JP7265780B2 - 抗腫瘍組成物 - Google Patents
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Description
項1.
紫芋もろみ蒸留粕抽出物を含有する、抗腫瘍組成物。
項2.
紫芋もろみ蒸留粕抽出物及び活性酸素生成抗癌剤を含有する、抗腫瘍組成物。
項3.
紫芋もろみ蒸留粕抽出物を含有する、活性酸素生成抗癌剤の抗癌作用増強組成物。
項4.
活性酸素生成抗癌剤を投与される若しくは投与された人に投与されるように用いられる、紫芋もろみ蒸留粕抽出物含有組成物。
項5.
活性酸素生成抗癌剤が、白金製剤、アントラサイクリン系抗癌剤、及びビンカアルカロイドからなる群より選択される少なくとも1種である、項2~4のいずれかに記載の組成物。
項6.
活性酸素が、スーパーオキシド、過酸化水素、及びヒドロキシルラジカルからなる群より選択される少なくとも1種である、項2~4のいずれかに記載の組成物。
項7.
紫芋もろみ蒸留粕抽出物が、紫芋もろみ蒸留粕アルコール抽出物である、項1~6のいずれかに記載の組成物。
項8.
紫芋もろみ蒸留粕抽出物が、カフェ酸アルキルエステルを含む、項1~7のいずれかに記載の組成物。
項9.
紫芋もろみ蒸留粕抽出物が、カフェ酸アルキルエステルを含む紫芋もろみ蒸留粕アルコール抽出物であり、
活性酸素生成抗癌剤が、白金製剤、アントラサイクリン系抗癌剤、及びビンカアルカロイドからなる群より選択される少なくとも1種である、
項2~4のいずれかに記載の組成物。
項10.
紫芋もろみ蒸留粕抽出物含有組成物及び活性酸素生成抗癌剤を備えた抗腫瘍キット。
<紫芋もろみ蒸留粕抽出物の調製及び分析>
紫芋の蒸留粕からの抽出
紫芋を原料とした焼酎粕から、薮田式フィルタープレスにより固液分離固体を得た。それをダブルドラムドライヤにより乾燥処理し、乾燥焼酎粕を調製した。1kgに3Lの99.5度のエタノールを添加して40℃で一晩撹拌抽出した。抽出後の固液分離は、24cmSUSロートと真空ポンプ付きのブフナーロート式の吸引ろ過により行った。ろ紙にはアドバンテックNo.1ろ紙を使用した。十分にろ過したエタノール溶液を、ナス型フラスコを用いてロータリーエバポレーターで濃縮乾固し、エタノール抽出濃縮物を得た。濃縮時のエタノールは回収した。
アセトン抽出濃縮物をクロロホルム/メタノール(2:1)に溶解してケイ酸TLCで分析した結果を図1に示す。展開溶媒としてヘキサン/ジエチルエーテル/酢酸(80:20:1)を用いて中性脂質クラスを検出すると(図1のA)、脂肪酸エチルエステルの大きなスポットが認められ、他に、脂肪酸、ステロール類が検出された。検出試薬としてラジカル剤であるDPPH溶液を噴霧すると(図1のB)、原点付近に強いラジカル消去活性を有する成分の存在が認められた。
アセトン抽出濃縮物をケイ酸TLCで分離し、上記スポットXを抽出・精製した。常法に従い、脂質をトリメチルシリル(TMS)エーテル誘導体としてGC-MS分析に供した(図3)。スポットXからは複数のピークが検出され、MS解析の結果から、多量成分であるピーク1がカフェ酸セチルエステル(CA16)、ピーク4がカフェ酸オクタデシルエステル(CA18)であることが分かった(図4)。また、これらの他にも、スポットXからは、カフェ酸エチルエステル(CA2)、カフェ酸ヘプタデシルエステル(CA17)、フェルラ酸ヘキサデシルエステル(FA16)、フェルラ酸オクタデシルエステル(FA18)が検出された。
アセトン抽出濃縮物を2-プロパノールに溶解し、DPPHエタノール溶液中に添加してラジカル消去活性を比色定量した(図5)。紫芋焼酎粕由来アセトン抽出物は、反応系への1mgの添加量で黄芋焼酎粕アセトン抽出物の2.5倍の抗酸化活性を示した。また、紫芋焼酎粕アセトン抽出物1.5mgの抗酸化活性が、試薬純品のγ-オリザノール1.0mgの活性と同等であった。
アルコール抽出からのアセトン抽出物を得た後の残渣(セラミド濃縮物)をTLCで分析すると(図6)、グルコシルセラミドの他、フリーセラミドの大きなスポットが検出された。(焼酎粕中には原料となるサツマイモや麹菌に由来するグルコシルセラミドが含まれることは既に知られているが、自然界では極めて稀なフリーセラミドが濃縮されていた。)
上で調製したアセトン抽出濃縮物を用いて、紫芋もろみ蒸留粕抽出物の抗腫瘍効果を検討した。なお、当該検討においては、当該アセトン抽出濃縮物をPPLと表記することがある。PPLを培地に溶解させて用いる際には、培地におけるDMSO終濃度が0.1%となるように、PPLをDMSOに溶解させたものを用いた。また、以下の図において、*はp<0.05を、**はp<0.01を、それぞれ示す。
マウス乳がんE0771細胞を10 % FBS を含む RPMI-1640培地中で加湿、37℃、5% CO2条件下で培養した。コロニー形成試験は次のようにして行った。当該細胞をトリプシン処理し、20~200個/mlの細胞密度に調整し、60 mm ディッシュに5 ml ずつ播種した。CO2 インキュベーターで6時間培養した後、培地を新たな2 ml の培地にPPLを溶解し、48時間培養した。48時間後に薬剤を除去し、新たに培地を5 ml 添加し、CO2 インキュベーターにて 7~10 日培養した。培養後、培地を除去し、メタノールを用いて細胞を固定した。10分乾燥させた後、0.03 % クリスタルバイオレットを各シャーレ2 ml ずつ加えてコロニーの染色を行った。20 分静置後、染色液を捨て、乾燥させた。50 個以上の細胞で形成されるコロニー数を計数し生存率を算出した。また、IC50はGraphpad Prism8 softwareで算出した。生存率(PPLを加えない場合を1としたときの相対値)と培地におけるPPL濃度の関係をグラフにして図10に示す。また、IC50は116.0μMであった。なお、PPLのモル濃度は、含まれる成分(主成分は脂肪酸ポリフェノール)を658g/モル(13mg/ml)と仮定して算出した。
日本チャールズリバーより購入した7から8週齢の C57BL/6Nマウスの雌を用い、同種移植片移植を行った。具体的には、2% イソフルラン (インターベット, 東京) 吸入麻酔下において、皮膚を 70 % エタノールで殺菌した後、2×106 個の E0771 細胞を乳腺脂肪内に移植した。当該マウスを次の4群に分けた。コントロール群(Control)、PPL投与群(PPL)、CBDCA投与群(CBDCA)、PPL及びCBDCA投与群(PPl+ CBDCA)。
Claims (8)
- 紫芋もろみ蒸留粕抽出物及び
白金製剤及びビンカアルカロイドからなる群より選択される少なくとも1種の活性酸素生成抗癌剤
を含有する、抗腫瘍用組成物。 - 紫芋もろみ蒸留粕抽出物を含有する、白金製剤及びビンカアルカロイドからなる群より選択される少なくとも1種の活性酸素生成抗癌剤の抗癌作用増強用組成物。
- 白金製剤及びビンカアルカロイドからなる群より選択される少なくとも1種の活性酸素生成抗癌剤を投与される若しくは投与された人に投与されるように用いられる、紫芋もろみ蒸留粕抽出物含有組成物。
- 活性酸素が、スーパーオキシド、過酸化水素、及びヒドロキシルラジカルからなる群より選択される少なくとも1種である、請求項1~3のいずれかに記載の組成物。
- 紫芋もろみ蒸留粕抽出物が、紫芋もろみ蒸留粕アルコール抽出物である、請求項1~4のいずれかに記載の組成物。
- 紫芋もろみ蒸留粕抽出物が、カフェ酸アルキルエステルを含む、請求項1~5のいずれかに記載の組成物。
- 紫芋もろみ蒸留粕抽出物が、カフェ酸アルキルエステルを含む紫芋もろみ蒸留粕アルコール抽出物であり、
活性酸素生成抗癌剤が、白金製剤及びビンカアルカロイドからなる群より選択される少なくとも1種である、
請求項1~6のいずれかに記載の組成物。 - 紫芋もろみ蒸留粕抽出物含有組成物及び
白金製剤及びビンカアルカロイドからなる群より選択される少なくとも1種の活性酸素生成抗癌剤
を備えた抗腫瘍用キット。
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Citations (1)
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JP2015105272A (ja) | 2013-12-03 | 2015-06-08 | 宮鍋 征克 | 紫芋もろみ蒸留粕抽出物 |
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2020
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Non-Patent Citations (4)
Title |
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J. Agric. Food Chem.,2006年,Vol. 54, No. 15,pp. 5375-5381 |
J. Agric. Food Chem.,2017年,Vol. 65,pp. 7228-7239 |
PLOS ONE,2014年,Vol. 9, No. 4, e95909,pp. 1-10 |
ムラサキマサリを用いた高度循環型醸造に関する産官学研究(3),総合農学研究所報,2010年,Vol. 26,pp. 1-17,https://www.u-tokai.ac.jp/education-research/research-centers/the-research-institute-of-agriculture/shohou/ |
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