JP7441851B2 - シリアルシンクロトロン結晶解析保持システム - Google Patents
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Description
本出願は、米国仮特許出願第62/814,510号の優先権及び利益を主張し、該出願は「シリアルシンクロトロン結晶学のためのツール」とタイトル付けされ、また2019年3月6日に出願されており、その全体は参照により本明細書に組み込まれる。
本発明は、バイオテクノロジーの分野に関する。より詳細には、本発明は、X線を用いる研究、特にシリアルシンクロトロン結晶解析学(結晶解析)において使用される研究のための結晶サンプルを配送する際に使用されるシステムの設計に関する。
生体分子の結晶解析は、分子生物学及びバイオテクノロジーにおける主要なツールである。分子生物学における進行中の革命は、生体分子及びそれらの錯体、錯イオンの原子分解能での構造を得る我々の能力によって支えられている。これらの構造は、機能に関する詳細な洞察と、米国経済に数十億ドルを貢献する幅広い製品設計の出発点とを提供する。
微結晶は、ナイロンループ又は微細加工された結晶解析マウント上へ分注される又はこれらを用いて採集されることができる。ループは、その開口内に微結晶を浮かせるために液体を必要とし、大きなバックグラウンド散乱を発生させる。MiTeGen社のMicroMeshes(多くの人々が初めてのシリアル微結晶解析実験である考えているもののために2006年にSwiss Light Sourceにおいて使用されたもの)は、溶液から結晶を区分けし(メッシュに掛けて取り出し)、また余分な液体は、メッシュの背面を拭き取る(吸い取る、拭い取る)ことによって除去される。メッシュのような平坦なマウントの場合、板状及び棒状の結晶が好ましい配向に横たわることができ、そのため、大きな振れ幅の又は螺旋の走査(ラスタ走査と組み合わせた連続回転)が、逆空間(逆格子空間)を完全にカバーのために必要である。
結晶は、ガスケットによって分離された2つの光学的透過及びX線透過のポリマー膜の間において成長される(又はサンドイッチ状に挟まれる)ことができる。欠点には、結晶化溶液/ゲル(ほとんどの結晶よりはるかに厚い)及び該膜(SiNウエハと置き換えることができる)からの大きなバックグラウンド、優先的な結晶配向、並びに非力な低温冷却性能がある。しかしながら、成長後の結晶操作は除かれて、成長時の主要な利点は、例えば高粘性LCPを包含する。
多くのXFEL実験は、SiN又はカーボン/PMMAで被覆されたSiウエハを使用してきており、ここでSiは、薄い窓のアレイを形成するために、エッチングで取り除かれる。結晶は、ウエハ上に「塗られ」ている。
結晶は、基板内のスルーホールのアレイに収容されることができる。これらは、硬質高分子シートにレーザドリルで穴開けされた孔であることができ、結晶は、それらの中にその場(in situ)検査のために成長されることができる。結晶化溶液からのバックグラウンドは著しく、高分子シートからの強い散乱は振動角度及び孔壁に隣接する結晶の探針を制約し、低温冷却(クライオクーリング)は、大きな熱質量によって妥協させられる。
例は、X線検査のための特定の位置に微結晶を仕分けまた捕捉するマイクロ流体トラップアレイと、動的光散乱及びX線測定を可能にするマイクロ流体結晶化アレイとを包含する。
音響ドロップディスペンサは、結晶をマイクロメッシュ(MicroMeshes)上に、薄いX線透過性の「コンベヤベルト」上に投射するために、また結晶化トレイから結晶をX線ビーム中に直接放出するために使用されてきた。基板上へ直接に音響分注することは、例えば、フラグメントスクリーニングに関して有望であり、この場合、微結晶は、ある溶液から取り出されることができ、またそれら基板上に順次に排出されたフラグメント溶液のアレイから落ちる。
液体状又は高粘度の媒質(例えば、LCP)に含まれる結晶は、X線ビームを通して流れる狭い「流れ」に形作られる。注入はXFELsでポピュラーであり、なぜなら、単一のX線パルスが結晶を破壊し、大きな結晶流速は~120HzのX線パルスレートの効率的な使用を可能にするからである。キャピラリー及びLCPゲル注入器を通って流れる結晶スラリー、これらは共に、XFEL実験よりもはるかに小さい流量の状態であって、該結晶スラリーは、シンクロトロンにおいて成功裏に使用されてきた。不便なことは、ノズル詰まりを最小限に抑えるために必要な結晶サイズに対する流れの直径の大きな比率に起因して大きなバックグラウンド散乱、ゲル中に結晶を濃縮してまた埋め込むために必要な操作(その内部で結晶が成長させない場合)、キャリア媒体の浸透性の環境を成長したままの結晶に整合させるという困難、及び室温のみのデータ収集、であることを包含する。
Claims (21)
- シリアルシンクロトロン結晶解析のための、固定された標的のサンプルホルダーであって、
ゴニオメーターに適合するように形作られると共に大きさが形成された磁性金属の基部と、
前記基部に取り付けられると共に前記基部の軸上に中心のある剛性の平坦なキャリアシートであって、前記キャリアシートは少なくとも1つのアパーチャを形成する、キャリアシートと、
少なくとも2つの厚さの領域のパターンを含むX線透過ポリマーのサンプル支持フィルムであって、該サンプル支持フィルムが前記キャリアシートの少なくとも1つの前記アパーチャに対して封止されると共に該アパーチャに架かる、サンプル支持フィルムと、
前記サンプル支持フィルムの上において座標系を規定するための前記サンプル支持フィルムの厚領域の上の基準マークのセットと、
サンプルを検査するための透明な窓として作用する、前記サンプル支持フィルムの薄領域のセットと、
を備え、
前記サンプル支持フィルムの前記薄領域の各々は、液体内に一又は複数の結晶体を含むサンプルを受け入れるように構成される、
サンプルホルダー。 - 前記キャリアシートは、8ミリメートル未満の幅を有する、
請求項1に記載のサンプルホルダー。 - 前記キャリアシートは、25マイクロメートルと500マイクロメートルとの間の厚さを有する、
請求項1に記載のサンプルホルダー。 - 前記キャリアシートは、前記アパーチャの下の領域において50~500マイクロメートルの厚さと、前記アパーチャの領域において25~200マイクロメートルの厚さとを有する、
請求項1に記載のサンプルホルダー。 - 前記キャリアシートは、拡散X線散乱を生成すると共にシャープな回折ピークを生成しない、配向無しのポリマーを含む剛性の材料で形成される、
請求項1に記載のサンプルホルダー。 - 前記サンプル支持フィルムが、前記キャリアシートの幅に等しい又は前記キャリアシートの幅未満の幅を有する、
請求項1に記載のサンプルホルダー。 - 前記サンプル支持フィルムが、1ミリメートルと15ミリメートルとの間の長さを有する、
請求項1に記載のサンプルホルダー。 - 前記サンプル支持フィルムが、10マイクロメートルから25マイクロメートルの最大厚さを有する、
請求項1に記載のサンプルホルダー。 - 前記サンプル支持フィルムが、0.5マイクロメートルと3マイクロメートルとの間の厚さの窓を有する、
請求項1に記載のサンプルホルダー。 - 前記サンプル支持フィルムの前記薄領域は、各々、1マイクロメートルと20マイクロメートルとの間の直径の少なくとも1つのスルーホールを形成し、該スルーホールを介して前記サンプル支持フィルムの上面の上に存在する液体が引き抜かれることができる、
請求項1に記載のサンプルホルダー。 - 前記サンプル支持フィルムの前記薄領域は、更に、表面テクスチャを含む、
請求項1に記載のサンプルホルダー。 - 前記表面テクスチャは、ポスト又は突起のアレイを含む、
請求項11に記載のサンプルホルダー。 - 前記サンプル支持フィルムの上の1又は複数の円形窓を更に備え、前記円形窓の各々は、1又は複数の厚い同心のリングによって囲まれており、該リングは、前記円形窓の各々の上に堆積されたサンプルが前記円形窓の隣の円形窓に広がることを液体接触線をピン止めすることによって防止するように作用する、
請求項1に記載のサンプルホルダー。 - 前記サンプル支持フィルムの上の1又は複数の円形窓を更に備え、前記円形窓の各々は、1又は複数の同心のうねのある環状アパーチャによって囲まれており、該環状アパーチャは、前記円形窓の各々の上に堆積されたサンプルが前記円形窓の隣の円形窓に広がることを防止するように作用する、
請求項1に記載のサンプルホルダー。 - 前記サンプル支持フィルムは、接着材、接着性ガスケット、超音波ボンディング、又は前記キャリアシートに対して前記サンプル支持フィルムを押圧する別フレームを用いて前記キャリアシートに取り付けられる、
請求項1に記載のサンプルホルダー。 - 前記基部に取り外し可能に取り付けられるように大きさが形成された蒸気封止チューブを更に含んで、前記蒸気封止チューブが前記基部に取り付けられるときに、前記蒸気封止チューブは、前記キャリアシートを囲む、
請求項1に記載のサンプルホルダー。 - 前記蒸気封止チューブは、水和溶液を含む吸収性プラグを含む、
請求項16に記載のサンプルホルダー。 - 前記キャリアシートの上面及び前記サンプル支持フィルムの下面に対して封止できる接着性ガスケットを持つX線透過の薄い2つの封止フィルムを更に含む、
請求項1に記載のサンプルホルダー。 - 前記サンプル支持フィルムに対して封止するX線透過の薄い封止フィルムを更に備える、
請求項1に記載のサンプルホルダー。 - シリアルシンクロトロン結晶解析のための、固定された標的のサンプルホルダーであって、
ゴニオメーターに適合するように形作られると共に大きさが形成された磁性金属の基部と、
前記基部に取り付けられると共に前記基部の軸上に中心のある剛性の平坦なキャリアシートであって、前記キャリアシートは少なくとも1つのアパーチャを形成する、キャリアシートと、
少なくとも2つの厚さの領域のパターンを含むX線透過ポリマーのサンプル支持フィルムであって、該サンプル支持フィルムが前記キャリアシートの少なくとも1つの前記アパーチャに対して封止されると共に該アパーチャに架かる、サンプル支持フィルムと、
前記サンプル支持フィルムの上において座標系を規定するための前記サンプル支持フィルムの厚領域の上の基準マークのセットと、
サンプルを検査するための透明な窓として作用する、前記サンプル支持フィルムの薄領域のセットであって、前記サンプル支持フィルムの前記薄領域の各々は、液体内に一又は複数の結晶体を含むサンプルを受け入れるように構成される、薄領域のセットと、
を備え、
前記サンプル支持フィルムの前記薄領域は、表面テクスチャを含む、
サンプルホルダー。 - シリアルシンクロトロン結晶解析のための、固定された標的のサンプルホルダーであって、
ゴニオメーターに適合するように形作られると共に大きさが形成された磁性金属の基部と、
前記基部に取り付けられると共に前記基部の軸上に中心のある剛性の平坦なキャリアシートであって、前記キャリアシートは少なくとも1つのアパーチャを形成する、キャリアシートと、
少なくとも2つの厚さの領域のパターンを含むX線透過ポリマーのサンプル支持フィルムであって、該サンプル支持フィルムが前記キャリアシートの少なくとも1つの前記アパーチャに対して封止されると共に該アパーチャに架かる、サンプル支持フィルムと、
前記サンプル支持フィルムの上において座標系を規定するための前記サンプル支持フィルムの厚領域の上の基準マークのセットと、
サンプルを検査するための透明な窓として作用する、前記サンプル支持フィルムの薄領域のセットであって、前記サンプル支持フィルムの前記薄領域の各々は、液体内に一又は複数の結晶体を含むサンプルを受け入れるように構成される、薄領域のセットと、
蒸気封止チューブであって、前記蒸気封止チューブが前記基部に取り付けられるときに前記蒸気封止チューブが前記キャリアシートを囲むように前記基部に取り外し可能に取り付けられ、前記蒸気封止チューブは、水和溶液を含む吸収性プラグを有する、蒸気封止チューブと、
を備える、
サンプルホルダー。
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