JP7686567B2

JP7686567B2 - 呼吸機能障害の治療に使用するための、植物エクジソン及びその誘導体

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Publication number: JP7686567B2
Application number: JP2021555792A
Authority: JP
Inventors: ラティル，マチルド; ディルダ，ピエール; ラフォン，ルネ; ヴェイエ，スタニスラス
Original assignee: Sorbonne Universite
Current assignee: Sorbonne Universite
Priority date: 2019-03-15
Filing date: 2020-03-12
Publication date: 2025-06-02
Anticipated expiration: 2040-03-12
Also published as: MX2021011183A; ES2967044T3; JP2022525410A; FR3093641A1; US20220152060A1; BR112021018198A2; FR3093641B1; EP3937949B1; PL3937949T3; CN113727717A; DK3937949T3; KR20210141578A; CA3133230A1; WO2020187679A1; EP3937949A1; PT3937949T

Description

本発明は、呼吸機能障害、特に神経筋疾患の一部としての呼吸機能障害の治療のための、植物エクジソン、及び植物エクジソンの半合成誘導体の使用に関する。

神経筋疾患は、運動ニューロン、神経筋接合部、及び骨格筋で構成された運動単位の機能性の変化を特徴とする。これらの病理による患者の運動機能障害に加えて、極めて多くの急性又は進行性神経筋疾患は、呼吸筋の機能不全を引き起こし、これは呼吸不全、肺炎、及び患者の死亡につながる恐れがある。実際に、呼吸障害は神経疾患の患者の主な死因である（非特許文献１）。

神経筋疾患の患者は呼吸機能障害を発症することがあり、これは、（主に咳の効果がないことによる）肺炎又は気管支炎といった感染症の頻繁な発生、息切れの感覚、吐痰の困難を伴ってはっきりと現れる場合がある。しかしながら場合によっては、症状はそれほど明らかでなく、患者は、深刻な体重減少を伴う食欲不振、頭痛、発汗、又は重度の倦怠感を有する。従って呼吸疾患を可能な限り早期に発見することが重要である。

神経筋疾患の患者の呼吸の問題のケアは、近年大幅に改善されており、例えばデュシェンヌ型筋ジストロフィーの小児等の患者の、寿命の延長が可能となっている。呼吸パラメータは、臨床検査、呼吸機能の診査を可能とするスパイロメトリーによる撮像、又はガス交換の品質を評価するためのガス測定（動脈血中の酸素及び二酸化炭素ガスのレベルの測定）を用いて、定期的に監視される。これらの定期的な検査により、筋肉の弱まり及び肺機能不全の結果を検出でき、これによって、これらの患者の低下した呼吸機能を補償してこれらの患者のＱＯＬを改善するように、これらの患者の医療を適合させることができる（非特許文献２～４）。上記ケアは、以下の複数のレベルで提供できる：上記ケアは、呼吸器系の可動性及び柔軟性の維持を目的とすることができ（能動的若しくは受動的可動化による、若しくは機械的過吸入による、呼吸理学療法）；又は気管支が生成する分泌物を除去するための気道の清掃（咳の補助若しくは気管支ドレナージ）を目的とすることができ；又は最後に、自然呼吸が身体の必要量を満たさなくなったときに、非侵襲的人工呼吸によって、若しくは最も重症の場合には気管切開による人工呼吸によって、患者の呼吸を補うことを目的とすることができる。

皮質、脳幹、脊髄、運動ニューロン、末梢神経、神経筋接合部、又は筋肉への損傷は全て、呼吸器系の障害につながり得る。

（先天性、遺伝性、若しくは後天性）ミオパチー、重症筋無力症、又は筋強直を含む、呼吸筋の機能不全につながる慢性筋肉疾患の多数の原因が存在する。

例えば、多数の肺合併症につながる呼吸不全であるデュシェンヌ型筋ジストロフィー（Ｄｕｃｈｅｎｎｅｍｕｓｃｕｌａｒｄｙｓｔｒｏｐｈｙ：ＤＭＤ）は、ＤＭＤ患者で観察される死亡の大半の原因である（非特許文献５～９）。ＤＭＤは、筋ジストロフィーの最も一般的な形態である。これは３５００人に１人の男児に影響を及ぼし、Ｘ染色体上のジストロフィン遺伝子に影響する突然変異に起因する。比較的重篤でない形態であるベッカー型筋ジストロフィー（Ｂｅｃｋｅｒｍｕｓｃｕｌａｒｄｙｓｔｒｏｐｈｙ：ＢＭＤ）もまたジストロフィン遺伝子に関与し、１８０００人に１人の男児に影響を及ぼす。ＤＭＤの男児は一般に、歩行が依然として可能であるときには呼吸又は咳に困難を感じない。歳を取り、疾患が呼吸筋に影響を及ぼすに従って、罹患している男児は、多くの場合咳の効果がなくなることにより、呼吸器感染症のリスクを有することになる。平滑筋細胞、ひいては気道の平滑筋は、多数の呼吸疾患に関与している。

ミオパチーのプロセスに加えて、肺系（気道又は肺）自体の異常は、ＤＭＤ患者の呼吸不全に強く関与している（非特許文献１０）。実際に、肺コンプライアンス（肺の、圧力変化に応じてその容積を変更する能力）は、主に以下の２つの理由で低下する：低呼吸によって引き起こされる肺胞の収縮及び崩壊（無気肺）；並びに気道の抵抗の増大を結果としてもたらす、気道の線維症の発症及び閉塞（非特許文献１１）。

筋ジストロフィーの患者の肺の弾性特性は損なわれ、肺の伸展性が低下する。筋ジストロフィーにおける肺の伸展性の低下の原因は、依然として完全には理解されていない。それにもかかわらず、肺の弾性の低下を説明することを試みて、以下のような様々な仮説が提示されている：先天性疾患の文脈における、肺組織の不完全な成熟；低呼吸によって誘発される無気肺；肺胞の表面の張力の上昇；又は線維症による肺実質の損傷。更に、このような伸展性及び肺コンプライアンスの低下を説明するための重要な因子の１つは、筋ジストロフィーの特徴である低肺気量呼吸である（非特許文献１１）。

関与する別の機序は、呼吸筋の慢性的かつ進行性の劣化であり、これは事実上、肺の活動の範囲を制限する。実際に、系の弾性特性の一部は、系が受ける応力によって決定される。総肺気量は、呼吸中の瞬間的な弾性収縮圧力と、吸気筋の収縮によって生成される圧力との間のバランスの結果である。後者が低下すると、その結果として総肺気量も低下し、これによって呼気パラメータが変化して、肺コンプライアンスの低下が起こる。

結論として、呼吸器系が適切な酸素吸入及び二酸化炭素排出を提供できないことを特徴とする呼吸障害が、ＤＭＤの患者に共通している。

従って、デュシェンヌ型筋ジストロフィーの最も広く使用されているマウスモデルであるｍｄｘマウスにおける、呼吸器系の障害の評価は、神経筋疾患の文脈において治療ソリューションを確立及び評価するにあたって、考慮すべき重要なパラメータである。

前臨床試験中にｍｄｘマウスの呼吸器系を評価することには、以下のような大きな利点がある：一方では、この評価は、臨床的に重大な欠陥に関与し；また他方では、スパイロメトリー又はプレチスモグラフ測定は非侵襲的であり、試験中に縦断的に繰り返すことができ、また任意に、筋ジストロフィーの様々な治療の有効性の評価基準として実施できる。

様々なグループが、健康な対照マウスと比較したｍｄｘマウスの呼吸機能に関心を持ち、ｍｄｘマウスの呼吸機能障害を報告してきた（非特許文献１２～１５）。そして、障害の重篤度及びこれらの障害の発生年齢に多少の変化はあるが、これら全てが、正常酸素状態下での（非特許文献１６）、又は高炭酸ガス血症に応じた（非特許文献１３）、呼吸パラメータの変化を報告している。

Ｍｉｌｌｅｒｅｔａｌ．，２００９Ｂｉｒｎｋｒａｎｔｅｔａｌ．，２００７Ｆｉｎｄｅｒｅｔａｌ．，２００４ＭｃＫｉｍｅｔａｌ．，２０１１Ｍａｙｅｒｅｔａｌ．，２０１５Ｖｉａｎｅｌｌｏｅｔａｌ．，１９９４Ｂａｙｄｕｒｅｔａｌ．，１９９０Ｓｍｉｔｈｅｔａｌ．，１９８７Ｉｎｋｌｅｙｅｔａｌ．，１９７４ＢｅｎｄｉｔｔａｎｄＢｏｉｔａｎｏ，２０１３ＬｏＭａｕｒｏａｎｄＡｌｉｖｅｒｔｉ，２０１６Ｇｏｓｓｅｌｉｎｅｔａｌ．［２００３］Ｐｏｌｉｚｚｉｅｔａｌ．［２００３］Ｐｏｌｉｚｚｉｅｔａｌ．２０１３Ｇａｙｒａｕｄｅｔａｌ．，［２００７］Ｈｕａｎｇｅｔａｌ．，２０１１

本発明者らは、植物エクジソン、及び植物エクジソンの半合成誘導体が、呼吸パラメータの経時的変化を制限することによって、及び呼吸器系の機械的パラメータを改善することによって、神経筋疾患を有する哺乳類の呼吸機能を有意に改善することを発見した。呼吸パラメータ、及び呼吸器系の機械的パラメータは、それぞれ、覚醒状態の動物の全身プレチスモグラフィによって、及び麻酔された動物の、中央制御ユニット（一般に「コンピュータ」と呼ばれる）によって制御されたピストン人工呼吸器によって、決定され、上記人工呼吸器は、ＦｌｅｘｉＶｅｎｔ（商標）として知られるデバイス等の強制振動技法を使用する。これらの効果は、遺伝性又は後天性の神経筋疾患を有する哺乳類の呼吸機能の改善を示す。

植物エクジソンは、昆虫の脱皮ホルモンに構造的に関連する植物ポリヒドロキシル化ステロールの重要なファミリーである。これらの分子は、多数の植物種によって産生され、害虫に対するこれらの防御に関与する。大半の植物エクジソンは２０‐ヒドロキシエクジソンである。

この目的のために、本発明は、呼吸機能障害の治療に使用するための、少なくとも１つの植物エクジソン、及び／又は植物エクジソンの少なくとも１つの半合成誘導体に関する。

本発明は好ましくは、呼吸機能障害の治療に使用するための、少なくとも１つの植物エクジソン及び／又は植物エクジソンの少なくとも１つの半合成誘導体を含む組成物に関する。

特定の実施形態では、本発明はまた、別個に実装される、又は技術的に可能な各組み合わせで実装される、以下の特性を満たしている。

上記植物エクジソン及びその誘導体は有利には、医薬品グレードまで精製される。

本発明に従って使用可能な植物エクジソンは、例えば２０‐ヒドロキシエクジソンであり、植物エクジソンの使用可能な半合成誘導体は、例えば２０‐ヒドロキシエクジソンの半合成誘導体である。

この目的のために、ある実施形態によると、上記組成物は、２０‐ヒドロキシエクジソン及び／又は２０‐ヒドロキシエクジソンの少なくとも１つの半合成誘導体を含む。

２０‐ヒドロキシエクジソン及びその誘導体は、有利には、医薬品グレードまで精製される。

使用される２０‐ヒドロキシエクジソンは、より好ましくは、２０‐ヒドロキシエクジソンに富む植物抽出物、又は２０‐ヒドロキシエクジソンを活性成分として含む組成物の形態である。２０‐ヒドロキシエクジソンに富む植物抽出物は例えば、Ｓｔｅｍｍａｃａｎｔｈａｃａｒｔｈａｍｏｉｄｅｓ（Ｌｅｕｚｅａｃａｒｔｈａｍｏｉｄｅｓとも呼ばれる）、Ｃｙａｎｏｔｉｓａｒａｃｈｎｏｉｄｅａ及びＣｙａｎｏｔｉｓｖａｇａの抽出物である。

得られた上記抽出物は、好ましくは医薬品グレードまで精製される。

ある実施形態では、２０‐ヒドロキシエクジソンは、植物抽出物又は植物の一部分の形態であり、上記植物は、上記植物の乾燥重量の少なくとも０．５％の２０‐ヒドロキシエクジソンを含有する植物から選択され、上記抽出物は、少なくとも９５％、好ましくは少なくとも９７％の２０‐ヒドロキシエクジソンを含む。上記抽出物は、好ましくは医薬品グレードまで精製される。

上記抽出物はこれ以降、ＢＩＯ１０１と呼ばれる。これは、上記抽出物の医薬品としての応用の安全性、利用可能性、又は有効性に影響を及ぼし得る微量化合物等の不純物を、上記抽出物の乾燥重量の０～０．０５％含むことを特徴とする。

本発明のある実施形態によると、不純物は、ルブロステロン、ジヒドロルブロステロン、又はポストステロン等の、１９又は２１個の炭素原子を含む化合物である。

ＢＩＯ１０１の生産の元となる上記植物は、好ましくはＳｔｅｍｍａｃａｎｔｈａｃａｒｔｈａｍｏｉｄｅｓ（Ｌｅｕｚｅａｃａｒｔｈａｍｏｉｄｅｓとも呼ばれる）、Ｃｙａｎｏｔｉｓａｒａｃｈｎｏｉｄｅａ及びＣｙａｎｏｔｉｓｖａｇａから選択される。

植物エクジソン誘導体、特に２０‐ヒドロキシエクジソン誘導体は、半合成によって得られ、特に欧州特許出願第１５７３２７８５．９号明細書に記載されている様式で得ることができる。

ある好ましい実施形態によると、本発明は、呼吸機能障害、より詳細には、後天性遺伝性神経筋疾患、例えば運動ニューロンの、及び／又は神経筋接合部の、及び／又は横紋筋の神経筋疾患に起因する呼吸機能障害の治療において哺乳類に使用するための、組成物に関する。

ある特定の実施形態によると、本発明は、横紋筋及び／又は平滑筋の障害に関連する呼吸機能障害の治療において哺乳類に使用するための、組成物に関する。

ある特定の実施形態では、本発明は、少なくとも部分的に平滑筋の障害によって引き起こされる呼吸機能障害の治療において哺乳類に使用するための、組成物に関する。

ある特定の実施形態によると、本発明は、気管支過反応に関連する呼吸機能障害の治療において哺乳類に使用するための、組成物に関する。

ある実施形態では、本発明は、上記気管支過反応が気管支平滑筋の機能に関連する呼吸機能障害の治療において哺乳類に使用するための上記組成物に関する。

ある実施形態では、本発明は、Ｐｅｎｈ値、ピーク吸気流、ピーク呼気流、弛緩時間、及び呼吸数から選択される呼吸パラメータのうちの少なくとも１つの状態に関連する呼吸機能障害の治療において哺乳類に使用するための上記組成物に関する。上記組成物は有利には、これらの呼吸パラメータの状態を低減する。

ある実施形態では、本発明は、肺組織の機械的パラメータのうちの少なくとも１つの状態に関連する呼吸機能障害の治療において哺乳類に使用するための上記組成物に関する。上記肺組織の上記機械的パラメータは、肺エラスタンス、コンプライアンス、及び抵抗である。

ある特定の実施形態では、本発明は、肺コンプライアンスの低下及び／又肺抵抗の上昇及び／又は肺エラスタンスの低下に関連する呼吸機能障害の治療において哺乳類に使用するための上記組成物に関する。

ある特定の実施形態では、本発明は、呼吸機能障害が肺胞の収縮及び崩壊並びに／又は線維症の発症に関連する、疾患の治療において哺乳類に使用するための上記組成物に関する。

ある特定の実施形態では、植物エクジソンは、ヒトでは、３～１５ｍｇ／ｋｇ／日の用量で投与される。「植物エクジソン」はここでは、一般的な植物エクジソン及びその誘導体、（特に抽出物の形態の）２０‐ヒドロキシエクジソン及びその誘導体を意味することが理解される。

好ましくは、植物エクジソンは、成年のヒトでは、２００～１，０００ｍｇ／日の用量を１回以上に分けて投与され、ヒトの小児又は幼児では、５～３５０ｍｇ／日の用量を１回以上に分けて投与される。「植物エクジソン」はここでは、一般的な植物エクジソン及びその誘導体、（特に抽出物の形態の）２０‐ヒドロキシエクジソン及びその誘導体を意味するものとして理解される。

いくつかの実施形態では、上記組成物は、植物エクジソンの誘導体と考えられる少なくとも１つの化合物を含み、上記少なくとも１つの化合物は、一般式（I）：

のものであり、ここで、Ｖ‐Ｕは炭素‐炭素単結合であり、Ｙはヒドロキシル基又は水素であり、又はＶ‐Ｕはエチレン性Ｃ＝Ｃ結合であり；
Ｘは酸素であり；
Ｑはカルボニル基であり；
Ｒ^１は：（Ｃ_１‐Ｃ_６）Ｗ（Ｃ_１‐Ｃ_６）基；（Ｃ_１‐Ｃ_６）Ｗ（Ｃ_１‐Ｃ_６）Ｗ（Ｃ_１‐Ｃ_６）基；（Ｃ_１‐Ｃ_６）Ｗ（Ｃ_１‐Ｃ_６）ＣＯ_２（Ｃ_１‐Ｃ_６）基；（Ｃ_１‐Ｃ_６）Ａ基（ここでＡは、ＯＨ、ＭｅＯ、（Ｃ_１‐Ｃ_６）、Ｎ（Ｃ_１‐Ｃ_６）、ＣＯ_２（Ｃ_１‐Ｃ_６）タイプの基で任意に置換された複素環を表す）；ＣＨ_２Ｂｒ基から選択され；
Ｗは、Ｎ、Ｏ、及びＳから選択されるヘテロ原子であり、好ましくはＯであり、より好ましくはＳである。

本発明の文脈において、「（Ｃ_１‐Ｃ_６）」は、炭素原子が１～６個の、直鎖又は分岐の、いずれのアルキル基、特にメチル、エチル、ｎ‐プロピル、イソプロピル、ｎ‐ブチル、イソブチル、ｓｅｃ‐ブチル、ｔ‐ブチル、ｎ‐ペンチル、ｎ‐ヘキシル基を意味する。有利には、これはメチル、エチル、イソプロピル、又はｔ‐ブチル基、特にメチル又はエチル基、より詳細にはメチル基を伴う。

ある好ましい実施形態では、上記式（I）において：
Ｙはヒドロキシル基であり；
Ｒ^１は：（Ｃ_１‐Ｃ_６）Ｗ（Ｃ_１‐Ｃ_６）基；（Ｃ_１‐Ｃ_６）Ｗ（Ｃ_１‐Ｃ_６）Ｗ（Ｃ_１‐Ｃ_６）基；（Ｃ_１‐Ｃ_６）Ｗ（Ｃ_１‐Ｃ_６）ＣＯ_２（Ｃ_１‐Ｃ_６）基；（Ｃ_１‐Ｃ_６）Ａ基、（ここでＡは、ＯＨ、ＭｅＯ、（Ｃ_１‐Ｃ_６）、Ｎ（Ｃ_１‐Ｃ_６）、ＣＯ_２（Ｃ_１‐Ｃ_６）タイプの基で任意に置換された複素環を表す）から選択され；
Ｗは、Ｎ、Ｏ、及びＳから選択されるヘテロ原子であり、好ましくはＯであり、より好ましくはＳである。

いくつかの実施形態では、上記組成物は、以下の化合物から選択される少なくとも１つの化合物を含む：
Ｎｏ．１：（２Ｓ，３Ｒ，５Ｒ，１０Ｒ，１３Ｒ，１４Ｓ，１７Ｓ）‐２，３，１４‐トリヒドロキシ‐１０，１３‐ジメチル‐１７‐（２‐モルホリノアセチル）‐２，３，４，５，９，１１，１２，１５，１６，１７‐デカヒドロ‐１Ｈ‐シクロペンタ［ａ］フェナントレン‐６‐オン；
Ｎｏ．２：（２Ｓ，３Ｒ，５Ｒ，１０Ｒ，１３Ｒ，１４Ｓ，１７Ｓ）‐２，３，１４‐トリヒドロキシ‐１７‐［２‐（３‐ヒドロキシピロリジン‐１‐イル）アセチル］‐１０，１３‐ジメチル‐２，３，４，５，９，１１，１２，１５，１６，１７‐デカヒドロ‐１Ｈ‐シクロペンタ［ａ］フェナントレン‐６‐オン；
Ｎｏ．３：（２Ｓ，３Ｒ，５Ｒ，１０Ｒ，１３Ｒ，１４Ｓ，１７Ｓ）‐２，３，１４‐トリヒドロキシ‐１７‐［２‐（４‐ヒドロキシ‐１‐ピペリジル）アセチル］‐１０，１３‐ジメチル‐２，３，４，５，９，１１，１２，１５，１６，１７‐デカヒドロ‐１Ｈ‐シクロペンタ［ａ］フェナントレン‐６‐オン；
Ｎｏ．４：（２Ｓ，３Ｒ，５Ｒ，１０Ｒ，１３Ｒ，１４Ｓ，１７Ｓ）‐２，３，１４‐トリヒドロキシ‐１７‐［２‐［４‐（２‐ヒドロキシエチル）‐１‐ピペリジル］アセチル］‐１０，１３‐ジメチル‐２，３，４，５，９，１１，１２，１５，１６，１７‐デカヒドロ‐１Ｈ‐シクロペンタ［ａ］フェナントレン‐６‐オン；
Ｎｏ．５：（２Ｓ，３Ｒ，５Ｒ，１０Ｒ，１３Ｒ，１４Ｓ，１７Ｓ）‐１７‐［２‐（３‐ジメチルアミノプロピル（メチル）アミノ）アセチル］‐２，３，１４‐トリヒドロキシ‐１０，１３‐ジメチル‐２，３，４，５，９，１１，１２，１５，１６，１７‐デカヒドロ‐１Ｈ‐シクロペンタ［ａ］フェナントレン‐６‐オン；
Ｎｏ．６：２‐［２‐オキソ‐２‐［（２Ｓ，３Ｒ，５Ｒ，１０Ｒ，１３Ｒ，１４Ｓ，１７Ｓ）‐２，３，１４‐トリヒドロキシ‐１０，１３‐ジメチル‐６‐オキソ‐２，３，４，５，９，１１，１２，１５，１６，１７‐デカヒドロ‐１Ｈ‐シクロペンタ［ａ］フェナントレン‐１７‐イル］エチル］エチルスルファニルアセテート；
Ｎｏ．７：（２Ｓ，３Ｒ，５Ｒ，１０Ｒ，１３Ｒ，１４Ｓ，１７Ｓ）‐１７‐（２‐エチルスルファニルアセチル）‐２，３，１４‐トリヒドロキシ‐１０，１３‐ジメチル‐２，３，４，５，９，１１，１２，１５，１６，１７‐デカヒドロ‐１Ｈ‐シクロペンタ［ａ］フェナントレン‐６‐オン；
Ｎｏ．８：（２Ｓ，３Ｒ，５Ｒ，１０Ｒ，１３Ｒ，１４Ｓ，１７Ｓ）‐２，３，１４‐トリヒドロキシ‐１７‐［２‐（２‐ヒドロキシエチルスルファニル）アセチル］‐１０，１３‐ジメチル‐２，３，４，５，９，１１，１２，１５，１６，１７‐デカヒドロ‐１Ｈシクロペンタ［ａ］フェナントレン‐６‐オン。

いくつかの実施形態では、上記組成物は、植物エクジソンの誘導体と考えられる少なくとも１つの化合物を含み、上記少なくとも１つの化合物は、一般式（II）：

式（II）の化合物は、これ以降ではＢＩＯ１０３と呼ばれる。

いくつかの実施形態では、上記組成物は、経口投与可能な、薬学的に許容可能な処方に組み込まれる。

本発明の文脈において、「薬学的に許容可能な（ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌｌｙａｃｃｅｐｔａｂｌｅ）」は、一般に安全であり、非毒性であり、獣医用及びヒト用医薬用途に許容される医薬組成物の調製に有用であることを意味している。

図面を参照して非限定的な例として与えられる以下の説明を読むと、本発明はよりよく理解されるだろう。

図１Ａは、プレチスモグラフィによって測定された、治療を受ける前（Ｄ０：０日目）の健康な対照マウスＣ５７Ｂｌａｃｋ１０（ｎ＝１２、白い丸）及びｍｄｘマウス（ｎ＝２３、白い正方形）に関する、研究開始前の、メタコリンの用量の増大に応じたＰｅｎｈ値の曲線を示し、ここで＊＊はｐ＜０．００１、＊＊＊はｐ＜０．０００１である。これ以降、ｎは試料のサイズに対応し、ｐは、結果の統計的有意性を定量化するために使用される「ｐ値」に対応し、＊はｐ＜０．０５、＊＊はｐ＜０．００１、＊＊＊はｐ＜０．０００１、ｎｓは有意差なし（ｎｏｔｓｉｇｎｉｆｉｃａｎｔ）である。図１Ｂは、プレチスモグラフィによって測定された、治療を受ける前（Ｄ０：０日目）の健康な対照マウスＣ５７Ｂｌａｃｋ１０（ｎ＝１２、白い丸）及びｍｄｘマウス（ｎ＝２３、白い正方形）に関する、研究開始前の、メタコリンの用量の増大に応じたピーク吸気流の曲線を示し、ここで＊はｐ＜０．０５、＊＊はｐ＜０．００１である。図１Ｃは、プレチスモグラフィによって測定された、治療を受ける前（Ｄ０：０日目）の健康な対照マウスＣ５７Ｂｌａｃｋ１０（ｎ＝１２、白い丸）及びｍｄｘマウス（ｎ＝２３、白い正方形）に関する、研究開始前の、メタコリンの用量の増大に応じたピーク呼気流の曲線を示し、ここで＊＊はｐ＜０．００１である。図１Ｄは、プレチスモグラフィによって測定された、治療を受ける前（Ｄ０：０日目）の健康な対照マウスＣ５７Ｂｌａｃｋ１０（ｎ＝１２、白い丸）及びｍｄｘマウス（ｎ＝２３、白い正方形）に関する、研究開始前の、メタコリンの用量の増大に応じた弛緩時間の曲線を示し、ここで＊＊はｐ＜０．００１、＊＊＊はｐ＜０．０００１である。図１Ｂは、プレチスモグラフィによって測定された、治療を受ける前（Ｄ０：０日目）の健康な対照マウスＣ５７Ｂｌａｃｋ１０（ｎ＝１２、白い丸）及びｍｄｘマウス（ｎ＝２３、白い正方形）に関する、研究開始前の、メタコリンの用量の増大に応じた呼吸数の曲線を示し、ここで＊はｐ＜０．０５、＊＊＊はｐ＜０．０００１である。図２Ａは、以下の３つの異なるグループの動物をランダム化した後に、プレチスモグラフィによって測定された、研究開始（Ｄ０）前の、メタコリンの用量の増大に応じたＰｅｎｈ値の曲線を示し、ここで＊＊はｐ＜０．００１、＊＊＊はｐ＜０．０００１である：健康な対照マウスＣ５７Ｂｌａｃｋ１０（ｎ＝１２、白い丸）；治療を受けないｍｄｘマウス（ｎ＝１１、白い正方形、「ｍｄｘ」グループ）；及びＢＩＯ１０１で治療されることになるｍｄｘマウス（ｎ＝１２、黒い正方形、「ｍｄｘＢＩＯ１０１」グループ）。図２Ｂは、以下の３つの異なるグループの動物をランダム化した後に、プレチスモグラフィによって測定された、研究開始（Ｄ０）前の、メタコリンの用量の増大に応じたピーク吸気流の曲線を示す：健康な対照マウスＣ５７Ｂｌａｃｋ１０（ｎ＝１２、白い丸）；治療を受けないｍｄｘマウス（ｎ＝１１、白い正方形、「ｍｄｘ」グループ）；及びＢＩＯ１０１で治療されることになるｍｄｘマウス（ｎ＝１２、黒い正方形、「ｍｄｘＢＩＯ１０１」グループ）。図２Ｃは、以下の３つの異なるグループの動物をランダム化した後に、プレチスモグラフィによって測定された、研究開始（Ｄ０）前の、メタコリンの用量の増大に応じたピーク呼気流の曲線を示す：健康な対照マウスＣ５７Ｂｌａｃｋ１０（ｎ＝１２、白い丸）；治療を受けないｍｄｘマウス（ｎ＝１１、白い正方形、「ｍｄｘ」グループ）；及びＢＩＯ１０１で治療されることになるｍｄｘマウス（ｎ＝１２、黒い正方形、「ｍｄｘＢＩＯ１０１」グループ）。図２Ｄは、以下の３つの異なるグループの動物をランダム化した後に、プレチスモグラフィによって測定された、研究開始（Ｄ０）前の、メタコリンの用量の増大に応じた弛緩時間の曲線を示す：健康な対照マウスＣ５７Ｂｌａｃｋ１０（ｎ＝１２、白い丸）；治療を受けないｍｄｘマウス（ｎ＝１１、白い正方形、「ｍｄｘ」グループ）；及びＢＩＯ１０１で治療されることになるｍｄｘマウス（ｎ＝１２、黒い正方形、「ｍｄｘＢＩＯ１０１」グループ）。図２Ｅは、以下の３つの異なるグループの動物をランダム化した後に、プレチスモグラフィによって測定された、研究開始（Ｄ０）前の、メタコリンの用量の増大に応じた呼吸数の曲線を示す：健康な対照マウスＣ５７Ｂｌａｃｋ１０（ｎ＝１２、白い丸）；治療を受けないｍｄｘマウス（ｎ＝１１、白い正方形、「ｍｄｘ」グループ）；及びＢＩＯ１０１で治療されることになるｍｄｘマウス（ｎ＝１２、黒い正方形、「ｍｄｘＢＩＯ１０１」グループ）。図３Ａは、プレチスモグラフィによって測定された、健康な対照マウスＣ５７Ｂｌａｃｋ１０（ｎ＝１２、白い丸）、治療されていないｍｄｘマウス（ｎ＝１１、白い正方形、「ｍｄｘ」グループ）、及びＢＩＯ１０１で治療されたｍｄｘマウス（ｎ＝１２、黒い正方形、「ｍｄｘＢＩＯ１０１」グループ）に関する、治療の開始の３０日後の、メタコリンの用量の増大に応じたＰｅｎｈ値の曲線を示し、ここで＊＊はｐ＜０．００１である。図３Ｂは、プレチスモグラフィによって測定された、健康な対照マウスＣ５７Ｂｌａｃｋ１０（ｎ＝１２、白い丸）、治療されていないｍｄｘマウス（ｎ＝１１、白い正方形、「ｍｄｘ」グループ）、及びＢＩＯ１０１で治療されたｍｄｘマウス（ｎ＝１２、黒い正方形、「ｍｄｘＢＩＯ１０１」グループ）に関する、治療の開始の３０日後の、メタコリンの用量の増大に応じたピーク吸気流の曲線を示し、ここで＊はｐ＜０．０５、＊＊はｐ＜０．００１である。図３Ｃは、プレチスモグラフィによって測定された、健康な対照マウスＣ５７Ｂｌａｃｋ１０（ｎ＝１２、白い丸）、治療されていないｍｄｘマウス（ｎ＝１１、白い正方形、「ｍｄｘ」グループ）、及びＢＩＯ１０１で治療されたｍｄｘマウス（ｎ＝１２、黒い正方形、「ｍｄｘＢＩＯ１０１」グループ）に関する、治療の開始の３０日後の、メタコリンの用量の増大に応じたピーク呼気流の曲線を示し、ここで＊＊はｐ＜０．０５である。図３Ｄは、プレチスモグラフィによって測定された、健康な対照マウスＣ５７Ｂｌａｃｋ１０（ｎ＝１２、白い丸）、治療されていないｍｄｘマウス（ｎ＝１１、白い正方形、「ｍｄｘ」グループ）、及びＢＩＯ１０１で治療されたｍｄｘマウス（ｎ＝１２、黒い正方形、「ｍｄｘＢＩＯ１０１」グループ）に関する、治療の開始の３０日後の、メタコリンの用量の増大に応じた弛緩時間の曲線を示し、ここで＊はｐ＜０．０５である。図３Ｅは、プレチスモグラフィによって測定された、健康な対照マウスＣ５７Ｂｌａｃｋ１０（ｎ＝１２、白い丸）、治療されていないｍｄｘマウス（ｎ＝１１、白い正方形、「ｍｄｘ」グループ）、及びＢＩＯ１０１で治療されたｍｄｘマウス（ｎ＝１２、黒い正方形、「ｍｄｘＢＩＯ１０１」グループ）に関する、治療の開始の３０日後の、メタコリンの用量の増大に応じた呼吸数の曲線を示す。図４Ａは、プレチスモグラフィによって測定された、健康な対照マウスＣ５７Ｂｌａｃｋ１０（ｎ＝１２、白い丸）、治療されていないｍｄｘマウス（ｎ＝１１、白い正方形、「ｍｄｘ」グループ）、及びＢＩＯ１０１で治療されたｍｄｘマウス（ｎ＝１２、黒い正方形、「ｍｄｘＢＩＯ１０１」グループ）に関する、治療の開始の６０日後の、メタコリンの用量の増大に応じたＰｅｎｈ値の曲線を示し、ここで＊＊＊はｐ＜０．０００１である。図４Ｂは、プレチスモグラフィによって測定された、健康な対照マウスＣ５７Ｂｌａｃｋ１０（ｎ＝１２、白い丸）、治療されていないｍｄｘマウス（ｎ＝１１、白い正方形、「ｍｄｘ」グループ）、及びＢＩＯ１０１で治療されたｍｄｘマウス（ｎ＝１２、黒い正方形、「ｍｄｘＢＩＯ１０１」グループ）に関する、治療の開始の６０日後の、メタコリンの用量の増大に応じたピーク吸気流の曲線を示し、ここで＊はｐ＜０．０５である。図４Ｃは、プレチスモグラフィによって測定された、健康な対照マウスＣ５７Ｂｌａｃｋ１０（ｎ＝１２、白い丸）、治療されていないｍｄｘマウス（ｎ＝１１、白い正方形、「ｍｄｘ」グループ）、及びＢＩＯ１０１で治療されたｍｄｘマウス（ｎ＝１２、黒い正方形、「ｍｄｘＢＩＯ１０１」グループ）に関する、治療の開始の３０日後の、メタコリンの用量の増大に応じたピーク呼気流の曲線を示す。図４Ｄは、プレチスモグラフィによって測定された、健康な対照マウスＣ５７Ｂｌａｃｋ１０（ｎ＝１２、白い丸）、治療されていないｍｄｘマウス（ｎ＝１１、白い正方形、「ｍｄｘ」グループ）、及びＢＩＯ１０１で治療されたｍｄｘマウス（ｎ＝１２、黒い正方形、「ｍｄｘＢＩＯ１０１」グループ）に関する、治療の開始の６０日後の、メタコリンの用量の増大に応じた弛緩時間の曲線を示す。図４Ｅは、プレチスモグラフィによって測定された、健康な対照マウスＣ５７Ｂｌａｃｋ１０（ｎ＝１２、白い丸）、治療されていないｍｄｘマウス（ｎ＝１１、白い正方形、「ｍｄｘ」グループ）、及びＢＩＯ１０１で治療されたｍｄｘマウス（ｎ＝１２、黒い正方形、「ｍｄｘＢＩＯ１０１」グループ）に関する、治療の開始の６０日後の、メタコリンの用量の増大に応じた呼吸数の曲線を示す。図５Ａは、プレチスモグラフィによって測定された、メタコリンの用量を増大させた場合の、研究の開始時（ｎ＝１２、黒い丸、Ｄ０）及び研究の終了時（ｎ＝１２、白い丸、Ｄ６０）の健康なマウスＣ５７Ｂｌａｃｋ１０に関するＰｅｎｈ値の変化の曲線を示す。図５Ｂは、プレチスモグラフィによって測定された、メタコリンの用量を増大させた場合の、研究の開始時（ｎ＝２３、黒い丸、Ｄ０）及び研究の終了時（ｎ＝１２、白い丸、Ｄ６０）の治療されていないｍｄｘマウスに関するＰｅｎｈ値の変化の曲線を示し、ここで＊＊＊はｐ＜０．０００１である。図６Ａは、プレチスモグラフィによって測定された、メタコリン用量が４０ｍｇ／ｍｌの場合の、研究の開始時（Ｄ０）の健康なマウスＣ５７Ｂｌａｃｋ１０（ｎ＝１２）及び治療されていないｍｄｘマウス（ｎ＝２３）に関するＰｅｎｈ値を示し、ここで＊＊＊はｐ＜０．０００１である。図６Ｂは、プレチスモグラフィによって測定された、メタコリン用量が４０ｍｇ／ｍｌの場合の、研究の開始の６０日後（Ｄ６０）の健康なマウスＣ５７Ｂｌａｃｋ１０（ｎ＝１２）、治療されていないｍｄｘマウス（ｎ＝１２）、及びＢＩＯ１０１で治療されたｍｄｘマウス（ｎ＝１２）に関するＰｅｎｈ値を示し、ここで＊＊＊はｐ＜０．０００１である。図７Ａは、ピストン人工呼吸器（ＦｌｅｘｉＶｅｎｔ（商標））によって測定された、メタコリンの用量を増大させた場合の、健康なマウスＣ５７Ｂｌａｃｋ１０（ｎ＝１０）、治療されていないｍｄｘマウス（ｎ＝１０）、及びＢＩＯ１０１で治療されたｍｄｘマウス（ｎ＝１０）における肺抵抗の変化を示し、ここで＊＊はｐ＜０．００１であり、＊＊＊はｐ＜０．０００１である。図７Ｂは、ピストン人工呼吸器によって測定された、メタコリンの用量を増大させた場合の、健康なマウスＣ５７Ｂｌａｃｋ１０（ｎ＝１０）、治療されていないｍｄｘマウス（ｎ＝１０）、及びＢＩＯ１０１で治療されたｍｄｘマウス（ｎ＝１０）における肺コンプライアンスの変化を示し、ここで＊＊＊はｐ＜０．０００１である。図７Ｃは、ピストン人工呼吸器によって測定された、メタコリンの用量を増大させた場合の、健康なマウスＣ５７Ｂｌａｃｋ１０（ｎ＝１０）、治療されていないｍｄｘマウス（ｎ＝１０）、及びＢＩＯ１０１で治療されたｍｄｘマウス（ｎ＝１０）における肺エラスタンスの変化を示し、ここで＊＊＊はｐ＜０．０００１である。図８Ａは、ピストン人工呼吸器によって測定された、メタコリン用量が２０ｍｇ／ｍｌの場合の、研究の開始の６０日後の健康なマウスＣ５７Ｂｌａｃｋ１０（ｎ＝１０）、治療されていないｍｄｘマウス（ｎ＝１０）、及びＢＩＯ１０１で治療されたｍｄｘマウス（ｎ＝１０）に関する肺抵抗の値を示し、ここで＊＊＊はｐ＜０．０００１である。図８Ｂは、ピストン人工呼吸器によって測定された、メタコリン用量が２０ｍｇ／ｍｌの場合の、研究の開始の６０日後の健康なマウスＣ５７Ｂｌａｃｋ１０（ｎ＝１０）、治療されていないｍｄｘマウス（ｎ＝１０）、及びＢＩＯ１０１で治療されたｍｄｘマウス（ｎ＝１０）に関する肺コンプライアンスの値を示し、ここで＊＊＊はｐ＜０．０００１である。図８Ｃは、ピストン人工呼吸器によって測定された、メタコリン用量が２０ｍｇ／ｍｌの場合の、研究の開始の６０日後の健康なマウスＣ５７Ｂｌａｃｋ１０（ｎ＝１０）、治療されていないｍｄｘマウス（ｎ＝１０）、及びＢＩＯ１０１で治療されたｍｄｘマウス（ｎ＝１０）に関する肺エラスタンスの値を示し、ここで＊＊はｐ＜０．０５、＊＊はｐ＜０．００１である。

これより、本発明を、その好ましい非限定的な応用分野の一部の特定の文脈で説明する。

１．ＢＩＯ１０１の精製方法
ＢＩＯ１０１は、純度９０％の２０‐ヒドロキシエクジソンから、以下のステップに従って調製される：
i）純度９０％の２０‐ヒドロキシエクジソンをメタノールに熱溶解し、ろ過及び部分濃縮するステップ；
ii）３倍量のアセトンを添加するステップ；
iii）０～５℃の温度まで撹拌しながら冷却するステップ；
iv）得られた沈殿物を濾過するステップ；
v）アセトン及び水で連続的にすすぐステップ；並びに
vi）乾燥させるステップ。

この精製は、この分子に好適な、工業規模で実施できる再結晶化のプロセスを伴う。

ステップi）のろ過は、０．２μｍ粒子フィルタを用いて実施される。

ステップi）の部分濃縮は有利には、ＭｅＯＨの存在下における約５０℃の温度での真空蒸留によって実施される。

乾燥させるステップvi）は、約５０℃の温度において真空下で実施される。

２．ＢＩＯ１０１の生物活性
１２週齢のオスのマウスＣ５７ＢＬ／１０ＳｃＳｎＪ（図面で「Ｃ５７Ｂｌａｃｋ１０」として示されている健康なマウス）及びＣ５７ＢＬ／１０ＳｃＳｎ‐Ｄｍｄｍｄｘ／Ｊ（図面で「ｍｄｘ」と示されている、デュシェンヌ型筋ジストロフィーのマウスモデル）を使用した。上記マウスを、それぞれ１２匹の、以下の３つのグループに分けた：健康な対照マウスＣ５７Ｂｌａｃｋ１０の、治療されていないグループ；治療されていないｍｄｘマウスのグループ（ｍｄｘ）；飲用水を用いて５０ｍｇ／ｋｇ／日の用量で定期的に経口治療されているマウスのグループ。

全てのマウスの呼吸機能を、研究の開始前（Ｄ０）、治療の開始の３０日後（Ｄ３０）及び６０日後（Ｄ６０）に、全身プレチスモグラフィで評価した。２か月の治療の後、動物を死亡させる直前に、中央制御ユニット（一般に「コンピュータ」と呼ばれる）で制御されたピストン人工呼吸器によって、呼吸機能を非侵襲的に評価した。上記人工呼吸器は、呼吸器系の機械的パラメータをより直接的に決定するためにＦｌｅｘｉＶｅｎｔ（商標）として知られるデバイス等の強制振動技法を使用する。

ａ．呼吸機能に対するＢＩＯ１０１の影響の、プレスチモグラフィによる分析
治療の経過全体にわたって呼吸機能の変化を正確に監視するために、全身プレチスモグラフィ分析（ＥｍｋａＴｅｃｈｎｏｌｏｇｉｅｓ（フランス、パリ））を、健康な対照マウスＣ５７Ｂｌａｃｋ１０、治療されていないｍｄｘマウス、及びＢＩＯ１０１で治療されたｍｄｘマウスに対して実施した。

この技法の利点は、気密性のエンクロージャ内を自由に移動する覚醒状態の動物に対して監視を実施できる点、及びこれが非侵襲的に実施される点である。その結果、動物の取り扱いによるストレスが軽減され、測定を長期間にわたって繰り返すことができるようになる。従って、小動物の気管支反応性の測定には、気圧プレチスモグラフィが頻繁に使用される（Ｃｈｏｎｇｅｔａｌ．，１９９８；Ｄｊｕｒｉｃｅｔａｌ．，１９９８；Ｈｏｆｆｍａｎｅｔａｌ．，１９９９）。

基準チャンバに関して測定された圧力変動により、吸気及び呼気の圧力のピーク及び時間、並びに気管支収縮の評価を可能にするＰｅｎｈ（ｅｎｈａｎｃｅｄＰａｕｓｅ）と呼ばれる無次元量といった、様々な呼吸パラメータを定義できる。より具体的には、チャンバ内の圧力信号（Ｐｂ）から計算されるＰｅｎｈは、取得するべき重要な指標である。というのは、Ｐｅｎｈの変動は、呼吸抵抗の変動と並行して変化するため、呼吸器系の抵抗特性の変化に関する予測パラメータを表すためである（Ｈａｍｅｌｍａｎｎｅｔａｌ．，１９９７；Ｂｅｒｇｒｅｎ，２００１；Ｏｎｃｌｉｎｘｅｔａｌ．，２００３）。以下の値を、フィルタリングされたＰｂから計算した：呼気中のＰｂの最大変化（ＰＥＰ：ピーク呼気圧力）；吸気中のＰｂの最大変化（ＰＩＰ：ピーク吸気圧力）；及び時間間隔（ＴＲ）。そしてＰｅｎｈ値を以下のようにして計算した：
（ＰＩＰ／ＰＥＰ）×Ｐａｕｓｅ
ここで
Ｐａｕｓｅ＝（ＴＥ－ＴＲ）／ＴＥ
であり、ＴＥは呼気時間である（Ａｄｌｅｒｅｔａｌ．，２００４）。

更に、ピーク吸気流（ＰＩＦ）及びピーク呼気流（ＰＥＦ）、弛緩時間（ＲＴ）、並びに呼吸数（ＢＦ）も測定して図示した。

Ｐｅｎｈ値は、治療の開始前（Ｄ０）、治療の開始の３０日後（Ｄ３０）、及び治療の開始の６０日後（Ｄ６０）に測定した。

まず、治療を受ける前に、ｍｄｘマウス（ｎ＝２４）の全コホートを健康なマウスＣ５７Ｂｌａｃｋ１０（ｎ＝１２）と比較した。覚醒状態のマウスを、ＰＢＳ中の０～４０ｍｇ／ｍＬのメタコリンを含有する、ネブライザーによって生成されたメタコリンエアロゾルの用量の増大に曝露した。予想通り、また既に実証されている通り、ｍｄｘマウスは呼吸機能障害を示し（Ｈｕａｎｇｅｔａｌ．，２０１１；Ｇｏｓｓｅｌｉｎｅｔａｌ．，２００３；Ｇａｙｒａｕｄｅｔａｌ．，２００７；Ｉｓｈｉｚａｋｉｅｔａｌ．，２００８）、特に気管支収縮剤の投薬前又は少量の投薬時に、健康なマウスに比べて有意に低いピーク吸気流及びピーク呼気流（ｐ＜０．０５及びｐ＜０．００１）（図１Ｂ、１Ｃ）と関連する、メタコリンに応じたＰｅｎｈの有意な上昇（ｐ＜０．００１及びｐ＜０．０００１）（図１Ａ）を伴う。弛緩時間（ＲＴ）もまた、対照マウスと比較してｍｄｘマウスでは極めて有意に長くなる（ｐ＜０．００１及びｐ＜０．０００１）（図１Ｄ）。吸気時間（ＴＩ）及び呼気時間（ＴＥ）の値は、各測定時点においてこれらのグループの間で同等のままである（データは図示されていない）。ｍｄｘマウスの呼吸数もまた、健康なマウスと比較して減少する（ｐ＜０．０５及びｐ＜０．０００１）（図１Ｅ）。

次にｍｄｘマウスを、以下の２つのグループに分けた：いかなる治療も受けないｍｄｘマウス（白い正方形）；及び分子ＢＩＯ１０１を投与されることになるｍｄｘマウス（黒い正方形）。図２Ａ、２Ｂ、２Ｃ、２Ｄ、及び２Ｅに示されているように、これら２つのグループは、その呼吸機能に関して同一の能力を示し、測定した様々な呼吸パラメータの間に有意差がなく、これは、治療前において、全ての治療されていないｍｄｘマウスが同一の呼吸プロファイルを有することを示している。

治療の開始の３０日後、ＢＩＯ１０１で治療されたｍｄｘマウスは、Ｄ０におけるｍｄｘマウスと比較して、Ｐｅｎｈの有意な低下（ｐ＜０．００１）を示し、メタコリンに応じたＰｅｎｈの曲線は、健康なマウスＣ５７Ｂｌａｃｋ１０の曲線と同等である（図３Ａ）。Ｐｅｎｈの減少は、特に定常状態又はメタコリン用量が低い場合の、ピーク吸気流の増大に関連する（ｐ＜０．０５）（図３Ｃ）。更に、治療されていないｍｄｘマウスと比較して、ＢＩＯ１０１で治療されたｍｄｘマウスにおいて弛緩時間の明らかな改善が観察される（ｐ＜０．０５）（図３Ｄ）。対照的に、ピーク吸気流及び呼吸数は、Ｄ０において測定されたものと比較して変化しないままである（図３Ｂ、３Ｅ）。

治療の開始の６０日後、ＢＩＯ１０１は、ｍｄｘマウスの呼吸機能に対するその有益な効果を維持している。具体的には、結果として、治療の開始の３０日後に観察された効果が追認される。ＢＩＯ１０１で治療されたｍｄｘマウスは、治療されていないｍｄｘマウスと比較してＰｅｎｈの有意な低下（ｐ＜０．０００１）を示し、Ｐｅｎｈの変動のプロファイルは、メタコリンの用量にかかわらず、対照のプロファイルと同様である（図４Ａ）。弛緩時間の改善の傾向と合わせて、ピーク吸気流の有意な改善（ｐ＜０．０５）が観察される（図４Ｂ、４Ｄ）。対照的に、ピーク呼気流及び呼吸数は変化しないままである（図４Ｂ、４Ｅ）。

ｍｄｘマウスの呼吸機能障害を縦断評価するために、健康な対照マウスのＤ０とＤ６０との間、及び治療されていないｍｄｘマウスのＤ０とＤ６０との間での、Ｐｅｎｈの変動を比較した。予想通り、対照マウスではＤ０とＤ６０との間でＰｅｎｈは変化しなかった（ｐ＝ｎｓ）（図５Ａ）。対照的に、メタコリンに応じたＰｅｎｈの増大によって示されるように、呼吸機能は、ｍｄｘマウスではＤ０に比べてＤ６０において有意に劣化する（ｐ＜０．０００１）（図５Ｂ）。

４０ｍｇ／ｍＬのメタコリン用量において、健康な対照マウス（ｎ＝１２）のＰｅｎｈの平均値は、治療前のｍｄｘマウス（ｎ＝２３）で見られる値よりも有意に低い（それぞれＰｅｎｈ＝０．７２及び１．４２；ｐ＜０．０００１）（図６Ａ）。Ｄ６０において、このＰｅｎｈ値は、健康な対照マウス（ｎ＝１２）と比較して、治療されていないｍｄｘマウス（ｎ＝１２）において高く、その値はそれぞれ１．０４及び４である（ｐ＜０．０００１）（図６Ｂ）。興味深いことに、ＢＩＯ１０１での治療は、治療されていないｍｄｘマウスと比較して、この値を有意に低下させ、Ｐｅｎｈ値は１．８７となる（ｐ＜０．０００１）（図６Ｂ）。この治療は、ｍｄｘマウスのＰｅｎｈ値を、健康なマウスの値と有意差がないレベルまで低下させる（Ｃ５７Ｂｌａｃｋ１０マウスのＰｅｎｈが１．０４であるのに対して、ｍｄｘマウスでは１．８７である；ｐ＜０．０５）．

ｂ．肺抵抗、コンプライアンス、及びエラスタンスに対するＢＩＯ１０１の効果の、ピストン人工呼吸器による分析
呼吸器系の機械的パラメータ、及びこれらのパラメータに対するＢＩＯ１０１での２ヶ月にわたる定期的治療（Ｄ６０）の影響を、より直接的に決定するために、上述のピストン人工呼吸器システムを用いて、メタコリンの用量の増大に応じた動的肺抵抗を測定した。

マウスを麻酔し、気管内カニューレを介してピストン人工呼吸器システムに接続した。機械的人工呼吸の開始後、各マウスに、０．１ｍＬの１０ｍｇ／ｍＬ臭化ロクロニウム溶液を腹腔内注射した。動物に対して、１５０呼吸／分の呼吸数で、３ｃｍＨ_２Ｏの呼気終末陽圧に対して１０ｍＬ／ｋｇの１回換気量で人工呼吸を行なった。持続時間１．２秒の強制振動操作（２．５Ｈｚ）、及び１～２０．５Ｈｚの１３の基本周波数を含む３秒の広帯域強制振動操作を用いて、呼吸メカニズムを評価した。呼吸器系の抵抗（Ｒ）を、マイクロコンピュータタイプの中央処理ユニットを用いて計算した。上記中央処理装置は、ピストン人工呼吸器システムに接続され、特に上記計算を実施するためのソフトウェアを含む。上記２つの操作を、メタコリンエアロゾルの各噴霧後に、１５秒毎に交互に実施し、メタコリンによって誘発される気管支収縮の応答時間の変化を測定した。このようにして、肺抵抗、コンプライアンス、及びエラスタンスを決定できた。

プレチスモグラフィで得られた結果と一致するように、治療されていないｍｄｘマウスは、健康なマウスＣ５７Ｂｌａｃｋ１０よりも高い気道抵抗を有する（ｐ＜０．００１）ことが観察された（図７Ａ）。治療の開始の６０日後、メタコリンの用量の０から２０ｍｇ／ｍＬへの増大に応じて、ＢＩＯ１０１で治療されたｍｄｘマウスは、治療されていないｍｄｘマウスに比べて有意に低い気道抵抗を示し（ｐ＜０．０００１）、これは健康な対照マウスで観察される肺抵抗のレベルと同等である（図８Ａ）。同様に、２ヶ月にわたるＢＩＯ１０１での定期的な治療により、ｍｄｘマウスで変化した２つのパラメータである肺コンプライアンス（ｐ＜０．０００１）及びエラスタンス（ｐ＜０．０００１）が有意に改善された（図７Ｂ、７Ｃ）。具体的には、試験した最大のメタコリン用量（２０ｍｇ／ｍＬ）において、ｍｄｘマウスは、対照マウスＣ５７Ｂｌａｃｋ１０と比較して有意に低い肺コンプライアンスを示した（それぞれ０．０１７ｍＬ／ｃｍＨ_２Ｏ及び０．０３１ｍＬ／ｃｍＨ_２Ｏ；ｐ＜０．０００１）。この肺コンプライアンスの欠陥は、ｍｄｘマウスにおいて、ＢＩＯ１０１による治療によって有意に修正される（０．０２９ｍＬ／ｃｍＨ_２Ｏ；ｐ＜０．０００１）（図８Ｂ）。同様に、肺エラスタンスは、対照マウスＣ５７Ｂｌａｃｋ１０と比較してｍｄｘマウスにおいて大幅に低く（６２．８ｃｍＨ_２Ｏ／ｍＬ及び３４．８ｃｍＨ_２Ｏ／ｍＬ；ｐ＜０．０５）、ＢＩＯ１０１による治療により、健康な対照マウスと同等に、及び治療されていないｍｄｘマウスよりも有意に高く維持される（３４．８ｃｍＨ_２Ｏ／ｍＬ及び６９．１ｃｍＨ_２Ｏ／ｍＬ；ｐ＜０．００１）（図８Ｃ）。

３．結論
これらの結果は、（飲用水中の５０ｍｇ／ｋｇ／日の）ＢＩＯ１０１による治療が、ｍｄｘマウス（デュシェンヌ型筋ジストロフィーの動物モデル）の呼吸機能を改善し、また長期にわたってこれを実現することを示す。呼吸機能に対するこの効果は、プレチスモグラフィの結果、特にＰｅｎｈの測定によって実証されるような呼吸パラメータ（吸気及び呼気の持続時間及び頻度）に関連しているだけでなく、ピストン人工呼吸器システムを用いた実験で実証されるような気道の構造の改善も実証している。実際に、このシステムのデータは、ｍｄｘマウスの肺の抵抗、コンプライアンス、及びエラスタンスという機械的呼吸パラメータに対する、ＢＩＯ１０１による治療の有益な効果を、有意に実証している。これらの観察結果は、神経筋疾患のマウスモデルにおいて、植物エクジソン、特にＢＩＯ１０１での治療によって、肺機能が経時的劣化から保護された結果である。

より一般的には、以上で検討されている、本発明の実装及び実施のための態様は、非限定的な例として記載されたものであること、従って他の変形例も考えられることに留意されたい。

参考文献
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Claims

後天性若しくは遺伝性神経筋疾患に起因する呼吸機能障害、又は気管支過反応に関連する呼吸機能障害の治療における哺乳類でのその使用のための、２０‐ヒドロキシエクジソン及び／又はその少なくとも１つの半合成誘導体を含む組成物であって、前記少なくとも１つの半合成誘導体が、
一般式（I）：
（式中、
Ｖ‐Ｕは炭素‐炭素単結合であり、Ｙはヒドロキシル基又は水素であり、又はＶ‐Ｕはエチレン性Ｃ＝Ｃ結合であり；
Ｘは酸素であり；
Ｑはカルボニル基であり；
Ｒ^１は：（Ｃ_１‐Ｃ_６）Ｗ（Ｃ_１‐Ｃ_６）基；（Ｃ_１‐Ｃ_６）Ｗ（Ｃ_１‐Ｃ_６）Ｗ（Ｃ_１‐Ｃ_６）基；（Ｃ_１‐Ｃ_６）Ｗ（Ｃ_１‐Ｃ_６）ＣＯ_２（Ｃ_１‐Ｃ_６）基；（Ｃ_１‐Ｃ_６）Ａ基、ただしＡは、ＯＨ、ＭｅＯ、（Ｃ_１‐Ｃ_６）、及びＣＯ_２（Ｃ_１‐Ｃ_６）から選択される基で任意に置換された複素環を表す；ＣＨ_２Ｂｒ基；および（２－ヒドロキシエチルスルファニル）メチル基から選択され；
Ｗは、Ｏ、及びＳから選択されるヘテロ原子である。）
の少なくとも１つの化合物、または
一般式（II）：
の化合物
を含む、組成物。
２０‐ヒドロキシエクジソンは、植物抽出物又は植物の一部分の抽出物の形態であり、
前記植物は、前記植物の乾燥重量の少なくとも０．５％の２０‐ヒドロキシエクジソンを含有する植物から選択され、
前記抽出物は、少なくとも９５％の２０‐ヒドロキシエクジソンを含む、請求項１に記載の、その使用のための組成物。
前記抽出物の医薬品としての応用の安全性、利用可能性、又は有効性に影響を及ぼし得る不純物を、前記抽出物の乾燥重量の０～０．０５％含む、請求項２に記載の、その使用のための組成物。
前記植物は、Ｓｔｅｍｍａｃａｎｔｈａｃａｒｔｈａｍｏｉｄｅｓ、Ｃｙａｎｏｔｉｓａｒａｃｈｎｏｉｄｅａ及びＣｙａｎｏｔｉｓｖａｇａから選択される、請求項２又は３に記載の、その使用のための組成物。
前記呼吸機能障害は、運動ニューロンの及び／又は神経筋接合部の及び／又は横紋筋の、神経筋疾患に起因する、請求項１～４のいずれか１項に記載の、その使用のための組成物。
前記呼吸機能障害は、横紋筋及び／又は平滑筋の障害に関連する、請求項１～５のいずれか１項に記載の、その使用のための組成物。
前記気管支過反応は、気管支平滑筋の機能に関連する、請求項１～４のいずれか１項に記載の、その使用のための組成物。
前記呼吸機能障害は、Ｐｅｎｈ値、ピーク吸気流、ピーク呼気流、弛緩時間、及び呼吸数から選択される呼吸パラメータのうちの少なくとも１つの状態に関連する、請求項１～７のいずれか１項に記載の、その使用のための組成物。
前記呼吸機能障害は、肺組織の機械的パラメータのうちの少なくとも１つの状態に関連する、請求項１～８のいずれか１項に記載の、その使用のための組成物。
前記呼吸機能障害は、肺コンプライアンスの低下、及び／又は肺抵抗の上昇、及び／又は肺エラスタンスの低下に関連する、請求項９に記載の、その使用のための組成物。
前記２０－ヒドロキシエクジソン及び／又は前記少なくとも１つの半合成誘導体は、ヒトでは、３～１５ｍｇ／ｋｇ／日の用量で投与される、請求項１～１０のいずれか１項に記載の、その使用のための組成物。
前記２０－ヒドロキシエクジソン及び／又は前記少なくとも１つの半合成誘導体は、成年のヒトでは、２００～１０００ｍｇ／日の用量を１回以上に分けて投与され、ヒトの小児又は幼児では、５～３５０ｍｇ／日の用量を１回以上に分けて投与される、請求項１～１１のいずれか１項に記載の、その使用のための組成物。
前記一般式（I）において：
Ｙはヒドロキシル基であり；
Ｒ^１は：（Ｃ_１‐Ｃ_６）Ｗ（Ｃ_１‐Ｃ_６）基；（Ｃ_１‐Ｃ_６）Ｗ（Ｃ_１‐Ｃ_６）Ｗ（Ｃ_１‐Ｃ_６）基；（Ｃ_１‐Ｃ_６）Ｗ（Ｃ_１‐Ｃ_６）ＣＯ_２（Ｃ_１‐Ｃ_６）基；（Ｃ_１‐Ｃ_６）Ａ基、ただしＡは、ＯＨ、ＭｅＯ、（Ｃ_１‐Ｃ_６）、及びＣＯ_２（Ｃ_１‐Ｃ_６）から選択される基で任意に置換された複素環を表す、から選択され；
Ｗは、Ｏ、及びＳから選択されるヘテロ原子である、請求項１に記載の、その使用のための組成物。
前記一般式（I）の前記少なくとも１つの化合物は：
‐Ｎｏ．１：（２Ｓ，３Ｒ，５Ｒ，１０Ｒ，１３Ｒ，１４Ｓ，１７Ｓ）‐２，３，１４‐トリヒドロキシ‐１０，１３‐ジメチル‐１７‐（２‐モルホリノアセチル）‐２，３，４，５，９，１１，１２，１５，１６，１７‐デカヒドロ‐１Ｈ‐シクロペンタ［ａ］フェナントレン‐６‐オン；
‐Ｎｏ．２：（２Ｓ，３Ｒ，５Ｒ，１０Ｒ，１３Ｒ，１４Ｓ，１７Ｓ）‐２，３，１４‐トリヒドロキシ‐１７‐［２‐（３‐ヒドロキシピロリジン‐１‐イル）アセチル］‐１０，１３‐ジメチル‐２，３，４，５，９，１１，１２，１５，１６，１７‐デカヒドロ‐１Ｈ‐シクロペンタ［ａ］フェナントレン‐６‐オン；
‐Ｎｏ．３：（２Ｓ，３Ｒ，５Ｒ，１０Ｒ，１３Ｒ，１４Ｓ，１７Ｓ）‐２，３，１４‐トリヒドロキシ‐１７‐［２‐（４‐ヒドロキシ‐１‐ピペリジル）アセチル］‐１０，１３‐ジメチル‐２，３，４，５，９，１１，１２，１５，１６，１７‐デカヒドロ‐１Ｈ‐シクロペンタ［ａ］フェナントレン‐６‐オン；
‐Ｎｏ．４：（２Ｓ，３Ｒ，５Ｒ，１０Ｒ，１３Ｒ，１４Ｓ，１７Ｓ）‐２，３，１４‐トリヒドロキシ‐１７‐［２‐［４‐（２‐ヒドロキシエチル）‐１‐ピペリジル］アセチル］‐１０，１３‐ジメチル‐２，３，４，５，９，１１，１２，１５，１６，１７‐デカヒドロ‐１Ｈ‐シクロペンタ［ａ］フェナントレン‐６‐オン；
‐Ｎｏ．６：２‐［２‐オキソ‐２‐［（２Ｓ，３Ｒ，５Ｒ，１０Ｒ，１３Ｒ，１４Ｓ，１７Ｓ）‐２，３，１４‐トリヒドロキシ‐１０，１３‐ジメチル‐６‐オキソ‐２，３，４，５，９，１１，１２，１５，１６，１７‐デカヒドロ‐１Ｈ‐シクロペンタ［ａ］フェナントレン‐１７‐イル］エチル］エチルスルファニルアセテート；
‐Ｎｏ．７：（２Ｓ，３Ｒ，５Ｒ，１０Ｒ，１３Ｒ，１４Ｓ，１７Ｓ）‐１７‐（２‐エチルスルファニルアセチル）‐２，３，１４‐トリヒドロキシ‐１０，１３‐ジメチル‐２，３，４，５，９，１１，１２，１５，１６，１７‐デカヒドロ‐１Ｈ‐シクロペンタ［ａ］フェナントレン‐６‐オン；
‐Ｎｏ．８：（２Ｓ，３Ｒ，５Ｒ，１０Ｒ，１３Ｒ，１４Ｓ，１７Ｓ）‐２，３，１４‐トリヒドロキシ‐１７‐［２‐（２‐ヒドロキシエチルスルファニル）アセチル］‐１０，１３‐ジメチル‐２，３，４，５，９，１１，１２，１５，１６，１７‐デカヒドロ‐１Ｈシクロペンタ［ａ］フェナントレン‐６‐オン
から選択される、請求項１に記載の、その使用のための組成物。