JP7278237B2 - Plant body manufacturing method, natural rubber manufacturing method, pneumatic tire manufacturing method, and rubber product manufacturing method - Google Patents

Plant body manufacturing method, natural rubber manufacturing method, pneumatic tire manufacturing method, and rubber product manufacturing method Download PDF

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Description

本発明は、植物体の製造方法、天然ゴムの製造方法、空気入りタイヤの製造方法、及び、ゴム製品の製造方法に関する。 TECHNICAL FIELD The present invention relates to a method for producing a plant body, a method for producing natural rubber, a method for producing a pneumatic tire, and a method for producing a rubber product.

現在、工業用ゴム製品に用いられている天然ゴム(ポリイソプレノイドの1種)は、トウダイグサ科のパラゴムノキ(Hevea brasiliensis)や桑科植物のインドゴムノキ(Ficus elastica)などのゴム産生植物を栽培し、その植物体が有する乳管細胞で天然ゴムを生合成させ、該天然ゴムを植物から手作業により採取することにより得られる。 Natural rubber (a type of polyisoprenoid) currently used in industrial rubber products is produced by cultivating rubber-producing plants such as Hevea brasiliensis of the Euphorbiaceae family and Ficus elastica of the mulberry family. It is obtained by biosynthesizing natural rubber in mammary duct cells of the plant and manually collecting the natural rubber from the plant.

現状、工業用天然ゴムは、パラゴムノキをほぼ唯一の採取源としている。またゴム製品の主原料として、様々な用途において幅広くかつ大量に用いられている。しかしながら、パラゴムノキは東南アジアや南米などの限られた地域でのみ生育可能な植物である。更に、パラゴムノキは、植樹からゴムの採取が可能な成木になるまでに7年程度を要し、また、採取出来る季節が限られる場合がある。また、成木から天然ゴムを採取できる期間は20~30年に限られる。 Currently, Hevea brasiliensis is almost the only source of natural rubber for industrial use. It is also widely used in large quantities in various applications as a main raw material for rubber products. However, Hevea brasiliensis is a plant that can grow only in limited regions such as Southeast Asia and South America. Moreover, the Hevea brasiliensis takes about seven years from planting until it becomes a mature tree from which rubber can be harvested, and the seasons in which rubber can be harvested are sometimes limited. Also, the period during which natural rubber can be collected from mature trees is limited to 20 to 30 years.

今後、開発途上国を中心に天然ゴムの需要の増大が見込まれており、天然ゴム資源の枯渇が懸念されていることから、安定的な天然ゴムの供給源が望まれている。 Demand for natural rubber is expected to increase in the future, mainly in developing countries, and there is concern about the depletion of natural rubber resources.

このような状況下において、パラゴムノキによる天然ゴムの増産を図る動きが見られる。パラゴムノキは、播種により実生苗を育成させ成長させた後台木とし、クローン苗から得た芽を台木に接ぎ木することで苗を増殖させる。しかしながら、接ぎ穂は、台木の影響を受ける場合があるため、真のクローン苗とはならない。 Under these circumstances, there is a movement to increase the production of natural rubber by Hevea brasiliensis. Hevea brasiliensis is grown by sowing seedlings, growing them, and then using them as rootstocks. Scions, however, are not true clonal seedlings as they may be affected by the rootstock.

一方、組織培養を利用したクローン苗を増殖させる方法としてマイクロプロパゲーションがある。マイクロプロパゲーション技術では無菌での組織培養で苗を増殖させる。具体的には、増殖させようとする植物の個体から採取した芽、茎端等の組織を培養してシュートを誘導し、最終的にシュートを発根させ、幼植物が得られる。この手法では、真のクローン苗が得られる。 On the other hand, there is micropropagation as a method of propagating cloned seedlings using tissue culture. The micropropagation technique propagates seedlings in sterile tissue culture. Specifically, tissues such as buds and stem ends collected from individual plants to be propagated are cultured to induce shoots, and the shoots are finally rooted to obtain seedlings. This technique yields true clonal seedlings.

本発明者らが鋭意検討した結果、木本植物のシュート由来の幼植物は、根の成長が十分ではない場合があり、生育が遅くなりやすいことが判明した。そのため、木本植物のシュート由来の幼植物を商業的に利用しようとした場合、根の成長、生育の遅延が大きな問題となり、木本植物のシュート由来の幼植物から植物体を生産性良く製造するという点では改善の余地がある。
本発明は、本発明者らが見出した新たな課題を解決し、木本植物のシュート由来の幼植物から植物体を生産性良く製造可能な植物体の製造方法、該製造方法を用いた天然ゴムの製造方法、空気入りタイヤの製造方法、及び、ゴム製品の製造方法を提供することを目的とする。
As a result of intensive studies by the present inventors, it was found that seedlings derived from shoots of woody plants tend to grow slowly due to insufficient root growth in some cases. Therefore, when attempting to commercially use seedlings derived from the shoots of woody plants, root growth and growth delay are major problems, and plants are produced from the shoots-derived seedlings of woody plants with high productivity. There is room for improvement in terms of
The present invention solves the new problems found by the present inventors, and provides a method for producing a plant body that can produce a plant body from a young plant derived from a shoot of a woody plant with high productivity, and a natural plant using the production method. An object of the present invention is to provide a method for manufacturing rubber, a method for manufacturing a pneumatic tire, and a method for manufacturing a rubber product.

なお、組織培養を利用したクローン苗を増殖させる方法として、前記のようなシュートを使用する方法以外にも、増殖させようとする植物の個体から採取した芽、茎端等の組織を培養してカルスを誘導し、誘導したカルスを増殖させ、増殖させたカルスを複数のカルスに分割し、分割された各カルスを再分化することにより幼植物を得る方法も存在する。この手法により得られた幼植物は、主根が形成されやすく、木本植物のシュート由来の幼植物のような根の成長(特に、主根の形成)が十分ではないという問題は生じない。よって、根の成長、生育の遅延が大きな問題となるのは、木本植物のシュート由来の幼植物特有の問題である。すなわち、本発明者らが見出した前述の新たな課題は、木本植物のシュート由来の幼植物特有の課題である。 As a method for propagating cloned seedlings using tissue culture, in addition to the method using shoots as described above, tissues such as buds and stem ends collected from individual plants to be propagated are cultured. There is also a method for obtaining seedlings by inducing callus, proliferating the induced callus, dividing the proliferated callus into a plurality of callus, and redifferentiating each divided callus. The seedlings obtained by this method easily form a taproot, and do not have the problem of insufficient root growth (particularly, taproot formation) as in seedlings derived from the shoots of woody plants. Therefore, the problem of root growth and growth delay is a problem peculiar to seedlings derived from shoots of woody plants. That is, the above-mentioned new problem discovered by the present inventors is a problem specific to young plants derived from shoots of woody plants.

本発明者らは、本発明者らが見出した新たな課題を解決するために鋭意検討した結果、通常は、木本植物のシュート由来の幼植物は、土壌が入れられたポットに移し替えられ、土耕栽培が行われるが、木本植物のシュート由来の幼植物を水耕栽培することにより、土耕栽培に比べて、発根、根の発達、及び地上部の生育が促進され、幼植物の生育が大きく促進され、木本植物のシュート由来の幼植物から植物体を生産性良く製造可能であることを見出して本発明を完成した。 The present inventors have made intensive studies in order to solve the new problem found by the present inventors. However, by hydroponically cultivating seedlings derived from the shoots of woody plants, rooting, root development, and growth of the above-ground parts are promoted more than soil culture. The inventors have found that the growth of plants is greatly promoted, and plants can be produced with high productivity from seedlings derived from the shoots of woody plants, and the present invention has been completed.

すなわち、本発明は、木本植物のシュート由来の幼植物を水耕栽培する水耕栽培工程を含む植物体の製造方法に関する。 That is, the present invention relates to a method for producing a plant body, which includes a hydroponics step of hydroponically cultivating seedlings derived from shoots of woody plants.

前記水耕栽培工程において、養液の温度が20~36℃であることが好ましい。 In the hydroponics step, the temperature of the nutrient solution is preferably 20 to 36°C.

前記水耕栽培工程において、養液の溶存酸素量が2~20ppmであることが好ましい。 In the hydroponics step, the dissolved oxygen content of the nutrient solution is preferably 2 to 20 ppm.

前記水耕栽培工程において、養液の初期pHが5.6~5.8であることが好ましい。 In the hydroponics step, the initial pH of the nutrient solution is preferably 5.6 to 5.8.

前記水耕栽培工程において、養液のpHを5.0~6.5に維持することが好ましい。 In the hydroponics step, it is preferable to maintain the pH of the nutrient solution at 5.0 to 6.5.

前記水耕栽培工程において、明条件時の葉の位置での照度が5000lx以上の照度環境下で栽培を行うことが好ましい。 In the hydroponic cultivation step, it is preferable to perform cultivation under an illuminance environment in which the illuminance at the position of the leaves under light conditions is 5000 lx or more.

前記幼植物の地上部の高さが1m以下であることが好ましい。 It is preferable that the height of the above-ground part of the young plant is 1 m or less.

前記シュートがHevea属に属する植物のシュートであることが好ましい。 Preferably, the shoot is of a plant belonging to the genus Hevea.

前記シュートがパラゴムノキのシュートであることが好ましい。 Preferably, the shoots are Hevea brasiliensis shoots.

本発明はまた、前記植物体の製造方法により植物体を製造する植物体製造工程と、
植物体製造工程により得られた植物体を用いて天然ゴムを製造する天然ゴム製造工程とを含む天然ゴムの製造方法に関する。
The present invention also provides a plant body manufacturing process for manufacturing a plant body by the plant body manufacturing method;
The present invention relates to a method for producing natural rubber, including a natural rubber production step of producing natural rubber using the plant body obtained by the plant body production step.

本発明はまた、前記天然ゴムの製造方法により天然ゴムを製造する工程、該工程により得られる天然ゴムと、添加剤とを混練して混練物を得る混練工程、前記混練物から生タイヤを成形する生タイヤ成形工程、及び前記生タイヤを加硫する加硫工程を含む空気入りタイヤの製造方法に関する。 The present invention also provides a step of producing natural rubber by the above-mentioned method for producing natural rubber, a kneading step of kneading the natural rubber obtained by said step and an additive to obtain a kneaded product, and molding a green tire from said kneaded product. The present invention relates to a method for manufacturing a pneumatic tire, including a green tire molding step and a vulcanization step of vulcanizing the green tire.

本発明はまた、前記天然ゴムの製造方法により天然ゴムを製造する工程、該工程により得られる天然ゴムと、添加剤とを混練して混練物を得る混練工程、前記混練物から生ゴム製品を成形する生ゴム製品成形工程、及び前記生ゴム製品を加硫する加硫工程を含むゴム製品の製造方法に関する。 The present invention also provides a step of producing natural rubber by the method for producing natural rubber, a kneading step of kneading the natural rubber obtained by said step with an additive to obtain a kneaded product, and molding a raw rubber product from said kneaded product. The present invention relates to a rubber product manufacturing method including a raw rubber product molding step and a vulcanization step of vulcanizing the raw rubber product.

本発明の植物体の製造方法は、木本植物のシュート由来の幼植物を水耕栽培する水耕栽培工程を含むため、木本植物のシュート由来の幼植物から植物体を生産性良く製造できる。 Since the method for producing a plant of the present invention includes a hydroponics step of hydroponically cultivating young plants derived from shoots of woody plants, plants can be produced from young plants derived from shoots of woody plants with high productivity. .

本発明の天然ゴムの製造方法は、前記植物体の製造方法により植物体を製造する植物体製造工程を含むため、天然ゴムを生産性良く製造できる。 Since the method for producing natural rubber of the present invention includes the step of producing a plant by the method for producing a plant, natural rubber can be produced with high productivity.

本発明の空気入りタイヤの製造方法は、前記天然ゴムの製造方法により天然ゴムを製造する工程を含むため、空気入りタイヤを生産性良く製造できる。 Since the method for manufacturing a pneumatic tire of the present invention includes the step of manufacturing natural rubber by the method for manufacturing natural rubber, it is possible to manufacture pneumatic tires with good productivity.

本発明のゴム製品の製造方法は、前記天然ゴムの製造方法により天然ゴムを製造する工程を含むため、ゴム製品を生産性良く製造できる。 Since the method for producing rubber products of the present invention includes the step of producing natural rubber by the method for producing natural rubber, rubber products can be produced with high productivity.

実施例1、比較例1の結果を示す図である。FIG. 2 is a diagram showing the results of Example 1 and Comparative Example 1; 地上部の様子の一例を示す写真である。It is a photograph which shows an example of a state of an above-ground part. 根の様子の一例を示す写真である。It is a photograph which shows an example of the state of the root. 実施例2の結果を示す写真である。4 is a photograph showing the results of Example 2. FIG.

<植物体の製造方法>
本発明の植物体の製造方法は、木本植物のシュート由来の幼植物を水耕栽培する水耕栽培工程を含む。
これにより、土耕栽培に比べて、発根、根の発達、及び地上部の生育が促進され、幼植物の生育が大きく促進され、木本植物のシュート由来の幼植物から植物体を生産性良く製造できる。
また、木本植物のシュート由来の幼植物に対して土耕栽培を行って、生育不良傾向となった場合であっても、生育不良傾向の幼植物を水耕栽培に切り替えて栽培することにより、生育の改善が見られる。
また、水耕栽培は、通常は、養液を用いて栽培を行うため、根が接するのは養液であるため、根の生育進行方向に物理的な障害は存在しないことから、接触摩擦によるストレスの発生を低減できる。
なお、本発明の植物体の製造方法は、水耕栽培工程を含む限り、その他の工程を含んでいてもよい。
<Method for producing plant body>
The method for producing a plant body of the present invention includes a hydroponics step of hydroponically cultivating seedlings derived from shoots of woody plants.
Compared to soil cultivation, this promotes rooting, root development, and growth of the above-ground part, greatly promotes the growth of seedlings, and produces plant bodies from seedlings derived from the shoots of woody plants. can be manufactured well.
In addition, even if soil culture is performed on seedlings derived from the shoots of woody plants and the growth tends to be poor, the seedlings that tend to grow poorly can be cultivated by switching to hydroponics. , an improvement in growth is observed.
In addition, since hydroponics is usually cultivated using a nutrient solution, it is the nutrient solution that the roots come into contact with, so there is no physical obstacle in the direction of the growth of the roots. It can reduce the occurrence of stress.
In addition, the method for producing a plant body of the present invention may include other steps as long as it includes a hydroponic cultivation step.

本発明において、前記効果が得られる理由は明らかではないが、以下のように推測される。
水耕栽培は、養分や水分を水溶液から比較的容易に吸収できることから、根の生育が比較的弱い状態であっても、養分や水分を吸収しやすい。そのため、木本植物のシュート由来の幼植物であっても、水耕栽培工程を行うことにより、生育を安定させるとともに根の生育を促すことができる。
Although the reason why the above effect is obtained in the present invention is not clear, it is presumed as follows.
In hydroponics, nutrients and water can be absorbed relatively easily from an aqueous solution, so even when root growth is relatively weak, nutrients and water can be easily absorbed. Therefore, even a young plant derived from a shoot of a woody plant can be stabilized in growth and root growth can be promoted by performing the hydroponic cultivation process.

本明細書においてシュートとは、頂芽、腋芽、不定芽の他、多芽体又は苗条原基より分化してきた芽、及びこれらの芽が伸長した状態のものを意味する。
本明細書において、幼植物とは、発根したシュートを意味する。なお、本明細書における幼植物には、発根したシュートに加えて、発根したシュートに対して土耕栽培を行って、生育不良傾向となったものも含まれる。
本明細書において、水耕栽培とは、土壌などの固形培地を必要としない栽培を意味し、水耕、水栽培とも言う。通常は、養液を用いて栽培を行う。
本明細書において、地上部とは、茎及び茎についている葉を意味する。
As used herein, the term "shoot" refers to apical buds, axillary buds, adventitious buds, as well as buds differentiated from multiple buds or shoot primordia, and those in the elongated state of these buds.
As used herein, a young plant means a rooted shoot. In the present specification, seedlings include not only rooted shoots, but also rooted shoots that have undergone soil cultivation and tend to grow poorly.
As used herein, hydroponics means cultivation that does not require a solid medium such as soil, and is also referred to as hydroponics or hydroponics. Cultivation is usually carried out using a nutrient solution.
As used herein, the above-ground part means the stem and the leaves attached to the stem.

本発明の製造方法が適用できる植物(シュートの由来植物)は、特に限定されないが、木本植物であることが好ましい。
前記木本植物としては、特に制限されず、落葉樹、常緑樹の広い範囲の種類及び品種の木本植物を挙げることができるが、特に、ゴムを資源として採取できるゴムノキであることが好ましく、パラゴムノキ(Hevea brasiliensis)等のHevea属;イチジク(Ficus carica)、インドゴムノキ(Ficus elastica)、オオイタビ(Ficus pumila L.)、イヌビワ(Ficus erecta Thumb.)、ホソバムクイヌビワ(Ficus ampelas Burm.f.)、コウトウイヌビワ(Ficus benguetensis Merr.)、ムクイヌビワ(Ficus irisana Elm.)、ガジュマル(Ficus microcarpa L.f.)、オオバイヌビワ(Ficus septica Burm.f.)、ベンガルボダイジュ(Ficus benghalensis)等のFicus属;グアユール(Parhenium argentatum)がより好ましい。更に好ましくは、Hevea属に属する植物等のトウダイグサ科(Euphorbiaceae)に属する植物であり、特に好ましくは、Hevea属に属する植物である。なかでも、パラゴムノキ(Hevea brasiliensis)が最も好ましい。
Plants (shoot-derived plants) to which the production method of the present invention can be applied are not particularly limited, but are preferably woody plants.
The woody plant is not particularly limited, and includes a wide range of types and varieties of deciduous trees and evergreen trees. In particular, rubber trees from which rubber can be collected as a resource are preferable, and Hevea brasiliensis ( Ficus carica, Ficus elastica, Ficus pumila L., Ficus erecta Thumb., Ficus ampelas Burm.f. ), Genus Ficus such as Ficus benguetensis Merr., Ficus irisana Elm., Ficus microcarpa L.f., Ficus septica Burm.f., Ficus benghalensis; Le ( Parhenium argentatum) is more preferred. Plants belonging to the family Euphorbiaceae, such as plants belonging to the genus Hevea, are more preferred, and plants belonging to the genus Hevea are particularly preferred. Among them, Para rubber tree (Hevea brasiliensis) is most preferable.

前記シュートを誘導するための材料としては、植物の葉柄、葉片、体細胞胚の胚軸、節、腋芽、頂芽等の植物の組織が挙げられる。なかでも、シュートを安定的に誘導することが可能であることから、節、腋芽、又は頂芽を含む組織が好ましい。具体的には、成木や幼木、苗木、クローン苗、又は試験管内で実生苗から生育させた無菌苗(無菌実生苗)由来の前記組織などが挙げられる。 Materials for inducing the shoot include plant tissues such as plant petioles, leaf discs, hypocotyls of somatic embryos, nodes, axillary buds, and apical buds. Among these, tissues containing nodes, axillary buds, or apical buds are preferable because they can stably induce shoots. Specifically, the tissue derived from an adult tree, a young tree, a seedling, a cloned seedling, or a sterile seedling grown from a seedling in a test tube (a sterile seedling) can be used.

成木や幼木、苗木、又はクローン苗由来の前記組織を使用する場合には、適宜必要な大きさに切断した後、表面を殺菌又は滅菌することで使用することができるが、試験管内で実生苗から生育させた無菌苗(無菌実生苗)由来の前記組織を使用する場合には、適宜必要な大きさに切断した後に使用することが可能である。 When using the tissue derived from an adult tree, young tree, sapling, or cloned seedling, it can be used by sterilizing or sterilizing the surface after appropriately cutting it to the required size. When using the tissue derived from a sterile seedling grown from a seedling (sterile seedling), it can be used after being appropriately cut into a required size.

成木や幼木、苗木、又はクローン苗由来の前記組織を用いる場合、後述する誘導培地で培養する前にまず、組織の表面を洗浄する。例えば、磨き粉で洗浄したり、柔らかいスポンジで洗浄したりしても良いが、流水で洗浄するのが好ましい。当該洗浄用の水は、界面活性剤を約0.1質量%含むものであってもよい。 When using the tissue derived from an adult tree, young tree, seedling, or cloned seedling, the surface of the tissue is first washed before culturing in the induction medium described below. For example, it may be washed with polishing powder or washed with a soft sponge, but washing with running water is preferable. The washing water may contain about 0.1% by weight of a surfactant.

次に、組織を殺菌又は滅菌する。殺菌又は滅菌は、周知の殺菌剤、滅菌剤を用いて行うことができるが、エタノール、塩化ベンザルコニウム、次亜塩素酸ナトリウム水溶液が好ましい。なお、殺菌又は滅菌処理の後、更に滅菌水で洗浄してもよい。 The tissue is then disinfected or sterilized. Sterilization or sterilization can be performed using well-known germicides and sterilizers, but ethanol, benzalkonium chloride, and aqueous sodium hypochlorite solution are preferred. After sterilization or sterilization treatment, it may be washed with sterilized water.

前記洗浄、殺菌又は滅菌処理を行う具体例として例えば以下の手順が挙げられる。流水で組織の表面を洗浄した後、エタノールで洗浄。次いで次亜塩素酸ナトリウム水溶液で必要に応じて撹拌しながら滅菌。その後、滅菌水を用いて洗浄。 Specific examples of the cleaning, sterilization, or sterilization include the following procedures. After washing the surface of the tissue with running water, wash it with ethanol. Next, sterilize with an aqueous sodium hypochlorite solution while stirring as necessary. Then wash with sterile water.

シュートの誘導方法は特に限定されないが、前記組織などからシュートを誘導する誘導工程の一例について説明する。 Although the method of inducing shoots is not particularly limited, an example of the inducing step of inducing shoots from the tissue or the like will be described.

(誘導工程)
誘導工程では、前記組織を、植物ホルモン及び炭素源を含む誘導培地で培養することにより、シュートを誘導、形成させる。なお、誘導培地は、液体であっても固体であってもよいが、培地に前記組織を差し込んで培養することでシュートを誘導しやすくなるため、固体培養が好ましい。また、誘導培地が液体培地である場合には、静置培養を行ってもよく、振とう培養を行ってもよい。
また、殺菌又は滅菌処理を行った組織を用いる場合には、殺菌剤、滅菌剤の影響を除くため切り口を切除して培養に用いるのが好ましい。
(Induction process)
In the induction step, the tissue is cultured in an induction medium containing plant hormones and a carbon source to induce and form shoots. The induction medium may be either liquid or solid, but solid culture is preferable because it facilitates the induction of shoots by inserting the tissue into the medium and culturing it. Also, when the induction medium is a liquid medium, static culture may be performed, or shaking culture may be performed.
In addition, when a tissue that has been sterilized or sterilized is used, it is preferable to cut the cut end and use it for culture in order to eliminate the influence of the sterilizing agent and the sterilizing agent.

植物ホルモン(植物生長ホルモン)としては、例えば、オーキシン系植物ホルモン及び/又はサイトカイニン系植物ホルモンが挙げられる。中でも、サイトカイニン系植物ホルモンを用いることが好ましい。 Plant hormones (plant growth hormones) include, for example, auxin plant hormones and/or cytokinin plant hormones. Among them, it is preferable to use cytokinin plant hormones.

オーキシン系植物ホルモンとしては、2,4-ジクロロフェノキシ酢酸、1-ナフタレン酢酸、インドール-3-酪酸、インドール-3-酢酸、インドールプロピオン酸、クロロフェノキシ酢酸、ナフトキシ酢酸、フェニル酢酸、2,4,5-トリクロロフェノキシ酢酸、パラクロロフェノキシ酢酸、2-メチル-4-クロロフェノキシ酢酸、4-フルオロフェノキシ酢酸、2-メトキシ-3,6-ジクロロ安息香酸、2-フェニル酸、ピクロラム、ピコリン酸等が挙げられる。なかでも、2,4-ジクロロフェノキシ酢酸、1-ナフタレン酢酸、インドール-3-酪酸が好ましく、2,4-ジクロロフェノキシ酢酸、1-ナフタレン酢酸がより好ましい。 Auxin plant hormones include 2,4-dichlorophenoxyacetic acid, 1-naphthaleneacetic acid, indole-3-butyric acid, indole-3-acetic acid, indolepropionic acid, chlorophenoxyacetic acid, naphthoxyacetic acid, phenylacetic acid, 2,4, 5-trichlorophenoxyacetic acid, parachlorophenoxyacetic acid, 2-methyl-4-chlorophenoxyacetic acid, 4-fluorophenoxyacetic acid, 2-methoxy-3,6-dichlorobenzoic acid, 2-phenylic acid, picloram, picolinic acid, etc. mentioned. Among them, 2,4-dichlorophenoxyacetic acid, 1-naphthaleneacetic acid and indole-3-butyric acid are preferred, and 2,4-dichlorophenoxyacetic acid and 1-naphthaleneacetic acid are more preferred.

サイトカイニン系植物ホルモンとしては、ベンジルアデニン、カイネチン、ゼアチン、ベンジルアミノプリン、イソペンテニルアミノプリン、チジアズロン、イソペンテニルアデニン、ゼアチンリボシド、ジヒドロゼアチン等が挙げられる。なかでも、ベンジルアデニン、カイネチン、ゼアチンが好ましく、ベンジルアデニン、カイネチンがより好ましく、ベンジルアデニンが更に好ましい。 Cytokinin plant hormones include benzyladenine, kinetin, zeatin, benzylaminopurine, isopentenylaminopurine, thidiazuron, isopentenyl adenine, zeatin riboside, dihydrozeatin and the like. Among them, benzyladenine, kinetin, and zeatin are preferred, benzyladenine and kinetin are more preferred, and benzyladenine is even more preferred.

炭素源としては、特に限定されず、スクロース、グルコース、トレハロース、フルクトース、ラクトース、ガラクトース、キシロース、アロース、タロース、グロース、アルトロース、マンノース、イドース、アラビノース、アピオース、マンニトール、ソルビトール、キシリトール、エリスリトール、マルトース等の糖類が挙げられる。なかでも、スクロースが好ましい。 Carbon sources are not particularly limited, and include sucrose, glucose, trehalose, fructose, lactose, galactose, xylose, allose, talose, gulose, altrose, mannose, idose, arabinose, apiose, mannitol, sorbitol, xylitol, erythritol, maltose. and other sugars. Among them, sucrose is preferred.

誘導培地は、前記組織への成長阻害物質の蓄積を防止するために、更に活性炭を含むことが好ましい。また、シュートの形成を促進するために、更に硝酸銀を含むことが好ましい。更には、シュートの形成を促進するために、ココナッツウォーター(ココナッツミルク)を含んでもよい。 Preferably, the induction medium further comprises activated charcoal to prevent growth inhibitors from accumulating in said tissue. In addition, it is preferable to further contain silver nitrate in order to promote the formation of shoots. Additionally, coconut water (coconut milk) may be included to promote shoot formation.

誘導培地としては、Whiteの培地(植物細胞工学入門(学会出版センター)p20~p36に記載)、Hellerの培地(Heller R, Bot.Biol.Veg.Paris 14 1-223(1953))、SH培地(SchenkとHildebrandtの培地)、MS培地(MurashigeとSkoogの培地)(植物細胞工学入門(学会出版センター)p20~p36に記載)、LS培地(LinsmaierとSkoogの培地)(植物細胞工学入門(学会出版センター)p20~p36に記載)、Gamborg培地、B5培地(植物細胞工学入門(学会出版センター)p20~p36に記載)、MB培地(Biotechnology in Agriculture and Forestry volum5(TreesII)p222-245に記載)、WP培地(Woody Plant:木本類用)等の基本培地や、該基本培地の組成に変更を加えた改変基本培地等のベースとなる培地に植物ホルモンを加えたものを使用すればよい。なかでも、MS培地、B5培地、WP培地、MB培地に植物ホルモンを加えたものが好ましく、MS培地、その組成に変更を加えたMS改変培地、MB培地又はその組成に変更を加えたMB改変培地に植物ホルモンを加えたものがより好ましい。 Examples of the induction medium include White medium (described in Introduction to Plant Cell Engineering (Gakkai Shuppan Center) p20-p36), Heller's medium (Heller R, Bot.Biol.Veg.Paris 14 1-223 (1953)), SH medium (Schenk and Hildebrandt's medium), MS medium (Murashige and Skoog's medium) (described in Introduction to Plant Cell Engineering (Gakkai Publishing Center) p20-p36), LS medium (Linsmaier and Skoog's medium) (Introduction to Plant Cell Engineering (Gakkai Publication Center) Described on p20-p36), Gamborg medium, B5 medium (Introduction to plant cell engineering (Gakkai Publishing Center) Described on p20-p36), MB medium (Biotechnology in Agriculture and Forestry volume 5 (TreesII) Described on p222-245) A basal medium such as WP medium (Woody Plant: for woody plants) or a modified basal medium obtained by modifying the composition of the basal medium to which a plant hormone is added may be used. Among them, MS medium, B5 medium, WP medium, and MB medium to which plant hormones are added are preferable, and MS medium, MS-modified medium whose composition has been modified, MB medium, or MB-modified medium whose composition has been modified. A medium containing a plant hormone is more preferable.

誘導培地を固体培地とする場合、固形化剤を使用して培地を固体にすればよい。固形化剤としては、特に限定されず、寒天、ゲランガム、アガロース、ゲルライト、アガー、フィタゲル等が挙げられる。 When the induction medium is a solid medium, a solidifying agent may be used to solidify the medium. The solidifying agent is not particularly limited, and includes agar, gellan gum, agarose, gelrite, agar, phytagel and the like.

好適な誘導培地の組成及び培養条件は、植物種により異なり、また培地が液体培地であるか固体培地であるかによっても異なるが、通常は(特に、ゴムノキの場合は)以下の組成である。 The composition and culture conditions of a suitable induction medium differ depending on the plant species and whether the medium is a liquid medium or a solid medium, but usually have the following composition (particularly in the case of rubber trees).

誘導培地中の炭素源の濃度は、好ましくは0.1質量%以上、より好ましくは1.0質量%以上、更に好ましくは3.0質量%以上である。該炭素源の濃度は、好ましくは10質量%以下、より好ましくは9.0質量%以下、更に好ましくは6.0質量%以下である。なお、本明細書において、炭素源の濃度とは、糖類の濃度を意味する。 The concentration of the carbon source in the induction medium is preferably 0.1% by mass or more, more preferably 1.0% by mass or more, and even more preferably 3.0% by mass or more. The concentration of the carbon source is preferably 10% by mass or less, more preferably 9.0% by mass or less, and even more preferably 6.0% by mass or less. In this specification, the concentration of carbon source means the concentration of saccharides.

誘導培地にオーキシン系植物ホルモンを実質的に加えないことが好ましく、誘導培地中のオーキシン系植物ホルモンの濃度としては、具体的には、好ましくは1.0mg/L以下、より好ましくは0.1mg/L以下、更に好ましくは0.05mg/L以下、特に好ましくは0.01mg/L以下である。 It is preferred that substantially no auxin-based plant hormone is added to the induction medium. Specifically, the concentration of the auxin-based plant hormone in the induction medium is preferably 1.0 mg/L or less, more preferably 0.1 mg. /L or less, more preferably 0.05 mg/L or less, particularly preferably 0.01 mg/L or less.

誘導培地にサイトカイニン系植物ホルモンを加える場合の、誘導培地中のサイトカイニン系植物ホルモンの濃度としては、好ましくは0.01mg/L以上、より好ましくは0.1mg/L以上、更に好ましくは0.5mg/L以上、特に好ましくは0.8mg/L以上、最も好ましくは3.0mg/L以上である。該サイトカイニン系植物ホルモンの濃度は、好ましくは8.0mg/L以下、より好ましくは7.0mg/L以下、更に好ましくは6.0mg/L以下である。
特に、前記サイトカイニン系植物ホルモンとしてベンジルアデニンを使用する場合の、該ベンジルアデニンの濃度は、4.0~6.0mg/Lであることが好ましく、最も好ましくは、5.0mg/Lである。他方、前記サイトカイニン系植物ホルモンとしてカイネチンを使用する場合の、該カイネチンの濃度は、0.8~1.2mg/Lであることが好ましく、最も好ましくは、1.0mg/Lである。
When the cytokinin plant hormone is added to the induction medium, the concentration of the cytokinin plant hormone in the induction medium is preferably 0.01 mg/L or more, more preferably 0.1 mg/L or more, and still more preferably 0.5 mg. /L or more, particularly preferably 0.8 mg/L or more, most preferably 3.0 mg/L or more. The concentration of the cytokinin plant hormone is preferably 8.0 mg/L or less, more preferably 7.0 mg/L or less, still more preferably 6.0 mg/L or less.
In particular, when benzyladenine is used as the cytokinin plant hormone, the concentration of benzyladenine is preferably 4.0-6.0 mg/L, most preferably 5.0 mg/L. On the other hand, when kinetin is used as the cytokinin plant hormone, the concentration of kinetin is preferably 0.8-1.2 mg/L, most preferably 1.0 mg/L.

誘導培地中の活性炭の濃度は、好ましくは0.01質量%以上、より好ましくは0.03質量%以上である。該活性炭の濃度は、好ましくは1.0質量%以下、より好ましくは0.1質量%以下である。 The concentration of activated carbon in the induction medium is preferably 0.01 wt% or more, more preferably 0.03 wt% or more. The concentration of the activated carbon is preferably 1.0% by mass or less, more preferably 0.1% by mass or less.

誘導培地中の硝酸銀の濃度は、好ましくは0.1mg/L以上、より好ましくは0.3mg/L以上、更に好ましくは0.5mg/L以上である。該硝酸銀の濃度は、好ましくは5.0mg/L以下、より好ましくは3.0mg/L以下である。 The concentration of silver nitrate in the induction medium is preferably 0.1 mg/L or higher, more preferably 0.3 mg/L or higher, even more preferably 0.5 mg/L or higher. The silver nitrate concentration is preferably 5.0 mg/L or less, more preferably 3.0 mg/L or less.

誘導培地のpHは、4.0~10.0が好ましく、5.0~6.5がより好ましく、5.5~6.0が更に好ましい。
なお、本明細書において、固体培地のpHは、固形化剤を除く全成分を添加した培地のpHを意味する。
The pH of the induction medium is preferably 4.0 to 10.0, more preferably 5.0 to 6.5, even more preferably 5.5 to 6.0.
In this specification, the pH of the solid medium means the pH of the medium to which all components except the solidifying agent have been added.

誘導工程は、通常、温度、照明時間等の培養条件の管理された制御環境下で行われる。培養条件は適宜設定することができるが、例えば、培養温度は、0~40℃が好ましく、20~40℃がより好ましく、25~35℃が更に好ましい。培養は、暗所で行っても明所で行ってもよいが、光条件としては、例えば、12.5μmol/m/sの照明の下、14~16時間の明時間という条件などが挙げられる。培養時間は、特に限定されないが、1~10週間培養することが好ましく、3~5週間がより好ましい。 The induction step is usually performed under a controlled environment in which culture conditions such as temperature and lighting time are controlled. Cultivation conditions can be appropriately set. For example, the culture temperature is preferably 0 to 40.degree. C., more preferably 20 to 40.degree. C., and even more preferably 25 to 35.degree. Cultivation may be performed in a dark place or in a bright place. Light conditions include, for example, 12.5 μmol/m 2 /s illumination and 14 to 16 hours of light. be done. Cultivation time is not particularly limited, but culturing for 1 to 10 weeks is preferable, and 3 to 5 weeks is more preferable.

固体培地の場合、誘導培地中の固形化剤の濃度は、好ましくは0.1質量%以上、より好ましくは0.2質量%以上である。該固形化剤の濃度は、好ましくは2.0質量%以下、より好ましくは1.1質量%以下、更に好ましくは0.8質量%以下である。 In the case of a solid medium, the concentration of the solidifying agent in the induction medium is preferably 0.1% by mass or more, more preferably 0.2% by mass or more. The concentration of the solidifying agent is preferably 2.0% by mass or less, more preferably 1.1% by mass or less, and even more preferably 0.8% by mass or less.

上述の条件のなかでも、植物ホルモンがサイトカイニン系植物ホルモン(特に、ベンジルアデニン、又はカイネチン)で、その濃度が3.0~8.0mg/Lであり、培養温度が25~35℃であることが特に好ましい。 Among the above conditions, the plant hormone is a cytokinin plant hormone (especially benzyladenine or kinetin), its concentration is 3.0 to 8.0 mg / L, and the culture temperature is 25 to 35 ° C. is particularly preferred.

以上のように、前記組織を前記誘導培地で培養することにより、シュートを誘導、形成することが可能である。 As described above, it is possible to induce and form shoots by culturing the tissue in the induction medium.

シュートから幼植物を得る方法は特に限定されないが、以下において、シュートから幼植物を得る方法の一例について説明する。
形成されたシュートはこのまま後述する培養工程に供してもよいが、培養工程の前に以下の浸漬処理工程に供することが好ましい。これにより、より好適に幼植物が得られる傾向がある。
Although the method for obtaining seedlings from shoots is not particularly limited, an example of the method for obtaining seedlings from shoots will be described below.
The formed shoots may be directly subjected to the culturing step described later, but it is preferable to subject them to the following immersion treatment step before the culturing step. As a result, seedlings tend to be obtained more favorably.

(浸漬処理工程)
浸漬処理工程では、オーキシン系植物ホルモンを含有するオーキシン溶液にシュートを浸漬する。
具体的には、誘導工程等により得られたシュート(例えば、2cm程度のシュートの切片)をオーキシン溶液に浸漬すればよい。
シュートをオーキシン溶液に浸漬する際、シュートの切片の端部、すなわち、シュートの切り口がオーキシン溶液に浸かる状態で浸漬することが好ましい。
また、シュートをオーキシン溶液に浸漬する際、シュートを静置して行ってもよく、シュートを振とうして行ってもよい。
(Immersion treatment step)
In the immersion treatment step, the shoots are immersed in an auxin solution containing auxin plant hormones.
Specifically, shoots (for example, about 2 cm shoot sections) obtained by the induction step or the like may be immersed in an auxin solution.
When the shoots are immersed in the auxin solution, it is preferable that the ends of the shoot segments, ie, the cut ends of the shoots, are immersed in the auxin solution.
In addition, when the shoots are immersed in the auxin solution, the shoots may be left standing or shaken.

前記浸漬処理工程を行う時間は、好ましくは24時間以上、より好ましくは40時間以上、更に好ましくは60時間以上、特に好ましくは70時間以上であり、好ましくは168時間以下、より好ましくは150時間以下、更に好ましくは130時間以下、特に好ましくは100時間以下、最も好ましくは90時間以下、より最も好ましくは80時間以下である。これにより、より良好な発根率が得られる。 The time for the immersion treatment step is preferably 24 hours or longer, more preferably 40 hours or longer, still more preferably 60 hours or longer, particularly preferably 70 hours or longer, preferably 168 hours or shorter, more preferably 150 hours or shorter. , more preferably 130 hours or less, particularly preferably 100 hours or less, most preferably 90 hours or less, and most preferably 80 hours or less. This gives a better rooting rate.

浸漬処理工程は、温度、照明時間等が管理された制御環境下で行われることが好ましい。例えば、浸漬処理工程を行う温度は、0~40℃が好ましく、20~40℃がより好ましく、25~35℃が更に好ましい。浸漬処理工程は、暗所で行っても明所で行ってもよいが、光条件としては、例えば、5~20μmol/m/sの照明の下、14~16時間の明時間という条件などが挙げられる。 The immersion treatment process is preferably performed under a controlled environment in which temperature, illumination time, etc. are controlled. For example, the temperature at which the immersion treatment step is performed is preferably 0 to 40°C, more preferably 20 to 40°C, and even more preferably 25 to 35°C. The immersion treatment step may be performed in a dark place or in a bright place, but the light conditions include, for example, 5 to 20 μmol/m 2 /s illumination and 14 to 16 hours of light. is mentioned.

浸漬処理工程に供されるシュートとしては、特に限定されず、どのような方法により形成されたシュートであっても用いることができ、例えば、前記誘導工程等により得られたシュートが挙げられる。
また、浸漬処理工程に供されるシュートとしては、シュートの切片であることが好ましい。例えば、シュートを誘導するための材料として用いられた腋芽等の組織から切断されたシュートの切片が好ましい。
また、誘導培地で培養した期間が6ヶ月以内のシュートを用いることも好ましい。
The shoot to be subjected to the immersion treatment step is not particularly limited, and any shoot formed by any method can be used.
Also, the shoots to be subjected to the immersion treatment step are preferably pieces of shoots. For example, shoot segments cut from tissues such as axillary buds used as materials for inducing shoots are preferred.
It is also preferable to use shoots that have been cultured in an induction medium for 6 months or less.

浸漬処理工程に供されるシュート(シュートの切片)の長さは、好ましくは10mm以上、より好ましくは15mm以上、更に好ましくは20mm以上であり、好ましくは100mm以下、より好ましくは80mm以下、更に好ましくは50mm以下である。これにより、より良好な発根率が得られる。 The length of the shoot (shoot section) subjected to the immersion treatment step is preferably 10 mm or more, more preferably 15 mm or more, still more preferably 20 mm or more, preferably 100 mm or less, more preferably 80 mm or less, and even more preferably. is 50 mm or less. This gives a better rooting rate.

オーキシン溶液が含有するオーキシン系植物ホルモンとしては、前記誘導培地に用いられるオーキシン系植物ホルモンと同様のものを用いることができる。なかでも、インドール-3-酪酸、1-ナフタレン酢酸が好ましく、インドール-3-酪酸及び1-ナフタレン酢酸を併用することが好ましい。 As the auxin-based plant hormone contained in the auxin solution, the same auxin-based plant hormone used in the induction medium can be used. Among them, indole-3-butyric acid and 1-naphthaleneacetic acid are preferred, and indole-3-butyric acid and 1-naphthaleneacetic acid are preferably used in combination.

オーキシン溶液中のオーキシン系植物ホルモンの濃度は、好ましくは15mg/L以下、より好ましくは12mg/L以下であり、好ましくは1.0mg/L以上、より好ましくは3.0mg/L以上、更に好ましくは5.0mg/L以上、特に好ましくは8.0mg/L以上である。これにより、より良好な発根率が得られる。
ここで、複数のオーキシン系植物ホルモンを使用する場合、オーキシン系植物ホルモンの濃度とは、オーキシン系植物ホルモンの合計濃度を意味する。
The concentration of the auxin plant hormone in the auxin solution is preferably 15 mg/L or less, more preferably 12 mg/L or less, preferably 1.0 mg/L or more, more preferably 3.0 mg/L or more, and even more preferably. is 5.0 mg/L or more, particularly preferably 8.0 mg/L or more. This gives a better rooting rate.
Here, when using a plurality of auxin-based plant hormones, the concentration of auxin-based plant hormones means the total concentration of auxin-based plant hormones.

オーキシン系植物ホルモンとして、インドール-3-酪酸及び1-ナフタレン酢酸を併用する場合、
オーキシン溶液中のインドール-3-酪酸の濃度は、好ましくは10mg/L以下、より好ましくは7.5mg/L以下、更に好ましくは6.0mg/L以下であり、好ましくは1.0mg/L以上、より好ましくは2.5mg/L以上、更に好ましくは3.0mg/L以上、特に好ましくは4.0mg/L以上であり、
オーキシン溶液中の1-ナフタレン酢酸の濃度は、好ましくは10mg/L以下、より好ましくは7.5mg/L以下、更に好ましくは6.0mg/L以下であり、好ましくは1.0mg/L以上、より好ましくは2.5mg/L以上、更に好ましくは3.0mg/L以上、特に好ましくは4.0mg/L以上である。これにより、より良好な発根率が得られる。
When indole-3-butyric acid and 1-naphthaleneacetic acid are used together as auxin plant hormones,
The concentration of indole-3-butyric acid in the auxin solution is preferably 10 mg/L or less, more preferably 7.5 mg/L or less, still more preferably 6.0 mg/L or less, and preferably 1.0 mg/L or more. , more preferably 2.5 mg/L or more, still more preferably 3.0 mg/L or more, particularly preferably 4.0 mg/L or more,
The concentration of 1-naphthaleneacetic acid in the auxin solution is preferably 10 mg/L or less, more preferably 7.5 mg/L or less, still more preferably 6.0 mg/L or less, preferably 1.0 mg/L or more, More preferably 2.5 mg/L or more, still more preferably 3.0 mg/L or more, and particularly preferably 4.0 mg/L or more. This gives a better rooting rate.

オーキシン溶液は、オーキシン系植物ホルモンを含有していればよく、オーキシン系植物ホルモンを溶解させる分散媒としては、特に限定されないが、水、等張液、緩衝液、組織培養用培地などが挙げられる。等張液としては、例えばKCl、NaCl、CaCl2、MgCl2などの無機塩を添加して0.01~7M、好ましくは、0.5~2Mにした液体が挙げられる。緩衝液としては、リン酸緩衝液、トリス緩衝液、MES緩衝液などが挙げられる。組織培養用培地としては、上述の培地などが挙げられる。なかでも、効果がより好適に得られるという理由から、水が好ましい。すなわち、オーキシン溶液が、オーキシン系植物ホルモンを水に溶解させた水溶液であることが好ましい。 The auxin solution may contain an auxin-based plant hormone, and the dispersion medium for dissolving the auxin-based plant hormone is not particularly limited. . Examples of isotonic solutions include liquids made to 0.01 to 7M, preferably 0.5 to 2M by adding inorganic salts such as KCl, NaCl, CaCl 2 and MgCl 2 . Buffers include phosphate buffers, Tris buffers, MES buffers, and the like. Examples of tissue culture media include the media described above. Among them, water is preferable because the effect can be obtained more preferably. That is, the auxin solution is preferably an aqueous solution obtained by dissolving the auxin plant hormone in water.

オーキシン系植物ホルモン以外にオーキシン溶液に配合できる成分は特に限定されないが、グルタチオンが好ましい。これにより、より良好な発根率が得られる。
グルタチオンは、グルタミン酸、システイン及びグリシンを構成アミノ酸とするトリペプチドで、還元型グルタチオン、酸化型グルタチオン(グルタチオンジスルフィド)、及びこれらの混合物のいずれでもよいが、還元型グルタチオンが好ましい。
In addition to the auxin-based plant hormones, ingredients that can be added to the auxin solution are not particularly limited, but glutathione is preferred. This gives a better rooting rate.
Glutathione is a tripeptide composed of glutamic acid, cysteine and glycine as constituent amino acids, and may be reduced glutathione, oxidized glutathione (glutathione disulfide) or a mixture thereof, preferably reduced glutathione.

オーキシン溶液中のグルタチオンの濃度は、好ましくは10μmol/L以上、より好ましくは30μmol/L以上、更に好ましくは40μmol/L以上、特に好ましくは60μmol/L以上、最も好ましくは80μmol/L以上であり、好ましくは500μmol/L以下、より好ましくは400μmol/L以下、更に好ましくは300μmol/L以下、特に好ましくは200μmol/L以下、最も好ましくは150μmol/L以下である。これにより、より良好な発根率が得られる。 The concentration of glutathione in the auxin solution is preferably 10 μmol/L or more, more preferably 30 μmol/L or more, still more preferably 40 μmol/L or more, particularly preferably 60 μmol/L or more, most preferably 80 μmol/L or more, It is preferably 500 μmol/L or less, more preferably 400 μmol/L or less, still more preferably 300 μmol/L or less, particularly preferably 200 μmol/L or less, and most preferably 150 μmol/L or less. This gives a better rooting rate.

オーキシン溶液にはオーキシン系植物ホルモン以外の植物ホルモンを使用することも可能である。オーキシン溶液に使用できるサイトカイニン系植物ホルモンとしては、前記誘導培地に用いられるサイトカイニン系植物ホルモンと同様のものを用いることができるが、オーキシン溶液にはオーキシン系植物ホルモン以外の植物ホルモンを使用しないことが好ましい。 It is also possible to use plant hormones other than auxin plant hormones in the auxin solution. As the cytokinin plant hormone that can be used in the auxin solution, the same cytokinin plant hormone used in the induction medium can be used, but the auxin solution should not contain plant hormones other than the auxin plant hormone. preferable.

オーキシン溶液中のオーキシン系植物ホルモン以外の植物ホルモンの濃度は、好ましくは2.0mg/L以下、より好ましくは1.0mg/L以下、更に好ましくは0.1mg/L以下、特に好ましくは0.08mg/L以下、最も好ましくは0mg/Lである。これにより、より良好な発根率が得られる。 The concentration of plant hormones other than auxin plant hormones in the auxin solution is preferably 2.0 mg/L or less, more preferably 1.0 mg/L or less, even more preferably 0.1 mg/L or less, and particularly preferably 0.1 mg/L or less. 08 mg/L or less, most preferably 0 mg/L. This gives a better rooting rate.

(培養工程)
培養工程では、前記浸漬処理工程により浸漬されたシュートを発根誘導培地で培養することにより発根させる。
なお、発根誘導培地は、液体であっても固体であってもよいが、培地にシュートを差し込んで培養することで発根させやすくなるため、固体培養が好ましい。また、発根誘導培地が液体培地である場合には、静置培養を行ってもよく、振とう培養を行ってもよい。
(Culturing process)
In the culturing step, the shoots immersed in the immersion treatment step are cultured in a rooting-inducing medium for rooting.
The rooting-inducing medium may be either liquid or solid, but solid culture is preferred because rooting is facilitated by inserting shoots into the medium and culturing. Moreover, when the rooting-inducing medium is a liquid medium, static culture may be performed, or shaking culture may be performed.

培養工程に供されるシュートは、前記浸漬処理工程により浸漬されたシュートであれば特に限定されない。なかでも、前記浸漬処理工程においてシュートを浸漬することにより、シュートの基部に組織塊が形成されたシュートが好ましい。更には、シュートの基部に既に組織塊が形成されているシュートを前記浸漬処理工程に用いることもより好ましい。 Shoots to be subjected to the culturing step are not particularly limited as long as they are immersed in the immersion treatment step. Among them, shoots in which a mass of tissue is formed at the base of the shoots by soaking the shoots in the immersion treatment step are preferable. Furthermore, it is more preferable to use shoots having tissue masses already formed at the base of the shoots in the soaking step.

発根誘導培地は、炭素源を含むものである。 A rooting induction medium contains a carbon source.

発根誘導培地に用いられる植物ホルモンとしては、特に限定されず、前記誘導培地に用いられる植物ホルモン(オーキシン系植物ホルモン、サイトカイニン系植物ホルモン)と同様のものを用いることができる。 The plant hormones used in the rooting induction medium are not particularly limited, and the same plant hormones (auxin plant hormones, cytokinin plant hormones) used in the induction medium can be used.

発根誘導培地に用いられる炭素源としては、特に限定されず、前記誘導培地に用いられる炭素源と同様のものを用いることができるが、なかでもスクロースが好ましい。これにより、より良好な発根率が得られる。 The carbon source used in the rooting induction medium is not particularly limited, and the same carbon sources as those used in the induction medium can be used, but sucrose is particularly preferred. This gives a better rooting rate.

発根誘導培地は、前記誘導培地同様、更に、活性炭、硝酸銀を含むことが好ましい。これにより、より良好な発根率が得られる。 The rooting induction medium preferably further contains activated charcoal and silver nitrate in the same manner as the induction medium. This gives a better rooting rate.

発根誘導培地は、前記オーキシン溶液同様、更に、グルタチオンを含むことが好ましい。これにより、より良好な発根率が得られる。
グルタチオンとしては、還元型グルタチオン、酸化型グルタチオン、及びこれらの混合物のいずれでもよいが、還元型グルタチオンが好ましい。
The rooting induction medium preferably further contains glutathione as well as the auxin solution. This gives a better rooting rate.
Glutathione may be reduced glutathione, oxidized glutathione, or a mixture thereof, but reduced glutathione is preferred.

発根誘導培地としては、前記誘導培地として用いられる基本培地や、該基本培地の組成に変更を加えた改変基本培地等のベースとなる培地に炭素源を加えた同様のものを用いることができるが、なかでも、MS培地、B5培地、WP培地、MB培地に炭素源を加えたものが好ましく、MS培地、その組成に変更を加えたMS改変培地、MB培地又はその組成に変更を加えたMB改変培地に炭素源を加えたものがより好ましく、MB培地又はその組成に変更を加えたMB改変培地に炭素源を加えたものが更に好ましい。 As the rooting-inducing medium, the basal medium used as the above-mentioned induction medium, or a modified basal medium obtained by modifying the composition of the basal medium, or the like, obtained by adding a carbon source to the base medium can be used. However, among these, MS medium, B5 medium, WP medium, and MB medium to which a carbon source has been added are preferable, and MS medium, MS modified medium whose composition has been changed, MB medium, or its composition has been changed. A modified MB medium to which a carbon source has been added is more preferred, and a MB medium or a modified MB medium whose composition has been modified to which a carbon source has been added is even more preferred.

発根誘導培地を固体培地とする場合、固形化剤を使用して培地を固体にすればよい。固形化剤としては、特に限定されず、寒天、ゲランガム、アガロース、ゲルライト、アガー、フィタゲル等が挙げられる。 When the rooting-inducing medium is a solid medium, a solidifying agent may be used to solidify the medium. The solidifying agent is not particularly limited, and includes agar, gellan gum, agarose, gelrite, agar, phytagel and the like.

好適な発根誘導培地の組成及び培養条件は、植物種により異なり、また培地が液体培地であるか固体培地であるかによっても異なるが、通常は(特に、ゴムノキの場合は)以下の組成である。 The composition and culture conditions of a suitable rooting induction medium differ depending on the plant species and whether the medium is a liquid medium or a solid medium. be.

発根誘導培地中の炭素源の濃度は、好ましくは0.1質量%以上、より好ましくは1.0質量%以上である。該炭素源の濃度は、好ましくは10質量%以下、より好ましくは6.0質量%以下である。 The carbon source concentration in the rooting induction medium is preferably 0.1% by mass or more, more preferably 1.0% by mass or more. The concentration of the carbon source is preferably 10% by mass or less, more preferably 6.0% by mass or less.

発根誘導培地中の植物ホルモンの濃度は、好ましくは2.0mg/L以下、より好ましくは1.0mg/L以下、更に好ましくは0.1mg/L以下、特に好ましくは0.08mg/L以下、最も好ましくは0mg/Lである。これにより、より良好な発根率が得られる。 The plant hormone concentration in the rooting induction medium is preferably 2.0 mg/L or less, more preferably 1.0 mg/L or less, still more preferably 0.1 mg/L or less, and particularly preferably 0.08 mg/L or less. , most preferably 0 mg/L. This gives a better rooting rate.

発根誘導培地中の活性炭の濃度は、好ましくは0.005質量%以上、より好ましくは0.008質量%以上である。該活性炭の濃度は、好ましくは1.0質量%以下、より好ましくは0.1質量%以下である。 The concentration of activated carbon in the rooting induction medium is preferably 0.005% by mass or more, more preferably 0.008% by mass or more. The concentration of the activated carbon is preferably 1.0% by mass or less, more preferably 0.1% by mass or less.

発根誘導培地中の硝酸銀の濃度は、好ましくは0.1mg/L以上、より好ましくは0.3mg/L以上、更に好ましくは0.5mg/L以上である。該硝酸銀の濃度は、好ましくは5.0mg/L以下、より好ましくは3.0mg/L以下である。 The concentration of silver nitrate in the rooting induction medium is preferably 0.1 mg/L or more, more preferably 0.3 mg/L or more, still more preferably 0.5 mg/L or more. The silver nitrate concentration is preferably 5.0 mg/L or less, more preferably 3.0 mg/L or less.

発根誘導培地中のグルタチオンの濃度は、好ましくは10μmol/L以上、より好ましくは30μmol/L以上、更に好ましくは40μmol/L以上、特に好ましくは60μmol/L以上、最も好ましくは80μmol/L以上であり、好ましくは500μmol/L以下、より好ましくは400μmol/L以下、更に好ましくは300μmol/L以下、特に好ましくは200μmol/L以下、最も好ましくは150μmol/L以下である。 The concentration of glutathione in the rooting induction medium is preferably 10 μmol/L or more, more preferably 30 μmol/L or more, still more preferably 40 μmol/L or more, particularly preferably 60 μmol/L or more, most preferably 80 μmol/L or more. preferably 500 μmol/L or less, more preferably 400 μmol/L or less, still more preferably 300 μmol/L or less, particularly preferably 200 μmol/L or less, and most preferably 150 μmol/L or less.

発根誘導培地のpHは、4.0~10.0が好ましく、5.0~6.5がより好ましく、5.5~6.0が更に好ましい。 The pH of the rooting induction medium is preferably 4.0 to 10.0, more preferably 5.0 to 6.5, even more preferably 5.5 to 6.0.

培養工程は、通常、温度、照明時間等の培養条件の管理された制御環境下で行われる。培養条件は適宜設定することができるが、例えば、培養温度は、0~40℃が好ましく、20~40℃がより好ましく、25~35℃が更に好ましい。培養は、暗所で行っても明所で行ってもよいが、光条件としては、例えば、5~20μmol/m/sの照明の下、14~16時間の明時間という条件などが挙げられる。培養時間は、特に限定されないが、1~10週間培養することが好ましく、4~8週間がより好ましい。 The culturing step is usually carried out in a controlled environment in which culture conditions such as temperature and lighting time are controlled. Cultivation conditions can be appropriately set. For example, the culture temperature is preferably 0 to 40.degree. C., more preferably 20 to 40.degree. C., and even more preferably 25 to 35.degree. Cultivation may be performed in a dark place or in a bright place. Light conditions include, for example, 5 to 20 μmol/m 2 /s illumination and 14 to 16 hours of light. be done. Cultivation time is not particularly limited, but culturing for 1 to 10 weeks is preferable, and 4 to 8 weeks is more preferable.

なお、本明細書において、培養工程の培養時間については、発根誘導培地に前記浸漬処理工程により浸漬されたシュート(シュートの切片)を移植したときを培養開始(0時間)とし、培養期間3週間目は、培養開始後504時間、培養期間9週間目は、培養開始後1512時間を意味し、新たな発根誘導培地に移植した(植え替えた)際は培養期間をリセットせずに、培養期間を累積加算することとする。 In this specification, the culture time of the culture step is defined as the start of culture (0 hours) when the shoots (shoot segments) immersed in the rooting induction medium are transplanted, and the culture period is 3. Week 9 means 504 hours after the start of culture, and Week 9 means 1512 hours after the start of culture. The culture period is cumulatively added.

固体培地の場合、発根誘導培地中の固形化剤の濃度は、好ましくは0.1質量%以上、より好ましくは0.2質量%以上である。該固形化剤の濃度は、好ましくは2.0質量%以下、より好ましくは1.1質量%以下、更に好ましくは0.75質量%以下である。 In the case of a solid medium, the concentration of the solidifying agent in the rooting induction medium is preferably 0.1% by mass or more, more preferably 0.2% by mass or more. The concentration of the solidifying agent is preferably 2.0% by mass or less, more preferably 1.1% by mass or less, and even more preferably 0.75% by mass or less.

上述の条件のなかでも、植物ホルモンの濃度が低いこと(実質的に含有しないこと)、グルタチオンを含有することが好ましく、植物ホルモンの濃度が低く(実質的に含有せず)、かつ、グルタチオンを含有することがより好ましい。 Among the above conditions, it is preferable that the plant hormone concentration is low (substantially free) and glutathione is contained, and the plant hormone concentration is low (substantially free) and glutathione is contained. Containing is more preferable.

以上のように、前記浸漬処理工程により浸漬されたシュートを前記発根誘導培地で培養することにより、発根させることが可能であり、発根させたシュート(幼植物)が得られ、完全なクローン苗が形成される。 As described above, by culturing the shoots soaked in the soaking treatment step in the rooting-inducing medium, it is possible to root, and rooted shoots (seedlings) are obtained, which are complete. Clonal seedlings are formed.

得られた幼植物(木本植物のシュート由来の幼植物)は、従来であれば、直接土壌に移植されるが、本発明では、以下の水耕栽培工程に供する。 The obtained seedlings (stem-derived seedlings of woody plants) are conventionally transplanted directly into soil, but in the present invention, they are subjected to the following hydroponic cultivation process.

(水耕栽培工程)
水耕栽培工程では、木本植物のシュート由来の幼植物を水耕栽培する。
(Hydroponic cultivation process)
In the hydroponic cultivation step, seedlings derived from shoots of woody plants are hydroponically cultivated.

水耕栽培工程に供される幼植物は、木本植物のシュート由来の幼植物であれば特に限定されない。水耕栽培工程に供される幼植物には、前記の通り、発根したシュートだけではなく、発根したシュートに対して土耕栽培を行って、生育不良傾向となった植物も含まれる。 The seedlings to be subjected to the hydroponics step are not particularly limited as long as they are seedlings derived from shoots of woody plants. As described above, seedlings to be subjected to the hydroponics process include not only rooted shoots, but also plants that tend to grow poorly as a result of performing soil culture on the rooted shoots.

水耕栽培工程に供される幼植物は、葉の展開が完了していることが好ましい。ここで、本明細書において、葉の展開が完了しているとは、芽が伸長し、出葉してから葉の展開が完了していることを意味する。 It is preferable that the seedlings to be subjected to the hydroponics process have completely developed leaves. Here, in the present specification, the term "leaf development has been completed" means that the buds have elongated and the leaf development has been completed after emergence of leaves.

水耕栽培工程に供される幼植物の地上部の高さは、好ましくは1m以下、より好ましくは50cm以下、更に好ましくは20cm以下であり、好ましくは1.5cm以上、より好ましくは3.0cm以上、更に好ましくは4.5cm以上である。前記範囲内であると、効果がより好適に得られる傾向がある。
ここで、水耕栽培工程に供される幼植物の地上部の高さは、水耕栽培工程開始時の幼植物の地上部の高さを意味する。
The height of the above ground part of the seedlings subjected to the hydroponics process is preferably 1 m or less, more preferably 50 cm or less, still more preferably 20 cm or less, preferably 1.5 cm or more, more preferably 3.0 cm. 4.5 cm or more, more preferably 4.5 cm or more. Within the above range, the effect tends to be obtained more favorably.
Here, the height of the above-ground part of the young plant to be subjected to the hydroponic cultivation process means the height of the above-ground part of the young plant at the start of the hydroponic cultivation process.

水耕栽培では、通常は、養液を用いて栽培を行う。より好ましくは幼植物の根が養液に接触する状態で栽培を行う。そして、土壌などの固形培地を使用しない。 In hydroponics, cultivation is usually performed using a nutrient solution. Cultivation is more preferably carried out in a state in which the roots of the seedlings are in contact with the nutrient solution. And do not use solid media such as soil.

前記養液は、植物が生長するために必要な養分を含む肥料を水に溶かして調製したものであり、植物の生育に適した養液であれば特に限定されず、従来公知のものを使用できるが、例えば、カネコ養液栽培用肥料ファームエース1号(カネコ種苗(株)製)、カネコ養液栽培用肥料ファームエース2号(カネコ種苗(株)製)、養液栽培用肥料OATハウス1号(OATアグリオ(株)製)、養液栽培用肥料OATハウス2号(OATアグリオ(株)製)、ハイポニカ液体肥料(協和(株)製)、ホーグランド水耕液などが使用できる。これらは単独で用いてもよく、2種以上を併用してもよい。なかでも、ハイポニカ液体肥料(協和(株)製)、ホーグランド水耕液が好ましく、ホーグランド水耕液がより好ましい。 The nutrient solution is prepared by dissolving a fertilizer containing nutrients necessary for plant growth in water, and is not particularly limited as long as it is suitable for plant growth, and conventionally known solutions are used. For example, Kaneko Hydroponic Fertilizer Farm Ace No. 1 (manufactured by Kaneko Seed Co., Ltd.), Kaneko Hydroponic Fertilizer Farm Ace No. 2 (manufactured by Kaneko Seed Co., Ltd.), Hydroponic Fertilizer OAT House No. 1 (manufactured by OAT Agrio Co., Ltd.), hydroponics fertilizer OAT House No. 2 (manufactured by OAT Agrio Co., Ltd.), Hyponica liquid fertilizer (manufactured by Kyowa Co., Ltd.), Hoagland hydroponic solution, and the like can be used. These may be used alone or in combination of two or more. Among them, Hyponica liquid fertilizer (manufactured by Kyowa Co., Ltd.) and Hoagland hydroponic solution are preferred, and Hoagland hydroponic solution is more preferred.

例えば、OATハウス1号は、窒素全量10.0質量%、水溶性リン酸8.0質量%、水溶性カリウム27.0質量%、水溶性苦土4.0質量%、水溶性マンガン0.10質量%、水溶性ホウ素0.10質量%、鉄分0.18質量%、銅分0.002質量%、亜鉛分0.006質量%、モリブデン分0.002質量%を含む粉末状の肥料である。
また、OATハウス2号は、窒素全量11.0質量%、石灰23.0質量%を含む粉末状肥料である。
For example, OAT House No. 1 contains 10.0% by mass of total nitrogen, 8.0% by mass of water-soluble phosphoric acid, 27.0% by mass of water-soluble potassium, 4.0% by mass of water-soluble magnesium, and 0.0% by mass of water-soluble manganese. Powdered fertilizer containing 10% by mass, 0.10% by mass of water-soluble boron, 0.18% by mass of iron, 0.002% by mass of copper, 0.006% by mass of zinc, and 0.002% by mass of molybdenum be.
OAT House No. 2 is a powdered fertilizer containing 11.0% by mass of nitrogen and 23.0% by mass of lime.

例えば、OATハウス1号とOATハウス2号とを用いて、養液を調製する場合には、公知の処方(例えば、A処方やC処方など)に従って、水にOATハウス1号を溶解させた後、その溶液にOATハウス2号を添加して溶解させる。
一例として、OATハウス1号(OATアグリオ(株)製)及びOATハウス2号(OATアグリオ(株)製)のA処方の成分組成を下記する。
窒素全量(TN):260ppm
(内アンモニア性窒素(AN):23ppm、硝酸性窒素(NN):233ppm)
リン酸(P):120ppm
加里(KO):405ppm
石灰(CaO):230ppm
苦土(MgO):60ppm
マンガン(MnO):1.5ppm
ホウ素(B):1.5ppm
鉄(Fe):2.7ppm
銅(Cu):0.03ppm
亜鉛(Zn):0.09ppm
モリブデン(Mo):0.03ppm
EC値(dS/m):2.6
For example, when using OAT House No. 1 and OAT House No. 2 to prepare a nutrient solution, OAT House No. 1 was dissolved in water according to a known formulation (eg, A formulation, C formulation, etc.). After that, OAT House No. 2 is added to the solution and dissolved.
As an example, the component composition of Form A of OAT House No. 1 (manufactured by OAT Agrio Co., Ltd.) and OAT House No. 2 (manufactured by OAT Agrio Co., Ltd.) is shown below.
Total nitrogen (TN): 260 ppm
(Ammonia nitrogen (AN): 23 ppm, nitrate nitrogen (NN): 233 ppm)
Phosphoric acid ( P2O5 ): 120ppm
Potassium (K 2 O): 405 ppm
Lime (CaO): 230ppm
Magnesium (MgO): 60 ppm
Manganese (MnO): 1.5 ppm
Boron ( B2O3 ): 1.5 ppm
Iron (Fe): 2.7ppm
Copper (Cu): 0.03ppm
Zinc (Zn): 0.09ppm
Molybdenum (Mo): 0.03 ppm
EC value (dS/m): 2.6

例えば、ホーグランド水耕液は、以下の組成である。

Figure 0007278237000001
For example, the Hoagland hydroponic solution has the following composition.
Figure 0007278237000001

前記養液中の窒素含有量、水溶性リン酸含有量、水溶性カリウム含有量、石灰含有量、水溶性苦土含有量等は特に限定されず、植物の生育に適した養液となるように当業者であれば容易に設定可能である。
前記養液中の窒素濃度は、例えば、10~20mmol/lであることが好ましい。
前記養液中の水溶性リン酸濃度は、例えば、1~6mmol/lであることが好ましい。前記養液中の水溶性カリウム濃度は、例えば、5~15mmol/lであることが好ましい。
The nitrogen content, water-soluble phosphoric acid content, water-soluble potassium content, lime content, water-soluble magnesium content, etc. in the nutrient solution are not particularly limited, and the nutrient solution may be suitable for plant growth. can be easily set by those skilled in the art.
The nitrogen concentration in the nutrient solution is preferably 10 to 20 mmol/l, for example.
The water-soluble phosphoric acid concentration in the nutrient solution is preferably, for example, 1 to 6 mmol/l. The water-soluble potassium concentration in the nutrient solution is preferably, for example, 5 to 15 mmol/l.

発根、根の発達、及び地上部の生育がより促進され、幼植物の生育がより大きく促進され、木本植物のシュート由来の幼植物から植物体をより生産性良く製造するためには、養液の温度及び養液の溶存酸素量が非常に重要である。養液の温度及び養液の溶存酸素量を以下の好適な数値範囲内とすることにより、効果がより好適に得られる。
これは、以下のように推測される。
根に必要な酸素を十分に供給することで、酸素不足を防ぐとともに、生育に適した水温に保つことで、湿害を予防できる。これにより、根からの養分・水分の吸収を促し、健康な植物体をより好適に得られる。
In order to further promote rooting, root development, and growth of the above-ground part, to further promote the growth of seedlings, and to produce plants from seedlings derived from the shoots of woody plants with high productivity, The temperature of the nutrient solution and the dissolved oxygen content of the nutrient solution are very important. By setting the temperature of the nutrient solution and the amount of dissolved oxygen in the nutrient solution within the following preferred numerical ranges, the effect can be obtained more favorably.
This is estimated as follows.
By supplying sufficient oxygen to the roots, oxygen deficiency can be prevented, and by keeping the water temperature suitable for growth, moisture damage can be prevented. As a result, the absorption of nutrients and water from the roots is promoted, and a healthy plant can be obtained more favorably.

養液の温度は、好ましくは20℃以上、より好ましくは22℃以上、更に好ましくは24℃以上、特に好ましくは25℃以上であり、好ましくは36℃以下、より好ましくは34℃以下、更に好ましくは32℃以下、特に好ましくは30℃以下、最も好ましくは28℃以下、より最も好ましくは26℃以下である。前記範囲内であると、効果がより好適に得られる傾向がある。 The temperature of the nutrient solution is preferably 20° C. or higher, more preferably 22° C. or higher, still more preferably 24° C. or higher, particularly preferably 25° C. or higher, preferably 36° C. or lower, more preferably 34° C. or lower, and even more preferably. is 32° C. or lower, particularly preferably 30° C. or lower, most preferably 28° C. or lower, and most preferably 26° C. or lower. Within the above range, the effect tends to be obtained more favorably.

養液の溶存酸素量は、好ましくは2ppm以上、より好ましくは4ppm以上、更に好ましくは5ppm以上、特に好ましくは7ppm以上、最も好ましくは9ppm以上であり、好ましくは20ppm以下、より好ましくは18ppm以下、更に好ましくは15ppm以下、特に好ましくは12ppm以下である。前記範囲内であると、効果がより好適に得られる傾向がある。
なお、養液の溶存酸素量は、溶存酸素測定器を用いて25℃で測定される値である。
なお、溶存酸素量を前記範囲内とするための方法としては特に限定されないが、例えば、養液に対して、空気や酸素を添加、すなわち、エアレーションを行えばよい。これにより、効果がより好適に得られる傾向がある。
The dissolved oxygen content of the nutrient solution is preferably 2 ppm or more, more preferably 4 ppm or more, still more preferably 5 ppm or more, particularly preferably 7 ppm or more, most preferably 9 ppm or more, preferably 20 ppm or less, more preferably 18 ppm or less. More preferably 15 ppm or less, particularly preferably 12 ppm or less. Within the above range, the effect tends to be obtained more favorably.
The amount of dissolved oxygen in the nutrient solution is a value measured at 25°C using a dissolved oxygen measuring instrument.
The method for adjusting the dissolved oxygen content within the above range is not particularly limited, but for example, air or oxygen may be added to the nutrient solution, that is, aeration may be performed. As a result, the effect tends to be obtained more favorably.

養液の初期pHは、好ましくは5.6~5.8である。前記範囲内であると、効果がより好適に得られる傾向がある。
また、水耕栽培工程において、養液のpHを5.0~6.5に維持しながら栽培を行うことが好ましい。該pHは、好ましくは5.2以上、より好ましくは5.5以上であり、好ましくは6.3以下、より好ましくは6.0以下である。前記範囲内であると、効果がより好適に得られる傾向がある。
なお、前記pH範囲内となるように、必要に応じて、酸やアルカリを養液に添加して調整すればよい。
また、本明細書において、pHは、25℃で測定される値である。
The initial pH of the nutrient solution is preferably 5.6-5.8. Within the above range, the effect tends to be obtained more favorably.
Moreover, in the hydroponics process, it is preferable to cultivate while maintaining the pH of the nutrient solution at 5.0 to 6.5. The pH is preferably 5.2 or higher, more preferably 5.5 or higher, and preferably 6.3 or lower, more preferably 6.0 or lower. Within the above range, the effect tends to be obtained more favorably.
If necessary, an acid or an alkali may be added to the nutrient solution so that the pH falls within the above range.
Moreover, in this specification, pH is a value measured at 25 degreeC.

水耕栽培工程において、明条件時の葉の位置での照度が5000lx以上の照度環境下で栽培を行うことが好ましい。照度は、好ましくは6000lx以上、より好ましくは7000lx以上であり、好ましくは15000lx以下、より好ましくは10000lx以下である。前記範囲内であると、効果がより好適に得られる傾向がある。
なお、本明細書において、葉の位置での照度は、JIS C 7612に準拠して測定される値である。
In the hydroponic cultivation process, it is preferable to perform cultivation under an illuminance environment in which the illuminance at the position of the leaves under light conditions is 5000 lx or more. The illuminance is preferably 6000 lx or more, more preferably 7000 lx or more, and preferably 15000 lx or less, more preferably 10000 lx or less. Within the above range, the effect tends to be obtained more favorably.
In addition, in this specification, the illuminance at the position of a leaf is a value measured based on JIS C7612.

前記照度を得るための光源としては、特に限定されず、自然光を利用しても、人工光を利用しても、これらを組み合わせて利用してもよい。人工光を用いる場合、発光ダイオード(LED)、ハロゲンランプ、白熱電球、蛍光灯、アーク灯、無電極放電灯、低圧放電灯、冷陰極型蛍光管、外部電極型蛍光管、エレクトロルミネセンスライト、及びHIDランプ等を使用することができる。HIDランプとしては、例えば、高圧水銀ランプ、メタルハライドランプ、及び高圧ナトリウムランプ等が挙げられる。これらの光源は、1種類のみを使用してもよいし、2種以上を組み合わせて使用してもよい。 A light source for obtaining the illuminance is not particularly limited, and natural light, artificial light, or a combination thereof may be used. When artificial light is used, light emitting diodes (LED), halogen lamps, incandescent lamps, fluorescent lamps, arc lamps, electrodeless discharge lamps, low pressure discharge lamps, cold cathode fluorescent lamps, external electrode fluorescent lamps, electroluminescence lights, and HID lamps and the like can be used. HID lamps include, for example, high-pressure mercury lamps, metal halide lamps, and high-pressure sodium lamps. Only one type of these light sources may be used, or two or more types may be used in combination.

水耕栽培工程における日長時間(明条件)は、特に限定されないが、好ましくは12時間以上、より好ましくは14時間以上であり、22時間以下が好ましく、20時間以下がより好ましい。前記範囲内であると、効果がより好適に得られる傾向がある。 The daytime (light condition) in the hydroponics process is not particularly limited, but is preferably 12 hours or longer, more preferably 14 hours or longer, preferably 22 hours or shorter, and more preferably 20 hours or shorter. Within the above range, the effect tends to be obtained more favorably.

水耕栽培工程における栽培温度は、好ましくは20℃以上、より好ましくは22℃以上、更に好ましくは24℃以上、特に好ましくは26℃以上であり、好ましくは36℃以下、より好ましくは34℃以下、更に好ましくは32℃以下、特に好ましくは30℃以下である。前記範囲内であると、効果がより好適に得られる傾向がある。 The cultivation temperature in the hydroponics step is preferably 20°C or higher, more preferably 22°C or higher, still more preferably 24°C or higher, particularly preferably 26°C or higher, and preferably 36°C or lower, more preferably 34°C or lower. , more preferably 32°C or lower, particularly preferably 30°C or lower. Within the above range, the effect tends to be obtained more favorably.

水耕栽培工程における栽培期間は、特に限定されないが、2ヶ月以上が好ましく、3ヶ月以上がより好ましく、4ヶ月以上が更に好ましく、上限については特に限定されない。前記範囲内であると、効果がより好適に得られる傾向がある。 The cultivation period in the hydroponic cultivation step is not particularly limited, but is preferably 2 months or longer, more preferably 3 months or longer, even more preferably 4 months or longer, and the upper limit is not particularly limited. Within the above range, the effect tends to be obtained more favorably.

その他の水耕栽培条件としては、特に限定されず、植物の生育に適した通常採用される条件により栽培することができる。また、水耕栽培を行う装置等についても特に限定されず、通常水耕栽培に用いられる装置等を用いることができる。 Other hydroponic cultivation conditions are not particularly limited, and cultivation can be carried out under conditions that are usually employed and are suitable for plant growth. In addition, there is no particular limitation on the apparatus or the like for hydroponics, and any apparatus or the like normally used for hydroponics can be used.

水耕栽培工程では、幼植物の根の基部周りに弾性材を取り付けることが好ましい。これにより、幼植物が養液上に固定され、効果がより好適に得られる傾向がある。
弾性材としては、弾性を有する限り特に限定されないが、スポンジ、給水シート等が挙げられる。これらは、単独で用いてもよく、2種以上を併用してもよい。なかでも、スポンジが好ましい。
ここで、本明細書において、根の基部とは、発根が見られた部位付近を意味する。
In the hydroponic cultivation process, it is preferable to attach an elastic material around the root base of the young plant. As a result, the seedlings are fixed on the nutrient solution, and the effect tends to be obtained more favorably.
The elastic material is not particularly limited as long as it has elasticity, and examples thereof include sponges and water supply sheets. These may be used alone or in combination of two or more. Among them, a sponge is preferable.
Here, in the present specification, the base of the root means the vicinity of the site where rooting was observed.

幼植物の根の基部に弾性材を取り付ける際に、基部を締め付けすぎないことが好ましい。そのため、弾性材は切込みが入れられていることが好ましい。
弾性材の引張強度は、好ましくは30KPa以上、より好ましくは40KPa以上、更に好ましくは60KPa以上であり、好ましくは1000KPa以下、より好ましくは500KPa以下、更に好ましくは100KPa以下である。前記範囲内であると、弾性材が基部を締め付けすぎず、効果がより好適に得られる傾向がある。
なお、本明細書において、弾性材の引張強度は、JIS K6400-5に準拠し、試験片を引張試験機で引っ張り、破断までの最大力を試験片断面積で除した値を引張強度とする。
When attaching the elastic material to the root base of the seedling, it is preferable not to over tighten the base. Therefore, it is preferable that the elastic member is notched.
The tensile strength of the elastic material is preferably 30 KPa or more, more preferably 40 KPa or more, still more preferably 60 KPa or more, and preferably 1000 KPa or less, more preferably 500 KPa or less, and still more preferably 100 KPa or less. Within the above range, the elastic material does not over tighten the base, and the effect tends to be obtained more favorably.
In this specification, the tensile strength of the elastic material is defined as the value obtained by pulling the test piece with a tensile tester and dividing the maximum force until breakage by the cross-sectional area of the test piece in accordance with JIS K6400-5.

以上のように、木本植物のシュート由来の幼植物を水耕栽培する水耕栽培工程を行うことにより、土耕栽培に比べて、発根、根の発達、及び地上部の生育が促進され、幼植物の生育が大きく促進され、木本植物のシュート由来の幼植物から植物体(完全な植物体であるクローン苗)を生産性良く製造できる。
得られた植物体は、必要に応じて、土壌に移植してもよい。
なお、前記水耕栽培工程を行うことにより、馴化も完了する。よって、前記水耕栽培工程を行うことにより、馴化と初期成育を共に効率的に促進できるため、別途、馴化工程を行う必要がなく、木本植物のシュート由来の幼植物から植物体(完全な植物体であるクローン苗)を生産性良く製造できる。
As described above, by performing the hydroponic cultivation step of hydroponically cultivating seedlings derived from shoots of woody plants, rooting, root development, and above-ground growth are promoted as compared to soil cultivation. , the growth of seedlings is greatly promoted, and plant bodies (cloned seedlings that are complete plants) can be produced from seedlings derived from the shoots of woody plants with high productivity.
The obtained plant body may be transplanted to soil, if necessary.
In addition, acclimatization is also completed by performing the said hydroponics process. Therefore, by performing the hydroponic cultivation step, both acclimatization and initial growth can be efficiently promoted, so there is no need to perform a separate acclimatization step, and the seedlings derived from the shoots of woody plants to the plant body (complete Cloned seedlings, which are plants, can be produced with high productivity.

<天然ゴムの製造方法>
本発明の天然ゴムの製造方法は、
前記植物体の製造方法により植物体を製造する植物体製造工程と、
植物体製造工程により得られた植物体を用いて天然ゴムを製造する天然ゴム製造工程とを含む。本発明の天然ゴムの製造方法は、前記植物体の製造方法により植物体を製造する植物体製造工程を含むため、天然ゴムを生産性良く製造できる。
<Method for producing natural rubber>
The method for producing natural rubber of the present invention comprises:
a plant body manufacturing step of manufacturing a plant body by the plant body manufacturing method;
and a natural rubber manufacturing process for manufacturing natural rubber using the plant body obtained by the plant body manufacturing process. Since the method for producing natural rubber of the present invention includes the step of producing a plant by the method for producing a plant, natural rubber can be produced with high productivity.

植物体製造工程は、前記植物体の製造方法により植物体を製造する工程であり、前記植物体の製造方法を実施すればよい。 The plant production step is a step of producing a plant by the method for producing a plant, and the above method for producing a plant may be carried out.

天然ゴム製造工程では、植物体製造工程により得られた植物体を用いて天然ゴムを製造する。具体的には、植物体製造工程により得られた植物体を栽培することにより、該植物体が有する乳管細胞で天然ゴムを生合成させ、天然ゴムを製造すればよい。 In the natural rubber production process, natural rubber is produced using the plant body obtained in the plant body production process. Specifically, natural rubber may be produced by cultivating the plant body obtained by the plant body production process, thereby biosynthesizing natural rubber in mammary ductal cells possessed by the plant body.

植物体からの天然ゴムの回収方法は従来公知の方法に従って行えばよい。
例えば、植物体をナイフ等で物理的に傷つけ、乳液(ラテックス)を回収し、必要に応じて、酸を添加する方法等によりラテックスを固化することにより、植物体からゴム(天然ゴム)を固形分として回収できる。得られたゴム(天然ゴム)は、必要に応じて、洗浄、脱水、乾燥を行ってから使用すればよい。
A method for recovering natural rubber from plants may be carried out according to a conventionally known method.
For example, by physically injuring the plant body with a knife or the like, collecting emulsion (latex), and if necessary, solidifying the latex by adding acid, etc., to solidify rubber (natural rubber) from the plant body. It can be recovered as a minute. The obtained rubber (natural rubber) may be washed, dehydrated and dried as necessary before use.

<ゴム製品の製造方法>
本発明のゴム製品の製造方法は、
前記天然ゴムの製造方法により天然ゴムを製造する工程、該工程により得られる天然ゴムと、添加剤とを混練して混練物を得る混練工程、前記混練物から生ゴム製品を成形する生ゴム製品成形工程、及び前記生ゴム製品を加硫する加硫工程を含む。本発明のゴム製品の製造方法は、前記天然ゴムの製造方法により天然ゴムを製造する工程を含むため、ゴム製品を生産性良く製造できる。
<Method for manufacturing rubber products>
The method for producing a rubber product of the present invention comprises:
A step of producing natural rubber by the method for producing natural rubber, a kneading step of kneading the natural rubber obtained by said step with an additive to obtain a kneaded product, and a raw rubber product forming step of forming a raw rubber product from said kneaded product. , and a vulcanization step of vulcanizing the crude rubber product. Since the method for producing rubber products of the present invention includes the step of producing natural rubber by the method for producing natural rubber, rubber products can be produced with high productivity.

ゴム製品としては、ゴム(好ましくは天然ゴム)を使用して製造できるゴム製品であれば特に限定されず、例えば、空気入りタイヤ、ゴムクローラ、ゴム防舷材等が挙げられる。 The rubber product is not particularly limited as long as it can be manufactured using rubber (preferably natural rubber), and examples thereof include pneumatic tires, rubber crawlers, rubber fenders, and the like.

ゴム製品が空気入りタイヤの場合、すなわち、本発明のゴム製品の製造方法が本発明の空気入りタイヤの製造方法の場合、前記生ゴム製品成形工程は、前記混練物から生タイヤを成形する生タイヤ成形工程に、前記加硫工程は、前記生タイヤを加硫する加硫工程に相当する。すなわち、本発明の空気入りタイヤの製造方法は、前記天然ゴムの製造方法により天然ゴムを製造する工程、該工程により得られる天然ゴムと、添加剤とを混練して混練物を得る混練工程、前記混練物から生タイヤを成形する生タイヤ成形工程、及び前記生タイヤを加硫する加硫工程を含む。本発明の空気入りタイヤの製造方法は、前記天然ゴムの製造方法により天然ゴムを製造する工程を含むため、空気入りタイヤを生産性良く製造できる。 When the rubber product is a pneumatic tire, that is, when the rubber product manufacturing method of the present invention is the pneumatic tire manufacturing method of the present invention, the raw rubber product molding step includes forming a raw tire from the kneaded product. In the molding process, the vulcanization process corresponds to the vulcanization process of vulcanizing the raw tire. That is, the method for producing a pneumatic tire of the present invention comprises a step of producing natural rubber by the above method for producing natural rubber, a kneading step of kneading the natural rubber obtained by the above step and an additive to obtain a kneaded product, A raw tire forming step of forming a raw tire from the kneaded material and a vulcanizing step of vulcanizing the raw tire are included. Since the method for manufacturing a pneumatic tire of the present invention includes the step of manufacturing natural rubber by the method for manufacturing natural rubber, it is possible to manufacture pneumatic tires with good productivity.

前記天然ゴムの製造方法により天然ゴムを製造する工程は、前記天然ゴムの製造方法を実施し、天然ゴムを製造すればよい。 The step of producing natural rubber by the above-described method for producing natural rubber may be performed by carrying out the above-mentioned method for producing natural rubber to produce natural rubber.

<混練工程>
混練工程では、前記天然ゴムの製造方法により天然ゴムを製造する工程により得られる天然ゴムと、添加剤とを混練して混練物を得る。
<Kneading process>
In the kneading step, a kneaded product is obtained by kneading the natural rubber obtained by the step of producing natural rubber by the above-described method for producing natural rubber and additives.

添加剤としては特に限定されず、ゴム製品の製造に用いられる添加剤を使用できる。例えば、ゴム製品が空気入りタイヤの場合、例えば、前記ラテックスから得られたゴム以外のゴム成分、カーボンブラック、シリカ、炭酸カルシウム、アルミナ、クレー、タルクなどの補強用充填剤、シランカップリング剤、酸化亜鉛、ステアリン酸、加工助剤、各種老化防止剤、オイルなどの軟化剤、ワックス、硫黄などの加硫剤、加硫促進剤等が挙げられる。 Additives are not particularly limited, and additives used in the production of rubber products can be used. For example, when the rubber product is a pneumatic tire, for example, a rubber component other than the rubber obtained from the latex, reinforcing fillers such as carbon black, silica, calcium carbonate, alumina, clay, and talc, a silane coupling agent, Zinc oxide, stearic acid, processing aids, various anti-aging agents, softening agents such as oils, waxes, vulcanizing agents such as sulfur, and vulcanization accelerators.

混練工程における混練は、オープンロール、バンバリーミキサー、密閉式混練機などのゴム混練装置を用いて行えばよい。 Kneading in the kneading step may be performed using a rubber kneading device such as an open roll, a Banbury mixer, or an internal kneader.

<生ゴム製品成形工程(タイヤの場合は生タイヤ成形工程)>
生ゴム製品成形工程では、混練工程により得られた混練物から生ゴム製品(タイヤの場合は生タイヤ)を成形する。
生ゴム製品の成形方法としては特に限定されず、生ゴム製品の成形に用いられる方法を適宜適用すればよい。例えば、ゴム製品が空気入りタイヤの場合、混練工程により得られた混練物を、各タイヤ部材の形状に合わせて押し出し加工し、タイヤ成型機上にて通常の方法にて成形し、各タイヤ部材を貼り合わせ、生タイヤ(未加硫タイヤ)を成形すればよい。
<Raw rubber product molding process (raw tire molding process in the case of tires)>
In the raw rubber product forming step, a raw rubber product (raw tire in the case of a tire) is formed from the kneaded material obtained in the kneading step.
The method for molding raw rubber products is not particularly limited, and methods used for molding raw rubber products may be applied as appropriate. For example, when the rubber product is a pneumatic tire, the kneaded product obtained by the kneading process is extruded according to the shape of each tire member, molded by a normal method on a tire molding machine, and each tire member are pasted together to form a raw tire (unvulcanized tire).

<加硫工程>
加硫工程では、生ゴム製品成形工程により得られた生ゴム製品を加硫することにより、ゴム製品が得られる。
生ゴム製品を加硫する方法としては特に限定されず、生ゴム製品の加硫に用いられる方法を適宜適用すればよい。例えば、ゴム製品が空気入りタイヤの場合、生ゴム製品成形工程により得られた生タイヤ(未加硫タイヤ)を加硫機中で加熱加圧して加硫することにより空気入りタイヤが得られる。
<Vulcanization process>
In the vulcanization step, a rubber product is obtained by vulcanizing the raw rubber product obtained in the raw rubber product molding step.
The method for vulcanizing raw rubber products is not particularly limited, and methods used for vulcanizing raw rubber products may be appropriately applied. For example, when the rubber product is a pneumatic tire, the raw tire (unvulcanized tire) obtained by the raw rubber product molding process is heated and pressurized in a vulcanizer to vulcanize the pneumatic tire.

実施例に基づいて、本発明を具体的に説明するが、本発明はこれらのみに限定されるものではない。 EXAMPLES The present invention will be specifically described based on Examples, but the present invention is not limited to these.

以下、実施例で使用した各種薬品について、まとめて説明する。
BA:ベンジルアデニン
KI:カイネチン
硝酸銀:メルク社製の硝酸銀
ゲル化剤(固形化剤):シグマアルドリッチ社製のPhytagel
Various chemicals used in the examples are collectively described below.
BA: benzyl adenine KI: kinetin silver nitrate: silver nitrate from Merck Co. Gelling agent (solidifying agent): Phytagel from Sigma-Aldrich

<誘導工程>
パラゴムノキの苗木から腋芽を含む組織を採取した。
次に、苗木から採取した腋芽を含む組織を流水で洗浄し、更に70質量%エタノールで洗浄した後、約5~10体積%に希釈した次亜塩素酸ナトリウム水溶液で滅菌し、滅菌水で洗浄した。
<Induction process>
Tissues containing axillary buds were collected from Hevea brasiliensis seedlings.
Next, the tissue containing the axillary bud collected from the seedling is washed with running water, further washed with 70% by mass ethanol, sterilized with an aqueous solution of sodium hypochlorite diluted to about 5 to 10% by volume, and washed with sterilized water. bottom.

次に、滅菌した組織を誘導培地(固体培地)に差し込み、培養を行った(誘導工程)。誘導培地は、MB培地に、ベンジルアデニン5.0mg/L、硝酸銀1.0mg/L、スクロース3.0質量%、活性炭0.05質量%を添加し、培地のpHを5.7に調整した後、ゲル化剤を0.275質量%となるように添加して、オートクレーブ(121℃、20分)で滅菌し、クリーンベンチ内で冷却することにより調製した。 Next, the sterilized tissue was inserted into an induction medium (solid medium) and cultured (induction step). The induction medium was prepared by adding 5.0 mg/L of benzyladenine, 1.0 mg/L of silver nitrate, 3.0% by mass of sucrose, and 0.05% by mass of activated carbon to MB medium, and adjusting the pH of the medium to 5.7. Thereafter, a gelling agent was added to 0.275% by mass, sterilized in an autoclave (121° C., 20 minutes), and cooled in a clean bench.

パラゴムノキの前記組織を誘導培地(固体培地)に差し込み、培養温度28℃、12.5μmol/m/sの照明の下、16時間の明時間という条件で培養し、シュートを誘導した。なお、4週間ごとに同じ組成の誘導培地に移植する植え継ぎを行った。
誘導工程により誘導されたシュートを以下において使用した。
The Hevea brasiliensis tissue was inserted into an induction medium (solid medium) and cultured at a culture temperature of 28° C. under illumination of 12.5 μmol/m 2 /s for 16 hours of light to induce shoots. In addition, the cells were transferred to an induction medium having the same composition every 4 weeks.
Shoots induced by the induction step were used in the following.

オーキシン溶液(5.0mg/L 1-ナフタレン酢酸、5.0mg/L インドール-3-酪酸、100μmol/L 還元型グルタチオン)にシュートの切り口を72時間浸漬した(浸漬処理工程、温度:28℃、12.5μmol/m/sの照明の下、16時間日長)。次に、MB基本培地に3.0質量%スクロース、0.01質量%活性炭、1.0mg/L硝酸銀、100μmol/L 還元型グルタチオン、0.275質量%固形化剤を含むホルモンフリー(植物ホルモンの濃度0mg/L)の固形培地(pH5.7)に、浸漬処理工程により浸漬処理されたシュートの切り口面を挿し込み培養した(培養工程)。培養は、12.5μmol/m/sの照明の下、16時間日長、温度25~28℃で8週間培養した。ホルモンフリーの培地で培養を開始後2週間目から根が確認できる個体があり、該個体を更に4週間培養し、幼植物(シュート由来の幼植物)を得た。
なお、オーキシン溶液は、前記成分を蒸留水に溶解することにより調製した。
また、培地は、基本培地に、固形化剤を除く前記各成分を添加し、培地のpHを5.7に調整した後、固形化剤を0.275質量%となるように添加して、オートクレーブ(121℃、20分)で滅菌し、クリーンベンチ内で冷却することにより調製した。
The cut end of the shoot was immersed in an auxin solution (5.0 mg/L 1-naphthaleneacetic acid, 5.0 mg/L indole-3-butyric acid, 100 μmol/L reduced glutathione) for 72 hours (immersion treatment step, temperature: 28°C, 16 hours photoperiod under illumination of 12.5 μmol/m 2 /s). Next, a hormone-free (phytohormone (concentration of 0 mg/L)) and cultured by inserting the cut surface of the shoot that had been immersed in the immersion treatment step into a solid medium (pH 5.7) (culture step). The culture was cultivated for 8 weeks at a temperature of 25-28° C. under illumination of 12.5 μmol/m 2 /s, 16-hour photoperiod. Two weeks after culturing in a hormone-free medium, some individuals were confirmed to have roots, and these individuals were further cultured for 4 weeks to obtain seedlings (shoot-derived seedlings).
The auxin solution was prepared by dissolving the above components in distilled water.
In addition, the medium is prepared by adding each component except the solidifying agent to the basal medium, adjusting the pH of the medium to 5.7, and then adding the solidifying agent to 0.275% by mass. It was prepared by sterilizing in an autoclave (121° C., 20 minutes) and cooling in a clean bench.

(実施例1)水耕栽培
得られた幼植物(地上部の高さ:5.0cm)の根の基部周りに、切込みを入れたスポンジ(引張強度:80KPa)を取り付けた。そして、台座(材質:発泡スチロール)に設けた穴に植物をセットし、養液(養液の初期pH:5.7)を入れた深さのある容器に台座を浮かべた。この際に、幼植物の根が養液に浸かるようにした。養液には、エアポンプで酸素を供給し、養液の溶存酸素量を12ppmに維持した。そして、養液の温度25℃、栽培温度28℃で、明条件16時間、暗条件8時間の条件下で水耕栽培を行った。
なお、明条件時の葉の位置での照度は5,000~10,000lxを維持し、暗条件時の葉の位置での照度は1lx以下を維持した。
また、硝酸溶液を養液に添加して、養液のpHを5.6~5.8に維持しながら栽培を行った。
(Example 1) An incised sponge (tensile strength: 80 KPa) was attached around the base of the root of a young plant (height above the ground: 5.0 cm) obtained by hydroponics. Then, a plant was set in a hole provided in a pedestal (material: styrofoam), and the pedestal was floated in a deep container containing a nutrient solution (initial pH of the nutrient solution: 5.7). At this time, the roots of the seedlings were immersed in the nutrient solution. Oxygen was supplied to the nutrient solution by an air pump, and the dissolved oxygen content of the nutrient solution was maintained at 12 ppm. Then, hydroponics was performed under the conditions of a nutrient solution temperature of 25° C., a cultivation temperature of 28° C., a light condition of 16 hours, and a dark condition of 8 hours.
The illuminance at the leaf position under bright conditions was maintained at 5,000 to 10,000 lx, and the illuminance at the leaf positions under dark conditions was maintained at 1 lx or less.
In addition, cultivation was carried out while maintaining the pH of the nutrient solution at 5.6 to 5.8 by adding a nitric acid solution to the nutrient solution.

なお、養液としては、ホーグランド水耕液を使用した。 Hoagland's hydroponic solution was used as the nutrient solution.

そして、栽培中1ヶ月経過毎に観察、写真撮影を行い、根の形成状態の確認、根の伸長、地上部の高さ、茎の太さ、葉の枯れの有無などを観察し、地上部の生育状態と根の形成状態を評価した。 Observations and photographs were taken every month during cultivation to confirm the state of root formation, root elongation, height of above-ground parts, thickness of stems, presence or absence of withered leaves, etc. were evaluated for growth and root formation.

(比較例1)
養液の代わりに培養土(バーミキュライトと観葉植物の土の混合)を用いた点以外は同様の条件で土耕栽培を行った。水やりは、前記養液をじょうろを用いて培養土に一日に一回加えて、培養土を湿らせることにより行った。
(Comparative example 1)
Soil cultivation was carried out under the same conditions except that potting soil (a mixture of vermiculite and foliage plant soil) was used instead of the nutrient solution. Watering was performed by adding the nutrient solution to the potting soil using a watering can once a day to moisten the potting soil.

実施例、比較例における評価結果を図1に示す。なお、各例はそれぞれ2回実施した。
図1(a)は、各例の地上部の高さの推移を、図1(b)は、各例の茎の太さの推移を示す。
図1より、実施例、比較例の対比により、水耕栽培することにより、土耕栽培に比べて、地上部の生育が顕著に促進されることが分かった。
また、土耕栽培を行った比較例1-1、1-2では、栽培初期の約6ヶ月に渡って遅延ステージ(retarded stage)が見られたのに対して、水耕栽培を行った実施例1-1、1-2では、栽培初期から地上部の生育が確認された。
なお、茎の太さは、地上部と根の境界から1.0cm離れた箇所の茎の太さを測定した。
FIG. 1 shows the evaluation results in Examples and Comparative Examples. Each example was performed twice.
FIG. 1(a) shows changes in the height of the ground part of each example, and FIG. 1(b) shows changes in the thickness of the stems in each example.
From FIG. 1, it was found that the growth of above-ground parts is remarkably promoted by hydroponics as compared with soil culture by comparing the examples and comparative examples.
In addition, in Comparative Examples 1-1 and 1-2 in which soil cultivation was performed, a retarded stage was observed for about 6 months in the initial stage of cultivation, whereas hydroponic cultivation was performed. In Examples 1-1 and 1-2, the growth of above-ground parts was confirmed from the early stage of cultivation.
The thickness of the stem was measured at a point 1.0 cm away from the boundary between the top part and the root.

図2は、各例の栽培3ヶ月経過時における地上部の様子を示す写真である。
図2より、水耕栽培した場合、土耕栽培した場合に比べて、地上部の生育が促進され、葉の健康状態が良好であることが分かった。
FIG. 2 is a photograph showing the state of the above-ground part after 3 months of cultivation in each example.
From FIG. 2, it was found that the growth of the above-ground part was promoted and the health condition of the leaves was better in the case of hydroponics than in the case of soil cultivation.

図3は、各例の栽培3ヶ月経過時における根の様子を示す写真である。
図3より、土耕栽培した比較例では、主に主根が渦を巻いているが、水耕栽培した実施例では、根は渦を巻かず、側根が発達していることが分かった。このように、水耕栽培した場合、土耕栽培に比べて、発根、根の発達が促進されることが分かった。
FIG. 3 is a photograph showing the state of the roots of each example after 3 months of cultivation.
From FIG. 3, it was found that in the comparative example of soil cultivation, mainly the taproot was swirled, but in the example of hydroponic cultivation, the roots were not swirled and the lateral roots were well developed. Thus, it was found that hydroponics promotes rooting and root development as compared to soil culture.

(実施例2)
まず、前記と同様にして得られた幼植物(地上部の高さ:5.0cm)を用いて土耕栽培を行った。この際に、生育不良となった。
この生育不良となった苗を実施例1と同様の条件で水耕栽培を2ヶ月行った。水耕栽培開始時の苗と、水耕栽培2ヶ月経過時の苗の写真を図4に示した。
図4より、木本植物のシュート由来の幼植物に対して土耕栽培を行って、生育不良傾向となった場合であっても、生育不良傾向の幼植物を水耕栽培に切り替えて栽培することにより、生育の改善が見られることが分かった。
一方、生育不良となった苗を比較例1と同様の条件で土耕栽培を行ったが、枯れてしまった。
(Example 2)
First, seedlings (height above the ground: 5.0 cm) obtained in the same manner as above were used for soil cultivation. At this time, the growth was poor.
The seedlings with poor growth were hydroponically cultivated under the same conditions as in Example 1 for 2 months. Fig. 4 shows photographs of the seedlings at the start of hydroponics and the seedlings after two months of hydroponics.
From FIG. 4, even if soil culture is performed on seedlings derived from shoots of woody plants and the growth tends to be poor, the seedlings that tend to grow poorly are cultivated by switching to hydroponics. It turned out that the improvement of growth was seen by this.
On the other hand, the poorly grown seedlings were cultivated under the same conditions as in Comparative Example 1, but they withered.

以上の通り、水耕栽培した場合、土耕栽培に比べて、発根、根の発達、及び地上部の生育が促進され、幼植物の生育が大きく促進され、木本植物のシュート由来の幼植物から植物体を生産性良く製造できることが分かった。 As described above, hydroponics promotes rooting, root development, and above-ground growth compared to soil culture, greatly promotes the growth of seedlings, and promotes shoot-derived seedlings of woody plants. It was found that plants can be produced from plants with high productivity.

Claims (20)

木本植物のシュート由来の幼植物を水耕栽培する水耕栽培工程を含み、
前記シュートがHevea属に属する植物のシュートであり、
前記水耕栽培工程において、養液の溶存酸素量が2~20ppmであり、前記水耕栽培工程において、固形培地を使用しない植物体の製造方法。
including a hydroponic cultivation step of hydroponically cultivating seedlings derived from shoots of woody plants;
the shoot is a shoot of a plant belonging to the genus Hevea;
A method for producing a plant body, wherein the dissolved oxygen content of the nutrient solution is 2 to 20 ppm in the hydroponic cultivation step, and no solid medium is used in the hydroponic cultivation step .
前記水耕栽培工程において、養液の温度が20~36℃である請求項1記載の植物体の製造方法。 The method for producing a plant body according to claim 1, wherein the temperature of the nutrient solution is 20 to 36°C in the hydroponics step. 前記水耕栽培工程において、養液の初期pHが5.6~5.8である請求項1又は2に記載の植物体の製造方法。 3. The method for producing a plant according to claim 1, wherein the initial pH of the nutrient solution is 5.6 to 5.8 in the hydroponics step. 前記水耕栽培工程において、養液のpHを5.0~6.5に維持する請求項1~のいずれかに記載の植物体の製造方法。 4. The method for producing a plant body according to any one of claims 1 to 3 , wherein pH of the nutrient solution is maintained at 5.0 to 6.5 in the hydroponics step. 前記水耕栽培工程において、明条件時の葉の位置での照度が5000lx以上の照度環境下で栽培を行う請求項1~のいずれかに記載の植物体の製造方法。 5. The method for producing a plant according to any one of claims 1 to 4 , wherein in the hydroponics step, the plant is cultivated under an illuminance environment in which the illuminance at the position of the leaves under light conditions is 5000 lx or more. 前記幼植物の地上部の高さが1m以下である請求項1~のいずれかに記載の植物体の製造方法。 6. The method for producing a plant body according to any one of claims 1 to 5 , wherein the height of the above-ground part of the young plant is 1 m or less. 前記シュートがパラゴムノキのシュートである請求項1~のいずれかに記載の植物体の製造方法。 The method for producing a plant according to any one of claims 1 to 6 , wherein the shoot is a shoot of Hevea brasiliensis. 請求項1~のいずれかに記載の植物体の製造方法により植物体を製造する植物体製造工程と、
植物体製造工程により得られた植物体を用いて天然ゴムを製造する天然ゴム製造工程とを含む天然ゴムの製造方法。
A plant body manufacturing process for manufacturing a plant body by the plant body manufacturing method according to any one of claims 1 to 7 ;
A method for producing natural rubber, comprising a natural rubber production step of producing natural rubber using the plant body obtained by the plant body production step.
請求項記載の天然ゴムの製造方法により天然ゴムを製造する工程、該工程により得られる天然ゴムと、添加剤とを混練して混練物を得る混練工程、前記混練物から生タイヤを成形する生タイヤ成形工程、及び前記生タイヤを加硫する加硫工程を含む空気入りタイヤの製造方法。 A step of producing natural rubber by the method for producing natural rubber according to claim 8 , a kneading step of kneading the natural rubber obtained by said step and an additive to obtain a kneaded product, and forming a green tire from said kneaded product. A method for manufacturing a pneumatic tire, comprising a raw tire molding step and a vulcanizing step of vulcanizing the raw tire. 請求項記載の天然ゴムの製造方法により天然ゴムを製造する工程、該工程により得られる天然ゴムと、添加剤とを混練して混練物を得る混練工程、前記混練物から生ゴム製品を成形する生ゴム製品成形工程、及び前記生ゴム製品を加硫する加硫工程を含むゴム製品の製造方法。 A step of producing natural rubber by the method for producing natural rubber according to claim 8 , a kneading step of kneading the natural rubber obtained by said step and an additive to obtain a kneaded product, and molding a raw rubber product from said kneaded product. A method for producing a rubber product, comprising a raw rubber product molding step and a vulcanization step of vulcanizing the raw rubber product. 木本植物のシュート由来の幼植物を水耕栽培する水耕栽培工程を含み、
前記シュートがHevea属に属する植物のシュートであり、
前記水耕栽培工程において、固形培地を使用しない植物体の製造方法。
including a hydroponic cultivation step of hydroponically cultivating seedlings derived from shoots of woody plants;
the shoot is a shoot of a plant belonging to the genus Hevea;
A method for producing a plant without using a solid medium in the hydroponics process.
前記水耕栽培工程において、養液の温度が20~36℃である請求項11記載の植物体の製造方法。 12. The method for producing a plant according to claim 11 , wherein the temperature of the nutrient solution is 20 to 36°C in the hydroponics step. 前記水耕栽培工程において、養液の初期pHが5.6~5.8である請求項11又は12に記載の植物体の製造方法。 13. The method for producing a plant according to claim 11 or 12 , wherein in the hydroponics step, the initial pH of the nutrient solution is 5.6 to 5.8. 前記水耕栽培工程において、養液のpHを5.0~6.5に維持する請求項1113のいずれかに記載の植物体の製造方法。 14. The method for producing a plant body according to any one of claims 11 to 13 , wherein pH of the nutrient solution is maintained at 5.0 to 6.5 in the hydroponics step. 前記水耕栽培工程において、明条件時の葉の位置での照度が5000lx以上の照度環境下で栽培を行う請求項1114のいずれかに記載の植物体の製造方法。 15. The method for producing a plant according to any one of claims 11 to 14 , wherein in the hydroponic cultivation step, the plant is cultivated under an illuminance environment in which the illuminance at the position of the leaves under light conditions is 5000 lx or more. 前記幼植物の地上部の高さが1m以下である請求項1115のいずれかに記載の植物体の製造方法。 16. The method for producing a plant body according to any one of claims 11 to 15 , wherein the height of the above-ground part of the young plant is 1 m or less. 前記シュートがパラゴムノキのシュートである請求項1116のいずれかに記載の植物体の製造方法。 17. The method for producing a plant according to any one of claims 11 to 16 , wherein the shoot is a shoot of Hevea brasiliensis. 請求項1117のいずれかに記載の植物体の製造方法により植物体を製造する植物体製造工程と、
植物体製造工程により得られた植物体を用いて天然ゴムを製造する天然ゴム製造工程とを含む天然ゴムの製造方法。
A plant body manufacturing process for manufacturing a plant body by the plant body manufacturing method according to any one of claims 11 to 17 ;
A method for producing natural rubber, comprising a natural rubber production step of producing natural rubber using the plant body obtained by the plant body production step.
請求項18記載の天然ゴムの製造方法により天然ゴムを製造する工程、該工程により得られる天然ゴムと、添加剤とを混練して混練物を得る混練工程、前記混練物から生タイヤを成形する生タイヤ成形工程、及び前記生タイヤを加硫する加硫工程を含む空気入りタイヤの製造方法。 A step of producing natural rubber by the method for producing natural rubber according to claim 18 , a kneading step of kneading the natural rubber obtained by said step and an additive to obtain a kneaded product, and forming a green tire from said kneaded product. A method for manufacturing a pneumatic tire, comprising a raw tire molding step and a vulcanizing step of vulcanizing the raw tire. 請求項18記載の天然ゴムの製造方法により天然ゴムを製造する工程、該工程により得られる天然ゴムと、添加剤とを混練して混練物を得る混練工程、前記混練物から生ゴム製品を成形する生ゴム製品成形工程、及び前記生ゴム製品を加硫する加硫工程を含むゴム製品の製造方法。
A step of producing natural rubber by the method for producing natural rubber according to claim 18 , a kneading step of kneading the natural rubber obtained by said step with an additive to obtain a kneaded product, and molding a raw rubber product from said kneaded product. A method for producing a rubber product, comprising a raw rubber product molding step and a vulcanization step of vulcanizing the raw rubber product.
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