JP7492757B2 - 遺伝子の発現制御剤、アルツハイマー病の予防薬または治療薬および認知症の改善方法 - Google Patents

Description

本発明は、遺伝子の発現制御剤、アルツハイマー病の予防薬または治療薬および認知症の改善方法に関する。

現在、アルツハイマー病は、認知症の原因の半数以上を占める神経変性疾患であり、治療法や予防法のさらなる発展が望まれている。これまでの研究で、アルツハイマー病の発生機序の解明が進んでいる。アルツハイマー病の予防や進行抑制、改善のために、アミロイドβタンパク質や微小管結合タンパク質であるタウ・タンパク質の増加、凝集、蓄積、沈着を抑制することなどが重要な点の一つであると考えられている。そして、詳細は後述するが、アルツハイマー病の治療薬とその作用機序も知られてきている（例えば、非特許文献１参照）。

一方、脳内アミロイドβタンパク質の代謝やアルツハイマー病の発現・進行への、神経細胞由来エクソソームの関与が示唆されている（例えば、特許文献１参照）。
特許文献１では、エクソソームの産生を促進し得る薬剤については、未だ十分な検討がなされていないことに注目し、容易に生体内でのエクソソームの産生を促進することができるエクソソーム産生促進剤として、酸性セラミダーゼに対する機能阻害及び／又は発現抑制が可能な物質を有効成分とする、エクソソーム産生促進剤が記載されている。

特開２０２１－０８３４１５号公報

臨床神経学 ５４（１２）， １１７８－１１８０， ２０１４

しかし、特許文献１では、その課題解決の手法から明らかなとおり実際にアミロイドβの蓄積などが生じるヒト神経細胞に注目しており、他の細胞由来のエクソソームには注目していなかった。例えば、特許文献１にはヒト神経芽細胞腫由来ＳＨ－ＳＹ５Ｙ細胞にエクソソームの産生を促進させた例が記載されているのみであった。また、特許文献１で引用された文献は、神経細胞由来エクソソームが、アミロイドβ結合性糖脂質を高発現し、アミロイドβタンパク質を捕捉する能力をもつこと、脳内の貪食細胞ミクログリアと連携してアミロイドβタンパク質を除去する作用を有することが示唆された非特許文献や、ニューロン由来エクソソームが、その表面でアミロイドβを捕捉し、ミクログリアへ輸送することで、アミロイドβタンパク質の分解効率を高めていることが示唆された非特許文献などであった。

本発明が解決しようとする課題は、アルツハイマー病などのアミロイドβ関連またはタウ・タンパク質関連の認知症や脳炎症に関連するタンパク質の発現を制御（抑制や阻害など）できる、新規な遺伝子の発現制御剤を提供することである。

本発明者らは、特定のマイクロＲＮＡを含む微小粒子が、アミロイドβ関連またはタウ・タンパク質関連の認知症や脳炎症に関連するタンパク質の発現を制御（抑制や阻害など）できることを見出した。

具体的に、本発明および本発明の好ましい構成は、以下のとおりである。

［１］ アミロイド前駆体タンパク質（ＡＰＰ）、β－セクレターゼ（ＢＡＣＥ１）、ＮＭＤＡ活性化タンパク質、グリコーゲン合成酵素キナーゼ－３β（ＧＳＫ－３β）、およびポリグルタミン結合タンパク質－１（ＰＱＢＰ１）のうち少なくとも１種類のタンパク質の発現に関する遺伝子を標的遺伝子とするｍｉＲＮＡを含む微小粒子である、遺伝子の発現制御剤。
［２］ 微小粒子がエクソソームである、［１］に記載の遺伝子の発現制御剤。
［３］ 微小粒子が、歯髄由来幹細胞の培養上清よりも高い濃度で、ＡＰＰ、ＢＡＣＥ１、ＮＭＤＡ活性化タンパク質、ＧＳＫ－３β、およびＰＱＢＰ１のうち少なくとも１種類のタンパク質の発現に関する遺伝子を標的遺伝子とするｍｉＲＮＡを含む、［１］または［２］に記載の遺伝子の発現制御剤。
［４］ ＡＰＰの発現に関する遺伝子の発現抑制剤であり、
微小粒子がＡＰＰの発現に関する遺伝子を標的遺伝子とするｍｉＲＮＡを含む、［１］～［３］のいずれか一項に記載の遺伝子の発現制御剤。
［５］ 微小粒子が下記ＡＰＰ抑制関連ｍｉＲＮＡ群のうち少なくとも１種類を含む、［４］に記載の遺伝子の発現制御剤；
ＡＰＰ抑制関連ｍｉＲＮＡ群：
hsa-miR-101-3p、hsa-miR-106b-5p、hsa-miR-1229-5p、hsa-miR-1238-3p、hsa-miR-1260b、
hsa-miR-1276、hsa-miR-128-3p、hsa-miR-142-3p、hsa-miR-142-5p、hsa-miR-144-3p、
hsa-miR-151a-3p、hsa-miR-153-3p、hsa-miR-15a-5p、hsa-miR-15b-5p、hsa-miR-16-5p、
hsa-miR-17-5p、hsa-miR-185-5p、hsa-miR-186-5p、hsa-miR-194-5p、hsa-miR-195-5p、
hsa-miR-196a-5p、hsa-miR-203a-3p、hsa-miR-20a-5p、hsa-miR-222-3p、hsa-miR-298、
hsa-miR-31-5p、hsa-miR-3120-3p、hsa-miR-3132、hsa-miR-323a-3p、hsa-miR-324-5p、
hsa-miR-328-3p、hsa-miR-3620-3p、hsa-miR-3646、hsa-miR-369-3p、hsa-miR-373-3p、
hsa-miR-374c-5p、hsa-miR-381-3p、hsa-miR-382-5p、hsa-miR-383-5p、hsa-miR-411-3p、
hsa-miR-423-3p、hsa-miR-424-3p、hsa-miR-424-5p、hsa-miR-4484、hsa-miR-455-3p、
hsa-miR-4786-5p、hsa-miR-484、hsa-miR-490-5p、hsa-miR-497-5p、hsa-miR-500a-5p、
hsa-miR-5093、hsa-miR-532-3p、hsa-miR-532-5p、hsa-miR-539-3p、hsa-miR-548f-3p、
hsa-miR-551b-5p、hsa-miR-5584-5p、hsa-miR-567、hsa-miR-5696、hsa-miR-582-5p、
hsa-miR-6073、hsa-miR-873-5p、hsa-miR-93-5p。
［６］ ＢＡＣＥ１の発現に関する遺伝子の阻害剤であり、
微小粒子がＢＡＣＥ１の発現に関する遺伝子を標的遺伝子とするｍｉＲＮＡを含む、［１］～［５］のいずれか一項に記載の遺伝子の発現制御剤。
［７］ 微小粒子が下記ＢＡＣＥ１阻害関連ｍｉＲＮＡ群のうち少なくとも１種類を含む、［６］に記載の遺伝子の発現制御剤；
ＢＡＣＥ１阻害関連ｍｉＲＮＡ群：
hsa-miR-107、hsa-miR-124-3p、hsa-miR-1267、hsa-miR-128-3p、hsa-miR-129-2-3p、
hsa-miR-140-3p、hsa-miR-140-5p、hsa-miR-141-3p、hsa-miR-15a-5p、hsa-miR-16-5p、
hsa-miR-17-5p、hsa-miR-195-5p、hsa-miR-200a-3p、hsa-miR-203a-3p、hsa-miR-212-3p、
hsa-miR-212-5p、hsa-miR-24-3p、hsa-miR-26b-5p、hsa-miR-27a-3p、hsa-miR-298、
hsa-miR-299-3p、hsa-miR-29a-3p、hsa-miR-29b-3p、hsa-miR-29c-3p、hsa-miR-328-3p、
hsa-miR-339-5p、hsa-miR-340-5p、hsa-miR-369-3p、hsa-miR-374a-5p、hsa-miR-374b-5p、
hsa-miR-374c-5p、hsa-miR-382-5p、hsa-miR-421、hsa-miR-424-5p、hsa-miR-455-3p、
hsa-miR-497-5p、hsa-miR-505-3p、hsa-miR-532-5p、hsa-miR-7-5p、hsa-miR-874-3p、
hsa-miR-9-5p。
［８］ ＧＳＫ－３βの発現に関する遺伝子の阻害剤であり、
微小粒子がＧＳＫ－３βの発現に関する遺伝子を標的遺伝子とするｍｉＲＮＡを含む、［１］～［７］のいずれか一項に記載の遺伝子の発現制御剤。
［９］ 微小粒子が下記ＧＳＫ－３β阻害関連ｍｉＲＮＡ群のうち少なくとも１種類を含む、［８］に記載の遺伝子の発現制御剤；
ＧＳＫ－３β阻害関連ｍｉＲＮＡ群：
hsa-let-7a-3p、hsa-let-7b-3p、hsa-let-7f-1-3p、hsa-let-7f-2-3p、hsa-miR-101-3p、
hsa-miR-1185-1-3p、hsa-miR-1185-2-3p、hsa-miR-124-3p、hsa-miR-128-3p、hsa-miR-129-5p、
hsa-miR-132-3p、hsa-miR-137、hsa-miR-140-5p、hsa-miR-142-5p、hsa-miR-144-3p、
hsa-miR-150-5p、hsa-miR-155-5p、hsa-miR-15a-5p、hsa-miR-15b-5p、hsa-miR-16-5p、
hsa-miR-1910-5p、hsa-miR-195-5p、hsa-miR-199a-5p、hsa-miR-212-3p、hsa-miR-218-5p、
hsa-miR-219a-5p、hsa-miR-23a-3p、hsa-miR-24-3p、hsa-miR-26a-5p、hsa-miR-26b-5p、
hsa-miR-27a-3p、hsa-miR-28-5p、hsa-miR-29a-3p、hsa-miR-29b-3p、hsa-miR-346、
hsa-miR-369-3p、hsa-miR-374a-5p、hsa-miR-374b-5p、hsa-miR-374c-5p、hsa-miR-377-3p、
hsa-miR-409-3p、hsa-miR-409-5p、hsa-miR-410-3p、hsa-miR-424-5p、hsa-miR-425-5p、
hsa-miR-4465、hsa-miR-497-5p、hsa-miR-582-5p、hsa-miR-6083、hsa-miR-708-5p、
hsa-miR-9-5p、hsa-miR-92a-3p、hsa-miR-96-5p、hsa-miR-98-3p。
［１０］ 微小粒子が、ＡＰＰの発現に関する遺伝子の発現抑制剤、ＢＡＣＥ１の発現に関する遺伝子の阻害剤およびＧＳＫ－３βの発現に関する遺伝子の阻害剤のうち少なくとも１種類であり、かつhsa-miR-16-5pを含む、［１］～［９］のいずれか一項に記載の遺伝子の発現制御剤。
［１１］ ＮＭＤＡ活性化遺伝子の発現抑制剤であり、
ＮＭＤＡ活性化タンパク質がＤＬＧ１、ＣＡＭＫ２Ｄ、ＣＡＭＫ２ＡおよびＣＡＰＮ１のうち少なくとも１種類のタンパク質であり、
微小粒子が、ＤＬＧ１、ＣＡＭＫ２Ｄ、ＣＡＭＫ２ＡおよびＣＡＰＮ１のうち少なくとも１種類のタンパク質発現に関する遺伝子を標的遺伝子とするｍｉ下記ＤＬＧ１抑制関連ｍｉＲＮＡ群、下記ＣＡＭＫ２Ｄ抑制関連ｍｉＲＮＡ群、下記ＣＡＭＫ２Ａ抑制関連ｍｉＲＮＡ群、および下記ＣＡＰＮ１抑制関連ｍｉＲＮＡ群のうち少なくとも１種類のｍｉＲＮＡ群を含む、［１］～［１０］のいずれか一項に記載の遺伝子の発現制御剤；
ＤＬＧ１抑制関連ｍｉＲＮＡ群：
hsa-miR-1-3p、hsa-miR-142-5p、hsa-miR-204-5p、hsa-miR-206、hsa-miR-21-5p、
hsa-miR-218-5p、hsa-miR-340-5p、hsa-miR-613。
ＣＡＭＫ２Ｄ抑制関連ｍｉＲＮＡ群：
hsa-let-7a-5p、hsa-miR-101-3p、hsa-miR-129-5p、hsa-miR-139-5p、hsa-miR-144-3p、
hsa-miR-145-5p、hsa-miR-185-5p、hsa-miR-203a-3p、hsa-miR-204-5p、hsa-miR-211-5p、
hsa-miR-24-3p、hsa-miR-27a-3p、hsa-miR-30a-3p、hsa-miR-31-5p、hsa-miR-361-5p、
hsa-miR-421、hsa-miR-484、hsa-miR-494-3p、hsa-miR-505-3p、hsa-miR-7-5p。
ＣＡＭＫ２Ａ抑制関連ｍｉＲＮＡ群：
hsa-miR-129-5p、hsa-miR-137、hsa-miR-142-5p、hsa-miR-148a-3p、hsa-miR-149-3p、
hsa-miR-152-3p、hsa-miR-25-3p、hsa-miR-27a-3p、hsa-miR-32-5p、hsa-miR-338-3p、
hsa-miR-340-5p、hsa-miR-363-3p、hsa-miR-3665、hsa-miR-4534、hsa-miR-4665-5p、
hsa-miR-4688、hsa-miR-485-5p、hsa-miR-5010-5p、hsa-miR-505-5p、hsa-miR-5698、
hsa-miR-625-5p、hsa-miR-92a-3p。
ＣＡＰＮ１抑制関連ｍｉＲＮＡ群：
hsa-miR-1-3p、hsa-miR-124-3p、hsa-miR-140-5p、hsa-miR-17-3p、hsa-miR-22-3p、
hsa-miR-34a-5p、hsa-miR-6511b-5p。
［１２］ 微小粒子が、
ＤＬＧ１抑制関連ｍｉＲＮＡ群のうちhsa-miR-21-5p、
ＣＡＭＫ２Ｄ抑制関連ｍｉＲＮＡ群のうちhsa-let-7a-5p、
ＣＡＭＫ２Ａ抑制関連ｍｉＲＮＡ群のうちhsa-miR-92a-3p、
ＣＡＰＮ１抑制関連ｍｉＲＮＡ群のうちhsa-miR-22-3pをいずれも含む、［１１］に記載の遺伝子の発現制御剤。
［１３］ ＰＱＢＰ１の発現抑制剤であり、
微小粒子がＰＱＢＰ１の発現に関する遺伝子を標的遺伝子とするｍｉＲＮＡを含む、［１］～［１２］のいずれか一項に記載の遺伝子の発現制御剤。
［１４］ 微小粒子が下記ＰＱＢＰ１抑制関連ｍｉＲＮＡ群のうち少なくとも１種類を含む、［１３］に記載の遺伝子の発現制御剤；
ＰＱＢＰ１抑制関連ｍｉＲＮＡ群：hsa-miR-6727-3p、hsa-miR-6727-5p。
［１５］ 微小粒子が歯髄由来幹細胞の培養上清から精製されて単離された微小粒子であり、
遺伝子の発現制御剤が、歯髄由来幹細胞の培養上清からエクソソームを除いた成分を含まない、［１］～［１４］のいずれかに記載の遺伝子の発現制御剤。
［１６］ ［１］～［１５］のいずれかに記載の遺伝子の発現制御剤を含む、アルツハイマー病の予防薬または治療薬。
［１７］ 有効量の［１］～［１５］のいずれか一項に記載の遺伝子の発現制御剤、あるいは有効量の［１６］に記載のアルツハイマー病の予防薬または治療薬を、アミロイドβ関連またはタウ・タンパク質関連の認知症を発症した対象に投与することを含む、認知症の改善方法。

本発明によれば、アルツハイマー病などのアミロイドβ関連またはタウ・タンパク質関連の認知症や脳炎症に関連するタンパク質の発現を制御できる、新規な遺伝子の発現制御剤を提供することができる。

図１は、アルツハイマー病の発生機序を示すフローチャートである。 図２は、非アミロイド形成経路のＡＰＰプロセシングの模式図である。 図３は、アミロイド形成経路のＡＰＰプロセシングの模式図である。 図４（Ａ）は、エイズウイルスのｃＤＮＡによるＰＱＢＰ１－ｃＧＡＳ－ＳＴＩＮＧ経路を介した炎症遺伝子の発現誘導の模式図である。図４（Ｂ）は、タウ・タンパク質によるＰＱＢＰ１－ｃＧＡＳ－ＳＴＩＮＧ経路を介した炎症遺伝子の発現誘導の模式図である。 図５は、ＡＰＰをｔａｒｇｅｔとする歯髄由来幹細胞の培養上清から精製したエクソソーム（実施例１の遺伝子の発現制御剤；ＳＧＦ）に発現するｍｉＲＮＡの発現量を、大脳皮質（Ｃｅｒｅｂｒａｌ Ｃｏｒｔｅｘ）におけるｍｉＲＮＡの発現量と対比して示したヒートマップである。 図６は、βセクレターゼ（ＢＡＳＥ１）をｔａｒｇｅｔとする歯髄由来幹細胞の培養上清から精製したエクソソーム（実施例１の遺伝子の発現制御剤；ＳＧＦ）に発現するｍｉＲＮＡの発現量を、大脳皮質（Ｃｅｒｅｂｒａｌ Ｃｏｒｔｅｘ）におけるｍｉＲＮＡの発現量と対比して示したヒートマップである。 図７は、ＤＬＧ１をｔａｒｇｅｔとする歯髄由来幹細胞の培養上清から精製したエクソソーム（実施例１の遺伝子の発現制御剤；ＳＧＦ）に発現するｍｉＲＮＡの発現量を、大脳皮質（Ｃｅｒｅｂｒａｌ Ｃｏｒｔｅｘ）におけるｍｉＲＮＡの発現量と対比して示したヒートマップである。 図８は、ＣＡＭＫ２Ｄをｔａｒｇｅｔとする歯髄由来幹細胞の培養上清から精製したエクソソーム（実施例１の遺伝子の発現制御剤；ＳＧＦ）に発現するｍｉＲＮＡの発現量を、大脳皮質（Ｃｅｒｅｂｒａｌ Ｃｏｒｔｅｘ）におけるｍｉＲＮＡの発現量と対比して示したヒートマップである。 図９は、ＣＡＭＫ２Ａをｔａｒｇｅｔとする歯髄由来幹細胞の培養上清から精製したエクソソーム（実施例１の遺伝子の発現制御剤；ＳＧＦ）に発現するｍｉＲＮＡの発現量を、大脳皮質（Ｃｅｒｅｂｒａｌ Ｃｏｒｔｅｘ）におけるｍｉＲＮＡの発現量と対比して示したヒートマップである。 図１０は、ＣＡＰＮ１をｔａｒｇｅｔとする歯髄由来幹細胞の培養上清から精製したエクソソーム（実施例１の遺伝子の発現制御剤；ＳＧＦ）に発現するｍｉＲＮＡの発現量を、大脳皮質（Ｃｅｒｅｂｒａｌ Ｃｏｒｔｅｘ）におけるｍｉＲＮＡの発現量と対比して示したヒートマップである。 図１１は、ＧＳＫ－３βをｔａｒｇｅｔとする歯髄由来幹細胞の培養上清から精製したエクソソーム（実施例１の遺伝子の発現制御剤；ＳＧＦ）に発現するｍｉＲＮＡの発現量を、大脳皮質（Ｃｅｒｅｂｒａｌ Ｃｏｒｔｅｘ）におけるｍｉＲＮＡの発現量と対比して示したヒートマップである。 図１２は、ＰＱＢＰ１をｔａｒｇｅｔとする歯髄由来幹細胞の培養上清から精製したエクソソーム（実施例１の遺伝子の発現制御剤；ＳＧＦ）に発現するｍｉＲＮＡの発現量を、大脳皮質（Ｃｅｒｅｂｒａｌ Ｃｏｒｔｅｘ）におけるｍｉＲＮＡの発現量と対比して示したヒートマップである。 図１３は、アミロイドβまたはタウ・タンパク質関連ｍｉＲＮＡについて、歯髄由来幹細胞の培養上清から精製したエクソソーム（実施例１の遺伝子の発現制御剤；ＳＧＦ）に発現するｍｉＲＮＡの発現量を、大脳皮質（Ｃｅｒｅｂｒａｌ Ｃｏｒｔｅｘ）におけるｍｉＲＮＡの発現量と対比して示したヒートマップ（１ページ目）である。 図１３－２は、図１３のヒートマップのつづき（２ページ目）である。 図１４は、試験例４におけるＡＰＰ遺伝子の発現量を示した棒グラフである。 図１５は、試験例４におけるＢＡＳＥ１遺伝子の発現量を示した棒グラフである。 図１６は、試験例４におけるＣＡＭＫ２Ｄ遺伝子の発現量を示した棒グラフである。 図１７は、試験例４におけるＧＳＫ－３β遺伝子の発現量を示した棒グラフである。 図１８は、試験例４におけるＰＱＢＰ１遺伝子の発現量を示した棒グラフである。 図１９は、試験例５における各ｍｉＲＮＡの発現量を示した棒グラフである。

以下において、本発明について詳細に説明する。以下に記載する構成要件の説明は、代表的な実施形態や具体例に基づいてなされることがあるが、本発明はそのような実施形態に限定されるものではない。なお、本明細書において「～」を用いて表される数値範囲は「～」前後に記載される数値を下限値および上限値として含む範囲を意味する。

［遺伝子の発現制御剤］
本発明の遺伝子の発現制御剤は、アミロイド前駆体タンパク質（ＡＰＰ）、β－セクレターゼ（ＢＡＣＥ１）、ＮＭＤＡ活性化タンパク質、およびグリコーゲン合成酵素キナーゼ－３β（ＧＳＫ－３β）のうち少なくとも１種類のタンパク質の発現に関する遺伝子を標的遺伝子（ｔａｒｇｅｔとも言う）とするｍｉＲＮＡを含む微小粒子である。
本発明の遺伝子の発現制御剤は、アミロイドβ関連またはタウ・タンパク質関連の認知症や脳炎症に関連するタンパク質に関する遺伝子の発現を制御できる。その結果、本発明の遺伝子の発現制御剤は、アミロイドβ関連またはタウ・タンパク質関連の認知症や脳炎症も改善できることが好ましく、予防または治療できることがより好ましい。治療とは、アミロイドβ関連またはタウ・タンパク質関連の認知症や脳炎症の症状を緩和させることを意味し、完治までは至らなくてもよい。アミロイドβ関連またはタウ・タンパク質関連の認知症の治療としては、認知機能や行動における症状を緩和することが好ましい。
以下、本発明の遺伝子の発現制御剤の好ましい態様を説明する。

＜認知症の定義＞
本発明において、認知症とは、一般的に、後天的に認知機能が低下した状態を意味する。
認知症の病型としては、例えば、アルツハイマー型認知症（ＡＤ）、血管性認知症（ＶａＤ）、レビー小体型認知症（ＤＬＢ。認知症を伴うパーキンソン病ＰＤＤを含む）、前頭側頭葉変性症（前頭側頭型認知症（ＦＴＤ）、意味性認知症（ＳＤ）、進行性非流暢性失語（ＰＮＦＡ）を含む）、アルコール性認知症、混合型、軽度認知障害（ＭＣＩ）、若年性認知症などが挙げられる。
本発明の遺伝子の発現制御剤の投与対象となる認知症は、アミロイドβ関連またはタウ・タンパク質関連の認知症であることが好ましい。アミロイドβ関連またはタウ・タンパク質関連の認知症としては特に制限はなく、いわゆるタウパクチーといわれるタウ蓄積が生じる疾患群が挙げられる。具体的には、本発明の遺伝子の発現制御剤の投与対象となる認知症として、アルツハイマー型認知症、前頭側頭型認知症（ＦＴＤまたはｂｖＦＴＤ）、意味性認知症（ＳＤ）、進行性非流暢性失語（ＰＮＦＡ）であることが好ましい。ＦＴＤにはピック病などが含まれる。
本発明の遺伝子の発現制御剤の投与対象となる認知症は、アルツハイマー型認知症であることがより好ましい。

＜アルツハイマー病の発生機序＞
アルツハイマー病の発生機序を示したフローチャートを、図１に示す。

まず、図１中の塗り潰し矢印によるフローチャートを説明する。
（１）アミロイド前駆体タンパク質（ＡＰＰ）の産生。さらに、原因遺伝子（ＡＰＰ，ＰＳ１，ＰＳ２）の変異およびＡｐｏＥ４（危険因子）によって、ＡＰＰが亢進される。
（２）アミロイドβタンパク質（Ａβ）の産生。さらに、Ａβ分解酵素の抑制（ネプリライシン、インシュリン分解酵素など）により、Ａβの産生が亢進される。
（３）アミロイドβタンパク質の凝集、蓄積、沈着。さらに、神経細胞内カルシウムホメオスタシスの異常、活性酸素、小胞体ストレスにより、Ａβの凝集、蓄積、沈着が進行する。
（２１）神経原線維変化、細胞死、反応性グリアの増殖。
（２２）アルツハイマー病の発生。

次に、図１中の塗り無し矢印によるフローチャートを説明する。
（１１）タウ・タンパク質の異常リン酸化の誘導が、（３）アミロイドβタンパク質の凝集、蓄積、沈着により、進行する。
（１２）微小管から可溶性の単量体タウ・タンパク質が遊離。
（１３）軸索から神経細胞の細胞体樹状突起部分に移動。単量体タウ・タンパク質が、Ｓｒｃチロシンキナーゼであるｆｙｎと相互作用。
（１４）ｆｙｎを樹状突起に局在、活性化。
（１５）興奮性ＮＭＤＡ受容体ＧｌｕＮ２Ｂをリン酸化。グルタミン酸シグナル伝達の増幅により、興奮性ＮＭＤＡ受容体ＧｌｕＮ２Ｂのリン酸化が進行。
（１６）細胞内へのＣａ^２＋流入量の増加。
（１７）Ａβの毒性が増加。
（２１）神経原線維変化、細胞死、反応性グリアの増殖。
（２２）アルツハイマー病の発生。

（ＡＰＰのプロセシング）
図１の（２）アミロイドβタンパク質（Ａβ）の産生に関連して、アミロイド前駆体タンパク質（ＡＰＰ）のプロセシングについて説明する。
図２は、非アミロイド形成経路のＡＰＰプロセシングの模式図である。
まず、ＡＰＰがαセクレターゼにより切断されると、Ｃ８３（Ｃ末端側の８３アミノ酸からなる断片）が細胞膜中に残り、ｓＡＰＰα（Ｎ末端側の細胞外ドメインからなる断片）が細胞外に放出される。
次に、Ｃ８３がγセクレターゼにより切断されると、Ｐ３ペプチドとＣＴＦが産生される。その結果、Ａβは産生されない。

一方、図３は、アミロイド形成経路のＡＰＰプロセシングの模式図である。
まず、ＡＰＰがβ－セクレターゼ（ＢＡＣＥ１）により切断され、Ｃ９９（Ｃ末端側の９９アミノ酸断片）が細胞膜中に残り、ｓＡＰＰβ（Ｎ末端側の細胞外ドメイン）が細胞外に放出される。
次に、Ｃ９９がγセクレターゼにより切断され、Ａβペプチド（Ａβ１－４０またはＡβ１－４２）が形成される。
なお、γ－セクレターゼは、Ｐｒｅｓｅｎｉｌｉｎ １（ＰＳ１）またはＰｒｅｓｅｎｉｌｉｎ ２（ＰＳ２）と、Ｎｉｃａｓｔｒｉｎ、ＡＰＨ－１およびＰＥＮ２で構成される。

＜アルツハイマー病治療薬と作用機序＞
本発明の遺伝子の発現制御剤は、認知症の中でも特にアルツハイマー病の改善をできることが好ましい。以下、アルツハイマー病治療薬と作用機序を、本発明の遺伝子の発現制御剤の作用機序とあわせて説明する。
アルツハイマー病治療薬と作用機序としては、以下のものが挙げられる。

（ａ）アセチルコリンの分解酵素の阻害剤
アセチルコリンは、神経細胞の突起先端部のシナプス部で放出されて、次の神経細胞に情報を届ける物質であり、アセチルコリンを産生する細胞がアルツハイマー型認知症の脳では減少している。アセチルコリンの分解酵素の阻害剤（ドネペジル塩酸塩など）により、シナプスでのアセチルコリン分解消失を抑え、アセチルコリンの量を増やす。
なお、アセチルコリンの分解酵素の阻害剤は、本発明の遺伝子の発現制御剤とは関連性が低い。

（ｂ）ニコチン受容体に対する刺激剤
ニコチン受容体に対して、アセチルコリンの情報伝達は、アセチルコリン受容体に結合することにより引き起こされる。アセチルコリン受容体にはニコチン性受容体（ニコチン性アセチルコリン受容体ともいう）とムスカリン性受容体が存在する。ニコチン性受容体はサブユニットからなる五量体であり、アセチルコリンが結合するとイオンチャネルとして機能する。アルツハイマー型認知症の脳では、ニコチン性受容体数が減少している。ガランタミン臭化水素などは、アセチルコリンとは別の場所に結合して、ニコチン性受容体の機能を高める（ＡＰＬ作用）。
なお、ニコチン受容体に対する刺激剤は、本発明の遺伝子の発現制御剤とは関連性が低い。

（ｃ）ＮＭＤＡ受容体阻害剤
Ａβやタウの増加で誘導されるＮＭＤＡ受容体の活性化を抑制することにより、神経細胞の過剰な興奮による細胞死を防ぐ。ＮＭＤＡは、記憶、学習、脳虚血に関係する。ＮＭＤＡを制御するタンパク質として、ＤＬＧ１、ＣＡＭＫ２Ｄ、ＣＡＭＫ２Ａ、ＣＡＰＮ１、ＥＰＨＢ２が挙げられる。
本発明の遺伝子の発現制御剤において、微小粒子がＮＭＤＡ活性化タンパク質の発現に関する遺伝子を標的遺伝子とするｍｉＲＮＡを含む場合、ＮＭＤＡ受容体阻害剤として機能する。特に、本発明の遺伝子の発現制御剤は、ＤＬＧ１発現抑制剤、ＣＡＭＫ２Ｄ発現抑制剤、ＣＡＭＫ２Ａ発現抑制剤およびＣＡＰＮ１発現抑制剤のうち少なくとも１種類のＮＭＤＡ受容体阻害剤として機能する。

（ｄ）ＢＡＣＥ１阻害剤
Ａβの産生酵素であるＢＡＣＥ１を阻害して、Ａβの産生を抑制する。
本発明の遺伝子の発現制御剤において、微小粒子がβ－セクレターゼ（ＢＡＣＥ１）の発現に関する遺伝子を標的遺伝子とするｍｉＲＮＡを含む場合、ＢＡＣＥ１阻害剤として機能する。

（ｅ）ＧＳＫ－３β阻害剤
グリコーゲン合成酵素キナーゼ－３β（ＧＳＫ－３β）は、鎖多様なタンパク質をリン酸化する酵素であり、正常細胞の生命維持や調節に重要かつ多様な働きをしている。ＧＳＫ－３βが病的に亢進すると、脳ではＡβの沈着や、神経細胞の中にタウ・タンパク質の蓄積が促進される。ＧＳＫ－３β阻害剤は、Ａβの沈着や、タウ・タンパク質の異常リン酸化を抑制する（下記表１に記載。臨床神経学 ５４（１２）， １１７８－１１８０， ２０１４参照）。
本発明の遺伝子の発現制御剤において、微小粒子がグリコーゲン合成酵素キナーゼ－３β（ＧＳＫ－３β）の発現に関する遺伝子を標的遺伝子とするｍｉＲＮＡを含む場合、ＧＳＫ－３β阻害剤として機能する。

（ｆ）ＡＰＰ阻害剤
ＡＰＰ阻害剤は、アミロイド前駆体タンパク質（ＡＰＰ）の産生を阻害して、ＡＰＰの産生を抑制する。
本発明の遺伝子の発現制御剤において、微小粒子がアミロイド前駆体タンパク質（ＡＰＰ）の発現に関する遺伝子を標的遺伝子とするｍｉＲＮＡを含む場合、ＡＰＰ阻害剤として機能する。

＜脳炎症＞
本発明の遺伝子の発現制御剤は、脳炎症の改善をできることが好ましい。以下、脳炎症の作用機序を、本発明の遺伝子の発現制御剤の作用機序とあわせて説明する。
アルツハイマー病をはじめとして、前頭側頭葉変性症、パーキンソン病、ハンチントン病など複数の神経変性疾患の病態に関与するタウ蛋白質が、脳内ミクログリアにおいて、エイズウイルスの細胞内受容体として知られているＰＱＢＰ１に認識されて、脳炎症を誘発する。具体的には、タウはＰＱＢＰ１－ｃＧＡＣ－ＳＴＩＮＧ経路を介してミクログリアを活性化し、脳炎症を促進する（Ｎａｔｕｒｅ Ｃｏｍｍｕｎｉｃａｔｉｏｎｓ ｖｏｌｕｍｅ １２， Ａｒｔｉｃｌｅ ｎｕｍｂｅｒ： ６５６５ （２０２１））。図４（Ａ）は、エイズウイルスのｃＤＮＡによるＰＱＢＰ１－ｃＧＡＳ－ＳＴＩＮＧ経路を介した炎症遺伝子の発現誘導の模式図である。図４（Ｂ）は、タウ・タンパク質によるＰＱＢＰ１－ｃＧＡＳ－ＳＴＩＮＧ経路を介した炎症遺伝子の発現誘導の模式図である。
したがって、本発明の遺伝子の発現制御剤において、微小粒子がポリグルタミン結合タンパク質－１（ＰＱＢＰ１）の発現に関する遺伝子を標的遺伝子とするｍｉＲＮＡを含む場合、ＰＱＢＰ１抑制剤として機能する。その結果、本発明の遺伝子の発現制御剤は、タウ・タンパク質関連の認知症（特にアルツハイマー病）や脳炎症の改善をできる。

＜微小粒子＞
本発明の遺伝子の発現制御剤の有効成分であるｍｉＲＮＡは、微小粒子に含まれる。
本発明の遺伝子の発現制御剤として用いられる微小粒子は、例えば、歯髄由来幹細胞等の間葉系幹細胞からの分泌、出芽または分散などにより、歯髄由来幹細胞等から導き出され、細胞培養培地に浸出、放出または脱落するものである。微小粒子は、歯髄由来幹細胞等の培養上清に含まれることが好ましく、歯髄由来幹細胞の培養上清に由来する微小粒子であることがより好ましい。ただし、歯髄由来幹細胞の培養上清に由来する微小粒子は、必ずしも歯髄由来幹細胞の培養上清から取得する必要がない。例えば、歯髄由来幹細胞の内部の微小粒子を任意の方法で単離したものであっても、歯髄由来幹細胞の培養上清から単離できる微小粒子と同じものであれば、歯髄由来幹細胞の培養上清に由来する微小粒子と言える。
歯髄由来幹細胞等の培養上清に由来する微小粒子は、培養上清に含まれた状態で用いてもよく、または培養上清から精製した状態で用いてもよい。微小粒子が培養上清から精製された微小粒子であることが好ましい。
微小粒子の由来は、公知の方法で判別することができる。例えば、微小粒子は、Ｊ Ｓｔｅｍ Ｃｅｌｌ Ｒｅｓ Ｔｈｅｒ （２０１８） ８：２に記載の方法で、歯髄由来幹細胞、脂肪由来幹細胞、骨髄由来幹細胞、臍帯由来幹細胞などのいずれの幹細胞に由来するか判別することができる。具体的には、微小粒子のｍｉＲＮＡパターンに基づいて、それぞれの微小粒子の由来を判別することができる。

（ｍｉＲＮＡ）
本発明では、微小粒子がアミロイド前駆体タンパク質（ＡＰＰ）、β－セクレターゼ（ＢＡＣＥ１）、ＮＭＤＡ活性化タンパク質、グリコーゲン合成酵素キナーゼ－３β（ＧＳＫ－３β）、およびポリグルタミン結合タンパク質－１（ＰＱＢＰ１）のうち少なくとも１種類のタンパク質の発現に関する遺伝子を標的遺伝子とするｍｉＲＮＡを含む。
本発明において、ｍｉＲＮＡ（ＭｉｃｒｏＲＮＡｓ）は、例えば２１～２５塩基（ヌクレオチド）のＲＮＡ分子である。ｍｉＲＮＡは、標的遺伝子（ｔａｒｇｅｔ；ターゲット）ｍＲＮＡの分解または解読段階における抑制により遺伝子発現を調節できる。
本発明において、ｍｉＲＮＡは、一本鎖（一量体）でもよいし、二本鎖（二量体）であってもよい。また、本発明において、ｍｉＲＮＡは、Ｄｉｃｅｒ等のリボヌクレアーゼにより切断された成熟型ｍｉＲＮＡが好ましい。

なお、hsa-miR-16-5pなどの本明細書に記載のｍｉＲＮＡの配列は公知のデータベース（例えば、ｍｉＲＢａｓｅ ｄａｔａｂａｓｅ）にアクセッション番号と関連づけられて登録されており、当業者であれば配列を一義的に定めることができる。例えば、hsa-miR-16-5pのアクセッション番号はＭＩＭＡＴ０００００６９であり、ｍｉＲＢａｓｅ ｄａｔａｂａｓｅに配列が登録されている。以下、各ｍｉＲＮＡのアクセッション番号は省略する。
ただし、本明細書におけるｍｉＲＮＡは、hsa-miR-16-5pなどの成熟型ｍｉＲＮＡに対して１～５個程度の塩基が異なるバリアントも含む。また、本明細書における各ｍｉＲＮＡは、各ｍｉＲＮＡ（例えばhsa-miR-16-5p）の塩基配列と同一性を有する塩基配列からなるポリヌクレオチド、または、それらの相補的な塩基配列からなるポリヌクレオチドであって、本発明におけるｍｉＲＮＡの機能を有するポリヌクレオチドを含む。「同一性」とは、比較する配列同士を適切にアライメントしたときの同一の程度であ
り、前記配列間のアミノ酸の正確な一致の出現率（％）を意味する。アライメントは、例えば、ＢＬＡＳＴ等の任意のアルゴリズムの利用により行うことができる。同一性は、例えば、８０％、８５％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％または約９９％である。同一性を有する塩基配列からなるポリヌクレオチドは、例えば、ｍｉＲＮＡの塩基配列において、点変異、欠失および／または付加を有してもよい。前記点変異等の塩基数は、例えば、１～５個、１～３個、１～２個、または１個である。また、相補的な塩基配列からなるポリヌクレオチドは、例えば、ｍｉＲＮＡの塩基配列からなるポリヌクレオチドとストリンジェントな条件でハイブリダイズするポリヌクレオチドであって、本発明におけるｍｉＲＮＡの機能を有するポリヌクレオチドを含む。ストリンジェントな条件としては、特に限定されないが、例えば、特開２０１７－１８４６４２号公報の［００２８］に記載の条件を挙げることができ、この公報の内容は参照して本明細書に組み込まれる。

本発明では、微小粒子が、歯髄由来幹細胞の培養上清よりも高い濃度で、ＡＰＰ、ＢＡＣＥ１、ＮＭＤＡ活性化タンパク質、ＧＳＫ－３β、およびＰＱＢＰ１のうち少なくとも１種類のタンパク質の発現に関する遺伝子を標的遺伝子とするｍｉＲＮＡを含むことが好ましい。
以下、微小粒子が含むｍｉＲＮＡの好ましい態様を説明する。

（１）ＡＰＰの発現抑制剤
本発明の遺伝子の発現制御剤はＡＰＰの発現抑制剤であることが好ましい。この場合、微小粒子がＡＰＰの発現に関する遺伝子を標的遺伝子とするｍｉＲＮＡを含むことが好ましい。
本発明では、微小粒子が下記ＡＰＰ抑制関連ｍｉＲＮＡ群（６３種類）のうち少なくとも１種類を含むことがより好ましい；
ＡＰＰ抑制関連ｍｉＲＮＡ群：
hsa-miR-101-3p、hsa-miR-106b-5p、hsa-miR-1229-5p、hsa-miR-1238-3p、hsa-miR-1260b、
hsa-miR-1276、hsa-miR-128-3p、hsa-miR-142-3p、hsa-miR-142-5p、hsa-miR-144-3p、
hsa-miR-151a-3p、hsa-miR-153-3p、hsa-miR-15a-5p、hsa-miR-15b-5p、hsa-miR-16-5p、
hsa-miR-17-5p、hsa-miR-185-5p、hsa-miR-186-5p、hsa-miR-194-5p、hsa-miR-195-5p、
hsa-miR-196a-5p、hsa-miR-203a-3p、hsa-miR-20a-5p、hsa-miR-222-3p、hsa-miR-298、
hsa-miR-31-5p、hsa-miR-3120-3p、hsa-miR-3132、hsa-miR-323a-3p、hsa-miR-324-5p、
hsa-miR-328-3p、hsa-miR-3620-3p、hsa-miR-3646、hsa-miR-369-3p、hsa-miR-373-3p、
hsa-miR-374c-5p、hsa-miR-381-3p、hsa-miR-382-5p、hsa-miR-383-5p、hsa-miR-411-3p、
hsa-miR-423-3p、hsa-miR-424-3p、hsa-miR-424-5p、hsa-miR-4484、hsa-miR-455-3p、
hsa-miR-4786-5p、hsa-miR-484、hsa-miR-490-5p、hsa-miR-497-5p、hsa-miR-500a-5p、
hsa-miR-5093、hsa-miR-532-3p、hsa-miR-532-5p、hsa-miR-539-3p、hsa-miR-548f-3p、
hsa-miR-551b-5p、hsa-miR-5584-5p、hsa-miR-567、hsa-miR-5696、hsa-miR-582-5p、
hsa-miR-6073、hsa-miR-873-5p、hsa-miR-93-5p。

微小粒子がＡＰＰ抑制関連ｍｉＲＮＡ群のうち５種類以上を含むことが好ましく、１０種類以上を含むことがより好ましく、２０種類以上を含むことが特に好ましく、３０種類以上を含むことがより特に好ましい。

微小粒子がＡＰＰ抑制関連ｍｉＲＮＡ群のうち、hsa-miR-101-3p、hsa-miR-153-3p、hsa-miR-16-5p、hsa-miR-222-3pおよびhsa-miR-93-5pのうちいずれか１種類を含むことが好ましく、hsa-miR-16-5pを少なくとも含むことが特に好ましい。
微小粒子は、ＡＰＰ抑制関連ｍｉＲＮＡ群のうち少なくとも１種類を、ＩＭＯＴＡを用いた解析で得られるリードカウント数のＬｏｇ２Ｒａｔｉｏとして、４．０以上含むことが好ましく、１０．０以上含むことがより好ましく、１５．０以上含むことが特に好ましい。微小粒子は、ＩＭＯＴＡを用いた解析で得られるリードカウント数のＬｏｇ２Ｒａｔｉｏとして、hsa-miR-101-3p、hsa-miR-153-3p、hsa-miR-16-5p、hsa-miR-222-3pおよびhsa-miR-93-5pをいずれも４．０以上含むことが好ましく、hsa-miR-101-3p、hsa-miR-16-5p、hsa-miR-222-3pおよびhsa-miR-93-5pをいずれも１０．０以上含むことがより好ましく、hsa-miR-16-5pを１５．０以上含むことが特に好ましい。

なお、ＡＰＰ抑制関連ｍｉＲＮＡ群に含まれるhsa-miR-16-5pは、ＢＡＣＥ１の発現に関する遺伝子の阻害剤およびＧＳＫ－３βの発現に関する遺伝子の阻害剤でもある。すなわち、本発明では、微小粒子が、ＡＰＰの発現に関する遺伝子の発現抑制剤、ＢＡＣＥ１の発現に関する遺伝子の阻害剤およびＧＳＫ－３βの発現に関する遺伝子の阻害剤のうち少なくとも１種類であり、かつhsa-miR-16-5pを含むことが好ましい。
さらに微小粒子が、ＡＰＰの発現に関する遺伝子の発現抑制剤、ＢＡＣＥ１の発現に関する遺伝子の阻害剤およびＧＳＫ－３βの発現に関する遺伝子の阻害剤であり、かつhsa-miR-16-5pを含むことがより好ましい。

本発明の遺伝子の発現制御剤は、脂肪由来幹細胞の培養上清から得られるエクソソームまたは臍帯由来幹細胞の培養上清から得られるエクソソームと比較して、hsa-miR-16-5pの発現量が１．１倍以上であることが好ましく、１．５倍以上であることがより好ましく、２倍以上であることが特に好ましい。

本発明の遺伝子の発現制御剤がＡＰＰ遺伝子の発現抑制剤である場合、任意の細胞内におけるＡＰＰ遺伝子の発現を通常の（未処理の細胞の場合の）０．８倍以下に抑制できることが好ましく、０．６倍以下に抑制できることがより好ましく、０．４倍以下に抑制できることが特に好ましい。

（２）ＢＡＣＥ１の阻害剤
本発明の遺伝子の発現制御剤はＢＡＣＥ１の阻害剤であることが好ましい。この場合、微小粒子がＢＡＣＥ１の発現に関する遺伝子を標的遺伝子とするｍｉＲＮＡを含むことが好ましい。
本発明では、微小粒子が下記ＢＡＣＥ１阻害関連ｍｉＲＮＡ群（５０種類）のうち少なくとも１種類を含むことがより好ましい。
ＢＡＣＥ１阻害関連ｍｉＲＮＡ群：
hsa-miR-107、hsa-miR-124-3p、hsa-miR-1267、hsa-miR-128-3p、hsa-miR-129-2-3p、
hsa-miR-140-3p、hsa-miR-140-5p、hsa-miR-141-3p、hsa-miR-15a-5p、hsa-miR-16-5p、
hsa-miR-17-5p、hsa-miR-195-5p、hsa-miR-200a-3p、hsa-miR-203a-3p、hsa-miR-212-3p、
hsa-miR-212-5p、hsa-miR-24-3p、hsa-miR-26b-5p、hsa-miR-27a-3p、hsa-miR-298、
hsa-miR-299-3p、hsa-miR-29a-3p、hsa-miR-29b-3p、hsa-miR-29c-3p、hsa-miR-328-3p、
hsa-miR-339-5p、hsa-miR-340-5p、hsa-miR-369-3p、hsa-miR-374a-5p、hsa-miR-374b-5p、
hsa-miR-374c-5p、hsa-miR-382-5p、hsa-miR-421、hsa-miR-424-5p、hsa-miR-455-3p、
hsa-miR-497-5p、hsa-miR-505-3p、hsa-miR-532-5p、hsa-miR-7-5p、hsa-miR-874-3p、
hsa-miR-9-5p。

微小粒子がＢＡＣＥ１阻害関連ｍｉＲＮＡ群のうち５種類以上を含むことが好ましく、１０種類以上を含むことがより好ましく、２０種類以上を含むことが特に好ましく、３０種類以上を含むことがより特に好ましい。

微小粒子がＢＡＣＥ１阻害関連ｍｉＲＮＡ群のうち、hsa-miR-101-3p、hsa-miR-16-5pおよびhsa-miR-29a-3pのうちいずれか１種類を含むことが好ましく、hsa-miR-16-5pを少なくとも含むことが特に好ましい。
微小粒子は、ＢＡＣＥ１阻害関連ｍｉＲＮＡ群のうち少なくとも１種類を、ＩＭＯＴＡを用いた解析で得られるリードカウント数のＬｏｇ２Ｒａｔｉｏとして、４．０以上含むことが好ましく、１０．０以上含むことがより好ましく、１５．０以上含むことが特に好ましい。微小粒子は、ＩＭＯＴＡを用いた解析で得られるリードカウント数のＬｏｇ２Ｒａｔｉｏとして、hsa-miR-101-3p、hsa-miR-16-5pおよびhsa-miR-29a-3pをいずれも４．０以上含むことが好ましく、hsa-miR-101-3p、hsa-miR-16-5pおよびhsa-miR-29a-3pをいずれも１０．０以上含むことがより好ましく、hsa-miR-16-5pを１５．０以上含むことが特に好ましい。

本発明の遺伝子の発現制御剤がＢＡＣＥ１遺伝子の発現抑制剤である場合、任意の細胞内におけるＢＡＣＥ１遺伝子の発現を通常の（未処理の細胞の場合の）０．８倍以下に抑制できることが好ましく、０．７５倍以下に抑制できることがより好ましく、０．７倍以下に抑制できることが特に好ましい。

（３）ＮＭＤＡ活性化遺伝子の発現抑制剤
本発明の遺伝子の発現制御剤はＮＭＤＡ活性化遺伝子の発現抑制剤であることが好ましい。この場合、ＮＭＤＡ活性化タンパク質がＤＬＧ１、ＣＡＭＫ２Ｄ、ＣＡＭＫ２ＡおよびＣＡＰＮ１のうち少なくとも１種類のタンパク質であり、微小粒子がＤＬＧ１、ＣＡＭＫ２Ｄ、ＣＡＭＫ２ＡおよびＣＡＰＮ１のうち少なくとも１種類のタンパク質発現に関する遺伝子を標的遺伝子とするｍｉＲＮＡを含むことが好ましい。
本発明では、微小粒子が下記ＤＬＧ１抑制関連ｍｉＲＮＡ群、下記ＣＡＭＫ２Ｄ抑制関連ｍｉＲＮＡ群、下記ＣＡＭＫ２Ａ抑制関連ｍｉＲＮＡ群、および下記ＣＡＰＮ１抑制関連ｍｉＲＮＡ群のうち少なくとも１種類のｍｉＲＮＡ群を含むことがより好ましい（合計５１種類）。
ＤＬＧ１抑制関連ｍｉＲＮＡ群：
hsa-miR-1-3p、hsa-miR-142-5p、hsa-miR-204-5p、hsa-miR-206、hsa-miR-21-5p、
hsa-miR-218-5p、hsa-miR-340-5p、hsa-miR-613。
ＣＡＭＫ２Ｄ抑制関連ｍｉＲＮＡ群：
hsa-let-7a-5p、hsa-miR-101-3p、hsa-miR-129-5p、hsa-miR-139-5p、hsa-miR-144-3p、
hsa-miR-145-5p、hsa-miR-185-5p、hsa-miR-203a-3p、hsa-miR-204-5p、hsa-miR-211-5p、
hsa-miR-24-3p、hsa-miR-27a-3p、hsa-miR-30a-3p、hsa-miR-31-5p、hsa-miR-361-5p、
hsa-miR-421、hsa-miR-484、hsa-miR-494-3p、hsa-miR-505-3p、hsa-miR-7-5p。
ＣＡＭＫ２Ａ抑制関連ｍｉＲＮＡ群：
hsa-miR-129-5p、hsa-miR-137、hsa-miR-142-5p、hsa-miR-148a-3p、hsa-miR-149-3p、
hsa-miR-152-3p、hsa-miR-25-3p、hsa-miR-27a-3p、hsa-miR-32-5p、hsa-miR-338-3p、
hsa-miR-340-5p、hsa-miR-363-3p、hsa-miR-3665、hsa-miR-4534、hsa-miR-4665-5p、
hsa-miR-4688、hsa-miR-485-5p、hsa-miR-5010-5p、hsa-miR-505-5p、hsa-miR-5698、
hsa-miR-625-5p、hsa-miR-92a-3p。
ＣＡＰＮ１抑制関連ｍｉＲＮＡ群：
hsa-miR-1-3p、hsa-miR-124-3p、hsa-miR-140-5p、hsa-miR-17-3p、hsa-miR-22-3p、
hsa-miR-34a-5p、hsa-miR-6511b-5p。

微小粒子がＤＬＧ１抑制関連ｍｉＲＮＡ群、ＣＡＭＫ２Ｄ抑制関連ｍｉＲＮＡ群、ＣＡＭＫ２Ａ抑制関連ｍｉＲＮＡ群、およびＣＡＰＮ１抑制関連ｍｉＲＮＡ群のうち５種類以上を含むことが好ましく、１０種類以上を含むことがより好ましく、２０種類以上を含むことが特に好ましく、３０種類以上を含むことがより特に好ましい。

微小粒子が、
ＤＬＧ１抑制関連ｍｉＲＮＡ群のうちhsa-miR-21-5p、
ＣＡＭＫ２Ｄ抑制関連ｍｉＲＮＡ群のうちhsa-let-7a-5p、
ＣＡＭＫ２Ａ抑制関連ｍｉＲＮＡ群のうちhsa-miR-92a-3p、
ＣＡＰＮ１抑制関連ｍｉＲＮＡ群のうちhsa-miR-22-3pをいずれも含むことが特に好ましい。
微小粒子は、ＤＬＧ１抑制関連ｍｉＲＮＡ群、ＣＡＭＫ２Ｄ抑制関連ｍｉＲＮＡ群、ＣＡＭＫ２Ａ抑制関連ｍｉＲＮＡ群、およびＣＡＰＮ１抑制関連ｍｉＲＮＡ群のうち少なくとも１種類を、ＩＭＯＴＡを用いた解析で得られるリードカウント数のＬｏｇ２Ｒａｔｉｏとして、４．０以上含むことが好ましく、１０．０以上含むことがより好ましく、１５．０以上含むことが特に好ましい。微小粒子は、ＩＭＯＴＡを用いた解析で得られるリードカウント数のＬｏｇ２Ｒａｔｉｏとして、hsa-miR-21-5p、hsa-let-7a-5p、hsa-miR-92a-3p、hsa-miR-22-3pをいずれも４．０以上含むことが好ましく、hsa-miR-21-5p、hsa-let-7a-5p、hsa-miR-92a-3p、hsa-miR-22-3pをいずれも１０．０以上含むことがより好ましく、hsa-miR-21-5p、hsa-let-7a-5p、hsa-miR-92a-3pを１５．０以上含むことが特に好ましい。

本発明の遺伝子の発現制御剤は、脂肪由来幹細胞の培養上清から得られるエクソソームまたは臍帯由来幹細胞の培養上清から得られるエクソソームと比較して、hsa-miR-21-5pの発現量が１．１倍以上であることが好ましく、１．５倍以上であることがより好ましく、２倍以上であることが特に好ましく、５倍以上であることがより特に好ましい。
本発明の遺伝子の発現制御剤は、脂肪由来幹細胞の培養上清から得られるエクソソームと比較して、hsa-let-7a-5pの発現量が１．１倍以上であることが好ましく、１．５倍以上であることがより好ましい。また、本発明の遺伝子の発現制御剤は、臍帯由来幹細胞の培養上清から得られるエクソソームと比較して、hsa-let-7a-5pの発現量が１．０倍を超えることが好ましく、１．０５倍以上であることがより好ましい。
本発明の遺伝子の発現制御剤は、脂肪由来幹細胞の培養上清から得られるエクソソームまたは臍帯由来幹細胞の培養上清から得られるエクソソームと比較して、hsa-miR-92a-3pの発現量が１．１倍以上であることが好ましく、１．５倍以上であることがより好ましく、２倍以上であることが特に好ましく、４倍以上であることがより特に好ましい。
本発明の遺伝子の発現制御剤は、脂肪由来幹細胞の培養上清から得られるエクソソームまたは臍帯由来幹細胞の培養上清から得られるエクソソームと比較して、hsa-miR-22-3pの発現量が１．１倍以上であることが好ましく、１．５倍以上であることがより好ましく、２倍以上であることが特に好ましい。

本発明の遺伝子の発現制御剤がＮＭＤＡ活性化遺伝子（好ましくはＣＡＭＫ２Ｄ遺伝子）の発現抑制剤である場合、任意の細胞内におけるＮＭＤＡ活性化遺伝子の発現を通常の（未処理の細胞の場合の）０．８倍以下に抑制できることが好ましく、０．５倍以下に抑制できることがより好ましく、０．３倍以下に抑制できることが特に好ましい。

（４）ＧＳＫ－３βの阻害剤
本発明の遺伝子の発現制御剤はＧＳＫ－３βの阻害剤であることが好ましい。この場合、微小粒子がＧＳＫ－３βの発現に関する遺伝子を標的遺伝子とするｍｉＲＮＡを含むことが好ましい。
微小粒子が下記ＧＳＫ－３β阻害関連ｍｉＲＮＡ群（５４種類）のうち少なくとも１種類を含むことがより好ましい。
ＧＳＫ－３β阻害関連ｍｉＲＮＡ群：
hsa-let-7a-3p、hsa-let-7b-3p、hsa-let-7f-1-3p、hsa-let-7f-2-3p、hsa-miR-101-3p、
hsa-miR-1185-1-3p、hsa-miR-1185-2-3p、hsa-miR-124-3p、hsa-miR-128-3p、hsa-miR-129-5p、
hsa-miR-132-3p、hsa-miR-137、hsa-miR-140-5p、hsa-miR-142-5p、hsa-miR-144-3p、
hsa-miR-150-5p、hsa-miR-155-5p、hsa-miR-15a-5p、hsa-miR-15b-5p、hsa-miR-16-5p、
hsa-miR-1910-5p、hsa-miR-195-5p、hsa-miR-199a-5p、hsa-miR-212-3p、hsa-miR-218-5p、
hsa-miR-219a-5p、hsa-miR-23a-3p、hsa-miR-24-3p、hsa-miR-26a-5p、hsa-miR-26b-5p、
hsa-miR-27a-3p、hsa-miR-28-5p、hsa-miR-29a-3p、hsa-miR-29b-3p、hsa-miR-346、
hsa-miR-369-3p、hsa-miR-374a-5p、hsa-miR-374b-5p、hsa-miR-374c-5p、hsa-miR-377-3p、
hsa-miR-409-3p、hsa-miR-409-5p、hsa-miR-410-3p、hsa-miR-424-5p、hsa-miR-425-5p、
hsa-miR-4465、hsa-miR-497-5p、hsa-miR-582-5p、hsa-miR-6083、hsa-miR-708-5p、
hsa-miR-9-5p、hsa-miR-92a-3p、hsa-miR-96-5p、hsa-miR-98-3p。

微小粒子がＧＳＫ－３β阻害関連ｍｉＲＮＡ群のうち５種類以上を含むことが好ましく、１０種類以上を含むことがより好ましく、２０種類以上を含むことが特に好ましく、３０種類以上を含むことがより特に好ましい。

微小粒子がＧＳＫ－３β阻害関連ｍｉＲＮＡ群のうち、hsa-miR-16-5pおよびhsa-miR-29a-3pのうちいずれか１種類を含むことが好ましく、hsa-miR-16-5pを少なくとも含むことが特に好ましい。
微小粒子は、ＧＳＫ－３β阻害関連ｍｉＲＮＡ群のうち少なくとも１種類を、ＩＭＯＴＡを用いた解析で得られるリードカウント数のＬｏｇ２Ｒａｔｉｏとして、４．０以上含むことが好ましく、１０．０以上含むことがより好ましく、１５．０以上含むことが特に好ましい。微小粒子は、ＩＭＯＴＡを用いた解析で得られるリードカウント数のＬｏｇ２Ｒａｔｉｏとして、hsa-miR-16-5pおよびhsa-miR-29a-3pをいずれも４．０以上含むことが好ましく、hsa-miR-16-5pおよびhsa-miR-29a-3pをいずれも１０．０以上含むことがより好ましく、hsa-miR-16-5pを１５．０以上含むことが特に好ましい。

本発明の遺伝子の発現制御剤がＧＳＫ－３β遺伝子の阻害剤である場合、任意の細胞内におけるＧＳＫ－３β遺伝子の発現を通常の（未処理の細胞の場合の）０．８倍以下に抑制できることが好ましく、０．７５倍以下に抑制できることがより好ましく、０．７倍以下に抑制できることが特に好ましい。

（５）ＰＱＢＰ１の発現抑制剤
本発明の遺伝子の発現制御剤はＰＱＢＰ１の発現抑制剤であることが好ましい。この場合、微小粒子がＰＱＢＰ１の発現に関する遺伝子を標的遺伝子とするｍｉＲＮＡを含むことがより好ましい。Ｎａｔｕｒｅ Ｃｏｍｍｕｎｉｃａｔｉｏｎｓ ｖｏｌｕｍｅ １２， Ａｒｔｉｃｌｅ ｎｕｍｂｅｒ： ６５６５ （２０２１）に示されているようにタウの活性化に関与するＰＱＢＰ１を抑制するｍｉＲＮＡはタウ疾患（アルツハイマー病や脳炎症）の治療に役立つ可能性がある。

微小粒子が下記ＰＱＢＰ１抑制関連ｍｉＲＮＡ群のうち少なくとも１種類を含むことが特に好ましく、２種類とも含むことがより特に好ましい。
ＰＱＢＰ１抑制関連ｍｉＲＮＡ群：hsa-miR-6727-3p、hsa-miR-6727-5p。
微小粒子が、ＰＱＢＰ１抑制関連ｍｉＲＮＡ群のうち、hsa-miR-6727-3pを少なくとも含むことがより好ましく、hsa-miR-6727-3pおよびhsa-miR-6727-5pをいずれも含むことが特に好ましい。
微小粒子は、ＰＱＢＰ１抑制関連ｍｉＲＮＡ群のうち少なくとも１種類を、ＩＭＯＴＡを用いた解析で得られるリードカウント数のＬｏｇ２Ｒａｔｉｏとして、１．０以上含むことが好ましく、２．０以上含むことがより好ましく、３．０以上含むことが特に好ましい。微小粒子は、ＩＭＯＴＡを用いた解析で得られるリードカウント数のＬｏｇ２Ｒａｔｉｏとして、hsa-miR-6727-3pおよびhsa-miR-6727-5pをいずれも２．０以上含むことが好ましく、hsa-miR-6727-3pおよびhsa-miR-6727-5pをいずれも３．０以上含むことがより好ましく、hsa-miR-6727-3pを４．０以上含むことが特に好ましい。

本発明の遺伝子の発現制御剤は、脂肪由来幹細胞の培養上清から得られるエクソソームまたは臍帯由来幹細胞の培養上清から得られるエクソソームと比較して、hsa-miR-6727-3pの発現量が１．１倍以上であることが好ましく、１．５倍以上であることがより好ましく、２倍以上であることが特に好ましい。

本発明の遺伝子の発現制御剤がＰＱＢＰ１遺伝子の発言抑制剤である場合、任意の細胞内におけるＰＱＢＰ１遺伝子の発現を通常の（未処理の細胞の場合の）０．８倍以下に抑制できることが好ましく、０．６倍以下に抑制できることがより好ましく、０．５５倍以下に抑制できることが特に好ましい。

（ｍｉＲＮＡの種類）
ここで、歯髄由来幹細胞の培養上清に由来する微小粒子には、約２６００種類のｓｍａｌｌ ＲＮＡが含まれる。このうちの約１８００種類がｍｉＲＮＡである。これらのｍｉＲＮＡのうち、含有量が多いｍｉＲＮＡは１８０～２００種類である。歯髄由来幹細胞に由来する微小粒子における含有量が多いｍｉＲＮＡは、脳神経疾患や眼疾患に治療に関連するマイクロＲＮＡが多い点が特徴であり、従来知られておらず、本発明者が新たに見出した知見である。この特徴は、その他の間葉系幹細胞の微小粒子における含有量が多いｍｉＲＮＡの種類とは大きく異なる。例えば、脂肪由来幹細胞の微小粒子や臍帯由来幹細胞の微小粒子における含有量が多いｍｉＲＮＡには、脳神経疾患や眼疾患に治療に関連するマイクロＲＮＡはほとんど含まれない。

歯髄由来幹細胞の培養上清に由来する微小粒子は、アルツハイマー病などのアミロイドβ関連またはタウ・タンパク質関連の認知症や脳炎症に関連するタンパク質の発現を制御できるマイクロＲＮＡ（以下、アルツハイマー関連マイクロＲＮＡともいう）として５種類以上を含むことが好ましく、１０種類以上を含むことがより好ましく、２０種類以上を含むことが特に好ましく、３０種類以上を含むことがより特に好ましく、１００種類以上含まれることが最も好ましい。

（微小粒子の種類）
微小粒子は、エクソソーム（ｅｘｏｓｏｍｅ）、微小胞、膜粒子、膜小胞、エクトソーム（Ｅｃｔｏｓｏｍｅ）およびエキソベシクル（ｅｘｏｖｅｓｉｃｌｅ）、またはマイクロベシクル（ｍｉｃｒｏｖｅｓｉｃｌｅ）からなる群から選択される少なくとも１種類であることが好ましく、エクソソームであることがより好ましい。
微小粒子の直径は、１０～１０００ｎｍであることが好ましく、３０～５００ｎｍであることがより好ましく、５０～１５０ｎｍであることが特に好ましい。
また、微小粒子の表面には、ＣＤ９、ＣＤ６３、ＣＤ８１などのテトラスパニンという分子が存在することが望ましく、それはＣＤ９単独、ＣＤ６３単独、ＣＤ８１単独でもよく、あるいはそれらの２つないしは３つのどの組み合わせでも良い。
以下、微小粒子として、エクソソームを用いる場合の好ましい態様を説明することがあるが、本発明に用いられる微小粒子はエクソソームに限定されない。

エクソソームは、原形質膜との多胞体の融合時に細胞から放出される細胞外小胞であることが好ましい。
エクソソームの表面は、歯髄由来幹細胞の細胞膜由来の脂質およびタンパク質を含むことが好ましい。
エクソソームの内部には、核酸（マイクロＲＮＡ、メッセンジャーＲＮＡ、ＤＮＡなど）およびタンパク質など歯髄由来幹細胞の細胞内の物質を含むことが好ましい。
エクソソームは、ある細胞から別の細胞への遺伝情報の輸送による、細胞と細胞とのコミュニケーションのために使用されることが知られている。エクソソームは、容易に追跡可能であり、特異的な領域に標的化され得る。

（微小粒子の含有量）
本発明の遺伝子の発現制御剤は、微小粒子の含有量は特に制限はない。本発明の遺伝子の発現制御剤は、微小粒子を０．５×１０^８個以上含むことが好ましく、１．０×１０^８個以上含むことがより好ましく、２．０×１０^８個以上含むことが特に好ましく、２．５×１０^８個以上含むことがより特に好ましく、１．０×１０^９個以上含むことがさらにより特に好ましい。
また、本発明の遺伝子の発現制御剤は、微小粒子の含有濃度は特に制限はない。本発明の遺伝子の発現制御剤は微小粒子を１．０×１０^８個／ｍＬ以上含むことが好ましく、２．０×１０^８個／ｍＬ以上含むことがより好ましく、４．０×１０^８個／ｍＬ以上含むことが特に好ましく、５．０×１０^８個／ｍＬ以上含むことがより特に好ましく、２．０×１０^９個／ｍＬ以上含むことがさらにより特に好ましい。
本発明の遺伝子の発現制御剤の好ましい態様は、微小粒子をこのように多量または高濃度で含むことにより、ｍｉＲＮＡなどの量を高く維持でき、アミロイドβ関連またはタウ・タンパク質関連の認知症や脳炎症に関連するタンパク質の発現を制御（特に抑制）できる。

＜その他の成分＞
本発明の遺伝子の発現制御剤は、微小粒子の他に、投与する対象の動物の種類や目的に応じて、本発明の効果を損なわない範囲でその他の成分を含有していてもよい。その他の成分としては、栄養成分、抗生物質、サイトカイン、保護剤、担体、賦形剤、崩壊剤、緩衝剤、乳化剤、懸濁剤、無痛化剤、安定剤、保存剤、防腐剤などを挙げられる。
栄養成分としては、例えば、脂肪酸等、ビタミン等を挙げることができる。
抗生物質としては、例えば、ペニシリン、ストレプトマイシン、ゲンタマイシン等が挙げられる。
担体としては、薬学的に許容可能な担体として公知の材料を挙げることができる。
本発明の遺伝子の発現制御剤は、歯髄由来幹細胞の培養上清それ自体または微小粒子それ自体であってもよく、薬学的に許容可能な担体や賦形剤などをさらに含む医薬組成物であってもよい。医薬組成物の目的は、投与対象への歯髄由来幹細胞の培養上清や微小粒子の投与を促進することである。

薬学的に許容可能な担体は、投与対象に対して顕著な刺激性を引き起こさず、投与される化合物の生物学的活性および特性を抑止しない担体（希釈剤を含む）であることが好ましい。担体の例は、プロピレングリコール；（生理）食塩水；エマルション；緩衝液；培地、例えばＤＭＥＭまたはＲＰＭＩなど；フリーラジカルを除去する成分を含有する低温保存培地である。

本発明の遺伝子の発現制御剤は、従来公知の遺伝子の発現制御剤の有効成分を含んでいてもよい。当業者であれば用途や投与対象などにあわせて適切に変更することができる。

一方、本発明の遺伝子の発現制御剤は、所定の物質を含まないことが好ましい。
例えば、本発明の遺伝子の発現制御剤は、歯髄由来幹細胞を含まないことが好ましい。
また、本発明の遺伝子の発現制御剤は、ＭＣＰ－１を含まないことが好ましい。ただし、ＭＣＰ－１以外のサイトカインを含んでいてもよい。その他のサイトカインとしては、特開２０１８－０２３３４３号公報の［００１４］～［００２０］に記載のもの等が挙げられる。
また、本発明の遺伝子の発現制御剤は、シグレック９を含まないことが好ましい。ただし、シグレック９以外のその他のシアル酸結合免疫グロブリン様レクチンを含んでいてもよい。
なお、本発明の遺伝子の発現制御剤は、血清（ウシ胎仔血清、ヒト血清、羊血清等）を実質的に含まないことが好ましい。また、本発明の遺伝子の発現制御剤は、Ｋｎｏｃｋｏｕｔ ｓｅｒｕｍ ｒｅｐｌａｃｅｍｅｎｔ（ＫＳＲ）などの従来の血清代替物を実質的に含まないことが好ましい。
本発明の遺伝子の発現制御剤は、上記したその他の成分の含有量（固形分量）がいずれも１質量％以下であることが好ましく、０．１質量％以下であることがより好ましく、０．０１質量％以下であることが特に好ましい。

＜遺伝子の発現制御剤の製造方法＞
本発明の遺伝子の発現制御剤の製造方法は、特に制限はない。
歯髄由来幹細胞等の培養上清を調製し、続けて歯髄由来幹細胞の培養上清から微小粒子を精製して、本発明の遺伝子の発現制御剤を調製してもよい。あるいは、商業的に購入して入手した歯髄由来幹細胞の培養上清から微小粒子を精製して、本発明の遺伝子の発現制御剤を調製してもよい。さらには、廃棄処理されていた歯髄由来幹細胞の培養上清を含む組成物を譲り受けて（またはその組成物を適宜精製して）、そこから微小粒子を精製して、本発明の遺伝子の発現制御剤を調製してもよい。

（歯髄由来幹細胞等の培養上清の調製方法）
歯髄由来幹細胞等の培養上清は、特に制限はない。
歯髄由来幹細胞等の培養上清は、血清を実質的に含まないことが好ましい。例えば、歯髄由来幹細胞等の培養上清は、血清の含有量が１質量％以下であることが好ましく、０．１質量％以下であることがより好ましく、０．０１質量％以下であることが特に好ましい。

歯髄由来幹細胞は、ヒト由来であっても、ヒト以外の動物由来であってもよい。ヒト以外の動物としては、後述する本発明の遺伝子の発現制御剤投与する対象の動物（生物種）と同様のものを挙げることができ、哺乳動物が好ましい。

培養上清に用いられる歯髄由来幹細胞としては、特に制限はない。脱落乳歯歯髄幹細胞（ｓｔｅｍ ｃｅｌｌｓ ｆｒｏｍ ｅｘｆｏｌｉａｔｅｄ ｄｅｃｉｄｕｏｕｓ ｔｅｅｔｈ）や、その他の方法で入手される乳歯歯髄幹細胞や、永久歯歯髄幹細胞（ｄｅｎｔａｌ ｐｕｌｐ ｓｔｅｍ ｃｅｌｌｓ；ＤＰＳＣ）を用いることができる。ヒト乳歯歯髄幹細胞やヒト永久歯歯髄幹細胞の他、ブタ乳歯歯髄幹細胞などのヒト以外の動物由来の歯髄由来幹細胞を用いることができる。
歯髄由来幹細胞は、エクソソームに加え、血管内皮増殖因子（ＶＥＧＦ）、肝細胞増殖因子（ＨＧＦ）、インシュリン様成長因子（ＩＧＦ）、血小板由来成長因子（ＰＤＧＦ）、形質転換成長因子－ベータ（ＴＧＦ－β）－１および－３、ＴＧＦ－α、ＫＧＦ、ＨＢＥＧＦ、ＳＰＡＲＣ、その他の成長因子、ケモカイン等の種々のサイトカインを産生し得る。また、その他の多くの生理活性物質を産生し得る。
本発明では、歯髄由来幹細胞の培養上清に用いられる歯髄由来幹細胞が、多くのタンパク質が含まれる歯髄由来幹細胞であることが特に好ましく、乳歯歯髄幹細胞を用いることが好ましい。すなわち、本発明では、乳歯歯髄幹細胞の培養上清を用いることが好ましい。

本発明に用いられる歯髄由来幹細胞は、目的の処置を達成することができれば、天然のものであってもよく、遺伝子改変したものであってもよい。
特に本発明では、歯髄由来幹細胞の不死化幹細胞を用いることができる。実質的に無限増殖が可能な不死化幹細胞を用いることで、幹細胞の培養上清中に含まれる生体因子の量と組成を、長期間にわたって安定させることができる。歯髄由来幹細胞の不死化幹細胞としては、特に制限はない。不死化幹細胞は、癌化していない不死化幹細胞であることが好ましい。歯髄由来幹細胞の不死化幹細胞は、歯髄由来幹細胞に、以下の低分子化合物（阻害剤）を単独または組み合わせて添加して培養することにより、調製することができる。
ＴＧＦβ受容体阻害薬としては、トランスフォーミング増殖因子（ＴＧＦ）β受容体の機能を阻害する作用を有するものであれば特に限定されることはなく、例えば、２－（５－ベンゾ［１，３］ジオキソール－４－イル－２－ｔｅｒｔ－ブチル－１Ｈ－イミダゾール－４－イル）－６－メチルピリジン、３－（６－メチルピリジン－２－イル）－４－（４－キノリル）－１－フェニルチオカルバモイル－１Ｈ－ピラゾール（Ａ－８３－０１）、２－［（５－クロロ－２－フルオロフェニル）プテリジン－４－イル］ピリジン－４－イルアミン（ＳＤ－２０８）、３－［（ピリジン－２－イル）－４－（４－キノニル）］－１Ｈ－ピラゾール、２－（３－（６－メチルピリジン－２－イル）－１Ｈ－ピラゾール－４－イル）－１，５－ナフチリジン（以上、メルク社）、ＳＢ４３１５４２（シグマアルドリッチ社）などが挙げられる。好ましくはＡ－８３－０１が挙げられる。
ＲＯＣＫ阻害薬としては、Ｒｈｏ結合キナーゼの機能を阻害する作用を有するものであれば特に限定されない。ＲＯＣＫ阻害薬としては、例えば、ＧＳＫ２６９９６２Ａ（Ａｘｏｎｍｅｄｃｈｅｍ社）、Ｆａｓｕｄｉｌ ｈｙｄｒｏｃｈｌｏｒｉｄｅ（Ｔｏｃｒｉｓ Ｂｉｏｓｃｉｅｎｃｅ社）、Ｙ－２７６３２、Ｈ－１１５２（以上、富士フイルム和光純薬株式会社）などが挙げられる。好ましくはＹ－２７６３２が挙げられる。
ＧＳＫ３阻害薬としては、ＧＳＫ－３（Ｇｌｙｃｏｇｅｎ ｓｙｎｔｈａｓｅ ｋｉｎａｓｅ ３，グリコーゲン合成酵素３）を阻害するものであれば特に限定されることはなく、Ａ １０７０７２２、ＢＩＯ、ＢＩＯ－ａｃｅｔｏｘｉｍｅ（以上、ＴＯＣＲＩＳ社）などが挙げられる。
ＭＥＫ阻害薬としては、ＭＥＫ（ＭＡＰ ｋｉｎａｓｅ－ＥＲＫ ｋｉｎａｓｅ）の機能を阻害する作用を有するものであれば特に限定されることはなく、例えば、ＡＺＤ６２４４、ＣＩ－１０４０（ＰＤ１８４３５２）、ＰＤ０３２５９０１、ＲＤＥＡ１１９（ＢＡＹ８６－９７６６）、ＳＬ３２７、Ｕ０１２６－ＥｔＯＨ（以上、Ｓｅｌｌｅｃｋ社）、ＰＤ９８０５９、Ｕ０１２４、Ｕ０１２５（以上、コスモ・バイオ株式会社）などが挙げられる。

本発明の遺伝子の発現制御剤を再生医療に用いる場合、再生医療等安全性確保法の要請から、歯髄由来幹細胞またはこれらの不死化幹細胞の培養上清や、それに由来する微小粒子を含む組成物は、歯髄由来幹細胞等以外のその他の体性幹細胞を含有しない態様とする。本発明の遺伝子の発現制御剤は、歯髄由来幹細胞等以外の間葉系幹細胞やその他の体性幹細胞を含有していてもよいが、含有しないことが好ましい。
間葉系幹細胞以外のその他の体性幹細胞の例としては、真皮系、消化系、骨髄系、神経系等に由来する幹細胞が含まれるが、これらに限定されるものではない。真皮系の体性幹細胞の例としては、上皮幹細胞、毛包幹細胞等が含まれる。消化系の体性幹細胞の例としては膵臓（全般の）幹細胞、肝幹細胞等が含まれる。（間葉系幹細胞以外の）骨髄系の体性幹細胞の例としては、造血幹細胞等が含まれる。神経系の体性幹細胞の例としては、神経幹細胞、網膜幹細胞等が含まれる。
本発明の遺伝子の発現制御剤は、体性幹細胞以外の幹細胞を含有していてもよいが、含有しないことが好ましい。体性幹細胞以外の幹細胞としては、胚性幹細胞（ＥＳ細胞）、誘導多能性幹細胞（ｉＰＳ細胞）、胚性癌腫細胞（ＥＣ細胞）が含まれる。

歯髄由来幹細胞またはこの不死化幹細胞の培養上清の調製方法としては特に制限はなく、従来の方法を用いることができる。
歯髄由来幹細胞等の培養上清は、歯髄由来幹細胞を培養して得られる培養液である。例えば歯髄由来幹細胞の培養後に細胞成分を分離除去することによって、本発明に使用可能な培養上清を得ることができる。各種処理（例えば、遠心処理、濃縮、溶媒の置換、透析、凍結、乾燥、凍結乾燥、希釈、脱塩、保存等）を適宜施した培養上清を用いることにしてもよい。

歯髄由来幹細胞の培養上清を得るための歯髄由来幹細胞は、常法により選別可能であり、細胞の大きさや形態に基づいて、または接着性細胞として選別可能である。脱落した乳歯や永久歯から採取した歯髄細胞から、接着性細胞またはその継代細胞として選別することができる。歯髄由来幹細胞の培養上清には、選別された幹細胞を培養して得られた培養上清を用いることができる。

なお、「歯髄由来幹細胞等の培養上清」は、歯髄由来幹細胞等を培養して得られる細胞そのものを含まない培養液であることが好ましい。本発明で用いる歯髄由来幹細胞の培養上清は、その一態様では全体としても細胞（細胞の種類は問わない）を含まないことが好ましい。当該態様の組成物はこの特徴によって、歯髄由来幹細胞自体は当然のこと、歯髄由来幹細胞を含む各種組成物と明確に区別される。この態様の典型例は、歯髄由来幹細胞を含まず、歯髄由来幹細胞の培養上清のみで構成された組成物である。
本発明で用いる歯髄由来幹細胞の培養上清は、乳歯歯髄由来幹細胞および大人歯髄由来幹細胞の両方の培養上清を含んでいてもよい。本発明で用いる歯髄由来幹細胞の培養上清は、乳歯歯髄由来幹細胞の培養上清を有効成分として含むことが好ましく、５０質量％以上含むことがより好ましく、９０質量％以上含むことが好ましい。本発明で用いる歯髄由来幹細胞の培養上清は、乳歯歯髄由来幹細胞の培養上清のみで構成された組成物であることがより特に好ましい。

培養上清を得るための歯髄由来幹細胞の培養液には基本培地、或いは基本培地に血清等を添加したもの等を使用可能である。なお、基本培地としてはダルベッコ改変イーグル培地（ＤＭＥＭ）の他、イスコフ改変ダルベッコ培地（ＩＭＤＭ）（ＧＩＢＣＯ社等）、ハムＦ１２培地（ＨａｍＦ１２）（ＳＩＧＭＡ社、ＧＩＢＣＯ社等）、ＲＰＭＩ１６４０培地等を用いることができる。また、培地に添加可能な成分の例として、血清（ウシ胎仔血清、ヒト血清、羊血清等）、血清代替物（Ｋｎｏｃｋｏｕｔ ｓｅｒｕｍ ｒｅｐｌａｃｅｍｅｎｔ（ＫＳＲ）など）、ウシ血清アルブミン（ＢＳＡ）、抗生物質、各種ビタミン、各種ミネラルを挙げることができる。
但し、血清を含まない「歯髄由来幹細胞の培養上清」を調製するためには、全過程を通して或いは最後または最後から数回の継代培養についは無血清培地を使用するとよい。例えば、血清を含まない培地（無血清培地）で歯髄由来幹細胞を培養することによって、血清を含まない歯髄由来幹細胞の培養上清を調製することができる。１回または複数回の継代培養を行うことにし、最後または最後から数回の継代培養を無血清培地で培養することによっても、血清を含まない歯髄由来幹細胞等の培養上清を得ることができる。一方、回収した培養上清から、透析やカラムによる溶媒置換などを利用して血清を除去することによっても、血清を含まない歯髄由来幹細胞の培養上清を得ることができる。

培養上清を得るための歯髄由来幹細胞の培養には、通常用いられる条件をそのまま適用することができる。歯髄由来幹細胞の培養上清の調製方法については、幹細胞の種類に応じて幹細胞の単離および選抜工程を適宜調整する以外は、後述する細胞培養方法と同様とすればよい。歯髄由来幹細胞の種類に応じた歯髄由来幹細胞の単離および選抜は、当業者であれば適宜行うことができる。
また、歯髄由来幹細胞の培養には、エクソソームなどの微小粒子を多量に生産させるために、特別な条件を適用してもよい。特別な条件として、例えば、低温条件、低酸素条件、微重力条件など、何らかの刺激物と共培養する条件などを挙げることができる。

本発明でエクソソームなどの微小粒子の調製に用いる歯髄由来幹細胞の培養上清は、歯髄由来幹細胞の培養上清の他にその他の成分を含んでいてもよいが、その他の成分を実質的に含まないことが好ましい。
ただし、エクソソームの調製に使用する各種類の添加剤を、歯髄由来幹細胞の培養上清に添加してから保存しておいてもよい。

（微小粒子の調製方法）
歯髄由来幹細胞等の培養上清から、微小粒子を精製して、微小粒子を調製することができる。

微小粒子の精製は、歯髄由来幹細胞の培養上清から微小粒子を含む画分の分離であることが好ましく、微小粒子の単離であることがより好ましい。
微小粒子は、微小粒子の特性に基づいて非会合成分から分離されることにより、単離され得る。例えば、微小粒子は、分子量、サイズ、形態、組成または生物学的活性に基づいて単離され得る。
本発明では、歯髄由来幹細胞の培養上清を遠心処理して得られた、微小粒子を多く含む特定の画分（例えば沈殿物）を分取することにより、微小粒子を精製することができる。所定の画分以外の画分の不要成分（不溶成分）は除去してもよい。本発明の遺伝子の発現制御剤からの、溶媒および分散媒、ならびに不要成分の除去は完全な除去でなくてもよい。遠心処理の条件を例示すると、１００～２００００ｇで、１～３０分間である。
本発明では、歯髄由来幹細胞の培養上清またはその遠心処理物を、ろ過処理することにより、微小粒子を精製することができる。ろ過処理によって不要成分を除去することができる。また、適切な孔径のろ過膜を使用すれば、不要成分の除去と滅菌処理を同時に行うことができる。ろ過処理に使用するろ過膜の材質、孔径などは特に限定されない。公知の方法で、適切な分子量またはサイズカットオフのろ過膜でろ過をすることができる。ろ過膜の孔径はエクソソームを分取しやすい観点から、１０～１０００ｎｍであることが好ましく、３０～５００ｎｍであることがより好ましく、５０～１５０ｎｍであることが特に好ましい。
本発明では、歯髄由来幹細胞の培養上清またはその遠心処理物あるいはそれらのろ過処理物を、ラムクロマトグラフィーなど、さらなる分離手段を用いて分離することができる。例えば様々なカラムを用いた高速液体クロマトグラフィー（ＨＰＬＣ）を使用できる。カラムは、サイズ排除カラムまたは結合カラムを使用できる。
各処理段階におけるそれぞれの画分中で、微小粒子（またはその活性）を追跡するために、微小粒子の１つ以上の特性または生物学的活性を使用できる。例えば、微小粒子を追跡するために、光散乱、屈折率、動的光散乱またはＵＶ－可視光検出器を使用できる。または、それぞれの画分中の活性を追跡するために、特定の酵素活性などを使用できる。
微小粒子の精製方法として、特表２０１９－５２４８２４号公報の［００３４］～［００６４］に記載の方法を用いてもよく、この公報の内容は参照して本明細書に組み込まれる。

本発明の遺伝子の発現制御剤の最終的な形態は、特に制限はない。例えば、本発明の遺伝子の発現制御剤は、微小粒子を溶媒または分散媒とともに容器に充填してなる形態；微小粒子をゲルとともにゲル化して容器に充填してなる形態；微小粒子を凍結および／または乾燥して固形化して製剤化または容器に充填してなる形態などが挙げられる。容器としては、例えば凍結保存に適したチューブ、遠沈管、バッグなどが挙げられる。凍結温度は、例えば－２０℃～－１９６℃とすることができる。

本発明の遺伝子の発現制御剤は、従来の遺伝子の発現制御剤として用いることができる組成物と比較して、大量生産しやすい、従来は産業廃棄物等として廃棄されていた幹細胞の培養液を利活用できる、幹細胞の培養液の廃棄コストを減らせる等の利点がある。特に歯髄由来幹細胞の培養上清が、ヒト歯髄由来幹細胞の培養上清である場合は、本発明の遺伝子の発現制御剤をヒトに対して適用する場合に、免疫学上などの観点での安全性が高く、倫理性の問題も少ないという利点もある。歯髄由来幹細胞の培養上清が、認知症の患者からの歯髄由来幹細胞の培養上清である場合は、本発明の遺伝子の発現制御剤をその患者に対して適用する際により安全性が高まり、倫理性の問題も少なくなるであろう。
本発明の遺伝子の発現制御剤が、歯髄由来幹細胞の培養上清に由来する場合、修復医療の用途にも用いられる。特に歯髄由来幹細胞等の培養上清に由来する微小粒子を含む組成物は、修復医療の用途に好ましく用いられる。ここで、幹細胞移植を前提とした再生医療において、幹細胞は再生の主役ではなく、幹細胞の産生する液性成分が自己の幹細胞とともに臓器を修復させる、ということが知られている。従来の幹細胞移植に伴うがん化、規格化、投与方法、保存性、培養方法などの困難な問題が解決され、歯髄由来幹細胞の培養上清またはそれに由来する微小粒子を用いた組成物により修復医療が可能となる。幹細胞移植と比較すると、本発明の遺伝子の発現制御剤を用いた場合は細胞を移植しないために腫瘍化などが起こりにくく、より安全と言えるだろう。また、本発明の遺伝子の発現制御剤は一定に規格化した品質のものを使用できる利点がある。大量生産や効率的な投与方法を選択することができるので、低コストで利用ができる。

［認知症の改善方法］
本発明の認知症の改善方法は、有効量の本発明の遺伝子の発現制御剤を、認知症を発症した対象に投与することを含む。

本発明の遺伝子の発現制御剤を、認知症を発症した対象に投与する工程は特に制限はない。
投与方法は、口腔、鼻腔または気道への噴霧または吸引、点滴、局所投与、点鼻薬などを挙げることができ、侵襲が少ないことが好ましい。局所投与の方法としては、注射が好ましい。また、皮膚表面に電圧（電気パルス）をかけることにより細胞膜に一時的に微細な穴をあけ、通常のケアでは届かない真皮層まで有効成分を浸透させられるエレクトロポレーションも好ましい。局所投与する場合、静脈内投与、動脈内投与、門脈内投与、皮内投与、皮下投与、筋肉内投与、腹腔内投与などを挙げることができ、動脈内投与、静脈内投与、皮下投与または腹腔内投与であることがより好ましい。
また、種々の製剤化技法を用い、遺伝子の発現制御剤のインビボ分布を変えることができる。インビボ分布を変える多数の方法が当業者に既知である。そのような方法の例には、たとえば、タンパク質、脂質（たとえば、リポソーム）、炭水化物または合成ポリマーのような物質で構成される小胞におけるエクソソームの保護が挙げられる。
認知症を発症した対象に投与された本発明の遺伝子の発現制御剤は対象の体内を循環し、所定の組織に到達してもよい。
投与回数および投与間隔は、特に制限はない。投与回数は１週間当たり１回以上とすることができ、５回以上であることが好ましく、６回以上であることがより好ましく、７回以上であることが特に好ましい。投与間隔は、１時間～１週間であることが好ましく、半日間～１週間であることがより好ましく、１日（毎日１回）であることが特に好ましい。ただし、投与対象の生物種や投与対象の症状に応じて、適宜調整することができる。
本発明の遺伝子の発現制御剤は、遺伝子の発現制御剤を治療有効期間にわたって１週間に１回以上、認知症を発症した対象に投与する用途であることが好ましい。投与対象がヒトである場合は、１週間当たりの投与回数は多い方が好ましく、治療有効期間にわたって１週間に５回以上投与することが好ましく、毎日投与することが好ましい。
２．０×１０^９個／ｍｌの濃度の歯髄由来幹細胞の培養上清を用いる場合、マウスモデルでは、マウス１匹（約２５ｇ）当たり０．１～５ｍｌであることが好ましく、０．３～３ｍｌであることがより好ましく、０．５～１ｍｌであることがより特に好ましい。
０．１×１０^８個／μｇの濃度の微小粒子を用いる場合、マウスモデルでは、マウス１匹（約２５ｇ）当たり１～５０μｇであることが好ましく、３～３０μｇであることがより好ましく、５～２５μｇであることがより特に好ましい。
その他の動物への体重当たりの投与量の好ましい範囲は、モデルマウスへの体重（約２５ｇ）当たりの投与量から比例関係を用いて計算することができる。ただし、投与対象の症状に応じて、適宜調整することができる。

本発明の遺伝子の発現制御剤を投与する対象の動物（生物種）は、特に制限はない。本発明の遺伝子の発現制御剤を投与する対象の動物は、哺乳動物、鳥類（ニワトリ、ウズラ、カモなど）、魚類（サケ、マス、マグロ、カツオなど）であることが好ましい。哺乳動物としては、ヒトであっても、非ヒト哺乳動物であってもよいが、ヒトであることが特に好ましい。非ヒト哺乳動物としては、ウシ、ブタ、ウマ、ヤギ、ヒツジ、サル、イヌ、ネコ、マウス、ラット、モルモット、ハムスターであることがより好ましい。

本発明の遺伝子の発現制御剤は、従来公知の遺伝子の発現制御剤と併用してもよい。また、本発明の遺伝子の発現制御剤は、従来公知のアミロイドβ関連またはタウ・タンパク質関連の認知症や脳炎症の治療薬や予防薬と併用してもよい。

以下に実施例と比較例または参考例とを挙げて本発明の特徴をさらに具体的に説明する。以下の実施例に示す材料、使用量、割合、処理内容、処理手順等は、本発明の趣旨を逸脱しない限り適宜変更することができる。したがって、本発明の範囲は以下に示す具体例により限定的に解釈されるべきものではない。

［実施例１］
＜歯髄由来幹細胞の培養上清の調製＞
ＤＭＥＭ／ＨａｍＦ１２混合培地の代わりにＤＭＥＭ培地を用い、その他は特許第６２９６６２２号の実施例６に記載の方法に準じて、ヒト乳歯歯髄幹細胞の培養上清を調製して、培養上清を分取した。初代培養ではウシ胎仔血清（ＦＢＳ）を添加して培養し、継代培養では初代培養液を用いて培養した継代培養液の上清をＦＢＳが含まれないように分取し、乳歯歯髄幹細胞の培養上清を調製した。なお、ＤＭＥＭはダルベッコ改変イーグル培地であり、Ｆ１２はハムＦ１２培地である。

＜エクソソームの調製＞
得られた歯髄由来幹細胞の培養上清から、歯髄由来幹細胞のエクソソームを以下の超遠心法により、精製および回収した。
乳歯歯髄幹細胞の培養上清（１００ｍＬ）を０．２２マイクロメーターのポアサイズのフィルターで濾過したのち、その溶液を、６０分間、４℃で１０００００×ｇで遠心分離した。上清をデカントし、エクソソーム濃縮ペレットをリン酸緩衝食塩水（ＰＢＳ）中に再懸濁した。再懸濁サンプルを、６０分間１０００００×ｇで遠心分離した。再度ペレットを濃縮サンプルとして遠心チューブの底から回収した（およそ１００μｌ）。タンパク濃度は、マイクロＢＳＡタンパク質アッセイキット（Ｐｉｅｒｃｅ、Ｒｏｃｋｆｏｒｄ、ＩＬ）によって決定した。エクソソームを含む組成物（濃縮溶液）は、－８０℃で保管した。
歯髄由来幹細胞の培養上清から精製したエクソソームを含む組成物を、実施例１の遺伝子の発現制御剤サンプルとした。

実施例１の遺伝子の発現制御剤に含まれる微小粒子の平均粒径、濃度を評価した。
実施例１の遺伝子の発現制御剤に含まれる微小粒子の平均粒径は５０～１５０ｎｍであった。
実施例１の遺伝子の発現制御剤は１．０×１０^９個／ｍｌ以上の高濃度エクソソーム溶液であり、具体的には２．０×１０^９個／ｍｌの高濃度エクソソーム溶液であった。
また、得られた実施例１の遺伝子の発現制御剤の成分を公知の方法で分析した。その結果、実施例１の遺伝子の発現制御剤は、歯髄由来幹細胞の幹細胞を含まず、ＭＣＰ－１を含まず、シグレック９も含まないことがわかった。そのため、間葉系幹細胞の培養上清の有効成分であるＭＣＰ－１およびシグレック９ならびにこれらの類縁体とは異なる有効成分が、実施例１の遺伝子の発現制御剤の有効成分であることがわかった。

［比較例１］
＜脂肪由来幹細胞の培養上清の調製＞
脂肪由来幹細胞を用いた以外は実施例１と同様にして、脂肪由来幹細胞の培養上清を調製した。
脂肪由来幹細胞の培養上清を用いた以外は実施例１と同様にして、脂肪由来幹細胞のエクソソームを精製した。得られた脂肪由来幹細胞のエクソソームを比較例１の遺伝子の発現抑制剤とした。

［比較例２］
＜臍帯由来幹細胞の培養上清の調製＞
臍帯由来幹細胞を用いた以外は実施例１と同様にして、臍帯由来幹細胞の培養上清を調製した。
臍帯由来幹細胞の培養上清を用いた以外は実施例１と同様にして、臍帯由来幹細胞のエクソソームを精製した。得られた臍帯由来幹細胞のエクソソームを比較例２の遺伝子の発現抑制剤とした。

［試験例１］：エクソソームで発現するマイクロＲＮＡ
実施例１の遺伝子の発現抑制剤に含まれるｓｍａｌｌ ＲＮＡを次世代シーケンシング（ＮＧＳ）解析により解析した。ＮＧＳ解析により、実施例１の遺伝子の発現抑制剤（歯髄由来幹細胞のエクソソーム）に含まれるｍｉＲＮＡが１７８７個同定された。得られた結果を下記表２に示す。

［試験例２］：大脳皮質のｍｉＲＮＡとの対比
マイクロＲＮＡの解析にはＩＭＯＴＡ（Ｉｎｔｅｒａｃｔｉｖｅ Ｍｕｌｔｉ－Ｏｍｉｃｓ－Ｔｉｓｓｕｅ Ａｔｌａｓ）を用いた。
タンパクを制御するマイクロＲＮＡをＩＭＯＴＡで大脳皮質（Ｃｅｒｅｂｒａｌ Ｃｏｒｔｅｘ）を中心に検索した。ＩＭＯＴＡは、各組織や細胞におけるｍｉＲＮＡやｍＲＮＡ、タンパク質の相互作用や発現量について調べることができる対話型のマルチオミクスアトラスである（Nucleic Acids Research, Volume 46, Issue D1, 4 January 2018, Pages D770-D775, "IMOTA: an interactive multi-omics tissue atlas for the analysis of human miRNA-target interactions"）。大脳皮質では、Ｏｍｉｃのカウント数は、タンパク質が３０７１個、ｍＲＮＡが１４１８２個、ｍｉＲＮＡが１１２４個であった。また、大脳皮質で発現率（Ｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎ Ｒａｔｅ）がＨｉｇｈのＯｍｉｃのカウント数は、タンパク質が１１１９個、ｍＲＮＡが１１１０個、ｍｉＲＮＡが１４５個であった。

大脳皮質で発現している１１２４個のｍｉＲＮＡと、歯髄由来幹細胞の培養上清から精製したエクソソーム（実施例１の遺伝子の発現制御剤；ＳＧＦ ｅｘｏｓｏｍｅ）で発現しているｍｉＲＮＡ１７８７個の間で、共通に発現しているｍｉＲＮＡは８５９個であった。すなわち、実施例１の遺伝子の発現抑制剤（歯髄由来幹細胞のエクソソーム）で発現しているｍｉＲＮＡのうち、大脳皮質でも発現しているｍｉＲＮＡの割合は４８．１％であり、非常に高かった。

また、実施例１の遺伝子の発現抑制剤（歯髄由来幹細胞のエクソソーム）で発現があり、大脳皮質での発現がＨｉｇｈであるｍｉＲＮＡは、下記表３および表４に記載の１２２個であった。

［試験例３］：疾患に関わるマイクロＲＮＡの探索
得られた解析結果をもとに疾患に関わるマイクロＲＮＡを探索した。疾患に関連するｍｉＲＮＡの抽出を、ＩＭＯＴＡを用いて行った。ここでは、アルツハイマー病に関連するタンパクを抑制するマイクロＲＮＡが含まれているか、または、治療薬のターゲットとなるタンパクを制御しているマイクロＲＮＡが含まれているかを探索した。この試験例３では、アルツハイマー病に関わるタンパク質として、βセクレターゼ（ＢＡＣＥ１）、ＡＰＰを抑制するマイクロＲＮＡを探索した。治療薬のターゲットとなるタンパク質として、ＮＭＤＡの抑制、ＧＳＫ－３βの阻害、またはＰＱＢＰ１の抑制をするマイクロＲＮＡを探索した。
得られた結果を、各ｍｉＲＮＡの発現量を大脳皮質（Ｃｅｒｅｂｒａｌ Ｃｏｒｔｅｘ）と実施例１の遺伝子の発現制御剤（ＳＧＦ）とを対比して図５～図１３－２に示した。

ＡＰＰをｔａｒｇｅｔとする歯髄由来幹細胞の培養上清から精製したエクソソームに発現するｍｉＲＮＡは、下記のＡＰＰ抑制関連ｍｉＲＮＡ群（６３種類）であった。
hsa-miR-101-3p、hsa-miR-106b-5p、hsa-miR-1229-5p、hsa-miR-1238-3p、hsa-miR-1260b、
hsa-miR-1276、hsa-miR-128-3p、hsa-miR-142-3p、hsa-miR-142-5p、hsa-miR-144-3p、
hsa-miR-151a-3p、hsa-miR-153-3p、hsa-miR-15a-5p、hsa-miR-15b-5p、hsa-miR-16-5p、
hsa-miR-17-5p、hsa-miR-185-5p、hsa-miR-186-5p、hsa-miR-194-5p、hsa-miR-195-5p、
hsa-miR-196a-5p、hsa-miR-203a-3p、hsa-miR-20a-5p、hsa-miR-222-3p、hsa-miR-298、
hsa-miR-31-5p、hsa-miR-3120-3p、hsa-miR-3132、hsa-miR-323a-3p、hsa-miR-324-5p、
hsa-miR-328-3p、hsa-miR-3620-3p、hsa-miR-3646、hsa-miR-369-3p、hsa-miR-373-3p、
hsa-miR-374c-5p、hsa-miR-381-3p、hsa-miR-382-5p、hsa-miR-383-5p、hsa-miR-411-3p、
hsa-miR-423-3p、hsa-miR-424-3p、hsa-miR-424-5p、hsa-miR-4484、hsa-miR-455-3p、
hsa-miR-4786-5p、hsa-miR-484、hsa-miR-490-5p、hsa-miR-497-5p、hsa-miR-500a-5p、
hsa-miR-5093、hsa-miR-532-3p、hsa-miR-532-5p、hsa-miR-539-3p、hsa-miR-548f-3p、
hsa-miR-551b-5p、hsa-miR-5584-5p、hsa-miR-567、hsa-miR-5696、hsa-miR-582-5p、
hsa-miR-6073、hsa-miR-873-5p、hsa-miR-93-5p。

βセクレターゼ（ＢＡＳＥ１）をｔａｒｇｅｔとする歯髄由来幹細胞の培養上清から精製したエクソソームに発現するｍｉＲＮＡは、下記ＢＡＣＥ１阻害関連ｍｉＲＮＡ群（４１種類）であった。
hsa-miR-107、hsa-miR-124-3p、hsa-miR-1267、hsa-miR-128-3p、hsa-miR-129-2-3p、
hsa-miR-140-3p、hsa-miR-140-5p、hsa-miR-141-3p、hsa-miR-15a-5p、hsa-miR-16-5p、
hsa-miR-17-5p、hsa-miR-195-5p、hsa-miR-200a-3p、hsa-miR-203a-3p、hsa-miR-212-3p、
hsa-miR-212-5p、hsa-miR-24-3p、hsa-miR-26b-5p、hsa-miR-27a-3p、hsa-miR-298、
hsa-miR-299-3p、hsa-miR-29a-3p、hsa-miR-29b-3p、hsa-miR-29c-3p、hsa-miR-328-3p、
hsa-miR-339-5p、hsa-miR-340-5p、hsa-miR-369-3p、hsa-miR-374a-5p、hsa-miR-374b-5p、
hsa-miR-374c-5p、hsa-miR-382-5p、hsa-miR-421、hsa-miR-424-5p、hsa-miR-455-3p、
hsa-miR-497-5p、hsa-miR-505-3p、hsa-miR-532-5p、hsa-miR-7-5p、hsa-miR-874-3p、
hsa-miR-9-5p。

ＮＭＤＡの活性化に関わるタンパクをｔａｒｇｅｔとする歯髄由来幹細胞の培養上清から精製したエクソソームに発現するｍｉＲＮＡは、下記ＤＬＧ１抑制関連ｍｉＲＮＡ群、下記ＣＡＭＫ２Ｄ抑制関連ｍｉＲＮＡ群、下記ＣＡＭＫ２Ａ抑制関連ｍｉＲＮＡ群、および下記ＣＡＰＮ１抑制関連ｍｉＲＮＡ群であった（合計５１種類）。
ＤＬＧ１抑制関連ｍｉＲＮＡ群：
hsa-miR-1-3p、hsa-miR-142-5p、hsa-miR-204-5p、hsa-miR-206、hsa-miR-21-5p、
hsa-miR-218-5p、hsa-miR-340-5p、hsa-miR-613。
ＣＡＭＫ２Ｄ抑制関連ｍｉＲＮＡ群：
hsa-let-7a-5p、hsa-miR-101-3p、hsa-miR-129-5p、hsa-miR-139-5p、hsa-miR-144-3p、
hsa-miR-145-5p、hsa-miR-185-5p、hsa-miR-203a-3p、hsa-miR-204-5p、hsa-miR-211-5p、
hsa-miR-24-3p、hsa-miR-27a-3p、hsa-miR-30a-3p、hsa-miR-31-5p、hsa-miR-361-5p、
hsa-miR-421、hsa-miR-484、hsa-miR-494-3p、hsa-miR-505-3p、hsa-miR-7-5p。
ＣＡＭＫ２Ａ抑制関連ｍｉＲＮＡ群：
hsa-miR-129-5p、hsa-miR-137、hsa-miR-142-5p、hsa-miR-148a-3p、hsa-miR-149-3p、
hsa-miR-152-3p、hsa-miR-25-3p、hsa-miR-27a-3p、hsa-miR-32-5p、hsa-miR-338-3p、
hsa-miR-340-5p、hsa-miR-363-3p、hsa-miR-3665、hsa-miR-4534、hsa-miR-4665-5p、
hsa-miR-4688、hsa-miR-485-5p、hsa-miR-5010-5p、hsa-miR-505-5p、hsa-miR-5698、
hsa-miR-625-5p、hsa-miR-92a-3p。
ＣＡＰＮ１抑制関連ｍｉＲＮＡ群：
hsa-miR-1-3p、hsa-miR-124-3p、hsa-miR-140-5p、hsa-miR-17-3p、hsa-miR-22-3p、
hsa-miR-34a-5p、hsa-miR-6511b-5p。
（合計５１種類）

ＧＳＫ－３βをｔａｒｇｅｔとする歯髄由来幹細胞の培養上清から精製したエクソソームに発現するｍｉＲＮＡは、下記ＧＳＫ－３β阻害関連ｍｉＲＮＡ群（５４種類）であった。
hsa-let-7a-3p、hsa-let-7b-3p、hsa-let-7f-1-3p、hsa-let-7f-2-3p、hsa-miR-101-3p、
hsa-miR-1185-1-3p、hsa-miR-1185-2-3p、hsa-miR-124-3p、hsa-miR-128-3p、hsa-miR-129-5p、
hsa-miR-132-3p、hsa-miR-137、hsa-miR-140-5p、hsa-miR-142-5p、hsa-miR-144-3p、
hsa-miR-150-5p、hsa-miR-155-5p、hsa-miR-15a-5p、hsa-miR-15b-5p、hsa-miR-16-5p、
hsa-miR-1910-5p、hsa-miR-195-5p、hsa-miR-199a-5p、hsa-miR-212-3p、hsa-miR-218-5p、
hsa-miR-219a-5p、hsa-miR-23a-3p、hsa-miR-24-3p、hsa-miR-26a-5p、hsa-miR-26b-5p、
hsa-miR-27a-3p、hsa-miR-28-5p、hsa-miR-29a-3p、hsa-miR-29b-3p、hsa-miR-346、
hsa-miR-369-3p、hsa-miR-374a-5p、hsa-miR-374b-5p、hsa-miR-374c-5p、hsa-miR-377-3p、
hsa-miR-409-3p、hsa-miR-409-5p、hsa-miR-410-3p、hsa-miR-424-5p、hsa-miR-425-5p、
hsa-miR-4465、hsa-miR-497-5p、hsa-miR-582-5p、hsa-miR-6083、hsa-miR-708-5p、
hsa-miR-9-5p、hsa-miR-92a-3p、hsa-miR-96-5p、hsa-miR-98-3p。

ＰＱＢＰ１をｔａｒｇｅｔとする歯髄由来幹細胞の培養上清から精製したエクソソームに発現するｍｉＲＮＡは、下記ＰＱＢＰ１抑制関連ｍｉＲＮＡ群（２種類）であった。
hsa-miR-6727-3p、hsa-miR-6727-5p。

アルツハイマーの治療に期待される、歯髄由来幹細胞のエクソソームに発現するｍｉＲＮＡは１５３個あり、これらの発現量を比較した結果を図１３のヒートマップに示す。ヒートマップの濃度は、リードカウント値のｌｏｇ ｒａｔｉｏで示したものである。

以上の試験例３では、アルツハイマー病に関わるタンパク質であるβセクレターゼ（ＢＡＣＥ１）またはＡＰＰを抑制するマイクロＲＮＡ、治療薬のターゲットとなるタンパク質であるＮＭＤＡの抑制、ＧＳＫ－３βの阻害またはＰＱＢＰ１の抑制をするマイクロＲＮＡがそれぞれ発見された。
特に図１３および図１３－２より、大脳皮質で発現が確認され、かつ実施例１の遺伝子の発現抑制剤でも確認された８５９個のｍｉＲＮＡの中で、アミロイドβまたはタウ・タンパク質関連の遺伝子（アルツハイマー病の原因遺伝子など）をｔａｒｇｅｔとして抑制する効果があるｍｉＲＮＡが１５３個も含まれることがわかった。

［試験例４］：遺伝子の発現制御
大脳皮質ニューロン細胞（アルツハイマー病患者由来の神経細胞）に対して、実施例１で得られた歯髄由来幹細胞のエクソソーム、または比較例１の脂肪由来幹細胞のエクソソームを添加した。添加量は、大脳皮質ニューロン細胞あたり、１，０００エクソソームとした。７２時間後、大脳皮質ニューロン細胞を回収し、ｍＲＮＡを精製した。精製したｍＲＮＡについて、ｑＰＣＲによって、アルツハイマー型認知症に関係する（発現上昇する）、発現解析の対象遺伝子の発現を定量した。
一方、エクソソームを未添加の大脳皮質ニューロン細胞をコントロール（参考例１）とし、回収した大脳皮質ニューロン細胞のｍＲＮＡを精製し、実施例１および比較例１と同様の方法で発現解析の対象遺伝子の発現を定量した。
実施例１（歯髄由来幹細胞のエクソソームにより処理した細胞）および比較例１（脂肪由来幹細胞のエクソソームにより処理した細胞）の発現解析の対象遺伝子の発現量を、参考例１（コントロール；未処理の細胞）の発現解析の対象遺伝子の発現量を１．０とした場合の相対値として計算した。発現解析の対象遺伝子は、アミロイド前駆体タンパク質（ＡＰＰ）遺伝子、β－セクレターゼ（ＢＡＣＥ１）遺伝子、ＮＭＤＡ活性化タンパク質（ＣＡＭＫ２Ｄ）遺伝子、グリコーゲン合成酵素キナーゼ－３β（ＧＳＫ－３β）遺伝子、ポリグルタミン結合タンパク質－１（ＰＱＢＰ１）遺伝子の５種類とした。それぞれの発現解析の対象遺伝子の発現量について、得られた結果を図１４～１８に示した。

図１４～１８に示した遺伝子の発現解析の結果より、本発明の遺伝子の発現制御剤（実施例１）は、アルツハイマー型認知症に関係する（コントロールで発現上昇する）、５種類の発現解析の対象遺伝子（ＡＰＰ、ＢＡＣＥ１、ＮＭＤＡ活性化タンパク質であるＣＡＭＫ２Ｄ、ＧＳＫ－３β、ＰＱＢＰ１の発現に関する遺伝子）の発現を制御できることがわかった。特に、実施例１の遺伝子の発現制御剤によれば、アルツハイマー型認知症に関係する５種類の発現解析の対象遺伝子の発現を、比較例１の遺伝子の発現制御剤と比較して、より顕著に抑制できることがわかった。

［試験例５］：ｍｉＲＮＡの種類と発現量
実施例１の遺伝子の発現抑制剤（歯髄由来幹細胞のエクソソーム）と、比較例１の遺伝子の発現抑制剤（脂肪組織幹細胞由来のエクソソーム；ＡＤＳＣ）と、比較例２の遺伝子の発現抑制剤（臍帯幹細胞由来のエクソソーム；Ｐｌａｃｅｎｔａ－ＭＳＣ）のｍｉＲＮＡ解析を、試験例４と同様にｑＰＣＲを用いて行った。得られた解析結果のうち、アルツハイマー病の対象遺伝子群である下記のｍｉＲＮＡの発現量を比較した。
hsa-miR-16-5p（ＡＰＰ抑制関連ｍｉＲＮＡ、ＢＡＣＥ１阻害関連ｍｉＲＮＡ、ＧＳＫ－３β阻害関連ｍｉＲＮＡ）、
hsa-miR-21-5p（ＤＬＧ１抑制関連ｍｉＲＮＡ）、
hsa-let7-a-5p（ＣＡＭＫ２Ｄ抑制関連ｍｉＲＮＡ）
hsa-miR-92a-3p（ＣＡＭＫ２Ａ抑制関連ｍｉＲＮＡ）、
hsa-miR-22-3p（ＣＡＰＮ１抑制関連ｍｉＲＮＡ）。
その結果を、図１９に示した。図１９では、実施例１の遺伝子の発現抑制剤（歯髄由来幹細胞のエクソソーム）におけるｍｉＲＮＡの発現量を１００とした場合の相対値で表した。

図１９より、実施例１の遺伝子の発現抑制剤（歯髄由来幹細胞のエクソソーム）における、アルツハイマー病に関連して発現が上昇する遺伝子群を抑制するｍｉＲＮＡ（治療効果があると予測されるマイクロＲＮＡ）の発現量は、他の間葉系幹細胞由来のエクソソーム（比較例１の脂肪幹細胞由来のエクソソーム、比較例２の臍帯幹細胞由来のエクソソーム）と比較して、顕著に多量であることがわかった。

Claims (3)

1. ＮＭＤＡ活性化タンパク質の発現に関する遺伝子を標的遺伝子とするｍｉＲＮＡを含む微小粒子を含有するＮＭＤＡ活性化遺伝子の発現抑制剤であり、
   前記ＮＭＤＡ活性化タンパク質がＤＬＧ１、ＣＡＭＫ２ＡおよびＣＡＰＮ１のうち少なくとも１種類のタンパク質であり、
   前記微小粒子がＤＬＧ１抑制関連ｍｉＲＮＡ群のうちhsa-miR-21-5p、ＣＡＭＫ２Ａ抑制関連ｍｉＲＮＡ群のうちhsa-miR-92a-3p、ＣＡＰＮ１抑制関連ｍｉＲＮＡ群のうちhsa-miR-22-3pをいずれも含み、
   前記微小粒子が歯髄由来幹細胞の培養上清から精製されて単離された微小粒子であり、
   前記遺伝子の発現制御剤が、前記歯髄由来幹細胞の培養上清からエクソソームを除いた成分を含まない、遺伝子の発現制御剤。
2. 前記微小粒子がエクソソームである、請求項１に記載の遺伝子の発現制御剤。
3. 前記微小粒子が、歯髄由来幹細胞の培養上清よりも高い濃度で、前記ＮＭＤＡ活性化タンパク質のうち少なくとも１種類のタンパク質の発現に関する遺伝子を標的遺伝子とするｍｉＲＮＡを含む、請求項１または２に記載の遺伝子の発現制御剤。