JP7608331B2 - 抗菌組成物 - Google Patents
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Description
(i)下記一般式1の化合物
(ii)下記構造を有する一般式2の精油化合物
R1はH、OHまたはOR(但し、Rは1~5個の炭素原子を有するアルキル鎖である。)であり;
R2は、C1~C6直鎖アルキル基;またはC3~C6分岐アルキル基;またはC5~C6環状もしくは複素環アルキル基;またはC6芳香族基である。]。
R1はH、OHまたはOR(但し、Rは1~5個の炭素原子を有するアルキル鎖である。)であり;
R2は、C1~C6直鎖アルキル基;またはC3~C6分岐アルキル基;またはC5~C6環状もしくは複素環アルキル基;またはC6芳香族基である。]。
以下のサンプルを、以下に記載のプロトコールを使用して、イン・ビトロ抗菌効力について試験した。
例-A:培養コントロール
例-B:1%・テトラヒドロキシプロピルエチレンジアミン(THPE)
例-C:0.01%・チモール
例-1:1%・THPE+0.01%・チモール
使用溶媒:
pH7.4の培養調製物用10mMリン酸ナトリウム緩衝液
大腸菌ATCC 10536
・試験菌をグリセロールストック(-70℃で保存)からTSAスラント(寒天斜面)上に継代培養し、37℃で18~24時間インキュベートした。スラントを冷蔵庫に最大2週間保存した後、新たなスラントを調製した。
・試験菌をTSAスラントからTSAを含むペトリ皿平板上に画線し、使用前に37℃で21~22時間インキュベートした。
・10mMリン酸ナトリウム緩衝液中の106細胞に対応する細菌接種物を上記の平板から調製した。
・培養物のODを大腸菌について0.8に調整して、108細胞/mlを得た。一旦、108細胞に対応する細菌接種材料がリン酸ナトリウム緩衝液中で調製されると、それは106細胞に連続的に希釈される(10mMリン酸ナトリウム緩衝液中で1:10希釈)。
・全ての処理について、135μlの細菌接種材料(106CFU/ml)を300μlの反応容器(マイクロタイタープレート/96ウェルプレート中)に添加した。
・全てのコントロールおよび処置群について、100mM緩衝液の15μlを添加して、すべての反応において~5mMに相当する最終濃度となるようにした。
・試験するそれぞれの化合物/活性物質を添加し、オートクレーブ処理した蒸留水で300μlの体積にした。注:各処理は2連で試験される。
・マイクロタイタープレートを37℃で4時間(接触時間)インキュベートし、次いで、細菌死滅を検査するために中和剤D/E中での必要な連続希釈後にTSA上にプレーティングした。
・プレートを大腸菌検査のために一晩インキュベートした。
・コロニーを計数して、残存する細菌を推定し、それによって対数死滅数を推定した。
1.抗菌活性物質を含まない石鹸バーを各ボランティアに与えて、入浴、手洗い、前腕洗浄等に使用し、7日間ウォッシュオフした後、試験を開始した。
2.ボランティアは、研究が終了するまで、いかなるリーブオン製品(サンスクリーン、手指消毒剤、皮膚保湿剤、ローション、クリーム、油および抗菌製品)の使用も控えるように指示された。
3.ボランティアは、朝に前腕を洗うことなく8日目に研究現場に来るように求められた(好ましくは入浴せずに研究現場に来るように求められた。)。
4.8日目に、研究者は例Dの石鹸バーでボランティアの一方の前腕を洗浄し、例2の石鹸バーで他の前腕を洗浄した。
5.洗浄プロトコールは以下の通りであった。
・水道水温は24℃±2℃であった。
・石鹸を水中で10秒間湿潤/浸漬する。
・各前腕を水道水(100ml±10ml)で湿らせる。
・前腕の全長にわたって石鹸を前後に10回塗布する。
・手袋をした手の掌に水を2~3mlとり、手で前腕を30秒間泡立てる。
・前腕に20秒間泡を保持する。
・前腕に水道水を流して1分間洗浄し、石鹸を完全に除去する。
・滅菌ティッシュペーパーを用いてパット乾燥することにより、過剰の水を除去する。
・前腕を洗った30分後、108ストックからの10μLの大腸菌(10536)を、前腕皮膚上の規定された円形領域(7cm2の円)に10分間適用した。(108培養ストックは10mMリン酸ナトリウム緩衝液中で、18~20時間培養液を用いて調製した。ODは620nmで0.8に調整し、108カウントを達成した。)。
6.前腕皮膚への大腸菌の10分間の接触時間の後、1.5mlの抽出緩衝液を用いてカップスクラブ法(ASTM法、E2752-10)により回収した。
7.次いで、各サンプルを9mlのD/E(Dey Engley中和ブロス)中で連続希釈し、それぞれの希釈物をMacConkey寒天培地上にプレーティングした。
8.プレートを37℃で24時間インキュベートして大腸菌を増殖させ、次いでコロニーを計数し、標準的な微生物学的方法を用いてlog cfu/mlを計算した。
0.4g・KH2PO4、10.1g・Na2HPO4、1.0g・Triton X100、100.0g・Tween 80および11.67g・レシチンを1リットルの精製熱水に溶解した。最終pHを7.8±0.1に調整した。オートクレーブ処理の直後に緩衝液をボルテックス処理した。
チモール+THPEについて行った実験と同様の実験を、カルバクロール+THPEを用いて行った。抗菌効力を、例1およびA~Cについて上記で詳述したように、イン・ビトロで測定した。抗菌効果を以下の表-4に要約する:
チモール+THPEについて行った実験と同様の実験を、オイゲノール+THPEを用いて行った。抗菌効力を、例1およびA~Cについて上記で詳述したように、イン・ビトロで測定した。抗菌効果を以下の表-5に要約する:
Claims (10)
- 抗菌組成物であって、以下の
(i)0.1~10重量%の下記一般式1の化合物
[式中、R1~R4はそれぞれ独立して、2~5個の炭素原子を有する直鎖状または分枝状炭素鎖であり、R5は、1~4個の炭素原子を有する炭素鎖である];および
(ii)0.005~0.5重量%の下記構造を有する一般式2の精油化合物
[式中、
R1はH、OHまたはOR(但し、Rは1~5個の炭素原子を有するアルキル鎖である)であり;
R2は、C1~C6直鎖アルキル基;またはC3~C6分岐アルキル基;またはC5~C6環状もしくは複素環アルキル基;またはC6芳香族基である];
を含有し、
但し、前記精油化合物は、チモール、カルバクロール、2-プロピルフェノール、4-ペンチルフェノール、4-sec-ブチルフェノール、2-ベンジルフェノールもしくはオイゲノールまたはそれらの組み合わせから選択され、
前記一般式1の化合物が、次式を有するテトラヒドロキシプロピルエチレンジアミン(THPE)
であり、水および界面活性剤を含む化粧品として許容される基剤を含む、前記抗菌組成物。 - 前記精油化合物がチモール、カルバクロールまたはオイゲノールである請求項1に記載の組成物。
- 前記組成物がテルピネオールをさらに含む、請求項1又は2に記載の組成物。
- テルピネオールおよび精油化合物としてのチモールの混合物を含む、請求項3に記載の組成物。
- 前記界面活性剤がアニオン性界面活性剤、好ましくは石鹸である請求項1~4のいずれか1項に記載の組成物。
- 成形された固体のバーの形態である、請求項1~5のいずれか1項に記載の組成物。
- 請求項1~6のいずれか1項に記載の組成物を所望の皮膚表面に適用し、続いて該組成物を該表面から拭き取るか、または該表面を水ですすいで該組成物を実質的に含まないようにする工程を含む、皮膚に抗菌効力を提供する方法。
- 前記組成物を水で希釈した後に、該組成物を所望の皮膚表面に適用する、請求項7に記載の方法。
- 前記組成物が、希釈溶液の1~50重量%、好ましくは2~20重量%の濃度まで水で希釈される、請求項8に記載の方法。
- 前記拭き取りまたはすすぎの工程が、前記組成物を適用した後10秒~2分で行われる、請求項7~9のいずれか1項に記載の方法。
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