JP7667922B2 - 局所投与用の医薬組成物 - Google Patents

Description

関連出願の参照

本願は、先行する日本国出願である特願２０２２－２０６４９０（出願日：２０２２年１２月２３日）の優先権の利益を享受するものであり、その開示内容全体は引用することにより本明細書の一部とされる。

本発明は、局所投与用の医薬組成物に関する。

新型コロナウイルス（ＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２）をはじめとするウイルスまたは細菌等による感染症の世界的な蔓延が社会問題となっている。ＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２による新型コロナウイルス感染症（ＣＯＶＩＤ－１９）の治療薬としては、例えば、中和モノクローナル抗体を用いた抗体医薬品等の開発が進められてきた（非特許文献１～３）。一方で、医薬品として効能および効果が認められている新型コロナウイルス感染症予防薬はなく、その開発が求められている。特にウイルスは変異株が出現する可能性が高いため、さらに変異株に対してもその有効性が期待できる治療薬および予防薬の開発が求められている。

乳酸菌はヨーグルト等の発酵乳等に多く含まれており、飲食品として古くから用いられている。また、乳酸菌は経口摂取により腸内等で様々な生理活性をもたらすことが知られているが、医薬用途での局所投与による効果は知られていない。

Weinreich DM, et al., N Engl J Med., 2021; 384(3): 238-251. Piccicacco N, et al., Open Forum Infect Dis., 2021; 8(7): ofab292. Koehler J, et al., Infection, 2021; 49(6): 1313-1318.

本発明は、新規な局所投与用の医薬組成物の提供を目的とする。

本発明者らは、乳酸菌を局所投与することにより感染症の予防効果を高められることを見出した。本発明者らはまた、乳酸菌を局所投与することにより免疫賦活効果が奏されることを見出した。本発明はこれらの知見に基づくものである。

本発明によれば以下の発明が提供される。
［１］乳酸菌を有効成分として含有する、局所投与用の医薬組成物。
［２］局所投与が経鼻投与、舌下投与または吸入投与である、上記［１］に記載の医薬組成物。
［３］局所投与が、上気道および／または下気道に対する投与である、上記［１］または［２］に記載の医薬組成物。
［４］前記上気道が、鼻腔である、上記［３］に記載の医薬組成物。
［５］上気道および／または下気道においてプラズマサイトイド樹状細胞によるインターフェロンの産生を誘導するための、上記［１］～［４］のいずれかに記載の医薬組成物。
［６］前記医薬組成物の投与対象が感染症に罹患した後、該対象においてＩＦＮの産生が誘導される、上記［５］に記載の医薬組成物。
［７］感染症の予防または治療のための、または、投与対象の感染症への罹患リスク低減に用いるための、上記［１］～［６］のいずれかに記載の医薬組成物。
［８］感染症が、ウイルス感染症である、上記［７］に記載の医薬組成物。
［９］ウイルス感染症の予防が、ウイルス感染症の発症予防またはウイルス感染症の重症化予防である、上記［８］に記載の医薬組成物。
［１０］ウイルス感染症がＣＯＶＩＤ－１９またはインフルエンザウイルス感染症である、上記［８］または［９］に記載の医薬組成物。
［１１］ウイルス感染症が呼吸器系感染症の原因ウイルスが感染したものである、上記［８］～［１０］のいずれかに記載の医薬組成物。
［１２］呼吸器系ウイルス感染症の原因ウイルスがＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２またはインフルエンザウイルスである、上記［１１］に記載の医薬組成物。
［１３］哺乳動物に投与される、上記［１］～［１２］のいずれかに記載の医薬組成物。
［１４］哺乳動物がヒトである、上記［１３］に記載の医薬組成物。
［１５］投与回数が２回以上である、上記［１］～［１４］のいずれかに記載の医薬組成物。
［１６］投与間隔が１日以上である、上記［１］～［１５］のいずれかに記載の医薬組成物。
［１７］ウイルス感染症の予防の有効期間が、局所投与を行った最後の日から５６日間である、上記［８］～［１６］のいずれかに記載の医薬組成物。
［１８］乳酸菌の１日当たりの投与量（成体の体重５０ｋｇ基準）が、１ｍｇ以上１０００ｍｇ以下である、上記［１］～［１７］のいずれかに記載の医薬組成物。
［１９］乳酸菌がラクトコッカス・ラクティス・サブスピーシーズ・ラクティスＪＣＭ５８０５菌株である、上記［１］～［１８］のいずれかに記載の医薬組成物。
［２０］ラクトコッカス・ラクティス・サブスピーシーズ・ラクティスを有効成分として含有する、局所投与用組成物。
［２１］医薬組成物である、上記［２０］に記載の局所投与用組成物。
［２２］ウイルス感染部位に局所投与する、上記［８］～［１９］のいずれかに記載の医薬組成物。
［２３］乳酸菌を有効成分として含有する、局所投与するための免疫賦活用組成物。
［２４］顎下リンパ節および／または脾臓におけるＩＦＮ誘導性抗ウイルス遺伝子（ＩＳＧ）の発現を増強させるための、上記［２２］または［２３］に記載の免疫賦活用組成物。
［２５］ＩＳＧが、Ｖｉｐｅｒｉｎ、Ｉｓｇ１５およびＭｘ１からなる群から選択される１種または２種以上である、上記［２４］に記載の免疫賦活用組成物。
［２６］脾臓中のリンパ球に対するｐＤＣの比率を増加させるための、および／または、鼻粘膜中のリンパ球に対するｐＤＣの比率を増加させるための、上記［２２］～［２５］のいずれかに記載の免疫賦活用組成物。
［２７］鼻粘膜中のリンパ球に対するＣＤ１１ｂ^＋Ｓｉｇｌｅｃ－Ｈ^＋細胞の比率を増加させるための、上記［２２］～［２６］のいずれかに記載の免疫賦活用組成物。
［２８］有効量の乳酸菌またはそれを含んでなる組成物を、それを必要としている対象に局所投与する工程を含む、感染症の予防方法もしくは治療方法、感染症の罹患リスク低減方法または免疫賦活方法。
［２９］局所投与用の感染症の予防剤もしくは治療剤の製造のための、局所投与用の感染症の罹患リスク低減剤の製造のための、または局所投与用の免疫賦活剤の製造のための、あるいは、局所投与用の感染症の予防剤もしくは治療剤としての、局所投与用の感染症の罹患リスク低減剤としてのまたは局所投与用の免疫賦活剤としての、あるいは、局所投与による感染症の予防方法もしくは治療方法、局所投与による感染症の罹患リスク低減方法または局所投与による免疫賦活方法における、乳酸菌の使用。
［３０］局所投与による感染症の予防もしくは治療に用いるための、局所投与による感染症の罹患リスク低減に用いるための、または局所投与による免疫賦活に用いるための、乳酸菌。

本発明によれば、局所投与（特に経鼻投与）することにより、有効成分である乳酸菌による感染症の予防効果および免疫賦活効果をより高めることができる点で有利である。

図１は、経鼻投与した場合の対照群および乳酸菌投与群（６群）の感染前の体重に対する感染３日後の体重の割合を示す。 図２Ａは、経鼻投与した場合の対照群および乳酸菌投与群（６群）の感染３日後の肺におけるＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２のＲＮＡ量を示す。図２Ｂは、経鼻投与した場合の感染３日後の対照群および乳酸菌投与群（６群）のＢＡＬＦ中のＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２のＲＮＡ量を示す。 図３は、経鼻投与した場合の対照群および乳酸菌投与群（６群）の感染３日後のＢＡＬＦ中のＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２のウイルス力価（ウイルス量）を示す。 図４Ａは、経鼻投与した場合の対照群および乳酸菌投与群（５群）の感染３日後の血漿中のＩＦＮ－α濃度を示す。図４Ｂは、経鼻投与した場合の対照群および乳酸菌投与群（５群）の感染３日後のＢＡＬＦ中のＩＦＮ－α濃度を示す。 図５Ａは、経鼻投与した場合の対照群および乳酸菌投与群における各マウスの感染前の体重に対する感染後の体重の割合の経時変化を示す。図５Ｂは、経鼻投与した場合の対照群および乳酸菌投与群の感染前の体重に対する感染後の体重の割合の平均値の経時変化を示す。なお、図中の^＊はｐ＜０．０５、^＊＊はｐ＜０．０１を示し（マン・ホイットニーのＵ検定）、エラーバーは標準偏差を示す。 図６は、経鼻投与した場合の対照群および乳酸菌投与群（５群）の感染２日後のＮＡＬＴ中のＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２のＲＮＡ量を示す。なお、図中の－は幾何平均値を示す。 図７は、経鼻投与した場合の対照群および乳酸菌投与群の感染２日後の鼻腔洗浄液中のＡ型インフルエンザウイルス（Ｈ１Ｎ１）のＲＮＡ量を示す。なお、図中の^＊はｐ＜０．０５を示し（マン・ホイットニーのＵ検定）、－は幾何平均値を示す。 図８は、Ｌｏｗ Ｖｏｌｕｍｅ（－）群、Ｌｏｗ ｖｏｌｕｍｅ（＋）群、Ｈｉｇｈ Ｖｏｌｕｍｅ（－）群およびＨｉｇｈ Ｖｏｌｕｍｅ（＋）群における、Ｄａｙ（－３）の体重に対する、Ｄａｙ（－２）、Ｄａｙ（－１）およびＤａｙ（０）の体重の割合（相対的体重（Ｄａｙ（－３）基準）（％）を示す。なお、図中のエラーバーは標準偏差を示す。 図９は、Ｌｏｗ Ｖｏｌｕｍｅ（－）群、Ｌｏｗ ｖｏｌｕｍｅ（＋）群、Ｈｉｇｈ Ｖｏｌｕｍｅ（－）群およびＨｉｇｈ Ｖｏｌｕｍｅ（＋）群の顎下リンパ節における、Ｖｉｐｅｒｉｎ、Ｉｓｇ１５、Ｍｘ１の相対的ｍＲＮＡ発現量を示す。なお、図中の^＊はｐ＜０．０５、^＊＊はｐ＜０．０１を示し（スチューデントのｔ検定（Ｓｔｕｄｅｎｔ’ｓ ｔ－ｔｅｓｔ）、エラーバーは標準偏差を示す。 図１０は、Ｌｏｗ Ｖｏｌｕｍｅ（－）群、Ｌｏｗ ｖｏｌｕｍｅ（＋）群、Ｈｉｇｈ Ｖｏｌｕｍｅ（－）群およびＨｉｇｈ Ｖｏｌｕｍｅ（＋）群の脾臓における、Ｖｉｐｅｒｉｎ、Ｉｓｇ１５、Ｍｘ１の相対的ｍＲＮＡ発現量を示す。なお、図中の^＊はｐ＜０．０５を示し（スチューデントのｔ検定（Ｓｔｕｄｅｎｔ’ｓ ｔ－ｔｅｓｔ）、エラーバーは標準偏差を示す。 図１１は、Ｌｏｗ Ｖｏｌｕｍｅ（－）群、Ｌｏｗ ｖｏｌｕｍｅ（＋）群、Ｈｉｇｈ Ｖｏｌｕｍｅ（－）群およびＨｉｇｈ Ｖｏｌｕｍｅ（＋）群の肺における、Ｖｉｐｅｒｉｎ、Ｉｓｇ１５、Ｍｘ１の相対的ｍＲＮＡ発現量を示す。なお、図中のエラーバーは標準偏差を示す）。 図１２Ａは、Ｌｏｗ Ｖｏｌｕｍｅ（－）群およびＬｏｗ ｖｏｌｕｍｅ（＋）群の脾臓のリンパ球分画におけるＣＤ１１ｃおよびＳｉｇｌｅｃ－Ｈに関するＦＡＣＳ解析像を示す。なお、ＣＤ１１ｃ^＋ＳＩｇｌｅｃ－Ｈ^＋細胞集団をｐＤＣとして解析した。図１２Ｂは、Ｌｏｗ Ｖｏｌｕｍｅ（－）群およびＬｏｗ ｖｏｌｕｍｅ（＋）群の脾臓中のリンパ球に対するｐＤＣの比率（％）を示す。なお、図中の－は平均値を示す。 図１３は、Ｌｏｗ Ｖｏｌｕｍｅ（－）群およびＬｏｗ ｖｏｌｕｍｅ（＋）群おける、脾臓中のｐＤＣにおけるＭＨＣクラスＩＩ（Ｉ－Ａ／Ｉ－Ｅ）（Ａ）およびＣＤ８６（Ｂ）の発現量（ＭＦＩ：Ｍｅｄｉａｎ Ｆｌｕｒｏｒｅｓｃｅｎｃｅ Ｉｎｔｅｎｓｉｔｙ）を示す。なお、図中の－は平均値を示す。 図１４Ａは、Ｌｏｗ Ｖｏｌｕｍｅ（－）群およびＬｏｗ ｖｏｌｕｍｅ（＋）群の顎下リンパ節のリンパ球分画におけるＣＤ１１ｃおよびＳｉｇｌｅｃ－Ｈに関するＦＡＣＳ解析像を示す。なお、ＣＤ１１ｃ^＋ＳＩｇｌｅｃ－Ｈ^＋細胞集団をｐＤＣとして解析した。図１４Ｂは、Ｌｏｗ Ｖｏｌｕｍｅ（－）群およびＬｏｗ ｖｏｌｕｍｅ（＋）群の顎下リンパ節中のリンパ球に対するｐＤＣの比率（％）を示す。図中の^＊＊はｐ＜０．０１を示し（スチューデントのｔ検定（Ｓｔｕｄｅｎｔ’ｓ ｔ－ｔｅｓｔ）、－は平均値を示す）。 図１５は、Ｌｏｗ Ｖｏｌｕｍｅ（－）群およびＬｏｗ ｖｏｌｕｍｅ（＋）群おける、顎下リンパ節のｐＤＣにおけるＭＨＣクラスＩＩ（Ｉ－Ａ／Ｉ－Ｅ）（Ａ）およびＣＤ８６（Ｂ）の発現量（ＭＦＩ）を示す。なお、図中の－は平均値を示す。 図１６Ａは、Ｌｏｗ Ｖｏｌｕｍｅ（－）群およびＬｏｗ ｖｏｌｕｍｅ（＋）群の鼻粘膜のリンパ球分画におけるＣＤ１１ｂおよびＳｉｇｌｅｃ－Ｈに関するＦＡＣＳ解析像を示す。ＣＤ１１ｂ^－Ｓｉｇｌｅｃ－Ｈ^＋細胞集団をｐＤＣ、ＣＤ１１ｂ^＋Ｓｉｇｌｅｃ－Ｈ^＋細胞集団をＣＤ１１ｂ^＋Ｓｉｇｋｅｃ－Ｈ^＋細胞として解析した。図１６Ｂは、Ｌｏｗ Ｖｏｌｕｍｅ（－）群およびＬｏｗ ｖｏｌｕｍｅ（＋）群の鼻粘膜中のリンパ球に対するｐＤＣおよびＣＤ１１ｂ^＋Ｓｉｇｌｅｃ－Ｈ^＋細胞の比率（％）を示す。なお、図中の^＊はｐ＜０．０５、^＊＊はｐ＜０．０１を示し（スチューデントのｔ検定（Ｓｔｕｄｅｎｔ’ｓ ｔ－ｔｅｓｔ）、－は平均値を示す。 図１７Ａは、Ｌｏｗ Ｖｏｌｕｍｅ（－）群およびＬｏｗ ｖｏｌｕｍｅ（＋）群における、鼻粘膜中のｐＤＣにおけるＭＨＣクラスＩＩ（Ｉ－Ａ／Ｉ－Ｅ）（Ａ）およびＣＤ８６（Ｂ）の発現量（ＭＦＩ）を示す。図１７Ｂは、Ｌｏｗ Ｖｏｌｕｍｅ（－）群およびＬｏｗ ｖｏｌｕｍｅ（＋）群における、鼻粘膜中のＣＤ１１ｂ^＋Ｓｉｇｌｅｃ－Ｈ^＋細胞におけるＭＨＣクラスＩＩ（Ｉ－Ａ／Ｉ－Ｅ）（Ａ）およびＣＤ８６（Ｂ）の発現量（ＭＦＩ）を示す。なお、図中の－は平均値を示す。 図１８は、Ｌｏｗ Ｖｏｌｕｍｅ（－）群およびＬｏｗ ｖｏｌｕｍｅ（＋）群から採取した鼻粘膜細胞を培養した時の、ＣｐＧ－Ａ添加なし（ＣｐＧ－Ａ ０μＭ）およびＣｐＧ－Ａ添加あり（ＣｐＧ－Ａ １μＭ）の培養上清中のＩＦＮ－α産生量（ｐｇ／ｍｌ）を示す。なお、図中の^＊＊はｐ＜０．０１を示し（スチューデントのｔ検定（Ｓｔｕｄｅｎｔ’ｓ ｔ－ｔｅｓｔ）、－は平均値を示す。 図１９は、Ｌｏｗ Ｖｏｌｕｍｅ（－）群およびＬｏｗ ｖｏｌｕｍｅ（＋）群から採取した鼻粘膜細胞を培養した時の、不活化済ＨＩＮ１添加なし（ＨＩＮ１ ０μｇ／ｍｌ）および不活化済ＨＩＮ１添加あり（ＨＩＮ１ ５μｇ／ｍｌ）の培養上清中のＩＦＮ－α産生量（ｐｇ／ｍｌ）（Ａ）、ＩＦＮ－β産生量（ｐｇ／ｍｌ）（Ｂ）およびＩＦＮ－λ産生量（ｐｇ／ｍｌ）（Ｃ）を示す。なお、図中の－は平均値を示す。 図２０Ａは、経口投与した場合の対照群および乳酸菌投与群（６群）の感染２日後のＮＡＬＴにおけるＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２のＲＮＡ量を示す（^＊はｐ＝０．０１０４を示す（マン・ホイットニー検定（Ｍａｎｎ－Ｗｈｉｔｎｅｙ ｔｅｓｔ））。図２０Ｂは、経口投与した場合の対照群および乳酸菌投与群（６群）の感染３日後のＮＡＬＴにおけるＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２のＲＮＡ量を示す。 図２１は、経口投与した場合の対照群および乳酸菌投与群（６群）の感染３日後の肺におけるＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２のＲＮＡ量を示す（^＊はｐ＝０．０２８１を示す（マン・ホイットニー検定（Ｍａｎｎ－Ｗｈｉｔｎｅｙ ｔｅｓｔ））。

発明の具体的説明

本発明は、乳酸菌を有効成分として含有する局所投与用の医薬組成物である。

本発明の有効成分である乳酸菌は、特に限定されないが、好ましくはインターフェロン（ＩＦＮ：Ｉｎｔｅｒｆｅｒｏｎ）産生を誘導する性質を有する乳酸菌であり、より好ましくはプラズマサイトイド樹状細胞（ｐＤＣ：ｐｌａｓｍａｃｙｔｏｉｄ ｄｅｎｄｒｔｉｃ ｃｅｌｌ）を活性化し、かつ、少なくともＩＦＮ産生を誘導する性質を有する乳酸菌である。例えば、１０μｇ／ｍｌでヒト末梢血単核細胞由来のプラズマサイトイド樹状細胞（ｐＤＣ）培養液に添加した場合に５０ｐｇ／ｍＬ以上、好ましくは１００ｐｇ／ｍｌ以上のＩＦＮ－α産生を誘導する性質を有する乳酸菌を使用することができる。

本発明の有効成分である乳酸菌はまた、本発明の医薬組成物の投与対象が感染症に罹患した後、該対象においてＩＦＮの産生を誘導する性質を有する乳酸菌とすることができる。

本発明のＩＦＮ産生を誘導する性質を有する乳酸菌は、好ましくは、Ｔｙｐｅ Ｉ ＩＦＮ（Ｉ型インターフェロン）、Ｔｙｐｅ ＩＩ ＩＦＮ（ＩＩ型インターフェロン）、Ｔｙｐｅ ＩＩＩ ＩＦＮ（ＩＩＩ型インターフェロン）のいずれか１種以上のＩＦＮの産生を誘導し得る。Ｔｙｐｅ Ｉ ＩＦＮはウイルス感染に有効とされるサイトカインであり、ＩＦＮ－α（１、２、４、５、６、７、８、１０、１３、１４、１６、１７、２１）およびＩＦＮ－β等が含まれる。Ｔｙｐｅ ＩＩ ＩＦＮにはＩＦＮ－γが含まれ、Ｔｙｐｅ ＩＩＩ ＩＦＮにはＩＦＮ－λが含まれる。本発明のＩＦＮ産生を誘導する性質を有する乳酸菌は、この中でも特にＴｙｐｅ Ｉ ＩＦＮの産生誘導活性を有するものが好ましい。本発明のＩＦＮ産生を誘導する性質を有する乳酸菌によりｐＤＣが活性化されると、活性化ｐＤＣの特徴である細胞突起が出現し、Ｔｙｐｅ Ｉ ＩＦＮおよびＴｙｐｅＩＩＩ ＩＦＮの産生が誘導され、さらに、ＮＫ細胞またはＴｈ１細胞からのＩＦＮ－γ等のＴｙｐｅ ＩＩ ＩＦＮの産生も誘導され得る。

本発明の有効成分であるＩＦＮ産生を誘導する性質を有する乳酸菌が産生を誘導し得るＩＦＮは、特に限定されないが、ＩＦＮ－α、ＩＦＮ－βおよびＩＦＮ－λからなる群から選択される１種以上であることが好ましく、ＩＦＮ－α、ＩＦＮ－βおよびＩＦＮ－λからなる群から選択される２種以上であることがより好ましく、ＩＦＮ－α、ＩＦＮ－βおよびＩＦＮ－λからなる群から選択される２種以上であって、かつ、２種以上のＩＦＮの内の少なくとも１種がＩＦＮ－αであることがさらに好ましく、２種以上のＩＦＮの内の少なくとも２種がＩＦＮ－αおよびＩＦＮ－βであることがさらにまた好ましく、ＩＦＮ－α、ＩＦＮ－βおよびＩＦＮ－λの３種であることが特に好ましい。

本発明の有効成分であるＩＦＮ産生を誘導する性質を有する乳酸菌がｐＤＣを活性化し、少なくともＩＦＮ産生を誘導し得るものであるかどうかは、例えば、候補乳酸菌をマウス等の哺乳類の骨髄細胞の共存下で培養した場合に、ｐＤＣが活性化され、ＩＦＮの産生が誘導されるかどうかを測定することにより確認することができる。例えば、ＩＦＮ－αの産生は、培養液中のＩＦＮ－α濃度をＥＬＩＳＡ等により測定することができ、具体的には、赤血球除去したマウス骨髄細胞を１０％のウシ胎児血清（ＦＣＳ）、２μＭのβ－メルカプトエタノールを含有するＲＰＭＩ培地（ＳＩＧＭＡ社）に、５×１０^５個／ｍＬになるように縣濁し、得られた細胞懸濁液に、ｐＤＣ誘導サイトカインとしてＦｌｔ－３Ｌを終濃度１００ｎｇ／ｍｌで添加し、ＣＯ_２インキュベータ内で３７℃、５％ＣＯ_２にて培養し、７日後に乳酸菌株を１０μｇ／ｍｌで添加し、４８時間後に培養上清を回収して、培養上清中のＩＦＮ－α濃度をＩＦＮ－α測定キット（ＰＢＬ社）を用いてＥＬＩＳＡ法にて測定することができる。

本発明の有効成分である乳酸菌は、特に限定されるものではないが、乳酸球菌が挙げられ、例えば、ラクトコッカス（Lactococcus）属、ロイコノストック（Leuconostoc）属、ぺディオコッカス（Pediococcus）属、ストレプトコッカス（Streptococcus）属、エンテロコッカス（Enterococcus）属、ラクトバチラス（Lactobacillus）属およびオエノコッカス（Oenococcus）属、ビフィドバクテリウム（Bifidobacterium）属、ワイセラ（Weissella）属およびテトラジェノコッカス（Tetragenococcus）属に属する乳酸菌が挙げられる。本発明の有効成分である乳酸菌は、好ましくは、ラクトコッカス属またはペディオコッカス属に属する乳酸菌である。また、本発明の有効成分である乳酸菌は、１種の菌種または菌株を用いることができ、２種以上の菌種または菌株を組み合わせて用いることもできる。

ラクトコッカス属細菌としては、例えば、ラクトコッカス・ラクティス（Lactococcus lactis）ラクトコッカス・ラクティス・サブスピーシーズ・ラクティス（Lactococcus lactis subsp. lactis）、ラクトコッカス・ガルビエアエ（Lactococcus garvieae）、ラクトコッカス・ラクティス・サブスピーシーズ・クレモリス（Lactococcus lactis subsp. cremoris）、ラクトコッカス・ラクティス・サブスピーシーズ・ホールドニアエ（Lactococcus lactis subsp. cremoris）等が挙げられ、ｐＤＣを活性化し、かつ、少なくともＩＦＮ産生を誘導し得る観点からラクトコッカス・ラクティス・サブスピーシーズ・ラクティスが好ましい。

ラクトコッカス属細菌の具体例としては、例えば、ラクトコッカス・ラクティス・サブスピーシーズ・ラクティスJCM5805、ラクトコッカス・ラクティス・サブスピーシーズ・ラクティスNBRC12007、ラクトコッカス・ラクティス・サブスピーシーズ・ラクティスNRIC1150、ラクトコッカス・ラクティス・サブスピーシーズ・ラクティスJCM20101、ラクトコッカス・ラクティス・サブスピーシーズ・ラクティスJCM7638、ラクトコッカス・ラクティス・サブスピーシーズ・ラクティスATCC11454、ラクトコッカス・ガルビエアエNBRC100934、ラクトコッカス・ラクティス・サブスピーシーズ・クレモリスJCM16167、ラクトコッカス・ラクティス・サブスピーシーズ・クレモリスNBRC100676、ラクトコッカス・ラクティス・サブスピーシーズ・ホールドニアエJCM1180、ラクトコッカス・ラクティス・サブスピーシーズ・ホールドニアエJCM11040およびラクトコッカス・プランタラムJCM11056等が挙げられ、ｐＤＣを活性化し、かつ、少なくともＩＦＮ産生を誘導し得る観点からラクトコッカス・ラクティス・サブスピーシーズ・ラクティスJCM5805が好ましい。

ロイコノストック属細菌としては、例えば、ロイコノストック・ラクティス（Leuconostoc lactis）等が挙げられる。ロイコノストック属細菌の具体例としては、例えば、ロイコノストック・ラクティスNBRC12455等が挙げられる。

ペディオコッカス属細菌としては、例えば、ペディオコッカス・アシディラクティシ（Pediococcus acidilactici）、ペディオコッカス・ペントサセウス（Pediococcus pentosaceus）、ペディオコッカス・セリコーラ（Pediococcus cellicola）、ペディオコッカス・クラウッセニー（Pediococcus claussenii）、ペディオコッカス・ダムノサス（Pediococcus damnosus）、ペディオコッカス・エタノーリデュランス（Pediococcus ethanolidurans）、ペディオコッカス・イノピナタス（Pediococcus inopinatus）、ペディオコッカス・パルヴルス（Pediococcus parvulus）、ペディオコッカス・スティレッシー（Pediococcus stilesii）等が挙げられる。ペディオコッカス属細菌の具体例としては、例えば、ペディオコッカス・アシディラクティシJCM8797、ペディオコッカス・アシディラクティシK15およびペディオコッカス・ダムノサスJCM5886等が挙げられる。

ストレプトコッカス属細菌としては、例えば、ストレプトコッカス・サーモフィラス等が挙げられる。ストレプトコッカス属細菌の具体例としては、例えば、ストレプトコッカス・サーモフィラスＳＢＣ８７８１等が挙げられる。

エンテロコッカス属細菌としては、例えば、エンテロコッカス・アルセディニス（Enterococcus alcedinis）等が挙げられる。

ラクトバチラス属細菌としては、例えば、ラクトバチラス・パラカゼイ（Lactobacillus paracasei）、ラクトバチラス・デルブルエッキ（Lactobacillus delbrueckii）、ラクトバチラス・アシドフィラス（Lactobacillus acidophilus）、ラクトバチラス・カゼイ（Lactobacillus casei）、ラクトバチラス・フルクティヴォランス（Lactobacillus fructivorans）、ラクトバチラス・ヒルガルディー（Lactobacillus hilgardii）、ラクトバチラス・ラムノサス（Lactobacillus rhamnosus）、ラクトバチラス・プランタラム（Lactobacillus plantarum）、ラクトバチラス・ガセリ（Lactobacillus gasseri）、ラクトバチラス・アシドフィルス（Lactobacillus acidophilus）、ラクトバチラス・ブルガリクス（Lactobacillus bulgaricus）が挙げられる。ラクトバチラス属細菌の具体例としては、例えば、ラクトバチラス・パラカゼイKW3110、ラクトバチラス・パラカゼイMCC1849、ラクトバチラス・パラカゼイK71、ラクトバチラス・ラムノサスGG、ラクトバチラス・ラムノサスCRL1505、ラクトバチラス・ガセリSBT2055、ラクトバチラス・パラケフィリ（新分類ではレンチラクトバチラス・パラケフィリ）JCM8573、ラクトバチラス・ペントーサス（新分類ではラクチプランチバチラス・ペントーサス）ONRICb0240、ラクトバチラス・プランタラム（新分類ではラクチプランチバチラス・プランタラム）L-137およびラクトバチラス・アシドフィルスL-92またはラクトバチラス・ブルガリクスOLL1073R-1（菌体外多糖を有する当該株を含む）等が挙げられる。本発明において、ラクトバチラス属細菌は、飲料中の水分散性に優れるという観点から、例えば、ラクトバチラス・パラカゼイ、ラクトバチラス・デルブルエッキ、ラクトバチラス・アシドフィラス、ラクトバチラス・カゼイ、ラクトバチラス・フルクティヴォランス、ラクトバチラス・ヒルガルディーおよびラクトバチラス・ラムノサスからなる群から選択される１種または２種以上とすることができる。

オエノコッカス属細菌としては、例えば、オエノコッカス・オエニ（Oenococcus oeni）等が挙げられる。オエノコッカス属細菌の具体例としては、オエノコッカス・オエニＪＣＭ６１２５等が挙げられる。

ビフィドバクテリウム属細菌としては、例えば、ビフィドバクテリウム・アニマリス・サブスピーシズ・ラクティス（Bifidobacterium animalis subsp. lactis）およびビフィドバクテリウム・ロンガム・サブスピーシーズ・インファンティス（Bifidobacterium longum subsp. infantis）等が挙げられる。ビフィドバクテリウム属細菌の具体例としては、ビフィドバクテリウム・アニマリス・サブスピーシズ・ラクティスＪＣＭ１０６０２およびビフィドバクテリウム・ロンガム・サブスピーシーズ・インファンティスＪＣＭ１２２２等が挙げられる。

ワイセラ属細菌としては、例えば、ワイセラ・パラメセンテロイデス（Weissella paramesenteroides）及びワイセラ・ビリデスセンス（Weissella viridescens）等が挙げられる。ワイセラ属細菌の具体例としては、ワイセラ・パラメセンテロイデスＪＣＭ９８９０及びワイセラ・ビリデスセンスＪＣＭ１１７４等が挙げられる。

テトラジェノコッカス属細菌としては、例えば、テトラジェノコッカス・ハロフィルス（Tetragenococcus halophilus）等が挙げられる。テトラジェノコッカス属細菌の具体例としては、テトラジェノコッカス・ハロフィルスＮＲＩＣ００９８等が挙げられる。

本発明において、乳酸菌は公知の寄託機関等から入手することができ、例えば上記の乳酸球菌株のうち、JCM菌株は、理化学研究所・バイオリソースセンター・微生物材料開発室（茨城県つくば市高野台３丁目１番地の１）から、NBRC菌株は、独立行政法人製品評価技術基盤機構生物遺伝資源部門（千葉県木更津市かずさ鎌足２丁目５番８号）から、NRIC菌株は、東京農業大学・菌株保存室（東京都世田谷区桜丘１丁目１番１号）から、ATCC菌株は、American type culture collection（米国）から、それぞれ入手することができる。

本発明において有効成分として用いられる乳酸菌は、乳酸菌の培養物を含んでもよい。培養物とは、生菌体、死菌体、生菌体または死菌体の破砕物、生菌体または死菌体の凍結乾燥物、該凍結乾燥物の破砕物、生菌体または死菌体の酵素処理物、培養液、培養液抽出物等を含み、乳酸菌の一部や乳酸菌の処理物も含む。死菌体は、生菌体を処理することで得ることができ、例えば、加熱処理、抗生物質等の薬物による処理、ホルマリン等の化学物質による処理、紫外線による処理およびγ線等の放射線による処理のいずれか１または２以上の組合せにより得ることができる。処理物は、例えば、加熱菌体（死菌体）、その凍結乾燥物、これらを含む培養物を含み、さらに、超音波等による菌体の破砕液および菌体の酵素処理液を含む。また、処理物には、細胞壁を酵素または機械的手段により除去した処理物等も含む。さらに、菌体を界面活性剤等によって溶解した後、エタノール等によって沈殿させて得られる核酸含有画分も含まれる。さらに、本発明において有効成分として用いられる乳酸菌には死菌体を含むこともできる。さらに、上記乳酸菌の培養物には乳酸菌由来のＤＮＡおよびＲＮＡが含まれ、乳酸菌由来のＤＮＡおよびＲＮＡは、好ましくはｐＤＣを活性化し、かつ、少なくともＩＦＮ産生を誘導し得るものである。

乳酸菌の培養は、公知の培地を用いた公知の方法で行うことができる。培地としては、例えば、ＭＲＳ培地、ＧＡＭ培地およびＬＭ１７培地等を用いることができ、無機塩類、ビタミン、アミノ酸、抗生物質および血清等を適宜添加して用いることができる。培養は、２５～４０℃で数時間～数日行えばよい。

培養後、乳酸菌菌体を遠心分離またはろ過により集菌することで乳酸菌の菌体を得ることができる。死菌体として用いる場合、オートクレーブ等により殺菌不活化して用いてもよい。

本発明において局所投与は、有効成分である乳酸菌が直接作用する部位への局所的な投与を意味するが、例えば、経鼻投与、舌下投与、吸入投与、バッカル投与、経皮投与、経直腸投与、経膣投与、経肺投与、経気道投与（気管内投与）および点眼投与が挙げられる。局所投与としては、感染予防効果または感染抑制効果を高める点および投与負担軽減の点で、好ましくは経鼻投与、舌下投与および吸入投与である。局所投与では、有効成分である乳酸菌が、例えば、鼻腔、舌下、咽頭、喉頭、気道、気管支、肺、膣、皮膚、眼および腸等の局所部位における粘膜を介して吸収されることが想定される。また、鼻腔から乳酸菌を投与する場合には、好ましくは、投与箇所はワルダイエル咽頭輪（例えば、咽頭扁桃、上咽頭（鼻咽頭）、口蓋扁桃、中咽頭または舌扁桃）である。局所投与は、内服剤等としての投与する経口投与と比べて、有効成分であるｐＤＣを活性化し、かつ、少なくともＩＦＮ産生を誘導する性質を有する乳酸菌を当該局所周辺に存在するｐＤＣや従来型樹状細胞（ｃＤＣ）等に直接作用させることができるため、感染予防効果または感染抑制効果が高まる点で有利である。

本発明において局所投与に適した剤型（製剤）は当業者に周知であり、目的に応じて適宜選択うることができる。剤型としては、例えば、点鼻剤（例えば、点鼻粉末剤、点鼻液剤）、吸入剤（例えば、吸入エアゾール剤、吸入粉末剤、吸入液剤）、舌下剤、バッカル投与剤、注射剤（皮内注射、皮下注射、筋肉内注射、静脈内注射を含む）、軟膏剤、クリーム剤、ゲル剤、坐剤、貼付剤および湿布剤が挙げられる。これらの剤型は、当分野で通常行われている手法（例えば、第十八改正日本薬局方 製剤総則等に記載の公知の方法）により、薬学上許容される担体（溶剤を含む）を用いて剤型化（製剤化）することができる。

本発明において、点鼻剤としては、特に限定されるものではないが、例えば、乳酸菌を、精製水もしくは生理食塩水等の液体または担体からなる粉体中等に分散させることにより調製できる。また、点鼻剤用の公知の噴霧器等に充填することにより点鼻剤として提供することができる。

本発明において、吸入剤としては、特に限定されるものではないが、例えば、乳酸菌を、精製水もしくは生理食塩水等の液体または担体からなる粉体中等に分散させることにより調製し、吸入剤用の公知の吸入器等に充填することにより吸入剤として提供できる。また、乳酸菌とともに水粒子または水蒸気を経口または経鼻等で吸入させる手段により提供することができる。具体的な手段としては、ネブライザー等の水粒子吸入が可能な吸入器により吸入させる方法、空気中の酸素との反応により発熱すると共に水蒸気を発生し、温められた水蒸気を対象に供給可能な蒸気発生具により吸入させる方法等が挙げられる。

ネブライザーは、超音波ネブライザー、メッシュ式ネブライザーまたはコンプレッサー式ネブライザーが好ましい。

吸入される水粒子の粒子径は、１０μｍ未満であることが好ましく、１～８μｍであることがより好ましい。ここで、水粒子の粒子径は、光散乱法によって測定することができる。

製剤化において薬学上許容される担体としては、限定されるものではないが、例えば、賦形剤、粘稠剤、滑沢剤、結合剤、崩壊剤、溶剤、溶解補助剤、懸濁化剤、乳化剤、等張化剤、緩衝剤、無痛化剤および安定化剤等が挙げられる。また、必要に応じて、保存剤（防腐剤）、ｐＨ調整剤、清涼化剤、抗酸化剤、湿潤化剤、粘着剤および矯臭剤等の添加物を含むことができる。

賦形剤としては、例えば、乳糖、白糖、Ｄ－マンニトール、澱粉、コーンスターチ、結晶セルロースおよび軽質無水ケイ酸等が挙げられる。

粘稠剤としては、例えば、グリセリン等の多価アルコール、メチルセルロース、カルボキシメチルセルロース、ヒドロキシプロピルメチルセルロース等のセルロース類、ポリビニルアルコール、ポリビニルピロリドン、カルボキシビニルポリマー、カルボキシメチルセルロースナトリウム等の親水性高分子、アルギン酸ナトリウム、コンドロイチン硫酸およびポリエチレングリコール等が挙げられる。

滑沢剤としては、例えば、ステアリン酸マグネシウム、ステアリン酸カルシウム、タルクおよびコロイドシリカ等が挙げられる。

結合剤としては、例えば、結晶セルロース、白糖、デキストリン、ヒドロキシプロピルセルロース、ヒドロキシプロピルメチルセルロース、ポリビニルピロリドン、澱粉、ショ糖、ゼラチン、メチルセルロースおよびカルボキシメチルセルロースナトリウム等が挙げられる。

崩壊剤としては、例えば、澱粉、カルボキシメチルセルロース、カルボキシメチルセルロースカルシウムおよびＬ－ヒドロキシプロピルセルロース等が挙げられる。

溶剤としては、例えば、水（精製水、純水等を含む）、エタノール、イソプロピルアルコールおよびプロピレングリコール等が挙げられる。

溶解補助剤としては、例えば、メチルセルロース、カルボキシメチルセルロース、ヒドロキシプロピルメチルセルロース等のセルロース類；ポリエチレングリコール、プロピレングリコール、エタノール、トリスアミノメタン、コレステロール、トリエタノールアミン、炭酸ナトリウム、クエン酸ナトリウムおよびポリビニルピロリドン等が挙げられる。

懸濁化剤としては、例えば、ラウリル硫酸ナトリウム、ラウリルアミノプロピオン酸、レシチン、塩化ベンザルコニウム、モノステアリン酸グリセリン、ポリオキシエチレン硬化ヒマシ油、ポリソルベート等の界面活性剤、グリセリン等の多価アルコール、ソルビトール、マンニトール、ショ糖等の糖類、メチルセルロース、カルボキシメチルセルロース、ヒドロキシプロピルメチルセルロース等のセルロース類、ポリビニルアルコール、ポリビニルピロリドン、カルボキシビニルポリマー等の親水性高分子およびコンドロイチン硫酸等が挙げられる。

等張化剤としては、例えば、ブドウ糖、Ｄ－ソルビトール、塩化ナトリウム、グリセリン、塩化カリウム、プロピレングリコールおよびショ糖等が挙げられる。

緩衝剤としては、例えば、リン酸塩（リン酸水素ナトリウム、リン酸二水素ナトリウム等）、ホウ酸、ホウ砂、酢酸塩（酢酸ナトリウム等）、炭酸塩（炭酸ナトリウム、炭酸カルシウム、炭酸カリウム等）、クエン酸およびＬ－グルタミン酸ナトリウム等が挙げられる。

無痛化剤としては、例えば、ベンジルアルコール、クロロブタノール、プロピレングリコール、アミノ安息香酸エチルおよびリドカイン等が挙げられる。

安定化剤としては、例えば、亜硫酸ナトリウム、亜硫酸水素ナトリウム、メタ亜硫酸水素ナトリウム、チオ硫酸ナトリウム、ロンガリット、チオグリセロール、チオグリコール酸、チオ乳酸、システイン、グルタチオン、チオ酢酸、メチオニン、チオソルビトール、チオグルコース、チオ尿素等の硫黄化合物、ホウ酸、ホウ砂、リン酸、メタリン酸、炭酸ナトリウム、炭酸水素ナトリウム等の無機酸およびその塩類、ギ酸、シュウ酸、酒石酸、クエン酸、エデト酸等の有機酸およびその塩類（エデト酸ナトリウム等）、アセトアミド、ジエチルアセトアミド、ニコチン酸アミド、尿素、バルビタール等の酸アミド、尿素誘導体、グリコール、プロピレングリコール、グリセリン、ポリエチレングリコール、ブドウ糖、アスコルビン酸等の多価アルコール、糖類、フェノール、キノン、クマロン、イソクマロン等のフェノール類、ジブチルヒドロキシトルエン、グリシン、グルタミン酸、リジン、フェニルアラニン、カゼイン、エデスチン等のアミノ酸およびタンパク質等が挙げられる。

乳化剤としては、例えば、グリセリンエステル（モノオレイン酸グリセリン）、ショ糖脂肪酸エステル、レシチン（植物レシチン、卵黄レシチン、大豆レシチン等）、各種界面活性剤（アルキルベンゼンスルホン酸塩型乳化剤、塩化ベンザルコニウム、セスキオレイン酸ソルビタン、ドデシルベンゼンスルホン酸等）およびトリエタノールアミン等が挙げられる。

保存剤（防腐剤）としては、例えば、パラオキシ安息香酸プロピル、パラオキシ安息香酸ブチル等のパラオキシ安息香酸エステル類、メチルパラベン、エチルパラベン、プロピルバラベン、ブチルパラベン等のパラベン類、塩化ベンザルコニウム、塩化ベンゼトニウム、グルコン酸クロルヘキシジン、塩化セチルピリジウム等の逆性石鹸類、ベンジルアルコール、フェネチルアルコール等のアルコール誘導体、デヒドロ酢酸ナトリウム、ソルビン酸、ソルビン酸ナトリウム等の有機酸およびその塩類、パラクロルメトキシフェノールおよびパラクロルメタクレゾール等のフェノール類等が挙げられる。

ｐＨ調整剤としては、例えば、水酸化ナトリウム、水酸化カリウム、リン酸三ナトリウム、リン酸水素二ナトリウム、塩酸、硝酸、クエン酸、ホウ酸および酢酸等が挙げられる。

清涼化剤としては、例えば、１－メントール、カンファー、ハッカ水等が挙げられる。抗酸化剤としては、例えば、亜硫酸塩、アスコルビン酸、クエン酸およびエデト酸ナトリウム等が挙げられる。

湿潤化剤としては、例えば、プロピレングリコール、ポリソルベート、ポリエチレングリコールおよびグリセリン等が挙げられる。

粘着剤としては、例えば、ヒドロキシプロピルセルロース、ヒドロキシプロピルメチルセルロース、カルボキシビニルポリマー、プロピレングリコールおよびポリソルベート８０等が挙げられる。

矯臭剤としては、トレハロース、リンゴ酸、マルトース、アニス精油、バニラ精油およびカルダモン精油等が挙げられる。

本発明の医薬組成物は、感染症の予防または治療に用いることができる。

本発明の医薬組成物は、投与対象の感染症の罹患リスク低減に、あるいは投与対象の病原体の感染リスク低減に用いることができる。投与対象は、本発明の医薬組成物を投与する対象であり、感染症の罹患リスクがある対象または病原体の感染リスクがある対象とすることができる。ここで、本発明において、「感染症の罹患リスク低減」は、感染症の罹患確率が低減されることを意味し、「病原体の感染リスク低減」は、病原体の感染確率が低減されることを意味する。

また、本発明の一態様として、ラクトコッカス・ラクティス・サブスピーシーズ・ラクティスを有効成分として含有する局所投与用組成物とすることができ、好ましくは当該組成物が医薬組成物である。

本発明において、感染症は、特に限定されるものではないが、病原体が感染することで生じる疾患であり、例えば、ウイルス感染症、細菌感染症、リケッチア・クラミジア感染症、真菌感染症、寄生虫感染症およびプリオン感染症等が挙げられ、好ましくはウイルス感染症および細菌感染症である。

本発明において、ウイルス感染症としては、例えば、ＣＯＶＩＤ－１９、インフルエンザウイルス感染症、狂犬病、日本脳炎、ウエストナイル熱、デング熱、チクングニア熱、ジカウイルス感染症、ダニ媒介脳炎、Ｅ型肝炎、重症熱性血小板減少症候群（ＳＦＴＳ）、エボラ出血熱重症急性呼吸器症候群（ＳＡＲＳ）および中東呼吸器症候群（ＭＥＲＳ）等が挙げられる。

本発明において、細菌感染症としては、例えば、Ｑ熱、ペスト、サルモネラ症、レプトスピラ症、猫ひっかき病、プルセラ症、カプノサイトファーガ・カニモルサス感染症、コリネバクテリウム・ウルセランス感染症、カンピロバクター症および炭疽等が挙げられる。

本発明において、リケッチア・クラミジア感染症としては、例えば、日本紅斑熱、つつが虫病およびオウム病等が挙げられる。

本発明において、真菌感染症としては、例えば、皮膚糸状菌症およびクリプトコッカス病等が挙げられる。

本発明において、寄生虫感染症としては、例えば、トキソプラズマ症、回虫症、エキノコックス症、クリプトスポリジウム症およびアニサキス症等が挙げられる。

本発明において、プリオン感染症としては、例えば、変異型クロイツフェルト・ヤコブ病（ｖＣＪＤ）等が挙げられる。

本発明においてウイルス感染症の予防は、ウイルス感染症の発症予防およびウイルス感染症の重症化予防を含む意味で用いられる。ここで、ウイルス感染症の発症の有無は、例えば、ＰＣＲ検査、抗原検査および抗体検査等の公知の方法により判定することができる。ウイルス感染症の重症度の有無は、例えば、呼吸不全の有無、酸素飽和濃度および肺炎所見等を指標にして判定することができ、ウイルス感染症がＣＯＶＩＤ－１９の場合、米国国立衛生研究所（ＮＩＨ）によるＣＯＶＩＤ－１９の治療ガイドライン（https://www.covid19treatmentguidelines.nih.gov/tables/management-of-hospitalized-adults-summary/）等に記載される重症度分類等を参考にすることができる。

本発明の医薬組成物により予防または治療されるウイルス感染症の原因ウイルスは、特に限定されるものではないが、例えば、ＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２、重症急性呼吸器症候群（ＳＡＲＳ）コロナウイルス、中東呼吸器症候群コロナウイルス、通常型ヒトコロナウイルス（２２９Ｅ、ＮＬ６３、ＯＣ４３及びＨＫＵ１）インフルエンザウイルス、パラインフルエンザウイルス、アデノウイルス、ＲＳウイルス、ヒトメタニューモウイルス、ライノウイルス、デングウイルス、水痘・帯状疱疹ウイルス、単純ヘルペスウイルス、麻疹ウイルス、パラインフルエンザウイルス、エンテロウイルス、ライノウイルス、ヒトメタニューモウイルス、アルファウイルス、サイトメガロウイルス、エプスタイン-バーウイルス、黄熱ウイルス、エコーウイルス、コクサッキーウイルス、単純ヘルペスウイルス、麻疹ウイルス、風疹ウイルス、水痘ウイルス、アルボウイルス、アレナウイルス、フィロウイルスおよびヒトパピローマウイルス等が挙げられる。本発明において、ウイルス感染症の原因ウイルスは、好ましくは呼吸器系感染症の原因ウイルスであり、より好ましくはＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２である。

本発明において、ＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２は、最初に発見されたウイルス株のみならず、その変異株（例えば、Ｂ．１．１．７系統（アルファ株）、Ｂ．１．３５１系統（ベータ株）、Ｐ．１系統（ガンマ株）、Ｂ．１．６１７．２系統（デルタ株）およびＢ．１．１．５２９系統（オミクロン株）等）を含む。なお、ＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２は、重症急性呼吸器症候群コロナウイルス２（ｓｅｖｅｒｅ ａｃｕｔｅ ｒｅｓｐｉｒａｔｏｒｙ ｓｙｎｄｒｏｍｅ ｃｏｒｏｎａｖｉｒｕｓ－２）と同義であり、ＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２感染症（ＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２の感染により引き起こされる疾患および症状）をＣＯＶＩＤ－１９（いわゆる新型コロナウイルス感染症）と呼ぶ。

本発明の有効成分であるＩＦＮ産生を誘導する性質を有する乳酸菌は、生体内でＩＦＮ産生を誘導し得るものであって、ＩＦＮを生体に直接投与するものではない。ＩＦＮを生体に直接投与する場合には、経口投与および非経口投与があり得る。ここで、ＩＦＮを生体に直接経口投与する場合には、ＩＦＮは胃液や腸液に対する耐性が弱く、分解が引き起こされ、ＩＦＮのまま生体に吸収される可能性は低い。さらに、ＩＦＮを生体に直接非経口投与する場合には、例えば、皮下投与等が有り得るが、摂取負担が高く、副作用（発熱、頭痛、うつ病等）の可能性も報告されている。したがって、本発明の有効成分であるＩＦＮ産生を誘導する性質を有する乳酸菌は、投与負担が軽減され得る点、副作用の可能性が軽減され得る点、ならびに、感染症の予防効果および治療効果の点で、ＩＦＮを生体に直接投与する場合より優れているといえる。

ウイルス感染のメカニズムに関しては、例えば、ＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２等の場合、細胞表面のＡＣＥ２（ａｎｇｉｏｔｅｎｓｉｎ ｃｏｎｖｅｒｔｉｎｇ ｅｎｚｙｍｅ ２）受容体にウイルスが結合して吸着し、これを足掛かりとしてウイルスが細胞内に侵入することで感染に至ることが知られている。このため本発明の有効成分である乳酸菌をＡＣＥ２受容体が高発現している組織へ局所投与することでより高い感染症の予防効果および治療効果をより発揮させることができる。ＡＣＥ２受容体が高発現している組織としては、呼吸器（例えば、鼻腔、咽頭、喉頭、気管、気管支、肺）が挙げられ、好ましくは上気道（より好ましくは鼻腔）および下気道が挙げられる。

後記実施例に示されるように、本発明の有効成分である乳酸菌は、局所投与されることにより免疫賦活作用を有し得るものである。したがって、本発明の別の面によれば、乳酸菌を有効成分として含有する局所投与するための免疫賦活用組成物が提供される。本発明の免疫賦活用組成物は、医薬組成物とすることができる。ここで、本発明において免疫賦活とは、免疫機能を維持もしくは増強、免疫力維持もしくは増強、免疫作用維持もしくは増強または免疫応答維持もしくは増強することを意味する。免疫賦活の効果は、後記実施例に示されるように、例えば、リンパ球に対するｐＤＣの比率の増加等により確認することができる。

後記実施例に示されるように、本発明の有効成分である乳酸菌は、顎下リンパ節および／または脾臓におけるＩＦＮ誘導性抗ウイルス遺伝子（ＩＳＧ：ＩＦＮ－ｓｔｉｍｕｌａｔｅｄ ｇｅｎｅ）の発現を増強する性質を有し得るものである。すなわち、本発明の医薬組成物は、顎下リンパ節および／または脾臓におけるＩＳＧの発現増強に用いることができる。本発明の有効成分である乳酸菌が発現を増強し得るＩＳＧとしては、限定されるものではないが、例えば、Ｖｉｐｅｒｉｎ（ビペリン）、Ｉｓｇ１５、Ｍｘ１、Ｏａｓｌ２、ＩＦＩＴＭ、ＩＳＧ２０およびＲｙＤＥＮ等が挙げられる。本発明の医薬組成物において、ＩＳＧは、Ｖｉｐｅｒｉｎ、Ｉｓｇ１５およびＭｘ１からなる群から選択される１種または２種以上であり、好ましくは、Ｖｉｐｅｒｉｎ、Ｉｓｇ１５およびＭｘ１からなる群から選択される１種または２種以上であり、より好ましくはＶｉｐｅｒｉｎまたはＩＳＧ１５である。ここで、ＶｉｐｅｒｉｎによってコードされるＶｉｐｅｒｉｎタンパク質は、多様な抗ウイルス活性を持つラジカルＳＡＭドメイン含有分子であり、Ｉｓｇ１５によってコードされるＩＳＧ１５は、抗ウイルス特性を有するユビキチン様の小分子であり、Ｍｘ１によってコードされるＭＸ１は、ダイナミン様ＧＴＰａｓｅであり、ウイルスのヌクレオカプシドを標的とし、複製が確立する前にウイルスを抑制することが知られている（Schoggins JW., Curr Opin Virol., 2014: 40-46.）。

後記実施例に示されるように、本発明の有効成分である乳酸菌は、脾臓中のリンパ球に対するｐＤＣの比率を増加し得るものであり、鼻粘膜中のリンパ球に対するｐＤＣの比率を増加し得るものである。すなわち、本発明の医薬組成物は、脾臓中のリンパ球に対するｐＤＣの比率を増加させるために、および／または、鼻粘膜中のリンパ球に対するｐＤＣの比率を増加させるために用いることができる。ここで、本発明において、脾臓中のリンパ球に対するｐＤＣの比率とは、脾臓に含まれる全リンパ球に占めるｐＤＣの割合を意味し、鼻粘膜中のリンパ球に対するｐＤＣの比率とは、鼻粘膜に含まれる全リンパ球に占めるｐＤＣの割合を意味する。脾臓中のリンパ球に対するｐＤＣの比率および／または鼻粘膜中のリンパ球に対するｐＤＣの比率は、限定されるものではないが、例えば、後記実施例に示されるようにＦＡＣＳ（Ｆｌｕｏｒｅｓｃｅｎｃｅ ａｃｔｉｖａｔｅｄ ｃｅｌｌ ｓｏｒｔｅｒ）を用いた解析において、リンパ球分画における全リンパ球に対するｐＤＣの比率（割合）として算出することができる。

本発明において、「脾臓中のリンパ球に対するｐＤＣの比率の増加」とは、乳酸菌を投与した場合の脾臓中のリンパ球に対するｐＤＣの比率が、乳酸菌を投与しなかった場合の当該比率と比較して、増加することを意味する。具体的には、乳酸菌の投与後の対象の脾臓中のリンパ球に対するｐＤＣの比率が、該対象の投与前の対象の当該比率と比較して、例えば、１．１倍、１．２倍、１．３倍、１．４倍、１．５倍、１．６倍、１．７倍、１．８倍、１．９倍、２．０倍、２．１倍、２．２倍、２．３倍、２．４倍、２．５倍、２．６倍、２．７倍、２．８倍、２．９倍または３．０倍以上である場合に、脾臓中のリンパ球に対するｐＤＣの比率が増加したとすることができる。

本発明において、「鼻粘膜中のリンパ球に対するｐＤＣの比率の増加」とは、乳酸菌を投与した場合の鼻粘膜中のリンパ球に対するｐＤＣの比率が、乳酸菌を投与しなかった場合の当該比率と比較して、増加することを意味する。具体的には、乳酸菌の投与後の対象の鼻粘膜中のリンパ球に対するｐＤＣの比率が、該対象の投与前の対象の当該比率と比較して、例えば、１．１倍、１．２倍、１．３倍、１．４倍、１．５倍、１．６倍、１．７倍、１．８倍、１．９倍、２．０倍、２．１倍、２．２倍、２．３倍、２．４倍、２．５倍、２．６倍、２．７倍、２．８倍、２．９倍、３．０倍、３．１倍、３．２倍、３．３倍、３．４倍、３．５倍、３．６倍、３．７倍、３．８倍、３．９倍、４．０倍、４．１倍、４．２倍、４．３倍、４．４倍、４．５倍、４．６倍、４．７倍、４．８倍、４．９倍または５．０倍以上である場合に、鼻粘膜中のリンパ球に対するｐＤＣの比率が増加したとすることができる。

後記実施例に示されるように、本発明の有効成分である乳酸菌は、鼻粘膜中のリンパ球に対するＣＤ１１ｂ^＋Ｓｉｇｌｅｃ－Ｈ^＋細胞の比率を増加し得るものである。すなわち、本発明の免疫賦活用組成物は、鼻粘膜中のリンパ球に対するＣＤ１１ｂ^＋Ｓｉｇｌｅｃ－Ｈ^＋細胞の比率を増加させるために用いることができる。ここで、本発明において、鼻粘膜中のリンパ球に対するＣＤ１１ｂ^＋Ｓｉｇｌｅｃ－Ｈ^＋細胞の比率とは、鼻粘膜に含まれる全リンパ球に占めるＣＤ１１ｂ^＋Ｓｉｇｌｅｃ－Ｈ^＋細胞の割合を意味する。鼻粘膜中のリンパ球に対するＣＤ１１ｂ^＋Ｓｉｇｌｅｃ－Ｈ^＋細胞の比率は、限定されるものではないが、例えば、後記実施例に示されるようにＦＡＣＳを用いた解析において、リンパ球分画における全リンパ球に対するＣＤ１１ｂ^＋Ｓｉｇｌｅｃ－Ｈ^＋細胞の比率（割合）として算出することができる。

本発明において、「鼻粘膜中のリンパ球に対するＣＤ１１ｂ^＋Ｓｉｇｌｅｃ－Ｈ^＋細胞の比率の増加」とは、乳酸菌を投与した場合の鼻粘膜中のリンパ球に対するＣＤ１１ｂ^＋Ｓｉｇｌｅｃ－Ｈ^＋細胞の比率が、乳酸菌を投与しなかった場合の当該比率と比較して、増加することを意味する。具体的には、乳酸菌の投与後の対象の鼻粘膜中のリンパ球に対するＣＤ１１ｂ^＋Ｓｉｇｌｅｃ－Ｈ^＋細胞の比率が、該対象の投与前の対象の当該比率と比較して、例えば、１．１倍、１．２倍、１．３倍、１．４倍、１．５倍、１．６倍、１．７倍、１．８倍、１．９倍、２．０倍、２．１倍、２．２倍、２．３倍、２．４倍、２．５倍、２．６倍、２．７倍、２．８倍、２．９倍、３．０倍、３．１倍、３．２倍、３．３倍、３．４倍、３．５倍、３．６倍、３．７倍、３．８倍、３．９倍、４．０倍、４．１倍、４．２倍、４．３倍、４．４倍、４．５倍、４．６倍、４．７倍、４．８倍、４．９倍または５．０倍以上である場合に、鼻粘膜中のリンパ球に対するＣＤ１１ｂ^＋Ｓｉｇｌｅｃ－Ｈ^＋細胞の比率が増加したとすることができる。

本発明の医薬組成物は、哺乳動物に投与することができる。哺乳動物としては特に限定はないが、例えば、霊長類、げっ歯類、食肉類等が挙げられ、好ましくは霊長類である。霊長類としては、例えば、ヒト、チンパンジー、アカゲザル、マーモセット、イヌ、ネコ、ウシ、ウマ、ブタおよびヒツジ等が挙げられ、好ましくはヒトである。

本発明の医薬組成物は、感染症の罹患前もしくは発症前（あるいは病原体の感染前）または感染症の罹患後もしくは発症後（あるいは病原体の感染後）のいずれにおいても投与することができる。感染症の予防に用いる場合は、感染前に投与することが望ましいといえるが、感染後であっても重症化を予防するため感染後初期（例えば、感染後５日以内）に投与してもよく、投与の時期は、ウイルス性感染症の流行状況や流行しやすい時期等を考慮して決定することもできる。

本発明の医薬組成物の投与回数は、投与の目的、投与対象の体質、体調、症状等に応じて任意に設定することができるが、１回または複数回（例えば、２回以上、３回以上、４回以上、５回以上）とすることができる。複数回投与する場合の投与間隔は１～２４時間または１～１０日とすることができ、例えば、１日ごと、２日ごと、３日ごと、４日ごと、５日ごととすることができる。感染症の予防または治療に用いる場合は、予防効果または治療効果の持続および医療費節減の点から、１日ごとの投与間隔にて２回以上投与することが好ましい。

本発明の医薬組成物は、ウイルス感染症の予防に用いる場合、有効成分が予防効果を奏する有効期間の始期は、効果即効性の観点から、投与を行った最後の日から０日目、１日目、２日目、３日目、４日目、５日目、６日目または７日目である。

本発明の医薬組成物は、ウイルス感染症の予防に用いる場合、有効成分が予防効果を奏する有効期間の終期は、効果維持の観点から、投与を行った最後の日から７日目、１４日目、２８日目または５６日目である。

本発明の医薬組成物において、上記始期および上記終期は任意に組み合わせることができ、例えば、０日目から５６日目まで、０日目から２８日目まで、０日目から１４日目まで、０日目から７日目まで、３日目から５６日目まで、３日目から２８日目まで、３日目から１４日目まで、３日目から７日目まで、５日目から５６日目まで、５日目から２８日目まで、５日目から１４日目まで、５日目から７日目まで、７日目から５６日目まで、７日目から２８日目まで、７日目から１４日目までとすることができる。

本発明の医薬組成物は、ウイルス感染症の予防に用いる場合、有効成分が予防効果を奏する有効期間は、投与を行った最後の日から５６日間以内、２８日間以内、１４日間以内、７日間以内、６日間以内、５日間以内、４日間以内または３日間以内である。

本発明の有効成分の１日当たりの投与量は、投与される対象の体重により適宜調整、決定することができる。成体（例えば、ヒトの成人）の場合、体重５０ｋｇを基準として、例えば、乾燥菌体質量により特定することができ、感染予防効果または感染抑制効果の点から、その下限値（以上または超える）は、１ｍｇ、２ｍｇ、３ｍｇ、４ｍｇ、５ｍｇ、６ｍｇ、７ｍｇ、８ｍｇ、９ｍｇ、１０ｍｇ、１１ｍｇ、１２ｍｇ、１３ｍｇ、１４ｍｇ、１５ｍｇ、１６ｍｇ、１７ｍｇ、１８ｍｇ、１９ｍｇ、２０ｍｇ、２１ｍｇ、２２ｍｇ、２３ｍｇ、２４ｍｇ、２５ｍｇ、２６ｍｇ、２７ｍｇ、２８ｍｇ、２９ｍｇ、３０ｍｇ、３１ｍｇ、３２ｍｇ、３３ｍｇ、３４ｍｇ、３５ｍｇ、３６ｍｇ、３７ｍｇ、３８ｍｇ、３９ｍｇ、４０ｍｇ、４１ｍｇ、４２ｍｇ、４３ｍｇ、４４ｍｇ、４５ｍｇまたは５０ｍｇとすることができ、その上限値（以下または未満）は１０００ｍｇ、９５０ｍｇ、９００ｍｇ、８５０ｍｇ、８００ｍｇ、７５０ｍｇ、７００ｍｇ、６５０ｍｇ、６００ｍｇ、５５０ｍｇ、５００ｍｇ、４７５ｍｇ、４５０ｍｇ、４２５ｍｇ、４００ｍｇ、３７５ｍｇ、３５０ｍｇ、３２５ｍｇ、３００ｍｇ、２７５ｍｇ、２５０ｍｇ、２２５ｍｇ、２００ｍｇ、１９０ｍｇ、１８０ｍｇ、１７０ｍｇ、１６０ｍｇ、１５０ｍｇ、１４０ｍｇ、１３０ｍｇ、１２０ｍｇ、１１０ｍｇまたは１００ｍｇ、９０ｍｇ、８０ｍｇ、７０ｍｇ、６０ｍｇまたは５０ｍｇとすることができる。これらの上限値および下限値はそれぞれ任意に組み合わせることができ、上記投与量の範囲は、例えば、１ｍｇ以上１０００ｍｇ以下、１０ｍｇ以上５００ｍｇ以下、２５ｍｇ以上４５０ｍｇ以下、３０ｍｇ以上４００ｍｇ以下、３５ｍｇ以上３７５ｍｇ以下、４０ｍｇ以上３５０ｍｇ以下、４０ｍｇ以上３２５ｍｇ以下、４５ｍｇ以上３００ｍｇ以下、４５ｍｇ以上２５０ｍｇ以下、４５ｍｇ以上２００ｍｇ以下、４５ｍｇ以上１５０ｍｇ以下、４５ｍｇ以上１００ｍｇ以下、４５ｍｇ以上９０ｍｇ以下、４５ｍｇ以上８０ｍｇ以下、４５ｍｇ以上７０ｍｇ以下または４５ｍｇ以上６０ｍｇ以下とすることができる。

本発明の有効成分の１日当たりの投与量は、菌数により特定することもでき、成体（例えば、ヒトの成人）の場合、体重５０ｋｇを基準として、感染予防効果または感染抑制効果の点から、その下限値（以上または超える）は１×１０^８個、１×１０^９個、１×１０^１０個または１×１０^１１個とすることができ、その上限値（以下または未満）は１×１０^１４個、１×１０^１３個、１×１０^１２個、５×１０^１１個または１×１０^１１個とすることができる。これらの上限値および下限値はそれぞれ任意に組み合わせることができ、上記投与量の範囲は、例えば、１×１０^８～１×１０^１４個、１×１０^９～１×１０^１３個、１×１０^１０～１×１０^１２個、５×１０^１０～５×１０^１１個または１×１０^１１個とすることができる。乳酸菌の菌数は、例えば、蛍光染色法、フローサイトメトリー、培養法により測定することができ、正確性の点からフローサイトメトリーにより測定することが好ましい。

本発明の有効成分は、感染予防効果または感染抑制効果を期待する期間内は投与を継続することが好ましい。本発明の有効成分の投与期間は、感染予防効果または感染抑制効果をよりよく発揮させる観点から、例えば、上記１日量での投与を１週間以上、２週間以上、３週間以上、１カ月以上（４週間以上）とすることができる。本発明の有効成分の投与間隔は、上記１日量での投与を３日に１回、２日に１回または１日１回とすることができ、好ましくは１日１回である。

本発明の有効成分はまた、感染症の罹患可能性または発症可能性（病原体への感染可能性）が高まる等の感染予防が期待される出来事または時期よりも前に投与を開始してもよい。感染予防効果が期待される出来事の例としては、感染症の罹患可能性または発症可能性（病原体の感染可能性）が高まる行動（例えば、感染リスクが高い行事への参加、流行地域への渡航、家族等の同居人の感染）等が挙げられ、感染予防効果が期待される時期の例としては、感染症の流行期が挙げられる。感染予防効果が期待される出来事よりも前の投与時期（投与タイミング）としては、例えば、１日以上前、３日以上前、１週間以上前、２週間以上前、３週間以上前、１ヶ月以上前（４週間以上前）または２ヶ月以上前（８週間以上前）が挙げられる。また、特に限定されるものではないが、投与を開始してから、感染予防効果が期待される出来事までは、場合によっては、投与間隔を置きながら継続して摂取することもできる。本発明において、感染予防効果が期待される出来事よりも前の好ましい投与タイミングとしては、例えば、１日前と３日前の計２回以上、４日前と６日前の計２回以上、７日前と９日前の計２回以上、１０日前と１２日前の計２回以上または１４日前と１６日前の計２回以上とすることができる。

本発明の有効成分はまた、感染予防効果が期待される出来事または時期よりも後に投与を開始してもよい。感染予防効果が期待される出来事よりも後の投与タイミングとしては、例えば、１日以上後、３日以上後、１週間以上後、２週間以上後が挙げられる。また、特に限定されるものではないが、感染予防効果が期待される出来事よりも後に投与するときには、場合によっては、投与間隔を置きながら継続して投与することもできる。本発明においては、特に好ましくは、感染予防効果が期待される出来事よりも前に本発明の有効成分の投与を開始し、当該出来事より後まで投与することもできる。

本発明の有効成分の投与は、公知の感染予防方法または感染抑制方法と組み合わせてもよい。公知の感染予防方法または感染抑制方法としては、例えば、免疫賦活剤（例えば、フコイダン、β－グルカンなどの多糖類、ラクトフェリン、プロポリスおよびビフィズス菌等）の投与、抗ウイルス剤（例えば、Ｍ２イオン－チャンネル阻害剤（アマンタジンまたはリマンタジン）、ノイラミニダーゼ阻害剤（オセルタミビルまたはザナミビル）およびそれらの塩等）の投与、中和抗体薬（チキサゲビマブおよびシルガビマブ）の投与およびワクチン（例えば、生ワクチン、不活化ワクチン、組換えタンパクワクチン、ｍＲＮＡ（メッセンジャーＲＮＡ）ワクチン、ＤＮＡワクチンおよびウイルスベクターワクチン）の投与等が挙げられる。

本発明の別の面によれば、有効量の乳酸菌またはそれを含んでなる組成物を、それを必要としている対象に局所投与する工程を含む、ウイルス感染症の予防方法もしくは治療方法、感染症の罹患リスク低減方法もしくは病原体の感染リスク低減方法または免疫賦活方法が提供される。本発明の方法は、本発明の医薬組成物に関する記載に従って実施することができる。

本発明の別の面によればまた、局所投与用のウイルス感染症の予防剤もしくは治療剤の製造のための、局所投与用の感染症の罹患リスク低減剤もしくは病原体の感染リスク低減剤の製造のための、または局所投与用の免疫賦活剤の製造のための、乳酸菌の使用が提供される。本発明によればまた、局所投与用のウイルス感染症の予防剤もしくは治療剤としての、局所投与用の感染症の罹患リスク低減剤もしくは病原体の感染リスク低減剤としての、または局所投与用の免疫賦活剤としての、乳酸菌の使用が提供される。本発明によればまた、局所投与による感染症の予防方法もしくは治療方法、局所投与による感染症の罹患リスク低減方法もしくは病原体の感染リスク低減方法または局所投与による免疫賦活方法における、乳酸菌の使用が提供される。本発明の使用は、本発明の医薬組成物および本発明の方法に関する記載に従って実施することができる。

本発明の別の面によればまた、局所投与によるウイルス感染症の予防もしくは治療に用いるための、局所投与による感染症の罹患リスク低減もしくは病原体の感染リスク低減に用いるための、または局所投与による免疫賦活に用いるための、乳酸菌が提供される。本発明の乳酸菌は、本発明の医薬組成物および本発明の方法に関する記載に従って実施することができる。

以下の実施例等に基づき本発明をより具体的に説明するが、本発明はこれらの例に限定されるものではない。

実施例１：経鼻投与によるＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２感染予防効果の検討（１）
実施例１では、乳酸菌の経鼻投与によるＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２感染予防効果について検討した。

（１）方法
ア 乳酸菌の投与、ＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２の感染
ＢＡＬＢ／ｃマウス（１７週齢・雌・体重約２０ｇ、日本エスエルシー社）を対照群（乳酸菌未投与群）と５つの乳酸菌投与群の計６群に分け、表１に示す条件にて乳酸菌（ラクトコッカス・ラクティス・サブスピーシーズ・ラクティス ＪＣＭ５８０５菌株）の加熱死菌体を投与した（各群のｎ数は２または３）。各群のマウスは感染０日目に麻酔下において国立感染症研究所で樹立されたマウス馴化ＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２ ＱＨｍｕｓＸ株（Ｉｗａｔａ－Ｙｏｓｈｉｋａｗａ Ｎ ｅｔ ａｌ．，Ｓｃｉｅｎｃｅ Ａｄｖａｎｃｅｓ．（２０２２）８（１）． ｅａｂｈ３８２７）を０．５×ＬＤ_５０（３０μｌ）で感染させた。また、感染前と感染３日後で体重測定を行った。そして、感染３日後に解剖し、肺および肺胞洗浄液（ＢＡＬＦ（Ｂｒｏｎｃｈｏａｌｖｅｏｌａｒ Ｌａｖａｇｅ Ｆｌｕｉｄ））を採取した。

イ ＲＮＡの抽出および調製
採取した肺をＴＲＩｚｏｌ（Ｔｈｅｒｍｏ Ｆｉｓｈｅｒ Ｓｃｉｅｎｔｉｆｉｃ社）に浸漬し、ｇｅｎｔｌｅＭＡＣＳ Ｍ ｔｕｂｅ（Ｍｉｌｔｅｎｙｉ Ｂｉｏｔｅｃ社）に分散させた。遠心分離後、上清を回収しクロロホルム（ナカライテスク社）を添加し、遠心分離後、上部の水槽を２－プロパノール（ナカライテスク社）を含むチューブへ回収した。遠心分離後、上清を除き７５％エタノールでペレットを懸濁し遠心分離し、上清を完全に除き乾燥後、ＲＮａｓｅ－Ｆｒｅｅ Ｗａｔｅｒ（ＧＩＢＣＯ社）に懸濁した。また、採取したＢＡＬＦからのＲＮＡはＱＩＡｍｐ ＶｉｒａｌＲＮＡ Ｍｉｎｉ Ｋｉｔ（ＱＩＡＧＥＮ社）を用いて調製した。

ウ ＲＮＡの定量
抽出したＲＮＡはリアルタイムＰＣＲ法により定量した。リアルタイムＰＣＲは、ＱｕａｎｔｉＴｅｃｔ Ｐｒｏｂｅ ＲＴ－ＰＣＲ Ｋｉｔ（ＱＩＡＧＥＮ社）および遺伝子特異的ＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２プライマー・プローブを用い、一般的な反応組成に従って、５０℃で３０分間、９５℃で１５分間、続いて９５℃で１５秒間、６０℃で６０秒間を４５サイクル反応させることにより行った。プライマーは表２に示すものを用いた（Ｓｈｉｒａｔｏ Ｋ， ｅｔ ａｌ．， Ｊｐｎ． Ｊ． Ｉｎｆｅｃｔ． Ｄｉｓ． ２０２０； ７３（４）： ３０４－３０７）。

エ ウイルスの定量
ＢＡＬＦについて、感染性ＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２ウイルスの定量を行った。具体的には、１０質量％ＦＣＳを添加したＤＭＥＭ（ＧＩＢＣＯ社）で１０－１０^６まで１０倍段階希釈系列を作成し、Ｖｅｒｏ細胞（アフリカミドリザル腎細胞株（ＪＣＲＢ１８１９ ＶｅｒｏＥ６／ＴＭＰＲＳＳ２、ＪＣＲＢ細胞バンク））をシートした９６穴プレート（ＣＯＲＮＩＮＧ社）に各ＢＡＬＦ希釈液１００μｌを４穴ずつ接種し、接種４日後における細胞変性の有無でウイルス感染を評価した。ウイルス力価の計算はＲｅｅｄ－Ｍｕｅｎｃｈの式によってＴＣＩＤ_５０／ｍｌとして算出した。

（２）結果
結果は、図１～３に示す通りであった。図１の示すＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２感染前の体重に対する感染３日目（感染約７２時間後）の体重の割合から、乳酸菌投与群ではいずれも体重減少が認められなかったのに対し、対照群（乳酸菌非投与群）では感染前の９０％程度の体重減少が認められた。Ｄａｙ（－２／－７）群およびＤａｙ（－３／－８）群においても体重減少の抑制効果が認められたことから、乳酸菌の経鼻投与による感染抑制効果が数日間（少なくとも３日間）は維持された。また、対照群では、乳酸菌投与群と比較して、毛並みが悪くなるとともに、活動量が低下し食餌摂取回数が減少する様子が観察された。

図２では、ＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２感染３日後（感染後約７２時間後）の肺およびＢＡＬＦにおけるＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２のＲＮＡ量（コピー数）が、対照群と比較して、Ｄａｙ（－１／－３）群、Ｄａｙ（－２／－４）群およびＤａｙ（－３／－５）群では顕著に減少しており、Ｄａｙ（－１／－３）（ｌｏｗ）群、Ｄａｙ（－２／－７）群およびＤａｙ（－３／－８）群でも減少していることが確認された。Ｄａｙ（－２／－７）群およびＤａｙ（－３／－８）群においてもＲＮＡ量の減少が認められたことから、乳酸菌の経鼻投与による感染抑制効果が数日間（少なくとも３日間）は維持された。

図３では、ＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２感染３日後（感染後約７２時間後）のＢＡＬＦにおける感染性ＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２のウイルス量が、対照群と比較して、Ｄａｙ（－１／－３）群、Ｄａｙ（－２／－４）群およびＤａｙ（－３／－５）群では顕著に減少しており、Ｄａｙ（－１／－３）（ｌｏｗ）群、Ｄａｙ（－２／－７）群およびＤａｙ（－３／－８）群でも減少していることが確認された。Ｄａｙ（－２／－７）群およびＤａｙ（－３／－８）群においてもウイルス量の減少が認められたことから、乳酸菌の経鼻投与による感染抑制効果が数日間（少なくとも３日間）は維持された。

これらの結果から、乳酸菌の投与により感染抑制だけでなく重症化を抑制する効果も奏されることが示された。

実施例２：経鼻投与によるＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２感染予防効果の検討（２）
実施例２では、乳酸菌の経鼻投与によるＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２感染後の血中およびＢＡＬＦ中のＩＦＮ－α産生に対する影響を検討した。

（１）方法
ＢＡＬＢ／ｃマウス（１７週齢・雌・体重約２０ｇ、日本エスエルシー社）を対照群（乳酸菌未投与群）と５つの乳酸菌投与群の計６群に分け、表３に示す条件にて乳酸菌（ラクトコッカス・ラクティス・サブスピーシーズ・ラクティス ＪＣＭ５８０５菌株）の加熱死菌体を投与した（各群のｎ数は２または３）。各群のマウスは感染０日目に麻酔下において国立感染症研究所で樹立されたマウス馴化ＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２ ＱＨｍｕｓＸ株（Ｉｗａｔａ－Ｙｏｓｈｉｋａｗａ Ｎ ｅｔ ａｌ．， Ｓｃｉｅｎｃｅ Ａｄｖａｎｃｅｓ． ２０２２； ８（１）： ｅａｂｈ３８２７）を０．５×ＬＤ_５０（３０μｌ）で感染させた。そして、感染３日後（約７２時間後）に解剖し、血中および肺胞洗浄液（ＢＡＬＦ）中のインターフェロン－α（ＩＦＮ－α）濃度をｉｎｔｅｒｆｅｒｏｎ α Ａｌｌ Ｓｕｂｔｙｐｅ ＥＬＩＳＡ Ｋｉｔ（ＰＢＬ ＢＩＯＭＥＤＩＣＡＬ ＬＡＢＯＲＡＴＯＲＩＥＳ社）を用いて測定した。

（２）結果
結果は、図４に示す通りであった。対照群では、ＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２感染３日後（感染後約７２時間後）の血中のＩＦＮ－α濃度の平均値は１００ｐｇ／ｍｌを超え、ＢＡＬＦ中のＩＦＮ－α濃度の平均値は３００ｐｇ／ｍｌを超えていることが確認された。これに対し、乳酸菌投与群では、ＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２感染３日後（感染後約７２時間後）の血中のＩＦＮ－α濃度の平均値は５０ｐｇ／ｍｌ以下であり、ＢＡＬＦ中のＩＦＮ－α濃度の平均値は２００ｐｇ／ｍｌ以下であることが確認された。

実施例３：経鼻投与によるＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２感染予防効果の検討（３）
実施例３では、乳酸菌の経鼻投与によるＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２感染後の体重減少抑制について検討した。

（１）方法
ＢＡＬＢ／ｃマウス（１６週齢・雌・体重約２０ｇ、日本エスエルシー社）を対照群（乳酸菌未投与群）と乳酸菌投与群の２群に分け、表４に示す条件にて乳酸菌（ラクトコッカス・ラクティス・サブスピーシーズ・ラクティス ＪＣＭ５８０５菌株）の加熱死菌体を投与した（各群のｎ数は６）。各群のマウスは感染０日目に麻酔下において国立感染症研究所で樹立されたマウス馴化ＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２ ＱＨｍｕｓＸ株（Ｉｗａｔａ－Ｙｏｓｈｉｋａｗａ Ｎ ｅｔ ａｌ．， Ｓｃｉｅｎｃｅ Ａｄｖａｎｃｅｓ． ２０２２； ８（１）： ｅａｂｈ３８２７）を０．５×ＬＤ_５０（３０μｌ）で感染させた。そして、感染７日後まで毎日体重測定し、感染前の体重に対する体重の割合を算出した。

（２）結果
結果は、図５に示す通りであった。対照群では感染後３日後から４日後をピークに顕著な体重減少が認められた。これに対し、乳酸菌投与群では、感染後に明らかな体重減少は認められず、対照群と比較して有意に体重減少が抑制された。

実施例４：経鼻投与によるＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２感染予防効果の検討（４）
実施例４では、乳酸菌の経鼻投与によるＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２感染予防効果の持続性について検討した。

（１）方法
ア 乳酸菌の投与、ＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２の感染
ＢＡＬＢ／ｃマウス（１５週齢・雌・体重約２０ｇ、日本エスエルシー社）を対照群（乳酸菌未投与群）と乳酸菌投与群５群の計６群に分け、表５に示す条件にて乳酸菌（ラクトコッカス・ラクティス・サブスピーシーズ・ラクティス ＪＣＭ５８０５菌株）の加熱死菌体を投与した（各群のｎ数は４または５）。各群のマウスは感染０日目に麻酔下において国立感染症研究所で樹立されたマウス馴化ＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２ ＱＨｍｕｓＸ株（Ｉｗａｔａ－Ｙｏｓｈｉｋａｗａ Ｎ ｅｔ ａｌ．， Ｓｃｉｅｎｃｅ Ａｄｖａｎｃｅｓ． ２０２２； ８（１）： ｅａｂｈ３８２７）を５×ＬＤ_５０（５μｌ）で感染させた。そして、感染２日後に解剖し、鼻咽腔関連リンパ組織（ＮＡＬＴ（ｎａｓａｌ－ａｓｓｏｃｉａｔｅｄ ｌｙｍｐｈｏｉｄ ｔｉｓｓｕｅｓ））を採取した。

イ ＲＮＡの抽出および調製
例１（１）イの記載と同様にして、採取したＮＡＬＴからのＲＮＡの抽出および調製を行った。

ウ ＲＮＡの定量
例１（１）ウの記載と同様にして、ＲＮＡの定量を行った。

（２）結果
結果は、図６に示す通りであった。Ｄａｙ（－１／－３）群およびＤａｙ（－４／－６）群では、対照群と比較して、ＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２のウイルスＲＮＡ量およびサブゲノミックＲＮＡ量が顕著に低かった。また、Ｄａｙ（－７／－９）群、Ｄａｙ（－１０／－１２）群およびＤａｙ（－１４／－１６）群においても、対照群と比較して、ウイルスＲＮＡ量およびサブゲノミックＲＮＡ量が１０倍程度低い傾向にあった。

実施例５：経鼻投与によるＡ型インフルエンザウイルス感染予防効果の検討
実施例５では、乳酸菌の経鼻投与によるＡ型インフルエンザウイルス（Ｈ１Ｎ１）感染予防効果について検討した。

（１）方法
ア 乳酸菌の投与、Ａ型インフルエンザウイルスの感染
ＢＡＬＢ／ｃマウス（１２週齢・雌・体重約２０ｇ、日本エスエルシー社）を対照群（乳酸菌未投与群）と乳酸菌投与群の２群に分け、表６および表７に示す条件にて乳酸菌（ラクトコッカス・ラクティス・サブスピーシーズ・ラクティス ＪＣＭ５８０５菌株）の加熱死菌体を投与した（各群のｎ数は５または７）。表６および表７の各群のマウスは感染０日目に麻酔下においてＡ型インフルエンザウイルスのＡ／ＰＲ８／３４（ＰＲ８）（国立感染症研究所から入手、Ｉｋｅｄａ Ｋ， Ａｉｎａｉ Ａ， ｅｔ ａｌ．， Ｖａｃｃｉｎｅ． ２０１５； ３３（４５）： ６０６６－９．）またはＡ／Ｎａｒｉｔａ／１／２００９（Ｎａｒｉｔａ）（国立感染症研究所から入手、Ａｄａｃｈｉ Ｙ， ｅｔ ａｌ．， Ｊ Ｅｘｐ Ｍｅｄ． ２０１５； ２１２（１０）： １７０９－２３．）を、４０×ＬＤ_５０（５μｌ）または５×ＬＤ_５０（５μｌ）でそれぞれ感染させた。そして、感染２日後に解剖し、鼻腔洗浄液を採取した。

イ ＲＮＡの抽出および調製
採取した鼻腔洗浄液からのＲＮＡはＱＩＡｍｐ ＶｉｒａｌＲＮＡ Ｍｉｎｉ Ｋｉｔ（ＱＩＡＧＥＮ社）を用いて調製した。

ウ ＲＮＡの定量
抽出したＲＮＡはリアルタイムＰＣＲ法により定量した。リアルタイムＰＣＲは、ＱｕａｎｔｉＴｅｃｔ Ｐｒｏｂｅ ＲＴ－ＰＣＲ Ｋｉｔ（ＱＩＡＧＥＮ社）および遺伝子特異的Ａ型インフルエンザウイルスプライマー・プローブを用い、一般的な反応組成に従って、５０℃で３０分間、９５℃で１５分間、続いて９４℃で１５秒間、５６℃で７５秒間を４０サイクル反応させることにより行った。プライマーは表８に示すものを用いた（Ｎａｋａｕｃｈｉ Ｍ， ｅｔ ａｌ．， Ｊｏｕｒｎａｌ ｏｆ Ｖｉｒｏｌｏｇｉｃａｌ Ｍｅｔｈｏｄｓ． ２０１１； ７１７１（１）： １５６－１６２）。

（２）結果
結果は、図７に示す通りであった。乳酸菌投与群では、対照群と比較して、ＰＲ８感染とＮａｒｉｔａ感染のいずれにおいても鼻腔洗浄液中のＡ型インフルエンザのウイルスＲＮＡ量が有意に低かった。

実施例６：経鼻投与による免疫賦活効果の検討（１）
実施例６では、乳酸菌の経鼻投与による免疫賦活効果について検討した。

（１）方法
ア 乳酸菌の投与
ＢＡＬＢ／ｃマウス（１６週齢・雌・体重約２０ｇ、日本エスエルシー社）を表９に示す４群に分けて乳酸菌の経鼻投与試験を行った。対照群にはＰＢＳ（ＧＩＢＣＯ社）を投与し、投与群には表９に示す条件にて乳酸菌（ラクトコッカス・ラクティス・サブスピーシーズ・ラクティス ＪＣＭ５８０５菌株）の加熱死菌体を投与した（各群のｎ数は３）。なお、対照群には、投与群の投与用量と対応するＰＢＳのみを投与した。そして、乳酸菌投与３日後に、麻酔下で心臓からの全採血により安楽死させ解剖した。

イ ＲＮＡの抽出
各組織検体からのＲＮＡ抽出は、次の下記（i）～（vi）の手順で行った。
（i）各組織検体を１ｍｌ ＴＲＩｚｏｌ（Ｔｈｅｒｍｏ Ｆｉｓｈｅｒ Ｓｃｉｅｎｔｉｆｉｃ社）入りＭチューブ（Ｍｉｌｔｅｎｙｉ Ｂｉｏｔｅｃ社）に回収し、－８０℃で凍結保存した。
（ii）凍結保存した組織検体を融解し、ＧｅｎｔｌｅＭＡＣＳ（Ｍｉｌｔｅｎｙｉ Ｂｉｏｔｅｃ社）を用いて組織を破砕し、室温で２～３分静置した後、３，０００×ｇ、５分、４℃で遠心した。上清をエッペンチューブに回収し、さらに１２，０００×ｇ、１０分、４℃で遠心した。
（iii）上清をエッペンチューブに回収し、クロロホルム（富士フィルム和光純薬社）１８０μｌを添加し、室温で２～３分静置した後、１２，０００×ｇ、１５分、４℃で遠心した。
（iv）上清上部の水層を２－プロパノール（富士フィルム和光純薬社）４５０μｌ入りのエッペンチューブに回収し、室温で１０分静置した後、１２，０００×ｇ、１０分、４℃で遠心した。
（v）上清を除去し、７５％エタノール（富士フィルム和光純薬社）１ｍｌを添加し、ボルテックスした後、７，５００×ｇ、５分、４℃で遠心した。
（vi）上清を除去し、１５分間ペレットを風乾させた。その後、ＲＮａｓｅ Ｆｒｅｅ Ｗａｔｅｒ（ＱＩＡＧＥＮ社）で懸濁し、５６℃、１０分で熱処理を行った後、－８０℃で保存した。

ウ ＲＮＡの定量
抽出したＲＮＡからＩＦＮ誘導性抗ウイルス遺伝子（ＩＳＧ）であるＶｉｐｅｒｉｎ、Ｉｓｇ１５およびＭｘ１の各ｍＲＡＮ発現量の定量を行った。具体的には、下記（i）～（v）の手順で行った。
（i）各サンプルのＲＮＡ濃度をナノドロップにて測定した後、１０００ｎｇ／１５μｌとなるようｉＳｃｒｉｐｔ ｃＤＮＡ ｓｙｎｔｈｅｓｉｓ ｋｉｔ（ＢＩＯＲＡＤ社）のＮｕｃｌｅａｓｅ Ｆｒｅｅ Ｗａｔｅｒで希釈した。
（ii）Ｍａｓｔｅｒ Ｍｉｘ （５ｘ ｉＳｃｒｉｐｔ ｒｅａｃｔｉｏｎ ｍｉｘ ４μｌ／サンプル、ｉＳｃｒｉｐｔ ｒｅｖｅｒｓｅ ｔｒａｎｓｃｒｉｐｔ １μｌ／サンプル）を調製し、各ＲＮＡ溶液に５μｌずつ添加した。
（iii）その後、サーマルサイクラーにてｃＤＮＡ合成を行い、－２０℃にて保存した。
（ｉｖ）各ｃＤＮＡサンプルをＭｉｌｌｉＱ水で５倍希釈するとともに、全サンプルを混合したスタンダード溶液を×１、×２、×４、×８、×１６、×３２、×６４および×１２８の濃度で調整した。
（v）表１０に示す反応液を９６ウェルプレートにアプライし、リアルタイムＰＣＲは、Ｌｉｇｈｔ Ｃｙｃｌｅｒ ４８０を用いて、９５℃で１０秒間、６０℃で１０秒間および７２℃で１０秒間のセットを４５サイクル反応させることにより行った。プライマーは表１１に示すものを用いた。

（２）結果
結果は、図８～１１に示す通りであった。図８では、Ｄａｙ（－３）（解剖３日前（乳酸菌の１回目の経鼻投与日））の体重に対する、Ｄａｙ（－２）（解剖２日前）、Ｄａｙ（－１）（解剖１日前（乳酸菌の２回目の経鼻投与日））およびＤａｙ（０）（解剖当日）の体重の割合から、Ｄａｙ（０）（解剖当日）においてＬｏｗ ｖｏｌｕｍｅ（－）群とＬｏｗ ｖｏｌｕｍｅ（＋）で比較し、有意な差は認められなかった。また、Ｄａｙ（０）（解剖当日）においてＨｉｇｈ Ｖｏｌｕｍｅ（－）群とＨｉｇｈ Ｖｏｌｕｍｅ（＋）群と比較し、有意な差は認められなかった。また、いずれの群においても、毛並みおよび活動量への影響は認められなかった。

図９では、Ｌｏｗ ｖｏｌｕｍｅ（＋）群は、Ｌｏｗ ｖｏｌｕｍｅ（－）群と比較して、顎下リンパ節におけるＶｉｐｅｒｉｎおよびＩｓｇ１５のｍＲＮＡ発現量が有意に増加するとともに、Ｍｘ１のｍＲＮＡ発現量も増加傾向にあった。これに対し、Ｈｉｇｈ Ｖｏｌｕｍｅ（＋）群は、Ｈｉｇｈ Ｖｏｌｕｍｅ（－）群と比較して、有意な増加は認められなかった。Ｌｏｗ ｖｏｌｕｍｅ（＋）およびＨｉｇｈ Ｖｏｌｕｍｅ（＋）は、乳酸菌液の投与体積の量の違いから、それぞれ鼻腔および肺に作用させたものであった。この結果は、局所投与部位として鼻腔が好ましいことを示唆するものであった。

図１０では、Ｌｏｗ ｖｏｌｕｍｅ（＋）群は、Ｌｏｗ ｖｏｌｕｍｅ（－）群と比較して、脾臓におけるＶｉｐｅｒｉｎおよびＩｓｇ１５の発現量が有意に増加するとともに、Ｍｘ１の発現量も増加傾向にあった。これに対し、Ｈｉｇｈ Ｖｏｌｕｍｅ（＋）群は、Ｈｉｇｈ Ｖｏｌｕｍｅ（－）群と比較して、有意な増加は認められなかった。

図１１では、Ｌｏｗ ｖｏｌｕｍｅ（＋）群は、Ｌｏｗ ｖｏｌｕｍｅ（－）群と比較して、肺におけるＩｓｇ１５の発現量が増加傾向にあった。

実施例７：経鼻投与による免疫賦活効果の検討（２）
実施例７では、実施例６で解剖により摘出した脾臓、顎下リンパ節および鼻粘膜を用いて、乳酸菌の経鼻投与によるｐＤＣに与える影響について検討した。

（１）方法
実施例６で解剖により摘出した脾臓、顎下リンパ節および鼻粘膜の各組織におけるｐＤＣ数を次の手順で定量した。表１２に示す蛍光標識抗体を用いて各組織を染色し、染色後の細胞をＦＡＣＳ ｂｕｆｆｅｒを用いて１回洗浄し、ＦＡＣＳ ｂｕｆｆｅｒに再懸濁して、ＦＡＣＳ解析に供した。そして、ＦＡＣＳ Ｃａｎｔ ＩＩ （ＢＤ Ｂｉｏｓｃｉｅｎｃｅｓ社）を用いてデータを取得し、ＦｌｏｗＪｏ ｓｏｆｔｗａｒｅ （Ｔｒｅｅ Ｓｔａｒ社）を用いて解析した。ここで、ＣＤ１１ｃおよびＳｉｇｌｅｃ－Ｈを発現する細胞（ＣＤ１１ｃ^＋ＳＩｇｌｅｃ－Ｈ^＋細胞）またはＣＤ１１ｂを発現せずＳｉｇｌｅｃ－Ｈを発現する細胞（ＣＤ１１ｂ^－Ｓｉｇｌｅｃ－Ｈ^＋細胞）をｐＤＣと定義し、ＦＡＣＳ解析のリンパ球分画に含まれる全リンパ球に対するｐＤＣの比率から各組織中のリンパ球に対するｐＤＣの比率を定量するとともに、ｐＤＣの細胞表面活性化マーカーとしてＭＨＣクラスＩＩ（Ｉ－Ａ／Ｉ－Ｅ）およびＣＤ８６の発現レベルを測定した。また、ＦＡＣＳ解析のリンパ球分画に含まれるＣＤ１１ｂおよびＳｉｇｌｅｃ－Ｈを発現する細胞（ＣＤ１１ｂ^＋Ｓｉｇｌｅｃ－Ｈ^＋細胞）の比率から各組織中のリンパ球に対するＣＤ１１ｂ^＋Ｓｉｇｌｅｃ－Ｈ^＋細胞の比率を定量した。

（２）結果
結果は、図１２～１７に示す通りであった。図１２では、Ｌｏｗ ｖｏｌｕｍｅ投与群（Ｌｏｗ ｖｏｌｕｍｅ（＋）群）は、Ｌｏｗ ｖｏｌｕｍｅ対照群（Ｌｏｗ ｖｏｌｕｍｅ（－）群）と比較して、脾臓中のリンパ球に対するｐＤＣの比率が増加傾向にあった。一方で、図１３では、脾臓のｐＤＣにおいて、ＭＨＣクラスＩＩ（Ｉ－Ａ／Ｉ－Ｅ）（図１３Ａ）およびＣＤ８６（図１３Ｂ）の発現量に有意な差は認められなかった。

図１４では、Ｌｏｗ ｖｏｌｕｍｅ投与群（Ｌｏｗ ｖｏｌｕｍｅ（＋）群）は、Ｌｏｗ ｖｏｌｕｍｅ対照群（Ｌｏｗ ｖｏｌｕｍｅ（－）群）と比較して、顎下リンパ節中のリンパ球に対するｐＤＣの比率は有意に減少した（ｐ＜０．０１）。一方で、図１５では、顎下リンパ節のｐＤＣにおいて、ＭＨＣクラスＩＩ（Ｉ－Ａ／Ｉ－Ｅ）（図１５Ａ）およびＣＤ８６（図１５Ｂ）の発現量に有意な差は認められなかった。

図１６では、Ｌｏｗ ｖｏｌｕｍｅ投与群（Ｌｏｗ ｖｏｌｕｍｅ（＋）群）は、Ｌｏｗ ｖｏｌｕｍｅ対照群（Ｌｏｗ ｖｏｌｕｍｅ（－）群）と比較して、鼻粘膜中のリンパ球に対するｐＤＣの比率が有意に増加した（ｐ＜０．０５）（図１６Ａ（実線囲み）および図１６Ｂ（左））。一方で、図１７Ａでは、鼻粘膜のｐＤＣにおいて、ＭＨＣクラスＩＩ（Ｉ－Ａ／Ｉ－Ｅ）およびＣＤ８６の発現量に有意な差は認められなかった。

図１６ではまた、Ｌｏｗ ｖｏｌｕｍｅ投与群（Ｌｏｗ ｖｏｌｕｍｅ（＋）群）は、Ｌｏｗ ｖｏｌｕｍｅ対照群（Ｌｏｗ ｖｏｌｕｍｅ（－）群）と比較して、鼻粘膜中のリンパ球に対するＣＤ１１ｂ^＋Ｓｉｇｌｅｃ－Ｈ^＋細胞の比率が有意に増加した（ｐ＜０．０１）（図１６Ａ（点線囲み）および図１６Ｂ（右））。一方で、図１７Ｂでは、鼻粘膜のＣＤ１１ｂ^＋Ｓｉｇｌｅｃ－Ｈ^＋細胞において、ＭＨＣクラスＩＩ（Ｉ－Ａ／Ｉ－Ｅ）およびＣＤ８６の発現量に有意な差は認められなかった。

実施例８：経鼻投与による免疫賦活効果の検討（３）
実施例８では、実施例６で解剖により摘出した鼻粘膜から採取した鼻粘膜細胞を用いて、乳酸菌投与による免疫賦活効果についてさらに検討した。

（１）方法
実施例６で解剖により摘出した鼻粘膜をＲＰＭＩ＋液中に一時保存した後、ＨＢＳＳ ｂｕｆｆｅｒ液中でピンセットを用いて鼻粘膜をしごき、液ごと７０μｍセルストレーナーを通した後、遠心分離後（１，５００ｒｐｍ、４℃、５分）、上清を除去しＲＰＭＩ＋を加えて細胞ペレットを懸濁した。次に、細胞数をカウントし、６×１０^５細胞／ｍｌとなるように調製し、５００μｌ／ウェルで４８ウェルプレートに播種した。そして、培地には、無添加のもの、ＣｐＧ－ＡとしてＯＤＮ１５８５（Ｉｎｖｉｖｏｇｅｎ社）を１μＭとなるように添加したもの、および不活化済インフルエンザウイルスＨ１Ｎ１（ＨｙＴｅｓｔ社）（Ｈ１Ｎ１）を５μｇ／ｍｌとなるように添加したものを各ウェルに加え、ＣＯ_２インキュベータで２４時間培養した。培養終了後、細胞液を回収し遠心分離後（５，０００ｒｐｍ、４℃、２分）、培養上清を回収した。培養上清中のＩＦＮ－α濃度はＶｅｒｉＫｉｎｅ Ｉｎｔｅｒｆｅｒｏｎα ＥＬＩＳＡ Ｋｉｔ、Ｍｏｕｓｅ（ＰＢＬ Ａｓｓａｙ Ｓｃｉｅｎｃｅ社）、ＩＦＮ－β濃度はＶｅｒｉＫｉｎｅ Ｉｎｔｅｒｆｅｒｏｎβ ＥＬＩＳＡ Ｋｉｔ（ＰＢＬ Ａｓｓａｙ Ｓｃｉｅｎｃｅ社）、ＩＦＮ－λ濃度はＭｏｕｓｅ ＩＬ－２８Ｂ／ＩＦＮ－ｌａｍｂｄａ ３ ＤｕｏＳｅｔ ＥＬＩＳＡ（Ｒ＆Ｄ ｓｙｓｔｅｍｓ社）をそれぞれ用いて測定した。

（２）結果
結果は、図１８および図１９に示す通りであった。図１８では、Ｌｏｗ ｖｏｌｕｍｅ投与群（Ｌｏｗ ｖｏｌｕｍｅ（＋）群）から採取した鼻粘膜細胞は、Ｌｏｗ ｖｏｌｕｍｅ対照群（Ｌｏｗ ｖｏｌｕｍｅ（－）群）から採取した鼻粘膜細胞と比較して、ＣｐＧ－Ａ添加あり（ＣｐＧ－Ａ １μＭ）の場合はＩＦＮ－α産生量が有意に増加した（ｐ＜０．０１）。一方、ＣｐＧ－Ａ添加なし（ＣｐＧ－Ａ ０μＭ）の場合はＩＦＮ－α産生量は検出されなかった。この結果から、乳酸菌の投与により細菌やウイルス等の病原体の感染後にＩＦＮ－α産生が誘導されて感染症の予防効果が奏されることが示された。

図１９では、Ｌｏｗ ｖｏｌｕｍｅ投与群（Ｌｏｗ ｖｏｌｕｍｅ（＋）群）から採取した鼻粘膜細胞は、Ｌｏｗ ｖｏｌｕｍｅ対照群（Ｌｏｗ ｖｏｌｕｍｅ（－）群）から採取した鼻粘膜細胞と比較して、不活化済Ｈ１Ｎ１添加あり（Ｈ１Ｎ１ ５μｇ／ｍｌ）の場合はＩＦＮ－α、ＩＦＮ－βおよびＩＦＮ－γの産生量がいずれも増加傾向にあった。一方、不活化済Ｈ１Ｎ１添加なし（Ｈ１Ｎ１ ０μｇ／ｍｌ）の場合はＩＦＮ－α産生量は検出されなかった。この結果から、乳酸菌の投与によりインフルエンザウイルスの感染後にＩＦＮ－α、ＩＦＮ－βおよびＩＮＦ－λ産生が誘導されて感染症の予防効果が奏されることが示された。

参考例：経口投与によるＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２感染予防効果の検討
参考例では、公知の投与方法である乳酸菌の経口投与によるＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２感染予防効果について検討した。

（１）方法
ア ウイルス上気道接種試験群
ＢＡＬＢ／ｃマウス（２０週齢・雌・体重約２０ｇ）を対照群（標準餌摂取群）と試験餌摂取群の２群に分け（各群ｎ＝８）、ＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２感染させる１４日前から感染２日後または感染３日後まで標準餌または試験餌（乳酸菌としてラクトコッカス・ラクティス・サブスピーシーズ・ラクティス ＪＣＭ５８０５菌株）の加熱死菌体を０．０２９質量％含む）を自由摂取させて飼育した。各群のマウスは感染０日目に麻酔下において国立感染症研究所で樹立されたマウス馴化ＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２ ＱＨｍｕｓＸ株（Ｉｗａｔａ－Ｙｏｓｈｉｋａｗａ Ｎ ｅｔ ａｌ．， Ｓｃｉｅｎｃｅ Ａｄｖａｎｃｅｓ． ２０２２； ８（１）： ｅａｂｈ３８２７）を５×ＬＤ_５０（１．８×１０^４ＴＣＩＤ_５０）（５μｌ）で感染させた。そして、感染２日後または感染３日後に解剖し、鼻咽腔関連リンパ組織（ＮＡＬＴ（ｎａｓａｌ－ａｓｓｏｃｉａｔｅｄ ｌｙｍｐｈｏｉｄ ｔｉｓｓｕｅｓ））を採取した。

イ ウイルス下気道接種試験群
ＢＡＬＢ／ｃマウス（２１週齢・雌・体重約２０ｇ）を対照群（標準餌摂取群）と試験餌摂取群の２群に分け（各群ｎ＝８）、ＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２感染させる１４日前から感染３日後まで標準餌または試験餌（乳酸菌としてラクトコッカス・ラクティス・サブスピーシーズ・ラクティス ＪＣＭ５８０５菌株）の加熱死菌体を０．０５質量％含む）を自由摂取（経口投与）させて飼育した。各群のマウスは感染０日目に麻酔下において国立感染症研究所で樹立されたマウス馴化ＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２ ＱＨｍｕｓＸ株（Ｉｗａｔａ－Ｙｏｓｈｉｋａｗａ Ｎ ｅｔ ａｌ．， Ｓｃｉｅｎｃｅ Ａｄｖａｎｃｅｓ． ２０２２； ８（１）： ｅａｂｈ３８２７）を１０×ＬＤ_５０（３．５×１０^４ＴＣＩＤ_５０）（３０μｌ）で感染させた。そして、感染３日後に解剖し、肺を採取した。

ウ ＲＮＡの抽出および調製
例１（１）イの記載と同様にして、採取したＮＡＬＴおよび肺からのＲＮＡの抽出および調製を行った。

エ ＲＮＡの定量
例１（１）ウの記載と同様にして、ＲＮＡの定量を行った。

（２）結果
ウイルス上気道接種試験群（（１）方法 ア）に関する結果は図２０に、ウイルス下気道接種試験群（（１）方法 イ）に関する結果は図２１にそれぞれ示す通りであった。ウイルス上気道接種試験群では、ＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２感染させる１４日前から感染２日後または感染３日後まで（合計１６日間または１７日間）標準餌または試験餌を自由摂取（経口投与）させた結果、マウス１匹１日当たり平均２．３８ｇ（試験餌として乳酸菌１．１９ｍｇ）を摂取したことを確認した。一方、ウイルス下気道接種試験群では、ＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２感染させる１４日前から感染３日後まで（合計１７日間）標準餌または試験餌を自由摂取（経口投与）させた結果、マウス１匹１日当たり平均２．２ｇ（試験餌として乳酸菌０．６４ｍｇ）を摂取したことを確認した。

図２０では、ＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２感染２日後または３日後（感染約４８時間後または約７２時間後）のＮＡＬＴにおけるＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２のＲＮＡ量が、乳酸菌投与群では、対照群と比較して減少していることが確認された。

図２１では、ＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２感染３日後（感染約７２時間後）のＮＡＬＴにおけるＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２のＲＮＡ量が、乳酸菌投与群では、対照群と比較して減少していることが確認された。

Claims (24)

1. 乳酸菌を有効成分として含有する、局所投与用の医薬組成物であって、前記乳酸菌がラクトコッカス・ラクティス・サブスピーシーズ・ラクティス ＪＣＭ５８０５菌株であり、上気道および／または下気道においてプラズマサイトイド樹状細胞によるインターフェロン（ＩＦＮ）の産生を誘導するための、医薬組成物。
2. 局所投与が経鼻投与、舌下投与または吸入投与である、請求項１に記載の医薬組成物。
3. 局所投与が、上気道および／または下気道に対する投与である、請求項１に記載の医薬組成物。
4. 前記上気道が、鼻腔である、請求項３に記載の医薬組成物。
5. 前記医薬組成物の投与対象が感染症に罹患した後、該対象においてＩＦＮの産生が誘導される、請求項１または２に記載の医薬組成物。
6. 感染症の予防または治療のための、または、投与対象の感染症への罹患リスク低減に用いるための、請求項１または２に記載の医薬組成物。
7. 感染症が、ウイルス感染症である、請求項６に記載の医薬組成物。
8. ウイルス感染症の予防が、ウイルス感染症の発症予防またはウイルス感染症の重症化予防である、請求項７に記載の医薬組成物。
9. ウイルス感染症がＣＯＶＩＤ－１９またはインフルエンザウイルス感染症である、請求項７に記載の医薬組成物。
10. ウイルス感染症が呼吸器系感染症の原因ウイルスが感染したものである、請求項７に記載の医薬組成物。
11. 呼吸器系ウイルス感染症の原因ウイルスがＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２またはインフルエンザウイルスである、請求項１０に記載の医薬組成物。
12. 哺乳動物に投与される、請求項１または２に記載の医薬組成物。
13. 哺乳動物がヒトである、請求項１２に記載の医薬組成物。
14. 投与回数が２回以上である、請求項１または２に記載の医薬組成物。
15. 投与間隔が１日以上である、請求項１または２に記載の医薬組成物。
16. ウイルス感染症の予防の有効期間が、局所投与を行った最後の日から５６日間である、請求項７に記載の医薬組成物。
17. 乳酸菌の１日当たりの投与量（成体の体重５０ｋｇ基準）が、１ｍｇ以上１０００ｍｇ以下である、請求項１または２に記載の医薬組成物。
18. ラクトコッカス・ラクティス・サブスピーシーズ・ラクティス ＪＣＭ５８０５菌株を有効成分として含有し、上気道および／または下気道に投与される、局所投与用組成物。
19. ラクトコッカス・ラクティス・サブスピーシーズ・ラクティス ＪＣＭ５８０５菌株を有効成分として含有し、経鼻投与、舌下投与または吸入投与される、局所投与用組成物。
20. 医薬組成物である、請求項１８または１９に記載の局所投与用組成物。
21. 乳酸菌を有効成分として含有する、局所投与用の医薬組成物であって、前記医薬組成物が感染症の予防または治療のための、または、投与対象の感染症への罹患リスク低減に用いるための、医薬組成物であり、前記乳酸菌がラクトコッカス・ラクティス・サブスピーシーズ・ラクティス ＪＣＭ５８０５菌株であり、前記感染症が、ウイルス感染症であり、前記医薬組成物がウイルス感染部位である上気道および／または下気道に局所投与される、医薬組成物。
22. 乳酸菌を有効成分として含有する、局所投与するための免疫賦活用組成物であって、前記乳酸菌がラクトコッカス・ラクティス・サブスピーシーズ・ラクティス ＪＣＭ５８０５菌株であり、前記局所投与が上気道および／または下気道に対する投与であり、次の１）～３）からなる群より選択される少なくとも一つのために用いられる免疫賦活用組成物。
    １）顎下リンパ節および／または脾臓におけるＩＦＮ誘導性抗ウイルス遺伝子（ＩＳＧ）の発現を増強させるため
    ２）脾臓中のリンパ球に対するｐＤＣの比率を増加させるための、および／または、鼻粘膜中のリンパ球に対するｐＤＣの比率を増加させるため
    ３）鼻粘膜中のリンパ球に対するＣＤ１１ｂ^＋Ｓｉｇｌｅｃ－Ｈ^＋細胞の比率を増加させるため
23. 乳酸菌を有効成分として含有する、局所投与するための免疫賦活用組成物であって、前記乳酸菌がラクトコッカス・ラクティス・サブスピーシーズ・ラクティス ＪＣＭ５８０５菌株であり、前記局所投与が経鼻投与、舌下投与または吸入投与であり、次の１）～３）からなる群より選択される少なくとも一つのために用いられる免疫賦活用組成物。
    １）顎下リンパ節および／または脾臓におけるＩＦＮ誘導性抗ウイルス遺伝子（ＩＳＧ）の発現を増強させるため
    ２）脾臓中のリンパ球に対するｐＤＣの比率を増加させるための、および／または、鼻粘膜中のリンパ球に対するｐＤＣの比率を増加させるため
    ３）鼻粘膜中のリンパ球に対するＣＤ１１ｂ ^＋ Ｓｉｇｌｅｃ－Ｈ ^＋ 細胞の比率を増加させるため
24. ＩＳＧが、Ｖｉｐｅｒｉｎ、Ｉｓｇ１５およびＭｘ１からなる群から選択される１種または２種以上である、請求項２２または２３に記載の免疫賦活用組成物。

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