JP7496198B2 - Yeast and foods made with it - Google Patents

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Description

NPMD NPMD NITE P-03028NITE P-03028

本発明は、酵母に関し、詳しくは、凍結融解耐性の高い酵母及びこれを用いた食品に関する。 The present invention relates to yeast, and more specifically to yeast with high freeze-thaw resistance and foods using the same.

野生酵母由来で菌株の出自が明らかにされている市販パン酵母製品としては、例えば、「白神こだま酵母」(特許文献1、非特許文献1)及び「とかち野酵母」(特許文献2)などがある。「白神こだま酵母」は、温帯落葉樹林帯内の腐葉土から分離された酵母であり、「とかち野酵母」は、北海道十勝地方に自生するエゾヤマザクラのサクランボから分離された酵母である。 Commercially available baker's yeast products derived from wild yeast and whose strain origins are known include, for example, "Shirakami Kodama Yeast" (Patent Document 1, Non-Patent Document 1) and "Tokachino Yeast" (Patent Document 2). "Shirakami Kodama Yeast" is a yeast isolated from leaf mold in temperate deciduous forests, while "Tokachino Yeast" is a yeast isolated from cherries of the Siberian cherry tree that grows wild in the Tokachi region of Hokkaido.

特開2001-178449号公報JP 2001-178449 A 特開2010-068739号公報JP 2010-068739 A

J. Appl. Glycosci.,Vol. 56, Suppl., 2009J. Appl. Glycosci., Vol. 56, Suppl., 2009

食品用に用いられる酵母は、一般に、冷蔵保存して、保管または流通される。国内において冷凍で保管、流通している製パン用などの酵母は、白神こだま酵母(登録商標)のみである。しかし、白神こだま酵母は冷凍および解凍を複数回行うと、酵母の生存率が低下してしまい、発酵食品などに用いることが困難となってしまう傾向があった。そのため、冷凍酵母は、一度解凍すると、再び冷凍保存するのは望ましくないため、およそ一週間以内に使用しきる必要があった。 Yeast used for food is generally stored or distributed refrigerated. In Japan, the only yeast for baking and other uses that is stored and distributed frozen is Shirakami Kodama Yeast (registered trademark). However, when Shirakami Kodama Yeast is frozen and thawed multiple times, the survival rate of the yeast decreases, making it difficult to use in fermented foods and the like. For this reason, once frozen yeast has been thawed, it is not advisable to store it frozen again, and it must be used within about a week.

以上のような状況に鑑み、本発明は、凍結融解を繰り返しても生存率の高い酵母およびこれを用いた食品を提供することを課題とするものである。 In view of the above circumstances, the present invention aims to provide yeast that has a high survival rate even after repeated freezing and thawing, and food products that use the yeast.

本発明者等は、様々な指標を用いてスクリーニングを実施し、鋭気研究の結果、上記の課題を解決できる酵母を見出し、本願発明を完成させるに至った。 The inventors conducted screening using various indicators, and as a result of their intensive research, they discovered a yeast that can solve the above problems, and thus completed the present invention.

〔1〕 凍結融解処理を2回繰り返した後の生存率が70%以上である、サッカロマイセス・セレビシエ。
〔2〕 凍結融解処理を3回繰り返した後の生存率が55%以上である、上記〔1〕に記載のサッカロマイセス・セレビシエ。
〔3〕 炭素源としてブドウ糖を含むYPD培地で2日間培養した後に回収した菌体中のトレハロース含有量が、前記菌体の乾燥菌体重量に対して19重量%以上である、上記〔1〕または〔2〕のいずれか一項に記載のサッカロマイセス・セレビシエ。
〔4〕 食塩10%(w/v)を含むYPD培地で増殖可能な耐塩性を有する、上記〔1〕~〔3〕のいずれか一項に記載のサッカロマイセス・セレビシエ。
〔5〕 更に、炭素源として、ブドウ糖、ショ糖、およびマルトースのそれぞれについて資化能を有する、上記〔1〕~〔4〕に記載のサッカロマイセス・セレビシエ。
〔6〕 サッカロマイセス・セレビシエの下記(A)または(B)の菌株:
(A)サッカロマイセス・セレビシエ KAY 723株、または
(B)前記(A)の菌株の全ゲノム配列に対する同一性が90%以上であって、且つ、凍結融解処理を2回繰り返した後の生存率が70%以上である菌株。
〔7〕 サッカロマイセス・セレビシエ KAY 723株。
〔8〕 上記〔1〕~〔7〕のいずれか一項に記載のサッカロマイセス・セレビシエの菌体を含む冷凍物である、冷凍酵母組成物。
〔9〕 上記〔1〕~〔7〕のいずれか一項に記載のサッカロマイセス・セレビシエの菌体を含む、冷凍パン生地。
〔10〕 上記〔1〕~〔7〕のいずれか一項に記載のサッカロマイセス・セレビシエの菌体乾燥物である、乾燥パン酵母。
〔11〕 上記〔1〕~〔7〕のいずれか一項に記載のサッカロマイセス・セレビシエの菌体を用いて発酵させることを含む、発酵食品の製造方法。
〔12〕 上記〔1〕~〔7〕のいずれか一項に記載のサッカロマイセス・セレビシエの菌体を含むパン生地を焼成することを含む、パンの製造方法。
〔13〕 上記〔1〕~〔7〕のいずれか一項に記載のサッカロマイセス・セレビシエの菌体を、-10~-30℃で冷凍する、サッカロマイセス・セレビシエの保存方法。
[1] Saccharomyces cerevisiae having a survival rate of 70% or more after two repeated freeze-thaw treatments.
[2] The Saccharomyces cerevisiae according to [1] above, which has a survival rate of 55% or more after three repeated freeze-thaw treatments.
[3] The Saccharomyces cerevisiae according to any one of [1] and [2] above, wherein the trehalose content in the cells recovered after culturing for 2 days in a YPD medium containing glucose as a carbon source is 19% by weight or more based on the dry cell weight of the cells.
[4] The Saccharomyces cerevisiae according to any one of [1] to [3] above, which has salt tolerance and can grow in a YPD medium containing 10% (w/v) salt.
[5] The Saccharomyces cerevisiae according to any one of [1] to [4] above, further having the ability to assimilate each of glucose, sucrose, and maltose as a carbon source.
[6] A Saccharomyces cerevisiae strain selected from the following strains (A) and (B):
(A) Saccharomyces cerevisiae KAY 723 strain, or (B) a strain having an identity of 90% or more to the entire genome sequence of the strain (A) and having a survival rate of 70% or more after two repeated freeze-thaw treatments.
[7] Saccharomyces cerevisiae KAY 723 strain.
[8] A frozen yeast composition, which is a frozen product containing the Saccharomyces cerevisiae cells according to any one of [1] to [7] above.
[9] A frozen bread dough comprising the Saccharomyces cerevisiae cells according to any one of [1] to [7] above.
[10] A dried baker's yeast which is a dried product of cells of the Saccharomyces cerevisiae strain according to any one of [1] to [7] above.
[11] A method for producing a fermented food, comprising fermenting using the Saccharomyces cerevisiae cells according to any one of [1] to [7] above.
[12] A method for producing bread, comprising baking dough containing the Saccharomyces cerevisiae cells according to any one of [1] to [7] above.
[13] A method for preserving Saccharomyces cerevisiae, comprising freezing the cells of the Saccharomyces cerevisiae according to any one of [1] to [7] above at -10 to -30°C.

本発明によって、凍結融解耐性の高い酵母が提供される。本発明の酵母は、凍結融解を複数回繰り返しても生存率が高く、食品添加物またはこれを含む食品として、保存、流通する上で利便性が高い。 The present invention provides yeast with high freeze-thaw resistance. The yeast of the present invention has a high survival rate even after repeated freezing and thawing, and is highly convenient for storage and distribution as a food additive or a food containing the same.

以下、本発明の実施形態について説明する。なお、本発明を特定するために用いられる数値は、下記に詳述される実施例に記載の方法によって特定できるものである。 The following describes an embodiment of the present invention. The numerical values used to specify the present invention can be determined by the method described in the examples below.

1.本発明の酵母
本発明は、凍結融解耐性の高い酵母を提供するものである。
本発明の一実施形態としては、凍結融解処理を2回繰り返した後の生存率が70%以上である、サッカロマイセス・セレビシエ(Saccharomyces cerevisiae)でありうる。当該生存率は、より好ましくは75%、さらに好ましくは76、77、78、79、または80%でありうる。
1. Yeast of the Present Invention The present invention provides a yeast having high freeze-thaw resistance.
One embodiment of the present invention may be Saccharomyces cerevisiae having a viability of 70% or more after two repeated freeze-thaw cycles, more preferably 75%, and even more preferably 76, 77, 78, 79, or 80%.

また、本発明の他の一実施形態としては、凍結融解処理を3回繰り返した後の生存率が55%以上である、サッカロマイセス・セレビシエでありうる。当該生存率は、より好ましくは58%、さらに好ましくは59、または60%でありうる。 In another embodiment of the present invention, the Saccharomyces cerevisiae has a survival rate of 55% or more after three repeated freeze-thaw cycles. The survival rate is more preferably 58%, and even more preferably 59 or 60%.

また、本発明の他の一実施形態としては、凍結融解処理を1回行った時点での生存率が80%以上、より好ましくは82%以上、さらに好ましくは、83、84、または85%以上でありうる。 In another embodiment of the present invention, the survival rate after one freeze-thaw cycle may be 80% or more, more preferably 82% or more, and even more preferably 83, 84, or 85% or more.

本発明の酵母は、更に他の実施形態として、トレハロースを高蓄積するサッカロマイセス・セレビシエでありうる。トレハロースを高蓄積する程度としては、例えば、炭素源としてブドウ糖を含むYPD培地で2日間培養した後に回収した菌体中のトレハロース含有量が、前記菌体の乾燥菌体重量に対して19重量%以上でありえ、好ましくは、20重量%、より好ましくは23重量%、さらに好ましくは25、26、または27重量%でありうる。 In yet another embodiment, the yeast of the present invention may be Saccharomyces cerevisiae that highly accumulates trehalose. The degree of trehalose accumulation may be, for example, such that the trehalose content in the cells harvested after two days of culture in a YPD medium containing glucose as a carbon source is 19% by weight or more, preferably 20% by weight, more preferably 23% by weight, and even more preferably 25, 26, or 27% by weight, based on the dry cell weight of the cells.

また、本発明の他の一実施形態としては、耐塩性の高いサッカロマイセス・セレビシエでありうる。耐塩性の有無または程度は、例えば、所定の濃度の食塩を含むYPD培地などに塗布して増殖の有無を確認することなどの方法によって特定できる。より具体的には、例えば、食塩10%(w/v)を含むYPD培地で増殖可能であるか否かを評価することが挙げられる。 Another embodiment of the present invention may be a highly salt-tolerant Saccharomyces cerevisiae. The presence or degree of salt tolerance can be determined, for example, by applying the bacteria to a YPD medium containing a predetermined concentration of salt and confirming whether or not the bacteria grows. More specifically, for example, the ability to grow in a YPD medium containing 10% (w/v) salt can be evaluated.

本発明の酵母は、更に他の実施形態として、炭素源として、ブドウ糖、ショ糖、およびマルトースのそれぞれについて資化能を有する、サッカロマイセス・セレビシエでありうる。このように様々な糖質に対し資化能を有する酵母は、様々なパンの製造に供試し得るため、製パン適性に優れているといえる。 In yet another embodiment, the yeast of the present invention may be Saccharomyces cerevisiae that has the ability to assimilate glucose, sucrose, and maltose as carbon sources. Yeast that has the ability to assimilate various carbohydrates in this way can be used to make a variety of breads, and therefore can be said to have excellent suitability for bread making.

本発明の好ましい一実施形態としては、例えば、サッカロマイセス・セレビシエ KAY 723株が挙げられる。KAY 723株は、下記の実施例の欄にて詳説するとおり、秋田県山本郡八峰町八森(字留山地内)の世界自然遺産「白神山地」緩衝地域より所管官庁の許可を得て採取した腐葉土から単離された菌株である。KAY 723株は、下記のとおり寄託されている。
(1)(受託番号:NITE P-03028)
(2)(受託日:2019年9月26日)
(3)寄託先:独立行政法人製品評価技術基盤機構 バイオテクノロジーセンター 特許微生物寄託センター(NPMD)(日本国千葉県木更津市かずさ鎌足2-5-8)
A preferred embodiment of the present invention is, for example, Saccharomyces cerevisiae KAY 723 strain. As described in detail in the Examples section below, KAY 723 strain is a strain isolated from leaf mold collected with permission from the competent authorities from the buffer zone of the World Natural Heritage site "Shirakami-Sanchi" in Hachimori, Hachimine-cho, Yamamoto-gun, Akita Prefecture (within the Tomeyama area). KAY 723 strain has been deposited as follows.
(1) (Accession number: NITE P-03028)
(2) (Accepted date: September 26, 2019)
(3) Deposit location: National Institute of Technology and Evaluation, Biotechnology Center, Patent Microorganisms Depositary (NPMD), 2-5-8 Kazusa Kamatari, Kisarazu, Chiba, Japan

KAY 723菌株は、菌学的性質として、下記の特徴を示す。(+:ポジティブ、-:ネガティブ)
凍結融解耐性:+
トレハロース蓄積能:+
ブドウ糖資化能:+
ショ糖資化能:+
マルトース資化能:+
無糖パン生地での発酵能:+
低ショ糖含有パン生地での発酵能:+
高ショ糖含有パン生地での発酵能:+
グルコース濃度46%(w/v)存在下で良好な生育、50%(w/v)存在下でも生育可能
食塩濃度6%(w/v)存在下で良好な生育、10%(w/v)存在下でも生育可能
核と液胞を有する卵形の形状
出芽により増殖
YPD平板培地上に直径2から8mmの艶のない乳白色のコロニーを形成
The KAY 723 strain exhibits the following mycological characteristics. (+: positive, -: negative)
Freeze-thaw resistance: +
Trehalose accumulation ability: +
Glucose utilization: +
Sucrose utilization: +
Maltose assimilation ability: +
Fermentation ability in unsweetened bread dough: +
Fermentation ability in low sucrose dough: +
Fermentation ability in high sucrose dough: +
Grows well in the presence of 46% (w/v) glucose, can grow even in the presence of 50% (w/v) Grows well in the presence of 6% (w/v) salt, can grow even in the presence of 10% (w/v) Oval shape with nucleus and vacuoles Grows by budding Forms dull milky white colonies with a diameter of 2 to 8 mm on YPD plate medium

また、本発明の酵母は、上記KAY 723菌株と同等の高凍結融解耐性を有する変異株でありうる。例えば、当該変異株は、サッカロマイセス・セレビシエ KAY 723株の全ゲノム配列に対する同一性(Identity)が約90%以上であって、且つ、凍結融解処理を2回繰り返した後の生存率が70%以上である菌株でありうる。また、他の実施形態としては、当該変異株は、サッカロマイセス・セレビシエ KAY 723株の全ゲノム配列に対する同一性(Identity)が約90%以上であって、且つ、凍結融解処理を2回繰り返した後の生存率が55%以上である菌株でありうる。 The yeast of the present invention may be a mutant strain having high freeze-thaw resistance equivalent to that of the above-mentioned KAY 723 strain. For example, the mutant strain may have an identity of about 90% or more to the entire genome sequence of the Saccharomyces cerevisiae KAY 723 strain, and a survival rate of 70% or more after two repeated freeze-thaw treatments. In another embodiment, the mutant strain may have an identity of about 90% or more to the entire genome sequence of the Saccharomyces cerevisiae KAY 723 strain, and a survival rate of 55% or more after two repeated freeze-thaw treatments.

配列の同一性は、BLAST(Basic Local Alignment Search Tool)などの公知のソフトウエアを用いることにより求めることができる。本発明に係る酵母において、KAY 723菌株の全ゲノム配列に対する同一性は、好ましくは約93%以上、より好ましくは約95%以上、さらに好ましくは約96、約97、約98、または約99%以上でありうる。なお、これまでに公開されたサッカロマイセス・セレビシエの全ゲノム配列によると、そのゲノムサイズは、一般的に約12Mb~12.5Mbである。サッカロマイセス・セレビシエの公知の配列は、例えば、NCBI(National Center For Biotechnology Information)、DDBJ(DNA Data Bank Of Japan)などを通じて検索可能である。 The sequence identity can be determined by using known software such as BLAST (Basic Local Alignment Search Tool). In the yeast of the present invention, the identity to the entire genome sequence of the KAY 723 strain is preferably about 93% or more, more preferably about 95% or more, and even more preferably about 96, about 97, about 98, or about 99% or more. According to the entire genome sequences of Saccharomyces cerevisiae published so far, the genome size is generally about 12 Mb to 12.5 Mb. Known sequences of Saccharomyces cerevisiae can be searched, for example, through NCBI (National Center for Biotechnology Information), DDBJ (DNA Data Bank Of Japan), etc.

2.本発明の酵母の利用
本発明の酵母は、さまざまな形態を採用しうる。本発明の一実施形態としては、上記のサッカロマイセス・セレビシエの菌体を冷凍した、冷凍酵母組成物でありうる。本発明のサッカロマイセス・セレビシエは、上述のとおり、凍結融解耐性に優れており、冷凍製品として保存、流通に好適である。
2. Use of the yeast of the present invention The yeast of the present invention may be in various forms. One embodiment of the present invention may be a frozen yeast composition obtained by freezing the above-mentioned Saccharomyces cerevisiae cells. As described above, the Saccharomyces cerevisiae of the present invention has excellent resistance to freezing and thawing, and is suitable for storage and distribution as a frozen product.

当該冷凍酵母組成物は、例えば、冷凍パン生地、冷凍ピザ生地などでありうる。本発明のサッカロマイセス・セレビシエは、一実施形態として、製パン適性も優れており、冷凍パン生地として好適である。また、本発明のサッカロマイセス・セレビシエは、一実施形態として、耐塩性に優れており、食塩を含む食品にも好適に用いうる。 The frozen yeast composition can be, for example, frozen bread dough, frozen pizza dough, etc. In one embodiment, the Saccharomyces cerevisiae of the present invention has excellent bread-making suitability and is suitable as frozen bread dough. In one embodiment, the Saccharomyces cerevisiae of the present invention has excellent salt tolerance and can be used suitably in foods containing salt.

本発明の酵母は、通常の酵母と同様に、食品原料に添加して、発酵食品の製造に用いうる。本発明の酵母は、パンの製造方法に好適に用いうる。 The yeast of the present invention can be added to food ingredients in the same way as regular yeast and used to produce fermented foods. The yeast of the present invention can be suitably used in the method of producing bread.

また、パン生地に添加する酵母は、生存していなければ発酵が進まず、パン生地、パンの膨らみが不十分となる。本発明の酵母は、一実施形態として、家庭用冷蔵庫で汎用されている-18℃前後の冷凍庫で、凍結、融解を繰り返しても、従来の酵母よりも生存率が高いため、ホームベーカリー用のパン生地などとして好適である。 Furthermore, if the yeast added to the dough is not viable, fermentation will not proceed, and the dough and bread will not rise sufficiently. In one embodiment, the yeast of the present invention has a higher survival rate than conventional yeast even when repeatedly frozen and thawed in a freezer at around -18°C, which is commonly used in household refrigerators, making it suitable for use in bread dough for home bakeries.

また、本発明の酵母は、一実施形態として、ブドウ糖、ショ糖、マルトースについて資化能を有し、また無糖、低糖、高糖パン生地においても発酵能を有するため、製パン適性に優れている。そのため、本発明の酵母は、パン生地に添加し、これを焼成することによりパンの製造に好適に用いうる。 In one embodiment, the yeast of the present invention has the ability to assimilate glucose, sucrose, and maltose, and also has the ability to ferment sugar-free, low-sugar, and high-sugar bread dough, making it highly suitable for bread making. Therefore, the yeast of the present invention can be suitably used in the production of bread by adding it to bread dough and baking it.

また、本発明の酵母は、乾燥して、乾燥菌体の形態としてもよい。乾燥菌体の場合、室温で保存してもよく、また、-10℃以上0℃未満の温度条件下で冷蔵保存してもよい。 The yeast of the present invention may also be dried to give a dried cell form. In the case of dried cells, they may be stored at room temperature or in a refrigerator at a temperature of -10°C or higher and lower than 0°C.

また、本発明の一実施形態は、上記のサッカロマイセス・セレビシエの菌体を、-10~-30℃で冷凍する、サッカロマイセス・セレビシエの保存方法でありうる。冷凍温度は、一定でなくてもよく、例えば、約-20℃程度~-30℃程度で急速冷凍後に、約-19℃程度~-10℃程度で冷凍または冷蔵保管するようにしてもよい。上述のとおり、本発明の酵母は、家庭用冷蔵庫で汎用されている-18℃前後の冷凍庫で、凍結、融解を繰り返しても、従来の酵母よりも生存率が高い。したがって、本発明の酵母の好ましい保存方法の実施形態としては、例えば、-10℃~-20℃、-15℃~-19℃、または-18℃前後での冷凍保存などでありうる。 One embodiment of the present invention may be a method for preserving Saccharomyces cerevisiae, in which the above-mentioned Saccharomyces cerevisiae cells are frozen at -10 to -30°C. The freezing temperature does not have to be constant, and for example, the cells may be flash-frozen at about -20°C to -30°C, and then frozen or refrigerated at about -19°C to -10°C. As described above, the yeast of the present invention has a higher survival rate than conventional yeast even when repeatedly frozen and thawed in a freezer at about -18°C, which is commonly used in household refrigerators. Therefore, preferred embodiments of the method for preserving the yeast of the present invention may be, for example, frozen storage at -10°C to -20°C, -15°C to -19°C, or around -18°C.

以下に実施例を挙げて本発明について具体的に説明するが、本発明の技術的範囲が下記の実施例に限定されるものではない。 The present invention will be described in detail below with reference to examples, but the technical scope of the present invention is not limited to the following examples.

なお、下記実施例における生地配合の分量表記にあたっては、ベーカーズパーセントを用いた。ベーカーズパーセントとは、生地に用いる小麦粉重量に対する重量%であり、BPと略記される。一例をあげて説明すると、水を70ベーカーズパーセント使用する場合、小麦粉100gに対して70gの水を使用する。同様に、小麦粉250gに対しては、175gの水を使用する。 In the examples below, the dough amounts are expressed in baker's percentage. Baker's percentage is the weight percentage of the flour used in the dough, and is abbreviated as BP. To give an example, if you use 70 baker's percentage of water, you would use 70g of water for 100g of flour. Similarly, you would use 175g of water for 250g of flour.

YPD液体培地は、次のように調製した。Yeast Extract(Difco社製)1g、Polypepton(Difco社製)2g、Dextrose(関東化学社製)2gを正確に秤量した後、蒸留水で溶解し、100mlとなるようにメスアップした。このYPD液体培地をオートクレーブにて121℃、15分間滅菌処理を行い、室温まで冷却して使用した。YPD寒天培地は、上記YPD液体培地成分に対し、1.5%(w/v)となるように寒天を加え、滅菌処理を行って使用した。 YPD liquid medium was prepared as follows. 1 g of Yeast Extract (Difco), 2 g of Polypeptone (Difco), and 2 g of Dextrose (Kanto Chemical) were accurately weighed, dissolved in distilled water, and made up to 100 ml. This YPD liquid medium was sterilized in an autoclave at 121°C for 15 minutes, cooled to room temperature, and used. YPD agar medium was prepared by adding agar to the above YPD liquid medium components to make a concentration of 1.5% (w/v), and sterilizing before use.

生酵母は、以下のようにして調製した。生酵母は、保存株から前培養を行い、続いて本培養を行って得られた菌体を洗浄することで、生酵母として使用した。各菌株の保存株は、20%(w/w)グリセロール懸濁液としてマイナス80℃に保存されている。
菌体は滅菌生理食塩水にて2回洗浄したものを生酵母として使用した。
The live yeast was prepared as follows. The live yeast was prepared by pre-culturing the stock strain, followed by main culture, and washing the resulting cells. The stock strains were stored at -80°C as 20% (w/w) glycerol suspension.
The cells were washed twice with sterile physiological saline and used as live yeast.

本発明の酵母の一実施例である、KAY 723株は、以下に示す方法により単離した。
1. 微生物の分離
1.1. 菌株の分離
秋田県山本郡八峰町八森(字留山地内)の世界自然遺産「白神山地」緩衝地域より所管官庁の許可を得て採取した腐葉土0.1gを、クロラムフェニコール200ppm、ブトウ糖0.3g、ペプトン0.1g、酵母エキス0.05g、水道水10mlの組成からなる培地に入れ、25~26℃、振幅5cmで5~7日間振とう培養を行い酵母の集殖を計った後、粉末麹エキス50g、寒天15g、水道水1、000ml、pH5.0の組成からなる麹汁寒天培地で27℃、3日間培養し、菌株を純粋に分離した。
The KAY 723 strain, which is an example of the yeast of the present invention, was isolated by the method described below.
1. Isolation of Microorganisms 1.1. Isolation of Bacterial Strains 0.1 g of leaf mold collected with permission from the competent authorities from the buffer zone of the World Natural Heritage site "Shirakami-Sanchi" in Hachimori, Hachimine-cho, Yamamoto-gun, Akita Prefecture (within the area of Tome-sanchi) was placed in a medium containing 200 ppm chloramphenicol, 0.3 g glucose, 0.1 g peptone, 0.05 g yeast extract, and 10 ml of tap water, and cultured at 25-26°C with a shaking amplitude of 5 cm for 5-7 days to allow yeast to multiply. After that, the yeast was cultured at 27°C for 3 days on a koji juice agar medium containing 50 g powdered koji extract, 15 g agar, 1,000 ml of tap water, and a pH of 5.0, to isolate the pure strain.

1.2. トレハロース生産菌の選抜
上記方法にて純粋に分離された菌株を、酵母エキス1g、ペプトン2g、ブドウ糖2g、蒸留水100mlの組成からなるYPD培地5mlに入れ、30℃、振幅5cmで、2日間、250rpmにて振盪培養を行い、前培養とした。本培養として、YPD培地に対して1/100量の前培養液を接種し、30℃、1分あたり120回転で、2日間、振盪培養を行った。本培養で得られた菌体を遠心分離機を用いて、4,000rpm、4℃の条件下で、10分間遠心分離を行い、上清を捨て、菌体を回収した。
1.2. Selection of Trehalose-producing Bacteria The strain isolated purely by the above method was placed in 5 ml of YPD medium consisting of 1 g yeast extract, 2 g peptone, 2 g glucose, and 100 ml distilled water, and cultured at 30°C, 5 cm amplitude, and 250 rpm for 2 days as a preculture. For main culture, 1/100 of the preculture liquid was inoculated into the YPD medium, and cultured at 30°C, 120 revolutions per minute, and 2 days as a shake culture. The cells obtained in the main culture were centrifuged at 4,000 rpm and 4°C for 10 minutes using a centrifuge, the supernatant was discarded, and the cells were collected.

菌体0.5gを、2.5%のトリクロロ酢酸で抽出し、抽出液中のトレハロースを高速液体クロマトグラフィー(日立ハイテクサイエンス社製)にて測定した。乾燥菌体重量に対し、19%以上のトレハロース含有量を示した11株(トレハロース高蓄積株)を選抜した。 0.5 g of the cells were extracted with 2.5% trichloroacetic acid, and the trehalose in the extract was measured by high performance liquid chromatography (Hitachi High-Tech Science Corporation). Eleven strains (high trehalose accumulation strains) that showed a trehalose content of 19% or more based on the dry cell weight were selected.

2.サッカロマイセス・セレビシエの選抜
酵母の仲間には病原性を有するものも存在する。その中で、パンや清酒などの食品に広く利用される酵母はサッカロマイセス・セレビシエ(Saccharomyces cerevisiae)である。製パンなど食品加工に利用可能な酵母を取得するためには、上記にて得られたトレハロース高蓄積株のうちから、サッカロマイセス・セレビシエであるものを選抜する必要がある。そこで、上記にて得られたトレハロース高蓄積株11株から、食品に広く利用しうるサッカロマイセス・セレビシエの同定および選抜を試みた。
2. Selection of Saccharomyces cerevisiae Some yeasts are pathogenic. Among them, Saccharomyces cerevisiae is a yeast that is widely used in foods such as bread and sake. In order to obtain yeast that can be used in food processing such as bread making, it is necessary to select Saccharomyces cerevisiae from the trehalose-accumulating strains obtained above. Therefore, we attempted to identify and select Saccharomyces cerevisiae that can be widely used in foods from the 11 trehalose-accumulating strains obtained above.

サッカロマイセス・セレビシエの同定には、真菌中に含まれるリボゾームRNA(rRNA)塩基配列の相同性比較にて同定を行った。rRNA塩基配列は、同一種の菌株間ではITS領域の塩基配列の相同性が99%以上であることが示されており、一般にこの数値が同定の目安とされている。そこで、rRNA塩基配列のうちITS領域に加えて26/28S rRNA 遺伝子のD1/D2領域の塩基配列の相同性を比較して同定を試みた。塩基配列の相同性比較はBLASTにて行った。 Saccharomyces cerevisiae was identified by comparing the homology of the ribosomal RNA (rRNA) base sequences contained in the fungus. It has been shown that the homology of the base sequences of the ITS region of rRNA base sequences is 99% or more between strains of the same species, and this figure is generally used as a guideline for identification. Therefore, identification was attempted by comparing the homology of the base sequences of the D1/D2 regions of the 26/28S rRNA genes in addition to the ITS region of the rRNA base sequences. The homology comparison of the base sequences was performed using BLAST.

その結果、4株のサッカロマイセス・セレビシエを得た。4株のうち、3株はITS領域およびD1/D2領域共に100%の相同性を示した。1株はITS領域の相同性が99%であったが、この1株のD1/D2領域は100%の相同性を示したため、サッカロマイセス・セレビシエと同定した。以上より、11株のうちから、4株の食品利用が可能な酵母、サッカロマイセス・セレビシエを取得した。これら4株は、トレハロースを高蓄積するサッカロマイセス・セレビシエである。 As a result, four strains of Saccharomyces cerevisiae were obtained. Of the four strains, three showed 100% homology in both the ITS region and the D1/D2 region. One strain had 99% homology in the ITS region, but the D1/D2 region of this strain showed 100% homology, and was therefore identified as Saccharomyces cerevisiae. From the above, four strains of yeast Saccharomyces cerevisiae that can be used as food were obtained from the 11 strains. These four strains are Saccharomyces cerevisiae that accumulate high amounts of trehalose.

3.サッカロマイセス・セレビシエの糖質資化試験
無糖パンの種類としては、フランスパン、バゲットなどがある。小麦粉に含まれる糖質として、ブドウ糖の他にマルトースが多く含まれる。そこで、ブドウ糖またはショ糖、またはマルトースを炭素源として生育できる菌株の選抜を試みた。
3. Carbohydrate assimilation test for Saccharomyces cerevisiae Types of sugar-free bread include French bread and baguette. Wheat flour contains a lot of maltose as well as glucose as a carbohydrate. Therefore, we tried to select a strain that can grow using glucose, sucrose, or maltose as a carbon source.

そこで、上記にて得られた、トレハロースを高蓄積するサッカロマイセス・セレビシエ4株を、YPD培地5mlにて30℃、振幅5cmにて、2日間、250rpmにて振盪培養して前培養液を得た。 The four trehalose-accumulating Saccharomyces cerevisiae strains obtained above were then cultured in 5 ml of YPD medium at 30°C with a shaking amplitude of 5 cm for 2 days at 250 rpm to obtain a preculture solution.

酵母エキス1g、ペプトン2g、糖質2g、蒸留水100mlの組成からなるYPD培地において、糖質の種類を、ブドウ糖2g、ショ糖2g、またはマルトース2gのいずれかとして、糖質の異なる3種類のYPD培地を用意した。各YPD培地5mlに、1/100量の前培養液を入れ良く懸濁した後、各200μlを丸底96wellマイクロプレート(岩城硝子社製)に移植した。このマイクロプレートを、インキュベーションリーダーHiTS(株式会社サイニクス社製)にて、30℃で、1時間毎に、吸光度600nmを測定し、数値の増加から微生物の増殖を測定した。 Three types of YPD medium with different carbohydrates were prepared, each consisting of 1 g yeast extract, 2 g peptone, 2 g carbohydrate, and 100 ml distilled water, with the carbohydrate being either 2 g glucose, 2 g sucrose, or 2 g maltose. 1/100 volume of preculture solution was added to 5 ml of each YPD medium and thoroughly suspended, after which 200 μl of each was transferred to a round-bottom 96-well microplate (manufactured by Iwaki Glass Co., Ltd.). The microplate was measured for absorbance at 600 nm every hour at 30°C using an incubation reader HiTS (manufactured by Synix Co., Ltd.), and the growth of the microorganisms was measured from the increase in the value.

その結果、4株のうち、1株はマルトース存在下で増殖が非常に悪いことから、マルトース資化能が実質的にないものと思われた。これにより、マルトースを唯一の炭素源とする培地でも良好な増殖性を示した3株を選抜した。この3株はトレハロースを高蓄積し、マルトースを唯一の炭素源とする培地中で良好な生育を示すサッカロマイセス・セレビシエである。 As a result, one of the four strains showed very poor growth in the presence of maltose, suggesting that it had virtually no ability to utilize maltose. As a result, three strains were selected that showed good growth even in a medium containing maltose as the sole carbon source. These three strains are Saccharomyces cerevisiae that accumulate high amounts of trehalose and grow well in a medium containing maltose as the sole carbon source.

4.低糖または無糖パン生地における炭酸ガス発生量の測定
上記「3.サッカロマイセス・セレビシエの糖質資化試験」を経て得られたサッカロマイセス・セレビシエ3株について、低糖または無糖の各パン生地における炭酸ガス発生量を測定した。
4. Measurement of the amount of carbon dioxide gas generated in low-sugar or sugar-free bread dough The amount of carbon dioxide gas generated in each low-sugar or sugar-free bread dough was measured for the three strains of Saccharomyces cerevisiae obtained through the above "3. Carbohydrate assimilation test of Saccharomyces cerevisiae".

日本イースト工業会のパン用酵母試験法に基づき、炭酸ガス発生量を観察した。比較例1として、市販パン酵母(スーパーカメリヤドライイースト(日清製粉グループ))を用いた。市販パン酵母は、YPD培地にて培養して得た生酵母を使用した。 The amount of carbon dioxide gas generated was observed based on the baker's yeast test method of the Japan Yeast Industry Association. As Comparative Example 1, a commercially available baker's yeast (Super Camellia Dry Yeast (Nissin Flour Milling Group)) was used. The commercially available baker's yeast used was live yeast obtained by culturing in YPD medium.

小麦粉100gを正確に計りとり、水をBP=70%、食塩をBP=1.5%となるように混合し、ベースとなる生地を得た。無糖生地は、ベース生地にショ糖を添加しなかった。低糖生地は、ベース生地にショ糖をBP=6%添加した。供試酵母として、生酵母または乾燥酵母を添加した。 100g of wheat flour was accurately weighed out and mixed with water to BP = 70% and salt to BP = 1.5% to obtain the base dough. For the no-sugar dough, no sucrose was added to the base dough. For the low-sugar dough, sucrose was added to the base dough to BP = 6%. Live yeast or dry yeast was added as the test yeast.

炭酸ガス発生量は、ファーモグラフ(登録商標、ATTO社製)を使用し、30℃にて、計測を行った。ファーモグラフとは、系中に生成したガス量を経時的に計測する装置で、単位はmlである。各単位時間あたりのガス発生量をeach gas、ガス発生量の累積総量をtotal gasとして測定した。得られたガス発生量(ml)は生酵母として3gとなるように換算した。 The amount of carbon dioxide generated was measured at 30°C using a Fermograph (registered trademark, manufactured by ATTO). A Fermograph is a device that measures the amount of gas generated in a system over time, and the unit is ml. The amount of gas generated per unit time was measured as "each gas," and the cumulative total amount of gas generated was measured as "total gas." The amount of gas generated (ml) obtained was converted to 3 g of live yeast.

低糖パン生地においては、900分間(15時間)、経時的に炭酸ガス発生量を測定した。計測の結果、低糖パン生地においてはいずれの菌株も初期の炭酸ガス発生パターンは類似していた。しかしながら、上記「3.サッカロマイセス・セレビシエの糖質資化試験」を経て得られたサッカロマイセス・セレビシエ」の3株のうちの1株(No.723株)と比較例1の市販パン酵母のみ、6時間を経過しても緩やかに炭酸ガス発生を続けることが判った。他方、上記糖質資化試験を経て得られた他の2株は、6時間経過すると炭酸ガス発生が大きく低下し、炭酸ガス発生量の累積合計の増加程度が非常に緩やかになった。
この結果より、低糖生地においては、いずれの菌株も製パン適性はあるが、No.723株と比較例1の市販パン酵母は特に優れていると判断された。
In the low sugar bread dough, the amount of carbon dioxide gas generated was measured over time for 900 minutes (15 hours). As a result of the measurement, the initial carbon dioxide gas generation pattern of each strain in the low sugar bread dough was similar. However, it was found that only one of the three strains of Saccharomyces cerevisiae obtained through the above-mentioned "3. Carbohydrate assimilation test of Saccharomyces cerevisiae" (No. 723 strain) and the commercially available baker's yeast of Comparative Example 1 continued to generate carbon dioxide gas slowly even after 6 hours. On the other hand, the other two strains obtained through the above-mentioned carbohydrate assimilation test showed a large decrease in carbon dioxide gas generation after 6 hours, and the degree of increase in the cumulative total amount of carbon dioxide gas generated became very slow.
From this result, it was judged that, although all strains are suitable for bread making in low sugar dough, No. 723 strain and the commercially available baker's yeast of Comparative Example 1 are particularly excellent.

同様に無糖パン生地を用いた計測の結果、No.723株と、比較例1の市販パン酵母において、良好な炭酸ガス発生パターンが認められた。上記糖質資化試験を経て得られた他の2株は相互に非常に類似した炭酸ガス発生パターンを示し、かつ、無糖パン生地において、0~10時間の間、炭酸ガス発生量が、No.723および比較例1の炭酸ガス発生量よりもかなり下回ることが判明した。 Similarly, measurements using sugar-free bread dough showed good carbon dioxide gas generation patterns for strain No. 723 and the commercially available baker's yeast of Comparative Example 1. The other two strains obtained through the carbohydrate assimilation test above showed very similar carbon dioxide gas generation patterns, and it was found that the amount of carbon dioxide gas generated in sugar-free bread dough between 0 and 10 hours was significantly lower than that of No. 723 and Comparative Example 1.

以上の結果より、無糖生地においては、上記「3.サッカロマイセス・セレビシエの糖質資化試験」を経て得られたサッカロマイセス・セレビシエの3株のうちでは、No.723株の1株が最も製パン適性が高い菌株であると判断された。 From the above results, it was determined that, among the three strains of Saccharomyces cerevisiae obtained through the above "3. Carbohydrate assimilation test of Saccharomyces cerevisiae", strain No. 723 was the strain with the highest suitability for bread making in sugar-free dough.

これまでの結果から、発酵性に優れ、かつ、トレハロースを高蓄積するサッカロマイセス・セレビシエとして、No.723株の1株を選び、選抜試験を終了した。このNo.723株を、KAY 723株と命名した。 Based on the results obtained so far, one strain, No. 723, was selected as Saccharomyces cerevisiae with excellent fermentation properties and high trehalose accumulation, and the selection test was completed. This No. 723 strain was named KAY 723.

5.高糖パン生地における炭酸ガス発生量の測定
上記「4.低糖または無糖パン生地における炭酸ガス発生量の測定」までの試験により選ばれた、製パン適性に優れ、かつ、トレハロースを高蓄積するKAY 723株の1株について、高糖生地における製パン適性を調べると共に、比較例1の市販パン酵母と発酵特性の違いを比較した。
5. Measurement of carbon dioxide gas generation in high sugar dough Selected by the test up to "4. Measurement of carbon dioxide gas generation in low sugar or sugar-free dough" above, has excellent bread making suitability and accumulates trehalose highly, KAY 723 strain is examined bread making suitability in high sugar dough, and compares the difference of fermentation characteristics with the commercially available baker's yeast of comparative example 1.

高糖生地は、上記のベース生地に、ショ糖をBP=30%添加して用意した。計測方法に関するその他の点については、上記の低糖または無糖パン生地の場合と同じとした。 The high sugar dough was prepared by adding sucrose (BP = 30%) to the above base dough. All other points regarding the measurement method were the same as those for the low sugar or sugar-free bread dough.

計測の結果、KAY 723株のガス発生量は、経時的に見て、ほぼ常時、比較例1の市販パン酵母の炭酸ガス発生量を上回っており、累積ガス発生量は、常時、比較例1の市販パン酵母のガス発生量を上回る結果が得られた。すなわち、KAY 723株は比較例1の市販パン酵母より優れた発酵能を有すると判断された。 The results of the measurements showed that the amount of gas generated by the KAY 723 strain over time was almost always greater than the amount of carbon dioxide generated by the commercially available baker's yeast of Comparative Example 1, and the cumulative amount of gas generated was always greater than the amount of gas generated by the commercially available baker's yeast of Comparative Example 1. In other words, it was determined that the KAY 723 strain has superior fermentation ability to the commercially available baker's yeast of Comparative Example 1.

以上の結果から、KAY 723株は、無糖パン、低糖パン、高糖パンのいずれについても製造が可能であり、製パン作業における時間の効率化が可能と考えられた。 These results suggest that KAY 723 can be used to produce sugar-free, low-sugar, and high-sugar bread, making it possible to improve the time efficiency of bread-making.

6.繰り返しの凍結融解に対する生存率
<意義>
凍結融解に対する耐性を知るために、以下のようにして、繰り返し凍結融解に対する生存率を求めた。一般に微生物を凍結保存する場合は、-80℃が使用されるが、これは生存率が高いためである。これに対して、家庭用冷凍庫温度である-18℃は、微生物の生存率が非常に低い温度、つまり、微生物が死滅しやすい温度である。
6. Survival rate after repeated freezing and thawing <Significance>
To determine the resistance to freezing and thawing, the survival rate against repeated freezing and thawing was calculated as follows. Generally, when freezing and storing microorganisms, a temperature of -80°C is used because the survival rate is high. In contrast, the temperature of a household freezer, -18°C, is a temperature at which the survival rate of microorganisms is very low, that is, a temperature at which microorganisms are likely to die.

ゆえに、家庭用冷凍庫温度である-18℃で高い生存率を有する酵母は、製パン業界で使用される生酵母の凍結ブロックの繰り返しの凍結融解利用を実現するために、有用性が高い。 Therefore, yeast that has a high survival rate at -18°C, the temperature of a domestic freezer, is highly useful for enabling repeated freezing and thawing of frozen blocks of live yeast used in the baking industry.

<生存率の測定>
供試菌として、実施例1:KAY 723株、比較例1:市販パン酵母(スーパーカメリヤドライイースト(日清製粉グループ))、比較例2:白神こだま酵母、および比較例3:サッカロマイセス・セレビシエとして広く利用されている協会7号酵母を用いた。各供試菌は、生菌を用いた。
<Measurement of survival rate>
The test bacteria used were: Example 1: KAY 723 strain, Comparative Example 1: commercially available baker's yeast (Super Camellia Dry Yeast (Nisshin Flour Milling Group)), Comparative Example 2: Shirakami Kodama yeast, and Comparative Example 3: Kyokai No. 7 yeast, which is widely used as Saccharomyces cerevisiae. Live bacteria were used for each test bacteria.

培地として、YPD培地(酵母エキス1%(w/v)、ペプトン2%(w/v)、グルコース2%(w/v))を用意した。YPD培地150mLを含む坂口フラスコを用意し、供試菌を加え、初回の凍結前に96時間培養した。得られた培養物10mLを15mL遠心チューブで集菌(3000rpm、10分)し、1度滅菌水で洗浄した。洗浄後、直ちに、-20℃フリーザーで冷却した。2日または3日毎に融解して一部をサンプリングし、滅菌水で希釈し、YPD寒天培地(寒天2%(w/v))に塗布した。 YPD medium (1% (w/v) yeast extract, 2% (w/v) peptone, 2% (w/v) glucose) was prepared as the medium. A Sakaguchi flask containing 150 mL of YPD medium was prepared, the test bacteria was added, and cultured for 96 hours before the first freezing. 10 mL of the resulting culture was harvested in a 15 mL centrifuge tube (3000 rpm, 10 minutes) and washed once with sterile water. After washing, it was immediately cooled in a -20°C freezer. It was thawed every 2 or 3 days, and a portion was sampled, diluted with sterile water, and spread on YPD agar medium (agar 2% (w/v)).

YPD寒天培地上に形成したコロニー数を計測し、コロニー数の平均値を求めた。各回の融解後のコロニー数の平均値と初発菌数の平均値から生存率(%)を算出した。結果を表1に示す。 The number of colonies formed on the YPD agar medium was counted, and the average colony count was calculated. The survival rate (%) was calculated from the average colony count after each thawing and the average initial bacterial count. The results are shown in Table 1.

Figure 0007496198000001
Figure 0007496198000001

表1示されるとおり、実施例1(KAY 723株)は、1回目凍結融解後および2回目の凍結融解後でも生存率80%以上を維持し、更に3回凍結融解を繰り返した後であっても60%を超える生存率の高さを示した。 As shown in Table 1, Example 1 (KAY 723 strain) maintained a viability rate of 80% or more even after the first and second freeze-thaw cycles, and even after three freeze-thaw cycles, the viability rate was still as high as 60%.

これに対して、比較例1の市販パン酵母は、1回の凍結融解で生存率が約56%にまで低下し、3回凍結融解後にあっては、20%を下回った。また、比較例2(白神こだま酵母)は、1回目の凍結融解後の段階では約80%の生存率を維持したが、3回凍結融解後の段階では生存率50%を下回った。 In contrast, the viability of the commercially available baker's yeast in Comparative Example 1 dropped to approximately 56% after one freeze-thaw cycle, and fell below 20% after three freeze-thaw cycles. Comparative Example 2 (Shirakami Kodama yeast) maintained a viability of approximately 80% after the first freeze-thaw cycle, but fell below 50% after three freeze-thaw cycles.

7. トレハロース含量の測定
上記実施例1、比較例1および2、さらに比較例3として、サッカロマイセス・セレビシエとして広く利用されている協会7号酵母を用いて、トレハロース含量を測定した結果を表2に示す。トレハロース含量の測定は、上記「1.2. トレハロース生産菌の選抜」に記載の方法と同じである。
7. Measurement of Trehalose Content The trehalose content was measured using Kyokai No. 7 yeast, which is widely used as Saccharomyces cerevisiae, in the above-mentioned Example 1, Comparative Examples 1 and 2, and Comparative Example 3, and the results are shown in Table 2. The trehalose content was measured in the same manner as in the above "1.2. Selection of trehalose-producing bacteria".

Figure 0007496198000002
Figure 0007496198000002

実施例1の酵母は、トレハロースを高蓄積する酵母であることが明らかとなった。 The yeast of Example 1 was found to be a yeast that accumulates high amounts of trehalose.

8. 高濃度食塩存在下における増殖性
上記「1.2. トレハロース生産菌の選抜」において用いたYPD培地をデフォルトのベース培地として用い、食塩濃度0~11%までの範囲で1%刻みの所定の食塩濃度条件下における酵母の増殖性を評価した。酵母として、実施例1、比較例1および2の酵母を用いた。酵母の増殖は、上記「3.サッカロマイセス・セレビシエの糖質資化試験」と同様にして、インキュベーションリーダー(サイニクス社製)を用いて経時的に測定した。測定は0時間から168時間まで行った。
8. Growth Ability in the Presence of High Salt Concentrations The YPD medium used in "1.2. Selection of Trehalose-Producing Bacteria" above was used as the default base medium, and the growth ability of yeast was evaluated under predetermined salt concentration conditions in 1% increments in the range of salt concentrations from 0 to 11%. The yeasts used were those of Example 1 and Comparative Examples 1 and 2. The growth of the yeast was measured over time using an incubation reader (manufactured by Synix Co., Ltd.) in the same manner as in "3. Carbohydrate assimilation test of Saccharomyces cerevisiae" above. Measurements were performed from 0 hours to 168 hours.

実施例1(KAY 723株)は、食塩濃度が上昇するのに伴って、その増殖速度が、比較例2(白神こだま酵母)よりも低下する傾向が見られた。しかし、比較例2の酵母は増殖可能な最大食塩濃度が9%であったのに対し、実施例1は、食塩濃度10%条件下でも約100時間経過後から増殖が始まり、最大食塩濃度10%まで増殖できることが示された。比較例1の市販酵母は、増殖可能な最大食塩濃度が9%であった。これら3種の酵母の中では、実施例1の酵母が最も高濃度の食塩条件下でも増殖可能であり、耐塩性に優れることが示された。 The growth rate of Example 1 (KAY 723 strain) tended to decrease as the salt concentration increased compared to Comparative Example 2 (Shirakami Kodama yeast). However, the maximum salt concentration at which the yeast of Comparative Example 2 could grow was 9%, whereas Example 1 began to grow after about 100 hours even under conditions of a salt concentration of 10%, and was shown to be capable of growing up to a maximum salt concentration of 10%. The maximum salt concentration at which the commercially available yeast of Comparative Example 1 could grow was 9%. Of these three types of yeast, the yeast of Example 1 was shown to be capable of growing even under conditions of the highest salt concentration, and to have excellent salt tolerance.

9.高濃度グルコース存在下における増殖性
上記「1.2. トレハロース生産菌の選抜」において用いたYPD培地をデフォルトのベース培地として用い、異なる濃度のグルコースを含むYPD培地を用意し、グルコース濃度2~50%(w/v)までの範囲で所定のグルコース濃度条件下における酵母の増殖を評価した。酵母として、実施例1、比較例1および2の酵母を用いた。酵母の増殖性は、上記「3.サッカロマイセス・セレビシエの糖質資化試験」と同様にして、インキュベーションリーダー(サイニクス社製)を用いて経時的に測定した。測定は0時間から168時間まで行った。
9. Growth in the Presence of High Concentration Glucose The YPD medium used in "1.2. Selection of Trehalose-Producing Bacteria" above was used as the default base medium, and YPD medium containing different concentrations of glucose was prepared, and the growth of yeast was evaluated under predetermined glucose concentration conditions in the range of glucose concentrations from 2 to 50% (w/v). The yeasts used were those of Example 1, Comparative Examples 1 and 2. The growth of yeast was measured over time using an incubation reader (manufactured by Synix Co., Ltd.) in the same manner as in "3. Carbohydrate assimilation test of Saccharomyces cerevisiae" above. Measurements were performed from 0 hours to 168 hours.

実施例1(KAY 723株)は、グルコース濃度46%(w/v)でも良好な生育を示し、グルコース濃度50%(w/v)でも生育できた。他方、比較例1の市販酵母は、グルコース濃度42%(w/v)を超えると、著しく生育不良となった。また比較例2(白神こだま酵母)は、グルコース濃度50%(w/v)では、実施例1よりも生育が劣る傾向が認められた。実施例1、比較例1および2の中では、実施例1の酵母が最も耐糖性に優れると認められた。 Example 1 (KAY 723 strain) showed good growth even at a glucose concentration of 46% (w/v), and could grow even at a glucose concentration of 50% (w/v). On the other hand, the commercial yeast of Comparative Example 1 showed significantly poor growth at glucose concentrations above 42% (w/v). Comparative Example 2 (Shirakami Kodama yeast) also showed a tendency for growth to be inferior to that of Example 1 at a glucose concentration of 50% (w/v). Among Example 1, Comparative Examples 1 and 2, the yeast of Example 1 was found to have the best sugar tolerance.

Claims (7)

受託番号がNITE P-03028である、サッカロマイセス・セレビシエ KAY 723株。 Saccharomyces cerevisiae KAY 723 strain, which has the accession number NITE P-03028 . 請求項1に記載のサッカロマイセス・セレビシエの菌体を含む冷凍物である、冷凍酵母組成物。 A frozen yeast composition, which is a frozen product containing the Saccharomyces cerevisiae cells according to claim 1. 請求項1に記載のサッカロマイセス・セレビシエの菌体を含む、冷凍パン生地。 Frozen bread dough containing the Saccharomyces cerevisiae cells according to claim 1. 請求項1に記載のサッカロマイセス・セレビシエの菌体乾燥物である、乾燥パン酵母。 Dried baker's yeast, which is a dried product of the Saccharomyces cerevisiae cells according to claim 1. 請求項1に記載のサッカロマイセス・セレビシエの菌体を用いて発酵させることを含む、発酵食品の製造方法。 A method for producing a fermented food, comprising fermenting the Saccharomyces cerevisiae cells according to claim 1. 請求項1に記載のサッカロマイセス・セレビシエの菌体を含むパン生地を焼成することを含む、パンの製造方法。 A method for producing bread, comprising baking dough containing the Saccharomyces cerevisiae cells according to claim 1. 請求項1に記載のサッカロマイセス・セレビシエの菌体を、-10~-30℃で冷凍する、サッカロマイセス・セレビシエの保存方法。 A method for preserving Saccharomyces cerevisiae, comprising freezing the cells of Saccharomyces cerevisiae according to claim 1 at -10 to -30°C.
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