎖（例えば、それぞれ配列番号１７及び／または２３）と、ｈｕＭＯＶ１９の可変軽鎖及び／または可変重鎖（例えば、それぞれ配列番号２０及び／または２６）と、を含む。
いくつかの実施形態では、本開示のバイパラトピック抗体またはその抗原結合断片は、ＦＲ５７の可変軽鎖及び／または可変重鎖（例えば、それぞれ配列番号１７及び／または２３）と、ｈｕＭＯＶ１９の可変軽鎖及び／または可変重鎖（例えば、それぞれ配列番号２１及び／または２４）と、を含む。
いくつかの実施形態では、本開示のバイパラトピック抗体またはその抗原結合断片は、ＦＲ５７の可変軽鎖及び／または可変重鎖（例えば、それぞれ配列番号１７及び／または２３）と、ｈｕＭＯＶ１９の可変軽鎖及び／または可変重鎖（例えば、それぞれ配列番号２１及び／または２５）と、を含む。いくつかの実施形態では、本開示のバイパラトピック抗体またはその抗原結合断片は、ＦＲ５７の可変軽鎖及び／または可変重鎖（例えば、それぞれ配列番号１７及び／または２３）と、ｈｕＭＯＶ１９の可変軽鎖及び／または可変重鎖（例えば、それぞれ配列番号２１及び／または５７）と、を含む。
いくつかの実施形態では、本開示のバイパラトピック抗体またはその抗原結合断片は、ＦＲ５７の可変軽鎖及び／または可変重鎖（例えば、それぞれ配列番号１７及び／または２３）と、ｈｕＭＯＶ１９の可変軽鎖及び／または可変重鎖（例えば、それぞれ配列番号２１及び／または２６）と、を含む。
いくつかの実施形態では、本開示のバイパラトピック抗体またはその抗原結合断片は、
ＦＲ５７の可変軽鎖及び／または可変重鎖（例えば、それぞれ配列番号１８及び／または２２）と、ｈｕＭＯＶ１９の可変軽鎖及び／または可変重鎖（例えば、それぞれ配列番号１９及び／または２４）と、を含む。
いくつかの実施形態では、本開示のバイパラトピック抗体またはその抗原結合断片は、ＦＲ５７の可変軽鎖及び／または可変重鎖（例えば、それぞれ配列番号１８及び／または２２）と、ｈｕＭＯＶ１９の可変軽鎖及び／または可変重鎖（例えば、それぞれ配列番号１９及び／または２５）と、を含む。いくつかの実施形態では、本開示のバイパラトピック抗体またはその抗原結合断片は、ＦＲ５７の可変軽鎖及び／または可変重鎖（例えば、それぞれ配列番号１７及び／または２３）と、ｈｕＭＯＶ１９の可変軽鎖及び／または可変重鎖（例えば、それぞれ配列番号２１及び／または５７）と、を含む。
いくつかの実施形態では、本開示のバイパラトピック抗体またはその抗原結合断片は、ＦＲ５７の可変軽鎖及び／または可変重鎖（例えば、それぞれ配列番号１８及び／または２２）と、ｈｕＭＯＶ１９の可変軽鎖及び／または可変重鎖（例えば、それぞれ配列番号１９及び／または２６）と、を含む。
いくつかの実施形態では、本開示のバイパラトピック抗体またはその抗原結合断片は、ＦＲ５７の可変軽鎖及び／または可変重鎖（例えば、それぞれ配列番号１８及び／または２２）と、ｈｕＭＯＶ１９の可変軽鎖及び／または可変重鎖（例えば、それぞれ配列番号２０及び／または２４）と、を含む。
いくつかの実施形態では、本開示のバイパラトピック抗体またはその抗原結合断片は、ＦＲ５７の可変軽鎖及び／または可変重鎖（例えば、それぞれ配列番号１８及び／または２２）と、ｈｕＭＯＶ１９の可変軽鎖及び／または可変重鎖（例えば、それぞれ配列番号２０及び／または２５）と、を含む。いくつかの実施形態では、本開示のバイパラトピック抗体またはその抗原結合断片は、ＦＲ５７の可変軽鎖及び／または可変重鎖（例えば、それぞれ配列番号１８及び／または２２）と、ｈｕＭＯＶ１９の可変軽鎖及び／または可変重鎖（例えば、それぞれ配列番号２０及び／または５７）と、を含む。
いくつかの実施形態では、本開示のバイパラトピック抗体またはその抗原結合断片は、ＦＲ５７の可変軽鎖及び／または可変重鎖（例えば、それぞれ配列番号１８及び／または２２）と、ｈｕＭＯＶ１９の可変軽鎖及び／または可変重鎖（例えば、それぞれ配列番号２０及び／または２６）と、を含む。
いくつかの実施形態では、本開示のバイパラトピック抗体またはその抗原結合断片は、ＦＲ５７の可変軽鎖及び／または可変重鎖（例えば、それぞれ配列番号１８及び／または２２）と、ｈｕＭＯＶ１９の可変軽鎖及び／または可変重鎖（例えば、それぞれ配列番号２１及び／または２４）と、を含む。
いくつかの実施形態では、本開示のバイパラトピック抗体またはその抗原結合断片は、ＦＲ５７の可変軽鎖及び／または可変重鎖（例えば、それぞれ配列番号１８及び／または２２）と、ｈｕＭＯＶ１９の可変軽鎖及び／または可変重鎖（例えば、それぞれ配列番号２１及び／または２５）と、を含む。いくつかの実施形態では、本開示のバイパラトピック抗体またはその抗原結合断片は、ＦＲ５７の可変軽鎖及び／または可変重鎖（例えば、それぞれ配列番号１８及び／または２２）と、ｈｕＭＯＶ１９の可変軽鎖及び／または可変重鎖（例えば、それぞれ配列番号２１及び／または５７）と、を含む。
いくつかの実施形態では、本開示のバイパラトピック抗体またはその抗原結合断片は、ＦＲ５７の可変軽鎖及び／または可変重鎖（例えば、それぞれ配列番号１８及び／または
２２）と、ｈｕＭＯＶ１９の可変軽鎖及び／または可変重鎖（例えば、それぞれ配列番号２１及び／または２６）と、を含む。
いくつかの実施形態では、本開示のバイパラトピック抗体またはその抗原結合断片は、ＦＲ５７の可変軽鎖及び／または可変重鎖（例えば、それぞれ配列番号１８及び／または２３）と、ｈｕＭＯＶ１９の可変軽鎖及び／または可変重鎖（例えば、それぞれ配列番号１９及び／または２４）と、を含む。
いくつかの実施形態では、本開示のバイパラトピック抗体またはその抗原結合断片は、ＦＲ５７の可変軽鎖及び／または可変重鎖（例えば、それぞれ配列番号１８及び／または２３）と、ｈｕＭＯＶ１９の可変軽鎖及び／または可変重鎖（例えば、それぞれ配列番号１９及び／または２５）と、を含む。いくつかの実施形態では、本開示のバイパラトピック抗体またはその抗原結合断片は、ＦＲ５７の可変軽鎖及び／または可変重鎖（例えば、それぞれ配列番号１８及び／または２２）と、ｈｕＭＯＶ１９の可変軽鎖及び／または可変重鎖（例えば、それぞれ配列番号２１及び／または５７）と、を含む。
いくつかの実施形態では、本開示のバイパラトピック抗体またはその抗原結合断片は、ＦＲ５７の可変軽鎖及び／または可変重鎖（例えば、それぞれ配列番号１８及び／または２３）と、ｈｕＭＯＶ１９の可変軽鎖及び／または可変重鎖（例えば、それぞれ配列番号１９及び／または２６）と、を含む。
いくつかの実施形態では、本開示のバイパラトピック抗体またはその抗原結合断片は、ＦＲ５７の可変軽鎖及び／または可変重鎖（例えば、それぞれ配列番号１８及び／または２３）と、ｈｕＭＯＶ１９の可変軽鎖及び／または可変重鎖（例えば、それぞれ配列番号２０及び／または２４）と、を含む。
いくつかの実施形態では、本開示のバイパラトピック抗体またはその抗原結合断片は、ＦＲ５７の可変軽鎖及び／または可変重鎖（例えば、それぞれ配列番号１８及び／または２３）と、ｈｕＭＯＶ１９の可変軽鎖及び／または可変重鎖（例えば、それぞれ配列番号２０及び／または２５）と、を含む。いくつかの実施形態では、本開示のバイパラトピック抗体またはその抗原結合断片は、ＦＲ５７の可変軽鎖及び／または可変重鎖（例えば、それぞれ配列番号１８及び／または２３）と、ｈｕＭＯＶ１９の可変軽鎖及び／または可変重鎖（例えば、それぞれ配列番号２０及び／または５７）と、を含む。
いくつかの実施形態では、本開示のバイパラトピック抗体またはその抗原結合断片は、ＦＲ５７の可変軽鎖及び／または可変重鎖（例えば、それぞれ配列番号１８及び／または２３）と、ｈｕＭＯＶ１９の可変軽鎖及び／または可変重鎖（例えば、それぞれ配列番号２０及び／または２６）と、を含む。
いくつかの実施形態では、本開示のバイパラトピック抗体またはその抗原結合断片は、ＦＲ５７の可変軽鎖及び／または可変重鎖（例えば、それぞれ配列番号１８及び／または２３）と、ｈｕＭＯＶ１９の可変軽鎖及び／または可変重鎖（例えば、それぞれ配列番号２１及び／または２４）と、を含む。
いくつかの実施形態では、本開示のバイパラトピック抗体またはその抗原結合断片は、ＦＲ５７の可変軽鎖及び／または可変重鎖（例えば、それぞれ配列番号１８及び／または２３）と、ｈｕＭＯＶ１９の可変軽鎖及び／または可変重鎖（例えば、それぞれ配列番号２１及び／または２５）と、を含む。いくつかの実施形態では、本開示のバイパラトピック抗体またはその抗原結合断片は、ＦＲ５７の可変軽鎖及び／または可変重鎖（例えば、それぞれ配列番号１８及び／または２３）と、ｈｕＭＯＶ１９の可変軽鎖及び／または可
変重鎖（例えば、それぞれ配列番号２１及び／または５７）と、を含む。
いくつかの実施形態では、本開示のバイパラトピック抗体またはその抗原結合断片は、ＦＲ５７の可変軽鎖及び／または可変重鎖（例えば、それぞれ配列番号１８及び／または２３）と、ｈｕＭＯＶ１９の可変軽鎖及び／または可変重鎖（例えば、それぞれ配列番号２１及び／または２６）と、を含む。
いくつかの実施形態では、バイパラトピック抗ＦＲα抗体またはその抗原結合断片は、（ｉ）ＦＲ５７と同じエピトープに結合するｓｃＦｖと、（ｉｉ）ｈｕＭｏｖ１９と同じエピトープに結合するｓｃＦｖと、を含む。いくつかの実施形態では、バイパラトピック抗ＦＲα抗体またはその抗原結合断片は、配列番号２７及び配列番号３０を含む。いくつかの実施形態では、バイパラトピック抗ＦＲα抗体またはその抗原結合断片は、配列番号２７及び配列番号３１を含む。いくつかの実施形態では、バイパラトピック抗ＦＲα抗体またはその抗原結合断片は、配列番号２７及び配列番号３２を含む。
いくつかの実施形態では、抗ＦＲαバイパラトピック抗体またはその抗原結合断片は、配列番号２８及び配列番号３０を含む。いくつかの実施形態では、バイパラトピック抗ＦＲα抗体またはその抗原結合断片は、配列番号２８及び配列番号３１を含む。いくつかの実施形態では、抗ＦＲαバイパラトピック抗体またはその抗原結合断片は、配列番号２８及び配列番号３２を含む。
いくつかの実施形態では、バイパラトピック抗ＦＲα抗体またはその抗原結合断片は、配列番号２９及び配列番号３０を含む。いくつかの実施形態では、バイパラトピック抗ＦＲα抗体またはその抗原結合断片は、配列番号２９及び配列番号３１を含む。いくつかの実施形態では、バイパラトピック抗ＦＲα抗体またはその抗原結合断片は、配列番号２９及び配列番号３２を含む。
配列番号２７～３２のＶＨ及びＶＬ配列は、異なる順序で配置され得ることが理解されるべきである。例えば、配列番号２７に記載されているようなＮ末端からＣ末端への配向は、ＶＨ－（Ｇ４Ｓ）４－ＶＬである。しかしながら、本明細書で開示されるのは、ＶＨ及びＶＬ配列がグリシン－セリンリンカーの周りで交換される配向（例えば、ＶＬ－（Ｇ４Ｓ）４－ＶＨ）であるｓｃＦｖポリペプチド配列である。
いくつかの実施形態では、バイパラトピック抗ＦＲα抗体またはその抗原結合断片は、配列番号２７、配列番号１９、及び配列番号２４を含む。いくつかの実施形態では、バイパラトピック抗ＦＲα抗体またはその抗原結合断片は、配列番号２７、配列番号１９、及び配列番号２５を含む。いくつかの実施形態では、バイパラトピック抗ＦＲα抗体またはその抗原結合断片は、配列番号２７、配列番号１９、及び配列番号５７を含む。いくつかの実施形態では、バイパラトピック抗ＦＲα抗体またはその抗原結合断片は、配列番号２７、配列番号１９、及び配列番号２６を含む。
いくつかの実施形態では、バイパラトピック抗ＦＲα抗体またはその抗原結合断片は、配列番号２７、配列番号２０、及び配列番号２４を含む。いくつかの実施形態では、バイパラトピック抗ＦＲα抗体またはその抗原結合断片は、配列番号２７、配列番号２０、及び配列番号２５を含む。いくつかの実施形態では、バイパラトピック抗ＦＲα抗体またはその抗原結合断片は、配列番号２７、配列番号２０、及び配列番号５７を含む。いくつかの実施形態では、バイパラトピック抗ＦＲα抗体またはその抗原結合断片は、配列番号２７、配列番号２０、及び配列番号２６を含む。
いくつかの実施形態では、バイパラトピック抗ＦＲα抗体またはその抗原結合断片は、
（ｉ）ＦＲ５７と同じエピトープに結合するｓｃＦｖと、（ｉｉ）ｈｕＭｏｖ１９と同じエピトープに結合する別個のポリペプチド上のＶＨ及びＶＬを含むＦＲα結合ドメインと、を含む。いくつかの実施形態では、バイパラトピック抗ＦＲα抗体またはその抗原結合断片は、配列番号２７、配列番号２１、及び配列番号２４を含む。いくつかの実施形態では、バイパラトピック抗ＦＲα抗体またはその抗原結合断片は、配列番号２７、配列番号２１、及び配列番号２５を含む。いくつかの実施形態では、バイパラトピック抗ＦＲα抗体またはその抗原結合断片は、配列番号２７、配列番号２１、及び配列番号５７を含む。いくつかの実施形態では、バイパラトピック抗ＦＲα抗体またはその抗原結合断片は、配列番号２７、配列番号２１、及び配列番号２６を含む。
いくつかの実施形態では、バイパラトピック抗ＦＲα抗体またはその抗原結合断片は、配列番号２８、配列番号１９、及び配列番号２４を含む。いくつかの実施形態では、バイパラトピック抗ＦＲα抗体またはその抗原結合断片は、配列番号２８、配列番号１９、及び配列番号２５を含む。いくつかの実施形態では、バイパラトピック抗ＦＲα抗体またはその抗原結合断片は、配列番号２８、配列番号１９、及び配列番号５７を含む。いくつかの実施形態では、バイパラトピック抗ＦＲα抗体またはその抗原結合断片は、配列番号２８、配列番号１９、及び配列番号２６を含む。
いくつかの実施形態では、バイパラトピック抗ＦＲα抗体またはその抗原結合断片は、配列番号２８、配列番号２０、及び配列番号２４を含む。いくつかの実施形態では、バイパラトピック抗ＦＲα抗体またはその抗原結合断片は、配列番号２８、配列番号２０、及び配列番号２５を含む。いくつかの実施形態では、バイパラトピック抗ＦＲα抗体またはその抗原結合断片は、配列番号２８、配列番号２０、及び配列番号５７を含む。いくつかの実施形態では、バイパラトピック抗ＦＲα抗体またはその抗原結合断片は、配列番号２８、配列番号２０、及び配列番号２６を含む。
いくつかの実施形態では、バイパラトピック抗ＦＲα抗体またはその抗原結合断片は、配列番号２８、配列番号２１、及び配列番号２４を含む。いくつかの実施形態では、バイパラトピック抗ＦＲα抗体またはその抗原結合断片は、配列番号２８、配列番号２１、及び配列番号２５を含む。いくつかの実施形態では、バイパラトピック抗ＦＲα抗体またはその抗原結合断片は、配列番号２８、配列番号２１、及び配列番号５７を含む。いくつかの実施形態では、バイパラトピック抗ＦＲα抗体またはその抗原結合断片は、配列番号２８、配列番号２１、及び配列番号２６を含む。
いくつかの実施形態では、バイパラトピック抗ＦＲα抗体またはその抗原結合断片は、配列番号２９、配列番号１９、及び配列番号２４を含む。いくつかの実施形態では、バイパラトピック抗ＦＲα抗体またはその抗原結合断片は、配列番号２９、配列番号１９、及び配列番号２５を含む。いくつかの実施形態では、バイパラトピック抗ＦＲα抗体またはその抗原結合断片は、配列番号２９、配列番号１９、及び配列番号５７を含む。いくつかの実施形態では、バイパラトピック抗ＦＲα抗体またはその抗原結合断片は、配列番号２９、配列番号１９、及び配列番号２６を含む。
いくつかの実施形態では、バイパラトピック抗ＦＲα抗体またはその抗原結合断片は、配列番号２９、配列番号２０、及び配列番号２４を含む。いくつかの実施形態では、バイパラトピック抗ＦＲα抗体またはその抗原結合断片は、配列番号２９、配列番号２０、及び配列番号２５を含む。いくつかの実施形態では、バイパラトピック抗ＦＲα抗体またはその抗原結合断片は、配列番号２９、配列番号２０、及び配列番号５７を含む。いくつかの実施形態では、バイパラトピック抗ＦＲα抗体またはその抗原結合断片は、配列番号２９、配列番号２０、及び配列番号２６を含む。
いくつかの実施形態では、バイパラトピック抗ＦＲα抗体またはその抗原結合断片は、配列番号２９、配列番号２１、及び配列番号２４を含む。いくつかの実施形態では、バイパラトピック抗ＦＲα抗体またはその抗原結合断片は、配列番号２９、配列番号２１、及び配列番号２５を含む。いくつかの実施形態では、バイパラトピック抗ＦＲα抗体またはその抗原結合断片は、配列番号２９、配列番号２１、及び配列番号５７を含む。いくつかの実施形態では、バイパラトピック抗ＦＲα抗体またはその抗原結合断片は、配列番号２９、配列番号２１、及び配列番号２６を含む。
いくつかの実施形態では、バイパラトピック抗ＦＲα抗体またはその抗原結合断片は、（ｉ）ｈｕＭｏｖ１９と同じエピトープに結合するｓｃＦｖと、（ｉｉ）ＦＲ５７と同じエピトープに結合する別個のポリペプチド上のＶＨ及びＶＬを含むＦＲα結合ドメインと、を含む。いくつかの実施形態では、バイパラトピック抗ＦＲα抗体またはその抗原結合断片は、配列番号３０、配列番号１７、及び配列番号２２を含む。いくつかの実施形態では、バイパラトピック抗ＦＲα抗体またはその抗原結合断片は、配列番号３０、配列番号１７、及び配列番号２３を含む。
いくつかの実施形態では、バイパラトピック抗ＦＲα抗体またはその抗原結合断片は、配列番号３０、配列番号１８、及び配列番号２２を含む。いくつかの実施形態では、バイパラトピック抗ＦＲα抗体またはその抗原結合断片は、配列番号３０、配列番号１８、及び配列番号２３を含む。
いくつかの実施形態では、バイパラトピック抗ＦＲα抗体またはその抗原結合断片は、（ｉ）ｈｕＭｏｖ１９と同じエピトープに結合するｓｃＦｖと、（ｉｉ）ＦＲ５７と同じエピトープに結合する別個のポリペプチド上のＶＨ及びＶＬを含むＦＲα結合ドメインと、を含む。いくつかの実施形態では、バイパラトピック抗ＦＲα抗体またはその抗原結合断片は、配列番号３１、配列番号１８、及び配列番号２２を含む。いくつかの実施形態では、バイパラトピック抗ＦＲα抗体またはその抗原結合断片は、配列番号３１、配列番号１８、及び配列番号２３を含む。
いくつかの実施形態では、バイパラトピック抗ＦＲα抗体またはその抗原結合断片は、配列番号３１、配列番号１７、及び配列番号２２を含む。いくつかの実施形態では、バイパラトピック抗ＦＲα抗体またはその抗原結合断片は、配列番号３１、配列番号１７、及び配列番号２３を含む。
いくつかの実施形態では、バイパラトピック抗ＦＲα抗体またはその抗原結合断片は、配列番号３２、配列番号１７、及び配列番号２２を含む。いくつかの実施形態では、バイパラトピック抗ＦＲα抗体またはその抗原結合断片は、配列番号３２、配列番号１７、及び配列番号２３を含む。
いくつかの実施形態では、バイパラトピック抗ＦＲα抗体またはその抗原結合断片は、配列番号３２、配列番号１８、及び配列番号２２を含む。いくつかの実施形態では、バイパラトピック抗ＦＲα抗体またはその抗原結合断片は、配列番号３２、配列番号１８、及び配列番号２３を含む。
いくつかの実施形態では、バイパラトピック抗体またはその抗原結合断片は、以下の表６に開示されるポリペプチド配列を含む。
いくつかの実施形態では、バイパラトピック抗ＦＲα抗体またはその抗原結合断片は、配列番号３３及び配列番号３４のポリペプチド配列を含む。いくつかの実施形態では、バイパラトピック抗ＦＲα抗体またはその抗原結合断片は、配列番号３５及び配列番号３６から選択されるポリペプチド配列を含む。いくつかの実施形態では、バイパラトピック抗ＦＲα抗体またはその抗原結合断片は、配列番号３７及び配列番号３８から選択されるポリペプチド配列を含む。いくつかの実施形態では、バイパラトピック抗ＦＲα抗体またはその抗原結合断片は、配列番号３９及び配列番号４０から選択されるポリペプチド配列を含む。
いくつかの実施形態では、バイパラトピック抗体またはその抗原結合断片は、以下の表７に開示されるポリペプチド配列を含む。
いくつかの実施形態では、バイパラトピック抗ＦＲα抗体またはその抗原結合断片は、配列番号４１～４３のポリペプチド配列を含む。いくつかの実施形態では、バイパラトピック抗ＦＲα抗体またはその抗原結合断片は、配列番号４４～４６のポリペプチド配列を含む。
本開示のバイパラトピック抗体またはその抗原結合断片は、リンカーをさらに含むことができる。いくつかの実施形態では、リンカーは、第１の抗体またはその抗原結合断片を、Ｎ末端からＣ末端に向けて、第２の抗体またはその抗原結合断片に連結することができる。他の実施形態では、リンカーは、第２のポリペプチドを、Ｎ末端からＣ末端に向けて、第１のポリペプチドに連結することができる。
一実施形態では、バイパラトピック抗体またはその抗原結合断片は、第１のペプチド、抗体、またはその抗原結合断片と、第２のペプチド、抗体、またはその抗原結合断片との間に位置するリンカー配列を含む。リンカーは任意の長さのものであってよく、少なくとも１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０、１１、１２、１３、１４、１５、１６、１７、１８、１９、２０、２５、３０、３１、３２、３３、３４、３５、３６、３７、３８、３９、４０、５０、もしくは６０、またはそれ以上のアミノ酸を含むことができる。他の実施形態では、本開示に有用なリンカーは、少なくとも１つのアミノ酸及び１００未満のアミノ酸、９０未満のアミノ酸、８０未満のアミノ酸、７０未満のアミノ酸、６０未満のアミノ酸、５０未満のアミノ酸、４０未満のアミノ酸、３０未満のアミノ酸、２０未満のアミノ酸、１９未満のアミノ酸、１８未満のアミノ酸、１７未満のアミノ酸、１６未満のアミノ酸、１５未満のアミノ酸、１４未満のアミノ酸、１３未満のアミノ酸、または１２未満のアミノ酸を有する。いくつかの実施形態では、リンカー配列は、グリシンアミノ酸残基を含む。他の例では、リンカー配列は、グリシンとセリンのアミノ酸残基の組み合わせを含む。
いくつかの実施形態では、そのようなグリシン／セリンリンカーは、ペプチドＧＧＧＳ（配列番号４９）もしくはＧＧＧＧＳ（配列番号５０）、またはそれらの所与のペプチドの１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０、もしくはそれ以上の反復を含む、それらの反復を含むがこれらに限定されないアミノ酸残基の任意の組み合わせを含むことができる。本明細書で開示されるグリシン／セリンリンカーは、（ＧＳ）ｎ、（ＧＧＳ）ｎ、（ＧＧＧＳ）ｎ、（ＧＧＧＧＳ）ｎ、または（ＧＧＧＧＳ）ｎのアミノ酸配列を含み、式中、ｎは、１、２、３、４、５、６、７、８、９、または１０の整数である。一実施形態では、リンカー配列はＧＧＧＧＳＧＧＧＧＳＧＧＧＧＳ（配列番号５１）（Ｇｌｙ４Ｓｅｒ）３とも呼ばれる）である。別の実施形態では、リンカー配列はＧＧＧＧＳＧＧＧＧＳＧＧＧＧＳＧＧＧＧＳ（配列番号５２）（Ｇｌｙ４Ｓｅｒ）４とも呼ばれる）である。
いくつかの実施形態では、バイパラトピック抗ＦＲα抗体は、改変（例えば、変異または操作）されたＦｃ領域を含む。例えば、いくつかの態様において、Ｆｃ領域は、抗体のエフェクター機能を低減または増強するために、血清半減期または抗体の他の機能的特性を改変するために改変されている。エフェクター機能の低減または排除は、特定の場合、例えば、その作用機序が標的抗原を担持する細胞の殺傷ではなく遮断または拮抗作用を含む抗体の場合に望ましい。エフェクター機能の増加は、ＦｃγＲが低レベルで発現する腫瘍及び外来細胞などの望ましくない細胞、例えば、ＦｃγＲＩＩＢのレベルが低い腫瘍特異的Ｂ細胞（例えば、非ホジキンリンパ腫、ＣＬＬ、及びバーキットリンパ腫）を対象とする場合に、一般的に望ましい。そのような付与されたかまたは改変されたエフェクター機能活性を有する本発明のイムノコンジュゲートは、エフェクター機能活性の効力の増強が望まれる疾患、障害、または感染症の治療、及び／または予防に有用である。いくつかの態様において、Ｆｃ領域は、ＩｇＭ、ＩｇＡ、ＩｇＧ、ＩｇＥ、または他のアイソタイプから選択されるアイソタイプである。
バイパラトピック抗ＦＲα抗体またはその抗原結合断片のＦｃ領域が、１つ以上のＦｃ受容体（例えば、ＦｃγＲ（複数可））に結合する能力を有し得るが、特定の実施形態では、抗体または抗体断片は、ＦｃγＲＩＡ（ＣＤ６４）、ＦｃγＲＩＩＡ（ＣＤ３２Ａ）、ＦｃγＲＩＩＢ（ＣＤ３２Ｂ）、ＦｃγＲＩＩＩＡ（ＣＤ１６ａ）、またはＦｃγＲＩＩＩＢ（ＣＤ１６ｂ）への（野生型Ｆｃ領域によって示される結合と比較して）改変された結合を有するバリアントＦｃ領域を含み、例えば、活性化受容体への結合に対する増強された結合を有し、及び／または抑制性受容体（複数可）に結合する能力が大幅に低下するか、まったくない。このように、バイパラトピック抗ＦＲα抗体またはその抗原結合断片のＦｃ領域は、ＣＨ２ドメインの一部または全部、及び／または完全なＦｃ領域のＣＨ
３ドメインの一部または全てを含んでいてもよく、あるいはバリアントＣＨ２及び／またはバリアントＣＨ３の配列を含んでもよい（例えば、完全なＦｃ領域のＣＨ２またはＣＨ３ドメインに対して１つ以上の挿入及び／または１つ以上の欠失を含んでもよい）。そのようなＦｃ領域は、非Ｆｃポリペプチド部分を含み得るか、または非天然の完全なＦｃ領域の部分を含み得るか、または天然に存在しないＣＨ２及び／またはＣＨ３ドメインの配向（例えば、２つのＣＨ２ドメインまたは２つのＣＨ３ドメイン、あるいはＮ末端からＣ末端方向に、ＣＨ３ドメインがＣＨ２ドメインに連結されるなど）を含み得る。
活性化受容体（例えば、ＦｃγＲＩＩＡ（ＣＤ１６Ａ））への結合を増加させ、抑制性受容体（例えば、ＦｃγＲＩＩＢ（ＣＤ３２Ｂ）への結合を低減させる改変を含む、エフェクター機能を改変するとして同定されたＦｃ領域改変は、当該技術分野で知られている（例えば、Ｓｔａｖｅｎｈａｇｅｎ，ｅｔ ａｌ．，Ｃａｎｃｅｒ Ｒｅｓ．５７（１８）：８８８２－８８９０（２００７）を参照されたい）。表８に、活性化受容体への結合を増加させ、及び／または抑制性受容体への結合を低減する、例示的な改変の、例示的な単一、二重、三重、四重、五重の置換を示す（ナンバリングは、Ｋａｂａｔに示されるＥＵインデックスのものであり、置換は、配列番号５９のアミノ酸配列と比較している）。
ＣＤ３２Ｂへの結合が低減し、及び／またはＣＤ１６Ａへの結合が増加したヒトＩｇＧ１ Ｆｃ領域の例示的なバリアントには、Ｆ２４３Ｌ、Ｒ２９２Ｐ、Ｙ３００Ｌ、Ｖ３０５Ｉ、またはＰ３９６Ｌの置換が含まれ、ナンバリングはＫａｂａｔに示されるＥＵインデックスのものである。これらのアミノ酸置換は、任意の組み合わせでヒトＩｇＧ１ Ｆｃ領域に存在し得る。一実施形態では、バリアントヒトＩｇＧ１ Ｆｃ領域は、Ｆ２４３Ｌ、Ｒ２９２Ｐ、及びＹ３００Ｌ置換を含む。別の実施形態では、バリアントヒトＩｇＧ１ Ｆｃ領域は、Ｆ２４３Ｌ、Ｒ２９２Ｐ、Ｙ３００Ｌ、Ｖ３０５Ｉ、及びＰ３９６Ｌ置換を含む。
いくつかの実施形態では、バイパラトピック抗ＦＲα 抗体またはその抗原結合断片は、エフェクター機能を低下させる改変を含む免疫グロブリン重鎖定常領域を含む（例えば、Ｉｄｕｓｏｇｉｅ ｅｔ ａｌ．，Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．１６６：２５７１－２５７５（２００１）；Ｓａｚｉｎｓｋｙ ｅｔ ａｌ．，ＰＮＡＳ ＵＳＡ １０５：２０１６
７－２０１７２（２００８）；Ｄａｖｉｓ ｅｔ ａｌ．，Ｊ．Ｒｈｅｕｍａｔｏｌ．３４：２２０４－２２１０（２００７）；Ｂｏｌｔ ｅｔ ａｌ．，Ｅｕｒ．Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．２３：４０３－４１１（１９９３）；Ａｌｅｇｒｅ ｅｔ ａｌ．，Ｔｒａｎｓｐｌａｎｔａｔｉｏｎ ５７：１５３７－１５４３（１９９４）；Ｘｕ ｅｔ ａｌ．，Ｃｅｌｌ Ｉｍｍｕｎｏｌ．２００：１６－２６（２０００）；Ｃｏｌｅ ｅｔ ａｌ．，Ｔｒａｎｓｐｌａｎｔａｔｉｏｎ ６８：５６３－５７１（１９９９）；Ｈｕｔｃｈｉｎｓ ｅｔ ａｌ．，ＰＮＡＳ ＵＳＡ ９２：１１９８０－１１９８４（１９９５）；Ｒｅｄｄｙ ｅｔ ａｌ．，Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．１６４：１９２５－１９３３（２０００）；ＷＯ９７／１１９７１、及びＷＯ０７／１０６５８５；米国特許出願公開第２００７／０１４８１６７Ａ１号；ＭｃＥａｒｃｈｅｒｎ ｅｔ ａｌ．，Ｂｌｏｏｄ １０９：１１８５－１１９２（２００７）；Ｓｔｒｏｈｌ，Ｃｕｒｒ．Ｏｐ．Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌ．２０：６８５－６９１（２００９）；ならびにＫｕｍａｇａｉ ｅｔ ａｌ．，Ｊ．Ｃｌｉｎ．Ｐｈａｒｍａｃｏｌ．４７：１４８９－１４９７（２００７）を参照されたい（そのそれぞれの内容は、参照によりその全体が本明細書に組み込まれる））。
いくつかの実施形態では、バイパラトピック抗ＦＲα抗体またはその抗原結合断片のＦｃ領域にとって好ましいのは、野生型ＩｇＧ Ｆｃ領域（配列番号５９）によって示される結合と比較して、ＦｃγＲＩＡ（ＣＤ６４）、ＦｃγＲＩＩＡ（ＣＤ３２Ａ）（アロタイプＲ１３１及びＨ１３１）、ＦｃγＲＩＩＢ（ＣＤ３２Ｂ）、ＦｃγＲＩＩＩＡ（ＣＤ１６ａ）（アロタイプＶ１５８及びＦ１５８）、ならびにＦｃγＲＩＩＩＢ（ＣＤ１６ｂ）（アロタイプＦｃγＩＩＩｂ－ＮＡ１及びＦｃγＩＩＩｂ－ＮＡ２）からなる群から選択されるエフェクター受容体への低下した結合（または実質的に結合しないこと）を示すことである。いくつかの実施形態では、バイパラトピック抗ＦＲα抗体またはその抗原結合断片のＦｃ領域バリアントのエフェクター受容体結合親和性は、対応する免疫グロブリンの野生型Ｆｃ領域を含む対応する抗体または抗体結合断片の結合親和性と比較して、１／１０以下、１／５０以下、または１／１００以下に減少している。
特定の実施形態では、バイパラトピック抗ＦＲα抗体または抗原結合断片は、低下したエフェクター機能（例えば、減少したＡＤＣＣ）を示すＩｇＧ Ｆｃ領域を含み、２３３、２３４、２３５、２３６、２３７、２３８、２３９、２６５、２６６、２６７、２６９、２７０、２７１、２９５、２９６、２９７、２９８、３００、３２４、３２５、３２７、３２８、３２９、３３１、及び３３２からなる群から選択される１つ以上のアミノ酸位置で改変を含み、ここで、アミノ酸位置のナンバリングは、Ｋａｂａｔに記載されるＥＵインデックスに従う。一実施形態では、バイパラトピック抗ＦＲα抗体または抗原結合断片のＣＨ２－ＣＨ３ドメインは、置換：Ｌ２３４Ａ、Ｌ２３５Ａ、Ｄ２６５Ａ、Ｎ２９７Ｑ、Ｎ２９７Ａ、及びＮ２９７Ｇのうちの任意の１、２、３、または４つを含み、ナンバリングはＫａｂａｔに示されるＥＵインデックスのものである。別の実施形態では、ＣＨ２－ＣＨ３ドメインは、Ｎ２９７Ｑ置換、Ｎ２９７Ａ置換、またはＬ２３４Ａ及びＬ２３５Ａ置換を含み、これらの変異は、ＦｃＲ結合を無効にするためである。代替的に、バイパラトピック抗ＦＲα抗体またはその抗原結合断片は、（野生型ＩｇＧ１ Ｆｃ領域（配列番号５９）によって示される結合及びエフェクター機能と比較して）低下した（または実質的にない）ＦｃγＲＩＩＩＡ（ＣＤ１６ａ）への結合、及び／または低減したエフェクター機能を本質的に示す、天然に存在するＦｃ領域のＣＨ２－ＣＨ３ドメインを含む。特定の実施形態では、バイパラトピック抗ＦＲα抗体のＦｃ定常領域は、ＩｇＧ２ Ｆｃ領域（配列番号６０）またはＩｇＧ４ Ｆｃ領域（配列番号６１）を含む。Ｎ２９７Ａ、Ｎ２９７Ｇ、Ｎ２９７Ｑ、Ｌ２３４Ａ、Ｌ２３５Ａ、及びＤ２６５Ａ置換はエフェクター機能を無効にするので、エフェクター機能が望まれる状況では、これらの置換は好ましくは使用されないであろう。
低下または消滅エフェクター機能を有するＦｃ領域を含むバイパラトピック抗ＦＲα抗
体またはその抗原結合断片のＣＨ２及びＣＨ３ドメインのための好ましいＩｇＧ１配列は、置換Ｌ２３４Ａ／Ｌ２３５Ａ（下線で示す）を含む（配列番号６２）：
低下または消滅エフェクター機能を有するＦｃ領域を含むバイパラトピック抗ＦＲα抗体またはその抗原結合断片のＣＨ２及びＣＨ３ドメインのための好ましいＩｇＧ１配列は、置換Ｎ２９７Ａ（下線で示す）を含む（配列番号６３）：
低下または消滅エフェクター機能を有するＦｃ領域を含むバイパラトピック抗ＦＲα抗体またはその抗原結合断片のＣＨ２及びＣＨ３ドメインのための好ましいＩｇＧ１配列は、置換Ｎ２９７Ｑ（下線で示す）を含む（配列番号６４）：
いくつかの実施形態では、バイパラトピック抗ＦＲα抗体またはその抗原結合断片は、配列番号６２、配列番号６３、または配列番号６４から選択されるＦｃ（免疫グロブリン）配列を含む。いくつかの実施形態では、バイパラトピック抗ＦＲα抗体またはその抗原結合断片は、低下または消滅したエフェクター機能を有するＦｃ（免疫グロブリン）配列（例えば、上述の配列番号６２、配列番号６３、及び／または配列番号６４に示される置換を含む）、及び本明細書に記載の１つ以上のノブインホール変異を含む。いくつかの実施形態では、Ｆｃ配列は、本明細書で開示されるようなノブ変異を含む。いくつかの実施形態では、Ｆｃ配列は、本明細書で開示されるようなホール変異を含む。
いくつかの実施形態では、バイパラトピック抗ＦＲα抗体またはその抗原結合断片は、ＩｇＧ１－Ｃ２２０Ｓ、Ｃ２２６Ｓ、Ｃ２２９Ｓ、Ｐ２３８Ｓ；ＩｇＧ１－Ｃ２２６Ｓ、Ｃ２２９Ｓ；ＩｇＧ１－Ｃ２２６Ｓ、Ｃ２２９Ｓ、Ｅ２３３Ｐ、Ｌ２３４Ｖ、Ｌ２３５Ａ；ＩｇＧ１－Ｌ２３４Ａ、Ｌ２３５Ａ；ＩｇＧ１－Ｌ２３４Ｆ、Ｌ２３５Ｅ、Ｐ３３１Ｓ；ＩｇＧ１－Ｌ２３４Ｆ、Ｌ２３５Ｅ、Ｐ３３１Ｓ；ＩｇＧ１－Ｈ２６８Ｑ、Ａ３３０Ｓ、Ｐ３３１Ｓ；ＩｇＧ１－Ｇ２３６Ｒ、Ｌ３２８Ｒ；ＩｇＧ１－Ｌ２３５Ｇ、Ｇ２３６Ｒ、ＩｇＧ１－Ｎ２９７Ａ；ＩｇＧ１－Ｎ３２５Ａ、Ｌ３２８Ｒ；ＩｇＧ１－Ｎ３２５Ｌ、Ｌ３２８Ｒ；ＩｇＧ１－Ｋ３２６Ｗ、Ｅ３３３Ｓ；ＩｇＧ２－Ｖ２３４Ａ、Ｇ２３７Ａ；
ＩｇＧ２－Ｅ３３３Ｓ；ＩｇＧ２ Ｈ２６８Ｑ、Ｖ３０９Ｌ、Ａ３３０Ｓ、Ａ３３１Ｓ；ＩｇＧ４－Ｓ２２８Ｐ、Ｌ２３６Ｅ；ＩｇＧ４－Ｆ２３４Ａ、Ｌ２３５Ａ；ＩｇＧ４－Ｆ２３４Ａ、Ｇ２３７Ａ、Ｅ３１８Ａ；ＩｇＧ４－Ｌ２３５Ａ、Ｇ２３７Ａ、Ｅ３１８Ａ；ＩｇＧ４－Ｌ２３６Ｅ；ＩｇＧ２－ＥＵ配列１１８～２６０；及びＩｇＧ４－ＥＵ配列２６１～４４７に対応する１つのまたは複数の改変を含み、ここで、位置のナンバリングは、Ｋａｂａｔに示されるＥＵインデックスによる。
いくつかの実施形態では、バイパラトピック抗ＦＲα抗体またはその抗原結合断片は、ＣＤＣ活性が低下している重鎖免疫グロブリン定常ドメインを含む。特定の態様において、バイパラトピック抗ＦＲα抗体またはその抗原結合断片は、ＣＤＣ活性を低下させる変異を含むＩｇＧ１重鎖定常領域を含む（例えば、ＷＯ１９９７／１１９７１及びＷＯ２００７／１０６５８５；米国特許出願公開第２００７／０１４８１６７Ａ１号；ＭｃＥａｒｃｈｅｒｎ ｅｔ ａｌ．，Ｂｌｏｏｄ １０９：１１８５－１１９２（２００７）；Ｈａｙｄｅｎ－Ｌｅｄｂｅｔｔｅｒ ｅｔ ａｌ．，Ｃｌｉｎ．Ｃａｎｃｅｒ １５：２７３９－２７４６（２００９）；Ｌａｚａｒ ｅｔ ａｌ．，ＰＮＡＳ ＵＳＡ １０３：４００５－４０１０（２００６）；Ｂｒｕｃｋｈｅｉｍｅｒ ｅｔ ａｌ．，Ｎｅｏｐｌａｓｉａ １１：５０９－５１７（２００９）；Ｓｔｒｏｈｌ，Ｃｕｒｒ．Ｏｐ．Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌ．２０：６８５－６９１（２００９）；ならびにＳａｚｉｎｓｋｙ ｅｔ
ａｌ．，ＰＮＡＳ ＵＳＡ １０５：２０１６７－２０１７２（２００８）を参照されたい（それぞれは、参照によりその全体が本明細書に組み込まれる））。ＣＤＣを減少させる重鎖定常ドメイン配列改変の例としては、ＥＵインデックスによる、ＩｇＧ１－Ｃ２２６Ｓ、Ｃ２２９Ｓ、Ｅ２３３Ｐ、Ｌ２３４Ｖ、Ｌ２３５Ａ；ＩｇＧ１－Ｃ２２６Ｓ、Ｐ２３０Ｓ；ＩｇＧ１－Ｌ２３４Ｆ、Ｌ２３５Ｅ、Ｐ３３１Ｓ；ＩｇＧ１－Ｓ２３９Ｄ、Ａ３３０Ｌ、Ｉ３３２Ｅ；ＩｇＧ２ ＥＵ配列１１８～２６０；ＩｇＧ４－ＥＵ配列２６１～４４７；及びＩｇＧ２－Ｈ２６８Ｑ、Ｖ３０９Ｌ、Ａ３３０Ｓ、Ａ３３１Ｓに対応する１つ以上の改変が挙げられる。
いくつかの実施形態では、提供されるバイパラトピック抗ＦＲα抗体またはその抗原結合断片は、１つ以上の半減期を延長させるアミノ酸改変（例えば、置換）を含む重鎖免疫グロブリン定常ドメインを含む。Ｆｃ領域を含む分子の半減期を増加させることができる多数の変異は、当該技術分野で知られており、本明細書で提供されるバイパラトピック抗ＦＲα抗体またはその抗原結合断片の構成要素として包含される。例えば、米国特許第６，２７７，３７５号、同第７，０８３，７８４号、同第７，２１７，７９７号、及び同第８，０８８，３７６号、米国特許出願公開第２００２／０１４７３１１号；及び同第２００７／０１４８１６４号；ならびにＰＣＴ公開番号ＷＯ１９９８／２３２８９；ＷＯ２００９／０５８４９２；及びＷＯ２０１０／０３３２７９を参照されたい（それぞれの内容は、参照によりその全体が本明細書に組み込まれる）。
Ｆｃ領域を含むタンパク質の血清半減期は、ＦｃＲｎに対するＦｃ領域の結合親和性を増加させることによって増加させることができる。本明細書で使用される場合、「半減期」という用語は、それらの投与後の分子の平均生存時間の尺度である分子の薬物動態学的特性を意味する。半減期は、例えば、血清中（すなわち、循環半減期）または他の組織で測定されるとき、対象（例えば、ヒトの患者または他の哺乳動物）の身体またはその特定のコンパートメントから、既知の量の分子の５０％を排除するのに必要な時間として表すことができる。一般に、半減期の増加は、投与された分子の循環中の平均滞留時間（ＭＲＴ）の増加をもたらす。
いくつかの実施形態では、バイパラトピック抗ＦＲα抗体またはその抗原結合断片は、２３８、２５０、２５２、２５４、２５６、２５７、２５６、２６５、２７２、２８６、２８８、３０３、３０５、３０７、３０８、３０９、３１１、３１２、３１７、３４０、
３５６、３６０、３６２、３７６、３７８、３８０、３８２、４１３、４２４、４２８、４３３、４３４、４３５、及び４３６からなる群から選択される１つ以上の位置で半減期を延長させるアミノ酸置換を含み、ここで、アミノ酸位置のナンバリングはＥＵインデックスに従う。いくつかの実施形態では、バイパラトピック抗ＦＲα抗体またはその抗原結合断片は、位置２５１～２５７、２８５～２９０、３０８～３１４、３８５～３８９、及び４２８～４３６におけるアミノ酸残基の一つ以上のアミノ酸置換を含み、ここで、アミノ酸位置のナンバリングはＥＵインデックスに従う。いくつかの実施形態では、バイパラトピック抗ＦＲα抗体またはその抗原結合断片は、Ｋａｂａｔ位置２５２のアミノ酸のＴｙｒ、Ｐｈｅ、Ｔｒｐ、もしくはＴｈｒによる置換；Ｋａｂａｔ位置２５４のアミノ酸のＴｈｒによる置換；Ｋａｂａｔ位置２５６のアミノ酸のＳｅｒ、Ａｒｇ、Ｇｌｎ、Ｇｌｕ、Ａｓｐ、もしくはＴｈｒによる置換；Ｋａｂａｔ位置２５７のアミノ酸のＬｅｕによる置換；Ｋａｂａｔ位置３０９のアミノ酸のＰｒｏによる置換；Ｋａｂａｔ位置３１１のアミノ酸のＳｅｒによる置換；Ｋａｂａｔの４２８位のアミノ酸のＴｈｒ、Ｌｅｕ、Ｐｈｅ、もしくはＳｅｒによる置換；Ｋａｂａｔの４３３位のアミノ酸のＡｒｇ、Ｓｅｒ、Ｉｓｏ、Ｐｒｏ、もしくはＧｌｎによる置換；または、Ｋａｂａｔの４３４位のアミノ酸のＴｒｐ、Ｍｅｔ、Ｓｅｒ、Ｈｉｓ、Ｐｈｅ、もしくはＴｙｒによる置換の一つ以上を含む。より具体的には、バイパラトピック抗ＦＲα抗体またはその抗原結合断片ドメインは、野生型ヒトＩｇＧの定常ドメインに対して、Ｋａｂａｔ位置２５２のアミノ酸のＴｙｒによる置換、Ｋａｂａｔ位置２５４のアミノ酸のＴｙｒによる置換、及びＫａｂａｔ位置２５６のアミノ酸のＧｌｕによる置換を含むアミノ酸置換を含むことができる。
いくつかの実施形態では、バイパラトピック抗ＦＲα抗体またはその抗原結合断片は、Ｔ２５０Ｑ、Ｍ２５２Ｙ、Ｓ２５４Ｔ、Ｔ２５６Ｅ、Ｋ２８８Ｄ、Ｔ３０７Ｑ、Ｖ３０８Ｐ、Ａ３７８Ｖ、Ｍ４２８Ｌ、Ｎ４３４Ａ、Ｎ４３４Ｓ、Ｎ４３４Ｈ、Ｎ４３４Ｙ、Ｈ４３５Ｋ、及びＹ４３６Ｉから選択される少なくとも１つの置換を含み、ここで、ナンバリングは、Ｋａｂａｔに示されるＥＵインデックスのものである。さらなる実施形態では、バイパラトピック抗ＦＲα抗体またはその抗原結合断片は、置換基は、（ａ）Ｍ２５２Ｙ、Ｓ２５４Ｔ、及びＴ２５６Ｅ；（ｂ）Ｍ２５２Ｙ及びＳ２５４Ｔ；（ｃ）Ｍ２５２Ｙ及びＴ２５６Ｅ；（ｄ）Ｔ２５０Ｑ及びＭ４２８Ｌ；（ｅ）Ｔ３０７Ｑ及びＮ４３４Ａ；（ｆ）Ａ３７８Ｖ及びＮ４３４Ａ；（ｇ）Ｎ４３４Ａ及びＹ４３６Ｉ；（ｈ）Ｖ３０８Ｐ及びＮ４３４Ａ；ならびに（ｉ）Ｋ２８８Ｄ及びＨ４３５Ｋから選択される置換を含む。
好ましい実施形態では、バイパラトピック抗ＦＲα抗体またはその抗原結合断片は、置換Ｍ２５２Ｙ、Ｓ２５４Ｔ、及びＴ２５６Ｅのうちの任意の１、２、または３つを含むバリアントＩｇＧ Ｆｃ領域を含む。本開示はさらに、（ａ）エフェクター機能及び／またはＦｃγＲを改変する１つ以上の変異；及び（ｂ）血清半減期を延長させる１つ以上の変異を含むバリアントＦｃ領域を有する、バイパラトピック抗ＦＲα抗体または抗原結合断片を提供する。
ＩＩＩ．バイパラトピック抗体産生
ＦＲαに免疫特異的に結合するバイパラトピック抗体またはその抗原結合断片は、例えば、化学合成または組換え発現技術によって、抗体の合成のための当該分野で公知の任意の方法により生成することができる。本明細書に記載の方法は、別途示されない限り、分子生物学、微生物学、遺伝子分析、組換えＤＮＡ、有機化学、生化学、ＰＣＲ、オリゴヌクレオチド合成及び修飾、核酸ハイブリダイゼーション、及び当業者の範囲内の関連分野における従来の技術を使用する。これらの技術は、例えば、本明細書で引用された参考文献に記載されており、文献で完全に説明されている。例えば、Ｓａｍｂｒｏｏｋ Ｊ ｅ
ｔ ａｌ．，（２００１）Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ Ｃｌｏｎｉｎｇ：Ａ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ Ｍａｎｕａｌ，Ｃｏｌｄ Ｓｐｒｉｎｇ Ｈａｒｂｏｒ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ Ｐｒｅｓｓ，Ｃｏｌｄ Ｓｐｒｉｎｇ Ｈａｒｂｏｒ，ＮＹ；Ａｕｓｕｂｅｌ ＦＭ ｅｔ ａｌ．，Ｃｕｒｒｅｎｔ Ｐｒｏｔｏｃｏｌｓ ｉｎ Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ Ｂｉｏｌｏｇｙ，Ｊｏｈｎ Ｗｉｌｅｙ ＆ Ｓｏｎｓ（１９８７ ａｎｄ ａｎｎｕａｌ ｕｐｄａｔｅｓ）；Ｃｕｒｒｅｎｔ Ｐｒｏｔｏｃｏｌｓ ｉｎ Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｙ，Ｊｏｈｎ Ｗｉｌｅｙ ＆ Ｓｏｎｓ（１９８７ ａｎｄ ａｎｎｕａｌ ｕｐｄａｔｅｓ）Ｇａｉｔ（ｅｄ．）（１９８４）Ｏｌｉｇｏｎｕｃｌｅｏｔｉｄｅ Ｓｙｎｔｈｅｓｉｓ：Ａ Ｐｒａｃｔｉｃａｌ Ａｐｐｒｏａｃｈ，ＩＲＬ Ｐｒｅｓｓ；Ｅｃｋｓｔｅｉｎ（ｅｄ．）（１９９１）Ｏｌｉｇｏｎｕｃｌｅｏｔｉｄｅｓ ａｎｄ Ａｎａｌｏｇｕｅｓ：Ａ Ｐｒａｃｔｉｃａｌ Ａｐｐｒｏａｃｈ，ＩＲＬ Ｐｒｅｓｓ；Ｂｉｒｒｅｎ Ｂ ｅｔ ａｌ．，（ｅｄｓ．）（１９９９）Ｇｅｎｏｍｅ Ａｎａｌｙｓｉｓ：Ａ
Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ Ｍａｎｕａｌ，Ｃｏｌｄ Ｓｐｒｉｎｇ Ｈａｒｂｏｒ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ Ｐｒｅｓｓを参照されたい。
本明細書で提供されるバイパラトピック抗体またはその抗原結合断片は、２つの異なるモノクローナル抗体を化学的に連結することによって、または２つのハイブリドーマ細胞株を融合してハイブリッドハイブリドーマを生成することによって調製することができる。
特定の実施形態では、記載されたバイパラトピック抗体またはその抗原結合断片は、例えばＤＮＡ配列の合成、遺伝子操作を介した創出を含む任意の手段により調製、発現、創出、または単離される。特定の実施形態では、そのようなバイパラトピック抗体またはその抗原結合断片は、インビボで動物または哺乳動物（例えば、ヒト）の抗体生殖系列レパートリー内に天然に存在しない配列（例えば、ＤＮＡ配列、またはアミノ酸配列）を含む。
二重特異性、二価抗体またはその抗原結合断片を作製する方法は、例えば、米国特許第５，７３１，１６８号、同第５，８０７，７０６号、同第５，８２１，３３３号、ならびに米国特許出願公開第２００３／０２０７３４号、及び同第２００２／０１５５５３７号に記載され、これらのそれぞれは、参照によりその全体が本明細書に組み込まれる。二重特異性４価抗体、及びそれらを作製する方法は、例えば、国際出願公開番号ＷＯ０２／０９６９４８及び同ＷＯ００／４４７８８に記載され、両方の開示は、参照によりその全体が本明細書に組み込まれる。一般に、国際出願公開番号ＷＯ９３／１７７１５、ＷＯ９２／０８８０２、ＷＯ９１／００３６０、及びＷＯ９２／０５７９３；Ｔｕｔｔ ｅｔ ａｌ．，Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．１４７：６０－６９（１９９１）；米国特許第４，４７４，８９３号；同第４，７１４，６８１号；同第４，９２５，６４８号；同第５，５７３，９２０号；及び５，６０１，８１９；及びＫｏｓｔｅｌｎｙ ｅｔ ａｌ．，Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．１４８：１５４７－１５５３（１９９２）を参照されたい（これらのそれぞれは、参照によりその全体が本明細書に組み込まれる）。
二重特異性抗体を生成するための１つの方法は、「ノブイントゥホール」戦略と呼ばれている（例えば、国際公開ＷＯ２００６／０２８９３６を参照されたい）。この技術では、ＩｇＧのＣＨ３ドメインの界面を形成する選択されたアミノ酸を変異させることにより、Ｉｇ重鎖の誤対形成が減少する。２本の重鎖が直接相互作用するＣＨ３ドメイン内の位置で、小さい側鎖（ホール）を有するアミノ酸が一方の重鎖の配列に導入され、大きい側鎖（ノブ）を有するアミノ酸がもう一方の重鎖上の対応物である相互作用する残基の位置に導入される。いくつかの実施形態では、本発明の組成物は、２つのポリペプチド間の界面で相互作用する選択されたアミノ酸を変異させることによって二重特異性抗体を優先的に形成するように、ＣＨ３ドメインが改変された免疫グロブリン鎖を有する。二重特異性
抗体は、同じサブクラス（例えば、ＩｇＧ１もしくはＩｇＧ３）または異なるサブクラス（例えば、ＩｇＧ１及びＩｇＧ３、もしくはＩｇＧ３及びＩｇＧ４）の免疫グロブリン鎖から構成することができる。
一実施形態では、バイパラトピック抗体またはその抗原結合断片は、「ノブ鎖」におけるＴ３６６Ｗ変異及び「ホール鎖」におけるＴ３６６Ｓ、Ｌ３６８Ａ、Ｙ４０７Ｖ変異、及び任意選択によるＣＨ３ドメイン間の追加の鎖間ジスルフィド架橋を含む。これらは、例えば、「ノブ鎖」にＹ３４９Ｃ変異、及び「ホール鎖」にＥ３５６Ｃ変異またはＳ３５４Ｃ変異；「ノブ鎖」にＲ４０９Ｄ、Ｋ３７０Ｅ変異、及び「ホール鎖」にＤ３９９Ｋ、Ｅ３５７Ｋ変異；「ノブ鎖」にＴ３６６Ｗ変異、及び「ホール鎖」にＴ３６６Ｓ、Ｌ３６８Ａ、Ｙ４０７Ｖ変異；「ノブ鎖」にＲ４０９Ｄ、Ｋ３７０Ｅ変異、及び「ホール鎖」にＤ３９９Ｋ、Ｅ３５７Ｋ変異；鎖の一方にＹ３４９Ｃ、Ｔ３６６Ｗ変異、対応する鎖にＥ３５６Ｃ、Ｔ３６６Ｓ、Ｌ３６８Ａ、Ｙ４０７Ｖ変異；鎖の一方にＹ３４９Ｃ、Ｔ３６６Ｗ変異、対応する鎖にＳ３５４Ｃ、Ｔ３６６Ｓ、Ｌ３６８Ａ、Ｙ４０７Ｖ変異を導入することによる（ＥＵのナンバリングシステムに従ったナンバリング）。
本明細書に記載の二重特異性抗体は、例えば、国際公開番号ＷＯ２０１１／１３１７４６、ＷＯ２０１１／１４７９８６、ＷＯ２００８／１１９３５３、及びＷＯ２０１３／０６０８６７、ならびにＬａｂｒｉｊｎ ＡＦ ｅｔ ａｌ．，（２０１３）ＰＮＡＳ １１０（１３）：５１４５－５１５０に記載されているように、ＤｕｏＢｏｄｙテクノロジープラットフォーム（Ｇｅｎｍａｂ Ａ／Ｓ）に従って生成することもできる。ＤｕｏＢｏｄｙ技術は、２つの重鎖及び２つの軽鎖を含む第１のＦＲα結合ドメインの一方の半分を、２つの重鎖及び２つの軽鎖を含む第２のＦＲα結合ドメインの一方の半分と組み合わせるために使用することができる。得られたヘテロダイマーは、第２のＦＲα結合ドメイン由来の１つの重鎖及び１つの軽鎖と対形成した、第１のＦＲα結合ドメイン由来の１つの重鎖及び１つの軽鎖を含む。
バイパラトピック抗体またはその抗原結合断片は、場合によっては、ＩｇＧ４とＩｇＧ１、ＩｇＧ４とＩｇＧ２、ＩｇＧ４とＩｇＧ２、ＩｇＧ４とＩｇＧ３、またはＩｇＧ１とＩｇＧ３の鎖のヘテロダイマーを含む。そのようなヘテロ二量体重鎖抗体は、例えば、ヘテロ二量体重鎖形成を促進するように、ヒトＩｇＧ４及びＩｇＧ１またはＩｇＧ３のＣＨ３ドメインの界面を形成する選択されたアミノ酸を改変することによって日常的に操作することができる。
特定の実施形態では、バイパラトピック抗体またはその抗原結合断片は、キメラＦＲα結合ドメインまたはヒト化ＦＲα結合ドメインを含むことができる。特定の実施形態では、バイパラトピック抗体またはその抗原結合断片は、Ｆ（ａｂ’）２断片であり得る。Ｆ（ａｂ’）２断片には、ヒンジ領域のジスルフィド結合によって連結された四量体抗体分子の２つの抗原結合アームが含まれている。
本明細書に記載のバイパラトピック抗体またはその抗原結合断片は、当業者に知られている任意の技術によって生成することができる。例えば、本明細書に記載のＦ（ａｂ’）２断片は、ペプシンなどの酵素を使用して、免疫グロブリン分子のタンパク質分解切断によって生成することができる。
特定の態様において、本明細書で提供されるのは、本明細書に記載の１つ以上の細胞を培養することを含む、バイパラトピック抗体またはその抗原結合断片を作製する方法である。特定の態様において、本明細書で提供されるのは、バイパラトピック抗体またはその抗原結合断片を作製する方法であって、本明細書に記載の細胞または宿主細胞（例えば、本明細書に記載の抗体をコードするポリヌクレオチドを含む細胞または宿主細胞）を使用
して、抗体または抗原結合断片を発現させる（例えば、組換え発現）ことを含む、方法である。特定の実施形態では、細胞は単離された細胞である。特定の実施形態では、外因性ポリヌクレオチドが細胞に導入されている。特定の実施形態では、方法は、細胞または宿主細胞から得られた抗体または抗原結合断片を精製するステップをさらに含む。
ＦＲα抗原結合ドメインは、ハイブリドーマの使用、組換え、及びファージディスプレイ技術、またはそれらの組み合わせを含む、当該技術分野で公知の多種多様な技術を用いて、例えば、モノクローナル抗体から調製することができる。例えば、モノクローナル抗体は、当該技術分野で知られており、例えば、Ｈａｒｌｏｗ Ｅ ＆ Ｌａｎｅ Ｄ，Ａｎｔｉｂｏｄｉｅｓ：Ａ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ Ｍａｎｕａｌ，（Ｃｏｌｄ Ｓｐｒｉｎｇ Ｈａｒｂｏｒ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ Ｐｒｅｓｓ，２ｎｄ ｅｄ．１９８８）；Ｈａｍｍｅｒｌｉｎｇ ＧＪ ｅｔ ａｌ．，ｉｎ：Ｍｏｎｏｃｌｏｎａｌ Ａｎｔｉｂｏｄｉｅｓ ａｎｄ Ｔ－Ｃｅｌｌ Ｈｙｂｒｉｄｏｍａｓ ５６３ ６８１ （Ｅｌｓｅｖｉｅｒ，Ｎ．Ｙ．，１９８１）において教示されているものを含むハイブリドーマ技術を使用して産生することができる。本明細書で使用される場合、「モノクローナル抗体」という用語は、ハイブリドーマ技術によって産生される抗体に限定されない。例えば、モノクローナル抗体は、本明細書に記載の抗体を外因的に発現する宿主細胞から組換え的に産生することができる。本明細書に記載のモノクローナル抗体は、例えば、Ｋｏｈｌｅｒ Ｇ ＆ Ｍｉｌｓｔｅｉｎ Ｃ（１９７５）Ｎａｔｕｒｅ ２５６：４９５に記載されているハイブリドーマ法によって作製することができるか、または、例えば、本明細書に記載の技術を使用して、例えばファージライブラリーから単離することができる。クローン細胞株及びそれによって発現されるモノクローナル抗体の調製のための他の方法は、当該技術分野において周知である（例えば、Ｓｈｏｒｔ Ｐｒｏｔｏｃｏｌｓ ｉｎ Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ Ｂｉｏｌｏｇｙ，（２００２）５ｔｈ Ｅｄ．，Ａｕｓｕｂｅｌ ＦＭ ｅｔ ａｌ．、前出の１１章を参照されたい）。
さらに、本明細書に記載のＦＲα結合ドメインはまた、当該技術分野で既知のさまざまなファージディスプレイ法を用いても生成することができる。ファージディスプレイ法では、タンパク質は、それらをコードするポリヌクレオチド配列を担持するファージ粒子の表面で提示される。特に、ＶＨ及びＶＬドメインをコードするＤＮＡ配列は、動物のｃＤＮＡライブラリー（例えば、罹患組織のヒトまたはマウスのｃＤＮＡライブラリー）から増幅される。ＶＨ及びＶＬドメインをコードするＤＮＡは、ＰＣＲによってｓｃＦｖリンカーと一緒に組み換えられ、ファージミドベクターにクローニングされる。ベクターをＥ．ｃｏｌｉにエレクトロポレーションし、Ｅ．ｃｏｌｉにヘルパーファージを感染させる。これらの方法で使用されるファージは、典型的には、ｆｄ及びＭ１３を含む繊維状ファージであり、ＶＨ及びＶＬドメインは通常、ファージ遺伝子ＩＩＩまたは遺伝子ＶＩＩＩのいずれかに組換えにより融合される。特定の抗原に結合する抗体または断片を発現するファージは、例えば、標識した抗原、または固体表面もしくはビーズに結合もしくは捕捉された抗原を用いて、抗原によって選択または特定され得る。本明細書に記載の抗体を作製するために使用することができるファージディスプレイ法の例としては、Ｂｒｉｎｋｍａｎ Ｕ ｅｔ ａｌ．，（１９９５）Ｊ Ｉｍｍｕｎｏｌ Ｍｅｔｈｏｄｓ １８２：４１－５０；Ａｍｅｓ ＲＳ ｅｔ ａｌ．，（１９９５）Ｊ Ｉｍｍｕｎｏｌ Ｍｅｔｈｏｄｓ １８４：１７７－１８６；Ｋｅｔｔｌｅｂｏｒｏｕｇｈ ＣＡ ｅｔ ａｌ．，（１９９４）Ｅｕｒ Ｊ Ｉｍｍｕｎｏｌ ２４：９５２－９５８；Ｐｅｒｓｉｃ Ｌ
ｅｔ ａｌ．，（１９９７）Ｇｅｎｅ １８７：９－１８；Ｂｕｒｔｏｎ ＤＲ ＆ Ｂａｒｂａｓ ＣＦ（１９９４）Ａｄｖａｎ Ｉｍｍｕｎｏｌ ５７：１９１－２８０；ＰＣＴ出願番号ＰＣＴ／ＧＢ９１／００１１３４；国際公開番号ＷＯ９０／０２８０９、ＷＯ９１／１０７３７、ＷＯ９２／０１０４７、ＷＯ９２／１８６１９、ＷＯ９３／１１２３６、ＷＯ９５／１５９８２、ＷＯ９５／２０４０１、及びＷＯ９７／１３８４４；ならびに米国特許第５，６９８，４２６号、同第５，２２３，４０９号、同第５，４０３，
４８４号、同第５，５８０，７１７号、同第５，４２７，９０８号、同第５，７５０，７５３号、同第５，８２１，０４７号、同第５，５７１，６９８号、同第５，４２７，９０８号、同第５，５１６，６３７号、同第５，７８０，２２５号、同第５，６５８，７２７号、同第５，７３３，７４３号、及び同第５，９６９，１０８号に開示されるものが挙げられる。
上述の参考文献に記載されているように、ファージ選択後、ファージからの抗体コード領域を単離し、ヒトＦＲα結合ドメインを含むＦＲα結合ドメインを生成し、例えば、以下に記載されているように、哺乳動物細胞、昆虫細胞、植物細胞、酵母、及び細菌を含む任意の望ましい宿主で発現させることができる。例えば、Ｆａｂ、Ｆａｂ’、及びＦ（ａｂ’）２断片などのＦＲα結合ドメインを組換え的に生成する技術は、ＰＣＴ公開ＷＯ９２／２２３２４、Ｍｕｌｌｉｎａｘ ＲＬ ｅｔ ａｌ．，（１９９２）ＢｉｏＴｅｃｈｎｉｑｕｅｓ １２（６）：８６４－９；Ｓａｗａｉ Ｈ ｅｔ ａｌ．，（１９９５）Ａｍ Ｊ Ｒｅｐｒｏｄ Ｉｍｍｕｎｏｌ ３４：２６－３４；及びＢｅｔｔｅｒ Ｍ ｅｔ ａｌ．，（１９８８）Ｓｃｉｅｎｃｅ ２４０：１０４１－１０４３に開示されているものなどの当該技術分野で既知の方法を使用して採用することができる。
一態様では、ＦＲα結合ドメインまたは抗体を産生するために、ＶＨまたはＶＬヌクレオチド配列、制限部位、及び制限部位を保護するための隣接配列を含むＰＣＲプライマーを使用して、鋳型、例えば、ｓｃＦｖクローンからＶＨ及びＶＬ配列を増幅することができる。当業者に公知のクローニング技術を利用して、ＰＣＲ増幅ＶＨドメインをＶＨ定常領域を発現するベクターにクローニングし、ＰＣＲ増幅ＶＬドメインをＶＬ定常領域、例えば、ヒトカッパまたはラムダ定常領域を発現するベクターにクローニングすることができる。ＶＨ及びＶＬドメインは、必要な定常領域を発現する１つのベクターにクローニングすることもできる。重鎖変換ベクター及び軽鎖変換ベクターは、その後、当業者に公知の技術を使用して抗体、例えば、ＩｇＧを発現する安定なまたは一過性細胞株を生成する細胞株に共トランスフェクトされる。
ＩＶ．バイパラトピック抗体をコードするポリヌクレオチド
特定の実施形態では、本開示はバイパラトピック抗ＦＲα抗体またはその抗原結合断片、またはそのような抗体または断片のドメイン、例えば、ＶＨ、ＶＬ、ＶＬとＶＨ（例えば、ｓｃＦｖにおいて）、重鎖、軽鎖、ｓｃＦｖを伴う重鎖、ｓｃＦｖを伴う軽鎖、定常領域、またはｓｃＦｖを伴う定常領域をコードする核酸を含むポリヌクレオチドを包含する。
したがって、本明細書で提供されるのは、配列番号１７～４０をコードするポリヌクレオチドである。本明細書でまた提供されるのは、任意のバイパラトピック抗ＦＲα抗体またはその抗原結合断片をコードするポリヌクレオチドの組み合わせを含む組成物（例えば、配列番号１７をコードするポリヌクレオチドと配列番号２２をコードするポリヌクレオチドを含む組成物、配列番号１８をコードするポリヌクレオチドと配列番号２３をコードするポリヌクレオチドを含む組成物、配列番号１９をコードするポリヌクレオチドと配列番号２４をコードするポリヌクレオチドを含む組成物、配列番号２０をコードするポリヌクレオチドと配列番号２５をコードするポリヌクレオチドを含む組成物、配列番号２１をコードするポリヌクレオチドと配列番号２６をコードするポリヌクレオチドを含む組成物、配列番号３３をコードするポリヌクレオチドと配列番号３４をコードするポリヌクレオチドを含む組成物、配列番号３５をコードするポリヌクレオチドと配列番号３６をコードするポリヌクレオチドを含む組成物、配列番号３７をコードするポリヌクレオチドと配列番号３８をコードするポリヌクレオチドを含む組成物、配列番号３９をコードするポリヌクレオチドと配列番号４０をコードするポリヌクレオチドを含む組成物、配列番号４１をコードするポリヌクレオチドと配列番号４２をコードするポリヌクレオチドと配列番号４
３をコードするポリヌクレオチドを含む組成物、または、配列番号４４をコードするポリヌクレオチドと配列番号４５をコードするポリヌクレオチドと配列番号４６をコードするポリヌクレオチドを含む組成物）である。本明細書でまた提供されるのは、任意のバイパラトピック抗ＦＲα抗体またはその抗原結合断片をコードするポリヌクレオチドの組み合わせを含む組成物（例えば、配列番号２０をコードするポリヌクレオチドと配列番号５７をコードするポリヌクレオチドを含む組成物）である。
特定の実施形態では、バイパラトピック抗ＦＲα抗体またはその抗原結合断片は、ブダペスト条約の条項の下でＡｍｅｒｉｃａｎ Ｔｙｐｅ Ｃｕｌｔｕｒｅ Ｃｏｌｌｅｃｔｉｏｎ（ＡＴＣＣ）（１０８０１ Ｕｎｉｖｅｒｓｉｔｙ Ｂｏｕｌｅｖａｒｄ，Ｍａｎａｓｓａｓ，ＶＡ ２０１１０に所在）に寄託された、ＡＴＣＣ寄託番号ＰＴＡ－１０７７４（２０１０年４月７日に寄託）、ＰＴＡ－１２５９１５（「Ｍｏｖ１９－Ｆｃ－ホール」、２０１９年４月２９日にＡＴＣＣに寄託され、２０１９年４月３０日にＡＴＣＣに受領された）、及びＰＴＡ－１２５９１６（「ＦＲ５７ｓｃＦｖ２－Ｆｃ－ノブ」；２０１９年４月２９日にＡＴＣＣに寄託され、２０１９年４月３０日にＡＴＣＣに受領された）を有するプラスミドによってコードされる。
本発明のポリヌクレオチドは、ＲＮＡの形態またはＤＮＡの形態であり得る。ＤＮＡには、ｃＤＮＡ、ゲノムＤＮＡ、及び合成ＤＮＡが含まれ、二本鎖、または一本鎖がコード鎖または非コード（アンチセンス）鎖であり得る場合一本鎖であり得る。いくつかの実施形態では、ポリヌクレオチドは、１つ以上の内因性イントロンを欠くｃＤＮＡまたはＤＮＡである。
いくつかの実施形態では、ポリヌクレオチドは、天然に存在しないポリヌクレオチドである。いくつかの実施形態では、ポリヌクレオチドは組換え的に産生される。
特定の実施形態では、ポリヌクレオチドは単離される。特定の実施形態では、ポリヌクレオチドは実質的に純粋である。いくつかの実施形態では、ポリヌクレオチドは、天然成分から精製される。
いくつかの実施形態では、本明細書で提供されるポリヌクレオチドは、特定の宿主での発現のためにコドン最適化されている（ヒトｍＲＮＡのコドンを、Ｅ．ｃｏｌｉなどの細菌宿主によって好ましいコドンに変更する）。
Ｖ．細胞及びベクター
本明細書に記載のポリヌクレオチドを含むベクター及び細胞も提供される。
特定の態様において、本明細書で提供されるのは、ＦＲαに特異的に結合する、本明細書に記載の抗体、その抗原結合断片を（例えば、組換え的に）発現し、関連するポリヌクレオチド及び発現ベクターを含む細胞（例えば、宿主細胞）である。本明細書で提供されるのは、宿主細胞、好ましくは哺乳動物細胞での組換え発現のためのそのような抗ＦＲα抗体またはその断片をコードするヌクレオチド配列を含むポリヌクレオチドを含むベクター（例えば発現ベクター）である。また、本明細書で提供されるのは、本明細書に記載の抗ＦＲα抗体またはその抗原結合断片を組換え発現するためのベクターを含む宿主細胞である。特定の態様において、本明細書で提供されるのは、宿主細胞においてそのような抗体またはその抗原結合断片を発現することを含む、本明細書に記載の抗体またはその抗原結合断片を産生するための方法である。
本明細書に記載の抗体またはその抗原結合断片の組換え発現は、抗体またはその断片（例えば、重鎖または軽鎖）、重鎖または軽鎖を含む融合タンパク質（例えば、１つ以上の
可変ドメインに融合した重鎖または軽鎖（例えば、ｓｃＦｖ））、可変ドメイン、ＶＨ及びＶＬを含むポリペプチド（例えば、ｓｃＦｖ）、定常ドメイン、及びまたは定常ドメインを含む融合タンパク質（例えば、１つ以上の可変ドメインに融合された定常ドメイン（例えば、ＳｃＦｖ））をコードするポリヌクレオチドを含む発現ベクターの構築を含む。本明細書に記載の抗体またはその断片をコードするポリヌクレオチドが得られたら、抗体またはその断片の生成のためのベクターは、当該技術分野で周知の技術を用いて組換えＤＮＡ技術によって生成することができる。このように、抗体またはその断片をコードするヌクレオチド配列であるポリヌクレオチドを発現することによるタンパク質の調製方法が本明細書に記載される。当業者に周知の方法を使用して、抗体またはその断片のコード配列及び適切な転写及び翻訳制御シグナルを含む発現ベクターを構築することができる。これらの方法には、例えば、インビトロ組換えＤＮＡ技術、合成技術、及びインビボ遺伝子組換えが含まれる。プロモーターに作動可能に連結された、抗体またはその断片をコードするヌクレオチド配列を含む複製可能なベクターも提供される。そのようなベクターは、例えば、抗体分子の定常領域をコードするヌクレオチド配列を含むことができ（例えば、国際公開番号ＷＯ８６／０５８０７、及びＷＯ８９／０１０３６；ならびに米国特許第５，１２２，４６４号）、抗体の可変ドメインは、重鎖全体、軽鎖全体、または重鎖と軽鎖の両方の全体の発現のためにそのようなベクターにクローニングすることができる。付加的な可変ドメインまたはＦＲα結合ドメイン（例えば、ｓｃＦｖ）をコードするヌクレオチド配列はまた、ＦＲα結合ドメインまたはその断片（例えば、ＶＨまたはＶＬ）に融合した重鎖または軽鎖を含む融合タンパク質の発現のためのそのようなベクターにクローニングすることができる。
発現ベクターは、従来の技術によって細胞（例えば、宿主細胞）に導入することができ、次に、得られた細胞を従来の技術によって培養して、本明細書に記載の抗体または断片（例えば、重鎖または軽鎖）、重鎖または軽鎖を含む融合タンパク質（例えば、１つ以上の可変ドメインに融合した重鎖または軽鎖（例えば、ｓｃＦｖ））、可変ドメイン、ＶＨ及びＶＬを含むポリペプチド（例えば、ｓｃＦｖ）、定常ドメイン、及びまたは定常ドメインを含む融合タンパク質（例えば、１つ以上の可変ドメインに融合された定常ドメイン（例えば、ＳｃＦｖ））を生成することができる。したがって、本明細書で提供されるのは、宿主細胞におけるそのような配列の発現のためのプロモーターに作動可能に連結された、本明細書に記載の抗体またはその断片をコードするポリヌクレオチドを含む宿主細胞である。
特定の実施形態では、多鎖抗体の発現のために、全ての鎖を個別にコードするベクターを、免疫グロブリン分子全体の発現のために宿主細胞で共発現させることができる。
特定の実施形態では、宿主細胞は、本明細書に記載の抗体またはその抗原結合断片の全ての鎖をコードするポリヌクレオチドを含むベクターを含む。特定の実施形態では、宿主細胞は、本明細書に記載の抗体またはその抗原結合断片の全ての鎖をコードする複数の異なるベクターを含む。
ベクターまたはベクターの組み合わせは、相互作用して本明細書に記載の抗体またはその抗原結合断片を形成する２つのポリヌクレオチドをコードするポリヌクレオチドを含むことができる：例えば、重鎖及びｓｃＦＶを含む融合タンパク質をコードする第１のポリヌクレオチドと、軽鎖をコードする第２のポリヌクレオチド；軽鎖を含む融合タンパク質をコードする第１のポリヌクレオチド及びｓｃＦｖと、重鎖をコードする第２のポリヌクレオチド；重鎖及びＶＨを含む融合タンパク質をコードする第１のポリヌクレオチドと、軽鎖及びＶＬを含む融合タンパク質をコードする第２のポリヌクレオチドなど。２つのポリペプチドが２つの別個のベクター中のポリヌクレオチドによってコードされる場合、ベクターは、重鎖を含む融合タンパク質をコードするポリヌクレオチドを３：軽鎖を含む融
合タンパク質をコードするポリヌクレオチドを１の比率で宿主細胞にトランスフェクトされる。
ベクターまたはベクターの組み合わせは、相互作用して本明細書に記載の抗体またはその抗原結合断片を形成する３つのポリペプチドをコードするポリヌクレオチドを含むことができる：例えば、重鎖をコードする第１のポリヌクレオチド、軽鎖をコードする第２のポリヌクレオチド、ならびに重鎖定常ドメイン、ＶＨ、及びＶＬを含む融合タンパク質をコードする第３のポリヌクレオチド（任意選択で、ＶＨ及びＶＬはｓｃＦｖである）。３つのポリペプチドが３つの別個のベクター中のポリヌクレオチドによってコードされる場合、ベクターは、重鎖をコードするポリヌクレオチドを６：軽鎖をコードするポリヌクレオチドを３：融合タンパク質をコードするポリヌクレオチドを１の比率で宿主細胞にトランスフェクトすることができる。
ベクターまたはベクターの組み合わせは、相互作用して本明細書に記載の抗体またはその抗原結合断片を形成する４つのポリペプチドをコードするポリヌクレオチドを含むことができる：例えば、第１の重鎖をコードする第１のポリヌクレオチド、第２の重鎖をコードする第２のポリヌクレオチド、第１の軽鎖をコードする第３のポリヌクレオチド、及び第２の軽鎖をコードする第４のポリヌクレオチド。
いくつかの実施形態では、宿主細胞は、上述のベクターまたはベクターの組み合わせを含む。他の実施形態では、２つの宿主細胞、３つの宿主細胞、または４つの宿主細胞が、上述のベクターまたはベクターの組み合わせを含む。
さまざまな宿主発現ベクターシステムを利用して、本明細書に記載の抗体分子またはその断片（例えば、重鎖または軽鎖）、重鎖または軽鎖を含む融合タンパク質（例えば、１つ以上の可変ドメインに融合した重鎖または軽鎖（例えば、ｓｃＦｖ））、可変ドメイン、ＶＨ及びＶＬを含むポリペプチド（例えば、ｓｃＦｖ）、定常ドメイン、及びまたは定常ドメインを含む融合タンパク質（例えば、１つ以上の可変ドメインに融合された定常ドメイン（例えば、ＳｃＦｖ））を発現させることができる。そのような宿主発現系は、目的のコード配列を産生し、その後精製することができる媒体を表すが、適切なヌクレオチドコード配列で形質転換またはトランスフェクトすると、本明細書に記載の抗体またはその断片をインサイチュで発現できる細胞も表す。これらには、抗体コード配列を含む組換えバクテリオファージＤＮＡ、プラスミドＤＮＡ、またはコスミドＤＮＡ発現ベクターで形質転換された細菌（例えば、Ｅ．ｃｏｌｉ及びＢ．ｓｕｂｔｉｌｉｓ）などの微生物；抗体コード配列を含む組換え酵母発現ベクターで形質転換された酵母（例えば、Ｓａｃｃｈａｒｏｍｙｃｅｓ Ｐｉｃｈｉａ）；抗体コード配列を含む組換えウイルス発現ベクター（例えば、バキュロウイルス）に感染した昆虫細胞系；抗体コード配列を含む組換えウイルス発現ベクター（例えば、カリフラワーモザイクウイルス、ＣａＭＶ；タバコモザイクウイルス、ＴＭＶ）に感染したか、または抗体コード配列を含む組換えプラスミド発現ベクター（例えば、Ｔｉプラスミド）で形質転換された植物細胞系（例えば、Ｃｈｌａｍｙｄｏｍｏｎａｓ ｒｅｉｎｈａｒｄｔｉｉなどの緑藻）；あるいは哺乳類細胞のゲノム（例えば、メタロチオネインプロモーター）または哺乳類ウイルス（例えば、アデノウイルス後期プロモーター；ワクシニアウイルス７．５Ｋプロモーター）に由来するプロモーターを含む組換え発現構築物を担持する哺乳類細胞システム（例えば、ＣＯＳ（例えば、ＣＯＳ１またはＣＯＳ）、ＣＨＯ、ＢＨＫ、ＭＤＣＫ、ＨＥＫ２９３、ＮＳ０、ＰＥＲ．Ｃ６、ＶＥＲＯ、ＣＲＬ７Ｏ３Ｏ、ＨｓＳ７８Ｂｓｔ、ＨｅＬａ、及びＮＩＨ３Ｔ３、ＨＥＫ－２９３Ｔ、ＨｅｐＧ２、ＳＰ２１０、Ｒ１．１、Ｂ－Ｗ、Ｌ－Ｍ、ＢＳＣ１、ＢＳＣ４０、ＹＢ／２０、及びＢＭＴ１０細胞）が含まれるが、これらに限定されない。特定の実施形態では、本明細書に記載の抗体またはその抗原結合断片を発現するための細胞は、ＣＨＯ細胞、例えば、ＣＨＯ ＧＳ Ｓｙｓｔｅｍ（商標）（Ｌｏｎｚａ）からのＣＨ
Ｏ細胞である。特定の実施形態では、ＦＲα（例えば、ヒトＦＲα）に免疫特異的に結合する抗体をコードするヌクレオチド配列の発現は、構成的プロモーター、誘導性プロモーター、または組織特異的プロモーターによって調節される。
本明細書に記載の抗体分子またはその断片（例えば、重鎖または軽鎖、可変ドメイン、及び／またはＶＨ及びＶＬを含むポリペプチド（例えば、ｓｃＦｖ））は、組換え発現によって生成されており、免疫グロブリン分子の精製のための当該技術分野で知られている任意の方法、例えば、クロマトグラフィー（例えば、イオン交換、アフィニティー、特にプロテインＡ後の特定の抗原に対するアフィニティー、及びサイジングカラムクロマトグラフィーによる）、遠心分離、異なる溶解度、またはタンパク質の精製のための他の標準的な技術によって精製することができる。さらに、本明細書に記載の抗体は、精製を促進するために、本明細書に記載の、または当該技術分野で既知の異種ポリペプチド配列に融合することができる。
ＶＩ．バイパラトピック抗体を含むイムノコンジュゲート
一態様において、本開示は、本明細書に記載のバイパラトピックＦＲα結合剤（例えば、抗体またはその抗原結合断片）と、細胞傷害性薬剤とを含むイムノコンジュゲートに関する。細胞傷害性薬剤は、「イムノコンジュゲート」、「コンジュゲート」、または「ＡＤＣ」を生成するために、当該技術分野で公知の技術を用いて、直接的に、またはリンカーを介して間接的に、ＦＲα結合剤に結合またはコンジュゲートさせることができる。
Ａ．例示的なイムノコンジュゲート
第１の実施形態では、本明細書で提供されるイムノコンジュゲートは、バイパラトピックＦＲα抗体またはその抗原結合断片上に位置する１つ以上のリジン残基のεアミノ基を介して本明細書に記載のマイタンシノイド化合物に共有結合された本明細書に記載のバイパラトピックＦＲα抗体抗またはその抗原結合性断片を含む。一実施形態では、イムノコンジュゲートは式（Ｉ）：
またはその薬学的に許容される塩で表され、式中、
ＣＢは、バイパラトピック抗ＦＲα抗体またはその抗原結合断片であり；
Ｌ２は、以下の式のうちの１つによって表され：
式中、
Ｒｘ、Ｒｙ、Ｒｘ’、及びＲｙ’は、それぞれの存在について、独立してＨ、－ＯＨ、ハロゲン、－Ｏ－（Ｃ１－４アルキル）、－ＳＯ３Ｈ、－ＮＲ４０Ｒ４１Ｒ４２ ＋、または任意選択で－ＯＨ、ハロゲン、ＳＯ３Ｈ、もしくはＮＲ４０Ｒ４１Ｒ４２ ＋によって置換されたＣ１－４アルキルであり、ここで、Ｒ４０、Ｒ４１、及びＲ４２は、それぞれ独立してＨまたはＣ１－４アルキルであり；
ｌ及びｋは、それぞれ独立して、１～１０の整数であり；
ｌ１は、２～５の整数であり；
ｋ１は、１～５の整数であり；
ｓ１は細胞結合剤ＣＢに接続された部位を示し、ｓ３はＡ基に接続された部位を示し；
Ａは、アミノ酸残基または２～２０個のアミノ酸残基を含むペプチドであり；
Ｒ１及びＲ２は、それぞれ独立して、ＨまたはＣ１－３アルキルであり；
Ｌ１は、以下の式によって表され：
－ＣＲ３Ｒ４－（ＣＨ２）１－８－Ｃ（＝Ｏ）－
式中、Ｒ３及びＲ４は、それぞれ独立してＨまたはＭｅであり、Ｌ１の－Ｃ（＝Ｏ）－部
分は、Ｄに接続されており；
Ｄは以下の式で表され：
ｑは、１～２０の整数である。いくつかの実施形態では、ｑは、
１～１０の整数である。いくつかの実施形態では、ｑは、２～５の整数である。いくつかの実施形態では、ｑは、３～４の整数である。
第１の実施形態の第１の特定の実施形態では、本明細書で提供されるイムノコンジュゲートは、上述の式（Ｉ）で表され、式中、Ｒｘ、Ｒｙ、Ｒｘ’、及びＲｙ’は全てＨであり；ｌ及びｋはそれぞれ独立して、２～６の整数であり；残りの変数は、式（Ｉ）について上述したとおりである。
第１実施形態の第２の特定の実施形態では、本明細書で提供されるイムノコンジュゲートは、上述の式（Ｉ）で表され、式中、Ａは、２～５個のアミノ酸残基を含むペプチドであり；残りの変数は、第１の実施形態または第１の特定の実施形態で式（Ｉ）について上述したとおりである。いくつかの実施形態では、Ａは、プロテアーゼによって切断可能なペプチドである。いくつかの実施形態では、腫瘍組織において発現するプロテアーゼによって切断可能なペプチドである。いくつかの実施形態では、Ａは、それぞれ独立してＬまたはＤ異性体としてのＡｌａ、Ａｒｇ、Ａｓｎ、Ａｓｐ、Ｃｉｔ、Ｃｙｓ、セリノ－Ｃｙｓ、Ｇｌｎ、Ｇｌｕ、Ｇｌｙ、Ｉｌｅ、Ｌｅｕ、Ｌｙｓ、Ｍｅｔ、Ｐｈｅ、Ｐｒｏ、Ｓｅｒ、Ｔｈｒ、Ｔｒｐ、Ｔｙｒ、及びＶａｌからなる群から選択される、－ＮＨ－ＣＲ１Ｒ２－Ｓ－Ｌ１－Ｄに共有結合したアミノ酸を有するペプチドである。いくつかの実施形態では、－ＮＨ－ＣＲ１Ｒ２－Ｓ－Ｌ１－Ｄに接続されたアミノ酸はＬアミノ酸である。
第１の実施形態の第３の特定の実施形態では、本明細書で提供されるイムノコンジュゲートは、上述の式（Ｉ）によって表され、式中、Ａは、Ｇｌｙ－Ｇｌｙ－Ｇｌｙ、Ａｌａ－Ｖａｌ、Ｖａｌ－Ａｌａ、Ｄ－Ｖａｌ－Ａｌａ、Ｖａｌ－Ｃｉｔ、Ｄ－Ｖａｌ－Ｃｉｔ、Ｖａｌ－Ｌｙｓ、Ｐｈｅ－Ｌｙｓ、Ｌｙｓ－Ｌｙｓ、Ａｌａ－Ｌｙｓ、Ｐｈｅ－Ｃｉｔ、Ｌｅｕ－Ｃｉｔ、Ｉｌｅ－Ｃｉｔ、Ｐｈｅ－Ａｌａ、Ｐｈｅ－Ｎ９－トシル－Ａｒｇ、Ｐｈｅ－Ｎ９－ニトロ－Ａｒｇ、Ｐｈｅ－Ｐｈｅ－Ｌｙｓ、Ｄ－Ｐｈｅ－Ｐｈｅ－Ｌｙｓ、Ｇｌｙ－Ｐｈｅ－Ｌｙｓ、Ｌｅｕ－Ａｌａ－Ｌｅｕ、Ｉｌｅ－Ａｌａ－Ｌｅｕ、Ｖａｌ－Ａｌａ－Ｖａｌ、Ａｌａ－Ａｌａ－Ａｌａ、Ｄ－Ａｌａ－Ａｌａ－Ａｌａ、Ａｌａ－Ｄ－Ａｌａ－Ａｌａ、Ａｌａ－Ａｌａ－Ｄ－Ａｌａ、Ａｌａ－Ｌｅｕ－Ａｌａ－Ｌｅｕ（配列番号５４）、β－Ａｌａ－Ｌｅｕ－Ａｌａ－Ｌｅｕ（配列番号５５）、Ｇｌｙ－Ｐｈｅ－Ｌｅｕ－Ｇｌｙ（配列番号５６）、Ｖａｌ－Ａｒｇ、Ａｒｇ－Ａｒｇ、Ｖａｌ－Ｄ－Ｃｉｔ、Ｖａｌ－Ｄ－Ｌｙｓ、Ｖａｌ－Ｄ－Ａｒｇ、Ｄ－Ｖａｌ－Ｃｉｔ、Ｄ－Ｖａｌ－Ｌ
ｙｓ、Ｄ－Ｖａｌ－Ａｒｇ、Ｄ－Ｖａｌ－Ｄ－Ｃｉｔ、Ｄ－Ｖａｌ－Ｄ－Ｌｙｓ、Ｄ－Ｖａｌ－Ｄ－Ａｒｇ、Ｄ－Ａｒｇ－Ｄ－Ａｒｇ、Ａｌａ－Ａｌａ、Ａｌａ－Ｄ－Ａｌａ、Ｄ－Ａｌａ－Ａｌａ、Ｄ－Ａｌａ－Ｄ－Ａｌａ、Ａｌａ－Ｍｅｔ、Ｇｌｎ－Ｖａｌ、Ａｓｎ－Ａｌａ、Ｇｌｎ－Ｐｈｅ、Ｇｌｎ－Ａｌａ、Ｄ－Ａｌａ－Ｐｒｏ、及びＤ－Ａｌａ－ｔＢｕ－Ｇｌｙからなる群から選択され、それぞれのペプチドの最初のアミノ酸はＬ２基に接続され、それぞれのペプチドの最後のアミノ酸は－ＮＨ－ＣＲ１Ｒ２－Ｓ－Ｌ１－Ｄに接続され、残りの変数は、第１の実施形態または第１の特定の実施形態で式（Ｉ）について上述したとおりである。
第１実施形態の第４の特定の実施形態では、本明細書で提供されるイムノコンジュゲートは、上述の式（Ｉ）で表され、式中、Ｒ１とＲ２は両方ともＨであり；残りの変数は、第１の実施形態または第１、第２、もしくは第３の特定の実施形態で式（Ｉ）について上述したとおりである。
第１実施形態の第５の特定の実施形態では、本明細書で提供されるイムノコンジュゲートは、上述の式（Ｉ）で表され、式中、Ｌ１は－（ＣＨ２）４－６－Ｃ（＝Ｏ）－であり；残りの変数は、第１の実施形態または第１、第２、第３、もしくは第４の特定の実施形態で式（Ｉ）について上述したとおりである。
［０１］第１の実施形態の第６の特定の実施形態では、本明細書で提供されるイムノコンジュゲートは、上述の式（Ｉ）で表され、式中、Ｄは、以下の式で表され：
残りの変数は第１の実施の形態または第１、第２、第３、第４、もしくは第５の特定の実施形態で式（Ｉ）について上述したとおりである。
第７の特定の実施形態では、本明細書で提供されるイムノコンジュゲートは、以下の式：
またはその薬学的に許容される塩で表され、式中、
は、Ｌｙｓのアミン基を介してＬ２基に接続される、バイパラトピック抗ＦＲα抗体またはその抗原結合断片であり；
は、Ｃｙｓのチオール基を介してＬ２基に接続される、バイパラトピック抗ＦＲα抗体またはその抗原結合断片であり；
Ｒ３及びＲ４は、それぞれ独立してＨまたはＭｅであり；
ｍ１、ｍ３、ｎ１、ｒ１、ｓ１、及びｔ１は、それぞれ独立して１～６の整数であり；
ｍ２、ｎ２、ｒ２、ｓ２、及びｔ２は、それぞれ独立して、１～７の整数であり；
ｔ３は、１～１２の整数であり；
Ｄ１は以下の式で表され：
ｑは、１～２０の整数である。いくつかの実施形態では、ｑは、１～１０の整数である。いくつかの実施形態では、ｑは２～５の整数である。いくつかの実施形態では、ｑは３～４の整数である。より具体的な実施形態では、Ｄ１は以下の式で表される：
第８の特定の実施形態では、本明細書で提供されるイムノコンジュゲートは、以下の式で表され：
式中：
ｍ１及びｍ３は、それぞれ独立して、２～４の整数であり；
ｍ２は、２～５の整数であり；
ｒ１は、２～６の整数であり；
ｒ２は、２～５の整数であり；
残りの変数は、第７の特定の実施形態に記載されているとおりである。
第９の特定の実施形態では、第７または第８の特定の実施形態で記載したイムノコンジュゲートについて、Ａは、Ａｌａ－Ａｌａ－Ａｌａ、Ａｌａ－Ｄ－Ａｌａ－Ａｌａ、Ａｌａ－Ａｌａ、Ｄ－Ａｌａ－Ａｌａ、Ｖａｌ－Ａｌａ、Ｄ－Ｖａｌ－Ａｌａ、Ｄ－Ａｌａ－Ｐｒｏ、またはＤ－Ａｌａ－ｔＢｕ－Ｇｌｙである。より具体的な実施形態では、第７または第８の特定の実施形態で記載したイムノコンジュゲートについて、ＡはＬ－Ａｌａ－Ｄ－Ａｌａ－Ｌ－Ａｌａである。
第１０の特定の実施形態では、本明細書で提供されるイムノコンジュゲートは、以下の式：
またはその薬学的に許容される塩で表され、式中、
Ａは、Ａｌａ－Ａｌａ－Ａｌａ、Ａｌａ－Ｄ－Ａｌａ－Ａｌａ、Ａｌａ－Ａｌａ、Ｄ－Ａｌａ－Ａｌａ、Ｖａｌ－Ａｌａ、Ｄ－Ｖａｌ－Ａｌａ、Ｄ－Ａｌａ－Ｐｒｏ、またはＤ－Ａｌａ－ｔＢｕ－Ｇｌｙであり；
Ｄ１は以下の式で表され：
残りの変数は、第７、第８、または第９の特定の実施形態に記載されているとおりである。より具体的な実施形態では、ＡはＬ－Ａｌａ－Ｄ－Ａｌａ－Ｌ－Ａｌａである。より具体的な実施形態では、Ｄ１は、以下の式で表される：
第１１の特定の実施形態では、本明細書で提供されるイムノコンジュゲートは、以下の式で表され：
式中、Ｄ１は以下の式で表される：
より具体的な実施形態では、Ｄ１は、以下の式で表される：
第１２の特定の実施形態では、本明細書で提供されるイムノコンジュゲートは、以下の式で表され：
式中：
ＣＢＡは、バイパラトピック抗ＦＲα抗体またはその抗原結合断片であり、当該抗体またはその抗原結合断片は、（ｉ）配列番号１～３の配列を有する、軽鎖相補性決定領域Ｌ－ＣＤＲ１、Ｌ－ＣＤＲ２、及びＬ－ＣＤＲ３、ならびに配列番号７～９の配列を有する重鎖相補性決定領域Ｈ－ＣＤＲ１、Ｈ－ＣＤＲ２、及びＨ－ＣＤＲ３と、（ｉｉ）配列番号４～６の配列を有する軽鎖相補性決定領域Ｌ－ＣＤＲ１、Ｌ－ＣＤＲ２、及びＬ－ＣＤＲ３、ならびにそれぞれ配列番号１０～１２の配列を有する重鎖相補性決定領域Ｈ－ＣＤＲ１、Ｈ－ＣＤＲ２、及びＨ－ＣＤＲ３と、を含み；
ｑは、１または２であり；
Ｄ１は以下の式で表される：
特定の実施形態では、式（Ｉ－４）または（Ｉ－６）のイムノコンジュゲートについて、バイパラトピック抗ＦＲα抗体またはその抗原結合断片は、配列番号１８のアミノ酸配列を含むＶＬと、配列番号２３のアミノ酸配列を含むＶＨと、配列番号１９のアミノ酸配列を含むＶＬと、配列番号２４のアミノ酸配列を含むＶＨと、を含む。
第１３の特定の実施形態では、本明細書で提供されるイムノコンジュゲートは、以下の式で表され：
式中：
ＣＢＡは、バイパラトピック抗ＦＲα抗体またはその抗原結合断片であり、当該抗体またはその抗原結合断片は、（ｉ）配列番号１～３の配列を有する、軽鎖相補性決定領域Ｌ－ＣＤＲ１、Ｌ－ＣＤＲ２、及びＬ－ＣＤＲ３、ならびに配列番号７～９の配列を有する重鎖相補性決定領域Ｈ－ＣＤＲ１、Ｈ－ＣＤＲ２、及びＨ－ＣＤＲ３と、（ｉｉ）配列番号４～６の配列を有する軽鎖相補性決定領域Ｌ－ＣＤＲ１、Ｌ－ＣＤＲ２、及びＬ－ＣＤＲ３、ならびにそれぞれ配列番号１０～１２の配列を有する重鎖相補性決定領域Ｈ－ＣＤＲ１、Ｈ－ＣＤＲ２、及びＨ－ＣＤＲ３と、を含み；
ｑは、１～１０の整数、例えば、１または１０であり；
Ｄ１は以下の式で表される：
特定の実施形態では、式（Ｉ－２）のイムノコンジュゲートについて、バイパラトピック抗ＦＲα抗体またはその抗原結合断片は、配列番号１８のアミノ酸配列を含むＶＬと、配列番号２３のアミノ酸配列を含むＶＨと、配列番号１９のアミノ酸配列を含むＶＬと、配列番号２４のアミノ酸配列を含むＶＨと、を含む。特定の実施形態では、式（Ｉ－２）のイムノコンジュゲートについて、バイパラトピック抗ＦＲα抗体またはその抗原結合断片は、配列番号４１、４２、及び４３のアミノ酸配列を有するポリペプチドを含む。
第１４の実施形態では、本明細書で提供されるイムノコンジュゲートは、以下の構造式で表されるマイタンシノイド化合物であるＤＭ２１Ｃ（また、Ｍａｌ－ＬＤＬ－ＤＭまたはＭａｌＣ５－ＬＤＬ－ＤＭまたは化合物１７Ａとも呼ばれる）と結合したバイパラトピック抗ＦＲα抗体を含み：
式中、バイパラトピック抗ＦＲα抗体またはその抗原結合断片は、（ｉ）それぞれ配列番号１８及び配列番号２３の配列を有する軽鎖可変領域及び重鎖可変領域と、（ｉｉ）それぞれ配列番号１９及び配列番号２４の配列を有する軽鎖可変領域及び重鎖可変領域と、を含み、Ｄ１は、以下の式で表される：
一実施形態では、イムノコンジュゲートは、以下の構造式で表され：
式中：
ＣＢＡは、バイパラトピック抗ＦＲα抗体またはその抗原結合断片であり、（ｉ）それぞれ配列番号１８及び配列番号２３の配列を有する軽鎖可変領域及び重鎖可変領域と、（ｉｉ）それぞれ配列番号１９及び配列番号２４の配列を有する軽鎖可変領域及び重鎖可変領域と、を含み；
ｑは、１または２である。
特定の実施形態では、第１４の特定の実施形態のイムノコンジュゲートを含む組成物（例えば、医薬組成物）について、ＤＡＲは、１．５～２．２、１．７～２．２、または１．９～２．１の範囲にある。いくつかの実施形態では、ＤＡＲは、１．７、１．８、１．９、２．０、または２．１である。
第１５特定の実施形態では、本明細書で提供されるイムノコンジュゲートは、以下の構造式で表されるマイタンシノイド化合物であるＤＭ２１（また、ＤＭ２１Ｌ、ＬＤＬ－ＤＭ、または化合物１４ｃとも呼ばれる）とγ－マレイミド酪酸Ｎ－スクシンイミジルエステル（ＧＭＢＳ）またはＮ－（γ－マレイミドブトリルオキシ）スルホスクシンイミドエステル（スルホ－ＧＭＢＳまたはｓＧＭＢＳ）リンカーを介して結合したバイパラトピック抗ＦＲα抗体またはその抗原結合断片を含む：
バイパラトピック抗ＦＲα抗体またはその抗原結合断片は、（ｉ）それぞれ配列番号１８及び配列番号２３の配列を有する軽鎖可変領域及び重鎖可変領域と、（ｉｉ）それぞれ配列番号１９及び配列番号２４の配列を有する軽鎖可変領域及び重鎖可変領域と、を含む。
ＧＭＢＳ及びスルホ－ＧＭＢＳ（またはｓＧＭＢＳ）リンカーは当該技術分野で知られており、以下の構造式で表すことができる：
一実施形態では、イムノコンジュゲートは、以下の構造式で表され：
式中：
ＣＢＡは、バイパラトピック抗ＦＲα抗体またはその抗原結合断片であり、（ｉ）それぞれ配列番号１８及び配列番号２３の配列を有する軽鎖可変領域及び重鎖可変領域と、（ｉｉ）それぞれ配列番号１９及び配列番号２４の配列を有する軽鎖可変領域及び重鎖可変領域と、を含み；
ｑは、１～１０の整数、例えば、１または１０である。いくつかの実施形態では、ｑは、２～５の整数である。いくつかの実施形態では、ｑは、３～４の整数である。
特定の実施形態では、第１５の特定の実施形態のイムノコンジュゲートについて、バイパラトピック抗ＦＲα抗体またはその抗原結合断片は、配列番号４１、４２、及び４３のアミノ酸配列を有するポリペプチドを含む。
特定の実施形態では、第１５の特定の実施形態のイムノコンジュゲートを含む組成物（例えば、医薬組成物）について、ＤＡＲは、３．０～４．０、３．２～３．８、３．１～３．７、または３．４～３．７の範囲にある。いくつかの実施形態では、ＤＡＲは、３．２、３．３、３．４、３．５、３．５、３．７、または３．８である。いくつかの実施形態では、ＤＡＲは３．５である。
特定の実施形態では、リジンコンジュゲートを含む組成物について、ＤＡＲは１．５～３．１の範囲にある。いくつかの実施形態では、ＤＡＲは約２．０である。
特定の実施形態では、第１の実施形態、または第１、第２、第３、第４、第５、第６、第７、第８、第９、第１０、第１１、第１２、第１３、第１４、または第１５の特定の実
施形態のイムノコンジュゲートを含む組成物（例えば、医薬組成物）について、組成物中の、薬物抗体比（ＤＡＲ）としても知られている、抗体分子あたりの細胞傷害性薬剤の平均数（すなわち、ｑの平均値）は、１．０～８．０の範囲である。いくつかの実施形態では、ＤＡＲは、１．０～５．０、１．０～４．０、１．５～４．０、２．０～４．０、２．５～４．０、１．０～３．４、１．０～３．０、３．０～４．０、３．１～３．５、３．１～３．７、３．４～３．６、１．５～２．５、２．０～２．５、１．７～２．３、または１．８～２．２の範囲である。いくつかの実施形態では、ＤＡＲは、４．０未満、３．８未満、３．６未満、３．５未満、３．０未満、または２．５未満である。いくつかの実施形態では、ＤＡＲは３．１～３．７の範囲である。いくつかの実施形態では、ＤＡＲは３．１～３．４の範囲である。いくつかの実施形態では、ＤＡＲは３．３～３．７の範囲である。いくつかの実施形態では、ＤＡＲは３．５～３．９の範囲である。いくつかの実施形態では、ＤＡＲは、３．１、３．２、３．３、３．４、３．５、３．６、３．７、または３．８である。いくつかの実施形態では、ＤＡＲは３．５である。いくつかの実施形態では、ＤＡＲは１．８～２．０の範囲である。いくつかの実施形態では、ＤＡＲは１．７～１．９の範囲である。いくつかの実施形態では、ＤＡＲは１．９～２．１の範囲である。いくつかの実施形態では、ＤＡＲは、１．９、２．０、または２．１である。いくつかの実施形態では、一つ以上のシステインチオール基を介してマイタンシノイド化合物に結合したバイパラトピック抗ＦＲα抗体またはその抗原結合断片を含む本発明のイムノコンジュゲートについて、ＤＡＲは、１．５～２．５、１．８～２．２、１．１～１．９、または１．９～２．１の範囲である。いくつかの実施形態では、ＤＡＲは、１．８、１．９、２．０、または２．１である。
Ｂ．リンカー
当該技術分野で知られている任意の適切なリンカーを、本開示のイムノコンジュゲートを調製する際に使用することができる。特定の実施形態では、リンカーは二官能性リンカーである。本明細書で使用される場合、「二官能性リンカー」という用語は、一方は細胞結合剤と反応することができ、もう一方はマイタンシノイド化合物と反応して２つの部分を一緒に結合する２つの反応性基を有する修飾剤を指す。そのような二官能性架橋剤は当該技術分野でよく知られている（例えば、Ｉｓａｌｍ ａｎｄ Ｄｅｎｔ ｉｎ Ｂｉｏｃｏｎｊｕｇａｔｉｏｎ ｃｈａｐｔｅｒ ５，ｐ２１８－３６３，Ｇｒｏｖｅｓ Ｄｉｃｔｉｏｎａｒｉｅｓ Ｉｎｃ．Ｎｅｗ Ｙｏｒｋ，１９９９を参照されたい）。例えば、チオエーテル結合を介して結合を可能にする二官能性架橋剤としては、マレイミド基を導入するＮ－スクシンイミジル－４－（Ｎ－マレイミドメチル）－シクロヘキサン－１－カルボキシレート（ＳＭＣＣ）、またはヨードアセチル基を導入するＮ－スクシンイミジル－４－（ヨードアセチル）－アミノベンゾエート（ＳＩＡＢ）が挙げられる。マレイミド基またはハロアセチル基を細胞結合剤に導入する他の二官能性架橋剤は、当該技術分野で周知であり（米国特許公開第２００８／００５０３１０号、同第２００５０１６９９３３号を参照されたい。Ｐｉｅｒｃｅ Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ Ｉｎｃ．Ｐ．Ｏ．Ｂｏｘ １１７，Ｒｏｃｋｌａｎｄ，ＩＬ ６１１０５，ＵＳＡから入手可能）、ビス－マレイミドポリエチレングリコール（ＢＭＰＥＯ）、ＢＭ（ＰＥＯ）２、ＢＭ（ＰＥＯ）３、Ｎ－（β－マレイミドプロピルオキシ）スクシンイミドエステル（ＢＭＰＳ）、γ－マレイミド酪酸Ｎ－スクシンイミジルエステル（ＧＭＢＳ）、ε－マレイミドカプロン酸Ｎ－ヒドロキシスクシンイミドエステル（ＥＭＣＳ）、５－マレイミド吉草酸ＮＨＳ、ＨＢＶＳ、Ｎ－スクシンイミジル－４－（Ｎ－マレイミドメチル）－シクロヘキサン－１－カルボキシ－（６－アミドカプロエート）、これはＳＭＣＣの「長鎖」類似体である（ＬＣ－ＳＭＣＣ）、ｍ－マレイミドベンゾイル－Ｎ－ヒドロキシスクシンイミドエステル（ＭＢＳ）、４－（４－Ｎ－マレイミドフェニル）－酪酸ヒドラジドまたはＨＣｌ塩（ＭＰＢＨ）、Ｎ－スクシンイミジル３－（ブロモアセトアミド）プロピオネート（ＳＢＡＰ）、Ｎ－スクシンイミジルヨードアセテート（ＳＩＡ）、κ－マレイミドウンデカン酸Ｎ－スクシンイミジルエステル（ＫＭＵＡ）、Ｎ－スクシンイミジル４－（ｐ－マレイミドフェ
ニル）－ブチレート（ＳＭＰＢ）、スクシンイミジル－６－（β－マレイミドプロピオンアミド）ヘキサノエート（ＳＭＰＨ）、スクシンイミジル－（４－ビニルスルホニル）ベンゾエート（ＳＶＳＢ）、ジチオビス－マレイミドエタン（ＤＴＭＥ）、１，４－ビス－マレイミドブタン（ＢＭＢ）、１，４－ビスマレイミジル－２，３－ジヒドロキシブタン（ＢＭＤＢ）、ビス－マレイミドヘキサン（ＢＭＨ）、ビス－マレイミドエタン（ＢＭＯＥ）、スルホスクシンイミジル４－（Ｎ－マレイミド－メチル）シクロヘキサン－１－カルボキシレート（スルホ－ＳＭＣＣ）、スルホスクシンイミジル（４－ヨード－アセチル）アミノベンゾエート（スルホ－ＳＩＡＢ）、ｍ－マレイミドベンゾイル－Ｎ－ヒドロキシスルホスクシンイミドエステル（スルホ－ＭＢＳ）、Ｎ－（γ－マレイミドブトリルオキシ）スルホスクシンイミドエステル（スルホ－ＧＭＢＳまたはｓＧＭＢＳ）、Ｎ－（ε－マレイミドカプロイルオキシ）スルホスクシミドエステル（スルホ－ＥＭＣＳ）、Ｎ－（κ－マレイミドウンデカノイルオキシ）スルホスクシンイミドエステル（スルホ－ＫＭＵＳ）、及びスルホスクシンイミジル４－（ｐ－マレイミドフェニル）ブチレート（スルホ－ＳＭＰＢ）が挙げられるが、これらに限定されない。
ヘテロ二官能性架橋剤は、２つの異なる反応性基を有する二官能性架橋剤である。アミン反応性Ｎ－ヒドロキシスクシンイミド基（ＮＨＳ基）とカルボニル反応性ヒドラジン基の両方を含むヘテロ二官能性架橋剤を使用して、本明細書に記載の細胞傷害性化合物を細胞結合剤（例えば、抗体）と結合させることもできる。そのような市販のヘテロ二官能性架橋剤の例には、スクシンイミジル６－ヒドラジノニコチンアミドアセトンヒドラゾン（ＳＡＮＨ）、スクシンイミジル４－ヒドラジドテレフタレートヒドロクロリド（ＳＨＴＨ）、及びスクシンイミジルヒドラジニウムニコチン酸ヒドロクロリド（ＳＨＮＨ）が含まれる。酸に不安定な連結を有するコンジュゲートはまた、本開示のヒドラジン含有ベンゾジアゼピン誘導体を使用して調製することができる。使用できる二官能性架橋剤の例には、スクシンイミジル－ｐ－ホルミルベンゾエート（ＳＦＢ）及びスクシンイミジル－ｐ－ホルミルフェノキシアセテート（ＳＦＰＡ）が含まれる。
ジスルフィド結合を介して細胞結合剤と細胞傷害性化合物との結合を可能にする二官能性架橋剤は当該技術分野で知られており、ジチオピリジル基を導入する、Ｎ－スクシンイミジル－３－（２－ピリジルジチオ）プロピオネート（ＳＰＤＰ）、Ｎ－スクシンイミジル－４－（２－ピリジルジチオ）ペンタノエート（ＳＰＰ）、Ｎ－スクシンイミジル－４－（２－ピリジルジチオ）ブタノエート（ＳＰＤＢ）、Ｎ－スクシンイミジル－４－（２－ピリジルジチオ）２－スルホブタノエート（スルホ－ＳＰＤＢまたはｓＳＰＤＢ）が含まれる。ジスルフィド基を導入するために使用することができる他の二官能性架橋剤は当該技術分野で知られており、米国特許第６，９１３，７４８号、同第６，７１６，８２１号及び米国特許公開２００９／０２７４７１３及び同２０１０／０１２９３１４に開示され、これらのそれぞれは、参照によりその全体が本明細書に組み込まれる。代替的に、チオール基を導入する２－イミノチオラン、ホモシステインチオラクトン、またはＳ－アセチルコハク酸無水物などの架橋剤も使用することができる。
Ｃ．細胞傷害性薬剤
いくつかの実施形態では、本明細書で提供されるのは、本開示のイムノコンジュゲートを作製するために使用され得る細胞傷害性薬剤である。本明細書で提供されるイムノコンジュゲートで使用される細胞傷害性薬剤は、細胞の死をもたらす、または細胞死を誘発する、または何らかの方法で細胞生存率を低下させる任意の化合物であり得、例えば、マイタンシノイド及びマイタンシノイド類似体、ベンゾジアゼピン、タキソイド、ＣＣ－１０６５及びＣＣ－１０６５類似体、デュオカルマイシン及びデュオカルマイシン類似体、カリチアマイシンなどのエンジイン、オーリスタチンを含むドラスタチン及びドラスタチン誘導体、トメイマイシン誘導体、レプトマイシン誘導体、メトトレキサート、シスプラチン、カルボプラチン、ダウノルビシン、ドキソルビシン、ビンクリスチン、ビンブラスチ
ン、メルファラン、マイトマイシンＣ、クロラムブシル、及びモルフォリノドキソルビシンが含まれる。特定の実施形態では、細胞傷害性薬剤は、マイタンシノイド及びマイタンシノイド類似体である。
適切なマイタンシノイドの例には、マイタンシノール及びマイタンシノール類似体のエステルが含まれる。マイタンシノール及びマイタンシノール類似体のように、微小管形成を阻害し、哺乳動物細胞に対して非常に毒性のある任意の薬物が含まれる。
例示的な細胞傷害性薬剤は、以前にＷＯ２０１８／１６０５３９Ａ１及びＷＯ２０１１／１０６５２８に記載され、これらのそれぞれは、参照によりその全体が本明細書に組み込まれる。
本明細書で提供されるイムノコンジュゲートは、以下の式：
またはその薬学的に許容される塩で表されるマイタンシノイド化合物を含むことができ、式中：
Ｌ２ ’は、以下の構造式によって表され：
式中、
Ｒｘ、Ｒｙ、Ｒｘ’、及びＲｙ’は、それぞれの存在について、独立してＨ、－ＯＨ、ハロゲン、－Ｏ－（Ｃ１－４アルキル）、－ＳＯ３Ｈ、－ＮＲ４０Ｒ４１Ｒ４２ ＋、または任意選択で－ＯＨ、ハロゲン、－ＳＯ３Ｈ、もしくはＮＲ４０Ｒ４１Ｒ４２ ＋によって置換されたＣ１－４アルキルであり、ここで、Ｒ４０、Ｒ４１、及びＲ４２は、それぞれ独立してＨまたはＣ１－４アルキルであり；
ｌ及びｋは、それぞれ独立して、１～１０の整数であり；
ＪＣＢ ’は、－Ｃ（＝Ｏ）ＯＨまたは－ＣＯＥであり、－ＣＯＥは反応性エステルであり；
Ａが、アミノ酸または２～２０個のアミノ酸を含むペプチドであり；
Ｒ１及びＲ２は、それぞれ独立して、ＨまたはＣ１－３アルキルであり；
Ｌ１は、以下の式によって表され：
－ＣＲ３Ｒ４－（ＣＨ２）１－８－Ｃ（＝Ｏ）－；
式中、Ｒ３及びＲ４は、それぞれ独立してＨまたはＭｅであり、Ｌ１の－Ｃ（＝Ｏ）－部分は、Ｄに接続されており；
Ｄが以下の式で表され：
ｑは、１～２０の整数である。いくつかの実施形態では、ｑは、１～１０の整数である。いくつかの実施形態では、ｑは、２～５の整数である。いくつかの実施形態では、ｑは、３～４の整数である。
いくつかの実施形態では、本発明のマイタンシノイドは、以下の式：
またはその薬学的に許容される塩で表され、式中：
Ａ’は、アミノ酸または２～２０個のアミノ酸を含むペプチド（すなわち、Ａ－ＮＨ２）であり；
Ｒ１及びＲ２は、それぞれ独立して、ＨまたはＣ１－３アルキルであり；
Ｌ１は、－ＣＲ３Ｒ４－（ＣＨ２）１－８－Ｃ（＝Ｏ）－であり；Ｒ３及びＲ４は、それぞれ独立してＨまたはＭｅであり；
Ｄが以下の式で表され：
ｑは、１～２０の整数である。いくつかの実施形態では、ｑは、１～１０の整数である。いくつかの実施形態では、ｑは、２～５の整数である。いくつかの実施形態では、ｑは、３～４の整数である。
いくつかの実施形態では、本発明のマイタンシノイドは、以下の式：
またはその薬学的に許容される塩で表され、式中：
Ｒｘ’及びＲｙ’は、それぞれの存在について、独立してＨ、－ＯＨ、ハロゲン、－Ｏ－（Ｃ１－４アルキル）、－ＳＯ３Ｈ、－ＮＲ４０Ｒ４１Ｒ４２ ＋、または任意選択で－ＯＨ、ハロゲン、ＳＯ３Ｈ、もしくはＮＲ４０Ｒ４１Ｒ４２ ＋によって置換されたＣ１－４アルキルであり、ここで、Ｒ４０、Ｒ４１、及びＲ４２は、それぞれ独立してＨまたはＣ１－４アルキルであり；
ｋは、１～１０の整数である。
Ａは、アミノ酸残基または２～２０個のアミノ酸残基を含むペプチドであり；
Ｒ１及びＲ２は、それぞれ独立して、ＨまたはＣ１－３アルキルであり；
Ｌ１は、－ＣＲ３Ｒ４－（ＣＨ２）１－８－Ｃ（＝Ｏ）－であり；Ｒ３及びＲ４は、それぞれ独立してＨまたはＭｅであり；
Ｄは以下の式で表され：
ｑは、１～２０の整数である。いくつかの実施形態では、ｑは、１～１０の整数である。いくつかの実施形態では、ｑは、２～５の整数である。いくつかの実施形態では、ｑは、３～４の整数である。
いくつかの実施形態では、式（ＩＩ）、（ＩＩＩ）、または（ＩＶ）のマイタンシノイド化合物について、変数は、第１の実施形態、または第１の実施形態の第１、第２、第３、第４、第５、第６、第７、第８、第９、第１０、もしくは第１１の特定の実施形態に記載されるとおりである。
特定の実施形態では、マイタンシノイド化合物は、以下の式で表される：
適切なマイタンシノールエステルの追加の例には、修飾された芳香環を有するもの及び他の位置に修飾を有するものが含まれる。そのような適切なマイタンシノイドは、米国特許第４，４２４，２１９号；同第４，２５６，７４６号；同第４，２９４，７５７号；同第４，３０７，０１６号；同第４，３１３，９４６号；同第４，３１５，９２９号；同第４，３３１，５９８号；同第４，３６１，６５０号；同第４，３６２，６６３号；同第４，３６４，８６６号；同第４，４５０，２５４号；同第４，３２２，３４８号；同第４，３７１，５３３号；同第５，２０８，０２０号；同第５，４１６，０６４号；同第５，４７５，０９２号；同第５，５８５，４９９号；同第５，８４６，５４５号；同第６，３３３，４１０号；同第７，２７６，４９７号；及び同第７，４７３，７９６号に開示されている。さらに、そのような抗体－マイタンシノイドコンジュゲートを生成するためのいくつかの説明は、米国特許第６，３３３，４１０号、第６，４４１，１６３号、第６，７１６，８２１号、及び第７，３６８，５６５号に提供されており、これらのそれぞれは、参照によりその全体が本明細書に組み込まれる。
いくつかの実施形態では、イムノコンジュゲートはＮ２’－デアセチル－Ｎ２’－（３－メルカプト－１－オキソプロピル）－メイタンシン（ＤＭ１）、Ｎ２’－デアセチル－Ｎ－２’（４－メルカプト－１－オキソペンチル）－メイタンシン（ＤＭ３と呼ばれる）、Ｎ２’－デアセチル－Ｎ２’－（４－メルカプト－４－メチル－１－オキソペンチル）メイタンシン（ＤＭ４）を含み、その両方とも、以前にＰＣＴ出願公開番号ＷＯ２０１１／１０６５２８Ａ１及び米国特許第８，５５７，９６６Ｂ２号に記載され、これらのそれぞれは、参照によりその全体が本明細書に組み込まれる。
Ｄ．薬物複合体
本明細書に記載の細胞傷害性薬剤（例えば、マイタンシノイド）に共有結合されたバイパラトピックＦＲα結合抗体またはその抗原結合断片を含むイムノコンジュゲートは、当該技術分野で公知の任意の適切な方法に従って調製することができる。
特定の実施形態では、第１の実施形態のイムノコンジュゲートは、バイパラトピックＦＲα結合抗体またはその抗原結合断片を、第２の実施形態に記載の式（ＩＩ）のマイタンシノイド化合物と反応させるステップを含む第１の方法によって調製することができる。
特定の実施形態では、第１の実施形態のイムノコンジュゲートは、以下のステップを含む第２の方法によって調製することができる：
（ａ）式（ＩＩＩ）または（ＩＶ）のマイタンシノイド化合物を本明細書に記載のリンカー化合物と反応させて、アミン反応性基またはチオール反応性基が結合した細胞傷害性薬剤－マイタンシノイド化合物（例えば、式（ＩＩ）の化合物）であって、バイパラトピックＦＲα結合抗体またはその抗原結合断片に共有結合することのできるものを形成すること、及び
（ｂ）バイパラトピックＦＲα結合抗体またはその抗原結合断片をマイタンシノイド－リンカー化合物と反応させてイムノコンジュゲートを形成すること。
特定の実施形態では、第１の実施形態のイムノコンジュゲートは、以下のステップを含む第３の方法によって調製することができる：
（ａ）バイパラトピックＦＲα結合抗体またはその抗原結合断片を、本明細書に記載のリンカー化合物と反応させて、アミン反応性基またはチオール反応性が結合した改変されたバイパラトピックＦＲα結合抗体またはその抗原結合断片であって、式（ＩＩＩ）または（ＩＶ）のマイタンシノイド化合物に共有結合することができるものを形成すること、及び
（ｂ）改変されたバイパラトピックＦＲα結合抗体またはその抗原結合断片を式（ＩＩＩ）または（ＩＶ）のマイタンシノイド化合物と反応させてイムノコンジュゲートを形成すること。
特定の実施形態では、上述の第２、第３、または第４の方法について、リンカー化合物は、式（ａ１Ｌ）～（ａ１０Ｌ）のいずれか１つ、またはそれらの薬学的に許容される塩で表される：
式中、Ｘはハロゲン；ＪＤ－ＳＨ、または－ＳＳＲｄであり；Ｒｄは、フェニル、ニトロフェニル、ジニトロフェニル、カルボキシニトロフェニル、ピリジル、またはニトロピリジルであり；Ｒｇはアルキルであり；Ｕは－ＨまたはＳＯ３Ｈである。
一実施形態では、リンカー化合物は、式（ａ９Ｌ）またはその薬学的に許容される塩で表されるＧＭＢＳまたはスルホ－ＧＭＢＳ（もしくはｓＧＭＢＳ）であり、式中、Ｕは、－ＨまたはＳＯ３Ｈである。
特定の実施形態では、本発明のイムノコンジュゲートは、以下の式によって表される：
イムノコンジュゲートは、上述の第２、第３、または第４の方法によって調製することができ、リンカー化合物は、式（ａ９Ｌ）またはその薬学的に許容される塩で表されるＧＭＢＳまたはスルホ－ＧＭＢＳであり、式中、Ｕは、－ＨまたはＳＯ３Ｈである。マイタンシノイド化合物は、上述の式（Ｄ－１）で表される。より具体的な実施形態では、式（Ｉ－１）のイムノコンジュゲートは、式（Ｄ－１）のマイタンシノイド化合物をリンカー化合物ＧＭＢＳまたはスルホ－ＧＭＢＳと反応させてマイタンシノイド－リンカー化合物を形成し、続いてバイパラトピックＦＲα結合抗体またはその抗原結合断片をマイタンシノイド－リンカー化合物と反応させることによって調製される。さらにより具体的な実施形態では、マイタンシノイドリンカー化合物はバイパラトピックＦＲα結合抗体またはその抗原結合断片と反応する前に精製されていない。
別の特定の実施形態では、イムノコンジュゲートは、以下の式によって表される：
イムノコンジュゲートは、上述の第２、第３、または第４の方法によって調製することができ、リンカー化合物は、式（ａ９Ｌ）または薬学的に許容される塩で表されるＧＭＢＳまたはスルホ－ＧＭＢＳであり、式中、Ｕは、－ＨまたはＳＯ３Ｈである。マイタンシノイド化合物は、上述の式（Ｄ－２）で表される。より具体的な実施形態では、式（Ｉ－２）のイムノコンジュゲートは、式（Ｄ－２）のマイタンシノイド化合物をリンカー化合物ＧＭＢＳまたはスルホ－ＧＭＢＳと反応させてマイタンシノイド－リンカー化合物を形成し、続いてバイパラトピックＦＲα結合抗体またはその抗原結合断片をマイタンシノイド－リンカー化合物と反応させることによって調製される。さらにより具体的な実施形態では、マイタンシノイドリンカー化合物はバイパラトピックＦＲα結合抗体またはその抗原結合断片と反応する前に精製されていない。
［０２］別の特定の実施形態では、イムノコンジュゲートは、以下の式によって表される：
イムノコンジュゲートは、上述の第１の方法に従って、バイパラトピックＦＲα結合抗体またはその抗原結合断片を、上述の式（Ｄ－３）のマイタンシノイド化合物と反応させることによって調製される。
別の特定の実施形態では、イムノコンジュゲートは、以下の式によって表される：
イムノコンジュゲートは、上述の第１の方法に従って、バイパラトピックＦＲα結合抗体またはその抗原結合断片を、上述の式（Ｄ－４）のマイタンシノイド化合物と反応させることによって調製される。
別の特定の実施形態では、イムノコンジュゲートは、以下の式によって表される：
イムノコンジュゲートは、上述の第１の方法に従って、抗ＦＲα抗体またはその抗原結合断片を、上述の式（Ｄ－５）のマイタンシノイド化合物と反応させることによって調製される。
別の特定の実施形態では、イムノコンジュゲートは、以下の式によって表される：
イムノコンジュゲートは、上述の第１の方法に従って、バイパラトピックＦＲα結合抗体またはその抗原結合断片を、上述の式（Ｄ－６）のマイタンシノイド化合物と反応させることによって調製される。
いくつかの実施形態では、上に開示された式Ｉ－３からＩ－６によって表されるイムノコンジュゲートは、２０１９年３月２１日に出願された米国仮出願６２／８２１，７０７、及び関連する米国出願第１６／８２５，１２７号に記載された方法に従って調製される。
いくつかの実施形態では、上述の任意の方法によって調製されたイムノコンジュゲートは、精製ステップの対象となる。これに関して、イムノコンジュゲートは、タンジェント流濾過（ＴＦＦ）、非吸着クロマトグラフィー、吸着クロマトグラフィー、吸着濾過、選択的沈殿、または任意の他の適切な精製プロセス、ならびにそれらの組み合わせを使用して、混合物の他の成分から精製することができる。
いくつかの実施形態では、イムノコンジュゲートは、単一の精製ステップ（例えば、ＴＦＦ）を使用して精製される。好ましくは、コンジュゲートは、単一の精製ステップ（例えば、ＴＦＦ）を使用して精製され、適切な製剤に交換される。本発明の他の実施形態では、イムノコンジュゲートは、２つの逐次的な精製ステップを使用して精製される。例えば、イムノコンジュゲートは、最初に選択的沈殿、吸着性濾過、吸収性クロマトグラフィー、または非吸収性クロマトグラフィーによって精製され、続いてＴＦＦによって精製され得る。当業者は、免疫コンジュゲートの精製が、細胞傷害性薬剤に化学的に結合された細胞結合剤を含む安定なコンジュゲートの単離を可能にすることを理解するであろう。
Ｐｅｌｌｉｃｏｎタイプのシステム（Ｍｉｌｌｉｐｏｒｅ，Ｂｉｌｌｅｒｉｃａ，Ｍａｓｓ．）、Ｓａｒｔｏｃｏｎカセットシステム（Ｓａｒｔｏｒｉｕｓ ＡＧ，Ｅｄｇｅｗｏｏｄ，Ｎ．Ｙ．）、及びＣｅｎｔｒａｓｅｔｔｅタイプのシステム（Ｐａｌｌ Ｃｏｒｐ．，Ｅａｓｔ Ｈｉｌｌｓ，Ｎ．Ｙ．）を含む任意の適切なＴＦＦシステムを精製に利用することができる。
任意の適切な吸着性クロマトグラフィー樹脂を精製に利用することができる。好ましい吸着性クロマトグラフィー樹脂には、ヒドロキシアパタイトクロマトグラフィー、疎水性電荷誘導クロマトグラフィー（ＨＣＩＣ）、疎水性相互作用クロマトグラフィー（ＨＩＣ）、イオン交換クロマトグラフィー、混合モードイオン交換クロマトグラフィー、固定化金属アフィニティークロマトグラフィー（ＩＭＡＣ）、染料リガンドクロマトグラフィー、アフィニティークロマトグラフィー、逆相クロマトグラフィー、及びそれらの組み合わせが含まれる。適切なヒドロキシアパタイト樹脂の例には、セラミックヒドロキシアパタイト（ＣＨＴタイプＩ及びタイプＩＩ、Ｂｉｏ－Ｒａｄ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｉｅｓ，Ｈｅｒｃｕｌｅｓ，Ｃａｌｉｆ．）、ＨＡウルトロゲルヒドロキシアパタイト（Ｐａｌｌ Ｃｏｒｐ．，Ｅａｓｔ Ｈｉｌｌｓ，Ｎ．Ｙ．）、及びセラミックフルオロアパタイト（
ＣＦＴタイプＩ及びタイプＩＩ、Ｂｉｏ－Ｒａｄ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｉｅｓ，Ｈｅｒｃｕｌｅｓ，Ｃａｌｉｆ．）が含まれる。適切なＨＣＩＣ樹脂の例は、ＭＥＰ Ｈｙｐｅｒｃｅｌ樹脂（Ｐａｌｌ Ｃｏｒｐ．，Ｅａｓｔ Ｈｉｌｌｓ，Ｎ．Ｙ．）である。適切なＨＩＣ樹脂の例には、ブチルセファロース、ヘキシルセファロース、フェニルセファロース、及びオクチルセファロース樹脂（全てＧＥ Ｈｅａｌｔｈｃａｒｅ，Ｐｉｓｃａｔａｗａｙ，Ｎ．Ｊ．から）、ならびにマクロプレップメチル及びマクロプレップｔ－ブチル樹脂（Ｂｉｏｒａｄ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｉｅｓ，Ｈｅｒｃｕｌｅｓ，Ｃａｌｉｆ．）が含まれる。適切なイオン交換樹脂の例には、ＳＰ－セファロース、ＣＭ－セファロース、及びＱ－セファロース樹脂（全てＧＥ Ｈｅａｌｔｈｃａｒｅ，Ｐｉｓｃａｔａｗａｙ，Ｎ．Ｊ．から）、及びウノスフィアＳ樹脂（Ｂｉｏ－Ｒａｄ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｉｅｓ，Ｈｅｒｃｕｌｅｓ，Ｃａｌｉｆ．）が含まれる。適切な混合モードイオン交換体の例には、Ｂａｋｅｒｂｏｎｄ ＡＢｘ樹脂（ＪＴ Ｂａｋｅｒ，Ｐｈｉｌｌｉｐｓｂｕｒｇ Ｎ．Ｊ．）が含まれる。適切なＩＭＡＣ樹脂の例には、キレートセファロース樹脂（ＧＥ
Ｈｅａｌｔｈｃａｒｅ，Ｐｉｓｃａｔａｗａｙ，Ｎ．Ｊ．）及びＰｒｏｆｉｎｉｔｙ ＩＭＡＣ樹脂（Ｂｉｏ－Ｒａｄ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｉｅｓ，Ｈｅｒｃｕｌｅｓ，Ｃａｌｉｆ．）が含まれる。適切な色素リガンド樹脂の例としては、ブルーセファロース樹脂（ＧＥ Ｈｅａｌｔｈｃａｒｅ，Ｐｉｓｃａｔａｗａｙ，Ｎ．Ｊ．）及びアフィゲルブルー樹脂（Ｂｉｏ－Ｒａｄ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｉｅｓ，Ｈｅｒｃｕｌｅｓ，Ｃａｌｉｆ．）が挙げられる。適切なアフィニティー樹脂の例には、細胞結合剤が抗体である場合、プロテインＡセファロース樹脂（例えば、ＭａｂＳｅｌｅｃｔ，ＧＥ Ｈｅａｌｔｈｃａｒｅ，Ｐｉｓｃａｔａｗａｙ，Ｎ．Ｊ．）、細胞結合剤が適切なレクチン結合部位を有する場合、レクチンアフィニティー樹脂、例えば、Ｌｅｎｔｉｌレクチンセファロース樹脂（ＧＥ Ｈｅａｌｔｈｃａｒｅ，Ｐｉｓｃａｔａｗａｙ，Ｎ．Ｊ．）が挙げられる。代替的に、細胞結合剤に特異的な抗体を使用することができる。このような抗体は、例えば、セファロース４ファストフロー樹脂（ＧＥ Ｈｅａｌｔｈｃａｒｅ，Ｐｉｓｃａｔａｗａｙ，Ｎ．Ｊ．）に固定化することができる。適切な逆相樹脂の例としては、Ｃ４、Ｃ８、及びＣ１８樹脂（Ｇｒａｃｅ Ｖｙｄａｃ，Ｈｅｓｐｅｒｉａ，Ｃａｌｉｆ．）が挙げられる。
任意の適切な非吸着性クロマトグラフィー樹脂を精製に利用することができる。適切な非吸着性クロマトグラフィー樹脂の例には、非限定的に、ＳＥＰＨＡＤＥＸ（商標）Ｇ－２５、Ｇ－５０、Ｇ－１００、ＳＥＰＨＡＣＲＹＬ（商標）樹脂（例えば、Ｓ－２００及びＳ－３００）、ＳＵＰＥＲＤＥＸ（商標）樹脂（例えば、ＳＵＰＥＲＤＥＸ（商標）７５及びＳＵＰＥＲＤＥＸ（商標）２００）、ＢＩＯ－ＧＥＬ（登録商標）樹脂（例えば、Ｐ－６、Ｐ－１０、Ｐ－３０、Ｐ－６０、及びＰ－１００）、ならびに当業者に知られている他のものが挙げられる。
ＶＩＩ．組成物及びキット
本明細書で提供されるのは、生理学的に許容される担体、賦形剤、または安定剤（Ｒｅｍｉｎｇｔｏｎ’ｓ Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ Ｓｃｉｅｎｃｅｓ（１９９０）Ｍａｃｋ Ｐｕｂｌｉｓｈｉｎｇ Ｃｏ．，Ｅａｓｔｏｎ，ＰＡ）において所望の純度を有する、本明細書に記載のイムノコンジュゲート、抗体、またはその抗原結合断片を含む組成物である。許容される担体、賦形剤、または安定剤は、使用される投与量及び濃度でレシピエントに無毒である。
医薬組成物は、対象への特定の投与経路のために製剤化され得る。例えば、医薬組成物は、非経口、例えば、静脈内投与用に製剤化することができる。インビボ投与に使用される組成物は、滅菌され得る。これは、例えば、滅菌濾過膜を通じた濾過によって容易に達成される。
本明細書に記載の医薬組成物は、一実施形態では、医薬として使用するためのものである。本明細書に記載の医薬組成物は、がんなどの状態を治療するのに有用であり得る。本明細書に記載のように治療できるがんの例としては、がん腫、リンパ腫、芽細胞腫、肉腫、及び白血病が含まれるが、これらに限定されない。そのようながんのさらに特定の例としては、卵管癌、扁平上皮細胞癌、小細胞肺癌、非小細胞肺癌、肺腺癌、肺の扁平上皮癌、腹膜癌、肝細胞癌、消化器癌、膵臓癌、神経膠腫、子宮頸癌、卵巣癌、肝臓癌、膀胱癌、肝細胞腫、乳癌、結腸癌、結腸直腸癌、小腸癌、子宮内膜または子宮癌腫、唾液腺癌、腎臓癌、肝臓癌、前立腺癌、外陰部癌、甲状腺癌、肝臓癌、及び種々の種類の頭頸部癌が挙げられる。がんは、ＦＲαを発現するがんであってよい。
本明細書で提供される医薬組成物は、イムノコンジュゲートを含むことができ、医薬組成物（医薬組成物中のイムノコンジュゲート）は、バイパラトピック抗体またはその抗原結合断片あたり平均１～２０の薬物を有することができる。いくつかの実施形態では、医薬組成物は、バイパラトピック抗体またはその抗原結合断片あたり平均１～１０の薬物を含む。いくつかの実施形態では、医薬組成物は、バイパラトピック抗体またはその抗原結合断片あたり平均２～５の薬物を含む。いくつかの実施形態では、医薬組成物は、バイパラトピック抗体またはその抗原結合断片あたり平均３～４の薬物を含む。
ＶＩＩＩ．方法及び使用
本開示のバイパラトピック抗ＦＲα抗体、その抗原結合断片、及びイムノコンジュゲートは、がんの治療などの治療処置方法を含むがこれらに限定されない種々の用途に有用である。特定の実施形態では、薬剤は、腫瘍増殖を阻害するため及び／または腫瘍体積を低減するために有用である。使用方法は、インビトロまたはインビボの方法であってもよい。
本開示は、対象（例えば、治療を必要とする対象）への治療有効量のバイパラトピック抗ＦＲα抗体、その抗原結合断片、またはイムノコンジュゲートを投与することを含む、がんを治療する方法を提供する。特定の実施形態では、がんは、卵管癌、がん腫、リンパ腫、芽細胞腫、肉腫、及び白血病を含むがこれらに限定されないがんである。そのようながんのさらに特定の例としては、扁平上皮細胞癌、小細胞肺癌、非小細胞肺癌、肺腺癌、肺の扁平上皮癌、腹膜癌、肝細胞癌、消化器癌、膵臓癌、神経膠腫、子宮頸癌、卵巣癌、肝臓癌、膀胱癌、肝細胞腫、乳癌（例えば、トリプルネガティブ乳癌（ＴＮＢＣ））、結腸癌、結腸直腸癌、小腸癌、子宮内膜または子宮癌腫、唾液腺癌、腎臓癌、肝臓癌、前立腺癌、外陰部癌、甲状腺癌、肝臓癌、及び種々の種類の頭頸部癌が挙げられる。
そのようながんのより具体的な例には、卵巣癌、上皮卵巣癌、卵巣原発性腹膜癌、または卵管癌が含まれる。特定の実施形態では、がんは卵巣癌である。いくつかの実施形態では、卵巣癌は上皮卵巣癌（ＥＯＣ）である。特定の実施形態では、卵巣癌（例えば、ＥＯＣ）は、プラチナ抵抗性、再発性、または不応性である。特定の実施形態では、がんは腹膜癌である。特定の実施形態では、腹膜癌は原発性腹膜癌である。特定の実施形態では、がんは子宮内膜癌である。特定の実施形態では、子宮内膜癌は、漿液性子宮内膜癌である。いくつかの実施形態では、がんは肺癌である。いくつかの実施形態では、肺癌は、非小細胞肺癌（ＮＳＣＬＣ）である。特定の実施形態では、肺癌は、肺癌は、腺癌または細気管支肺胞癌である。特定の実施形態では、がんは、子宮癌である。
特定の実施形態では、がんはプラチナ不応性である。特定の実施形態では、がんは原発性プラチナ難治性である。特定の実施形態では、がんはプラチナ感受性である。
特定の実施形態では、がんは、ＩＭＧＮ８５３抵抗性である。
特定の実施形態では、がんは転移性または進行性のがんである。
特定の実施形態では、がんは、ＦＲα結合剤または抗体が結合する葉酸受容体を発現する。特定の実施形態では、がんは、ヒトＦＲαを過剰発現する。
いくつかの実施形態では、バイパラトピック抗ＦＲα抗体、その抗原結合断片、イムノコンジュゲート、またはそれを含む医薬組成物は、米国公開出願２０１２／０２８２１７５または国際公開出願番号ＷＯ２０１２／１３５６７５（これらは両方とも、参照によりその全体が本明細書に組み込まれる）に記載されるようなＦＲαの増大した発現レベルを有する患者に投与される。ＦＲαの検出のための例示的な抗体、アッセイ、及びキットは、ＷＯ２０１４／０３６４９５及びＷＯ２０１５／０３１８１５に提供され、これらは両方とも、参照によりその全体が本明細書に組み込まれる。したがって、いくつかの実施形態では、ＦＲαタンパク質の発現は、免疫組織化学（ＩＨＣ）的に測定することができ、定義されたスコアを示す対照（例えば、較正対照）と比較して染色強度スコア及び／または染色均一性スコアを与えることができる（例えば、強度がレベル３の較正対照と同等であれば強度スコア３が試験試料に与えられ、強度がレベル２の較正対照と同等であれば強度スコア２（中程度）が試験試料に与えられる）。「焦点」（すなわち、０％より大きく２５％未満の細胞が染色される）の代わりに「不均一」（すなわち、少なくとも２５％及び７５％未満の細胞が染色される）、または「均一」（すなわち、少なくとも７５％の細胞が染色される）である染色均一性も増加したＦＲα発現を示す。染色強度及び染色均一性スコアは、単独で使用することも、組み合わせて使用することもできる（例えば、２ ｈｏｍｏ、２ ｈｅｔｅｒｏ、３ ｈｏｍｏ、３ ｈｅｔｅｒｏなど）。別の例では、ＦＲα発現の増加は、対照値（例えば、がんを有さない対象、またはＦＲα値が上昇していないがんを有する対象からの組織または細胞における発現レベル）と比較して、少なくとも２倍、少なくとも３倍、または少なくとも５倍の増加の検出によって決定することができる。いくつかの実施形態では、染色均一性スコアは、染色された細胞のパーセントに基づく。
いくつかの実施形態では、がんは、ＩＨＣによって１ ｈｅｔｅｒｏ以上のレベルでＦＲαを発現するがんである。いくつかの実施形態では、がんは、ＩＨＣによって２ ｈｅｔｅｒｏ以上のレベルでＦＲαを発現するがんである。いくつかの実施形態では、がんは、ＩＨＣによって３ ｈｅｔｅｒｏ以上のレベルでＦＲαを発現するがんである。いくつかの実施形態では、がんは、ＩＨＣによって２ ｈｅｔｅｒｏ以上のレベルでＦＲαを発現する肺癌である。いくつかの実施形態では、がんは、ＩＨＣによって３ ｈｅｔｅｒｏ以上のレベルでＦＲαを発現する肺癌である。いくつかの実施形態では、がんは、ＩＨＣによって２ ｈｅｔｅｒｏ以上のレベルでＦＲαを発現する卵巣癌である。いくつかの実施形態では、がんは、ＩＨＣによって３ ｈｅｔｅｒｏ以上のレベルでＦＲαを発現する卵巣癌である。いくつかの実施形態では、がんは、ＩＨＣによって２ ｈｅｔｅｒｏ以上のレベルでＦＲαを発現する子宮内膜癌である。いくつかの実施形態では、がんは、ＩＨＣによって１ ｈｅｔｅｒｏ以上のレベルでＦＲαを発現する子宮内膜癌である。
いくつかの実施形態では、患者から得られた試料中の少なくとも１つの細胞は、少なくとも１のＦＲαスコアを有する。いくつかの実施形態では、患者から得られた試料中の少なくとも１つの細胞は、少なくとも２（中程度）のＦＲαスコアを有する。いくつかの実施形態では、患者から得られた試料中の少なくとも１つの細胞は、少なくとも３のＦＲαスコアを有する。
いくつかの実施形態では、患者から得られた試料中の細胞の少なくとも２５％は、少なくとも１のＦＲαのＩＨＣスコアを有する。いくつかの実施形態では、患者から得られた試料中の細胞の少なくとも３３％は、少なくとも１のＦＲαのＩＨＣスコアを有する。い
くつかの実施形態では、患者から得られた試料中の細胞の少なくとも５０％は、少なくとも１のＦＲαのＩＨＣスコアを有する。いくつかの実施形態では、患者から得られた試料中の細胞の少なくとも６６％は、少なくとも１のＦＲαのＩＨＣスコアを有する。いくつかの実施形態では、患者から得られた試料中の細胞の少なくとも７５％は、少なくとも１のＦＲαのＩＨＣスコアを有する。
いくつかの実施形態では、患者から得られた試料中の細胞の少なくとも２５％は、少なくとも２（中等度）のＦＲαのＩＨＣスコアを有する。いくつかの実施形態では、患者から得られた試料中の少なくとも３３％の細胞は、少なくとも２（中等度）のＦＲαのＩＨＣスコアを有する。いくつかの実施形態では、患者から得られた試料中の２５～７５％の細胞は、少なくとも２（中等度）のＦＲαのＩＨＣスコアを有する。いくつかの実施形態では、患者から得られた試料中の細胞の少なくとも５０％が少なくとも２（中等度）のＦＲαのＩＨＣスコアを有する。いくつかの実施形態では、患者から得られた試料中の少なくとも６６％の細胞は、少なくとも２（中等度）のＦＲαのＩＨＣスコアを有する。いくつかの実施形態では、患者から得られた試料中の少なくとも７５％の細胞は、少なくとも２（中等度）のＦＲαのＩＨＣスコアを有する。
いくつかの実施形態では、患者から得られた試料中の細胞の少なくとも２５％は、少なくとも３のＦＲαのＩＨＣスコアを有する。いくつかの実施形態では、患者から得られた試料中の少なくとも３３％の細胞は、少なくとも３のＦＲαのＩＨＣスコアを有する。いくつかの実施形態では、患者から得られた試料中の細胞の少なくとも５０％が少なくとも３のＦＲαのＩＨＣスコアを有する。いくつかの実施形態では、患者から得られた試料中の細胞の少なくとも６６％は、少なくとも３のＦＲαのＩＨＣスコアを有する。いくつかの実施形態では、患者から得られた試料中の少なくとも７５％の細胞は、少なくとも３のＦＲαのＩＨＣスコアを有する。
いくつかの実施形態では、ＦＲα発現は、免疫組織化学によって測定することができ、視覚的なスコアが与えられ、ＦＲα陽性は、１０倍以下の顕微鏡対物レンズでＦＲαの膜の染色が可視化される腫瘍細胞が５０％以上あることを指す。いくつかの実施形態では、ＦＲα発現は、免疫組織化学によって測定することができ、視覚的なスコアが与えられ、ＦＲα陽性は、１０倍以下の顕微鏡対物レンズでＦＲαの膜の染色が可視化される腫瘍細胞が６６％以上あることを指す。いくつかの実施形態では、ＦＲα発現は、免疫組織化学によって測定することができ、視覚的なスコアが与えられ、ＦＲα陽性は、１０倍以下の顕微鏡対物レンズでＦＲαの膜の染色が可視化される腫瘍細胞が７５％以上あることを指す。
特定の実施形態において、対象はヒトである。
本開示はさらに、本明細書に記載のバイパラトピック抗ＦＲα抗体、その抗原結合断片、及びイムノコンジュゲートを使用する、腫瘍増殖を阻害するための方法を提供する。特定の実施形態では、腫瘍増殖を阻害する方法は、インビトロで、腫瘍を、本明細書で提供されるバイパラトピック抗ＦＲα抗体、その抗原結合断片、及びイムノコンジュゲートと接触させることを含む。例えば、ＦＲαを発現する、不死化細胞株またはがん細胞株は、培地中で培養され、そこに、バイパラトピック抗ＦＲα抗体、その抗原結合断片、及びイムノコンジュゲートが添加されて腫瘍増殖を阻害する。いくつかの実施形態では、腫瘍細胞は、例えば、組織生検、胸水、または血液試料などの患者試料から単離され、培地中で培養され、そこに、バイパラトピック抗ＦＲα抗体、その抗原結合断片、及びイムノコンジュゲートが添加されて腫瘍増殖を阻害する。
いくつかの実施形態では、腫瘍増殖を阻害する方法は、インビボで、腫瘍または腫瘍細
胞を、バイパラトピック抗ＦＲα抗体、その抗原結合断片、及びイムノコンジュゲートと接触させることを含む。特定の実施形態では、腫瘍または腫瘍細胞を、バイパラトピック抗ＦＲα抗体、その抗原結合断片、及びイムノコンジュゲートと接触させることは、動物モデル内で実施される。例えば、バイパラトピック抗ＦＲα抗体、その抗原結合断片、及びイムノコンジュゲートは、免疫無防備状態のマウス（例えば、ＮＯＤ／ＳＣＩＤマウス）で増殖した１つ以上複数の腫瘍を示す異種移植片に投与されて腫瘍増殖を阻害する。いくつかの実施形態では、がん幹細胞は、例えば、組織生検、胸水、または血液試料などの患者試料から単離され、免疫無防備状態のマウスに注射され、次いで、バイパラトピック抗ＦＲα抗体、その抗原結合断片、及びイムノコンジュゲートが投与されて腫瘍細胞増殖を阻害する。
特定の実施形態では、腫瘍増殖を阻害する方法は、治療有効量のバイパラトピック抗ＦＲα抗体、その抗原結合断片、及びイムノコンジュゲートを、対象に投与することを含む。特定の実施形態において、対象はヒトである。特定の実施形態では、対象は、腫瘍を有するか、または腫瘍が除去されている。
投与は、静脈内投与を含む非経口投与であってよい。
状態の治療に有効であるバイパラトピックイムノコンジュゲート、抗体もしくはその抗原結合断片、または組成物の量は、疾患の性質に依存するであろう。組成物に使用される正確な用量はまた、投与経路、及び疾患の重症度にも依存するであろう。
いくつかの実施形態では、本明細書で提供されるのは、医薬として使用するための、バイパラトピック抗ＦＲα抗体、その抗原結合断片、イムノコンジュゲート、またはそれを含む医薬組成物である。いくつかの態様において、本明細書で提供されるのは、がんの治療のための方法における使用のための、バイパラトピック抗ＦＲα抗体、その抗原結合断片、イムノコンジュゲート、または医薬組成物である。いくつかの態様において、本明細書で提供されるのは、有効量の本明細書で提供されるバイパラトピック抗ＦＲα抗体、その抗原結合断片、イムノコンジュゲート、または医薬組成物を対象に投与することを含む、対象におけるがんを治療するための方法における使用のための、バイパラトピック抗ＦＲα抗体、その抗原結合断片、イムノコンジュゲート、または医薬組成物である。
一態様では、本開示のバイパラトピック抗ＦＲα抗体、その抗原結合断片、及びイムノコンジュゲートは、例えば生体試料中の、ＦＲαの存在を検出するために有用である。本明細書で使用される場合、「検出すること」という用語は、定量的または定性的な検出を包含する。特定の実施形態では、生体試料は、細胞または組織を含む。特定の実施形態では、そのような組織は、他の組織と比較して高いレベルでＦＲαを発現する正常な組織及び／またはがん性組織を含む。特定の実施形態では、ＦＲα過剰発現は、卵巣癌、肺癌、脳癌、乳癌、子宮癌、腎臓癌、または膵臓癌の存在を検出する。
特定の実施形態では、生体試料中でＦＲαの存在を検出する方法は、生体試料を、バイパラトピック抗ＦＲα抗体、その抗原結合断片、またはイムノコンジュゲートの結合を可能にする条件下で、バイパラトピック抗ＦＲα抗体、その抗原結合断片、またはイムノコンジュゲートと接触させることと、抗ＦＲα抗体、その抗原結合断片、またはイムノコンジュゲートと、ＦＲαとの間で複合体が形成されているか否かを検出することと、を含む。
特定の実施形態では、バイパラトピック抗ＦＲα抗体、その抗原結合断片、またはイムノコンジュゲートを標識する。標識には、直接検出される標識または部分（蛍光標識、発色団標識、高電子密度標識、化学発光標識、及び放射性標識など）、ならびに例えば、酵
素反応または分子相互作用を通じて、間接的に検出される酵素またはリガンドなどの部分が含まれるが、これらに限定されない。
本開示の実施形態は、本開示の特定の抗体の調製及び本開示の抗体を使用するための方法を詳細に記載する以下の非限定的な例を参照することによってさらに定義することができる。材料と方法の両方に対する多くの修正が、本開示の範囲から逸脱することなく実施され得ることは、当業者には明白であろう。
本明細書に記載される実施例及び実施形態は例示のみを目的とするものであり、それを考慮したさまざまな修正または変更が当業者に示唆され、それらは本出願の趣旨及び範囲内に含まれることは理解されよう。
実施例１．バイパラトピック抗体の生成
二重特異性抗体の発現
上述のように、マウス抗ＦＲα抗体のパネルは、標準的なハイブリドーマ技術によって生成され、表面再構成法を使用してヒト化された（例えば、ＷＯ２０１１／１０６５２８Ａ１を参照されたい）。抗体は、ＦＡＣＳ競合アッセイを使用して、結合についてＭｏｖ１９と競合するか（Ｂｉｎ １）、そうでないか（Ｂｉｎ ２；ＦＲα抗体Ａ、ＦＲα抗体Ｂ、ＦＲα抗体Ｃ、及びＦＲ５７）に応じて、２つのＢｉｎに分類された。簡潔に述べると、１．５ｘ１０－９ＭのＭ９３４６Ａビオチン化抗体を、一般的に５×１０－８Ｍ～５×１０－１１Ｍの範囲の濃度のＦＲα抗体Ａ、ＦＲα抗体Ｂ、ＦＲα抗体Ｃ、及びＦＲ５７と混合した。完全な結合競合の対照として、ビオチン化されていないＭ９３４６Ａ抗体を使用した。混合物を、ウェルあたり２０，０００個のＦＲα陽性ＫＢ細胞を含む９６ウェルプレートに加え、プレートを氷上で１時間インキュベートした。次いで、細胞を冷リン酸緩衝生理食塩水／１％ウシ血清アルブミンで洗浄し、結合したｈｕＭ９３４６Ａ－ビオチンをストレプトアビジン－ＰＥ試薬で検出した。ＦＡＣＳＣａｌｉｂｕｒフローサイトメーターを使用して試料を分析した。図１に示すように、対照抗体Ｍ９３４６ＡのみがｈｕＭ９３４６Ａ－ビオチンと結合について競合し、分析された４つのＦＲ－抗体のいずれも、ｈｕＭ９３４６Ａ－ビオチンの結合を妨害しなかった。
Ｂｉｎ １及びＢｉｎ ２抗体の可変領域（ＶＨ及びＶＬ）を使用して、Ｍｏｒｒｉｓｏｎのフォーマットと非対称Ｆｃの２つの異なるフォーマットを使用していくつかのバイパラトピック分子を構築した。簡潔に述べると、Ｍｏｒｒｉｓｏｎのフォーマットベースの分子について、Ｂｉｎ １またはＢｉｎ ２抗体のいずれかのＶＨ及びＶＬ領域に対応する配列を（Ｇ４Ｓ）４リンカーで接続して単鎖断片（ｓｃＦｖ）を作成し、次いで、（Ｇ４Ｓ）３リンカーを使用して、Ｂｉｎ ２またはＢｉｎ １のＩｇＧ１の重鎖のＣ末端またはＮ末端に融合させた。非対称Ｆｃベースのバイパラトピック分子は、ノブインホールテクノロジーを使用してＦＲ５７ｓｃＦｖとＭｏｖ１９ Ｆａｂで作成された（Ｐｒｏｔｅｉｎ Ｅｎｇ．１９９６ Ｊｕｌ；９（７）：６１７－２１．‘Ｋｎｏｂｓ－ｉｎｔｏ－ｈｏｌｅｓ’ ｅｎｇｉｎｅｅｒｉｎｇ ｏｆ ａｎｔｉｂｏｄｙ ＣＨ３ ｄｏｍａｉｎｓ ｆｏｒ ｈｅａｖｙ ｃｈａｉｎ ｈｅｔｅｒｏｄｉｍｅｒｉｚａｔｉｏｎ．
Ｒｉｄｇｗａｙ ＪＢ，Ｐｒｅｓｔａ ＬＣ，Ｃａｒｔｅｒ，Ｐ）。簡潔に述べると、ＦＲ１－５７ｓｃＦｖは、Ｃ２２０Ｓ（対になっていないシステインをセリンに変異させる）及びノブ変異（Ｔ３６６Ｗ）を含む操作されたＦｃ領域に融合され、Ｍｏｖ１９ Ｆａｂ領域は、ホール変異（Ｔ３６６Ｓ、Ｌ３６８Ａ、及びＹ４０７Ｖ）を含む操作されたＦｃに融合された。別段の記載がない限り、全てのナンバリングはＥＵシステムに基づいている。図２は、以降の実験で評価されたさまざまな抗体フォーマットを示す。
特定の構築された分子の配列を表６～７に示す。これらの二重特異性抗体に対応する遺
伝子は、標準的な分子生物学技術を使用して、コドン最適化され、合成され、プラスミドにクローニングされた。トランスフェクション用の軽鎖プラスミドと重鎖プラスミドの比率は、Ｍｏｒｒｉｓｏｎベースの分子の場合１：３に、非対称Ｆｃベースの分子の場合９：３：１（Ｍｏｖ１９ＬＣ：Ｍｏｖ１９ ＨＣ－ホール：ＦＲ５７ｓｃＦｖ－ノブ）に維持された。図３に示されるように、非対称Ｆｃベースの分子を生成するために、いくつかの重鎖及び軽鎖プラスミドトランスフェクション比が調査され、９：３：１の比率が最小限のホモ二量体を示した。
全ての二重特異性抗体分子は、２９３Ｔで一過性に生成された。簡潔に述べると、２９３Ｔトランスフェクションの場合、振とうフラスコ内で、トランスフェクション試薬としてＰＥＩを使用して、懸濁に適合したＨＥＫ－２９３Ｔ細胞で発現構築物を一時的に生成した。ＰＥＩ一過性トランスフェクションは、以前に記載されたように実施された（Ｄｕｒｏｃｈｅｒ ｅｔ ａｌ．，Ｎｕｃｌｅｉｃ Ａｃｉｄｓ Ｒｅｓ．３０（２）：Ｅ９（２００２））が、ただし、ＨＥＫ－２９３Ｔ細胞はＦｒｅｅｓｔｙｌｅ ２９３で増殖させ、ＰＥＩ－ＤＮＡ複合体の添加後は培養液を希釈せずに残した。トランスフェクション物を１週間インキュベートし、回収した。
抗体精製
濾過された上清は、プロテインＡアフィニティーとセラミックヒドロキシアパタイト（ＣＨＴ）の２つのクロマトグラフィーステップから本質的になるスキームを使用して精製された。簡潔に述べると、濾過した上清を、１×ＰＢＳ（ｐＨ７．３±０．１）で事前に平衡化したプロテインＡカラムにロードした。非特異的宿主細胞タンパク質を減少させるために、カラムを１×ＰＢＳ（ｐＨ７．３±０．１）で洗浄した。結合した抗体は、５０ｍＭ塩化ナトリウム（ｐＨ３．２）を含む２５ｍＭ酢酸を使用して溶出し、１ＭＴｒｉｓ－ｂａｓｅで直ちにｐＨ７．０±０．２に中和した。中和されたプールはＣＨＴ結合緩衝液（１５ｍＭリン酸ナトリウム、ｐＨ ７．０±０．１）中で１：１０に希釈され、ＣＨＴ結合緩衝液で事前に平衡化したタイプＩＩ ＣＨＴカラム（４０μｍ粒経）にロードした。結合したタンパク質を直線勾配（１０カラム容量で１５ｍＭから１６０ｍＭのリン酸ナトリウム）を使用して溶出し、目的の画分（サイズ排除クロマトグラフィー、ＳＥＣによる高いモノマーパーセント）をプールし、１×ＰＢＳ（ｐＨ７．３±０．１）に対して透析し、濾過滅菌した。最終抗体濃度は、２８０ｎｍでの吸光度と１．４４ｍＬ ｍｇ－１ ｃｍ－１の吸光係数を測定することによって決定された。
全ての精製実験は、インラインＵＶ、導電率、及びｐＨプローブを備えたＡＫＴＡ精製システムで実施された。ＳＥＣ分析は、Ａｇｉｌｅｎｔ ＨＰＬＣ １１００システムを使用して、カラムの寿命を延ばすためのインラインガードカラム（６．０×４０ｍｍ）も備えたＴＳＫｇｅｌ Ｇ３０００ＳＷＸＬカラム（７．８×３００ｍｍ）に４０μｇの試料を注入することによって実行した。移動相には５０ｍｍのリン酸ナトリウム緩衝液と４００ｍｍの過塩素酸ナトリウムが含まれ、流速は１．０ｍＬ／分であり、溶出は定組成であった。
実施例２．抗体産生、安定性、及び機能的活性に対するバイパラトピック抗体フォーマットの影響
親（Ｂｉｎ １及びＢｉｎ ２）抗体の結合特性
表１０は、Ｂｉｎ １及びＢｉｎ ２抗体と組換えＦＲα抗原との結合の速度論的パラメーターを要約する。ＫＤ値は、Ｏｃｔｅｔ９６システム（Ｆｏｒｔｅｂｉｏ）で実施されたバイオレイヤー干渉法を介して、基本的にメーカーの推奨手順に従って取得された。簡潔に述べると、抗ヒトまたは抗マウス－Ｆｃセンサーを１×Ｋｉｎｅｔｉｃ Ｂｕｆｆｅｒ（Ｆｏｒｔｅｂｉｏ）に１０分間事前に浸し、Ｂｉｎ １またはＢｉｎ ２ ＩｇＧのいずれかの５μｇ／ｍＬと５分間インキュベートした。次いで、センサーを１×Ｋｉｎ
ｅｔｉｃ Ｂｕｆｆｅｒに５分間移してベースラインを決定し、抗原の連続希釈液で結合（１０分間）、１×Ｋｉｎｅｔｉｃ Ｂｕｆｆｅｒで解離（１０分間）を順次行った。生データが収集され、処理され、Ｆｏｒｔｅｂｉｏ分析ソフトウェアを使用して単純な１：１結合モデルに適合され、動的パラメーターＫｏｎ及びＫｏｆｆを決定した。
バイパラトピック抗体の安定性
バイパラトピック抗体は、Ｍｏｖ１９抗体を別の重複しないエピトープを認識する抗体と組み合わせることによって作成された。特に、Ｍｏｒｒｉｓｏｎのフォーマットに基づくＩｇＧは、Ｂｉｎ ＩｇＧの１つからのｓｃＦｖを別のＢｉｎからのＩｇＧのＣ末端またはＮ末端に融合することによって生成された。表１１に、調査した全ての組み合わせを示す。Ｃ末端に融合したｓｃＦｖはＶＨ－ＶＬ配向であり、Ｎ末端に融合したものはＶＬ－ＶＨ配向であった。Ｍｏｖ１９は、ＢｒｉｎｋｍａｎｎのＶＨ４４－ＶＬ１００ジスルフィド安定化変異を含んで、または含まずに、ＶＨ－ＶＬ及びＶＬ－ＶＨの方向の両方でＣ末端のｓｃＦｖとしてのみ探索された（ＰＮＡＳ １９９３ Ａｕｇｕｓｔ；９０（１６）：７５３８－７５４．Ａ ｒｅｃｏｍｂｉｎａｎｔ ｉｍｍｕｎｏｔｏｘｉｎ ｃｏｎｔａｉｎｉｎｇ ａ ｄｉｓｕｌｆｉｄｅ－ｓｔａｂｉｌｉｚｅｄ Ｆｖ ｆｒａｇｍｅｎｔ．Ｕ Ｂｒｉｎｋｍａｎｎ，Ｙ Ｒｅｉｔｅｒ，Ｓ Ｈ Ｊｕｎｇ，Ｂ Ｌｅｅ，ａｎｄ Ｉ Ｐａｓｔａｎ）。
表９に示すように、Ｍｏｒｒｉｓｏｎのフォーマットに基づくかなりの数のバイパラトピック分子は、プロテインＡアフィニティー精製後で低いモノマーパーセントを有した。スケーラビリティまたは製造可能性は、モノマーパーセントまたは力価が低い構築物にとって課題となる可能性があるため、より高い力価及び７０を超えるモノマー％を示した８つの構築物（表９にアスタリスクで示される）がさらなる評価のために選択された。これらの８つの構築物は、セラミックヒドロキシアパタイトクロマトグラフィーを使用して９
５％を超える純度までさらに洗練され、さらに特性評価された。バイパラトピックアームの結合に対するｓｃＦｖアームの全体的な分子立体配座または潜在的な構造変化の影響を説明するために、８つのＭｏｒｒｉｓｏｎ構築物の各アームの結合効率を競合ＦＡＣＳアッセイでアッセイした。簡潔に述べると、ＦＲα陽性Ｔ４７Ｄ細胞を、対応するマウス親抗体と通常５０ｎＭ～０．２ｎＭの濃度範囲で混合した０．８ｎＭのＭｏｒｒｉｓｏｎ抗体とインキュベートした。氷上で２時間インキュベートした後、細胞を非結合抗体から洗い流し、結合したＭｏｒｒｉｓｏｎ抗体を二次抗ヒトＦＩＴＣ標識抗体で検出した。親抗体の濃度を増加させた場合のＭｏｒｒｉｓｏｎ抗体の結合の減少は、第２のアームのセットの結合に対する効果を示した。図４Ａ～４Ｈ及び表１２に示されるように、Ｍｏｒｒｉｓｏｎの抗体の８つのうち５つは、完全に不活性であるか、または部分的に影響を受けたアームを有していた。機能アームの両方のセットを有する３つのＭｏｒｒｉｓｏｎ抗体のうち、２つの抗体（ＦＲα－抗体－Ａ－ｓｃＦｖ２－Ｍｏｖ１９－ＩｇＧ１及びＦＲα－抗体－Ｃ－ｓｃＦｖ２－Ｍｏｖ１９－ＩｇＧ１）は安定性の問題を示した。これらのデータに基づいて、ＦＲ５７ｓｃＦｖ２－Ｍｏｖ１９－ＩｇＧ１（「４価」）がさらなる評価のために選択された。
別の実験では、非対称Ｆｃ形式に基づく２つのバイパラトピック分子（ＦＲ５７ｓｃＦｖ２－ノブ－Ｍｏｖ１９－ホール及びＦＲ５７ｓｃＦｖ３ｗｔ－ノブ－Ｍｏｖ１９－ホール）も発現した。ＦＲ５７ｓｃＦｖ２－ノブ－Ｍｏｖ１９－ホール（「ＫＩＨ」）はより高いモノマー％と力価を示し、さらなる評価のために選択された。図５に示すように、この分子は、非還元条件下でのゲル電気泳動で単一のバンド（約１２５ｋＤａに対応する）として泳動し、還元条件下で３つのバンド（１つは軽鎖（約２５ｋＤ）に対応し、２つは、同様のサイズ（それぞれ約５０ｋＤａ）の重鎖（ＦＲ５７ｓｃＦｖ－Ｆｃ－ノブ及びＭｏｖ１９－ＨＣ－ホール）に対応する）に分解する。これらの結果は、ＦＲ５７ｓｃＦｖ２－ノブ－Ｍｏｖ１９－ホールが細胞培養で正しく組み立てられ、精製中に分解しないことを示唆している。
次に、ＦＲ５７ｓｃＦｖ２－ノブ－Ｍｏｖ１９－ホール分子の安定性を、分子を４０℃（１×ＰＢＳ中の濃度：１０ｍｇ／ｍＬ）で２週間加熱し、本質的に実施例１に記載の手順を用いてＳＥＣ分析を行うことによって評価した。図６は、０日目と１４日目の試料のＳＥＣオーバーレイを示している。特に、凝集や切断は見られず、分子の安定性が良好であることを示唆している。
抗体の結合とプロセシング
抗体の結合とプロセシングに対する抗体フォーマットの影響は、３［Ｈ］抗体を使用してインビトロで評価された。簡潔に述べると、ＦＲα陽性ＫＢ細胞を飽和濃度の親、ＫＩＨバイパラトピック、またはＭｏｒｒｉｓｏｎ抗体に対して３７℃で３０分間曝露し、ＰＢＳで洗浄して未結合の抗体を除去し、新鮮な培地に再懸濁し、６％に加湿したＣＯ２雰囲気中で３７℃で２２時間インキュベートした。アセトン抽出及び液体シンチレーションカウンティングに続いて、タンパク質を含まない放射能（プロセシングされた抗体）及びタンパク質関連放射能（プロセシングしていない抗体）の量を評価し、データを使用して細胞あたりの抗体結合部位（ＡＢＣ）、プロセシングされた抗体％、プロセシングされた抗体の量を計算した。予備実験は、親抗体Ｍ９３４６ＡとｈｕＦＲ５７のプロセシングが類似していることを示した。したがって、１つの親抗体（Ｍ９３４６Ａ）のみがさらなる実験で使用された。
両方のバイパラトピックフォーマット（ＫＩＨ及び４価）は、親抗体と比較して増加したプロセシングされた抗体の量を示した（図７Ｃ及び７Ｄ）。興味深いことに、２つのバイパラトピックフォーマットの改善された送達／プロセシングのメカニズムが異なっていた。ＫＩＨバイパラトピック抗体は、単一特異性親抗体よりも高いＡＢＣ及び同様の内在化効率を有し（図７Ａ～７Ｄ）、Ｍｏｒｒｉｓｏｎの４価抗体は、改善された内在化効率及び親抗体に匹敵するＡＢＣ値を示した（図７Ｃ及び７Ｄ）。２つのバイパラトピックフォーマットについて分解された抗体の量は類似していた（図７Ｅ及び７Ｆ）。
実施例３．バイパラトピックＦＲα標的化イムノコンジュゲートの調製
ＦＲ５７ｓｃｆｖ－ｈｕＭｏｖ１９－スルホ－ＳＰＤＢ－ＤＭ４コンジュゲートの調製
ＦＲ５７ｓｃｆｖ－ｈｕＭｏｖ１９、スルホ－ＳＰＤＢ、及びＤＭ４のモル濃度は、それぞれ２８０、３４３、４１２ｎｍでのＵＶ／Ｖｉｓ吸光度値と吸光係数を用いてベールの法則に従って計算された。リンカー濃度は、リンカーを５０ｍＭのリン酸カリウム緩衝液、５０ｍＭの塩化ナトリウムと２ｍＭのＥＤＴＡ、ｐＨ７．５中の２５ｍＭのＤＴＴと反応させ、３４３ｎｍでのチオピリジン放出を測定することによって決定した。薬物濃度は、ＤＭ４を５０ｍＭのリン酸カリウム緩衝液、５０ｍＭの塩化ナトリウム、２ｍＭのＥＤＴＡ、ｐＨ ７．５中の１０ｍＭのＤＴＮＢ［５，５－ジチオビス－（２－ニトロ安息香酸）］と反応させ、４１２ｎｍでの吸光度を測定することによって決定された。
抗体コンジュゲーションの前に、１．５ｍＭのスルホ－ＳＰＤＢを３０％水溶液［１５ｍＭのリン酸カリウムｐＨ７．６）中の１．９５ｍＭのＤＭ４及び７０％有機［（Ｎ－Ｎ－ジメチルアセトアミド、ＤＭＡ、ＳＡＦＣ）］と２５℃で９０分間反応させることにより、スルホ－ＳＰＤＢ－ＤＭ４インサイチュ混合物を調製した。コンジュゲーション反応中、２．５ｍｇ／ｍＬの抗体溶液を、１０％ＤＭＡ（ｖ／ｖ）を含む１５ｍＭのリン酸カリウムｐＨ７．６で、抗体の８～８．５倍モル過剰のスルホ－ＳＰＤＢ－ＤＭ４と２５℃で１５～２０時間反応させた。反応物を、ＡＫＴＡ上のＳｅｐｈａｄｅｘ ２５脱塩カラムを使用して１０ｍＭの酢酸塩、９％スクロース、０．０１％Ｔｗｅｅｎ ２０、ｐＨ５．０の製剤緩衝液中に精製し、０．２２μｍＰＶＤＦメンブレンを備えたシリンジフィルターで濾過した。
抗体に対するコンジュゲートしたＤＭ４のモル比（ＤＡＲ）及びコンジュゲートしていないマイタンシノイド種のパーセンテージを以下のように決定した。精製されたコンジュゲートは、ＵＶ－Ｖｉｓによって３．４モルＤＭ４／モル抗体、ＳＥＣによって９９．８％モノマー、ＨＰＬＣ Ｈｉｓｅｐカラム分析によって２％未満の遊離薬物であることがわかった。
ＤＡＲは、２５２及び２８０ｎｍでのＵＶ／Ｖｉｓ吸光度を測定することと、各成分の
寄与を説明する二項方程式を使用してＡｂ濃度及びＤＭ４濃度を計算することとによって決定された。最終的なＦＲ５７ｓｃｆｖ－ｈｕＭｏｖ１９－スルホ－ＳＰＤＢ－ＤＭ４コンジュゲート試料に存在する非結合マイタンシノイドの量は、ＨＩＳＥＰカラム（２５ｃｍ×４．６ｍｍ、５μｍ）で分析した試料で観察されたピーク面積から計算した。コンジュゲート試料に存在する遊離マイタンシノイドパーセント（ＦＭ％）は、以下の式を使用して計算された：遊離マイタンシノイド％＝（ＤＭ４による逆相ＰＡ ２５２）／（ＤＭ４による逆相ＰＡ ２５２＋ＤＭ４によるフロースルーＰＡ ２５２）×１００％。
ノブインホール（ＫＩＨ）－ＦＲ５７ｓｃｆｖ－ｈｕＭｏｖ１９－スルホ－ＳＰＤＢ－ＤＭ４コンジュゲートの調製
抗体コンジュゲーションの前に、１．５ｍＭのスルホ－ＳＰＤＢを３０％水溶液［１５ｍＭのリン酸カリウムｐＨ７．６）中の１．９５ｍＭのＤＭ４及び７０％有機［（Ｎ－Ｎ－ジメチルアセトアミド、ＤＭＡ、ＳＡＦＣ）］と２５℃で９０分間反応させることにより、スルホ－ＳＰＤＢ－ＤＭ４インサイチュ混合物を調製した。コンジュゲーション反応中、３．０ｍｇ／ｍＬの抗体溶液を、１１％ＤＭＡ（ｖ／ｖ）を含む１５ｍＭのリン酸カリウムｐＨ７．６で、抗体の１０倍モル過剰のスルホ－ＳＰＤＢ－ＤＭ４と２５℃で１５～２０時間反応させた。反応物を、ＮＡＰ脱塩カラムを使用して１０ｍＭのコハク酸塩、２５０ｍＭのグリシン、０．５％スクロース、０．０１％Ｔｗｅｅｎ ２０、ｐＨ５．５の製剤緩衝液中に２回精製し、０．２２μｍＰＶＤＦメンブレンを備えたシリンジフィルターで濾過した。精製されたコンジュゲートは、ＵＶ－Ｖｉｓによって２．９モルＤＭ４／モル抗体、ＳＥＣによって９０．６％モノマー、ＨＰＬＣ Ｈｉｓｅｐカラム分析によって１％未満の遊離薬物であることがわかった。
ＦＲ５７ｓｃｆｖ－ｈｕＭｏｖ１９－ＤＭ２１コンジュゲートの調製
ＦＲ５７ｓｃｆｖ－ｈｕＭｏｖ１９、スルホ－ＧＭＢＳ、及びＤＭ２１のモル濃度は、それぞれ２８０、３４３、４１２ｎｍでのＵＶ／Ｖｉｓ吸光度値と吸光係数を用いてベールの法則に従って計算された。リンカー濃度は、リンカーを５０ｍＭのリン酸カリウム緩衝液、５０ｍＭの塩化ナトリウムと２ｍＭのＥＤＴＡ、ｐＨ７．５中の２５ｍＭのＤＴＴの５０ｍＭのＤＴＴと反応させ、３４３ｎｍでのチオピリジン放出を測定することによって決定した。薬物濃度は、ＤＭ２１を５０ｍＭのリン酸カリウム緩衝液、５０ｍＭの塩化ナトリウム、２ｍＭのＥＤＴＡ、ｐＨ ７．５中の１０ｍＭのＤＴＮＢ［５，５－ジチオビス－（２－ニトロ安息香酸）］と反応させ、４１２ｎｍでの吸光度を測定することによって決定された。
コンジュゲーションの前に、１．５ｍＭのスルホ－ＧＭＢＳを、それぞれ６０／４０（ｖ／ｖ）ＤＭＡ及びコハク酸緩衝液ｐＨ５．０中の１．９５ｍＭのＤＭ２１と反応させることにより、スルホ－ＧＭＢＳ－ＤＭ２１のインサイチュ混合物を調製した。コンジュゲーションは、１０％ＤＭＡ（ｖ／ｖ）を含む、６０ｍＭの４－（２－ヒドロキシエチル）－１－ピペラジンプロパンスルホン酸（ＥＰＰＳ）ｐＨ８．０中の２．５ｍｇ／ｍＬの抗体に対して６．５リンカー過剰のスルホ－ＧＭＢＳ－ＤＭ２１で実施された。２５℃で２０～２２時間インキュベートした後、反応物を、ＮＡＰ脱塩カラムを使用して１０ｍＭのコハク酸塩、２５０ｍＭのグリシン、０．５％スクロース、０．０１％Ｔｗｅｅｎ ２０、ｐＨ５．５中に精製し、０．２２μｍＰＶＤＦメンブレンフィルターで濾過した。
抗体に対するコンジュゲートしたＤＭ２１のモル比（ＤＡＲ）及びコンジュゲートしていないマイタンシノイド種のパーセンテージを以下のように決定した。精製されたコンジュゲートは、ＵＶ－Ｖｉｓによって３．７モルＤＭ２１／モル抗体、ＳＥＣによって９８％モノマー、ＨＰＬＣ Ｈｉｓｅｐカラム分析によって２％未満の遊離薬物であることがわかった。
抗体に対するコンジュゲートしたＤＭ２１のモル比（ＤＡＲ）は、２５２及び２８０ｎｍでのＵＶ／Ｖｉｓ吸光度を測定することと、各成分の寄与を説明する二項方程式を使用してＡｂ濃度及びＤＭ２１濃度を計算することとによって決定された。最終的なＦＲ５７ｓｃｆｖ－ｈｕＭｏｖ１９－ＧＭＢＳ－ＤＭ２１Ｌコンジュゲート試料に存在する非結合マイタンシノイドの量は、ＨＩＳＥＰカラム（２５ｃｍ×４．６ｍｍ、５μｍ）で分析した試料で観察されたピーク面積から計算した。コンジュゲート試料に存在する遊離マイタンシノイドパーセント（ＦＭ％）は、以下の式を使用して計算された：遊離マイタンシノイド％＝（ＤＭ２１による逆相ＰＡ ２５２）／（ＤＭ２１による逆相ＰＡ ２５２ ＋
ＤＭ２１によるフロースルーＰＡ ２５２）×１００％。
ノブインホール（ＫＩＨ）－ＦＲ５７ｓｃｆｖ－ｈｕＭｏｖ１９－ＧＭＢＳ－ＤＭ２１Ｌコンジュゲートの調製
ＫＩＨ－ＦＲ５７ｓｃｆｖ－ｈｕＭｏｖ１９－ＧＭＢＳ－ＤＭ２１Ｌの最初のバッチは、インサイチュ混合物中のより低濃度の薬物とリンカー、及びコンジュゲーションプロセス中のより低濃度の抗体を使用して調製した。簡潔に述べると、コンジュゲーションの前に、１．５ｍＭのスルホ－ＧＭＢＳを、それぞれ６０／４０（ｖ／ｖ）ＤＭＡ及びコハク酸緩衝液ｐＨ５．０中の１．９５ｍＭのＤＭ２１と反応させることにより、スルホ－ＧＭＢＳ－ＤＭ２１のインサイチュ混合物を調製した。コンジュゲーションは、１０％ＤＭＡ（ｖ／ｖ）を含む、６０ｍＭの４－（２－ヒドロキシエチル）－１－ピペラジンプロパンスルホン酸（ＥＰＰＳ）ｐＨ８．０中の２．５ｍｇ／ｍＬの抗体に対して７．５リンカー過剰のスルホ－ＧＭＢＳ－ＤＭ２１で実施された。２５℃で２０～２２時間インキュベートした後、反応物を、ＮＡＰ脱塩カラムを使用して１０ｍＭのコハク酸塩、２５０ｍＭのグリシン、０．５％スクロース、０．０１％Ｔｗｅｅｎ ２０、ｐＨ５．５中に２回精製し、０．２２μｍＰＶＤＦメンブレンフィルターで濾過した。精製されたコンジュゲートは、ＵＶ－Ｖｉｓによって３．１モルＤＭ２１／モル抗体、ＳＥＣによって９９．１％モノマー、ＨＰＬＣ Ｈｉｓｅｐカラム分析によって２％未満の遊離薬物であることがわかった。
薬物動態及び有効性研究で使用するためのＫＩＨ－ＦＲ５７ｓｃｆｖ－ｈｕＭｏｖ１９－ＧＭＢＳ－ＤＭ２１Ｌのその後のバッチは、インサイチュ混合物中のより高濃度の薬物とリンカー、及びコンジュゲーションプロセス中のより高濃度の抗体を使用して調製した。簡潔に述べると、コンジュゲーションの前に、３ｍＭのスルホ－ＧＭＢＳを、それぞれ６０／４０（ｖ／ｖ）ＤＭＡ及びコハク酸緩衝液ｐＨ５．０中の３．９ｍＭのＤＭ２１と反応させることにより、スルホ－ＧＭＢＳ－ＤＭ２１のインサイチュ混合物を調製した。コンジュゲーションは、１０％ＤＭＡ（ｖ／ｖ）を含む、６０ｍＭの４－（２－ヒドロキシエチル）－１－ピペラジンプロパンスルホン酸（ＥＰＰＳ）ｐＨ８．０中の５．７～６ｍｇ／ｍＬの抗体に対して６．５～７リンカー過剰のスルホ－ＧＭＢＳ－ＤＭ２１で実施された。２５℃で２０～２２時間インキュベートした後、反応物を、ＡＫＴＡ上のＳｅｐｈａｄｅｘ－２５脱塩カラムを使用して１０ｍＭのコハク酸塩、２５０ｍＭのグリシン、０．５％スクロース、０．０１％Ｔｗｅｅｎ ２０、ｐＨ５．５中に精製し、０．２２μｍＰＶＤＦメンブレンフィルターで濾過した。精製されたコンジュゲートは、ＵＶ－Ｖｉｓによって３．１モルＤＭ２１／モル抗体、ＳＥＣによって９８．７％モノマー、ＨＰＬＣ Ｈｉｓｅｐカラム分析によって２％未満の遊離薬物であることがわかった。
ＤＡＲが３．５のＫＩＨ－ＦＲ５７ｓｃｆｖ－ｈｕＭｏｖ１９－ＧＭＢＳ－ＤＭ２１Ｌ構築物を含む組成物を「ＩＭＧＮ１５１」と呼ぶ。
実施例４．イムノコンジュゲートの有効性に対するバイパラトピック抗体フォーマットの効果
バイパラトピックイムノコンジュゲートのインビトロ細胞傷害性
イムノコンジュゲートの細胞傷害性に対するバイパラトピック抗体フォーマットの効果は、ＫＢ、Ｉｇｒｏｖ－１、及びＴ４７Ｄ細胞を使用してインビトロで評価された。親抗体、ＫＩＨ抗体、及びＭｏｒｒｉｓｏｎ抗体のスルホ－ＳＰＤＢ－ＤＭ４コンジュゲートを、実施例３に記載の方法に従って調製した。コンジュゲートを適切な培地で希釈し、１×１０３細胞／ウェルを含む９６ウェル平底プレートのウェルに添加した。プレートを３７℃、６％ＣＯ２で５日間インキュベートした。細胞生存率は、製造元のプロトコールに従ってＷＳＴ－８アッセイによって決定され、ＩＣ５０は、シグモイド用量反応（可変勾配）非線形回帰カーブフィット（ＧｒａｐｈＰａｄ Ｓｏｆｔｗａｒｅ Ｉｎｃ）を使用して生成された。
バイパラトピックスルホ－ＳＰＤＢ－ＤＭ４コンジュゲートは両方とも、試験した３つの中程度から低いＦＲα発現細胞株のうち２つ（Ｉｇｒｏｖ－１及びＴ４７Ｄ）に対して、親抗体コンジュゲートよりも高い活性であった。３つのコンジュゲートに同等に感受性のある唯一の細胞株はＫＢであり、これは非常に高レベルの標的発現を有する。ＫＩＨコンジュゲートは、Ｔ４７Ｄ細胞株（すなわち、標的発現のレベルが最も低い細胞）に対してＭｏｒｒｉｓｏｎフォーマットコンジュゲートよりも高い細胞傷害活性を示した。しかしながら、ＫＩＨコンジュゲートとＭｏｒｒｉｓｏｎのフォーマットコンジュゲートはどちらも、分析された他の２つの細胞株に対して同等に活性であった。
ＯＶ－９０ヒト卵巣癌異種移植片を有するＳＣＩＤマウスにおける４価バイパラトピックＡＤＣのインビボ抗腫瘍活性
イムノコンジュゲートの治療効果に対する４価のバイパラトピック抗体フォーマットの効果は、ＯＶ－９０異種移植モデルを使用してインビボで評価された。マウスは腫瘍体積によって群に無作為化され（群あたりｎ＝６）、その後接種後７日目に投与された。これらの群には、製剤緩衝液を投与した対照群、２．５及び５ｍｇ／ｋｇの４価－ｓ－ＳＰＤＢ－ＤＭ４、ならびに２．５及び５ｍｇ／ｋｇのＭ－ｓ－ＳＰＤＢ－ＤＭ４が含まれていた。全てのマウスに、上述の化合物を単回静脈内投与した。接種後８０日目に研究を終了した。
腫瘍体積は、キャリパーを使用して３次元で週に２回測定された。体積は、式、体積＝１／２（長さ×幅×高さ）を使用してｍｍ３で表された。（Ｃａｎｃｅｒ Ｃｈｅｍｏｔｈｅｒ．Ｐｈａｒｍａｃｏｌ。１９８９（２４）：１４８－１５４．Ｄｅｔｅｒｍｉｎａｔｉｏｎ ｏｆ ｓｕｂｃｕｔａｎｅｏｕｓ ｔｕｍｏｒ ｓｉｚｅ ｉｎ ａｔｈｙｍｉｃ（ｎｕｄｅ）ｍｉｃｅ．ＭＭ Ｔｏｍａｙｋｏ ａｎｄ ＣＰ Ｒｅｙｎｏｌｄｓ）。試験剤の毒性の大まかな指標として、体重を週に２回測定した。活性を、Ｃａｎｃｅｒ
Ｒｅｓ．１９９１ Ｓｅｐｔ．（５１）：４８４５－４８５２．Ｅｘｐｅｒｉｍｅｎｔａｌ Ａｎｔｉｔｕｍｏｒ Ａｃｔｉｖｉｔｙ ｏｆ Ｔａｘｏｔｅｒｅ（ＲＰ ５６９７６，ＮＳＣ ６２８５０３），ａ Ｔａｘｏｌ Ａｎａｌｏｇｕｅ．Ｍ Ｂｉｓｓｅｒｙ，Ｄ Ｇｕｅｎａｒｄ，Ｆ Ｇｕｅｒｉｔｔｅ－Ｖｏｅｇｅｌｅｉｎ，ｅｔ ａｌに記
載されるように評価した。
研究の結果を図８及び表１４に示す。４価－ｓ－ＳＰＤＢ－ＤＭ４コンジュゲートは２．５と５ｍｇ／ｋｇ用量の両方で活性であり、それぞれＴ／Ｃが１３％及び１１％であった。２．５ｍｇ／ｋｇ用量では、Ｔ－Ｃが３２日、ＬＣＫが１．２５（活性）、ＰＲが２／６、ＣＲが０／６であった。５ｍｇ／ｋｇ用量では、Ｔ－Ｃが４７日、ＬＣＫが１．８４（活性）、ＰＲが２／６、ＣＲが２／６、ＴＦＳが１／６であった。Ｍ－ｓ－ＳＰＤＢ－ＤＭ４コンジュゲートは２．５ｍｇ／ｋｇ用量で活性であり、Ｔ／Ｃが２６％であり、５ｍｇ／ｋｇ用量で高い活性であり、Ｔ／Ｃが３％であった。２．５ｍｇ／ｋｇ用量では、Ｔ－Ｃが２５日、ＬＣＫが０．９８（不活性）で、退縮はなかった。腫瘍体積が小さい場合の壊死のため、５ｍｇ／ｋｇ群のＴ－Ｃ及びＬＣＫを決定できなかった。しかしながら、この群では、ＰＲが４／６、ＣＲが３／６、ＴＦＳが３／６であった。接種後１３日目に最下点で研究の全ての群において２～５％の最小限の体重減少があった。この研究の結果は、４価のＡＤＣフォーマットが親コンジュゲートよりも活性の改善をもたらさないことを示している。
ＩＧＲＯＶ－１ヒト卵巣癌異種移植片を有するＳＣＩＤマウスにおける４価バイパラトピックＡＤＣのインビボ抗腫瘍活性
イムノコンジュゲートの治療効果に対する４価のバイパラトピック抗体フォーマットの効果は、ＩＧＲＯＶ－１異種移植モデルを使用してインビボで評価された。マウスは腫瘍体積によって群に無作為化され（群あたりｎ＝８）、その後接種後１１日目に投与された。これらの群には、製剤緩衝液を投与した対照群、１００μｇ／ｋｇの４価－ｓ－ＳＰＤＢ－ＤＭ４、及び１００μｇ／ｋｇのＭ－ｓ－ＳＰＤＢ－ＤＭ４が含まれていた。４価抗体と親抗体の分子量の違い（すなわち、５０ｋＤａの違い）による４価コンジュゲートの過少投与の可能性を説明するために、この研究及び今後の全ての研究では、用量をペイロードによって正規化した。全てのマウスに、上述の化合物を単回静脈内投与した。接種後８１日目に研究を終了した。腫瘍の測定及び計算は、上述のサブセクション「ＯＶ－９０ヒト卵巣癌異種移植片を有するＳＣＩＤマウスにおける４価バイパラトピックＡＤＣのインビボ抗腫瘍活性」に記載されているように決定された。
研究の結果を図９及び表１５に示す。４価－ｓ－ＳＰＤＢ－ＤＭ４と親のＭ－ｓ－ＳＰＤＢ－ＤＭ４コンジュゲートは両方とも１００μｇ／ｋｇで活性であり、それぞれ、Ｔ／Ｃが２１％及び１５％であった。腫瘍体積が小さい場合の壊死のため、いずれの群もＴ－Ｃ及びＬＣＫを決定できなかった。四価コンジュゲートは、ＰＲが２／８、ＣＲが１／８、ＴＦＳが０／８であったが、Ｍ－ｓ－ＳＰＤＢ－ＤＭ４は、ＰＲが３／８、ＣＲが１／８、ＴＦＳが０／８であった。接種後１４日目に最下点で８％の体重減少があった１００μｇ／ｋｇの４価ＡＤＣを除いて、研究のほとんどの群で最小限の体重減少があった。同様に、この研究の結果は、４価のＡＤＣフォーマットが親コンジュゲートよりも活性の改善をもたらさないことを示している。
ＯＶ－９０ヒト卵巣癌異種移植片を有するＳＣＩＤマウスにおけるＫＩＨバイパラトピックＡＤＣのインビボ抗腫瘍活性
イムノコンジュゲートの治療効果に対するＫＩＨバイパラトピック抗体フォーマットの効果は、ＯＶ－９０異種移植モデルを使用してインビボで評価された。マウスは腫瘍体積によって群に無作為化され（群あたりｎ＝６）、その後接種後７日目に投与された。これらの群には、製剤緩衝液を投与した対照群、４０、２０、及び１０μｇ／ｋｇのＫＩＨ－ｓ－ＳＰＤＢ－ＤＭ４、ならびに２０μｇ／ｋｇのＭ－ｓ－ＳＰＤＢ－ＤＭ４が含まれていた。全てのマウスに、上述の化合物を単回静脈内投与した。接種後８０日目に研究を終了した。腫瘍の測定及び計算は、サブセクション「ＯＶ－９０ヒト卵巣癌異種移植片を有するＳＣＩＤマウスにおける４価バイパラトピックＡＤＣのインビボ抗腫瘍活性」に記載されているように決定された。
研究の結果を図１０及び表１６に示す。ＫＩＨ－ｓ－ＳＰＤＢ－ＤＭ４コンジュゲートは４０μｇ／ｋｇで高い活性であり、２０μｇ／ｋｇで活性であり、１０μｇ／ｋｇで不活性であり、それぞれのＴ／Ｃが６％、１２％、及び８３％であった。４０μｇ／ｋｇ用量群では、Ｔ－Ｃが２９日、ＬＣＫが１．８４（活性）、ＰＲが３／６、ＣＲが２／６、ＴＦＳが０／６であった。２０μｇ／ｋｇ用量群では、Ｔ－Ｃが３８日、ＬＣＫが１．３２（活性）で、退縮はなかった。１０μｇ／ｋｇ群では、Ｔ－Ｃが２日、ＬＣＫが０．０９（不活性）で、退縮はなかった。親のＭ－ｓ－ＳＰＤＢ－ＤＭ４コンジュゲートは２０μｇ／ｋｇで不活性であり、Ｔ／Ｃは８１％で、退縮はなかった。腫瘍体積が小さい場合の壊死のため、この群のＴ－Ｃ及びＬＣＫを決定できなかった。この研究では体重減少は観察されなかった。４価コンジュゲートで実施された研究とは対照的に、ＫＩＨ－ｓ－ＳＰＤＢ－ＤＭ４はＭ－ｓ－ＳＰＤＢ－ＤＭ４よりも顕著に高い活性を示した。これらの研究の結果に基づいて、さらなる評価のために、４価フォーマットよりもＫＩＨフォーマットが選択された。
実施例５．ＤＭ２１にコンジュゲートしたノブインホールバイパラトピック抗体のインビトロ活性
ＤＭ２１にコンジュゲートしたノブインホールバイパラトピック抗体のインビトロ細胞傷害性
ＤＭ２１にコンジュゲートしたＫＩＨバイパラトピック抗体のインビトロ細胞傷害性を
、実施例４に記載のプロトコール（「バイパラトピックイムノコンジュゲートのインビトロ細胞傷害性」）に従って複数の細胞株で評価した。以前の研究では、２つの親ＤＭ２１コンジュゲート（Ｍ－ＤＭ２１及びｈｕＦＲ５７－ＤＭ２１）の活性が非常に類似していることが示された（図１１）。さらなる全ての研究において、ＫＩＨ－ＤＭ２１の活性を親Ｍ抗体のコンジュゲート（Ｍ－ｓ－ＳＰＤＢ－ＤＭ４及びＭ－ＤＭ２１）と比較して、ＫＩＨ－ＤＭ２１の全体的な細胞傷害性に対するバイパラトピックフォーマット及びＤＭ２１ペイロードの寄与を評価した。
ＫＩＨ－ＤＭ２１は、試験した５つの細胞株のうち３つ（Ｉｇｒｏｖ－１、Ｔ４７Ｄ、及びＪＨＯＳ－４）に対して、２つの親コンジュゲートよりも顕著に高い活性であった（図１２Ａ～１２Ｅ）。さらに、ＤＭ２１リンカー／ペイロードを含む２つのコンジュゲート（ＫＩＨ－ＤＭ２１及びＭ－ＤＭ２１）はＪｅｇ－３細胞に対して同様に活性であったが、Ｍ－ｓ－ＳＰＤＢ－ＤＭ４コンジュゲートはこの細胞株に対してより低い活性を示した。最高ＦＲα発現レベルを示す唯一の細胞株（ＫＢ）は、全ての３つのコンジュゲートに同様に感受性であった。したがって、これらの結果は、ＫＩＨ－ＤＭ２１が、親抗体のコンジュゲート（Ｍ－ｓ－ＳＰＤＢ－ＤＭ４及びＭ－ＤＭ２１）と比較して、ほとんどの試験された細胞株に対して増加した活性を示すことを示している。
さらに、ＫＩＨ－ＤＭ２１と親の単一特異性抗体の結合、内在化、及びプロセシングを、３Ｈ抗体を使用して比較した。中程度（ＪＨＯＳ－４）及び高い（ＫＢ）ＦＲα発現を有する腫瘍細胞では、ＫＩＨ－ＤＭ２１は抗体結合イベント及びプロセシングを、それぞれ１００％及び１７０％ブーストした。
ＤＭ２１にコンジュゲートしたノブインホールバイパラトピック抗体のバイスタンダー殺傷活性
混合細胞培養においてＦＲα細胞を殺傷するＫＩＨ－ＤＭ２１の能力は、複数の細胞株を使用してインビトロで評価された。他のインビトロ細胞傷害性実験と一致して、親抗体コンジュゲートＭ－ＤＭ２１及びＭ－ｓ－ＳＰＤＢ－ＤＭ４を対照として使用した。標的陽性細胞（ＫＢ、Ｉｇｒｏｖ－１、Ｊｅｇ－３またはＴ４７Ｄ）と標的陰性細胞Ｎａｍａｌｗａ／ｌｕｃ（すなわち、ルシフェラーゼを発現するＮａｍａｌｗａ細胞）の混合培養を０．５ｎＭのコンジュゲートに曝露した。この濃度のコンジュゲートは、細胞を単独でインキュベートした場合、標的陰性細胞に対して毒性がない。混合培養における標的陽性細胞のさまざまなパーセンテージ（９％～５０％）がその後、試験された。５日間の曝露後、混合物中の標的陰性細胞の細胞増殖の阻害は、製造元のプロトコールに従ってＯｎｅ
Ｇｌｏ（Ｐｒｏｍｅｇａ）によって決定された。
試験した全ての混合培養で、ＫＩＨ－ＤＭ２１が最も高いバイスタンダー活性を示し、Ｍ－ＤＭ２１がそれに続いた。Ｍ－ｓ－ＳＰＤＢ－ＤＭ４は、図１３Ａ～１３Ｄ及び表１７に示すように、最も活性の低いコンジュゲートであった。
まとめると、これらのデータは、ＤＭ２１リンカー／ペイロードと組み合わされたＫＩＨバイパラトピックフォーマットが、ＤＭ２１またはｓ－ＳＰＤＢ－ＤＭ４にコンジュゲートした親抗体と比較してインビトロの有効性の向上をもたらしたことを示している。
実施例６．ＫＩＨバイパラトピックイムノコンジュゲートのインビボ有効性
ＯＶ－９０ヒト卵巣癌異種移植片を有するＳＣＩＤマウスにおけるＫＩＨバイパラトピックＡＤＣのインビボ抗腫瘍活性
低いＦＲα発現（Ｈスコア３０）を有するＯＶ－９０異種移植モデルで、ＫＩＨ－ＤＭ２１のインビボ有効性を評価し、ＫＩＨ－ｓ－ＳＰＤＢ－ＤＭ４と比較した。マウスは腫瘍体積によって群に無作為化され（群あたりｎ＝６）、その後接種後７日目に投与された。これらの群には、製剤緩衝液を投与した対照群、４０、２０、及び１０μｇ／ｋｇのＫＩＨ－ｓ－ＳＰＤＢ－ＤＭ４、４０、２０、及び１０μｇ／ｋｇのＫＩＨ－ＤＭ２１、２０μｇ／ｋｇのＭ－ＤＭ２１、ならびに２０μｇ／ｋｇのＭ－ｓ－ＳＰＤＢ－ＤＭ４が含まれていた。全てのマウスに、上述の化合物を単回静脈内投与した。接種後８０日目に研究を終了した。腫瘍の測定及び計算は、実施例４のサブセクション「ＯＶ－９０ヒト卵巣癌異種移植片を有するＳＣＩＤマウスにおける４価バイパラトピックＡＤＣのインビボ抗腫瘍活性」に記載されているように決定された。
研究の結果を図１４Ａ～１４Ｂ及び表１８に示す。ＫＩＨ－ｓ－ＳＰＤＢ－ＤＭ４の４０μｇ／ｋｇ用量群では、Ｔ－Ｃが２９日、ＬＣＫが１．８４（活性）、ＰＲが３／６、ＣＲが２／６、ＴＦＳが０／６であった。２０μｇ／ｋｇ用量群では、Ｔ－Ｃが３８日、ＬＣＫが１．３２（活性）で、退縮はなかった。１０μｇ／ｋｇ群では、Ｔ－Ｃが２日、ＬＣＫが０．０９（不活性）で、退縮はなかった。親のＭ－ｓ－ＳＰＤＢ－ＤＭ４コンジュゲートは２０μｇ／ｋｇで不活性であり、Ｔ／Ｃは８１％で、退縮はなかった。腫瘍体積が小さい場合の壊死のため、この群のＴ－Ｃ及びＬＣＫを決定できなかった。ＫＩＨ－ＤＭ２１コンジュゲートは、全ての用量で非常に高い活性であり、４０μｇ／ｋｇ用量に対してＴ／Ｃは１％で、２０μｇ／ｋｇ用量に対して７％で、１０μｇ／ｋｇ用量に対して９％であった。４０μｇ／ｋｇ用量では、Ｔ－Ｃが５３日、ＬＣＫが２．４９（活性）、ＰＲが５／６、ＣＲが５／６、ＴＦＳが３／６であった。２０μｇ／ｋｇ用量では、Ｔ－Ｃが４２日、ＬＣＫが１．９８（活性）、ＰＲが３／６、ＣＲが２／６、ＴＦＳが１／６であった。１０μｇ／ｋｇ用量ではＰＲが２／６、ＣＲが０／６であった。腫瘍体積が小さい場合の壊死のため、この群のＴ－Ｃ及びＬＣＫを決定できなかった。Ｍ－ＤＭ２１コンジュゲートは２０μｇ／ｋｇで活性であり、Ｔ／Ｃが２２％、Ｔ－Ｃが３０日、ＬＣＫが１．４１（活性）で、退縮はなかった。この研究では体重減少は観察されなかった。要約すると、ＤＭ２１コンジュゲートは、この研究の親フォーマットとＫＩＨバイパラトピックフォーマットの両方でｓ－ＳＰＤＢ－ＤＭ４コンジュゲートよりも活性であった。さらに、バイパラトピックＫＩＨコンジュゲートは、同じリンカー／ペイロードフォーマット内での釣り合った２０μｇ／ｋｇ用量で、それらの親の対応物よりもより活性であった。これらの結果に基づいて、ＫＩＨ－ＤＭ２１が追加の異種移植モデルでの評価のために選択された。
Ｉｓｈｉｋａｗａヒト子宮内膜腺癌異種移植片を有するＳＣＩＤマウスにおけるＫＩＨバイパラトピックＡＤＣのインビボ抗腫瘍活性
中程度のＦＲα発現（Ｈスコア１００）を有するＩｓｈｉｋａｗａ異種移植モデルで、ＤＭ２１にコンジュゲートしたＫＩＨバイパラトピック抗体のインビボ有効性を評価した。
マウスは腫瘍体積によって群に無作為化され（群あたりｎ＝６）、その後接種後１１日目に投与された。これらの群には、製剤緩衝液を投与した対照群、１００、５０、及び２５μｇ／ｋｇのＫＩＨ－ＤＭ２１、１００及び５０μｇ／ｋｇのＭ－ＤＭ２１、ならびに１００μｇ／ｋｇのＭ－ｓ－ＳＰＤＢ－ＤＭ４が含まれていた。全てのマウスに、上述の化合物を単回静脈内投与した。接種後９０日目に研究を終了した。腫瘍の測定及び計算は、実施例４のサブセクション「ＯＶ－９０ヒト卵巣癌異種移植片を有するＳＣＩＤマウスにおける４価バイパラトピックＡＤＣのインビボ抗腫瘍活性」に記載されているように決定された。
研究の結果を図１５及び表１９に示す。ＫＩＨ－ＤＭ２１コンジュゲートは１００及び５０μｇ／ｋｇで高い活性であったが、２５μｇ／ｋｇで不活性であり、それぞれ、Ｔ／Ｃが０％、９％、及び７８％であった。１００μｇ／ｋｇ用量では、Ｔ－Ｃが６３日を超え、ＬＣＫが３．３３を超え（高い活性）、ＰＲが６／６、ＣＲが５／６、ＴＦＳが４／６であった。５０μｇ／ｋｇ用量ではＰＲが３／６、ＣＲが０／６であった。腫瘍体積が小さい場合の壊死のため、この群のＴ－Ｃ及びＬＣＫを決定できなかった。２５μｇ／ｋｇ用量では、Ｔ－Ｃが２日、ＬＣＫが０．１１（不活性）で、退縮はなかった。Ｍ－ＤＭ２１コンジュゲートは１３０μｇ／ｋｇで高い活性であり、７０μｇ／ｋｇで活性であり、それぞれ、Ｔ／Ｃが０％及び１１％であった。１３０μｇ／ｋｇ用量では、Ｔ－Ｃが６３日を超え、ＬＣＫが３．３３を超え（高い活性）、ＰＲが６／６、ＣＲが６／６、ＴＦＳが０／６であった。５０μｇ／ｋｇ用量では、Ｔ－Ｃが２７日、ＬＣＫが１．４３（活性）、ＰＲが４／６、ＣＲが２／６、ＴＦＳが０／６であった。１００μｇ／ｋｇでのＭ－ｓ－ＳＰＤＢ－ＤＭ４コンジュゲートは高い活性であり、Ｔ／Ｃが１％、ＰＲが６／６、ＣＲが３／６であった。腫瘍体積が小さい場合の壊死のため、この群のＴ－Ｃ及びＬＣＫを決定できなかった。この研究の全ての群で、１～５％の最小限の体重減少があった。要約すると、ＫＩＨ－ＤＭ２１は、１００μｇ／ｋｇで投与した場合、親コンジュゲートＭ－ＤＭ２１及びＭ－ｓ－ＳＰＤＢ－ＤＭ４よりも顕著に高い活性であった。３つのコンジュゲートは全て１００μｇ／ｋｇで高い活性であったが、応答の持続時間は、親抗体コンジュゲートよりもＫＩＨバイパラトピックＡＤＣの方がはるかに長かった。
ＩＧＲＯＶ－１ヒト卵巣癌異種移植片を有するＳＣＩＤマウスにおけるＫＩＨバイパラトピックＡＤＣのインビボ抗腫瘍活性
中程度のＦＲα発現（Ｈスコア１４０）を有するＩＧＲＯＶ－１異種移植モデルで、ＤＭ２１にコンジュゲートしたＫＩＨバイパラトピック抗体のインビボ有効性を評価した。マウスは腫瘍体積によって群に無作為化され（群あたりｎ＝８）、その後接種後１０日目に投与された。これらの群には、製剤緩衝液を投与した対照群、１００及び５０μｇ／ｋｇのＫＩＨ－ＤＭ２１、１３０及び７０μｇ／ｋｇのＭ－ＤＭ２１、ならびに１００及び５０μｇ／ｋｇのＭ－ｓ－ＳＰＤＢ－ＤＭ４が含まれていた。全てのマウスに、上述の化合物を単回静脈内投与した。接種後１２０日目に研究を終了した。腫瘍の測定及び計算は、実施例４のサブセクション「ＯＶ－９０ヒト卵巣癌異種移植片を有するＳＣＩＤマウスにおける４価バイパラトピックＡＤＣのインビボ抗腫瘍活性」に記載されているように決定された。
研究の結果を図１６及び表２０に示す。ＫＩＨ－ＤＭ２１コンジュゲートは１００と５０μｇ／ｋｇの両方で活性であり、それぞれＴ／Ｃが１９％及び１２％であった。１００μｇ／ｋｇ用量では、Ｔ－Ｃが９９日を超え、ＬＣＫが２．８７を超え（高い活性）、ＰＲが７／８、ＣＲが６／８、ＴＦＳが０／８であった。５０μｇ／ｋｇ用量では、Ｔ－Ｃが５３日、ＬＣＫが１．５３（活性）、ＰＲが５／８、ＣＲが３／８、ＴＦＳが０／８であった。Ｍ－ＤＭ２１コンジュゲートは１３０μｇ／ｋｇと７０μｇ／ｋｇの両方で活性であり、それぞれＴ／Ｃが１３％及び１６％であった。１３０μｇ／ｋｇ用量では、Ｔ－Ｃが９９日を超え、ＬＣＫが２．８７を超え（高い活性）、ＰＲが８／８、ＣＲが７／８、ＴＦＳが２／８であった。７０μｇ／ｋｇ用量では、Ｔ－Ｃが３６日、ＬＣＫが１．０４（活性）、ＰＲが３／８、ＣＲが２／８、ＴＦＳが０／８であった。Ｍ－ｓ－ＳＰＤＢ－ＤＭ４コンジュゲートは１００と５０μｇ／ｋｇ用量の両方で活性であり、それぞれＴ／Ｃが１７％及び３４％であった。１００μｇ／ｋｇ用量では、Ｔ－Ｃが２３日、ＬＣＫが０．６７（不活性）、ＰＲが３／８、ＣＲが２／８、ＴＦＳが０／８であった。５０μｇ／ｋｇ用量では、Ｔ－Ｃが１７日、ＬＣＫが０．４９（不活性）で、退縮はなかった。接種後１６日目最下点での５０μｇ／ｋｇ（６％）のＭ－ＤＭ２１及び５０μｇ／ｋｇのＭ－ｓ－ＳＰＤＢ－ＤＭ４（７％）を除いて、ほとんどの群で１～５％の最小限の体重減少があった。要約すると、親のＭ－ｓ－ＳＰＤＢ－ＤＭ４コンジュゲートは、ＤＭ２１コンジュゲートよりもインビボでの有効性が低かった。さらに、ＫＩＨ－ＤＭ２１と親Ｍ－ＤＭ２１は、試験した２つの用量で同様に活性であった。
ＫＢヒト子宮頸癌異種移植片を有するＳＣＩＤマウスにおけるＫＩＨバイパラトピックＡＤＣのインビボ抗腫瘍活性
高いＦＲα発現（Ｈスコア３００）を有するＫＢ異種移植モデルで、ＤＭ２１にコンジュゲートしたＫＩＨバイパラトピック抗体のインビボ有効性を評価した。腫瘍が約１００ｍｍ３に到達したとき、マウスは腫瘍体積によって群に無作為化され（群あたりｎ＝６）、その後接種後６日目に投与された。これらの群には、製剤緩衝液を投与した対照群、５０及び２５μｇ／ｋｇのＫＩＨ－ＤＭ２１、５０及び２５μｇ／ｋｇのＭ－ＤＭ２１、ならびに５０及び２５μｇ／ｋｇのＭ－ｓ－ＳＰＤＢ－ＤＭ４が含まれていた。全てのマウスに、上述の化合物を単回静脈内投与した。接種後１２０日目に研究を終了した。腫瘍の測定及び計算は、実施例４のサブセクション「ＯＶ－９０ヒト卵巣癌異種移植片を有するＳＣＩＤマウスにおける４価バイパラトピックＡＤＣのインビボ抗腫瘍活性」に記載されているように決定された。
研究の結果を図１７及び表２１に示す。ＫＩＨ－ＤＭ２１コンジュゲートは５０と２５μｇ／ｋｇの両方で高い活性であり、両方の用量で、Ｔ／Ｃが０％、Ｔ－Ｃが１００日を超え、ＬＣＫが６．４１を超えた（高い活性）。１００μｇ／ｋｇ用量では、ＰＲが６／６、ＣＲが６／６、ＴＦＳが６／６であったが、２５μｇ／ｋｇ用量では、ＰＲが６／６、ＣＲが５／６、ＴＦＳが５／６であった。Ｍ－ＤＭ２１コンジュゲートは５０と２５μｇ／ｋｇの両方で高い活性であり、それぞれＴ／Ｃが０％及び２％であった。両方の用量では、Ｔ－Ｃが１００日を超え、ＬＣＫが６．４１を超えた（高い活性）。５０μｇ／ｋｇ用量では、ＰＲが６／６、ＣＲが６／６、ＴＦＳが６／６であったが、２５μｇ／ｋｇ用量では、ＰＲが５／６、ＣＲが４／６、ＴＦＳが４／６であった。Ｍ－ｓ－ＳＰＤＢ－ＤＭ４コンジュゲートは５０と２５μｇ／ｋｇの両方で高い活性であり、それぞれＴ／Ｃが０％及び８％であった。５０μｇ／ｋｇ用量では、Ｔ－Ｃが１００日を超え、ＬＣＫが６．４１を超え（高い活性）、ＰＲが６／６、ＣＲが６／６、ＴＦＳが５／６であった。２５μｇ／ｋｇ用量では、Ｔ－Ｃが２４日、ＬＣＫが１．５４（活性）、ＰＲが３／６、ＣＲが１／６、ＴＦＳが１／６であった。Ｍ－ＤＭ２１及びＭ－ｓ－ＳＰＤＢ－ＤＭ４群では、接種後８日目の最下点で２～４％の最小限の体重減少が見られた。要約すると、２５μｇ／ｋｇでのＭ－ｓ－ＳＰＤＢ－ＤＭ４の応答は一過性であり、一方、５０μｇ／ｋｇでＭ－ｓ－ＳＰＤＢ－ＤＭ４を投与すると、ほとんどのマウスで長期にわたる完全な退縮をもたらした。２５μｇ／ｋｇと５０μｇ／ｋｇ用量の両方のＭ－ＤＭ２１とＫＩＨ－ＤＭ２１の投与は、ほとんどのマウスで長期にわたる完全な退縮をもたらした。
まとめると、ここで説明するインビボ有効性研究は、ＫＩＨ－ＤＭ２１が試験されたほとんどの異種移植モデルで最も活性の高いコンジュゲートであり、Ｍ－ＤＭ２１とＭ－ｓ－ＳＰＤＢ－ＤＭ４がそれに続くことを示している。
ＩＭＧＮ８５３抵抗性ＫＢヒト子宮頸癌異種移植片を有するＳＣＩＤマウスにおけるＫＩＨバイパラトピックＡＤＣのインビボ抗腫瘍活性
ＤＭ２１にコンジュゲートしたＫＩＨバイパラトピック抗体のインビボ有効性はＩＭＧＮ８５３抵抗性ＫＢ異種移植モデルで評価した。親ＫＢ細胞は１ｎＭのＤＭ１－Ｍｅの存在下で増殖させた。安定して増殖した培養物が確立された後、細胞をサブクローン化し、クローンを増殖させ、特徴評価して、凍結させた。この研究のためにサブクローン６Ａを選択し、マウスに皮下接種した。腫瘍が約１００ｍｍ３に到達したとき、マウスは腫瘍体積によって群に無作為化され（群あたりｎ＝６）、その後接種後５日目に投与された。これらの群には、製剤緩衝液を投与した対照群、４０及び２０μｇ／ｋｇのＫＩＨ－Ｌ－ＤＭ２１、４０及び２０μｇ／ｋｇのＭ－Ｌ－ＤＭ２１、ならびに４０及び２０μｇ／ｋｇのＭ－ｓ－ＳＰＤＢ－ＤＭ４が含まれていた。全てのマウスに、上述の化合物を単回静脈内投与した。接種後７８日目に研究を終了した。腫瘍の測定及び計算は、上述のＯＶ－９０ヒト卵巣癌異種移植片実験に記載されているように決定された。
研究の結果を図１９及び表２２に示す。ＫＩＨ－Ｌ－ＤＭ２１コンジュゲートは４０と２０μｇ／ｋｇの両方で高い活性であり、Ｔ／Ｃが０％であった。４０μｇ／ｋｇ用量群では、Ｔ－Ｃが６０日を超え、ＬＣＫが３．４１を超え（高い活性）、ＰＲが６／６、ＣＲが６／６、ＴＦＳが６／６であった。２０μｇ／ｋｇ投与群では、Ｔ－Ｃが４６日、ＬＣＫが２．６１（活性）、ＰＲが６／６、ＣＲが４／６、ＴＦＳが１／６であった。Ｍ－Ｌ－ＤＭ２１コンジュゲートは４０μｇ／ｋｇと２０μｇ／ｋｇの両方で高い活性であり、それぞれＴ／Ｃが０％及び２％であった。４０μｇ／ｋｇ用量群では、Ｔ－Ｃが６０日を超え、ＬＣＫが３．４１を超え（高い活性）、ＰＲが６／６、ＣＲが６／６、ＴＦＳが６／６であった。２０μｇ／ｋｇ用量群では、Ｔ－Ｃが２８日、ＬＣＫが１．５９（活性）、ＰＲが５／６、ＣＲが２／６、ＴＦＳが２／６であった。Ｍ－ｓ－ＳＰＤＢ－ＤＭ４コンジュゲートは４０μｇ／ｋｇで高い活性であるが２０μｇ／ｋｇで不活性であり、それぞれＴ／Ｃが０％及び６３％であった。４０μｇ／ｋｇ用量では、Ｔ－Ｃが４１日、ＬＣＫが２．３３（活性）、ＰＲが６／６、ＣＲが６／６、ＴＦＳが０／６であった。２０
μｇ／ｋｇ用量では、Ｔ－Ｃが６日、ＬＣＫが０．３４（不活性）、ＰＲが０／６、ＣＲが０／６、ＴＦＳが０／６であった。ＫＩＨ－Ｌ－ＤＭ２１の２０μｇ／ｋｇ群では、接種後８日目の最下点で３％の最小限の体重減少が見られた。要約すると、このモデルではＫＩＨ－Ｌ－ＤＭ２１はＭ－Ｌ－ＤＭ２１と同等の効果があり、ＫＩＨ－Ｌ－ＤＭ２１とＭ－Ｌ－ＤＭ２１の両方がＭ－ｓ－ＳＰＤＢ－ＤＭ４よりも効果的であった。
実施例７．バイパラトピックイムノコンジュゲートの薬物動態と忍容性
バイパラトピックなＦＲα標的化イムノコンジュゲートの毒性及び毒物動態プロファイルを、単回投与後のカニクイザルで評価した。簡潔に述べると、ＫＩＨ－ＤＭ２１は、用量レベルあたり２頭のオスのサルに対し、１０または１３ｍｇ／ｋｇの用量レベルで１０分間のゆっくりとしたボーラス注入として投与された。動物は投与後２８日まで観察され、影響の回復、持続、または進行を評価した。体重、臨床観察、及び食物消費を評価し、臨床病理学パラメーター（血液学、血清化学、及び凝固）及び毒物動態パラメーターのために血液試料を収集した。
全ての動物は研究の終わりまで生き残った。体重、血液学、または血清化学パラメーターに対するＫＩＨ－ＤＭ２１関連の影響はなかった。単回の１０Ａｂ ｍｇ／ｋｇ群動物で見られたＫＩＨ－ＤＭ２１関連の臨床観察は、８日目と１２日目の後肢の発赤であったが、非投与期間の残りの期間は臨床所見は認められなかった。ＫＩＨ Ｌ ＤＭ２１に関連するより高いフィブリノーゲン値は、両方の用量群で４日目と８日目で見られ。値は、非投与期間の終わり（２９日目）までの前処理値と同様であった。
ＫＩＨ－ＤＭ２１ ＡＤＣは、サルへの単回静脈内投与後の二相性薬物動態を示す。ＡＤＣの平均終末相ｔ１／２は１０ｍｇ／ｋｇ用量で１５６時間であった。総抗体（ＴＡｂ）の平均ｔ１／２は、ＡＤＣで観察されたものよりも長かった（１０ｍｇ／ｋｇ用量で１８４時間）。ＡＤＣとＴＡｂの濃度時間プロファイルの比較は、ＫＩＨ－ＤＭ２１イムノコンジュゲートが１０ｍｇ／ｋｇ用量でＩＭＧＮ８５３よりも安定していることを示した。ＫＩＨ－ＤＭ２１は、１０ｍｇ／ｋｇ用量でのＩＭＧＮ８５３よりも長い終末相半減期と大きな曝露測定基準（ＡＵＣ∞値）を有する。
図１８Ａ及び１８Ｂに示されるように、ＦＲαバイパラトピックイムノコンジュゲートとＩＭＧＮ８５３は、両方とも１０ｍｇ／ｋｇで十分に許容され、バイパラトピックイムノコンジュゲートは、１３ｍｇ／ｋｇで同様によく許容された。さらに、表２３に示すように、ＦＲαバイパラトピックイムノコンジュゲートは１０ｍｇ／ｋｇ用量でＩＭＧＮ８５３よりも安定していた。特に、バイパラトピックイムノコンジュゲートは、ＩＭＧＮ８５３よりも約６０時間長い終末半減期と、ＩＭＧＮ８５３よりも約４０％高い総曝露量を示した。
特定の実施形態では、例えば以下の項目が提供される。
（項目１）
ヒト葉酸受容体１（ＦＲα）に特異的に結合するバイパラトピック抗体またはその抗原結合断片であって、前記抗体またはその抗原結合断片は、
（ａ）ＦＲαの第１のエピトープに結合する第１の可変重鎖（ＶＨ）及び第１の可変軽鎖（ＶＬ）を含む第１のＦＲα結合ドメインと、
（ｂ）ＦＲαの第２のエピトープに結合する第２のＶＨ及び第２のＶＬを含む第２のＦＲα結合ドメインと、を含む、前記バイパラトピック抗体またはその抗原結合断片。
（項目２）
前記第１のＦＲα結合ドメインが、配列番号２４、２５、２６、及び５７からなる群から選択されるＶＨアミノ酸配列と、配列番号１９、２０、及び２１からなる群から選択されるＶＬアミノ酸配列と、を含む抗体と同じＦＲαエピトープに特異的に結合する、項目
１に記載のバイパラトピック抗体またはその抗原結合断片。
（項目３）
前記第１のＦＲα結合ドメインが、配列番号２４、２５、２６、及び５７からなる群から選択されるＶＨアミノ酸配列と、配列番号１９、２０、及び２１からなる群から選択されるＶＬアミノ酸配列と、を含む抗体と同じＦＲαのエピトープへの結合を競合的に阻害する、項目１に記載のバイパラトピック抗体またはその抗原結合断片。
（項目４）
前記第２のＦＲα結合ドメインが、配列番号２２または２３のＶＨアミノ酸配列と、配列番号１７または１８のＶＬアミノ酸配列と、を含む抗体と同じＦＲαのエピトープに特異的に結合する、項目１～３のいずれか１項に記載のバイパラトピック抗体またはその抗原結合断片。
（項目５）
前記第２のＦＲα結合ドメインが、配列番号２２または２３のＶＨアミノ酸配列と、配列番号１７または１８のＶＬアミノ酸配列と、を含む抗体と同じＦＲαのエピトープへの結合を競合的に阻害する、項目１～３のいずれか１項に記載のバイパラトピック抗体またはその抗原結合断片。
（項目６）
前記第１のＶＨが、それぞれ（ａ）配列番号１０～１２または（ｂ）配列番号１５、１６、及び１２のアミノ酸配列を含むＶＨ ＣＤＲ１～３を含み、前記第１のＶＬが、それぞれ配列番号４～６のアミノ酸配列を含むＶＬ ＣＤＲ１～３を含む、項目１～５のいずれか１項に記載のバイパラトピック抗体またはその抗原結合断片。
（項目７）
前記第１のＶＨが、配列番号２４、２５、２６、及び５７からなる群から選択されるアミノ酸配列を含み、及び／または前記第１のＶＬが、配列番号１９、２０、及び２１からなる群から選択されるアミノ酸配列を含む、項目１～６のいずれか１項に記載のバイパラトピック抗体またはその抗原結合断片。
（項目８）
前記第２のＶＨが、それぞれ（ａ）配列番号７～９または（ｂ）配列番号１３、１４、及び９のアミノ酸配列を含むＶＨ ＣＤＲ１～３を含み、前記第２のＶＬが、それぞれ配列番号１～３のアミノ酸配列を含むＶＬ ＣＤＲ１～３を含む、項目１～７のいずれか１項に記載のバイパラトピック抗体またはその抗原結合断片。
（項目９）
前記第２のＶＨが、配列番号２２もしくは２３のアミノ酸配列を含み、及び／または前記第２のＶＬが、配列番号１７もしくは１８のアミノ酸配列を含む、項目１～８のいずれか１項に記載のバイパラトピック抗体またはその抗原結合断片。
（項目１０）
前記第１のＶＨとＶＬの対、及び／または前記第２のＶＨとＶＬの対が、マウス、非ヒト、ヒト化、キメラ、表面再構成（ｒｅｓｕｒｆａｃｅｄ）、またはヒトである、項目１～９のいずれか１項に記載のバイパラトピック抗体またはその抗原結合断片。
（項目１１）
前記抗体またはその抗原結合断片が、ヒトＦＲαに結合するが、ＦＯＬＲ２またはＦＯＬＲ３に結合しない、項目１～１０のいずれか１項に記載のバイパラトピック抗体またはその抗原結合断片。
（項目１２）
前記第１のＦＲα結合ドメインが単鎖可変断片（ｓｃＦｖ）である、項目１～１１のいずれか１項に記載のバイパラトピック抗体またはその抗原結合断片。
（項目１３）
前記第１のＦＲα結合ドメインの前記ｓｃＦｖが、ＶＨ－リンカー－ＶＬのペプチドの配向を有する、項目１２に記載のバイパラトピック抗体またはその抗原結合断片。
（項目１４）
前記第１のＦＲα結合ドメインの前記ｓｃＦｖが、ＶＬ－リンカー－ＶＨのペプチドの配向を有する、項目１２に記載のバイパラトピック抗体またはその抗原結合断片。
（項目１５）
前記第２のＦＲα結合ドメインが単鎖可変断片（ｓｃＦｖ）である、項目１～１１のいずれか１項に記載のバイパラトピック抗体またはその抗原結合断片。
（項目１６）
前記第２のＦＲα結合ドメインの前記ｓｃＦｖが、ＶＨ－リンカー－ＶＬのペプチドの配向を有する、項目１５に記載のバイパラトピック抗体またはその抗原結合断片。
（項目１７）
前記第２のＦＲα結合ドメインの前記ｓｃＦｖが、ＶＬ－リンカー－ＶＨのペプチドの配向を有する、項目１５に記載のバイパラトピック抗体またはその抗原結合断片。
（項目１８）
前記リンカーがグリシン－セリンリンカーである、項目１３～１７のいずれか１項に記載のバイパラトピック抗体またはその抗原結合断片。
（項目１９）
前記第２のＦＲα結合ドメインが、配列番号２７～２９から選択されるアミノ酸配列を含む、項目１～１８のいずれか１項に記載のバイパラトピック抗体またはその抗原結合断片。
（項目２０）
前記第１のＦＲα結合ドメインが、配列番号３０～３２から選択されるアミノ酸配列を含む、項目１～１８のいずれか１項に記載のバイパラトピック抗体またはその抗原結合断片。
（項目２１）
（ｉ）配列番号３３及び３４、（ｉｉ）配列番号３５及び３６、（ｉｉｉ）配列番号３７及び３８、または（ｉｖ）配列番号３９及び４０のアミノ酸配列を含む、項目１～２０のいずれか１項に記載のバイパラトピック抗体またはその抗原結合断片。
（項目２２）
配列番号４１～４３のアミノ酸配列を含む、項目１～２０のいずれか１項に記載のバイパラトピック抗体またはその抗原結合断片。
（項目２３）
配列番号４４～４６のアミノ酸配列を含む、項目１～２０のいずれか１項に記載のバイパラトピック抗体またはその抗原結合断片。
（項目２４）
前記バイパラトピック抗体またはその抗原結合断片が、４価のバイパラトピック抗体またはその抗原結合断片である、項目１～２３のいずれか１項に記載のバイパラトピック抗体またはその抗原結合断片。
（項目２５）
前記バイパラトピック抗体またはその抗原結合断片が、２価のバイパラトピック抗体またはその抗原結合断片である、項目１～２３のいずれか１項に記載のバイパラトピック抗体またはその抗原結合断片。
（項目２６）
前記二重特異性抗体またはその抗原結合断片が、タンデムｓｃＦｖ、ダイアボディ、トリアボディ、テトラボディ、及びノブインホール構造からなる群から選択されるＦＲα結合ドメインを含む、項目１～２５のいずれか１項に記載のバイパラトピック抗体またはその抗原結合断片。
（項目２７）
ノブインホール（ＫＩＨ）構造を有する、項目１～２０及び２２～２６のいずれか１項に記載のバイパラトピック抗体またはその抗原結合断片。
（項目２８）
配列番号１～３及び７～９を含む前記ＦＲα結合ドメインが、前記ＫＩＨ構造のノブ側
にある、項目２７に記載のバイパラトピック抗体またはその抗原結合断片。
（項目２９）
配列番号１～３及び７～９を含む前記ＦＲα結合ドメインが、前記ＫＩＨ構造のホール側にある、項目２７に記載のバイパラトピック抗体またはその抗原結合断片。
（項目３０）
配列番号４～６及び１０～１２を含む前記ＦＲα結合ドメインが、前記ＫＩＨ構造のノブ側にある、項目２７～２９のいずれか１項に記載のバイパラトピック抗体またはその抗原結合断片。
（項目３１）
配列番号４～６及び１０～１２を含む前記ＦＲα結合ドメインが、前記ＫＩＨ構造のホール側にある、項目２７～２９のいずれか１項に記載のバイパラトピック抗体またはその抗原結合断片。
（項目３２）
全長抗体を含む、項目１～３１のいずれか１項に記載のバイパラトピック抗体またはその抗原結合断片。
（項目３３）
前記第１のＦＲα結合ドメインが全長抗体である、項目１～３２のいずれか１項に記載のバイパラトピック抗体またはその抗原結合断片。
（項目３４）
前記第２のＦＲα結合ドメインが全長抗体である、項目１～３３のいずれか１項に記載のバイパラトピック抗体またはその抗原結合断片。
（項目３５）
抗原結合断片を含む、項目１～３１のいずれか１項に記載のバイパラトピック抗体またはその抗原結合断片。
（項目３６）
前記第１のＦＲα結合ドメインが抗原結合断片である、項目１～３５のいずれか１項に記載のバイパラトピック抗体またはその抗原結合断片。
（項目３７）
前記第２のＦＲα結合ドメインが抗原結合断片である、項目１～３６のいずれか１項に記載のバイパラトピック抗体またはその抗原結合断片。
（項目３８）
配列番号４１～４３のアミノ酸配列を含む、バイパラトピック抗体またはその抗原結合断片。
（項目３９）
項目１～３８に記載のバイパラトピック抗体またはその抗原結合断片をコードする単離された核酸分子の組み合わせ。
（項目４０）
項目３９に記載の核酸分子のうちの１つを含む、単離されたベクター。
（項目４１）
項目３９に記載の単離された核酸分子、または項目４０に記載の単離されたベクターの組み合わせを含む宿主細胞。
（項目４２）
Ｅ．ｃｏｌｉ、Ｐｓｅｕｄｏｍｏｎａｓ、Ｂａｃｉｌｌｕｓ、Ｓｔｒｅｐｔｏｍｙｃｅｓ、酵母、ＣＨＯ、ＹＢ／２０、ＮＳ０、ＰＥＲ－Ｃ６、ＨＥＫ－２９３Ｔ、ＮＩＨ－３Ｔ３、ＨｅＬａ、ＢＨＫ、Ｈｅｐ Ｇ２、ＳＰ２／０、Ｒ１．１、Ｂ－Ｗ、Ｌ－Ｍ、ＣＯＳ １、ＣＯＳ ７、ＢＳＣ１、ＢＳＣ４０、ＢＭＴ１０細胞、植物細胞、昆虫細胞、及び組織培養におけるヒト細胞からなる群から選択される、項目４１に記載の宿主細胞。
（項目４３）
項目１～３８のいずれか１項に記載のバイパラトピック抗体または抗原、項目３９に記載の核酸分子、項目４０に記載のベクター、または項目４１もしくは４２に記載の宿主細
胞の組み合わせと、薬学的に許容される担体または賦形剤と、を含む、医薬組成物。
（項目４４）
項目１～３８のいずれか１項に記載のバイパラトピック抗体と、薬学的担体または賦形剤を含む、医薬組成物。
（項目４５）
項目１～２３のいずれか１項に記載のバイパラトピック抗体を作製する方法であって、（ａ）前記抗体を発現する細胞を培養することと、（ｂ）前記培養された細胞から前記抗体を単離することと、を含む、前記方法。
（項目４６）
前記細胞が真核細胞である、項目４５に記載の方法。
（項目４７）
以下の式：
またはその薬学的に許容される塩で表されるイムノコンジュゲートであって、式中：
ＣＢは、項目１～３８のいずれか１項に記載のバイパラトピック抗体またはその抗原結合断片であり；
Ｌ２は、以下の式のうちの１つによって表され：
式中：
Ｒｘ、Ｒｙ、Ｒｘ’、及びＲｙ’は、それぞれの存在について、独立してＨ、－ＯＨ、ハロゲン、－Ｏ－（Ｃ１－４アルキル）、－ＳＯ３Ｈ、－ＮＲ４０Ｒ４１Ｒ４２ ＋、または任意選択で－ＯＨ、ハロゲン、ＳＯ３Ｈ、もしくはＮＲ４０Ｒ４１Ｒ４２ ＋によって置換されたＣ１－４アルキルであり、ここで、Ｒ４０、Ｒ４１、及びＲ４２は、それぞれ独立してＨまたはＣ１－４アルキルであり；
ｌ及びｋは、それぞれ独立して、１～１０の整数であり；
ｌ１は、２～５の整数であり；
ｋ１は、１～５の整数であり；
ｓ１は細胞結合剤ＣＢに接続された部位を示し、ｓ３はＡ基に接続された部位を示し；
Ａが、アミノ酸残基または２～２０個のアミノ酸残基を含むペプチドであり；
Ｒ１及びＲ２が、それぞれ独立して、ＨまたはＣ１－３アルキルであり；
Ｌ１が、以下の式によって表され：
－ＣＲ３Ｒ４－（ＣＨ２）１－８－Ｃ（＝Ｏ）－
式中、Ｒ３及びＲ４が、それぞれ独立してＨまたはＭｅであり、Ｌ１の－Ｃ（＝Ｏ）－部分は、Ｄに接続されており；
Ｄが以下の式で表され：
ｑが、１～２０の整数である、前記イムノコンジュゲート。
（項目４８）
Ｒｘ、Ｒｙ、Ｒｘ’、及びＲｙ’の全てがＨであり、ｌ及びＫが、それぞれ独立して、２～６の整数整数である、項目４７に記載のイムノコンジュゲート。
（項目４９）
Ａが２～５個のアミノ酸残基を含むペプチドである、項目４７または４８に記載のイムノコンジュゲート。
（項目５０）
Ａが、Ｇｌｙ－Ｇｌｙ－Ｇｌｙ、Ａｌａ－Ｖａｌ、Ｖａｌ－Ａｌａ、Ｄ－Ｖａｌ－Ａｌａ、Ｖａｌ－Ｃｉｔ、Ｄ－Ｖａｌ－Ｃｉｔ、Ｖａｌ－Ｌｙｓ、Ｐｈｅ－Ｌｙｓ、Ｌｙｓ－Ｌｙｓ、Ａｌａ－Ｌｙｓ、Ｐｈｅ－Ｃｉｔ、Ｌｅｕ－Ｃｉｔ、Ｉｌｅ－Ｃｉｔ、Ｐｈｅ－Ａｌａ、Ｐｈｅ－Ｎ９－トシル－Ａｒｇ、Ｐｈｅ－Ｎ９－ニトロ－Ａｒｇ、Ｐｈｅ－Ｐｈｅ－Ｌｙｓ、Ｄ－Ｐｈｅ－Ｐｈｅ－Ｌｙｓ、Ｇｌｙ－Ｐｈｅ－Ｌｙｓ、Ｌｅｕ－Ａｌａ－Ｌｅｕ、Ｉｌｅ－Ａｌａ－Ｌｅｕ、Ｖａｌ－Ａｌａ－Ｖａｌ、Ａｌａ－Ａｌａ－Ａｌａ、Ｄ－Ａｌａ－Ａｌａ－Ａｌａ、Ａｌａ－Ｄ－Ａｌａ－Ａｌａ、Ａｌａ－Ａｌａ－Ｄ－Ａｌａ、Ａｌａ－Ｌｅｕ－Ａｌａ－Ｌｅｕ（配列番号５４）、β－Ａｌａ－Ｌｅｕ－Ａｌａ－Ｌｅｕ（配列番号５５）、Ｇｌｙ－Ｐｈｅ－Ｌｅｕ－Ｇｌｙ（配列番号５６）、Ｖａｌ－Ａｒｇ、Ａｒｇ－Ａｒｇ、Ｖａｌ－Ｄ－Ｃｉｔ、Ｖａｌ－Ｄ－Ｌｙｓ、Ｖａｌ－Ｄ－Ａｒｇ、Ｄ－Ｖａｌ－Ｃｉｔ、Ｄ－Ｖａｌ－Ｌｙｓ、Ｄ－Ｖａｌ－Ａｒｇ、Ｄ－Ｖａｌ－Ｄ－Ｃｉｔ、Ｄ－Ｖａｌ－Ｄ－Ｌｙｓ、Ｄ－Ｖａｌ－Ｄ－Ａｒｇ、Ｄ－Ａｒｇ－Ｄ－Ａｒｇ、Ａｌａ－Ａｌａ、Ａｌａ－Ｄ－Ａｌａ、Ｄ－Ａｌａ－Ａｌａ、Ｄ－Ａｌａ－Ｄ－Ａｌａ、Ａｌａ－Ｍｅｔ、Ｇｌｎ－Ｖａｌ、Ａｓｎ－Ａｌａ、Ｇｌｎ－Ｐｈｅ、Ｇｌｎ－Ａｌａ、Ｄ－Ａｌａ－Ｐｒｏ、及びＤ－Ａｌａ－ｔＢｕ－Ｇｌｙからなる群から選択され、それぞれのペプチドの最初のアミノ酸がＬ２基に接続され、それぞれのペプチドの最後のアミノ酸が－ＮＨ－ＣＲ１Ｒ２－Ｓ－Ｌ１－Ｄに接続されている、項目４９に記載のイムノコンジュゲート。
（項目５１）
Ｒ１とＲ２が両方ともＨである、項目４７～５０のいずれか１項に記載のイムノコンジュゲート。
（項目５２）
Ｌ１が－（ＣＨ２）４－６－Ｃ（＝Ｏ）－である、項目４７～５１のいずれか１項に記載のイムノコンジュゲート。
（項目５３）
Ｄが以下の式で表される、項目４７～５２のいずれか１項に記載のイムノコンジュゲート：
（項目５４）
前記イムノコンジュゲートが以下の式：
またはその薬学的に許容される塩で表され、式中：
が、Ｌｙｓのアミン基を介してＬ２基に接続される、項目１～３８のいずれか１項に記載のバイパラトピック抗体またはその抗原結合断片であり；
が、Ｃｙｓのチオール基を介してＬ２基に接続される、項目１～３８のいずれか１項に記載のバイパラトピック抗体またはその抗原結合断片であり；
Ｒ３及びＲ４が、それぞれ独立してＨまたはＭｅであり；
ｍ１、ｍ３、ｎ１、ｒ１、ｓ１、及びｔ１が、それぞれ独立して１～６の整数であり；
ｍ２、ｎ２、ｒ２、ｓ２、及びｔ２が、それぞれ独立して、１～７の整数であり；
ｔ３が、１～１２の整数であり；
Ｄ１が以下の式で表される項目４７～５３のいずれか１項に記載のイムノコンジュゲート：
（項目５５）
前記イムノコンジュゲートが以下の式で表され：
式中：
ｍ１及びｍ３が、それぞれ独立して、２～４の整数であり；
ｍ２が、２～５の整数であり；
ｒ１が、２～６の整数であり；
ｒ２が、２～５の整数である、項目５４に記載のイムノコンジュゲート。
（項目５６）
Ａが、Ａｌａ－Ａｌａ－Ａｌａ、Ａｌａ－Ｄ－Ａｌａ－Ａｌａ、Ａｌａ－Ａｌａ、Ｄ－
Ａｌａ－Ａｌａ、Ｖａｌ－Ａｌａ、Ｄ－Ｖａｌ－Ａｌａ、Ｄ－Ａｌａ－Ｐｒｏ、またはＤ－Ａｌａ－ｔＢｕ－Ｇｌｙである、項目５４または５５に記載のイムノコンジュゲート。（項目５７）
前記イムノコンジュゲートが以下の式：
またはその薬学的に許容される塩で表され、式中：
Ａが、Ａｌａ－Ａｌａ－Ａｌａ、Ａｌａ－Ｄ－Ａｌａ－Ａｌａ、Ａｌａ－Ａｌａ、Ｄ－Ａｌａ－Ａｌａ、Ｖａｌ－Ａｌａ、Ｄ－Ｖａｌ－Ａｌａ、Ｄ－Ａｌａ－Ｐｒｏ、またはＤ－Ａｌａ－ｔＢｕ－Ｇｌｙであり；
Ｄ１が以下の式で表される項目５４に記載のイムノコンジュゲート：
（項目５８）
前記イムノコンジュゲートが以下の式で表され：
式中、Ｄ１が以下の式で表される項目５７に記載のイムノコンジュゲート：
（項目５９）
前記イムノコンジュゲートが以下の式で表され：
式中：
ＣＢＡが、項目１～３８のいずれか１項に記載のバイパラトピック抗体またはその抗原結合断片であり；
ｑが、１～１０の整数であり；
Ｄ１が以下の式で表される項目４７に記載のイムノコンジュゲート：
（項目６０）
以下の式：
またはその薬学的に許容される塩で表されるイムノコンジュゲートであって、式中：
ＣＢＡが、配列番号４１～４３のアミノ酸配列を含むバイパラトピック抗体または抗原結合断片であり；
Ｄ１が、以下の式で表され：
及び
ｑが、１～１０の整数である、前記イムノコンジュゲート。
（項目６１）
式（Ａ）－（Ｌ）－（Ｃ）を有するイムノコンジュゲートであって、式中、
（Ａ）が項目１～３８のいずれか１項に記載のバイパラトピック抗体またはその抗原結合断片であり；
（Ｌ）が、リンカーであり；
（Ｃ）が細胞傷害性薬剤であり、前記リンカー（Ｌ）が（Ａ）を（Ｃ）に連結する、前記イムノコンジュゲート。
（項目６２）
前記リンカーが、切断可能なリンカー、切断不可能なリンカー、親水性リンカー、及びジカルボン酸ベースのリンカーからなる群から選択される、項目６１に記載のイムノコンジュゲート。
（項目６３）
前記リンカーが、Ｎ－（γマレイミドブトリルオキシ）スルホスクシンイミドエステル（スルホ－ＧＭＢＳまたはｓＧＭＢＳ）、γマレイミド酪酸Ｎ－スクシンイミジルエステル（ＧＭＢＳ）、Ｎ－スクシンイミジル４－（２－ピリジルジチオ）－２－スルホブタノエート（スルホ－ＳＰＤＢ）；Ｎ－スクシンイミジル４－（２－ピリジルジチオ）ペンタノエート（ＳＰＰ）またはＮ－スクシンイミジル４－（２－ピリジルジチオ）－２－スルホペンタノエート（スルホ－ＳＰＰ）；Ｎ－スクシンイミジル４－（２－ピリジルジチオ）ブタノエート（ＳＰＤＢ）、Ｎ－スクシンイミジル４－（マレイミドメチル）シクロヘ
キサンカルボキシレート（ＳＭＣＣ）；Ｎ－スルホスクシンイミジル４－（マレイミドメチル）シクロヘキサンカルボキシレート（スルホＳＭＣＣ）；Ｎ－スクシンイミジル－４－（ヨードアセチル）－アミノ安息香酸（ＳＩＡＢ）；及びＮ－スクシンイミジル－［（Ｎ－マレイミドプロピオンアミド）－テトラエチレングリコール］エステル（ＮＨＳ－ＰＥＧ４－マレイミド）からなる群から選択される、項目６２に記載のイムノコンジュゲート。
（項目６４）
前記リンカーが、スルホ－ＧＭＢＳである、項目６１～６３のいずれか１項に記載のイムノコンジュゲート。
（項目６５）
前記リンカーが、ＧＭＢＳである、項目６１～６３のいずれか１項に記載のイムノコンジュゲート。
（項目６６）
前記リンカーが、スルホ－ＳＰＤＢである、項目６１～６３のいずれか１項に記載のイムノコンジュゲート。
（項目６７）
前記細胞傷害性薬剤が、マイタンシノイド、マイタンシノイド類似体、ベンゾジアゼピン、タキソイド、ＣＣ－１０６５、ＣＣ－１０６５類似体、デュオカルマイシン、デュオカルマイシン類似体、カリチアマイシン、ドラスタチン、ドラスタチン類似体、アウリスタチン、トメイマイシン誘導体、及びレプトマイシン誘導体または薬剤のプロドラッグからなる群から選択される、項目６１～６６のいずれか１項に記載のイムノコンジュゲート。
（項目６８）
前記細胞傷害性薬剤がマイタンシノイドである、項目６１～６７のいずれか１項に記載のイムノコンジュゲート。
（項目６９）
前記マイタンシノイドがＤＭ４である、項目６８に記載のイムノコンジュゲート。
（項目７０）
前記マイタンシノイドがＤＭ２１である、項目６８に記載のイムノコンジュゲート。
（項目７１）
第２の（Ｃ）をさらに含む、項目６１～７０のいずれか１項に記載のイムノコンジュゲート。
（項目７２）
第３の（Ｃ）をさらに含む、項目７１に記載のイムノコンジュゲート。
（項目７３）
第４の（Ｃ）をさらに含む、項目７２に記載のイムノコンジュゲート。
（項目７４）
項目６１～７３のいずれか１項に記載の少なくとも１つのイムノコンジュゲートを含む組成物であって、前記イムノコンジュゲートが、Ａあたり平均３～４個のＣを含む前記組成物。
（項目７５）
項目４７～７４のいずれか１項に記載のイムノコンジュゲートと、薬学的に許容される担体と、を含む、医薬組成物。
（項目７６）
前記医薬組成物が、抗体またはその抗原結合断片あたり平均２～５の薬物を含む、項目７５に記載の医薬組成物。
（項目７７）
前記医薬組成物が、抗体またはその抗原結合断片あたり平均３～４の薬物を含む、項目７５に記載の医薬組成物。
（項目７８）
対象におけるがんを治療する方法であって、治療有効量の項目１～３８のいずれか１項に記載の抗体もしくはその抗原結合断片、項目４７～７３のいずれか１項に記載のイムノコンジュゲート、または項目４３、４４、もしくは７４～７７に記載の組成物を、前記対象に投与することを含む、前記方法。
（項目７９）
前記がんが、卵巣癌、子宮癌、腹膜癌、卵管癌、子宮内膜癌、肺癌、または脳癌である、項目７８に記載の方法。
（項目８０）
前記がんが卵巣癌である、項目７８に記載の方法。
（項目８１）
前記卵巣癌が、プラチナ抵抗性上皮卵巣癌である、項目８０に記載の方法。
（項目８２）
前記卵巣癌が、再発した上皮卵巣癌である、項目８０に記載の方法。
（項目８３）
前記卵巣癌が、プラチナ不応性上皮卵巣癌である、項目８０に記載の方法。
（項目８４）
前記がんが子宮癌である、項目７８に記載の方法。
（項目８５）
前記がんが腹膜癌である、項目７８に記載の方法。
（項目８６）
前記がんが卵管癌である、項目７８に記載の方法。
（項目８７）
前記がんが子宮内膜癌である、項目７８に記載の方法。
（項目８８）
前記がんが肺癌である、項目７８に記載の方法。
（項目８９）
前記がんが脳癌である、項目７８に記載の方法。
（項目９０）
前記がんがＩＭＧＮ８５３抵抗性である、項目７８～８９のいずれか１項に記載の方法。
（項目９１）
ステロイドの投与をさらに含む、項目７８～９０のいずれか１項に記載の方法。

Claims (30)

  1. がんの治療における使用のためのイムノコンジュゲートを含む医薬組成物であって、前記イムノコンジュゲートは、ヒト葉酸受容体１（ＦＲα）に特異的に結合するバイパラトピック抗体またはその抗原結合断片及び細胞傷害性薬剤を含み、かつ以下の式で示され：
    式中：
    ＣＢＡが、前記バイパラトピック抗体またはその抗原結合断片であり；
    ｑが、１～１０の整数であり；及び
    Ｄ１が以下の式：
    で示され、
    前記バイパラトピック抗体またはその抗原結合断片が、
    （ａ）配列番号２４の第１の可変重鎖（ＶＨ）及び配列番号１９の第１の可変軽鎖（ＶＬ）を含む第１のＦＲα結合ドメイン；並びに
    （ｂ）配列番号２３の第２のＶＨ及び配列番号１８の第２のＶＬを含む第２のＦＲα結合ドメインを含み、並びに
    前記医薬組成物は、前記バイパラトピック抗体又はその抗原結合断片あたり平均３～４個の細胞傷害性薬剤を含む、医薬組成物。
  2. 前記がんが、卵巣癌、子宮癌、腹膜癌、卵管癌、子宮内膜癌、肺癌、または脳癌であ
    る、請求項１に記載の医薬組成物。
  3. 前記がんが、プラチナ感受性である、請求項２に記載の医薬組成物。
  4. 前記がんが卵巣癌である、請求項１に記載の医薬組成物。
  5. 前記卵巣癌が、プラチナ抵抗性上皮卵巣癌である、請求項４に記載の医薬組成物。
  6. 前記卵巣癌が、再発した上皮卵巣癌である、請求項４に記載の医薬組成物。
  7. 前記卵巣癌が、プラチナ不応性上皮卵巣癌である、請求項４に記載の医薬組成物。
  8. 前記がんが子宮癌である、請求項１に記載の医薬組成物。
  9. 前記がんが腹膜癌である、詰求項１に記載の医薬組成物。
  10. 前記がんが卵管癌である、請求項１に記載の医薬組成物。
  11. 前記がんが子宮内膜癌である、請求項１に記載の医薬組成物。
  12. 前記がんが肺癌である、請求項１に記載の医薬組成物。
  13. 前記がんが脳癌である、請求項１に記載の医薬組成物。
  14. 前記がんがＩＭＧＮ８５３抵抗性である、請求項１～１３のいずれか１項に記載の医薬組成物。
  15. 前記医薬組成物がステロイドと共に投与するためのものである、請求項１～１３のいずれか１項に記載の医薬組成物。
  16. がんの治療における使用のためのイムノコンジュゲートを含む医薬組成物であって、前記イムノコンジュゲートは、ヒト葉酸受容体１（ＦＲα）に特異的に結合するバイパラトピック抗体及び細胞傷害性薬剤を含み、かつ以下の式で示され：
    式中：
    ＣＢＡが、前記バイパラトピック抗体であり；
    ｑが、１～１０の整数であり；及び
    Ｄ１が以下の式：
    で示され、
    前記バイパラトピック抗体が、配列番号４１～４３のアミノ酸配列を含み、並びに前記医薬組成物が、前記バイパラトピック抗体あたり平均３～４個の細胞傷害性薬剤を含む、医薬組成物。
  17. 前記がんが、卵巣癌、子宮癌、腹膜癌、卵管癌、子宮内膜癌、肺癌、または脳癌である、請求項１６に記載の医薬組成物。
  18. 前記がんが、プラチナ感受性である、請求項１７に記載の医薬組成物。
  19. 前記がんが卵巣癌である、請求項１６に記載の医薬組成物。
  20. 前記卵巣癌が、プラチナ抵抗性上皮卵巣癌である、請求項１９に記載の医薬組成物。
  21. 前記卵巣癌が、再発した上皮卵巣癌である、請求項１９に記載の医薬組成物。
  22. 前記卵巣癌が、プラチナ不応性上皮卵巣癌である、請求項１９に記載の医薬組成物。
  23. 前記がんが子宮癌である、請求項１６に記載の医薬組成物。
  24. 前記がんが腹膜癌である、詰求項１６に記載の医薬組成物。
  25. 前記がんが卵管癌である、請求項１６に記載の医薬組成物。
  26. 前記がんが子宮内膜癌である、請求項１６に記載の医薬組成物。
  27. 前記がんが肺癌である、請求項１６に記載の医薬組成物。
  28. 前記がんが脳癌である、請求項１６に記載の医薬組成物。
  29. 前記がんがＩＭＧＮ８５３抵抗性である、請求項１６～２８のいずれか１項に記載の医薬組成物。
  30. 前記医薬組成物がステロイドと共に投与するためのものである、請求項１６～２８のいずれか１項に記載の医薬組成物。
JP2024193434A 2019-04-29 2024-11-05 バイパラトピックＦＲ－α抗体及びイムノコンジュゲート Active JP7844591B2 (ja)

Applications Claiming Priority (6)

Application Number Priority Date Filing Date Title
US201962840297P 2019-04-29 2019-04-29
US62/840,297 2019-04-29
US201962879864P 2019-07-29 2019-07-29
US62/879,864 2019-07-29
JP2021564298A JP7585230B2 (ja) 2019-04-29 2020-04-28 バイパラトピックＦＲ－α抗体及びイムノコンジュゲート
PCT/US2020/030245 WO2020223221A1 (en) 2019-04-29 2020-04-28 Biparatopic fr-alpha antibodies and immunoconjugates

Related Parent Applications (1)

Application Number Title Priority Date Filing Date
JP2021564298A Division JP7585230B2 (ja) 2019-04-29 2020-04-28 バイパラトピックＦＲ－α抗体及びイムノコンジュゲート

Publications (3)

Publication Number Publication Date
JP2025023994A JP2025023994A (ja) 2025-02-19
JP2025023994A5 JP2025023994A5 (ja) 2025-06-12
JP7844591B2 true JP7844591B2 (ja) 2026-04-13

Family

ID=73028723

Family Applications (2)

Application Number Title Priority Date Filing Date
JP2021564298A Active JP7585230B2 (ja) 2019-04-29 2020-04-28 バイパラトピックＦＲ－α抗体及びイムノコンジュゲート
JP2024193434A Active JP7844591B2 (ja) 2019-04-29 2024-11-05 バイパラトピックＦＲ－α抗体及びイムノコンジュゲート

Family Applications Before (1)

Application Number Title Priority Date Filing Date
JP2021564298A Active JP7585230B2 (ja) 2019-04-29 2020-04-28 バイパラトピックＦＲ－α抗体及びイムノコンジュゲート

Country Status (12)

Country Link
US (4) US11396543B2 (ja)
EP (1) EP3962935A4 (ja)
JP (2) JP7585230B2 (ja)
KR (1) KR20220004687A (ja)
CN (1) CN114222756A (ja)
AU (1) AU2020265568B2 (ja)
CA (1) CA3138272A1 (ja)
IL (1) IL287451A (ja)
MA (1) MA55818A (ja)
SG (1) SG11202111109UA (ja)
TW (2) TWI872065B (ja)
WO (1) WO2020223221A1 (ja)

Families Citing this family (13)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CA2911499A1 (en) * 2013-05-14 2014-11-20 Immunogen, Inc. Anti-folr1 immunoconjugate dosing regimens
AU2014312086B2 (en) 2013-08-30 2020-03-12 Immunogen, Inc. Antibodies and assays for detection of folate receptor 1
WO2020223221A1 (en) * 2019-04-29 2020-11-05 Immunogen, Inc. Biparatopic fr-alpha antibodies and immunoconjugates
AU2022207985A1 (en) * 2021-01-13 2023-07-06 Visterra, Inc. Humanized complement 5a receptor 1 antibodies and methods of use thereof
WO2022256507A1 (en) * 2021-06-04 2022-12-08 Immunogen, Inc. Treatment of cancer in patients with soluble fr-alpha
KR20240159839A (ko) 2022-03-09 2024-11-06 아스트라제네카 아베 FRα에 대한 결합 분자
TW202409080A (zh) * 2022-07-26 2024-03-01 美商沙塔克實驗室股份有限公司 用於治療卵巢癌之組合療法
TW202448517A (zh) 2023-02-16 2024-12-16 瑞典商阿斯特捷利康公司 用治療性結合分子治療癌症的組合療法
WO2025094146A1 (en) 2023-11-02 2025-05-08 Immunogen Switzerland Gmbh Vasconstrictors for reducing ocular toxicity of antibody-maytansinoid conjugates
US12600795B2 (en) 2023-12-26 2026-04-14 Medicovestor, Inc. Oligomeric IgG for immunotherapeutics and diagnostics
WO2025252094A1 (zh) * 2024-06-05 2025-12-11 长春金赛药业有限责任公司 靶向叶酸受体α(FRα)的抗体、双特异性抗体和偶联物，及其制备和用途
US20260001950A1 (en) * 2024-07-01 2026-01-01 Medicovestor, Inc. Methods of enhancing efficacy of immunoconjugates using paired human antibodies targeted at non-overlapping b-cell epitopes on the same antigen
WO2026020031A2 (en) * 2024-07-18 2026-01-22 Novarock Biotherapeutics, Ltd. Cdh17 antibodies and uses thereof

Citations (2)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
JP2013524773A (ja) 2010-02-24 2013-06-20 イミュノジェン， インコーポレイテッド フォレート受容体１抗体及びそのイムノコンジュゲート及び使用
WO2018160539A1 (en) 2017-02-28 2018-09-07 Immunogen, Inc. Maytansinoid derivatives with self-immolative peptide linkers and conjugates thereof

Family Cites Families (19)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CA2556027C (en) 2004-02-12 2015-11-24 Morphotek, Inc. Monoclonal antibodies that specifically block biological activity of a tumor antigen
EP2172487A1 (en) 2005-04-22 2010-04-07 Morphotek Inc. Antibodies with Immune Effector Activity that Internalize in Folate Receptor Alpha-Positive Cells
EP1900752A1 (en) * 2006-09-15 2008-03-19 DOMPE' pha.r.ma s.p.a. Human anti-folate receptor alpha antibodies and antibody fragments for the radioimmunotherapy of ovarian carcinoma
AU2011323124C1 (en) 2010-11-05 2016-09-22 Eisai Inc. Folate receptor alpha as a diagnostic and prognostic marker for folate receptor alpha-expressing cancers
IL281714B2 (en) 2011-04-01 2023-11-01 Immunogen Inc Methods for increasing the effectiveness of FOLR1 cancer therapy
US20120282282A1 (en) 2011-04-04 2012-11-08 Immunogen, Inc. Methods for Decreasing Ocular Toxicity of Antibody Drug Conjugates
HUE049693T2 (hu) 2012-08-31 2020-10-28 Immunogen Inc Diagnosztikai ASSAY-k és készletek a folát receptor 1 kimutatására
CA2911499A1 (en) 2013-05-14 2014-11-20 Immunogen, Inc. Anti-folr1 immunoconjugate dosing regimens
AU2014312086B2 (en) 2013-08-30 2020-03-12 Immunogen, Inc. Antibodies and assays for detection of folate receptor 1
IL298044B2 (en) 2013-10-08 2024-11-01 Immunogen Inc Dosing regimens of anti-FOLR1 immunoconjugate
EP3153178A4 (en) 2014-06-06 2017-12-20 Kyowa Hakko Kirin Co., Ltd. Method for treating cancer patients using folr1 targeted drug and antifolate, and drug
CN106999604B (zh) 2014-09-02 2021-08-03 伊缪诺金公司 用于配制抗体药物缀合物组合物的方法
AU2016323968B2 (en) 2015-09-17 2023-07-06 Immunogen, Inc. Therapeutic combinations comprising anti-FOLR1 immunoconjugates
GB201707864D0 (en) 2017-05-16 2017-06-28 Inst Of Cancer Research: Royal Cancer Hospital Platinum-reistant cancer treatment
SG11202001348WA (en) 2017-09-05 2020-03-30 Immunogen Inc Methods for detection of folate receptor 1 in a patient sample
JP2020534332A (ja) 2017-09-22 2020-11-26 イミュノジェン， インコーポレイテッド カチオン交換クロマトグラフィーを使用した三重軽鎖抗体の分離
MA51629A (fr) 2018-01-12 2020-11-18 Immunogen Inc Procédés de production, purification et formulation de conjugués anticorps-médicaments
WO2020223221A1 (en) * 2019-04-29 2020-11-05 Immunogen, Inc. Biparatopic fr-alpha antibodies and immunoconjugates
WO2022256507A1 (en) * 2021-06-04 2022-12-08 Immunogen, Inc. Treatment of cancer in patients with soluble fr-alpha

Patent Citations (2)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
JP2013524773A (ja) 2010-02-24 2013-06-20 イミュノジェン， インコーポレイテッド フォレート受容体１抗体及びそのイムノコンジュゲート及び使用
WO2018160539A1 (en) 2017-02-28 2018-09-07 Immunogen, Inc. Maytansinoid derivatives with self-immolative peptide linkers and conjugates thereof

Also Published As

Publication number Publication date
KR20220004687A (ko) 2022-01-11
US20230085779A1 (en) 2023-03-23
AU2020265568A1 (en) 2021-11-04
EP3962935A1 (en) 2022-03-09
US11834498B2 (en) 2023-12-05
TW202100557A (zh) 2021-01-01
JP2025023994A (ja) 2025-02-19
JP7585230B2 (ja) 2024-11-18
TWI872065B (zh) 2025-02-11
US20200362029A1 (en) 2020-11-19
US20240182560A1 (en) 2024-06-06
CN114222756A (zh) 2022-03-22
SG11202111109UA (en) 2021-11-29
CA3138272A1 (en) 2020-11-05
JP2022530524A (ja) 2022-06-29
AU2020265568B2 (en) 2026-04-02
MA55818A (fr) 2022-03-16
US11396543B2 (en) 2022-07-26
WO2020223221A1 (en) 2020-11-05
TW202515623A (zh) 2025-04-16
IL287451A (en) 2021-12-01
EP3962935A4 (en) 2023-05-31
US20260061058A1 (en) 2026-03-05

Similar Documents

Publication Publication Date Title
JP7844591B2 (ja) バイパラトピックＦＲ－α抗体及びイムノコンジュゲート
JP7194762B2 (ja) 抗ｎｔｂ－ａ抗体及び関連組成物ならびに方法
TWI897855B (zh) Ｅ ｐ Ｃ Ａ Ｍ 抗體、可活化抗體及免疫偶聯物以及其用途
CN104936617B (zh) Cd33抗体及其在治疗癌症中的用途
US12357701B2 (en) Anti-HER2 biparatopic antibody-drug conjugates and methods of use
CN107735093A (zh) Cd123抗体和其结合物
CN112543770A (zh) 靶向adam9的免疫缀合物及其使用方法
JP2024518709A (ja) Ｆｏｌｒ１結合剤、そのコンジュゲートおよびこれを使用する方法
JP2024522544A (ja) 可溶性ＦＲ－α患者におけるがんの治療
US20250375530A1 (en) Ror1/egfr bi-specific antigen binding molecules
RU2832083C2 (ru) Бипаратопные fr-альфа антитела и иммуноконъюгаты
JP7721698B2 (ja) 三重特異性抗体、その調製方法および用途
HK40099999A (en) Anti-her2 biparatopic antibody-drug conjugates and methods of use
WO2026035986A1 (en) Humanized anti-cdh17 antibodies and use of the same
HK40043130B (en) Anti-her2 biparatopic antibody-drug conjugates and methods of use
HK40043130A (en) Anti-her2 biparatopic antibody-drug conjugates and methods of use

Legal Events

Date Code Title Description
A521 Request for written amendment filed

Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A523

Effective date: 20241204

A621 Written request for application examination

Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A621

Effective date: 20241204

A521 Request for written amendment filed

Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A523

Effective date: 20250210

A521 Request for written amendment filed

Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A523

Effective date: 20250604

TRDD Decision of grant or rejection written
A01 Written decision to grant a patent or to grant a registration (utility model)

Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A01

Effective date: 20260303

A61 First payment of annual fees (during grant procedure)

Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A61

Effective date: 20260401

R150 Certificate of patent or registration of utility model

Ref document number: 7844591

Country of ref document: JP

Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: R150