JP7397808B2 - 骨髄系新生物および固形腫瘍の処置のためのｓｅｔｂｐ１インヒビター - Google Patents

Description

政府の支援を受けた研究または開発に関する陳述
本発明は、Ｕｎｉｆｏｒｍｅｄ Ｓｅｒｖｉｃｅｓ Ｕｎｉｖｅｒｓｉｔｙ ｏｆ ｔｈｅ Ｈｅａｌｔｈ Ｓｃｉｅｎｃｅｓ（ＵＳＵＨＳ）によって授与されたＱＰ８６ＧＩおよびＰＥＤ－８６－９３０１、ならびにＷａｌｔｅｒ Ｒｅｅｄ Ｎａｔｉｏｎａｌ Ｍｉｌｉｔａｒｙ Ｍｅｄｉｃａｌ Ｃｅｎｔｅｒ（ＷＲＮＭＭＣ）によって授与された６４３４９の下で、政府支援を受けて行われた。政府は、本発明において一定の権利を有する。

配列表への言及
コンピューター可読テキストファイル（ファイル名「０４４５０８－５０８８－ＰＲ－ＳｅｑｕｅｎｃｅＬｉｓｔｉｎｇ．ｔｘｔ」、作成日２０１８年５月２４日、ファイルサイズ約３ｋｂ）は、本出願の配列表を含み、その全体において参考として援用される。

背景
ＳＥＴ結合タンパク質１（ＳＥＴＢＰ１）は、１５００超のアミノ酸の大きなＡＴ－フック転写因子をコードし、がんタンパク質（ｏｎｃｏｐｒｏｔｅｉｎ）ＳＥＴの相互作用因子を同定するためのスクリーニングにおいて最初にクローニングされたが、心臓、脳、腎臓、肝臓、肺、膵臓、脾臓、および骨格筋を含む広く種々の組織において発現される（Ｍｉｎａｋｕｃｈｉ ｅｔ ａｌ．， Ｅｕｒ． Ｊ． Ｂｉｏｃｈｅｍ． ２６８（５）：１３４０－１３５１ （２００１））。過剰発現またはミスセンス変異を経てのその異常な活性化は、近年、原発性急性骨髄性白血病（ＡＭＬ）（Ｃｒｉｓｔｏｂａｌ ｅｔ ａｌ．， Ｂｌｏｏｄ １１５（３）：６１５－６２５ （２０１０））、慢性骨髄性白血病急性転化（ＣＭＬ－ＢＣ）（Ｏａｋｌｅｙ ｅｔ ａｌ．， Ｂｌｏｏｄ １１９（２５）：６０９９－６１０８ （２０１２））、非定型慢性骨髄性白血病（ａＣＭＬ）（Ｐｉａｚｚａ ｅｔ ａｌ．， Ｎａｔ． Ｇｅｎｅｔ． ４５（１）：１８－２４ （２０１３））、慢性骨髄単球性白血病（ＣＭＭＬ）、二次性ＡＭＬ（ｓＡＭＬ）（Ｍａｋａｓｈｉｍａ ｅｔ ａｌ．， Ｎａｔ． Ｇｅｎｅｔ． ４５（８）：９４２－９４６ （２０１３））、若年性骨髄単球性白血病（ＪＭＭＬ）（Ｓａｋａｇｕｃｈｉ ｅｔ ａｌ．， Ｎａｔ． Ｇｅｎｅｔ． ４５（８）：９３７－９４１ （２０１３））、および骨髄異形成症候群（ＭＤＳ）（Ｄａｍｍ ｅｔ ａｌ．， Ｌｅｕｋｅｍｉａ ２７（６）：１４０１－１４０３ （２０１３）； Ｆｅｒｎａｎｄｅｚ－Ｍｅｒｃａｄｏ ｅｔ ａｌ．， Ｂｒ． Ｊ． Ｈａｅｍａｔｏｌ． １６３（２）：２３５－２３９ （２０１３））；およびＨｏｕ ｅｔ ａｌ．， Ａｍ． Ｊ． Ｈｅｍａｔｏｌ． ８９（２）：１８１－１８６ （２０１４））を含む種々のヒト骨髄系新生物において頻繁に起こることが見出されている。

ＳＥＴＢＰ１活性化はおそらく、野生型Ｓｅｔｂｐ１またはそのミスセンス変異体のいずれかの過剰発現が、マウスにおいてＡＭＬ発生を誘導することが示されているという所見に基づいてこれらの疾患の発生を駆動することにおいて重要な役割を果たす。ＳＥＴＢＰ１活性化はまた、これらの悪性腫瘍のうちの多くで予後不良と関連しており、これは、罹患した患者にとって有効な標的化療法を開発する必要が差し迫っていることを示唆する（Ｃｒｉｓｔｏｂａｌ ｅｔ ａｌ．， Ｂｌｏｏｄ １１５（３）：６１５－６２５ （２０１０）； Ｐｉａｚｚａ ｅｔ ａｌ．， Ｎａｔ． Ｇｅｎｅｔ． ４５（１）：１８－２４ （２０１３）；およびＭａｋａｓｈｉｍａ ｅｔ ａｌ．， Ｎａｔ． Ｇｅｎｅｔ． ４５（８）：９４２－９４６ （２０１３））。ＳＥＴＢＰ１誘導性転写活性化の標的化は、有望な治療ストレテジーを表し得る。なぜならＳｅｔｂｐ１およびそのミスセンス変異体によるＨｏｘａ９、Ｈｏｘａ１０およびＭｙｂの転写活性化は、これらが正常なマウス骨髄系前駆細胞の不死化を誘導するために必須であることが示されているからである（Ｏａｋｌｅｙ ｅｔ ａｌ．， Ｂｌｏｏｄ １１９（２５）：６０９９－６１０８ （２０１２）； Ｎｇｕｙｅｎ ｅｔ ａｌ．， Ｏｎｃｏｔａｒｇｅｔ ７（５２）：８６３００－８６３１２ （２０１６））。Ｓｅｔｂｐ１指向性転写調節の分子機構のより完全な理解は、ＳＥＴＢＰ１活性化を伴う骨髄系新生物の有効な標的化治療の発見を容易にするはずである。
核外移出におけるその旧来の役割（Ｆｕｋｕｄａ ｅｔ ａｌ．， Ｎａｔｕｒｅ ３９０（６６５７）：３０８－３１１ （１９９７）； Ｏｓｓａｒｅｈ－Ｎａｚａｒｉ ｅｔ ａｌ．， Ｓｃｉｅｎｃｅ ２７８（５３３５）：１４１－１４４ （１９９７）； Ｈｕｔｔｅｎ ｅｔ ａｌ．， Ｔｒｅｎｄｓ Ｃｅｌｌ． Ｂｉｏｌ． １７（４）：１９３－２０１ （２００７）；およびＴｕｒｎｅｒ ｅｔ ａｌ．， Ｃｕｒｒ． Ｍｅｄ． Ｃｈｅｍ． １５（２６）：２６４８－２６５５ （２００８））とは対照的に、Ｘｐｏ１（ＣＲＭ１としても公知）が、Ｈｏｘａ９、Ｈｏｘａ１０、およびＭｙｂを含む重要な標的の転写を活性化するにあたって、Ｓｅｔｂｐ１およびＳｅｔｂｐ１のミスセンス変異体の本質的な補因子であり得ることは、本出願の発明者らによって観察された。Ｓｅｔｂｐ１／Ｓｅｔｂｐ１ミスセンス変異体とＸｐｏ１との間の相互作用を担うモチーフも同定された。このモチーフは、ＳＥＴＢＰ１活性化を有する新生物を処置するための治療標的を表す。さらに、このモチーフを含むＳｅｔｂｐ１ペプチドフラグメント（本明細書で「ポリペプチド２５－２０」といわれる）と相互作用し得る低分子に関する化合物スクリーニングを行うことによって、Ｓｅｔｂｐ１またはそのミスセンス変異体によって不死化された骨髄系前駆細胞の増殖を阻害し、これら細胞においてＳｅｔｂｐ１標的遺伝子転写をも低減し得る化合物が、同定された。ＳＥＴＢＰ１活性化を有する骨髄系新生物および他のがん（例えば、固形腫瘍のがん）を処置するためのこれら化合物の同定および治療上の使用が、本明細書で記載される。

Ｍｉｎａｋｕｃｈｉ ｅｔ ａｌ．， Ｅｕｒ． Ｊ． Ｂｉｏｃｈｅｍ． ２６８（５）：１３４０－１３５１ （２００１） Ｃｒｉｓｔｏｂａｌ ｅｔ ａｌ．， Ｂｌｏｏｄ １１５（３）：６１５－６２５ （２０１０） Ｏａｋｌｅｙ ｅｔ ａｌ．， Ｂｌｏｏｄ １１９（２５）：６０９９－６１０８ （２０１２） Ｐｉａｚｚａ ｅｔ ａｌ．， Ｎａｔ． Ｇｅｎｅｔ． ４５（１）：１８－２４ （２０１３） Ｍａｋａｓｈｉｍａ ｅｔ ａｌ．， Ｎａｔ． Ｇｅｎｅｔ． ４５（８）：９４２－９４６ （２０１３） Ｓａｋａｇｕｃｈｉ ｅｔ ａｌ．， Ｎａｔ． Ｇｅｎｅｔ． ４５（８）：９３７－９４１ （２０１３） Ｄａｍｍ ｅｔ ａｌ．， Ｌｅｕｋｅｍｉａ ２７（６）：１４０１－１４０３ （２０１３） Ｆｅｒｎａｎｄｅｚ－Ｍｅｒｃａｄｏ ｅｔ ａｌ．， Ｂｒ． Ｊ． Ｈａｅｍａｔｏｌ． １６３（２）：２３５－２３９ （２０１３） Ｈｏｕ ｅｔ ａｌ．， Ａｍ． Ｊ． Ｈｅｍａｔｏｌ． ８９（２）：１８１－１８６ （２０１４））

発明の要旨
本発明の一局面は、被験体において骨髄系新生物または固形腫瘍を処置するための方法であって、上記方法は、必要性のある被験体に、治療有効量の式（１）の化合物：
またはその薬学的に受容可能な塩を投与する工程を含み、ここで
Ｒ_１は、－ＯＲ_８、－ＳＲ_８または－ＮＲ_８Ｒ_８であり；
Ｒ_２、Ｒ_３、Ｒ_４、Ｒ_５およびＲ_６は、独立して、ＨまたはＣ_１－４アルキルであり；
Ｒ_７は、－ＮＲ_１０Ｒ_１０またはヘテロシクリル基であり；
Ｌは、－（ＣＲ_９Ｒ_９）_ｎ－であり；
Ｘ^－は、有機アニオンまたは無機アニオンであり；
各Ｒ_８は、独立して、ＨまたはＣ_１－３アルキルであり；
各Ｒ_９は、独立して、ＨまたはＣ_１－３アルキルであり；
各Ｒ_１０は、独立して、ＨまたはＣ_１－３アルキルであり；そして
ｎは、１、２、３または４である、
方法である。

例示的実施形態において、上記被験体は、ヒトである。

例示的実施形態において、上記方法は、骨髄系新生物を処置するためのものである一方で、別の実施形態においては、上記方法は、固形腫瘍を処置するためのものである。

式（１）の例示的実施形態において、Ｒ_１は、－ＯＲ_８である。

式（１）の例示的実施形態において、Ｒ_１は、－ＯＲ_８であり、Ｒ_３は、Ｈである。

式（１）の例示的実施形態において、Ｒ_１は、－ＯＲ_８であり、Ｒ_３は、Ｈであり、Ｒ_８は、Ｈであり、各Ｒ_９は、Ｈである。

式（１）の例示的実施形態において、ｎは２である。

式（１）の例示的実施形態において、Ｒ_１は、－ＯＲ_８であり、少なくとも１個のＲ_９は、Ｈである。

式（１）の例示的実施形態において、Ｒ_１は、－ＮＲ_８Ｒ_８であり、Ｒ_３は、Ｈであり、各Ｒ_８は、Ｈであり、各Ｒ_９は、Ｈである。

式（１）の例示的実施形態において、Ｒ_４およびＲ_５のうちの少なくとも一方は、－ＣＨ_３である。

式（１）の例示的実施形態において、Ｒ_４およびＲ_５の各々は、－ＣＨ_３である。

式（１）の例示的実施形態において、Ｒ_１は、－ＯＲ_８であり、Ｒ_２は、Ｈであり、Ｒ_３は、Ｈであり、Ｒ_４およびＲ_５の各々は、－ＣＨ_３である。

式（１）の例示的実施形態において、Ｒ_７は、ヘテロシクリル基であり、ここで上記ヘテロシクリル基は、１個または２個の窒素原子を含む５員または６員の環である。

式（１）の例示的実施形態において、Ｒ_７は、ヘテロシクリル基であり、Ｒ_２は、Ｈであり、Ｒ_１は、－ＯＲ_８である。

式（１）の例示的実施形態において、Ｒ_７は、ヘテロシクリル基であり、Ｒ_２は、Ｈであり、Ｒ_１は、－ＯＲ_８であり、Ｒ_３は、Ｈである。

式（１）の例示的実施形態において、Ｒ_７は、ヘテロシクリル基であり、ここで上記ヘテロシクリル基は、ピペリジニル基であり、Ｒ_１は、－ＯＲ_８であり、Ｒ_２は、Ｈであり、Ｒ_３は、Ｈであり、Ｒ_８は、Ｈであり、各Ｒ_９は、Ｈである。

式（１）の例示的実施形態において、Ｒ_７は、ヘテロシクリル基であり、ここで上記ヘテロシクリル基は、ピペリジニル基であり、Ｒ_２は、Ｈであり、少なくとも１個のＲ_９は、Ｈである。

式（１）の例示的実施形態において、Ｒ_７は、ヘテロシクリル基であり、ここで上記ヘテロシクリル基は、ピペリジニル基であり、Ｒ_２は、Ｈであり、各Ｒ_９は、Ｈである。

式（１）の例示的実施形態において、Ｒ_７は、ヘテロシクリル基であり、ここで上記ヘテロシクリル基は、ピペリジニル基であり、Ｒ_２は、Ｈであり、Ｒ_４およびＲ_５のうちの少なくとも一方は、－ＣＨ_３である。

式（１）の例示的実施形態において、Ｒ_７は、ヘテロシクリル基であり、ここで上記ヘテロシクリル基は、ピペリジニル基であり、Ｒ_２は、Ｈであり、Ｒ_４およびＲ_５の各々は、－ＣＨ_３である。

式（１）の例示的実施形態において、Ｒ_７は、ヘテロシクリル基であり、ここで上記ヘテロシクリル基は、ピペリジニル基であり、Ｒ_１は、－ＯＲ_８であり、Ｒ_２は、Ｈであり、Ｒ_３は、Ｈであり、Ｒ_４およびＲ_５の各々は、－ＣＨ_３である。

式（１）の例示的実施形態において、Ｘは、Ｆ、Ｃｌ、ＢｒまたはＩである。

式（１）の例示的実施形態において、Ｒ_７は、ヘテロシクリル基であり、ここで上記ヘテロシクリル基は、ピペリジニル基であり、Ｒ_１は、－ＯＲ_８であり、Ｒ_２は、Ｈであり、Ｒ_３は、Ｈであり、Ｒ_４およびＲ_５の各々は、－ＣＨ_３であり、Ｘは、Ｆ、Ｃｌ、ＢｒまたはＩである。

式（１）の例示的実施形態において、Ｒ_７は、－ＮＲ_１０Ｒ_１０である。

式（１）の例示的実施形態において、Ｒ_７は、－ＮＲ_１０Ｒ_１０であり、各Ｒ_１０は、独立して、Ｃ_１－３アルキルである。

式（１）の例示的実施形態において、Ｒ_７は、－ＮＲ_１０Ｒ_１０であり、一方のＲ_１０は、Ｃ_１－３アルキルであり、一方のＲ_１０は、－Ｈである。

式（１）の例示的実施形態において、Ｒ_２は、Ｈであり、Ｒ_７は、－ＮＲ_１０Ｒ_１０であり、各Ｒ_１０は、－ＣＨ_２ＣＨ_３である。

式（１）の例示的実施形態において、Ｒ_２は、Ｈであり、Ｒ_７は、－ＮＲ_１０Ｒ_１０であり、各Ｒ_１０は、Ｈである。

式（１）の例示的実施形態において、Ｒ_２は、Ｈであり、Ｒ_７は、－ＮＲ_１０Ｒ_１０であり、Ｒ_１は、－ＯＲ_８であり、Ｒ_３は、Ｈである。

式（１）の例示的実施形態において、Ｒ_２は、Ｈであり、Ｒ_７は、－ＮＲ_１０Ｒ_１０であり、Ｒ_１は、－ＯＲ_８であり、Ｒ_３は、Ｈであり、Ｒ_８は、Ｈであり、各Ｒ_９は、Ｈである。

式（１）の例示的実施形態において、Ｒ_２は、Ｈであり、Ｒ_７は、－ＮＲ_１０Ｒ_１０であり、少なくとも１個のＲ_９は、Ｈである。

式（１）の例示的実施形態において、Ｒ_２は、Ｈであり、Ｒ_７は、－ＮＲ_１０Ｒ_１０であり、各Ｒ_９は、Ｈである。

式（１）の例示的実施形態において、Ｒ_７は、－ＮＲ_１０Ｒ_１０であり、各Ｒ_１０は、－ＣＨ_２ＣＨ_３であり、Ｒ_４およびＲ_５のうちの少なくとも一方は、－ＣＨ_３である。

式（１）の例示的実施形態において、Ｒ_２は、Ｈであり、Ｒ_７は、－ＮＲ_１０Ｒ_１０であり、各Ｒ_１０は、－ＣＨ_２ＣＨ_３であり、Ｒ_４およびＲ_５の各々は、－ＣＨ_３である。

式（１）の例示的実施形態において、Ｒ_２は、Ｈであり、Ｒ_７は、－ＮＲ_１０Ｒ_１０であり、各Ｒ_１０は、－ＣＨ_２ＣＨ_３であり、Ｒ_１は、－ＯＲ_８であり、Ｒ_３は、Ｈであり、Ｒ_４およびＲ_５の各々は、－ＣＨ_３であり、Ｘは、Ｆ、Ｃｌ、ＢｒまたはＩである。

式（１）の例示的実施形態において、Ｒ_７は、モルホリニル、ピロリジノニル、ピロリジニル、ピペリジニル、ピペラジニルおよびテトラヒドロピラニルからなる群より選択されるヘテロシクリル基である。

式（１）の例示的実施形態において、Ｒ_７は、モルホリニル、ピペリジニル、ピペラジニルおよびテトラヒドロピラニルからなる群より選択されるヘテロシクリル基である。

式（１）の化合物の例示的実施形態において、Ｒ_１は、－ＯＲ_８であり；Ｒ_２、Ｒ_３およびＲ_６は、Ｈであり；Ｒ_４およびＲ_５は、独立して、Ｃ_１－３アルキルであり；Ｒ_７は、－ＮＲ_１０Ｒ_１０またはピペリジニル基であり；Ｌは、－（ＣＲ_９Ｒ_９）_ｎ－であり；Ｘは、有機アニオンまたは無機アニオンであり；Ｒ_８は、ＨまたはＣ_１－３アルキルであり；各Ｒ_９は、独立して、ＨまたはＣ_１－３アルキルであり；各Ｒ_１０は、独立して、ＨまたはＣ_１－３アルキルであり；そしてｎは、１、２、３または４である。特定の実施形態において、Ｘは、Ｆ、Ｃｌ、ＢｒおよびＩからなる群より選択される。別の特定の実施形態において、ｎは、２である。

式（１）の化合物の例示的実施形態において、Ｒ_１は、－ＯＲ_８であり；Ｒ_２、Ｒ_３、Ｒ_６、Ｒ_８およびＲ_９は、Ｈであり；Ｒ_４およびＲ_５は、ＣＨ_３であり；Ｒ_７は、ピペリジニル基であり；Ｌは、－（ＣＲ_９Ｒ_９）_ｎ－であり；Ｘは、Ｆ、Ｃｌ、ＢｒおよびＩからなる群より選択され；そしてｎは、１、２、３または４である。

式（１）の化合物の例示的実施形態において、Ｒ_１は、－ＯＲ_８であり；Ｒ_２、Ｒ_３、Ｒ_６、Ｒ_８およびＲ_９は、Ｈであり；Ｒ_４およびＲ_５は、ＣＨ_３であり；Ｒ_７は、－ＮＲ_１０Ｒ_１０であり；各Ｒ_１０は、独立して、Ｃ_１－３アルキルであり；Ｌは、－（ＣＲ_９Ｒ_９）_ｎ－であり；Ｘは、Ｆ、Ｃｌ、ＢｒおよびＩからなる群より選択され；そしてｎは、１、２、３または４である。

例示的実施形態において、式（１）の化合物は、式（１Ａ）の化合物：
であり、ここでＸは、有機アニオンまたは無機アニオンである。例示的実施形態において、Ｘは、ハロ（Ｆ、Ｃｌ、Ｂｒ、Ｉ）、アルコキシド、ｐ－トルエンスルホネート、メチルスルホネート、スルホネート、ホスフェート、およびカルボキシレート（例えば、ベンゾエート、スクシネート、アセテート、グリコレート、マレエート、マレート、フマレート、シトレート、タートレート、アスコルベート、シナメート、マンデレート、およびジフェニルアセテート）からなる群より選択される。特定の実施形態において、Ｘは、Ｆ、Ｃｌ、ＢｒおよびＩからなる群より選択される。

例示的実施形態において、式（１）の化合物は、化合物（１ＡＡ）：
である。

例示的実施形態において、式（１）の化合物は、式（１Ｂ）の化合物：
であり、ここでＸは、有機アニオンまたは無機アニオンである。例示的実施形態において、Ｘは、ハロ（Ｆ、Ｃｌ、Ｂｒ、Ｉ）、アルコキシド、ｐ－トルエンスルホネート、メチルスルホネート、スルホネート、ホスフェート、およびカルボキシレート（例えば、ベンゾエート、スクシネート、アセテート、グリコレート、マレエート、マレート、フマレート、シトレート、タートレート、アスコルベート、シナメート、マンデレート、およびジフェニルアセテート）からなる群より選択される。特定の実施形態において、Ｘは、Ｆ、Ｃｌ、ＢｒおよびＩからなる群より選択される。

例示的実施形態において、式（１）の化合物は、化合物（１ＢＢ）：
である。

本発明の別の局面は、被験体において骨髄系新生物または固形腫瘍を処置するための方法であって、上記方法は、必要性のある被験体に、治療有効量の式（２）の化合物：
またはその薬学的に受容可能な塩を投与する工程を含み、ここで
Ｒ_１は、アリール基またはヘテロアリール基であり、ここで上記アリール基および上記ヘテロアリール基は各々、－ＮＲ_６Ｒ_６、ＯＨ、Ｆ、Ｃｌ、ＢｒおよびＣ_１－３アルキルからなる群より独立して選択される０～３個の置換基を有し；
Ｒ_２およびＲ_３は、独立して、ＨまたはＣ_１－６アルキルであり；
Ｒ_４およびＲ_５は、独立して、Ｈ、－ＮＲ_６Ｒ_６またはＯＲ_６であり；
各Ｒ_６は、独立して、ＨまたはＣ_１－３アルキルであり；
Ｘ_１およびＸ_２は、独立して、ＣＨまたはＮであり；
Ｌは、－（ＣＲ_７Ｒ_７）_ｎ－であり；
各Ｒ_７は、独立して、ＨまたはＣ_１－３アルキルであり；そして
ｎは、１、２、３または４である、
方法である。

例示的実施形態において、上記被験体は、ヒトである。

式（２）の例示的実施形態において、上記Ｒ_１のアリールまたはヘテロアリール基は、フェニル、フリル、ベンゾフラニル、チオフェニル、ベンゾチオフェニル、ピロリル、ピリジルおよびピリミジニルからなる群より選択される。

式（２）の例示的実施形態において、Ｒ_１は、－ＮＲ_６Ｒ_６である１個の置換基を有するフェニル基である。

式（２）の例示的実施形態において、Ｒ_１は、－ＮＲ_６Ｒ_６（ここでＲ_６のうちの少なくとも一方は、Ｈである）である１個の置換基を有するフェニル基である。

式（２）の例示的実施形態において、Ｒ_１は、－ＮＲ_６Ｒ_６（ここで各Ｒ_６は、Ｈである）である１個の置換基を有するフェニル基である。

式（２）の例示的実施形態において、Ｒ_２およびＲ_３のうちの少なくとも一方は、Ｈである。

式（２）の例示的実施形態において、Ｒ_２およびＲ_３の各々は、Ｈである。

式（２）の例示的実施形態において、Ｘ_１およびＸ_２は、各々Ｎであり、Ｒ_４およびＲ_５のうちの少なくとも一方は、－ＮＲ_６Ｒ_６である。

式（２）の例示的実施形態において、Ｘ_１およびＸ_２は、各々Ｎであり、Ｒ_４およびＲ_５の各々は、－ＮＲ_６Ｒ_６である。

式（２）の例示的実施形態において、Ｘ_１およびＸ_２は、各々Ｎであり、Ｒ_４およびＲ_５のうちの少なくとも一方は、－ＮＲ_６Ｒ_６であり、ここで各Ｒ_６は、Ｈである。

式（２）の例示的実施形態において、Ｘ_１およびＸ_２は、各々Ｎであり、Ｒ_４およびＲ_５の各々は、－ＮＲ_６Ｒ_６であり、ここで各Ｒ_６は、Ｈである。

例示的実施形態において、式（２）の化合物は、式（２Ａ）の化合物：
であり、ここで式（２Ａ）の化合物は、薬学的に受容可能な塩として存在し、ここでＨＡは、プロトンドナーである。例示的実施形態において、ＨＡは、無機酸（例えば、塩酸、臭化水素酸、硫酸、リン酸、硝酸など）および有機酸（例えば、酢酸、シュウ酸、酒石酸、コハク酸、リンゴ酸、フマル酸、マレイン酸、アスコルビン酸、安息香酸、タンニン酸、パモ酸、アルギン酸、ポリグルタミン酸、ナフタレンスルホン酸、ナフタレンジスルホン酸およびポリガラクツロン酸）からなる群より選択される。特定の実施形態において、ＨＡは、塩酸、臭化水素酸、硫酸、リン酸および硝酸からなる群より選択される。

例示的実施形態において、式（２）の化合物は、化合物（２ＡＡ）：
である。

本発明のある局面において、本明細書で開示される化合物での処置のために同定された骨髄系新生物または固形腫瘍は、ＳＥＴＢＰ１活性化（これは、例えば、過剰発現または変異による活性化が挙げられるが、これらに限定されない）と関連する。例示的実施形態において、上記骨髄系新生物は、急性骨髄性白血病（ＡＭＬ）、慢性骨髄単球性白血病（ＣＭＭＬ）、若年性骨髄単球性白血病（ＪＭＭＬ）、慢性骨髄性白血病急性転化（ＣＭＬ－ＢＣ）、非定型慢性骨髄性白血病（ａＣＭＬ）、二次性急性骨髄性白血病（ｓＡＭＬ）、骨髄異形成症候群（ＭＤＳ）および慢性好中球性白血病（ＣＮＬ）からなる群より選択される。例示的実施形態において、上記固形腫瘍は、乳がん、結腸直腸がん、肺がん、卵巣がん、前立腺がん、皮膚がん、肝臓がん、膵臓がん、腎臓がん、子宮内膜がん、食道がん、胃がん、および頭頚部がんからなる群より選択される。

例示的実施形態において、式（１）の化合物は、１またはこれより多くの賦形剤を含む薬学的組成物に存在する。

例示的実施形態において、式（１Ａ）の化合物は、１またはこれより多くの賦形剤を含む薬学的組成物に存在する。

例示的実施形態において、化合物（１ＡＡ）は、１またはこれより多くの賦形剤を含む薬学的組成物に存在する。

例示的実施形態において、式（２）の化合物は、１またはこれより多くの賦形剤を含む薬学的組成物に存在する。

例示的実施形態において、式（２Ａ）の化合物は、１またはこれより多くの賦形剤を含む薬学的組成物に存在する。

例示的実施形態において、化合物（２ＡＡ）は、１またはこれより多くの賦形剤を含む薬学的組成物に存在する。

本発明の別の局面は、６×Ｈｉｓタグを有するポリペプチド２５－２０を表す配列番号１のアミノ酸配列を含む２４０アミノ酸の単離されたポリペプチドである。種々の例示的実施形態において、本発明は、配列番号１の特定されたアミノ酸配列と少なくとも７０％、７１％、７２％、７３％、７４％ ７５％、７６％、７７％、７８％、７９％、８０％、８１％、８２％、８３％、８４％、８５％、８６％、８７％、８８％、８９％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％またはさらには１００％同一であるアミノ酸配列を含むペプチドを提供する。

例示的実施形態において、上記単離されたポリペプチドは、配列番号１のアミノ酸配列からなる。種々の例示的実施形態において、本発明は、配列番号１の特定されたアミノ酸配列と少なくとも７０％、７１％、７２％、７３％、７４％ ７５％、７６％、７７％、７８％、７９％、８０％、８１％、８２％、８３％、８４％、８５％、８６％、８７％、８８％、８９％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％またはさらには１００％同一であるアミノ酸配列から本質的になるかまたはからなるペプチドを提供する。

例示的実施形態において、上記単離されたポリペプチドは、配列番号１のアミノ酸２４～２４０からなる。種々の例示的実施形態において、本発明は、配列番号１のアミノ酸２４～２４０の特定されたアミノ酸配列と少なくとも７０％、７１％、７２％、７３％、７４％ ７５％、７６％、７７％、７８％、７９％、８０％、８１％、８２％、８３％、８４％、８５％、８６％、８７％、８８％、８９％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％またはさらには１００％同一であるアミノ酸配列から本質的になるかまたはからなるペプチドを提供する。

本発明の別の局面は、配列番号１のアミノ酸配列を含む２４０アミノ酸の単離されたポリペプチドを含む試薬組成物である。

上記試薬組成物の例示的実施形態において、上記単離されたポリペプチドは、配列番号１のアミノ酸配列からなる。

試薬組成物の例示的実施形態において、上記単離されたポリペプチドは、配列番号１のアミノ酸２４～２４０からなる。

以下の図面は、本発明の具体的実施形態の例証に過ぎず、本発明の全範囲を記載されるとおりに別の方法で限定することは意図されない。

図１Ａは、ＨＥＫ２９３Ｔ細胞におけるＳｅｔｂｐ１／Ｓｅｔｂｐ１（Ｄ／Ｎ）およびＸＰＯ１の複合体形成を図示する。左パネルは、示された特異的抗体を使用して、ｐＭＹｓ－３×ＦＬＡＧ－Ｓｅｔｂｐ１－ＩＲＥＳ－ＧＦＰ、ｐＭＹｓ－３×ＦＬＡＧ－Ｓｅｔｂｐ１（Ｄ／Ｎ）－ＩＲＥＳ－ＧＦＰまたはコントロール空ベクターｐＭＹｓ－ＩＲＥＳ－ＧＦＰで一過性にトランスフェクトしたＨＥＫ２９３Ｔ細胞の核抽出物から調製したＭ２免疫沈降物のウェスタンブロット分析を示す。右パネルは、左パネルにおけるものと同様にトランスフェクトしたＨＥＫ２９３Ｔ細胞から、ＸＰＯ１特異的抗体を使用して調製した免疫沈降物のウェスタンブロット分析を示す。Ｓｅｔｂｐ１（Ｄ／Ｎ）は、骨髄系新生物の患者において頻繁に同定されるミスセンス変異を有するＳｅｔｂｐ１変異体である。

図１Ｂは、Ｓｅｔｂｐ１／Ｓｅｔｂｐ１（Ｄ／Ｎ）とＸｐｏ１との間の直接的物理的相互作用を図示する。ウェスタンブロット分析を、示された抗体を使用して、Ｘｐｏ１タンパク質と、３×ＦＬＡＧタグ化Ｓｅｔｂｐ１またはＳｅｔｂｐ１（Ｄ／Ｎ）タンパク質との混合物から調製した免疫沈降物に対して行った。Ｘｐｏ１、Ｓｅｔｂｐ１およびＳｅｔｂｐ１（Ｄ／Ｎ）タンパク質を、インビトロ転写および翻訳によって生成した。免疫沈降を、Ｘｐｏ１特異的抗体またはコントロールＩｇＧを使用して行った。

図１Ｃは、Ｓｅｔｂｐ１をＨｏｘａ９遺伝子座に直接結合することを図示する。３×ＦＬＡＧタグ化Ｓｅｔｂｐ１不死化骨髄系前駆細胞において抗Ｘｐｏ１またはＭ２抗体を使用して、転写開始部位に対すてＨｏｘａ９遺伝子座の示された領域のクロマチン免疫沈降（ＣｈＩＰ）分析を行い、定量的リアルタイムＰＣＲによって分析した。

図１Ｄは、ＮＥＳコンセンサス配列に対するマウスおよびヒトのＳｅｔｂｐ１ ＮＥＳ１配列およびＮＥＳ２配列のアラインメントを図示する。「Φ」は、疎水性残基を示す一方で、「Ｘ」は、任意の他のアミノ酸を表す。

図１Ｅは、ＮＥＳ２が、Ｓｅｔｂｐ１／Ｓｅｔｂｐ１（Ｄ／Ｎ）とＸｐｏ１との間の相互作用の媒介を担うことを図示する。左パネルは、示された特異的抗体を使用して、３×ＦＬＡＧタグ化野生型Ｓｅｔｂｐ１またはＳｅｔｂｐ１ ＮＥＳ変異体を発現するｐＭＹｓレトロウイルス構築物で一過性にトランスフェクトしたＨＥＫ２９３Ｔ細胞の核抽出物から調製したＭ２免疫沈降物のウェスタンブロット分析を示す。右パネルは、示された特異的抗体を使用して、３×ＦＬＡＧタグ化Ｓｅｔｂｐ１（Ｄ／Ｎ）またはＳｅｔｂｐ１（Ｄ／Ｎ） ＮＥＳ変異体を発現する、ｐＭＹｓ構築物で一過性にトランスフェクトしたＨＥＫ２９３Ｔ細胞の核抽出物から調製したＭ２免疫沈降物のウェスタンブロット分析を表す。

図２Ａは、Ｓｅｔｂｐ１が転写活性化を誘導するためにＸｐｏ１が必要とされることを図示する。左パネルは、Ｘｐｏ１を標的化するレンチウイルスｓｈＲＮＡ（Ｘｐｏ１－ｓｈ１および－ｓｈ２）または非標的化コントロールレンチウイルスｓｈＲＮＡ（ＮＣ－ｓｈ）での感染後５４時間での、野生型Ｓｅｔｂｐ１によって不死化したマウス骨髄系前駆細胞におけるＨｏｘａ９、Ｈｏｘａ１０およびＭｙｂ ｍＲＮＡレベルのリアルタイムＲＴ－ＰＣＲ分析を表す。相対的発現レベルを、同じサンプル中のβ－アクチンｍＲＮＡレベルに対して、またＮＣ－ｓｈウイルスに感染させた細胞に対して正規化することによって計算した、。各相対的発現レベルの平均およびＳＤを示す。右パネルは、示された抗体を使用して、左パネルにおける同じ形質導入した細胞のウェスタンブロット分析を表す。＊＊＊， Ｐ＜０．００１（両側のスチューデントｔ検定）。

図２Ｂは、Ｓｅｔｂｐ１（Ｄ／Ｎ）が転写活性化を誘導するためにＸｐｏ１が必要であることを図示する。図２Ａにおけるものと同じ分析を、Ｓｅｔｂｐ１（Ｄ／Ｎ）不死化マウス骨髄系前駆細胞で行った。

図２Ｃは、ＸＰＯ１インヒビターであるＫＰＴ－１８５によるＳｅｔｂｐ１／Ｓｅｔｂｐ１（Ｄ／Ｎ）誘導性転写活性化の阻害を図示する。Ｓｅｔｂｐ１（左パネル）およびＳｅｔｂｐ１（Ｄ／Ｎ）（右パネル）によって不死化したマウス骨髄系前駆細胞におけるＨｏｘａ９、Ｈｏｘａ１０、およびＭｙｂ ｍＲＮＡレベルを、ＫＰＴ－１８５（３００ｎＭ）またはコントロールとしてのＤＭＳＯでの処理後２．５時間で、リアルタイムＲＴ－ＰＣＲによって分析した。＊＊， Ｐ＜０．０１； ＊＊＊， Ｐ＜０．００１（両側のスチューデントｔ検定）。

図２Ｄは、Ｓｅｔｂｐ１およびＳｅｔｂｐ１（Ｄ／Ｎ）におけるＮＥＳ２変異が、正常な造血幹細胞および前駆細胞において転写活性化を誘導するそれらの能力を阻害することを図示する。示したｐＭＹｓレトロウイルスでの感染後７２時間におけるマウスＬＳＫ細胞におけるＨｏｘａ９、Ｈｏｘａ１０、およびＭｙｂ ｍＲＮＡレベルを、リアルタイムＲＴ－ＰＣＲによって分析した。形質導入した細胞を、ＧＦＰ陽性に基づいて精製した。＊＊， Ｐ＜０．０１； ＊＊＊， Ｐ＜０．００１（両側のスチューデントｔ検定）。

図２Ｅは、Ｓｅｔｂｐ１およびＳｅｔｂｐ１（Ｄ／Ｎ）におけるＮＥＳ２変異が、正常な造血幹細胞および前駆細胞の自己再生を誘導するそれらの能力を阻害することを図示する。連続再プレーティングアッセイを、図２Ｄにおけるものと同じマウスＬＳＫ細胞に対して行った。マウスＳｃｆ（１００ｎｇ／ｍｌ）、Ｉｌ－６（１０ｎｇ／ｍｌ）、およびＩｌ－３（６ｎｇ／ｍｌ）の存在下で、ＩＭＤＭメチルセルロース培地上に５×１０^３個の形質導入ＬＳＫ細胞によって形成されるコロニー数の平均およびＳＤを示す。１回目のプレーティングの５日後に、コロニーを計数し、同数のコロニー細胞を、同じ条件下で２回目のプレーティングのために使用した。

図３は、Ｘｐｏ１ノックダウンが、Ｓｅｔｂｐ１およびＳｅｔｂｐ１（Ｄ／Ｎ）によって不死化した骨髄系前駆細胞のコロニー形成能力を有意に減少することを示す。マウスＳｃｆ（５０ｎｇ／ｍｌ）およびＩｌ－３（１０ｎｇ／ｍｌ）の存在下でメチルセルロース上でのＸｐｏ１を標的化するレンチウイルスｓｈＲＮＡ（Ｘｐｏ１－ｓｈ１およびＸｐｏ１－ｓｈ２）またはコントロールｓｈＲＮＡ（ＮＣ－ｓｈ）を形質導入したＳｅｔｂｐ１またはＳｅｔｂｐ１（Ｄ／Ｎ）不死化骨髄系前駆細胞の相対的コロニー形成能力の平均およびＳＤ。

図４は、ＫＰＴ－１８５が、Ｓｅｔｂｐ１活性化によって不死化した骨髄系前駆細胞のコロニー形成能力を有意に低減することを示す。マウスＳｃｆ（５０ｎｇ／ｍｌ）およびＩｌ－３（１０ｎｇ／ｍｌ）の存在下でメチルセルロース上でのＫＰＴ－１８５またはコントロールＤＭＳＯの示された濃度で処理したＳｅｔｂｐ１またはＳｅｔｂｐ１（Ｄ／Ｎ）不死化骨髄系前駆細胞の相対的コロニー形成能力の平均およびＳＤ。

図５Ａおよび図５Ｂは、ＫＰＴ－１８５での処理が、Ｓｅｔｂｐ１およびＳｅｔｂｐ１（Ｄ／Ｎ）によって不死化した骨髄系前駆細胞においてアポトーシスおよび分化を誘導することを示す。図５Ａ（上側パネル）において、アポトーシス細胞を、ＫＰＴ－１８５またはＤＭＳＯのいずれかでの処理後４８時間において、Ｓｅｔｂｐ１不死化骨髄系前駆細胞におけるアネキシンＶ染色によって検出した。図５Ａ（下側パネル）は、処理後７２時間での同じ細胞のサイトスピン分析を示す。成熟好中球の数は、ＫＰＴ－１８５での処理後の培養物中で有意に増大することが観察された。図５Ｂは、Ｓｅｔｂｐ１（Ｄ／Ｎ）不死化骨髄系前駆細胞で行った、図５Ａにおけるものと同じ分析を示す。

図６は、ＸＰＯ１インヒビターであるＫＰＴ－３３０での処置が、Ｓｅｔｂｐ１（Ｄ／Ｎ）によって誘導したマウスＡＭＬを移植したマウスの生存を長期化したことを示す。Ｓｅｔｂｐ１（Ｄ／Ｎ）誘導性白血病を移植し、ＫＰＴ－３３０（２０ｍｇ／ｋｇ体重）またはビヒクルで処置した照射済みＢ６－Ｌｙ５．２マウスの生存曲線。動物を、移植後７日間から開始して２日間ごとに、強制経口投与によって処置した。ｐ＝０．０１２， ログランク検定。

図７は、ＨＥＫ２９３Ｔ細胞におけるＳＥＴＢＰ１およびＸＰＯ１の細胞局在が、ＮＥＳ変異によって影響を及ぼされないことを示す。示された抗体を使用する、示された３×ＦＬＡＧタグ化Ｓｅｔｂｐ１または特定のＮＥＳ変異を伴うＳｅｔｂｐ１変異体を一過性に発現するＨＥＫ２９３Ｔ細胞の核画分および細胞質画分のウェスタンブロット分析。

図８は、示された抗体を使用する、示されたｐＭＹｓレトロウイルスでの感染後７２時間でのマウスＬＳＫ細胞のウェスタンブロット分析を示す。

図９は、ＮＥＳ２変異が、マウスＬＳＫ細胞におけるＳｅｔｂｐ１およびＳｅｔｂｐ１（Ｄ／Ｎ）タンパク質の核局在に影響を及ぼさないことを示す。相当するｐＭＹｓレトロウイルス発現構築物での感染後７２時間での、マウスＬＳＫ細胞における抗ＦＬＡＧ Ｍ２抗体を使用する免疫蛍光による３×ＦＬＡＧタグ化Ｓｅｔｂｐ１－ＮＥＳ２、Ｓｅｔｂｐ１、Ｓｅｔｂｐ１（Ｄ／Ｎ）－ＮＥＳ２、またはＳｅｔｂｐ１（Ｄ／Ｎ）タンパク質の検出。核を、ＤＡＰＩで染色することによって目立たせた。空のウイルス（ｐＭＹｓ－ＩＲＥＳ－ＧＦＰ）を形質導入したＬＳＫ細胞を、陰性コントロールとして含めた。

図１０は、化合物（１ＡＡ）が、１ｎＭ、５ｎＭ、１０ｎＭ、および１００ｎＭの濃度においてコロニー形成を阻害し、１００ｎＭでＳｅｔｂｐ１不死化細胞における分化／細胞傷害性を誘導することを示す。

図１１は、化合物（１ＡＡ）が、１ｎＭ、５ｎＭ、１０ｎＭ、および１００ｎＭの濃度においてコロニー形成を阻害し、１００ｎＭでＳｅｔｂｐ１（Ｄ／Ｎ）不死化細胞における分化／細胞傷害性を誘導することを示し、ここでＳｅｔｂｐ１（Ｄ／Ｎ）は、骨髄系新生物の患者において頻繁に同定されるミスセンス変異を有するＳｅｔｂｐ１変異体である。

図１２は、化合物（１ＡＡ）が、Ｓｅｔｂｐ１不死化細胞で、１ｎＭ、１０ｎＭ、１００ｎＭおよび５００ｎＭの濃度での処理後１２時間においてＨｏｘａ９、Ｈｏｘａ１０およびＭｙｂのＳｅｔｂｐ１標的転写レベルを低減することを示す。

図１３は、化合物（１ＡＡ）が、Ｓｅｔｂｐ１（Ｄ／Ｎ）不死化細胞で、１ｎＭ、１０ｎＭ、１００ｎＭおよび５００ｎＭの濃度での処理後１２時間においてＨｏｘａ９、Ｈｏｘａ１０およびＭｙｂのＳｅｔｂｐ１（Ｄ／Ｎ）標的転写レベルを低減することを示す。

図１４は、化合物（２ＡＡ）が、１ｎＭ、５ｎＭ、１０ｎＭ、および１００ｎＭの濃度においてコロニー形成を阻害し、１００ｎＭでＳｅｔｂｐ１不死化細胞において分化／細胞傷害性を誘導することを示す。

図１５は、化合物（２ＡＡ）が、１ｎＭ、１０ｎＭ、５０ｎＭ、１００ｎＭ、３００ｎＭおよび５００ｎＭの濃度においてコロニー形成を阻害し、１００ｎＭでＳｅｔｂｐ１（Ｄ／Ｎ）不死化細胞において分化／細胞傷害性を誘導することを示す。

図１６は、化合物（２ＡＡ）が、Ｓｅｔｂｐ１不死化細胞で、１ｎＭ、５０ｎＭ、１００ｎＭおよび３００ｎＭの濃度での処理後１２時間においてＨｏｘａ９、Ｈｏｘａ１０およびＭｙｂのＳｅｔｂｐ１標的転写レベルを低減することを示す。

図１７は、化合物（２ＡＡ）が、Ｓｅｔｂｐ１（Ｄ／Ｎ）不死化細胞で、１ｎＭ、５０ｎＭ、１００ｎＭおよび３００ｎＭの濃度での処理後１２時間においてＨｏｘａ９、Ｈｏｘａ１０およびＭｙｂのＳｅｔｂｐ１（Ｄ／Ｎ）標的転写レベルを低減することを示す。

図１８は、配列番号１である６×Ｈｉｓタグを有するポリペプチド２５－２０を示す。

図１９は、ポリペプチド２５－２０が、ＸＰＯ１と相互作用することを示す。

図２０は、化合物（１ＡＡ）が、１μＭ、１０μＭおよび２５μＭの濃度においてＳｅｔｂｐ１（Ｄ／Ｎ）とＸＰＯ１との間の相互作用を破壊することを図示する。示した特異的抗体を使用するウェスタンブロット分析を、ｐＭＹｓ－３×ＦＬＡＧ－Ｓｅｔｂｐ１－ＩＲＥＳ－ＧＦＰで一過性トランスフェクトし、その後、種々の濃度の化合物（１ＡＡ）およびコントロールＤＭＳＯで１２時間処理したＨＥＫ２９３Ｔ細胞の核抽出物から調製したＭ２免疫沈降物に対して行った。

図２１は、化合物（１ＡＡ）が、Ｓｅｔｂｐ１（Ｄ／Ｎ）によって誘導したマウスＡＭＬを移植した白血病マウスの生存を有意に延ばし、それらの脾臓サイズを低減したことを図示する。左パネルは、Ｓｅｔｂｐ１（Ｄ／Ｎ）誘導性白血病を移植し、化合物（１ＡＡ）（３３ｍｇ／ｋｇ体重）またはビヒクルで処置した致死量未満で照射したＢ６－Ｌｙ５．２マウスの生存曲線を示す。動物を、移植後１０日から開始して、５回の腹腔内注射によって処置した。ｐ＝０．００３４， ログランク検定。右パネルは、瀕死になったときの左パネルにおけるマウスの脾臓重量を示す。

詳細な説明
定義
用語「薬学的に受容可能なキャリア」とは、本明細書で使用される場合、水、エタノール、ポリオール（例えば、グリセロール、プロピレングリコール、および液体ポリエチレングリコールなど）、これらの適切な混合物、ならびに植物性油、コーティング、等張化剤および吸収遅延剤、リポソーム、市販の洗浄剤（ｃｌｅａｎｓｅｒ）などが挙げられるが、これらに限定されない、任意のおよび全ての溶媒、または分散媒を含む。補助的な生体活性成分がまた、このようなキャリアの中に組み込まれ得る。

用語「アルキル」とは、本明細書で使用される場合、例えば、１～２０個の炭素原子を含む、任意の直鎖または分枝状、非環式もしくは環式の、不飽和もしくは飽和の脂肪族炭化水素を意味するが、用語「低級アルキル」は、アルキルと同じ意味を有するが、１～５個の炭素原子を含む。用語「高級アルキル」とは、アルキルと同じ意味を有するが、６～２０個の炭素原子を含む。代表的な飽和直鎖アルキルとしては、メチル、エチル、ｎ－プロピル、ｎ－ブチル、ｎ－ペンチル、ｎ－ヘキシル、ｎ－ヘプチル、ｎ－オクチル、ｎ－ノニルなどが挙げられるが、これらに限定されない；一方で、飽和分枝状アルキルとしては、イソプロピル、ｓｅｃ－ブチル、イソブチル、ｔｅｒｔ－ブチル、イソペンチルなどが挙げられるが、これらに限定されない。環式アルキルとしては、同じ原子に結合した２個のアルキル基を結合することによって、または各々隣り合っている原子に結合した２個のアルキル基を結合することによって、得られ得る。代表的な飽和環式アルキルとしては、シクロプロピル、シクロブチル、シクロペンチル、シクロヘキシルなどが挙げられるが、これらに限定されない；一方で、不飽和環式アルキルとしては、シクロペンテニルおよびシクロヘキセニルなどが挙げられるが、これらに限定されない。環式アルキルはまた、本明細書で「シクロアルキル」、「ホモ環」または「ホモ環式環」ともいわれる。不飽和アルキルは、隣接する炭素原子の間に少なくとも１個の二重結合または三重結合を含む（それぞれ「アルケニル」または「アルキニル」といわれる）。代表的な直鎖および分枝状のアルケニルとしては、エチレニル、プロピレニル、１－ブテニル、２－ブテニル、イソブチレニル、１－ペンテニル、２－ペンテニル、３－メチル－１－ブテニル、２－メチル－２－ブテニル、２，３－ジメチル－２－ブテニルなどが挙げられるが、これらに限定されない；一方で、代表的な直鎖および分枝状のアルキニルとしては、アセチレニル、プロピニル、１－ブチニル、２－ブチニル、１－ペンチニル、２－ペンチニル、３－メチル－１－ブチニルなどが挙げられるが、これらに限定されない。

用語「アリール」とは、本明細書で使用される場合、例えば、５～２０個の炭素原子を含む任意の芳香族炭素環式部分（例えば、フェニルまたはナフチルが挙げられるが、これらに限定されない）をいう。

用語「アリールアルキル」または「アラルキル」とは、本明細書で使用される場合、少なくとも１個のアルキル水素原子がアリール部分で置き換えられている任意のアルキル（例えば、ベンジル、（ＣＨ_２）_２フェニル、－（ＣＨ_２）_３フェニル、－ＣＨ（フェニル）_２などが挙げられるが、これらに限定されない）をいう。

用語「ハロゲン」または「ハロ」とは、本明細書で使用される場合、任意のフルオロ、クロロ、ブロモ、またはヨード部分をいう。

用語「ハロアルキル」とは、本明細書で使用される場合、少なくとも１個の水素原子がハロゲンで置き換えられている任意のアルキル（例えば、トリフルオロメチルなど）をいう。

用語「ヘテロアリール」とは、本明細書で使用される場合、窒素、酸素および硫黄から選択される少なくとも１個のヘテロ原子を有し、少なくとも１個の炭素原子を含む５～２０員の任意の芳香族複素環であって、単環式および二環式両方の環系が挙げられるが、これらに限定されないものをいう。代表的なヘテロアリールとしては、フリル、ベンゾフラニル、チオフェニル、ベンゾチオフェニル、ピロリル、インドリル、イソインドリル、アザインドリル、ピリジル、キノリニル、イソキノリニル、オキサゾリル、イソオキサゾリル、ベンゾオキサゾリル、ピラゾリル、イミダゾリル、ベンゾイミダゾリル、チアゾリル、ベンゾチアゾリル、イソチアゾリル、ピリダジニル、ピリミジニル、ピラジニル、トリアジニル、シンノリニル、フタラジニル、またはキナゾリニルが挙げられるが、これらに限定されない。

用語「ヘテロアリールアルキル」とは、本明細書で使用される場合、少なくとも１個のアルキル水素原子がヘテロアリール部分で置き換えられている任意のアルキル（例えば、－ＣＨピリジニル、－ＣＨ_２ピリミジニルなど）をいう。

用語「複素環」または「複素環式」、「ヘテロシクリル」または「複素環式環」とは、本明細書で使用される場合、飽和または不飽和のいずれかでありかつ窒素、酸素および硫黄から独立して選択される１～４個のヘテロ原子を含む、任意の非芳香族の３員～７員の単環式または任意の非芳香族の７員～１０員の二環式の複素環式環であって、ここで上記窒素および硫黄ヘテロ原子は、必要に応じて酸化されていてもよく、上記窒素ヘテロ原子は、必要に応じて四級化されていてもよいもの（上記の複素環のうちのいずれかが、ベンゼン環に縮合されている二環式環を含む）をいう。上記複素環は、任意のヘテロ原子または炭素原子を介して付着され得る。複素環としては、モルホリニル、ピロリジノニル、ピロリジニル、ピペリジニル、ピペラジニル、イミダゾリニル、イミダゾリジニル、ピラゾリニル、ピラゾリジニル、１，４－ジオキサニル、ジチアニル、ヒダントイニル、バレロラクタミル、オキシラニル、オキセタニル、テトラヒドロフラニル、テトラヒドロピラニル、テトラヒドロピリジニル、テトラヒドロピリミジニル、テトラヒドロチオフェニル、テトラヒドロチオピラニル、テトラヒドロピリミジニル、テトラヒドロチオフェニル、テトラヒドロチオピラニルなどが挙げられ得るが、これらに限定されない。

用語「ヘテロシクロアルキル」とは、本明細書で使用される場合、少なくとも１個のアルキル水素原子が複素環で置き換えられている任意のアルキル（例えば、－ＣＨ_２モルホリニルなど）をいう。

用語「ホモ環」または「シクロアルキル」とは、本明細書で使用される場合、３～７個の炭素原子を含む任意の飽和または不飽和（非芳香族）の炭素環式環（例えば、シクロプロパン、シクロブタン、シクロペンタン、シクロヘキサン、シクロヘプタン、シクロヘキセンなどが挙げられるが、これらに限定されない）をいう。

用語「アルキルアミノ」とは、本明細書で使用される場合、窒素架橋を通じて付着されている少なくとも１個のアルキル部分（すなわち、－Ｎ－（アルキル）Ｎ、例えば、ジアルキルアミノ）をいい、メチルアミノ、エチルアミノ、ジメチルアミノ、ジエチルアミノなどが挙げられるが、これらに限定されない。

用語「アルキルオキシ」または「アルコキシ」とは、本明細書で使用される場合、酸素架橋を通じて付着されている任意のアルキル部分（すなわち、－Ｏ－アルキル）をいい、例えば、メトキシ、エトキシなどが挙げられるが、これらに限定されない。

用語「アルキルチオ」とは、本明細書で使用される場合、硫黄架橋（すなわち、－Ｓ－アルキル）を通じて付着されている任意のアルキル部分をいい、例えば、メチルチオ、エチルチオなどが挙げられるが、これらに限定されない。

用語「塩」とは、本明細書で使用される場合、本明細書で記載される同定された化合物と複合体化した任意の塩をいう。このような塩の例としては、無機酸（例えば、塩酸、臭化水素酸、硫酸、リン酸、硝酸など）と形成される酸付加塩、および有機酸（例えば、酢酸、シュウ酸、酒石酸、コハク酸、リンゴ酸、フマル酸、マレイン酸、アスコルビン酸、安息香酸、タンニン酸、パモ酸、アルギン酸、ポリグルタミン酸、ナフタレンスルホン酸、ナフタレンジスルホン酸、およびポリガラクツロン酸が挙げられるが、これらに限定されない）と形成される塩が挙げられるが、これらに限定されない。塩化合物はまた、当業者に公知の薬学的に受容可能な四級塩として投与され得、上記塩化合物としては、具体的には、式－ＮＲＲ’Ｒ”＋Ｚ－の四級アンモニウム塩であって、ここでＲ、Ｒ’、Ｒ”は、独立して、水素、アルキル、またはベンジルであり、Ｚは、対イオン（クロリド、ブロミド、ヨージド、アルコキシド、トルエンスルホネート、メチルスルホネート、スルホネート、ホスフェート、またはカルボキシレート（例えば、ベンゾエート、スクシネート、アセテート、グリコレート、マレエート、マレート、フマレート、シトレート、タートレート、アスコルベート、シナメート、マンデレート、およびジフェニルアセテート）であるものが挙げられるが、これらに限定されない）が挙げられる。塩化合物はまた、置換されたまたは置換されていない部分式を有する薬学的に受容可能なピリジンカチオン塩として投与され得る：ここでＺは、対イオン（クロリド、ブロミド、ヨージド、アルコキシド、トルエンスルホネート、メチルスルホネート、スルホネート、ホスフェート、またはカルボキシレート（例えば、ベンゾエート、スクシネート、アセテート、グリコレート、マレエート、マレート、フマレート、シトレート、タートレート、アスコルベート、シナメート、マンデレート、およびジフェニルアセテート）が挙げられるが、これらに限定されない）である。

用語「低減する」、「阻害する」、「減らす」、「抑制する」、「減少させる」、「防止する」および文法上の等価物（「より低い」、「より小さい」などが挙げられる）は、処置した被験体と比較して処置されていない被験体における任意の症状の発現に言及する場合、上記処置した被験体における症状の量および／または大きさが、任意の医療上の訓練がなされた人によって臨床上関連すると認識される任意の量だけ上記処置されていない被験体におけるより低いことを意味する。種々の例示的実施形態において、上記処置した被験体における症状の量および／または大きさは、上記処置されていない被験体における症状の量および／または大きさより、少なくとも１０％低い、少なくとも２５％低い、少なくとも５０％低い、少なくとも７５％低い、および／または少なくとも９０％低い。

用語「阻害性化合物」とは、本明細書で使用される場合、結合パートナーに、上記結合パートナーがその天然のリガンドに非応答性になるような条件下で相互作用（すなわち、例えば、付着、結合など）し得る任意の化合物をいう。阻害性化合物としては、有機低分子、抗体、およびタンパク質／ペプチドが挙げられ得るが、これらに限定されない。

用語「付着される（ａｔｔａｃｈｅｄ）」とは、本明細書で使用される場合、媒体（またはキャリア）と薬物との間の任意の相互作用を指す。付着は、可逆的であっても不可逆的であってもよい。このような付着としては、共有結合、イオン結合、ファンデルワールス力または摩擦などが挙げられるが、これらに限定されない。薬物は、浸漬される、組み込まれる、コーティングされる、懸濁状態になる、溶液状態になる、混合されるなどの場合に、媒体（またはキャリア）に付着される。

用語「薬物」または「化合物」とは、本明細書で使用される場合、所望の効果を達成する、投与され得る任意の薬理学的に活性な物質をいう。薬物または化合物は、合成または天然に存在する非ペプチド、タンパク質またはペプチド、オリゴヌクレオチドまたはヌクレオチド、ポリサッカリドまたは糖であり得る。

用語「投与される」または「投与する」とは、本明細書で使用される場合、組成物が、患者に対してその意図された効果を有するように、患者に組成物を提供する任意の方法をいう。例示的な投与方法は、局所組織投与（すなわち、例えば、血管外への配置）、経口摂取、経皮パッチ、局所、吸入、坐剤などのような直接的な機構によるものである。

用語「患者」とは、本明細書で使用される場合、入院している必要はない動物（例えば、哺乳動物のような、例えば、ヒトのような）である。例えば、外来患者および療養施設にいる個人は、「患者」である。患者は、任意の年齢のヒトまたは非ヒト動物を含んでいてもよく、従って、成人および若年者（すなわち、小児）の両方を含む。用語「患者」が、医療処置の必要性を暗示することは意図されず、従って、患者は、自由意志でまたは不本意に、臨床であろうが基礎科学研究の支援であろうが、実験の一部であり得る。

用語「被験体」とは、本明細書で使用される場合、脊椎動物、好ましくは哺乳動物、より好ましくは霊長類、さらにより好ましくはヒトをいう。哺乳動物としては、ヒト、霊長類、野生動物、野生化した動物、家畜、競技用動物および愛玩動物が挙げられるが、これらに限定されない。

例示的実施形態において、本発明は、少なくとも１種の薬学的に受容可能なキャリアを、本明細書で記載される化合物のうちの１またはこれより多くに加えて含む薬学的組成物を提供する。上記組成物は、所望の投与経路のために任意の適切な形態において存在し得る。上記組成物が経口投与されるべき場合、任意の適切な経口送達可能な投与形態が使用され得る（錠剤、カプセル剤（固体または液体充填）、散剤、粒剤、シロップ剤および他の液体、エリキシル剤、吸入剤、トローチ、ロゼンジおよび液剤が挙げられるが、これらに限定されない）。注射用組成物またはｉ．ｖ．注入物は、液剤、懸濁物、およびエマルジョンの形態でも提供される。

本発明の化合物は、本明細書で記載されるように製剤化され、任意の数の方法での上記被験体への治療有効量での投与に適している。治療有効量の本明細書で記載されるとおりの化合物は、使用される賦形剤の量およびタイプ、投与形態で存在する活性成分の量および具体的なタイプ、ならびに上記化合物が患者に投与されるべき経路に依存する。

本発明の化合物の代表的な投与量レベルは、一般に、約０．００１～約１００ｍｇ／ｋｇ被験体体重／日の範囲であり、これは、単一用量または複数用量において投与され得る。例示的な投与量は、約０．０１～約２５ｍｇ／ｋｇ／日または約０．０５～約１０ｍｇ／ｋｇ／日である。他の例示的実施形態において、上記投与量レベルは、約０．０１～約２５ｍｇ／ｋｇ／日（例えば、約０．０５～約１０ｍｇ／ｋｇ／日、または約０．１～約５ｍｇ／ｋｇ／日）の範囲である。

用量は、代表的には、約０．１ｍｇ～約２０００ｍｇ／日の範囲であり得、単一の１日１回の用量として、または代わりに、１日全体の間の分割用量として与えられ得、必要に応じて食品と一緒に摂取され得る。特定の実施形態において、１日用量は、等分割した用量で１日に２回投与される。１日用量範囲は、約５ｍｇ～約５００ｍｇ／日（例えば、約１０ｍｇ～約３００ｍｇ／日のような）の範囲であり得る。患者を管理するにあたって、治療は、低用量（例えば、約１ｍｇ～約２５ｍｇ）において開始され得、必要であれば、被験体の全身の応答に応じて、単一用量または分割用量のいずれかとして、約２００ｍｇ～約２０００ｍｇ／日まで増大される。

本発明に従う適切な経口組成物は、錠剤、トローチ、ロゼンジ、水性もしくは油性の懸濁物、分散性の散剤もしくは粒剤、エマルジョン、硬質もしくは軟質のカプセル剤、シロップ剤もしくはエリキシル剤が挙げられるが、これらに限定されない。経口使用に適した本発明の組成物は、薬学的組成物の製造のために当該分野で公知の任意の方法に従って調製され得る。例えば、上記化合物の液体製剤は、活性薬剤の薬学的に的確かつ嗜好性の高い調製物を提供するために、甘味剤、矯味矯臭剤、着色剤および保存剤からなる群より選択される１またはこれより多くの薬剤を含み得る。

錠剤組成物に関して、代表的な非毒性の薬学的に受容可能な賦形剤としては、不活性希釈剤（例えば、炭酸カルシウム、炭酸ナトリウム、ラクトース、リン酸カルシウムまたはリン酸ナトリウム）；造粒剤および崩壊剤（例えば、コーンスターチ、またはアルギン酸のような）；結合剤（例えば、デンプンのような）、ゲル化剤または滑沢剤（例えば、ステアリン酸マグネシウム、ステアリン酸またはタルクのような）が挙げられるが、これらに限定されない。上記錠剤は、コーティングされていなくてもよいし、または代わりに、それらは、消化管における崩壊および吸収を遅延させ、それによって、所望の期間にわたって持続した治療作用を提供するために公知のコーティング技術によってコーティングされていてもよい。例えば、時間遅延物質（ｔｉｍｅ ｄｅｌａｙ ｍａｔｅｒｉａｌ）（例えば、グリセリルモノステアレートまたはグリセリルジステアレート）が使用され得る。

経口使用のための製剤はまた、活性成分が不活性の固体希釈剤（例えば、炭酸カルシウム、リン酸カルシウムまたはカオリンのような）と混合される硬質ゼラチンカプセルとして、または活性成分が水または油媒体（例えば、ラッカセイ油、流動パラフィンまたはオリーブ油のような）と混合される軟質ゼラチンカプセルとして調製され得る。

水性懸濁物に関しては、上記化合物は、安定な懸濁物を維持するために適した賦形剤と混合され得る。このような賦形剤の例としては、カルボキシメチルセルロースナトリウム、メチルセルロース、ヒドロプロピルメチルセルロース、アルギン酸ナトリウム、ポリビニルピロリドン、トラガカントガムおよびアカシアガムが挙げられるが、これらに限定されない。

経口懸濁物はまた、分散剤または湿潤剤（例えば、天然に存在するホスファチド（例えば、レシチンのような））またはアルキレンオキシドと脂肪酸との縮合生成物（例えば、ポリオキシエチレンステアレートのような）、またはエチレンオキシドと長鎖脂肪族アルコールとの縮合生成物（例えば、ヘプタデカエチレンオキシセタノールのような）、またはエチレンオキシドと、脂肪酸およびヘキシトールから誘導される部分エステルとの縮合生成物（例えば、ポリオキシエチレンソルビトールモノオレエート）、またはエチレンオキシドと、脂肪酸およびヘキシトール無水物から誘導される部分エステルとの縮合生成物（例えば、ポリエチレンソルビタンモノオレエートのような）を含み得る。上記水性懸濁物はまた、１またはこれより多くの保存剤（例えば、ｐ－ヒドロキシ安息香酸エチルまたはｐ－ヒドロキシ安息香酸ｎ－プロピルのような）、１またはこれより多くの着色剤、１またはこれより多くの矯味矯臭剤、および１またはこれより多くの甘味剤（例えば、スクロースまたはサッカリン）を含み得る。

甘味剤（例えば、上記に示されるもの）および矯味矯臭剤は、嗜好性の高い経口調製物を提供するために添加され得る。これらの組成物は、抗酸化剤（例えば、アスコルビン酸）の添加によって保存され得る。

水の添加による水性懸濁物の調製に適した分散性の散剤および粒剤は、分散剤または湿潤剤、懸濁剤および１またはこれより多くの保存剤との混合状態で上記活性成分を提供し得る。適切な分散剤または湿潤剤および懸濁剤は、既に上記で言及されるものによって例示される。さらなる賦形剤（例えば、甘味剤、矯味矯臭剤および着色剤のような）も、存在してもよい。

シロップ剤およびエリキシル剤は、甘味剤（例えば、グリセロール、プロピレングリコール、ソルビトールまたはスクロースのような）とともに製剤化され得る。このような製剤はまた、粘滑剤、保存剤、ならびに矯味矯臭剤および着色剤を含み得る。

非経口投与のための組成物は、静脈内、筋肉内または髄腔内送達に適した滅菌媒体中に製剤化される。上記化合物の滅菌注射用調製物は、滅菌注射用液剤または滅菌注射用懸濁物の形態であり得る。非毒性の非経口的に受容可能な希釈剤または溶媒（例えば、１，３－ブタンジオールのような）は、非経口組成物を製剤化するために使用され得る。使用され得る受容可能なビヒクルおよび溶媒の中には、水、リンゲル液および等張性塩化ナトリウム溶液がある。さらに、滅菌した油はまた、溶媒または懸濁媒体として使用され得る。この目的のために、任意の刺激の少ない不揮発性油が使用され得る（合成モノグリセリドまたはジグリセリドが挙げられる）。さらに、脂肪酸（例えば、オレイン酸）は、注射物の調製において使用され得る。

上記製剤中の使用されるビヒクルおよび薬物濃度に応じて、非経口調製物は、他の補助物質（例えば、局所麻酔剤、保存剤および緩衝化剤）を含み得る。

本発明に従う薬学的組成物は、例えば、有効性を増大させるおよび／または副作用を減少させるために、１またはこれより多くのさらなる治療剤を含み得る。このような薬剤の例としては、免疫学的障害、炎症性障害、自己免疫障害またはアレルギー性障害を処置または阻害するための薬剤が挙げられるが、これらに限定されない。

ＳＥＴＢＰ１およびＸＰＯ１
Ｓｅｔｂｐ１およびＸＰＯ１は、ＨＥＫ２９３Ｔ細胞において互いと物理的に会合することが観察された。Ｓｅｔｂｐ１が、がん遺伝子Ｈｏｘａ９およびＨｏｘａ１０を活性化し得る転写調節因子であり、このような活性化が、骨髄系前駆細胞のＳｅｔｂｐ１活性化誘導性形質転換におそらく必須であることは、以前に示された（Ｏａｋｌｅｙ ｅｔ ａｌ．， Ｂｌｏｏｄ １１９（２５）：６０９９－６１０８ （２０１２））。ＳＥＴＢＰ１媒介性転写調節に決定的に関与する潜在的な補因子を同定しようとする試みにおいて、本発明者らは、ＸＰＯ１が、３×ＦＬＡＧタグ化野生型Ｓｅｔｂｐ１を発現させるＤＮＡ構築物でトランスフェクトしたＨＥＫ２９３Ｔ細胞の核抽出物から、ＦＬＡＧタグ特異的Ｍ２抗体を使用して効率的に免疫沈降され得ることを見出した。同様に、ＸＰＯ１はまた、ヒト白血病患者において同定された再発性ミスセンス変異（Ｄ８６８Ｎ）を有するＳｅｔｂｐ１変異体であるＳｅｔｂｐ１（Ｄ／Ｎ）によってプルダウンされ得る（図１Ａ）。さらに、両方のＦＬＡＧタグ化Ｓｅｔｂｐ１タンパク質はまた、これらの核抽出物からＸＰＯ１特異的抗体で効率的に免疫沈降され得る（図１Ａ）。これらの結果は、ＸＰＯ１が、複合体形成においてＳｅｔｂｐ１およびＳｅｔｂｐ１（Ｄ／Ｎ）の両方と会合し得ることを示唆する。

Ｓｅｔｂｐ１およびＸｐｏ１が、互いと直接的に相互作用し得るか否かを試験するために、Ｓｅｔｂｐ１、Ｓｅｔｂｐ１（Ｄ／Ｎ）、およびＸｐｏ１のｃＤＮＡを、ｐＣＭＶ－ＴＮＴベクターにクローニングし、コムギ胚芽抽出物を使用するインビトロ転写および翻訳を通じて、そのタンパク質を合成した。合成したＳｅｔｂｐ１タンパク質をその後、Ｘｐｏ１タンパク質とともに個々にインキュベートして、共免疫沈降によって潜在的な直接的相互作用を試験した（図１Ｂ）。顕著な量のＳｅｔｂｐ１およびＳｅｔｂｐ１（Ｄ／Ｎ）がともに、Ｘｐｏ１特異的抗体によってＸｐｏ１と一緒にプルダウンされることが観察された。これは、Ｓｅｔｂｐ１およびＳｅｔｂｐ１（Ｄ／Ｎ）の両方が、Ｘｐｏ１と直接的に相互作用することを強く示唆する（図１Ｂ）。

Ｘｐｏ１とＳｅｔｂｐ１およびＳｅｔｂｐ１（Ｄ／Ｎ）との物理的相互作用は、Ｘｐｏ１が、両方にとって、クロマチンへの結合によって転写を調節する補因子であることを示唆した（Ｃｏｎｗａｙ ｅｔ ａｌ．， Ｌｅｕｋｅｍｉａ ２９（２）： ４２３－４３２ （２０１５）；およびＯｋａ ｅｔ ａｌ．， Ｅｌｉｆｅ ５： ｅ０９５４０ （２０１６）。この可能性は、Ｘｐｏ１特異的抗体を使用して、３×ＦＬＡＧタグ化Ｓｅｔｂｐ１の発現によって不死化した骨髄系前駆細胞においてクロマチン免疫沈降（ＣｈＩＰ）アッセイによって試験した。Ｈｏｘａ９プロモーターの領域は、ＦＬＡＧ Ｍ２抗体によって生成した沈殿物に類似して、Ｘｐｏ１抗体によって調製した沈殿物において容易に検出された（図１Ｃ）。これは、Ｘｐｏ１がＳｅｔｂｐ１およびＳｅｔｂｐ１（Ｄ／Ｎ）と協働して、Ｓｅｔｂｐ１標的遺伝子の転写を直接的に調節するという考えを裏付ける。

ＸＰＯ１が、標的遺伝子転写を活性化するためにＳＥＴＢＰ１およびＳＥＴＢＰ１（Ｄ／Ｎ）にとって重要であるか否かを決定するために、Ｘｐｏ１発現を、２種の異なるレンチウイルスｓｈＲＮＡを使用してＳｅｔｂｐ１またはＳｅｔｂｐ１（Ｄ／Ｎ）によって不死化した骨髄系前駆細胞においてノックダウンし、Ｓｅｔｂｐ１標的遺伝子Ｈｏｘａ９、Ｈｏｘａ１０およびＭｙｂのｍＲＮＡレベルを、形質導入後５４時間で試験した。これらの細胞におけるレンチウイルスｓｈＲＮＡによるＸｐｏ１ノックダウンは、Ｈｏｘａ９、Ｈｏｘａ１０およびＭｙｂ ｍＲＮＡレベルならびにそれらのコロニー形成能力において顕著な低減を引き起こすことが観察された（図２Ａおよび２Ｂ、ならびに図３）。これらの結果は、ＸＰＯ１が、その標的遺伝子転写を活性化するために、Ｓｅｔｂｐ１の必須の補因子であることを強く示唆する。

Ｘｐｏ１は、ΦＸＸＸΦＸＸΦＸΦというコンセンサス（ここでΦは、疎水性残基（しばしば、ロイシンおよびイソロイシン）であり、Ｘは、任意の他のアミノ酸である）を有するそれらの核外移行シグナル（ＮＥＳ）を通じてそのカーゴタンパク質と相互作用することが公知である（Ｋｏｓｕｇｉ ｅｔ ａｌ．， Ｔｒａｆｆｉｃ ９（１２）： ２０５３－２０６２ （２００８）。２種の潜在的ＮＥＳを、コンセンサス配列に対する配列類似性に基づいてＳＥＴＢＰ１において同定した（図１Ｄ）。ＮＥＳが、Ｘｐｏ１との相互作用の媒介を担うか否かを決定するために、各ＮＥＳをその後、Ｓｅｔｂｐ１およびＳｅｔｂｐ１（Ｄ／Ｎ）においてそれらのロイシンおよびイソロイシン残基をアラニン残基で置き換えることによって、別個に、または一緒に変異させ、上記変異タンパク質が免疫沈降によってＨＥＫ２９３Ｔ細胞におけるＸＰＯ１と相互作用する能力を試験した（図１Ｅ）。Ｓｅｔｂｐ１およびそのＮＥＳ変異体間で、類似の細胞分布パターンを観察した。これは、ＮＥＳ変異が、Ｓｅｔｂｐ１の細胞局在に有意に影響を及ぼさないことを示唆する（図７）。Ｓｅｔｂｐ１およびＳｅｔｂｐ１（Ｄ／Ｎ）と同様に、ＮＥＳ１単一変異体－ Ｓｅｔｂｐ１－ＮＥＳ１およびＳｅｔｂｐ１（Ｄ／Ｎ）－ＮＥＳ１） －の両方が、ＸＰＯ１との結合の能力があった（図１Ｅ）。これは、ＮＥＳ１が、ＸＰＯ１との相互作用には必要とされないことを示唆する。対照的に、両方のＮＥＳ２単一変異体－（Ｓｅｔｂｐ１－ＮＥＳ２およびＳｅｔｂｐ１（Ｄ／Ｎ）－ＮＥＳ２）－、ならびにＮＥＳ１およびＮＥＳ２二重変異体－（Ｓｅｔｂｐ１－ＮＥＳ１＋２およびＳｅｔｂｐ１（Ｄ／Ｎ）－ＮＥＳ１＋２）－は、ＸＰＯ１と相互作用する能力を完全に失った（図１Ｅ）。これは、Ｓｅｔｂｐ１／Ｓｅｔｂｐ１（Ｄ／Ｎ）とＸｐｏ１との間の相互作用が、ＮＥＳ２によって媒介されることをさらに証明する。

Ｓｅｔｂｐ１／Ｓｅｔｂｐ１（Ｄ／Ｎ）とＸｐｏ１との間のＮＥＳ媒介性相互作用は、それがＸＰＯ１インヒビターによって遮断されるはずであることを示唆する。この考えを試験するために、Ｓｅｔｂｐ１およびＳｅｔｂｐ１（Ｄ／Ｎ）によって不死化した骨髄系前駆細胞におけるＨｏｘａ９／Ｈｏｘａ１０／Ｍｙｂ転写に対するＫＰＴ－１８５（選択的ＸＰＯ１インヒビター）の効果を試験した。Ｈｏｘａ９／Ｈｏｘａ１０／Ｍｙｂ ｍＲＮＡレベルは、ＫＰＴ－１８５での処理後２．５時間程度の早さで不死化細胞において有意にダウンレギュレートされることが観察された（図２Ｃ）。ＫＰＴ－１８５での処理はまた、これらの細胞によるコロニー形成を有意に阻害することが観察された（図４）。これは、処理した細胞における増大したアポトーシスおよび分化の誘導におそらく起因した（図５）。インビボでＳＥＴＢＰ１活性化を有する白血病を処置することにおけるＸＰＯ１阻害の潜在的有効性を試験するために、Ｓｅｔｂｐ１（Ｄ／Ｎ）によって誘導される原発性マウスＡＭＬを有するマウスを、移植し、レシピエントマウスを、移植後７日から開始して、２日ごとに１回、ＫＰＴ－３３０（Ｓｅｌｉｎｅｘｏｒとしても公知のＸＰＯ１の選択的インヒビター）またはビヒクルで処置した（図６）。ビヒクルで処置した全てのレシピエントマウスは、１７日間での白血病発生に起因して瀕死になった。対照的に、ＫＰＴ－３３０処置は、それらの生存時間の５０％までの延長を伴って、全ての白血病マウスの生存を有意に長期化することが観察された。まとめると、これらの結果は、Ｘｐｏ１との相互作用が、Ｈｏｘａ９／Ｈｏｘａ１０／Ｍｙｂ転写を活性化するために、Ｓｅｔｂｐ１およびＳｅｔｂｐ１（Ｄ／Ｎ）にとって重要であることを示唆する。結果として、ＸＰＯ１阻害は、ＳＥＴＢＰ１活性化を有する骨髄系新生物を処置するための有望な治療ストラテジーを表し得る。

ＳＥＴＢＰ１およびそのミスセンス変異体の発がん可能性は、おそらく、骨髄系前駆細胞の自己再生を誘導するそれらの能力に依存する。Ｓｅｔｂｐ１が標的遺伝子転写を活性化し、Ｘｐｏ１ノックダウンまたはＫＰＴ－１８５での処置によって潜在的に誘導される核外移行の全体的な阻害の非存在下で、骨髄系形質転換を誘導するために、Ｘｐｏ１が重要な補因子であるという考えをさらに試験するために、Ｓｅｔｂｐ１－ＮＥＳ２およびＳｅｔｂｐ１（Ｄ／Ｎ）－ＮＥＳ２が、造血幹細胞および前駆細胞に関して富化した精製マウスｌｉｎ－Ｓｃａ－１＋ｃ－ｋｉｔ＋（ＬＳＫ）細胞の連続再プレーティング活性を誘導する能力を、それらの野生型対応物との比較において評価した。Ｓｅｔｂｐ１－ＮＥＳ２またはＳｅｔｂｐ１（Ｄ／Ｎ）－ＮＥＳ２のいずれかを発現するレトロウイルスを形質導入した上記ＬＳＫ細胞は、変異タンパク質がそれらの野生型対応物に類似のレベルで検出され、上記形質導入された細胞の核にも存在するとしても（図８および９）、形質導入後７２時間で、空のウイルスが形質導入された細胞より有意により高いレベルのＨｏｘａ９／Ｈｏｘａ１０／Ｍｙｂ ｍＲＮＡを発現しないことが観察された（図２Ｄ）。対照的に、それらがＨｏｘａ９／Ｈｏｘａ１０／Ｍｙｂ転写を活性化できないことと一致して、Ｓｅｔｂｐ１－ＮＥＳ２またはＳｅｔｂｐ１（Ｄ／Ｎ）－ＮＥＳ２を発現する細胞はまた、２回目のプレーティングにおいていかなるコロニーをも形成しなかった（図２Ｅ）。これらの結果は、Ｓｅｔｂｐ１およびそのミスセンス変異体にとってＮＥＳ２を介したＸｐｏ１との相互作用が、転写活性化および白血病形質転換を誘導するために、必須であることを示唆する。

Ｓｅｔｂｐ１／Ｓｅｔｂｐ１（Ｄ／Ｎ）媒介性転写活性化は、Ｓｅｔｂｐ１／Ｓｅｔｂｐ１（Ｄ／Ｎ）誘導性形質転換に必須であり、その阻害は、予後不良と関連するＳＥＴＢＰ１活性化を有する骨髄系新生物を処置するための実行可能なストラテジーを表す。しかし、骨髄系前駆細胞におけるこの転写活性化を担う分子機構は、現在未知である。本明細書で記載されるように、Ｘｐｏ１は、転写を活性化するためにＳｅｔｂｐ１／Ｓｅｔｂｐ１（Ｄ／Ｎ）にとって重要な補因子であるようである。この考えは、Ｘｐｏ１とＳｅｔｂｐ１／Ｓｅｔｂｐ１（Ｄ／Ｎ）との間の直接的な物理的相互作用およびＳｅｔｂｐ１不死化細胞におけるＨｏｘａ９プロモーターにおけるそれらの共局在によって裏付けられる。さらに、Ｘｐｏ１ノックダウンまたはＸＰＯ１インヒビターでの処置のいずれかによるこの相互作用の破壊は、Ｈｏｘａ９、Ｈｏｘａ１０、およびＭｙｂを含む、Ｓｅｔｂｐ１／Ｓｅｔｂｐ１（Ｄ／Ｎ）標的のｍＲＮＡレベルにおける急速な低減を生じることが観察された。これらの低減は、Ｘｐｏ１カーゴ分子の核外移行を阻害するという二次的効果ではないようである。なぜならＸｐｏ１と相互作用できない変異体Ｓｅｔｂｐ１／Ｓｅｔｂｐ１（Ｄ／Ｎ）タンパク質はまた、Ｈｏｘａ９／Ｈｏｘａ１０／Ｍｙｂ転写、および骨髄系前駆細胞のその後の不死化を誘導しなかったからである。

実験
ＸＰＯ１の正常な機能を阻害することなく、ＳＥＴＢＰ１とＸＰＯ１との間の相互作用を遮断し得る低分子を同定するアプローチとして、ＮＥＳ２の周りのＳｅｔｂｐ１領域と相互作用し得る化合物をスクリーニングした。共免疫沈降によって、Ｓｅｔｂｐ１タンパク質のａ．ａ．８０５～ａ．ａ．１０２０にまたがりかつＮＥＳ２を含む、Ｓｅｔｂｐ１タンパク質の細菌合成したフラグメント（ポリペプチド２５－２０）（図１８）が、全長ＸＰＯ１との安定な相互作用を形成し得る（図１９）ことが発見された。ポリペプチド２５－２０と相互作用し得る低分子を同定するために、化合物ライブラリーを、Ｇｅｏｒｇｅｔｏｗｎ ＵｎｉｖｅｒｓｉｔｙのＢｉａｃｏｒｅ Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ Ｉｎｔｅｒａｃｔｉｏｎ Ｓｈａｒｅｄ Ｒｅｓｏｕｒｃｅとの契約を通じて、表面プラズモン共鳴（ＳＰＲ）ベースのＢｉａｃｏｒｅシステムを使用してスクリーニングした。このスクリーニングのために、Ｈｉｓタグ化ポリペプチド２５－２０を細菌において合成し、精製し、抗Ｈｉｓタグ抗体を使用してＣＭ５チップ表面に固定化し、ポリペプチド２５－２０に対する化合物の親和性を、化合物をチップ表面を通して流しながら測定した。コントロールとして、これらの化合物とＨｉｓタグ化ヒト血清アルブミン（ＨＳＡ）との相互作用もまた同様に評価した。２つの化合物ライブラリーを最初にスクリーニングした（１，２００を超える大部分が承認された薬物を含むＰｒｅｓｔｗｉｃｋライブラリーおよび２，５００を超える化合物を有するＮＣＩ Ｄｅｖｅｌｏｐｍｅｎｔａｌ Ｔｈｅｒａｐｅｕｔｉｃｓ Ｐｒｏｇｒａｍ（ＤＴＰ）ライブラリー）。合計で７７の化合物を、このスクリーニングにおいてＨＳＡに対するより少なくとも５０倍高い親和性でポリペプチド２５－２０に結合すると見出した。いくつかの化合物は、１μＭ濃度もしくはこれより低い濃度でＳｅｔｂｐ１によって不死化したマウス骨髄系前駆細胞の増殖を有意に阻害することが見出された。

プロトコール
化合物（１ＡＡ）のインビトロおよびインビボ試験． 骨髄系新生物に対する化合物１ＡＡの活性を、２０％ ウマ血清＋マウスＳｃｆ（５０ｎｇ／ｍｌ）およびＩｌ－３（１０ｎｇ／ｍｌ）を有するＩＭＤＭメチルセルロース培地上でＳｅｔｂｐ１／Ｓｅｔｂｐ１（Ｄ／Ｎ）不死化マウス骨髄系前駆細胞によるコロニー形成に対するその阻害効果を評価することによって、インビトロで先ず決定した。化合物１ＡＡのインビボ活性を、Ｓｅｔｂｐ１（Ｄ／Ｎ）誘導性白血病細胞を移植したマウスの脾臓サイズを低減し、生存を延ばすその能力を評価することによって評価した。白血病マウスの作製のために、Ｓｅｔｂｐ１（Ｄ／Ｎ）誘導性白血病を有する原発性レシピエントマウスの５×１０^５個の脾細胞を、各々致死量未満で照射した（^１３７Ｃｓ源から５５０ラド）Ｂ６－Ｌｙ５．２雌性マウスの尾静脈へと注射した。移植後１０日目から開始して、上記レシピエントマウスを、化合物（１ＡＡ）（３３ｍｇ／ｋｇ、生理食塩水中に溶解）または生理食塩水で、５回の腹腔内注射によって処置した。固形腫瘍に対する化合物１ＡＡの活性を、培養において種々のヒト固形腫瘍細胞株に対するその増殖阻害性効果を評価することによって決定する。具体的には、これらの細胞株の液体培養物の細胞ＡＴＰレベルを、系列希釈した濃度の化合物１ＡＡでの処理後７２時間で測定し、処理されていない細胞と比較する。

試験したマウス． Ｃ５７ＢＬ／６およびＢ６－Ｌｙ５．２雌性マウス（７～１２週齢； Ｃｈａｒｌｅｓ Ｒｉｖｅｒ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｉｅｓ， Ｗｉｌｍｉｎｇｔｏｎ， ＭＡ）を、Ｕｎｉｆｏｒｍｅｄ Ｓｅｒｖｉｃｅｓ Ｕｎｉｖｅｒｓｉｔｙ ｏｆ ｔｈｅ Ｈｅａｌｔｈ Ｓｃｉｅｎｃｅｓ（ＵＳＵＨＳ， Ｂｅｔｈｅｓｄａ， ＭＤ）のＣｅｎｔｅｒ ｆｏｒ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ ｏｆ Ａｎｉｍａｌ Ｍｅｄｉｃｉｎｅの動物施設において維持した。全てのマウス実験を、ＵＳＵＨＳ動物実験委員会によって承認されたプロトコールに従って行った。

レトロウイルス構築物およびレトロウイルスの作製． ３×ＦＬＡＧタグ化Ｓｅｔｂｐ１およびＳｅｔｂｐ１（Ｄ／Ｎ）タンパク質を発現するｐＭＹｓレトロウイルス構築物（ｐＭＹｓ－３×ＦＬＡＧ－Ｓｅｔｂｐ１－ＩＲＥＳ－ＧＦＰおよびｐＭＹｓ－３×ＦＬＡＧ－Ｓｅｔｂｐ１（Ｄ／Ｎ）－ＩＲＥＳ－ＧＦＰ）は、以前に記載された（Ｍａｋｉｓｈｉｍａ ｅｔ ａｌ．， Ｎａｔｕｒｅ Ｇｅｎｅｔｉｃｓ ４５（８）： ９４２－９４６ （２０１３）； Ｎｇｕｙｅｎ ｅｔ ａｌ．， Ｏｎｃｏｔａｒｇｅｔ ７（５２）： ８６３００－８６３１２ （２０１６））。ＮＥＳ１およびＮＥＳ２変異を、ＱｕｉｃｋＣｈａｎｇｅ ＩＩ部位指向性変異誘発キット（Ａｇｉｌｅｎｔ Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｉｅｓ， Ｓａｎｔａ Ｃｌａｒａ， ＣＡ）を使用して作製し、変異ｃＤＮＡをまた、ｐＭＹｓ－ＩＲＥＳ－ＧＦＰベクターへとクローニングした。高力価レトロウイルスを、Ｆｕｇｅｎｅ－６（Ｒｏｃｈｅ， Ｉｎｄｉａｎａｐｏｌｉｓ， ＩＮ）を使用して、Ｐｌａｔ－Ｅ細胞の一過性のトランスフェクションによって生成した。ウイルス力価を、系列希釈およびＮＩＨ－３Ｔ３細胞の感染によって評価した。レンチウイルスの作製に関しては、ｐＬＫＯ．１レンチウイルス構築物を、Ｓｉｇｍａ Ａｌｄｒｉｃｈから購入した（ＮＣ－ｓｈ， ＳＨＣ００２； Ｘｐｏ１－ｓｈ１， ＴＲＣＮ００００１２６５７８； Ｘｐｏ１－ｓｈ２， ＴＲＣＮ００００１５１５７９）。感染性レンチウイルスを、以前に記載されるように作製した（Ｏａｋｌｅｙ ｅｔ ａｌ．， Ｂｌｏｏｄ １１９（２５）： ６０９９－６１０８ （２０１２）。

免疫沈降． ＨＥＫ２９３Ｔ細胞を、ＬｉｐｏＤ２９３（ＳｉｇｎａＧｅｎ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｉｅｓ， Ｒｏｃｋｖｉｌｌｅ， ＭＤ）を使用して、示された発現構築物でトランスフェクトし、核抽出物を、Ｎｕｃｌｅａｒ Ｃｏｍｐｌｅｘ Ｃｏ－ＩＰキット（Ａｃｔｉｖｅ Ｍｏｔｉｆ， Ｃａｒｌｓｂａｄ， ＣＡ）を使用して、トランスフェクションの４８時間後に単離した。核溶解物を、４μｇの抗Ｆｌａｇ Ｍ２（Ｓｉｇｍａ Ａｌｄｒｉｃｈ， Ｓｔ． Ｌｏｕｉｓ， ＭＯ）または抗ＸＰＯ１（ＮＢ１００－７９８０２， Ｎｏｖｕｓ Ｂｉｏｌｏｇｉｃａｌ， Ｃｅｎｔｅｎｎｉａｌ， ＣＯ）のいずれかとともに、４℃において４時間インキュベートした。その後、ＤｙｎａｂｅａｄｓプロテインＡ（Ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎ， Ｃａｒｌｓｂａｄ， ＣＡ）を、上記核溶解物／抗体混合物に添加し、４℃でさらに２時間インキュベートした。免疫沈降したタンパク質を溶離し、ウェスタンブロット分析によって分析した。インビトロ転写および翻訳したタンパク質を使用する免疫沈降実験に関しては、相当するｃＤＮＡを、ｐＣＭＶ－ＴＮＴへとクローニングし、ＴｎＴ Ｔ７ Ｃｏｕｐｌｅｄ Ｗｈｅａｔ Ｇｅｒｍ Ｅｘｔｒａｃｔ（Ｐｒｏｍｅｇａ， Ｍａｄｉｓｏｎ， ＷＩ）システムを、製造業者の説明書に従って使用した。

不死化骨髄系前駆細胞の細胞培養試験． ３×ＦＬＡＧタグ化Ｓｅｔｂｐ１およびＳｅｔｂｐ１（Ｄ／Ｎ）によって不死化したマウス骨髄系前駆細胞を作製し、それぞれ、ｐＭＹｓ－３×ＦＬＡＧ－Ｓｅｔｂｐ１－ＩＲＥＳ－ＧＦＰおよびｐＭＹｓ－３×ＦＬＡＧ－Ｓｅｔｂｐ１（Ｄ／Ｎ）－ＩＲＥＳ－ＧＦＰウイルスを使用して、以前に記載されるように維持した（Ｏａｋｌｅｙ ｅｔ ａｌ．， Ｂｌｏｏｄ １１９（２５）： ６０９９－６１０８ （２０１２）。これらの不死化細胞のレンチウイルス形質導入を、レンチウイルスおよび標的細胞の混合物を２０００×ｇで９０分間、３７℃において遠心するスピン播種（ｓｐｉｎｏｃｕｌａｔｉｏｎ）によって行った。形質導入した細胞を、レンチウイルス形質導入後２４時間で、２４時間にわたるピューロマイシン（２μｇ／ｍｌ）による処理によって選択した。形質導入した細胞のコロニー形成アッセイを、２０％ ウマ血清、マウスＳｃｆ（１００ｎｇ／ｍｌ）およびＩｌ－３（１０ｎｇ／ｍｌ）、ならびにピューロマイシン（２μｇ／ｍｌ）を補充したＩＭＤＭメチルセルロース培地上で１×１０^４個のピューロマイシン耐性細胞を使用して感染後４８時間で行い、７日後にコロニー数を計数した。液体培養物中のＫＰＴ－１８５（Ｓｅｌｌｅｃｋ Ｃｈｅｍｉｃａｌｓ， Ｈｏｕｓｔｏｎ， ＴＸ）の効果を試験するために、不死化細胞を、２．５×１０^５細胞／ｍｌの濃度で処理した。アポトーシスの検出を、ＰＥ Ａｎｎｅｘｉｎ Ｖ Ａｐｏｐｔｏｓｉｓ Ｄｅｔｅｃｔｉｏｎ Ｋｉｔ（ＢＤ Ｂｉｏｓｃｉｅｎｃｅｓ）を使用して行った。ＫＰＴ－１８５を、不死化細胞によるコロニー形成に対するその効果を評価するために、メチルセルロース培地に直接添加した。

骨髄移植およびＫＰＴ－３３０でのインビボ処置． 白血病マウスの作製のために、Ｓｅｔｂｐ１（Ｄ／Ｎ）誘導性白血病を有する原発性のレシピエントマウスの１×１０^６個の脾細胞を、各々致死的に照射した（^１３７Ｃｓ源から１１００ラド）Ｂ６－Ｌｙ５．２雌性マウスの尾静脈に、７．５×１０^５個の非照射Ｂ６－Ｌｙ５．２マウス由来支援骨髄細胞とともに注射した。移植後７日目から開始して、上記レシピエントマウスを、ＫＰＴ－３３０（２０ｍｇ／ｋｇ、２％ＤＭＳＯ／４９％ＰＥＧ３００／ｄｄＨ_２Ｏ中に溶解）またはビヒクルで、２日ごとに１回の経口強制投与によって処置した。ＫＰＴ－３３０は、Ｓｅｌｌｅｃｋ Ｃｈｅｍｉｃａｌｓから購入した。

マウスＬＳＫ細胞の精製および形質導入． ＬＳＫ細胞を、以前に記載されるように、Ｃ５７ＢＬ／６マウスから精製した（Ｖｉｓｈｗａｋａｒｍａ ｅｔ ａｌ．， Ｌｅｕｋｅｍｉａ ３０（１）： ２００－２０８ （２０１６）。精製ＬＳＫ細胞を、培地［１５％ ウシ胎仔血清およびマウスＳｃｆ（１００ｎｇ／ｍｌ）、Ｉｌ－３（６ｎｇ／ｍｌ）およびＩｌ－６（１０ｎｇ／ｍｌ）を有するＤＭＥＭ］中で、２４時間先ず培養して、それらの増殖を刺激し、その後、高力価ｐＭＹｓレトロウイルスを、レトロネクチンコーティングしたプレート上で４８時間、同じ培地中で２回感染させた。

免疫蛍光． レトロウイルス形質導入後７２時間でＧＦＰソートしたＬＳＫ細胞を、ポリ－Ｌ－リジンコーティング顕微鏡用スライド上に２％ パラホルムアルデヒドで固定した。固定した細胞を、０．０５％ Ｔｒｉｔｏｎ Ｘ－１００で透過化し、１０％ 正常ヤギ血清および１％ ＢＳＡで３０分間ブロッキングした。次いで、細胞を、抗ＦＬＡＧ Ｍ２（Ｓｉｇｍａ）とともに、室温で３時間インキュベートした。ＰＢＳで洗浄した後、細胞を、Ａｌｅｘａ－Ｆｌｕｏｒ ５５５ヤギ抗マウス二次抗体（Ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎ）とともに、室温で１時間インキュベートした。核を、ＤＡＰＩを使用して対比染色し、Ｆｌｕｏｒｏｍｏｕｎｔ Ｇ（Ｅｌｅｃｔｒｏｎ Ｍｉｃｒｏｓｃｏｐｙ Ｓｃｉｅｎｃｅｓ， Ｈａｔｆｉｅｌｄ， ＰＡ）でスライドに固定した。ＬＳＭ ７１０走査型共焦点顕微鏡（Ｚｅｉｓｓ， Ｇｅｒｍａｎｙ）を使用して、画像を取得した。

クロマチン免疫沈降． ３×ＦＬＡＧタグ化Ｓｅｔｂｐ１およびＳｅｔｂｐ１（Ｄ／Ｎ）によって不死化したマウス骨髄系前駆細胞を、記載されるように作製した（Ｏａｋｌｅｙ ｅｔ ａｌ．， Ｂｌｏｏｄ １１９（２５）： ６０９９－６１０８ （２０１２）。ＣｈＩＰ分析を、ＣｈＩＰ－ＩＴ Ｅｘｐｒｅｓｓキット（Ａｃｔｉｖｅ Ｍｏｔｉｆ， Ｃａｒｌｓｂａｄ， ＣＡ）を使用して行った。免疫沈降を、抗ＦＬＡＧ Ｍ２（Ｓｉｇｍａ－Ａｌｄｒｉｃｈ， Ｓｔ． Ｌｏｕｉｓ， ＭＯ）、抗ＸＰＯ１抗体（Ｎｏｖｕｓ Ｂｉｏｌｏｇｉｃａｌ）、マウスＩｇＧ（Ｇ３Ａ１、５４１５Ｓ、Ｃｅｌｌ Ｓｉｇｎａｌｉｎｇ Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｉｅｓ， Ｄａｎｖｅｒｓ， ＭＡ）、ウサギＩｇＧ（２７２９Ｓ， Ｃｅｌｌ Ｓｉｇｎａｌｉｎｇ Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｉｅｓ）を使用して行った。クロマチンＤＮＡを、Ａｃｔｉｖｅ Ｍｏｔｉｆ ＰＣＲ Ｐｕｒｉｆｉｃａｔｉｏｎ Ｋｉｔ（Ａｃｔｉｖｅ Ｍｏｔｉｆ）を使用して精製し、リアルタイムＰＣＲによって定量した。Ｈｏｘａ９プロモーターにおいて使用したＣｈＩＰプライマーは、以前に記載された（Ｋｕｏ ｅｔ ａｌ．， Ｃａｎｃｅｒ Ｃｅｌｌ ２４（４）： ４２３－４３７ （２０１３）。

ウェスタンブロット分析． ウェスタンブロット分析のために、全細胞溶解物を、加熱した２×ＳＤＳサンプル緩衝液中での細胞ペレットの直接溶解によって調製した。サンプルを、３－８％ トリス－酢酸ゲル（Ｌｉｆｅ Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｉｅｓ， Ｃａｒｌｓｂａｄ， ＣＡ）上で分離し、続いて、ニトロセルロース膜（Ｂｉｏ－Ｒａｄ， Ｈｅｒｃｕｌｅｓ， ＣＡ）上に転写した。使用した一次抗体は、抗Ｓｅｔｂｐ１（１６８４１－１ＡＰ， Ｐｒｏｔｅｉｎｔｅｃｈ， Ｃｈｉｃａｇｏ， ＩＬ）、抗ＸＰＯ１（Ｈ－７， ＳＣ－３７４１２４， Ｓａｎｔａ Ｃｒｕｚ Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ， Ｄａｌｌａｓ， ＴＸ）、および抗ＧＡＰＤＨ（６０００４－１－Ｉｇ， Ｐｒｏｔｅｉｎｔｅｃｈ）を含む。使用した二次抗体は、ヤギ抗ウサギＩｇＧ－ＨＲＰ（（７０７４Ｓ， Ｃｅｌｌ Ｓｉｇｎａｌｉｎｇ Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｉｅｓ）および抗マウスＩｇＧ－ＨＲＰ（Ａ－９０４４， Ｓｉｇｍａ Ａｌｄｒｉｃｈ）を含む。タンパク質バンドを、ＳｕｐｅｒＳｉｇｎａｌ Ｗｅｓｔ化学発光基質（Ｐｉｅｒｃｅ， Ｔｈｅｒｍｏ Ｆｉｓｈｅｒ Ｓｃｉｅｎｔｉｆｉｃ， Ｒｏｃｋｆｏｒｄ， ＩＬ）とのインキュベーションによって可視化した。

リアルタイムＲＴ－ＰＣＲ． リアルタイムＲＴ－ＰＣＲのために、全ＲＮＡを、Ｎｕｃｌｅｏｓｐｉｎ ＲＮＡ（Ｃｌｏｎｔｅｃｈ， Ｄｕｒｅｎ， Ｇｅｒｍａｎｙ）を使用して細胞から抽出した。Ｏｌｉｇｏ－ｄＴプライミングしたｃＤＮＡサンプルを、Ｓｕｐｅｒｓｃｒｉｐｔ ＩＩＩ（Ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎ）を使用して調製し、リアルタイムＰＣＲ分析を、ＱｕａｎｔＳｔｕｄｉｏリアルタイムＰＣＲシステム（Ａｐｐｌｉｅｄ Ｂｉｏｓｙｓｔｅｍｓ， Ｆｏｓｔｅｒ Ｃｉｔｙ， ＣＡ）で、ＳＹＢＲ ｇｒｅｅｎ検出試薬（Ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎ）を使用して三連で行った。発現における相対的変化を、ΔΔＣｔ法に従って計算した。サイクリング条件は、５０℃で２分間、続いて、９５℃で２分間、次いで、９５℃で１５秒間および６０℃で１分間の４０サイクルであった。以下の遺伝子特異的プライマー配列を使用した： Ｈｏｘａ９ Ｓ， ５’ ＴＧＴ ＣＴＣ ＣＴＣ ＴＣＣ ＣＣＣ ＡＡＡ ＣＣ ３’； Ｈｏｘａ９ ＡＳ， ５’ ＧＡＧ ＡＴＧ ＡＧＧ ＣＣＴ ＧＧＧ ＡＴＴＴＡＧ Ａ ３’； Ｈｏｘａ１０ Ｓ， ５’ ＣＣＡ ＧＣＣ ＣＴＧ ＧＧＴ ＡＡＡ ＣＴＴ ＡＧＣ ３’； Ｈｏｘａ１０ ＡＳ， ５’ ＣＡＴＴＧＡ ＣＣＴ ＣＡＧ ＧＣＣ ＡＧＡ ＣＡ ３’； Ｍｙｂ Ｓ， ５’ ＣＣＡ ＴＧＡ ＡＡＧ ＣＴＣ ＧＧＧ ＣＴＴ ＡＧ ３’； Ｍｙｂ ＡＳ， ５’ ＣＴＣ ＧＡＣ ＡＴＧ ＧＴＧ ＴＣＡ ＧＴＴ ＧＴＧ ３’； β－アクチン Ｓ， ５’ ＣＣＴ ＣＣＣ ＴＧＧ ＡＧＡ ＡＧＡ ＧＣＴ Ａ ３’； β－アクチン ＡＳ， ５’ ＴＣＣ ＡＴＡ ＣＣＣ ＡＡＧ ＡＡＧ ＧＡＡ Ｇ ３’； Ｇａｐｄｈ Ｓ， ５’ ＡＧＧ ＴＣＧ ＧＴＧ ＴＧＡ ＡＣＧ ＧＡＴ ＴＴＧ ３’； Ｇａｐｄｈ ＡＳ， ５’ ＴＧＴＡＧＡＣＣＡＴＧＴＡＧＴＴＧＡＧＧＴＣＡ ３’。

統計分析． サンプルサイズおよび動物数を、以前の経験によって決定した。どのサンプルも、分析から排除しなかった。全てのデータを、生存曲線をログランク検定によって比較したことを除いて、両側スチューデントｔ検定によって分析した。研究者は、サンプル収集および分析の間に盲検化しなかった。

考察
式１の代表的化合物としての化合物（１ＡＡ）は、Ｓｅｔｂｐ１不死化細胞（図１０）およびＳｅｔｂｐ１（Ｄ／Ｎ）不死化細胞（図１１）において、コロニー形成を阻害し、分化／細胞傷害性を誘導することが観察された。さらに、化合物（１ＡＡ）は、それぞれ、Ｓｅｔｂｐ１不死化細胞およびＳｅｔｂｐ１（Ｄ／Ｎ）不死化細胞において処置後１２時間で、Ｈｏｘａ９、Ｈｏｘａ１０およびＭｙｂのＳｅｔｂｐ１（図１２）およびＳｅｔｂｐ１（Ｄ／Ｎ）（図１３）標的転写レベルを低減した。

化合物（１ＡＡ）はまた、化合物スクリーニングのデザインから予測されるように、ＨＥＫ２９３Ｔ細胞においてＳｅｔｂｐ１（Ｄ／Ｎ）とＸＰＯ１との間の相互作用を破壊することが観察された（図２０）。さらに、化合物（１ＡＡ）は、脾臓サイズを有意に低減し、Ｓｅｔｂｐ１活性化によって誘導されるＡＭＬを発症しているマウスの生存を延ばした（図２１）。ＸＰＯ１は、遍在的に発現され、ＳＥＴＢＰ１は、造血系以外の多くの組織および細胞タイプにおいて検出されているので、多くの固形腫瘍タイプの生存および／または増殖が、それらの物理的相互作用を必要とし、従って、化合物（１ＡＡ）に感受性であることは、非常にあり得る。固形腫瘍に対する化合物（１ＡＡ）の阻害活性は、培養においてヒト固形腫瘍細胞株に対するその増殖阻害効果を評価することによって検出されている。

式２の代表的化合物としての化合物（２ＡＡ）は、Ｓｅｔｂｐ１不死化細胞（図１４）およびＳｅｔｂｐ１（Ｄ／Ｎ）不死化細胞（図１５）において、コロニー形成を阻害し、分化／細胞傷害性を誘導することが観察された。さらに、化合物（２ＡＡ）は、Ｓｅｔｂｐ１不死化細胞およびＳｅｔｂｐ１（Ｄ／Ｎ）不死化細胞においてそれぞれ、処置後１２時間でＨｏｘａ９、Ｈｏｘａ１０およびＭｙｂのＳｅｔｂｐ１（図１６）およびＳｅｔｂｐ１（Ｄ／Ｎ）（図１７）の標的転写レベルを低減した。

本明細書で引用される全ての特許および刊行物は、それらの全体において参考として援用される。
例えば、本発明は、以下の項目を提供する。
（項目１）
被験体において骨髄系新生物または固形腫瘍を処置するための方法であって、前記方法は、必要性のある被験体に、治療有効量の式（１）の化合物：

を投与する工程を含み、ここで：
Ｒ _１ は、－ＯＲ _８ であり；
Ｒ _２ 、Ｒ _３ およびＲ _６ は、Ｈであり；
Ｒ _４ およびＲ _５ は、独立して、Ｃ _１－４ アルキルであり；
Ｒ _７ は、－ＮＲ _１０ Ｒ _１０ またはピペリジニル基であり；
Ｌは、－（ＣＲ _９ Ｒ _９ ） _ｎ －であり；
Ｘ ^－ は、有機アニオンまたは無機アニオンであり；
Ｒ _８ は、ＨまたはＣ _１－３ アルキルであり；
各Ｒ _９ は、独立して、ＨまたはＣ _１－３ アルキルであり；
各Ｒ _１０ は、独立して、ＨまたはＣ _１－３ アルキルであり；そして
ｎは、１、２、３または４である、
方法。
（項目２）
Ｘは、Ｆ、Ｃｌ、ＢｒおよびＩからなる群より選択される、項目１に記載の方法。
（項目３）
Ｒ _１ は、－ＯＲ _８ であり；
Ｒ _２ 、Ｒ _３ 、Ｒ _６ 、Ｒ _８ およびＲ _９ は、Ｈであり；
Ｒ _４ およびＲ _５ は、ＣＨ _３ であり；
Ｒ _７ は、ピペリジニル基であり；
Ｌは、－（ＣＲ _９ Ｒ _９ ） _ｎ －であり；
Ｘは、Ｆ、Ｃｌ、ＢｒおよびＩからなる群より選択され；そして
ｎは、１、２、３または４である、
項目１に記載の方法。
（項目４）
Ｒ _１ は、－ＯＲ _８ であり；
Ｒ _２ 、Ｒ _３ 、Ｒ _６ 、Ｒ _８ およびＲ _９ は、Ｈであり；
Ｒ _４ およびＲ _５ は、ＣＨ _３ であり；
Ｒ _７ は、－ＮＲ _１０ Ｒ _１０ であり；
各Ｒ _１０ は、独立して、Ｃ _１－３ アルキルであり；
Ｌは、－（ＣＲ _９ Ｒ _９ ） _ｎ －であり；
Ｘは、Ｆ、Ｃｌ、ＢｒおよびＩからなる群より選択され；そして
ｎは、１、２、３または４である、
項目１に記載の方法。
（項目５）
式（１）の化合物は、式（１Ａ）の化合物：

であり、ここでＸは、Ｆ、Ｃｌ、ＢｒおよびＩからなる群より選択される、項目１に記載の方法。
（項目６）
式（１）の化合物は、化合物（１ＡＡ）：

である、項目１に記載の方法。
（項目７）
式（１）の化合物は、式（１Ｂ）の化合物：

であり、ここでＸは、Ｆ、Ｃｌ、ＢｒおよびＩからなる群より選択される、項目１に記載の方法。
（項目８）
式（１）の化合物は、化合物（１ＢＢ）：

である、項目１に記載の方法。
（項目９）
前記方法は、骨髄系新生物を処置するためのものである、項目１に記載の方法。
（項目１０）
前記方法は、固形腫瘍を処置するためのものである、項目１に記載の方法。
（項目１１）
被験体において骨髄系新生物または固形腫瘍を処置するための方法であって、前記方法は、必要性のある被験体に、治療有効量の式（２Ａ）の化合物：

を投与する工程を含み、ここでＨＡは、プロトンドナーである、
方法。
（項目１２）
ＨＡは、塩酸、臭化水素酸、硫酸、リン酸および硝酸からなる群より選択される、項目１１に記載の方法。
（項目１３）
式（２Ａ）の化合物は、化合物（２ＡＡ）：

である、項目１１に記載の方法。
（項目１４）
前記方法は、骨髄系新生物を処置するためのものである、項目１１に記載の方法。
（項目１５）
前記方法は、固形腫瘍を処置するためのものである、項目１１に記載の方法。
（項目１６）
前記骨髄系新生物または前記固形腫瘍は、ＳＥＴＢＰ１活性化と関連する、項目１または１１に記載の方法。
（項目１７）
前記骨髄系新生物は、急性骨髄性白血病（ＡＭＬ）、慢性骨髄単球性白血病（ＣＭＭＬ）、若年性骨髄単球性白血病（ＪＭＭＬ）、慢性骨髄性白血病急性転化（ＣＭＬ－ＢＣ）、非定型慢性骨髄性白血病（ａＣＭＬ）、二次性急性骨髄性白血病（ｓＡＭＬ）、骨髄異形成症候群（ＭＤＳ）および慢性好中球性白血病（ＣＮＬ）からなる群より選択される、項目１６に記載の方法。
（項目１８）
前記固形腫瘍は、乳がん、結腸直腸がん、肺がん、卵巣がん、前立腺がん、皮膚がん、肝臓がん、膵臓がん、腎臓がん、子宮内膜がん、食道がん、胃がん、および頭頚部がんからなる群より選択される、項目１６に記載の方法。
（項目１９）
前記化合物は、１またはこれより多くの賦形剤を含む薬学的組成物中に存在する、項目１または１１に記載の方法。
（項目２０）
配列番号１のアミノ酸配列を含む２４０アミノ酸の単離されたポリペプチド。
（項目２１）
前記ポリペプチドは、配列番号１のアミノ酸配列からなる、項目２０に記載の単離されたポリペプチド。
（項目２２）
前記ポリペプチドは、配列番号１のアミノ酸２４～２４０からなる、項目２０に記載の単離されたポリペプチド。
（項目２３）
配列番号１のアミノ酸配列を含む２４０アミノ酸の単離されたポリペプチドを含む試薬組成物。
（項目２４）
前記ポリペプチドは、配列番号１のアミノ酸配列からなる、項目２３に記載の試薬組成物。
（項目２５）
前記ポリペプチドは、配列番号１のアミノ酸２４～２４０からなる、項目２４に記載の試薬組成物。

Claims (12)

1. ＳＥＴＢＰ１とＸＰＯ１との間の相互作用を遮断することによって被験体において骨髄系新生物または固形腫瘍を処置するための組成物であって、式（１ＡＡ）の化合物：
   

   

   
   を含む、組成物。
2. 前記組成物は、骨髄系新生物を処置するためのものである、請求項１に記載の組成物。
3. 前記組成物は、固形腫瘍を処置するためのものである、請求項１に記載の組成物。
4. 被験体において骨髄系新生物または固形腫瘍を処置するための組成物であって、式（２Ａ）の化合物：
   
   を含み、ここでＨＡは、プロトンドナーである、組成物。
5. ＨＡは、塩酸、臭化水素酸、硫酸、リン酸および硝酸からなる群より選択される、請求項４に記載の組成物。
6. 式（２Ａ）の化合物は、化合物（２ＡＡ）：
   
   である、請求項４に記載の組成物。
7. 前記組成物は、骨髄系新生物を処置するためのものである、請求項４に記載の組成物。
8. 前記組成物は、固形腫瘍を処置するためのものである、請求項４に記載の組成物。
9. 前記骨髄系新生物または前記固形腫瘍は、ＳＥＴＢＰ１活性化と関連する、請求項１または４に記載の組成物。
10. 前記骨髄系新生物は、急性骨髄性白血病（ＡＭＬ）、慢性骨髄単球性白血病（ＣＭＭＬ）、若年性骨髄単球性白血病（ＪＭＭＬ）、慢性骨髄性白血病急性転化（ＣＭＬ－ＢＣ）、非定型慢性骨髄性白血病（ａＣＭＬ）、二次性急性骨髄性白血病（ｓＡＭＬ）、骨髄異形成症候群（ＭＤＳ）および慢性好中球性白血病（ＣＮＬ）からなる群より選択される、請求項９に記載の組成物。
11. 前記固形腫瘍は、乳がん、結腸直腸がん、肺がん、卵巣がん、前立腺がん、皮膚がん、肝臓がん、膵臓がん、腎臓がん、子宮内膜がん、食道がん、胃がん、および頭頚部がんからなる群より選択される、請求項９に記載の組成物。
12. 前記組成物は、１またはこれより多くの賦形剤を含む薬学的組成物中に存在する、請求項１または４に記載の組成物。