JP7303540B2 - 角質細胞のメラニンの染色液とそれを利用した染色方法 - Google Patents
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(1)フェリシアン化カリウム、塩化第二鉄及び非イオン性界面活性剤を含有することを特徴とするメラニンの染色液。
(2)非イオン性界面活性剤の濃度が0.5~10W/V%の濃度である(1)記載のメラニンの染色液。
(3)フェリシアン化カリウムの濃度が0.1~0.5W/V%の濃度である(1)又は(2)記載のメラニンの染色液。
(4)塩化第二鉄の濃度が0.5~2.0W/V%の濃度である(1)~(3)いずれか記載のメラニンの染色液。
(5)非イオン性界面活性剤がポリオキシエチレン(10)オクチルフェニルエーテル又はポリオキシエチレンソルビタンモノラウレートである(1)~(4)いずれか記載のメラニンの染色液。
(6)染色する対象物が角質細胞である(1)~(5)いずれか記載のメラニンの染色液を利用したメラニンの染色方法。
本願発明で使用する染色液は、非イオン性界面活性剤、フェリシアン化カリウム及び塩化第二鉄の3種の混合水溶液であることを特徴とする。
本願発明で使用する非イオン性界面活性剤は、例えば、ポリオキシエチレンアルキルエーテル、ポリオキシエチレンアルキルフェニルエーテル、ポリオキシエチレンソルビタン脂肪酸エステル、ポリオキシエチレンソルビトール脂肪酸エステル、ポリオキシエチレン脂肪酸エステル、ポリグリセリン脂肪酸エステル、ショ糖脂肪酸エステル、ソルビタン脂肪酸エステル、脂肪酸アルカノールアミド、ポリオキシエチレン硬化ヒマシ油等が挙げられるが、フェリシアン化カリウムと塩化第二鉄の混合水溶液に添加できれば特に限定されない。好ましくは、ポリオキシエチレンアルキルエーテル及びポリオキシエチレンソルビタン脂肪酸エステルがよい。さらに好ましくは、ポリオキシエチレン(10)オクチルフェニルエーテル及びポリオキシエチレンソルビタンモノラウレートがよい。
本願発明で使用するフェリシアン化カリウムの含有濃度は、最終濃度が0.1~0.5W/V%であることが好ましい。フェリシアン化カリウムの最終濃度は、染色の目的に応じて変えることができる。
本願発明で使用する塩化第二鉄の含有濃度は、最終濃度が0.5~2.0W/V%であることが好ましい。塩化第二鉄の最終濃度は、染色の目的に応じて変えることができる。
本願発明の染色方法は、上記非イオン性界面活性剤、フェリシアン化カリウム及び塩化第二鉄の3種を混合水溶液とした染色液を利用した染色方法であり、この染色液中で5分以上処理するのであれば特に時間は限定されない。染色の目的に応じて染色時間は変えることができるが、好ましくは、5~10分がよい。本願発明の染色液とそれを利用した染色方法で染色できる標本としては、通常の生体組織標本であれば特に限定なく使用することができる。好ましくは、皮膚がよく、さらに、テープストリップのように粘着性の媒体を皮膚に接触させ得られた角質細胞が最も好ましい。
両面粘着性の透明テープを用い、テープの片面を塩化ビニル製のプレートに貼付、固定したものを使用した。残った粘着面をヒト前腕内側部の皮膚に密着させ、剥離することにより角質細胞のサンプルを採取し、標本を得た。この標本は、2.0W/V%ポリオキシエチレン(10)オクチルフェニルエーテル、0.25W/V%フェリシアン化カリウム、0.75%塩化第二鉄の混合水溶液で5分間染色した(実施例3)。一方、上記に対し、濃度の異なる非イオン性界面活性剤が添加された混合水溶液を用いて染色に対する影響を比較した(実施例1~2、4~5、比較例1~2)。染色後のメラニンの観察結果を表1に示した。メラニンは、光学顕微鏡を用いて、総合倍率100~1000倍で染色した標本の観察を行い、メラニンの染色状態及び背景の染色状態を評価した。染色液にポリオキシエチレン(10)オクチルフェニルエーテルを添加することにより、染色状態が格段に改善されることが示された(図1~2)。
染色する標本は、(1)と同様にして作製した。基準となる標本は、2.0W/V%ポリオキシエチレンソルビタンモノラウレート、0.25W/V%フェリシアン化カリウム、0.75W/V%塩化第二鉄の混合水溶液で10分間染色した(実施例6)。一方、上記に対し、種類の異なる界面活性剤が添加された混合水溶液を用いて界面活性剤の種類による染色に対する影響を比較した(比較例3~5)。染色後のメラニンの観察結果を表2に示した。メラニンは、光学顕微鏡を用いて、総合倍率100~1000倍で染色した標本の観察を行い、メラニンの染色状態及び背景の染色状態を評価した。ポリオキシエチレンソルビタンモノラウレートを添加した時にメラニンは染色状態が良好であることが示された。
染色する標本は、(1)と同様にして作製した。基準となる標本は、2.0W/V%ポリオキシエチレン(10)オクチルフェニルエーテル、0.25W/V%フェリシアン化カリウム、0.75W/V%塩化第二鉄の混合水溶液で5分間染色した(実施例8)。一方、上記に対し、濃度を変えたフェリシアン化カリウムを用いてフェリシアン化カリウムの濃度による染色に対する影響を比較した(実施例7、9、比較例6~7)。染色後のメラニンの観察結果を表3に示した。メラニンは、光学顕微鏡を用いて、総合倍率100~1000倍で染色した標本の観察を行い、メラニンの染色状態及び背景の染色状態を評価した。フェリシアン化カリウムが低濃度、もしくは高濃度である場合は染色状態が不良であるが、0.1~0.5W/V%の濃度範囲内では染色状態が良好であることが示された。
染色する標本は、(1)と同様にして作製した。基準となる標本は、2.0W/V%ポリオキシエチレン(10)オクチルフェニルエーテル、0.25W/V%フェリシアン化カリウム、0.75W/V%塩化第二鉄の混合水溶液で5分間染色した(実施例11)。一方、上記に対し、濃度を変えた塩化第二鉄を用いて塩化第二鉄の濃度による染色に対する影響を比較した(実施例10、12、比較例8~9)。染色後のメラニンの観察結果を表4に示した。メラニンは、光学顕微鏡を用いて、総合倍率100~1000倍で染色した標本の観察を行い、メラニンの染色状態及び背景の染色状態を評価した。塩化第二鉄が低濃度、もしくは高濃度である場合は染色状態が不良であるが、0.5~2.0W/V%の濃度範囲内では染色状態が良好であることが示された。
Claims (3)
- フェリシアン化カリウム、塩化第二鉄及び非イオン性界面活性剤を含有することを特徴とする、皮膚の角質細胞用メラニンの染色液。
- 非イオン性界面活性剤の濃度が0.5~10W/V%の濃度である請求項1記載のメラニンの染色液。
- 非イオン性界面活性剤がポリオキシエチレン(10)オクチルフェニルエーテル又はポリオキシエチレンソルビタンモノラウレートである請求項1又は2記載のメラニンの染色液。
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Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
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WO2004022748A1 (en) | 2002-09-09 | 2004-03-18 | Benitec Australia Limited | Methods for gene silencing in transgenic animals |
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Non-Patent Citations (1)
Title |
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山田 寛,生体内色素: シュモール反応,General Database of Diagnostic Pathlogy and Immunohistochemistry,一般社団法人ひょうご病理ネットワーク,2009年04月21日 |
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