JP7274540B2 - インビトロの新生児バイオミメティック(nmimic)モデル及び方法、並びにその使用 - Google Patents
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Description
nMIMIC 樹状細胞/T細胞モデルは、主として、臍帯血由来の樹状細胞(DCs)および臍帯血CD4+T細胞を含み、例えば、新生児抗原提示およびCD4+T細胞反応について選択薬剤の効果をアッセイするために用いることができる。nMIMIC 樹状細胞/T細胞モデルが多くの異なる態様で用いることができることは容易に明らかであろうが、このモデルの非限定的な例として、選択薬剤(selected agent)に対する新生児免疫系の細胞の反応をインビトロで評価する方法を例示することができる。具体的には、第1の実施形態として、本発明は、選択薬剤に対する細胞応答を評価する方法に関し、当該方法は下記:
(a)選択薬剤を、臍帯血由来の樹状細胞(DCs)を含む第1のインビトロ細胞培養物に添加し、前記樹状細胞による前記選択薬剤の取り込みを促進する条件下で細胞培養物を維持し、薬剤刺激された樹状細胞の第1集団を形成し、
(b)(a)で発達させた薬剤刺激された樹状細胞と臍帯血CD4+T細胞とを含む第2のインビトロ細胞培養物を形成し、T細胞の活性化を促進する条件下で細胞培養物を維持し、
(c)薬剤刺激された樹状細胞の第2集団を、(b)の細胞培養物に添加し、T細胞応答を促進する条件下で培養物を維持し、ここで、薬剤刺激された樹状細胞の前記第2集団は、薬剤刺激された樹状細胞の前記第1集団と同じ方法で調製されており、
(d)T細胞応答について(c)の細胞培養物からの上清および/またはT細胞を分析し、それによって選択薬剤に対する細胞応答を評価すること、
を含む。
(a)選択薬剤を、臍帯血由来の樹状細胞(DCs)を含む第1のインビトロ細胞培養物に添加し、前記樹状細胞による前記選択薬剤の取り込みを促進する条件下で細胞培養物を維持し、薬剤刺激された樹状細胞の第1集団を形成し、
(b)(a)で発達させた薬剤刺激された樹状細胞と臍帯血CD4+T細胞とを含む第2のインビトロ細胞培養物を形成し、T細胞の活性化を促進する条件下で細胞培養物を維持し、
(c)薬剤刺激された樹状細胞の第2集団を、(b)の細胞培養物に添加し、T細胞応答を促進する条件下で培養物を維持し、ここで、薬剤刺激された樹状細胞の前記第2集団は、薬剤刺激された樹状細胞の前記第1集団と同じ方法で調製されており、
(d)T細胞応答について、(c)の細胞培養物からの上清および/または細胞の細胞応答について分析し、それによって活性について前記選択薬剤をスクリーニングする、
ことを含む。
(a)細胞培養ウェルの下部チャンバーの上に分離可能に吊される当該ウェルの上部チャンバー内に収容されている多孔質膜の上面で内皮細胞を培養し、
(b)(a)の多孔質膜上の内皮細胞に臍帯血単核細胞(CBMCs:cord blood mononuclear cell)を与え、
(c)前記臍帯血単核細胞を与えてから約48時間後に、多孔質膜および内皮細胞を収容している前記上部チャンバーを取り外し、
(d)樹状細胞を前記ウェルの下部チャンバーから分離する、
ことを含む方法によって調製しうる。
nMIMIC B細胞/TFH細胞モデルは、主として、臍帯血由来濾胞性ヘルパーT(TFH)細胞および臍帯血B細胞を含んでおり、例えば、抗原提示およびB細胞応答についての選択薬剤の効果をアッセイするために用いることができる。nMIMIC B細胞/TFH細胞モデルは、多くの異なる態様で用いることができ、非限定的な例として、選択ワクチン(selected vaccine)に対する新生児免疫系の細胞応答をインビトロで評価する方法が挙げられる。このように、第3の実施形態として、本発明は、活性についてワクチンをスクリーニングする方法に関し、当該方法は下記:
(a)ワクチンおよび1つ以上の細胞活性化因子を、臍帯血CD4+T細胞を含む第1のインビトロ細胞培養物に添加し、ワクチン特異的濾胞性ヘルパーT(TFH)細胞の発達を促進する条件下で細胞培養物を維持し、
(b)(a)で発達したTFH細胞と臍帯血B細胞とを含む第2のインビトロ細胞培養物を形成し、
(c)ワクチン特異的抗原を、(b)の細胞培養物に添加し、細胞応答を促進する条件下で培養物を維持し、
(d)細胞応答について、(c)の細胞培養物からの上清および/または細胞を分析し、それによって活性についてワクチンをスクリーニングする、
ことを含む。
具体的には、第4の実施形態として、本発明は、ワクチンの効能をアッセイする方法に関し、当該方法は下記:
(a)ワクチンおよび1つ以上の細胞活性化因子を、臍帯血CD4+T細胞を含む第1のインビトロ細胞培養物に添加し、ワクチン特異的濾胞性ヘルパーT(TFH)細胞の発達を促進する条件下で細胞培養物を維持し、
(b)(a)で発達したTFH細胞と臍帯血B細胞とを含む第2のインビトロ細胞培養物を形成し、
(c)ワクチン特異的抗原を、(b)の細胞培養物に添加し、細胞応答を促進する条件下で培養物を維持し、
(d)細胞応答について、(c)の細胞培養物からの上清および/または細胞を分析し、それによってワクチンの効能を評価する、
ことを含む。
具体的には、第5の実施形態として、本発明は、インビトロの細胞培養物を用いてワクチンのインビボにおける効能を予測する方法に関し、当該方法は下記:
(a)ワクチンおよび1つ以上の細胞活性化因子を、臍帯血CD4+T細胞を含む第1のインビトロ細胞培養物に添加し、ワクチン特異的濾胞性ヘルパーT(TFH)細胞の発達を促進する条件下で細胞培養物を維持し、
(b)(a)で発達したTFH細胞と臍帯血B細胞とを含む第2のインビトロ細胞培養物を形成し、
(c)ワクチン特異的抗原を、(b)の細胞培養物に添加し、細胞応答を促進する条件下で培養物を維持し、
(d)細胞応答について、(c)の細胞培養物からの上清および/または細胞を分析し、細胞応答が見出された場合、前記ワクチンはインビボでの効能を有すると予測する、
ことを含む。
(a)抗原および1つ以上の細胞活性化因子を、臍帯血CD4+T細胞を含む第1のインビトロ細胞培養物に添加し、ワクチン特異的濾胞性ヘルパーT(TFH)細胞の発達を促進する条件下で細胞培養物を維持し、
(b)(a)で発達したTFH細胞と臍帯血B細胞とを含む第2のインビトロ細胞培養物を形成し、
(c)前記抗原を、(b)の細胞培養物に添加し、細胞応答を促進する条件下で培養物を維持し、
(d)細胞応答について、(c)の細胞培養物からの上清および/または細胞を分析し、それによって抗原の免疫原性を評価する、
ことを含む。
(a)ワクチンおよび細胞活性化因子を、臍帯血CD4+T細胞を含む第1の細胞培養物に添加し、ワクチン特異的濾胞性ヘルパーT(TFH)細胞の発達を促進する条件下で、約8~12日間、細胞培養物を維持し、
ここで、前記細胞活性化因子は、抗CD28抗体、IL-2、IL-6、IL-12、IL-21、およびIL-23のうちの1つ以上であり、
ここで、照射を受けたフィーダー細胞および追加ワクチンを、最初のワクチンの添加後2、3または4日目のうちの1つ、および、最初のワクチンの添加後5、6または7日目のうちの1つに添加し、
(b)(a)で発達したTFH細胞と自家性臍帯血B細胞とを含む第2の細胞培養物を3次元マトリックス中で形成し、
ここで、前記第2の細胞培養物中における、TFH細胞の臍帯血B細胞に対する比は、約1:1から約1:100までの範囲であり、
(c)ワクチン特異的抗原を、(b)の細胞培養物に添加し、細胞応答を促進する条件下で、約1~25日間、培養物を維持し、
ここで、前記抗原を添加のうえで、IL-21を、第2の細胞培養物の調製後2、3または4日目のうちの1つ、および、第2の細胞培養物の調製後5、6または7日目のうちの1つに、(b)の細胞培養物に添加し、
(d)前記B細胞による、前記ワクチン特異的抗原に対する結合特異性を有する抗体の産生について、(c)の細胞培養物からの上清および/または細胞を分析し、それによって活性について、前記ワクチンをインビトロでスクリーニングする、
ことを含む。
(a)ワクチンおよび細胞活性化因子を、臍帯血CD4+T細胞を含む第1の細胞培養物に添加し、ワクチン特異的濾胞性ヘルパーT(TFH)細胞の発達を促進する条件下で、約8~12日間、細胞培養物を維持し、
ここで、前記細胞活性化因子は、抗CD28抗体、IL-2、IL-6、IL-12、IL-21およびIL-23のうちの1つ以上であり、
ここで、照射を受けたフィーダー細胞および追加ワクチンを、最初のワクチン添加後2、3または4日目のうちの1つ、および、最初のワクチン添加後5、6または7日目のうちの1つに添加し、
(b)(a)で発達したTFH細胞と自家性臍帯血B細胞とを含む第2の細胞培養物を3次元マトリックス中で形成し、
ここで、前記第2の細胞培養物中における、TFH細胞の臍帯血B細胞に対する比は、約1:1から約1:100までの範囲であり、
(c)ワクチン特異的抗原を、(b)の細胞培養物に添加し、細胞応答を促進する条件下で、約1~25日間、培養物を維持し、
ここで、前記抗原を添加のうえで、IL-21を、第2の細胞培養物の調製後2、3または4日目のうちの1つ、および、第2の細胞培養物の調製後5、6または7日目のうちの1つに、(b)の細胞培養物に添加し、
(d)前記B細胞による、前記ワクチン特異的抗原に対する結合特異性を有する抗体の産生について、(c)の細胞培養物からの上清および/または細胞を分析し、それによって前記ワクチンの効能をインビトロで評価する、
ことを含む。
(a)ワクチンおよび細胞活性化因子を、臍帯血CD4+T細胞を含む第1の細胞培養物に添加し、ワクチン特異的濾胞性ヘルパーT(TFH)細胞の発達を促進する条件下で、約8~12日間、細胞培養物を維持し、
ここで、前記細胞活性化因子は、抗CD28抗体、IL-2、IL-6、IL-12、IL-21およびIL-23のうちの1つ以上であり、
ここで、照射を受けたフィーダー細胞および追加ワクチンを、最初のワクチン添加後2、3または4日目のうちの1つ、および、最初のワクチン添加後5、6または7日目のうちの1つに添加し、
(b)(a)で発達したTFH細胞と自家性臍帯血B細胞とを含む第2の細胞培養物を3次元マトリックス中で形成し、
ここで、前記第2の細胞培養物中における、TFH細胞の臍帯血B細胞に対する比は、約1:1から約1:100までの範囲であり、
(c)ワクチン特異的抗原を、(b)の細胞培養物に添加し、細胞応答を促進する条件下で、約1~25日間、培養物を維持し、
ここで、前記抗原を添加のうえで、IL-21を、第2の細胞培養物の調製後2、3または4日目のうちの1つ、および、第2の細胞培養物の調製後5、6または7日目のうちの1つに、(b)の細胞培養物に添加し、
(d)前記B細胞による、前記ワクチン特異的抗原に対する結合特異性を有する抗体の産生について、(c)の細胞培養物からの上清および/または細胞を分析し、それによって、このような抗体が見出される場合、前記ワクチンはインビボで効能を有すると予測する、
ことを含む。
本明細書で使用する不定冠詞「a」又は「an」は、一以上を意味しうる。本明細書において、用語「comprising(含む、有する、備える)」等と関連して使用される場合、不定冠詞「a」又は「an」は、一又は複数を意味することがある。本明細書で使用する「他の(another)」とは、少なくとも第2の又はそれ以上を意味しうる。更に、文脈による要求がない限り、単数形の用語は複数を含み、複数形の用語は単数を含む。
上記にて概説のとおり、本発明は、哺乳類の新生児免疫細胞系のインビトロモデルとして共に役立つ、細胞培養構築物および方法論を提供する。構築物が臍帯血および臍帯血由来の免疫細胞を含む細胞培養物であるので、構築物は、新生児モジュール免疫インビトロ構築物(nMIMIC:neonatal modular immune in vitro construct)と称する。これらのnMIMICモデルは、選択薬剤(例えば抗原)に対する若齢期の免疫応答を予測するために用いることができ、それらは、乳幼児および歩き始めの幼児用ワクチンの前臨床評価における第一次評価としても役立てることができる。
nMIMIC 樹状細胞/T細胞モデルは、本発明の2つのnMIMICモデルのうち第一ものである。このモデルは、主として、臍帯血由来樹状細胞(DCs)および臍帯血CD4+T細胞を含み、例えば、新生児抗原提示およびCD4+T細胞反応についての選択薬剤の効果をアッセイするために、用いることができる。新生児免疫細胞系は未発達であるので、この種のシステムの抗原およびワクチンに対する応答は、少年(juvenile)および大人の免疫系で見られるそれらとは異なることがあり得る。したがって、このモデルは、新生児免疫細胞系の複雑さを研究するばかりではなく、抗原またはワクチンに対する乳幼児であり得そうな応答に関する重要な情報を得るために、用いることができる。
(a)選択薬剤を、臍帯血由来の樹状細胞(DCs)を含む第1のインビトロ細胞培養物に添加し、前記樹状細胞による前記選択薬剤の取り込みを促進する条件下で細胞培養物を維持し、薬剤刺激された樹状細胞の第1集団を形成し、
(b)(a)で発達させた薬剤刺激された樹状細胞と臍帯血CD4+T細胞とを含む第2のインビトロ細胞培養物を形成し、T細胞の活性化を促進する条件下で細胞培養物を維持し、
(c)薬剤刺激された樹状細胞の第2集団を、(b)の細胞培養物に添加し、T細胞応答を促進する条件下で培養物を維持し、ここで、薬剤刺激された樹状細胞の前記第2集団は、薬剤刺激された樹状細胞の前記第1集団と同じ方法で調製されており、
(d)T細胞応答について、(c)の細胞培養物からの上清および/またはT細胞を分析し、それによって選択薬剤に対する細胞応答を評価すること、
を含む。
(a)選択薬剤を、臍帯血由来の樹状細胞(DCs)を含む第1のインビトロ細胞培養物に添加し、前記樹状細胞による前記選択薬剤の取り込みを促進する条件下で細胞培養物を維持し、薬剤刺激された樹状細胞の第1集団を形成し、
(b)(a)で発生させた薬剤刺激された樹状細胞と臍帯血CD4+T細胞とを含む第2のインビトロ細胞培養物を形成し、T細胞の活性化を促進する条件下で細胞培養物を維持し、
(c)薬剤刺激された樹状細胞の第2集団を、(b)の細胞培養物に添加し、T細胞応答を促進する条件下で培養物を維持し、ここで、薬剤刺激された樹状細胞の前記第2集団は、薬剤刺激された樹状細胞の前記第1集団と同じ方法で調製されており、
(d)T細胞応答について、(c)の細胞培養物からの上清および/またはT細胞を分析し、それによって活性について選択薬剤をスクリーニングすること、
を含む。
(a)細胞培養ウェルの下部チャンバーの上に分離可能に吊される当該ウェルの上部チャンバー内に収容されている多孔質膜の上面で内皮細胞を培養し、
(b)(a)の多孔質膜上の内皮細胞に臍帯血単核細胞(CBMCs)を与え、
(c)前記臍帯血単核細胞を与えてから約48時間後に、多孔質膜および内皮細胞を収容している前記上部チャンバーを取り外し、
(d)樹状細胞を前記ウェルの下部チャンバーから分離する、
ことを含む方法によって調製することができる。
nMIMIC B細胞/TFH細胞モデルは、本発明の2つのnMIMICモデルのうち第2ものである。このモデルは、臍帯血由来の濾胞性ヘルパーT(TFH)細胞および臍帯血B細胞を含んでおり、例えば、新生児抗原提示およびB細胞反応についての選択薬剤の効果をアッセイするために用いることができる。nMIMIC 樹状細胞/T細胞モデルと同様に、このモデルもまた、新生児免疫細胞系の複雑さを研究するばかりではなく、抗原またはワクチンに対する乳幼児であり得そうな応答に関する重要な情報を得るために、用いることができる。
(a)ワクチンおよび1つ以上の細胞活性化因子を、臍帯血CD4+T細胞を含む第1のインビトロ細胞培養物に添加し、ワクチン特異的濾胞性ヘルパーT(TFH)細胞の発達を促進する条件下で細胞培養物を維持し、
(b)(a)で発達したTFH細胞と臍帯血B細胞とを含む第2のインビトロ細胞培養物を形成し、
(c)ワクチン特異的抗原を、(b)の細胞培養物に添加し、細胞応答を促進する条件下で培養物を維持し、
(d)細胞応答について、(c)の細胞培養物からの上清および/または細胞を分析し、それによって活性についてワクチンをスクリーニングする、
ことを含む。
(a)ワクチンおよび1つ以上の細胞活性化因子を、臍帯血CD4+T細胞を含む第1のインビトロ細胞培養物に添加し、ワクチン特異的濾胞性ヘルパーT(TFH)細胞の発達を促進する条件下で細胞培養物を維持し、
(b)(a)で発達したTFH細胞と臍帯血B細胞とを含む第2のインビトロ細胞培養物を形成し、
(c)ワクチン特異的抗原を、(b)の細胞培養物に添加し、細胞応答を促進する条件下で培養物を維持し、
(d)細胞応答について、(c)の細胞培養物からの上清および/または細胞を分析し、それによってワクチンの効能を評価する、
ことを含む。
(a)ワクチンおよび1つ以上の細胞活性化因子を、臍帯血CD4+T細胞を含む第1のインビトロ細胞培養物に添加し、ワクチン特異的濾胞性ヘルパーT(TFH)細胞の発達を促進する条件下で細胞培養物を維持し、
(b)(a)で発達したTFH細胞と臍帯血B細胞とを含む第2のインビトロ細胞培養物を形成し、
(c)ワクチン特異的抗原を、(b)の細胞培養物に添加し、細胞応答を促進する条件下で培養物を維持し、
(d)細胞応答について、(c)の細胞培養物からの上清および/または細胞を分析し、細胞応答が見出された場合、前記ワクチンはインビボでの効能を有すると予測する、
ことを含む。
(a)抗原および1つ以上の細胞活性化因子を、臍帯血CD4+T細胞を含む第1のインビトロ細胞培養物に添加し、ワクチン特異的濾胞性ヘルパーT(TFH)細胞の発達を促進する条件下で細胞培養物を維持し、
(b)(a)で発達したTFH細胞と臍帯血B細胞とを含む第2のインビトロ細胞培養物を形成し、
(c)前記抗原を、(b)の細胞培養物に添加し、細胞応答を促進する条件下で培養物を維持し、
(d)細胞応答について、(c)の細胞培養物からの上清および/または細胞を分析し、それによって抗原の免疫原性を評価する、
ことを含む。
(a)ワクチンおよび細胞活性化因子を、臍帯血CD4+T細胞を含む第1の細胞培養物に添加し、ワクチン特異的濾胞性ヘルパーT(TFH)細胞の発達を促進する条件下で、約8~12日間、細胞培養物を維持し、
ここで、前記細胞活性化因子は、抗CD28抗体、IL-2、IL-6、IL-12、IL-21、およびIL-23のうちの1つ以上であり、
ここで、照射を受けたフィーダー細胞および追加ワクチンを、最初のワクチン添加後2、3または4日目のうちの1つ、および、最初のワクチン添加後5、6または7日目のうちの1つに添加し、
(b)(a)で発達したTFH細胞と自家性臍帯血B細胞とを含む第2の細胞培養物を3次元マトリックス中で形成し、
ここで、前記第2の細胞培養物中における、TFH細胞の臍帯血B細胞に対する比は、約1:1から約1:100までの範囲であり、
(c)ワクチン特異的抗原を、(b)の細胞培養物に添加し、細胞応答を促進する条件下で、約1~25日間、培養物を維持し、
ここで、前記抗原を添加のうえで、IL-21を、第2の細胞培養物の調製後2、3または4日目のうちの1つ、および、第2の細胞培養物の調製後5、6または7日目のうちの1つに、(b)の細胞培養物に添加し、
(d)前記B細胞による、前記ワクチン特異的抗原に対する結合特異性を有する抗体の産生について、(c)の細胞培養物からの上清および/または細胞を分析し、それによって、インビトロで、活性についてワクチンをスクリーニングする、
ことを含む。
(a)ワクチンおよび細胞活性化因子を、臍帯血CD4+T細胞を含む第1の細胞培養物に添加し、ワクチン特異的濾胞性ヘルパーT(TFH)細胞の発達を促進する条件下で、約8~12日間、細胞培養物を維持し、
ここで、前記細胞活性化因子は、抗CD28抗体、IL-2、IL-6、IL-12、IL-21およびIL-23のうちの1つ以上であり、
ここで、照射を受けたフィーダー細胞および追加ワクチンを、最初のワクチンの添加の後の2、3または4日目のうちの1つ、および、最初のワクチンの添加の後の5、6または7日目のうちの1つに添加し、
(b)(a)で発達したTFH細胞と自家性臍帯血B細胞とを含む第2の細胞培養物を3次元マトリックス中で形成し、
ここで、前記第2の細胞培養物中における、TFH細胞の臍帯血B細胞に対する比は、約1:1から約1:100までの範囲であり、
(c)ワクチン特異的抗原を、(b)の細胞培養物に添加し、細胞応答を促進する条件下で、約1~25日間、培養物を維持し、
ここで、前記抗原を添加のうえで、IL-21を、第2の細胞培養物の調製後2、3または4日目のうちの1つ、および、第2の細胞培養物の調製後5、6または7日目のうちの1つに、(b)の細胞培養物に添加し、
(d)前記B細胞による、前記ワクチン特異的抗原に対する結合特異性を有する抗体の産生について、(c)の細胞培養物からの上清および/または細胞を分析し、それによってワクチンの効能をインビトロで評価する、
ことを含む。
(a)ワクチンおよび細胞活性化因子を、臍帯血CD4+T細胞を含む第1の細胞培養物に添加し、ワクチン特異的濾胞性ヘルパーT(TFH)細胞の発達を促進する条件下で、約8~12日間、細胞培養物を維持し、
ここで、前記細胞活性化因子は、抗CD28抗体、IL-2、IL-6、IL-12、IL-21およびIL-23のうちの1つ以上であり、
ここで、照射を受けたフィーダー細胞および追加ワクチンを、最初のワクチンの添加の後の2、3または4日目のうちの1つ、および、最初のワクチンの添加の後の5、6または7日目のうちの1つに添加し、
(b)(a)で発達したTFH細胞と自家性臍帯血B細胞とを含む第2の細胞培養物を3次元マトリックス中で形成し、
ここで、前記第2の細胞培養物中における、TFH細胞の臍帯血B細胞に対する比は、約1:1から約1:100までの範囲であり、
(c)ワクチン特異的抗原を、(b)の細胞培養物に添加し、細胞応答を促進する条件下で、約1~25日間、培養物を維持し、
ここで、前記抗原を添加のうえで、IL-21を、第2の細胞培養物の調製後2、3または4日目のうちの1つ、および、第2の細胞培養物の調製後5、6または7日目のうちの1つに、(b)の細胞培養物に添加し、
(d)前記B細胞による、前記ワクチン特異的抗原に対する結合特異性を有する抗体の産生について、(c)の細胞培養物からの上清および/または細胞を分析し、それによって、このような抗体が見出される場合、前記ワクチンはインビボで効能を有すると予測する、
ことを含む。
本発明の各実施形態および側面において、サイトカイン、マーカーおよび他の因子の産生および/または存在についての上清および細胞培養培地の分析は、当業者によく知られ理解されている手段によって実施することができ、以下に限定されるものではないが、そのようなものには、サイトカイン/ケモカイン磁気ビーズパネル(例えば、ミリポアのMILLIPLEXマップTMキット)、ELISAまたはMSD(mesoscal scale discovery)マルチ・アレイ技術が含まれる。
nMIMIC 樹状細胞/T細胞モデル
nMIMIC 樹状細胞/T細胞モデルの使用について、図1を示しつつ、以下に詳述する。
nMIMIC B細胞/TFH細胞モデルの使用について、図4を示しつつ、以下に詳述する。
nMIMIC B細胞/TFH細胞モデルの使用について、図4を示しつつ、以下に詳述する。
nMIMIC B細胞/TFH細胞モデルの使用について、図4を示しつつ、以下に詳述する。
nMIMIC B細胞/TFH細胞モデルの使用について、図4を示しつつ、以下に詳述する。
<付記事項>
[付記事項1]
選択薬剤に対する細胞応答を評価する方法であって、
(a)選択薬剤を、臍帯血由来の樹状細胞を含む第1のインビトロ細胞培養物に添加し、前記樹状細胞による前記選択薬剤の取り込みを促進する条件下で細胞培養物を維持し、薬剤刺激された樹状細胞の第1集団を形成し、
(b)(a)で発達させた薬剤刺激された樹状細胞と臍帯血CD4+T細胞とを含む第2のインビトロ細胞培養物を形成し、T細胞の活性化を促進する条件下で細胞培養物を維持し、
(c)薬剤刺激された樹状細胞の第2集団を、(b)の細胞培養物に添加し、T細胞応答を促進する条件下で培養物を維持し、ここで、薬剤刺激された樹状細胞の前記第2集団は、薬剤刺激された樹状細胞の前記第1集団と同じ方法で調製されており、
(d)T細胞応答について、(c)の細胞培養物からの上清および/またはT細胞を分析し、それによって選択薬剤に対する細胞応答を評価する、
ことを含む、前記方法。
[付記事項2]
活性について選択薬剤をスクリーニングする方法であって、
(a)選択薬剤を、臍帯血由来の樹状細胞を含む第1のインビトロ細胞培養物に添加し、前記樹状細胞による前記選択薬剤の取り込みを促進する条件下で細胞培養物を維持し、薬剤刺激された樹状細胞の第1集団を形成し、
(b)(a)で発生させた薬剤刺激された樹状細胞と臍帯血CD4+T細胞とを含む第2のインビトロ細胞培養物を形成し、T細胞の活性化を促進する条件下で細胞培養物を維持し、
(c)薬剤刺激された樹状細胞の第2集団を、(b)の細胞培養物に添加し、T細胞応答を促進する条件下で培養物を維持し、ここで、薬剤刺激された樹状細胞の前記第2集団は、薬剤刺激された樹状細胞の前記第1集団と同じ方法で調製されており、
(d)T細胞応答について、(c)の細胞培養物からの上清および/またはT細胞を分析し、それによって活性について選択薬剤をスクリーニングする、
ことを含む、前記方法。
[付記事項3]
前記第1の細胞培養物が、前記第2の細胞培養物の形成の前に、約12~36時間維持される、付記事項1または2に記載の方法。
[付記事項4]
前記第2の細胞培養物が、薬剤刺激された樹状細胞の前記第2集団が添加される前に、約5~10日間維持される、付記事項1~3のいずれか一項に記載の方法。
[付記事項5]
前記(c)の培養物が、(d)の分析の前に、約2~8時間維持される、付記事項1~4のいずれか一項に記載の方法。
[付記事項6]
前記T細胞応答は、サイトカインまたはマーカーの産生である、付記事項1~5のいずれか一項に記載の方法。
[付記事項7]
前記サイトカインが、TNFα、IFNγ、IL-2、IL-4、IL-5、IL-6、IL-8、IL-9、IL-10、IL-13、IL-17A、IL-17F、IL-18、IL-21、IL-22、およびIL-26のうちの1つ以上である、付記事項6に記載の方法。
[付記事項8]
前記マーカーが、CD25、CD26、CD27、CD28、CD30、CD44、CD69、CD71、CD134、およびCD154のうちの1つ以上である、付記事項6に記載の方法。
[付記事項9]
前記選択薬剤が、抗原、ワクチン、タンパク質、ペプチド、ポリヌクレオチド、オリゴヌクレオチド、多糖、ウイルス、ビリオン、細菌、真菌、または、それらの断片である、付記事項1~8のいずれか一項に記載の方法。
[付記事項10]
前記臍帯血T細胞が、前記臍帯血由来の樹状細胞に対して自家性である、付記事項1~9のいずれ一項に記載の方法。
[付記事項11]
前記(b)の培養物における、薬剤刺激された樹状細胞の臍帯血T細胞に対する比が、約1:5から約1:100の範囲である、付記事項1~10のいずれか一項に記載の方法。
[付記事項12]
前記(c)の培養物に添加される、薬剤刺激された樹状細胞の前記第2集団の、臍帯血T細胞に対する比が、約1:5から約1:100の範囲である、付記事項1~11のいずれか一項に記載の方法。
[付記事項13]
前記樹状細胞が、以下のマーカー:CD14、CD16、CD25、CD80、CD86、およびHLA-DRのうちの1つ以上を発現する、付記事項1~12のいずれか一項に記載の方法。
[付記事項14]
前記臍帯血由来の樹状細胞が、
(a)細胞培養ウェルの下部チャンバーの上に分離可能に吊される当該ウェルの上部チャンバー内に収容されている多孔質膜の上面で内皮細胞を培養し、
(b)(a)の多孔質膜上の内皮細胞に臍帯血単核細胞を与え、
(c)前記臍帯血単核細胞を与えてから約48時間後に、多孔性膜および内皮細胞を収容している前記上部チャンバーを取り外し、
(d)樹状細胞を前記ウェルの下部チャンバーから分離する、
ことを含む方法によって調製される、付記事項1~13のいずれか一項の方法。
[付記事項15]
前記多孔質膜が、ポリカーボネート膜である、付記事項12に記載の方法。
[付記事項16]
前記多孔質膜は、大きさ約1~15μmの範囲の穴を有する、付記事項14または15に記載の方法。
[付記事項17]
膜支持体が、前記ウェルの上部チャンバー、前記ポリカーボネート膜、および前記ウェルの下部チャンバーを提供することに用いられる、付記事項14~16のいずれか一項に記載の方法。
[付記事項18]
前記ウェルの下部チャンバーが、細胞外マトリックス材料を含む、付記事項14~17のいずれか一項に記載の方法。
[付記事項19]
前記細胞外マトリックス材料が、ゼラチン、コラーゲン、合成細胞外マトリックス材料、ポリ乳酸-グリコール酸共重合体、ポリグリコール酸、天然細胞外マトリックス材料、キトサン、プロトサン(protosan)、フィブロネクチン、ビトロネクチン、コラーゲンI、コラーゲンIV、ラミニン、およびそれらの混合物からなる群から選ばれる材料を含む、付記事項18に記載の方法。
[付記事項20]
前記ウェルの下部チャンバーが、繊維芽細胞、支持体細胞、および間質細胞を更に含む、付記事項14~19のいずれか一項に記載の方法。
[付記事項21]
前記(a)の第1の細胞培養物が、前記ウェルの下部チャンバーである、付記事項14~20のいずれか一項に記載の方法。
[付記事項22]
前記内皮細胞が、ヒト臍帯静脈内皮細胞またはヒト体細胞ハイブリッドEA.hy926である、付記事項14~21のいずれか一項に記載の方法。
[付記事項23]
前記内皮細胞が、形質転換された内皮細胞系である、付記事項14~22のいずれか一項に記載の方法。
[付記事項24]
内皮細胞が、前記多孔質膜の両面に培養される、付記事項14~23のいずれか一項に記載の方法。
[付記事項25]
前記内皮細胞が、前記臍帯血単核細胞を加える前に、コンフルエンシーに達するまで培養される、付記事項14~24のいずれか一項に記載の方法。
[付記事項26]
前記内皮細胞が、前記臍帯血単核細胞を加える前であって、多層細胞発育に達成するまで、培養される、付記事項14~25のいずれか一項に記載の方法。
[付記事項27]
細胞外マトリックス材料の層が前記多孔質膜の上面にあって、前記内皮細胞が前記細胞外マトリックス材料層上で培養される、付記事項14~26のいずれか一項に記載の方法。
[付記事項28]
細胞外マトリックス材料の層が前記多孔質膜の上面および下面にあって、前記内皮細胞が細胞外マトリックス材料層の両方の層に培養される、付記事項14~26のいずれか一項に記載の方法。
[付記事項29]
前記細胞外マトリックスが、ゼラチン、コラーゲン、合成細胞外マトリックス材料、ポリ乳酸-グリコール酸共重合体、ポリグリコール酸、天然細胞外マトリックス材料、キトサン、プロトサン(protosan)、フィブロネクチン、ビトロネクチン、コラーゲンI、コラーゲンIV、ラミニン、およびそれらの混合物からなる群から選ばれる材料を含む、付記事項27または28に記載の方法。
[付記事項30]
活性についてワクチンをスクリーニング方法であって、
(a)ワクチンおよび1つ以上の細胞活性化因子を、臍帯血CD4+T細胞を含む第1のインビトロ細胞培養物に添加し、ワクチン特異的濾胞性ヘルパーT(T FH )細胞の発達を促進する条件下で細胞培養物を維持し、
(b)(a)で発達したT FH 細胞と臍帯血B細胞とを含む第2のインビトロ細胞培養物を形成し、
(c)ワクチン特異的抗原を、(b)の細胞培養物に添加し、細胞応答を促進する条件下で培養物を維持し、
(d)細胞応答について、(c)の細胞培養物からの上清および/または細胞を分析し、それによって活性についてワクチンをスクリーニングする、
ことを含む、前記方法。
[付記事項31]
ワクチンの効能を評価する方法であって、
(a)ワクチンおよび1つ以上の細胞活性化因子を、臍帯血CD4+T細胞を含む第1のインビトロ細胞培養物に添加し、ワクチン特異的濾胞性ヘルパーT(T FH )細胞の発達を促進する条件下で細胞培養物を維持し、
(b)(a)で発達したT FH 細胞と臍帯血B細胞とを含む第2のインビトロ細胞培養物を形成し、
(c)ワクチン特異的抗原を、(b)の細胞培養物に添加し、細胞応答を促進する条件下で培養物を維持し、
(d)細胞応答について、(c)の細胞培養物からの上清および/または細胞を分析し、それによってワクチンの効能を評価する、
ことを含む、前記方法。
[付記事項32]
インビトロの細胞培養を用いてワクチンのインビボでの効能を予測する方法であって、
(a)ワクチンおよび1つ以上の細胞活性化因子を、臍帯血CD4+T細胞を含む第1のインビトロ細胞培養物に添加し、ワクチン特異的濾胞性ヘルパーT(T FH )細胞の発達を促進する条件下で細胞培養物を維持し、
(b)(a)で発達したT FH 細胞と臍帯血B細胞とを含む第2のインビトロ細胞培養物を形成し、
(c)ワクチン特異的抗原を、(b)の細胞培養物に添加し、細胞応答を促進する条件下で培養物を維持し、
(d)細胞応答について、(c)の細胞培養物からの上清および/または細胞を分析し、細胞応答が見出された場合、前記ワクチンはインビボでの効能を有すると予測する、
ことを含む、前記方法。
[付記事項33]
前記第1の細胞培養物が、約8~12日間維持される、付記事項30~32のいずれか一項に記載の方法。
[付記事項34]
追加ワクチンが、少なくとも1回、第1の細胞培養物に添加される、付記事項30~33のいずれか一項に記載の方法。
[付記事項35]
前記第1の細胞培養物が、約8~12日間維持され、追加ワクチンが、最初のワクチンの添加後2、3または4日目のうちの1つ、および、最初のワクチンの添加後5、6または7日目のうちの1つに添加される、付記事項30~34のいずれか一項に記載の方法。
[付記事項36]
照射を受けたフィーダー細胞が、ワクチン添加の1回以上の繰り返しの際に、第1の培養物に添加される、付記事項34または35に記載の方法。
[付記事項37]
前記照射を受けたフィーダー細胞が、無血清培地で成長した臍帯血単核細胞である、付記事項36に記載の方法。
[付記事項38]
前記(c)の培養物が、約8~12日間維持される、付記事項30~37のいずれか一項に記載の方法。
[付記事項39]
IL-21が、(c)の培養物に添加される、付記事項30~38のいずれか一項に記載の方法。
[付記事項40]
前記(c)の培養物が、約1~25日間維持され、第2の細胞培養物に対するワクチン特異的抗原を添加のうえで、IL-21が、第2の細胞培養物の調製後の2、3または4日目のうちの1つ、および、第2の細胞培養物の調製後の5、6または7日目のうちの1つに、添加される、付記事項30~39のいずれか一項に記載の方法。
[付記事項41]
前記細胞応答は、T FH 細胞によるサイトカインの産生、T FH 細胞によるマーカーの発現、B細胞によるサイトカインの産生、B細胞によるマーカーの発現、およびB細胞によるワクチン特異的抗原に対する結合特異性を有する抗体の産生のうちの1つ以上である、付記事項30~40のいずれか一項に記載の方法。
[付記事項42]
前記サイトカインが、CXCL13、TNFα、IFNγ、IL-2、IL-4、IL-6、IL-8、IL-10、IL-13、IL-17、またはIL-21のうちの1つ以上である、付記事項41に記載の方法。
[付記事項43]
前記マーカーが、CD10、CD19、CD20、CD24、CD27、CD38、CD40、CD86、CD138、IgD、IgG、およびIgMのうちの1つ以上である、付記事項41に記載の方法。
[付記事項44]
前記ワクチンが、不活化、弱毒化、トキソイド、サブユニット、コンジュゲート、結合価および異型のワクチン、またはタンパク質、ペプチド、ポリヌクレオチド、オリゴヌクレオチド、多糖、ウイルス、ビリオン、細菌、菌類、またはそれらの断片、または抗原刺激された樹状細胞である、付記事項40~43のいずれか一項に記載の方法。
[付記事項45]
前記ワクチン特異的抗原が、ワクチンの一部またはワクチンの構成成分である、付記事項40~44のいずれか一項に記載の方法。
[付記事項46]
前記1つ以上の細胞活性化因子が、抗CD28抗体、IL-2、IL-6、IL-12、IL-21、およびIL-23からなる群から選ばれる、付記事項40~45のいずれか一項である方法。
[付記事項47]
前記臍帯血B細胞が、臍帯血CD4+T細胞に対して自家性である、付記事項40~46のいずれか一項に記載の方法。
[付記事項48]
前記臍帯血B細胞が、第2の細胞培養物に臍帯血B細胞の添加する前に、CpG2006で処理される、付記事項40~47のいずれか一項に記載の方法。
[付記事項49]
前記第2の細胞培養物中における、T FH 細胞の臍帯血B細胞に対する比が、約1:1から約1:100の範囲である、付記事項40~48のいずれか一項に記載の方法。
[付記事項50]
前記第2の細胞培養物が、3次元マトリックスに形成される、付記事項40~49のいずれか一項に記載の方法。
[付記事項51]
前記マトリックスが、ゲルマトリックスである、付記事項50に記載の方法。
[付記事項52]
活性についてワクチンをスクリーニングする方法であって、
(a)ワクチンおよび細胞活性化因子を、臍帯血CD4+T細胞を含む第1の細胞培養物に添加し、ワクチン特異的濾胞性ヘルパーT(T FH )細胞の発達を促進する条件下で、約8~12日間、細胞培養物を維持し、
ここで、前記細胞活性化因子は、抗CD28抗体、IL-2、IL-6、IL-12、IL-21、およびIL-23のうちの1つ以上であり、
ここで、照射を受けたフィーダー細胞および追加ワクチンを、最初のワクチンの添加後2、3または4日目のうちの1つ、および、最初のワクチンの添加後5、6または7日目のうちの1つに添加し、
(b)(a)で発達したT FH 細胞と自家性臍帯血B細胞とを含む第2の細胞培養物を3次元マトリックス中で形成し、
ここで、前記第2の細胞培養物中における、T FH 細胞の臍帯血B細胞に対する比は、約1:1から約1:100までの範囲であり、
(c)ワクチン特異的抗原を、(b)の細胞培養物に添加し、細胞応答を促進する条件下で、約1~25日間、培養物を維持し、
ここで、前記抗原を添加のうえで、IL-21を、第2の細胞培養物の調製後2、3または4日目のうちの1つ、および、第2の細胞培養物の調製後5、6または7日目のうちの1つに、(b)の細胞培養物に添加し、
(d)前記B細胞による、前記ワクチン特異的抗原に対する結合特異性を有する抗体の産生について、(c)の細胞培養物からの上清および/または細胞を分析し、それによって活性についてワクチンをスクリーニングする、
ことを含む、前記方法。
[付記事項53]
ワクチンの効能を評価する方法であって、
(a)ワクチンおよび細胞活性化因子を、臍帯血CD4+T細胞を含む第1の細胞培養物に添加し、ワクチン特異的濾胞性ヘルパーT(T FH )細胞の発達を促進する条件下で、約8~12日間、細胞培養物を維持し、
ここで、前記細胞活性化因子は、抗CD28抗体、IL-2、IL-6、IL-12、IL-21、およびIL-23のうちの1つ以上であり、
ここで、照射を受けたフィーダー細胞および追加ワクチンを、最初のワクチンの添加後2、3または4日目のうちの1つ、および、最初のワクチンの添加後5、6または7日目のうちの1つに添加し、
(b)(a)で発達したT FH 細胞と自家性臍帯血B細胞とを含む第2の細胞培養物を3次元マトリックス中で形成し、
ここで、第2の細胞培養物中における、T FH 細胞の臍帯血B細胞に対する比は、約1:1から約1:100までの範囲であり、
(c)ワクチン特異的抗原を、(b)の細胞培養物に添加し、細胞応答を促進する条件下で、約1~25日間、培養物を維持し、
ここで、前記抗原を添加のうえで、IL-21を、第2の細胞培養物の調製後2、3または4日目のうちの1つ、および、第2の細胞培養物の調製後5、6または7日目のうちの1つに、(b)の細胞培養物に添加し、
(d)前記B細胞による、前記ワクチン特異的抗原に対する結合特異性を有する抗体の産生について、(c)の細胞培養物からの上清および/または細胞を分析し、それによってワクチンの効能を評価する、
ことを含む、前記方法。
[付記事項54]
インビトロの細胞培養を用いてワクチンのインビボでの効能を予測する方法であって、
(a)ワクチンおよび細胞活性化因子を、臍帯血CD4+T細胞を含む第1の細胞培養物に添加し、ワクチン特異的濾胞性ヘルパーT(T FH )細胞の発達を促進する条件下で、約8~12日間、細胞培養物を維持し、
ここで、前記細胞活性化因子は、抗CD28抗体、IL-2、IL-6、IL-12、IL-21、およびIL-23のうちの1つ以上であり、
ここで、照射を受けたフィーダー細胞および追加ワクチンを、最初のワクチン添加後2、3または4日目のうちの1つ、および、最初のワクチン添加後5、6または7日目のうちの1つに添加し、
(b)(a)で発達したT FH 細胞と自家性臍帯血B細胞とを含む第2の細胞培養物を3次元マトリックス中で形成し、
ここで、前記第2の細胞培養物中における、T FH 細胞の臍帯血B細胞に対する比は、約1:1から約1:100までの範囲であり、
(c)ワクチン特異的抗原を、(b)の細胞培養物に添加し、細胞応答を促進する条件下で、約1~25日間、培養物を維持し、
ここで、前記抗原を添加のうえで、IL-21を、第2の細胞培養物の調製後2、3または4日目のうちの1つ、および、第2の細胞培養物の調製後5、6または7日目のうちの1つに、(b)の細胞培養物に添加し、
(d)前記B細胞による、前記ワクチン特異的抗原に対する結合特異性を有する抗体の産生について、(c)の細胞培養物からの上清および/または細胞を分析し、それによって、このような抗体が見出される場合、前記ワクチンはインビボで効能を有すると予測する、
ことを含む、前記方法。
[付記事項55]
前記照射を受けたフィーダー細胞が、無血清培地で成長した臍帯血単核細胞である、付記事項52~54のいずれか一項に記載の方法。
[付記事項56]
前記ワクチンが、不活化、弱毒化、トキソイド、サブユニット、コンジュゲート、結合価および異型のワクチン、またはタンパク質、ペプチド、ポリヌクレオチド、オリゴヌクレオチド、多糖、ウイルス、ビリオン、細菌、菌類、またはそれらの断片、または抗原刺激された樹状細胞、である、付記事項52~55のいずれか一項に記載の方法。
[付記事項57]
前記ワクチンに特異的な抗原が、ワクチンの一部またはワクチンの構成成分である、付記事項52~56のいずれか一項に記載の方法。
[付記事項58]
前記臍帯血B細胞が、第2の細胞培養物に臍帯血B細胞の添加する前に、CpG2006で処理される、付記事項52~57のいずれか一項に記載の方法。
[付記事項59]
前記マトリックスが、ゲルマトリックスである、付記事項52~58のいずれか一項に記載の方法。
Claims (26)
- 活性についてワクチン候補をスクリーニングする方法であって、
(a)ワクチン候補および1つ以上の細胞活性化因子を、臍帯血CD4+T細胞を含む第1のインビトロ細胞培養物に添加し、ワクチン候補特異的濾胞性ヘルパーT(TFH)細胞の発達を促進する条件下で細胞培養物を維持し、
(b)(a)で発達したTFH細胞と臍帯血B細胞とを含む第2のインビトロ細胞培養物を形成し、
(c)ワクチン候補の一部またはワクチン候補の構成成分を、(b)の細胞培養物に添加し、細胞応答を促進する条件下で培養物を維持し、
(d)細胞応答について、(c)の細胞培養物からの上清および/または細胞を分析し、それによって活性についてワクチン候補をスクリーニングする、
ことを含み、
前記細胞応答は、前記B細胞によるサイトカインの産生、前記B細胞によるマーカーの発現、および、前記B細胞による、(c)で添加されたワクチン候補の一部またはワクチン候補の構成成分に対する結合特異性を有する抗体の産生のうちの1つ以上であり、
前記1つ以上の細胞活性化因子が、抗CD28抗体、IL-6、およびIL-12からなる群から選ばれる、
前記方法。 - ワクチンの効能を評価する方法であって、
(a)ワクチンおよび1つ以上の細胞活性化因子を、臍帯血CD4+T細胞を含む第1のインビトロ細胞培養物に添加し、ワクチン特異的濾胞性ヘルパーT(TFH)細胞の発達を促進する条件下で細胞培養物を維持し、
(b)(a)で発達したTFH細胞と臍帯血B細胞とを含む第2のインビトロ細胞培養物を形成し、
(c)ワクチンの一部またはワクチンの構成成分を、(b)の細胞培養物に添加し、細胞応答を促進する条件下で培養物を維持し、
(d)細胞応答について、(c)の細胞培養物からの上清および/または細胞を分析し、それによってワクチンの効能を評価する、
ことを含み、
前記細胞応答は、前記B細胞によるサイトカインの産生、前記B細胞によるマーカーの発現、および、前記B細胞による、(c)で添加されたワクチンの一部またはワクチンの構成成分に対する結合特異性を有する抗体の産生のうちの1つ以上であり、
前記1つ以上の細胞活性化因子が、抗CD28抗体、IL-6、およびIL-12からなる群から選ばれる、
前記方法。 - インビトロの細胞培養を用いてワクチンのインビボでの効能を予測する方法であって、
(a)ワクチンおよび1つ以上の細胞活性化因子を、臍帯血CD4+T細胞を含む第1のインビトロ細胞培養物に添加し、ワクチン特異的濾胞性ヘルパーT(TFH)細胞の発達を促進する条件下で細胞培養物を維持し、
(b)(a)で発達したTFH細胞と臍帯血B細胞とを含む第2のインビトロ細胞培養物を形成し、
(c)ワクチンの一部またはワクチンの構成成分を、(b)の細胞培養物に添加し、細胞応答を促進する条件下で培養物を維持し、
(d)細胞応答について、(c)の細胞培養物からの上清および/または細胞を分析し、細胞応答が見出された場合、前記ワクチンはインビボでの効能を有すると予測する、
ことを含み、
前記細胞応答は、前記B細胞によるサイトカインの産生、前記B細胞によるマーカーの発現、および、前記B細胞による、(c)で添加されたワクチンの一部またはワクチン候補の構成成分に対する結合特異性を有する抗体の産生のうちの1つ以上であり、
前記1つ以上の細胞活性化因子が、抗CD28抗体、IL-6、およびIL-12からなる群から選ばれる、
前記方法。 - 前記第1の細胞培養物が、8~12日間維持される、請求項1~3のいずれか一項に記載の方法。
- 追加ワクチンまたはワクチン候補が、少なくとも1回、第1の細胞培養物に添加される、請求項1~4のいずれか一項に記載の方法。
- 前記第1の細胞培養物が、8~12日間維持され、追加ワクチンまたはワクチン候補が、最初のワクチンまたはワクチン候補の添加後2、3または4日目のうちの1つ、および、最初のワクチンまたはワクチン候補の添加後5、6または7日目のうちの1つに添加される、請求項1~5のいずれか一項に記載の方法。
- 照射を受けたフィーダー細胞が、ワクチンまたはワクチン候補添加の1回以上の繰り返しの際に、第1の培養物に添加される、請求項5または6に記載の方法。
- 前記照射を受けたフィーダー細胞が、無血清培地で成長した臍帯血単核細胞である、請求項7に記載の方法。
- 前記(c)の培養物が、8~12日間維持される、請求項1~8のいずれか一項に記載の方法。
- IL-21が、(c)の培養物に添加される、請求項1~9のいずれか一項に記載の方法。
- 前記(c)の培養物が、1~25日間維持され、第2の細胞培養物に対するワクチン若しくはワクチン候補の一部またはワクチン若しくはワクチン候補の構成成分を添加のうえで、IL-21が、第2の細胞培養物の調製後の2、3または4日目のうちの1つ、および、第2の細胞培養物の調製後の5、6または7日目のうちの1つに、添加される、請求項1~10のいずれか一項に記載の方法。
- 前記サイトカインが、TNFα、IFNγ、IL-2、IL-4、IL-6、IL-8、IL-10、IL-17、またはIL-21のうちの1つ以上である、請求項1~3のいずれか一項に記載の方法。
- 前記マーカーが、CD10、CD19、CD20、CD24、CD27、CD38、CD40、CD86、CD138、IgD、IgG、およびIgMのうちの1つ以上である、請求項1~3のいずれか一項に記載の方法。
- 前記ワクチンが、不活化ワクチン、弱毒化ワクチン、トキソイドワクチン、サブユニットワクチン、コンジュゲートワクチン、タンパク質、ペプチド、ポリヌクレオチド、オリゴヌクレオチド、多糖、ウイルス、ビリオン、細菌、菌類、若しくはそれらのうちのいずれかの断片、または抗原刺激された樹状細胞である、請求項11~13のいずれか一項に記載の方法。
- 前記臍帯血B細胞が、臍帯血CD4+T細胞に対して自家性である、請求項11~14のいずれか一項に記載の方法。
- 前記臍帯血B細胞が、第2の細胞培養物に臍帯血B細胞の添加する前に、CpG2006で処理される、請求項11~15のいずれか一項に記載の方法。
- 前記第2の細胞培養物中における、TFH細胞の臍帯血B細胞に対する比が、1:1から1:100の範囲である、請求項11~16のいずれか一項に記載の方法。
- 前記第2の細胞培養物が、3次元マトリックスに形成される、請求項11~17のいずれか一項に記載の方法。
- 前記マトリックスが、ゲルマトリックスである、請求項18に記載の方法。
- 活性についてワクチン候補をスクリーニングする方法であって、
(a)ワクチン候補および細胞活性化因子を、臍帯血CD4+T細胞を含む第1の細胞培養物に添加し、ワクチン候補特異的濾胞性ヘルパーT(TFH)細胞の発達を促進する条件下で、8~12日間、細胞培養物を維持し、
ここで、前記細胞活性化因子は、抗CD28抗体、IL-6、およびIL-12のうちの1つ以上であり、
ここで、照射を受けたフィーダー細胞および追加ワクチン候補を、最初のワクチン候補の添加後2、3または4日目のうちの1つ、および、最初のワクチン候補の添加後5、6または7日目のうちの1つに添加し、
(b)(a)で発達したTFH細胞と自家性臍帯血B細胞とを含む第2の細胞培養物を3次元マトリックス中で形成し、
ここで、前記第2の細胞培養物中における、TFH細胞の臍帯血B細胞に対する比は、1:1から1:100までの範囲であり、
(c)ワクチン候補の一部またはワクチン候補の構成成分を、(b)の細胞培養物に添加し、細胞応答を促進する条件下で、1~25日間、培養物を維持し、
ここで、前記ワクチン候補の一部またはワクチン候補の構成成分を添加のうえで、IL-21を、第2の細胞培養物の調製後2、3または4日目のうちの1つ、および、第2の細胞培養物の調製後5、6または7日目のうちの1つに、(b)の細胞培養物に添加し、
(d)前記B細胞による、前記ワクチン候補の一部またはワクチン候補の構成成分に対する結合特異性を有する抗体の産生について、(c)の細胞培養物からの上清および/または細胞を分析し、それによって活性についてワクチン候補をスクリーニングする、
ことを含む、前記方法。 - ワクチンの効能を評価する方法であって、
(a)ワクチンおよび細胞活性化因子を、臍帯血CD4+T細胞を含む第1の細胞培養物に添加し、ワクチン特異的濾胞性ヘルパーT(TFH)細胞の発達を促進する条件下で、8~12日間、細胞培養物を維持し、
ここで、前記細胞活性化因子は、抗CD28抗体、IL-6、およびIL-12のうちの1つ以上であり、
ここで、照射を受けたフィーダー細胞および追加ワクチンを、最初のワクチンの添加後2、3または4日目のうちの1つ、および、最初のワクチンの添加後5、6または7日目のうちの1つに添加し、
(b)(a)で発達したTFH細胞と自家性臍帯血B細胞とを含む第2の細胞培養物を3次元マトリックス中で形成し、
ここで、第2の細胞培養物中における、TFH細胞の臍帯血B細胞に対する比は、1:1から1:100までの範囲であり、
(c)ワクチンの一部またはワクチンの構成成分を、(b)の細胞培養物に添加し、細胞応答を促進する条件下で、1~25日間、培養物を維持し、
ここで、前記ワクチンの一部またはワクチンの構成成分を添加のうえで、IL-21を、第2の細胞培養物の調製後2、3または4日目のうちの1つ、および、第2の細胞培養物の調製後5、6または7日目のうちの1つに、(b)の細胞培養物に添加し、
(d)前記B細胞による、前記ワクチンの一部またはワクチンの構成成分に対する結合特異性を有する抗体の産生について、(c)の細胞培養物からの上清および/または細胞を分析し、それによってワクチンの効能を評価する、
ことを含む、前記方法。 - インビトロの細胞培養を用いてワクチンのインビボでの効能を予測する方法であって、
(a)ワクチンおよび細胞活性化因子を、臍帯血CD4+T細胞を含む第1の細胞培養物に添加し、ワクチン特異的濾胞性ヘルパーT(TFH)細胞の発達を促進する条件下で、8~12日間、細胞培養物を維持し、
ここで、前記細胞活性化因子は、抗CD28抗体、IL-6、およびIL-12のうちの1つ以上であり、
ここで、照射を受けたフィーダー細胞および追加ワクチンを、最初のワクチン添加後2、3または4日目のうちの1つ、および、最初のワクチン添加後5、6または7日目のうちの1つに添加し、
(b)(a)で発達したTFH細胞と自家性臍帯血B細胞とを含む第2の細胞培養物を3次元マトリックス中で形成し、
ここで、前記第2の細胞培養物中における、TFH細胞の臍帯血B細胞に対する比は、1:1から1:100までの範囲であり、
(c)ワクチンの一部またはワクチンの構成成分を、(b)の細胞培養物に添加し、細胞応答を促進する条件下で、1~25日間、培養物を維持し、
ここで、前記ワクチンの一部またはワクチンの構成成分を添加のうえで、IL-21を、第2の細胞培養物の調製後2、3または4日目のうちの1つ、および、第2の細胞培養物の調製後5、6または7日目のうちの1つに、(b)の細胞培養物に添加し、
(d)前記B細胞による、前記ワクチンの一部またはワクチンの構成成分に対する結合特異性を有する抗体の産生について、(c)の細胞培養物からの上清および/または細胞を分析し、それによって、このような抗体が見出される場合、前記ワクチンはインビボで効能を有すると予測する、
ことを含む、前記方法。 - 前記照射を受けたフィーダー細胞が、無血清培地で成長した臍帯血単核細胞である、請求項20~22のいずれか一項に記載の方法。
- 前記ワクチンが、不活化ワクチン、弱毒化ワクチン、トキソイドワクチン、サブユニットワクチン、コンジュゲートワクチン、タンパク質、ペプチド、ポリヌクレオチド、オリゴヌクレオチド、多糖、ウイルス、ビリオン、細菌、菌類、若しくはそれらのうちのいずれかの断片、または抗原刺激された樹状細胞、である、請求項20~23のいずれか一項に記載の方法。
- 前記臍帯血B細胞が、第2の細胞培養物に臍帯血B細胞の添加する前に、CpG2006で処理される、請求項20~24のいずれか一項に記載の方法。
- 前記マトリックスが、ゲルマトリックスである、請求項20~25のいずれか一項に記載の方法。
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Non-Patent Citations (2)
Title |
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Altern. Lab. Anim.,2009年,Vol. 37, Suppl. 1,pp.19-27 |
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