JP7264044B2 - Fluorescent Labeling Agents and Phosphorus Phthalocyanines - Google Patents
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Description
本発明は、蛍光標識剤と、それに用いられるリンフタロシアニンに関する。 The present invention relates to a fluorescent labeling agent and phosphorous phthalocyanine used therefor.
バイオイメージングは、タンパク質や細胞、組織などを可視化する技術であり、生体内分子・細胞機能の解明や創薬の研究等、生物学、医学の研究領域で幅広く活用されている。 中でも蛍光バイオイメージング法は、現象の動的な観察、多色観察、高感度観察が可能なイメージング法である。さらに、近年では、蛍光バイオイメージング法は非侵襲的に診断可能なイメージング法として注目されており、患者への負担が少ない画像診断や手術中のリアルタイム診断など臨床現場における応用が期待されている。 Bioimaging is a technique for visualizing proteins, cells, tissues, etc., and is widely used in the research fields of biology and medicine, such as the elucidation of in vivo molecules and cell functions and drug discovery research. Among them, the fluorescence bioimaging method is an imaging method that enables dynamic observation of phenomena, multicolor observation, and high-sensitivity observation. Furthermore, in recent years, the fluorescence bioimaging method has attracted attention as an imaging method that enables non-invasive diagnosis, and is expected to be applied in clinical settings such as image diagnosis with less burden on patients and real-time diagnosis during surgery.
蛍光バイオイメージング法は、主に標的部位に吸着、あるいは、標的部位でのみ発光する蛍光色素を用い、その蛍光色素に紫外~近赤外領域の光を照射した際に色素が発する蛍光を検出することにより、標的を可視化する方法である。 Fluorescent bioimaging methods mainly use fluorescent dyes that either adsorb to the target site or emit light only at the target site, and detect the fluorescence emitted by the dye when the fluorescent dye is irradiated with light in the ultraviolet to near-infrared region. This is a method for visualizing the target.
蛍光バイオイメージング用の色素(蛍光標識剤)の多くは、可視光領域に吸収を有するものであるが、可視光はエネルギーが強いため、光の照射によって色素が劣化し易いという問題があった。また、可視光領域に吸収や蛍光を示す色素は、色素に由来する蛍光だけではなく、生体の内在物質からの蛍光(自家蛍光)も検出されてしまうため、良好な画質が得られないという問題があった。加えて、可視光はヘモグロビンなどの身体を構成する物質によっても吸収されてしまうため、体内の深部まで光が到達せず、生体が生きている状態で血管や臓器を観察することは困難であるという問題があった。 Many dyes (fluorescent labeling agents) for fluorescent bioimaging have absorption in the visible light region, but there is a problem that the dyes are easily degraded by light irradiation because visible light has high energy. In addition, with dyes that absorb or fluoresce in the visible light region, not only the fluorescence derived from the dye, but also the fluorescence (autofluorescence) from the internal substances of the living body is detected, so there is a problem that good image quality cannot be obtained. was there. In addition, visible light is also absorbed by substances that make up the body, such as hemoglobin, so the light does not reach deep inside the body, making it difficult to observe blood vessels and organs in living organisms. There was a problem.
ところで、700~1800nmの波長領域は、生体の窓と呼ばれ、生体透過性の高い領域と言われている。現在は、生体の第1光学窓と言われる波長650~900nmに蛍光を発するインドシアニングリーンが、蛍光バイオイメージングの蛍光標識剤として用いられている。しかし、第1光学窓に蛍光を発する蛍光標識剤は、自家蛍光や光散乱の悪影響を無視することができず、深部に及ぶ鮮明なイメージングを得ることが困難であった。 By the way, the wavelength region of 700 to 1800 nm is called the biological window and is said to be a region with high biological permeability. At present, indocyanine green, which emits fluorescence at a wavelength of 650 to 900 nm, which is said to be the first optical window of living organisms, is used as a fluorescent labeling agent for fluorescent bioimaging. However, the fluorescent labeling agent that emits fluorescence in the first optical window cannot ignore the adverse effects of autofluorescence and light scattering, and it has been difficult to obtain clear imaging of deep areas.
一方、生体の第2光学窓と呼ばれる1000~1400nmの領域での蛍光イメージングは、生体の第1光学窓に比べ、生体組織からの自家蛍光や散乱の悪影響を受けにくいため、生体深部の蛍光イメージングが可能になることが期待されている。したがって、鮮明で深部に及ぶイメージングを実現するためには、生体の第2光学窓に蛍光を示す蛍光標識剤が求められている。しかし、特許文献1に開示されているシアニン色素を用いた蛍光標識剤は、蛍光強度や耐光性が低いため、鮮明なイメージングが得られ難く、光の照射によって蛍光標識剤が劣化し易いという問題があった。 On the other hand, fluorescence imaging in the region of 1000 to 1400 nm, which is called the second optical window of the living body, is less susceptible to the adverse effects of autofluorescence and scattering from living tissue than the first optical window of the living body. is expected to become possible. Therefore, there is a need for fluorescent labeling agents that exhibit fluorescence in the second optical window of the body in order to achieve sharp and deep imaging. However, since the fluorescent labeling agent using the cyanine dye disclosed in Patent Document 1 has low fluorescence intensity and light resistance, it is difficult to obtain clear imaging, and the fluorescent labeling agent is easily deteriorated by light irradiation. was there.
一方、フタロシアニン色素は、優れた光学特性、高い蛍光強度、高い耐光性を有する色素として知られている。例えば、特許文献2には、フタロシアニン色素を含む蛍光標識剤が開示されている。しかしながら、いずれも蛍光波長が1000nm未満であり、高感度かつ安定した蛍光バイオイメージングを得ることはできないという問題があった。したがって、蛍光イメージングにおいて、鮮明で深部に及ぶ、安定したイメージングを行うために、生体の第2光学窓に蛍光を示す蛍光標識剤が求められていた。 On the other hand, phthalocyanine dyes are known as dyes having excellent optical properties, high fluorescence intensity, and high light resistance. For example, Patent Document 2 discloses a fluorescent labeling agent containing a phthalocyanine dye. However, all of them have a fluorescence wavelength of less than 1000 nm, and there is a problem that highly sensitive and stable fluorescence bioimaging cannot be obtained. Therefore, in fluorescence imaging, a fluorescent labeling agent that exhibits fluorescence in the second optical window of the living body has been desired in order to perform clear, deep, and stable imaging.
本発明が解決しようとする課題は、生体内で鮮明かつ深部に及ぶ安定したイメージングを行うための、1000nm以上の長波長の波長領域に強い蛍光を発するフタロシアニンとそれを含む蛍光標識剤を提供することである。 The problem to be solved by the present invention is to provide a phthalocyanine that emits strong fluorescence in a long-wavelength region of 1000 nm or longer and a fluorescent labeling agent containing the same for performing clear and stable imaging of a deep region in vivo. That is.
本発明者らは、鋭意検討を重ねた結果、フタロシアニンの共役拡張、および中心元素としてリン元素を導入することにより、上記課題を解決し得ることを見出し、本発明に至った。 As a result of intensive studies, the present inventors have found that the above problems can be solved by extending the conjugation of phthalocyanine and introducing a phosphorus element as a central element, and have completed the present invention.
すなわち、本発明は、下記一般式(1)または一般式(2)で表されるリンフタロシアニンを含んでなる蛍光標識剤に関する。 That is, the present invention relates to a fluorescent labeling agent comprising a phosphorous phthalocyanine represented by the following general formula (1) or general formula (2).
一般式(1)
General formula (1)
(式中、X1~X8は、それぞれ独立に、第16族元素を表す。R1~R8は、それぞれ独立に、置換または無置換の脂肪族炭化水素基、置換または無置換の芳香族炭化水素基を表す。R9~R12は、それぞれ独立に、置換または無置換の芳香族炭化水素環、置換または無置換の複素環を表す。R13及びR14は、それぞれ独立に、水素原子、置換または無置換の脂肪族炭化水素基、-P(=O)R15R16、-C(=O)R17、-S(=O)2R18、-SiR19R20R21を表す。R15及びR16は、それぞれ独立に、水素原子、水酸基、置換もしくは無置換の脂肪族炭化水素基、置換もしくは無置換の芳香族炭化水素基、置換もしくは無置換のアルコキシル基、置換もしくは無置換のアリールオキシ基を表す。R17は、水素原子、置換もしくは無置換の脂肪族炭化水素基、置換もしくは無置換の芳香族炭化水素基を表す。R18は、水素原子、水酸基、置換もしくは無置換の脂肪族炭化水素基、置換もしくは無置換の芳香族炭化水素基を表す。R19~R21は、それぞれ独立に、置換もしくは無置換の脂肪族炭化水素基、置換もしくは無置換の芳香族炭化水素基を表す。Y1 -は、アニオンを表す。) (Wherein, X 1 to X 8 each independently represent a Group 16 element; R 1 to R 8 each independently represent a substituted or unsubstituted aliphatic hydrocarbon group, a substituted or unsubstituted aromatic Represents an aromatic hydrocarbon group R 9 to R 12 each independently represents a substituted or unsubstituted aromatic hydrocarbon ring or a substituted or unsubstituted heterocyclic ring R 13 and R 14 each independently hydrogen atom, substituted or unsubstituted aliphatic hydrocarbon group, -P(=O)R 15 R 16 , -C(=O)R 17 , -S(=O) 2 R 18 , -SiR 19 R 20 R 21. R 15 and R 16 each independently represent a hydrogen atom, a hydroxyl group, a substituted or unsubstituted aliphatic hydrocarbon group, a substituted or unsubstituted aromatic hydrocarbon group, a substituted or unsubstituted alkoxyl group, represents a substituted or unsubstituted aryloxy group, R 17 represents a hydrogen atom, a substituted or unsubstituted aliphatic hydrocarbon group, or a substituted or unsubstituted aromatic hydrocarbon group, R 18 represents a hydrogen atom or a hydroxyl group , represents a substituted or unsubstituted aliphatic hydrocarbon group, or a substituted or unsubstituted aromatic hydrocarbon group, and each of R 19 to R 21 independently represents a substituted or unsubstituted aliphatic hydrocarbon group, a substituted or unsubstituted represents a substituted aromatic hydrocarbon group, and Y 1 - represents an anion.)
一般式(2)
(式中、X9~X16は、それぞれ独立に、第16族元素を表す。R22~R29は、それぞれ独立に、置換または無置換の脂肪族炭化水素基、置換または無置換の芳香族炭化水素基を表す。R30~R33は、それぞれ独立に、置換または無置換の芳香族炭化水素環、置換または無置換の複素環を表す。R34は、水素原子、置換または無置換の脂肪族炭化水素基、-P(=O)R35R36、-C(=O)R37、-S(=O)2R38、-SiR39R40R41を表す。R35及びR36は、それぞれ独立に、水酸基、置換もしくは無置換の脂肪族炭化水素基、置換もしくは無置換の芳香族炭化水素基、置換もしくは無置換のアルコキシル基、置換もしくは無置換のアリールオキシ基を表す。R37は、水素原子、置換もしくは無置換の脂肪族炭化水素基、置換もしくは無置換の芳香族炭化水素基を表す。R38は、水素原子、水酸基、置換もしくは無置換の脂肪族炭化水素基、置換もしくは無置換の芳香族炭化水素基を表す。R39~R41は、それぞれ独立に、置換もしくは無置換の脂肪族炭化水素基、置換もしくは無置換の芳香族炭化水素基を表す。) (In the formula, X 9 to X 16 each independently represent a Group 16 element; R 22 to R 29 each independently represent a substituted or unsubstituted aliphatic hydrocarbon group, a substituted or unsubstituted aromatic each of R 30 to R 33 independently represents a substituted or unsubstituted aromatic hydrocarbon ring or a substituted or unsubstituted heterocyclic ring R 34 represents a hydrogen atom or a substituted or unsubstituted -P(=O)R 35 R 36 , -C(=O)R 37 , -S(=O) 2 R 38 , -SiR 39 R 40 R 41. R 35 and Each R 36 independently represents a hydroxyl group, a substituted or unsubstituted aliphatic hydrocarbon group, a substituted or unsubstituted aromatic hydrocarbon group, a substituted or unsubstituted alkoxyl group, or a substituted or unsubstituted aryloxy group. R 37 represents a hydrogen atom, a substituted or unsubstituted aliphatic hydrocarbon group or a substituted or unsubstituted aromatic hydrocarbon group, R 38 represents a hydrogen atom, a hydroxyl group or a substituted or unsubstituted aliphatic hydrocarbon R 39 to R 41 each independently represent a substituted or unsubstituted aliphatic hydrocarbon group or a substituted or unsubstituted aromatic hydrocarbon group. )
また、本発明は、下記一般式(1)または一般式(2)で表されるリンフタロシアニンに関する。 The present invention also relates to phosphorus phthalocyanine represented by the following general formula (1) or general formula (2).
一般式(1)
General formula (1)
(式中、X1~X8は、それぞれ独立に、第16族元素を表す。R1~R8は、それぞれ独立に、置換または無置換の脂肪族炭化水素基、置換または無置換の芳香族炭化水素基を表す。R9~R12は、それぞれ独立に、置換または無置換の芳香族炭化水素環、置換または無置換の複素環を表す。R13及びR14は、それぞれ独立に、水素原子、置換または無置換の脂肪族炭化水素基、-P(=O)R15R16、-C(=O)R17、-S(=O)2R18、-SiR19R20R21を表す。R15及びR16は、それぞれ独立に、水素原子、水酸基、置換もしくは無置換の脂肪族炭化水素基、置換もしくは無置換の芳香族炭化水素基、置換もしくは無置換のアルコキシル基、置換もしくは無置換のアリールオキシ基を表す。R17は、水素原子、置換もしくは無置換の脂肪族炭化水素基、置換もしくは無置換の芳香族炭化水素基を表す。R18は、水素原子、水酸基、置換もしくは無置換の脂肪族炭化水素基、置換もしくは無置換の芳香族炭化水素基を表す。R19~R21は、それぞれ独立に、置換もしくは無置換の脂肪族炭化水素基、置換もしくは無置換の芳香族炭化水素基を表す。Y1 -は、アニオンを表す。) (Wherein, X 1 to X 8 each independently represent a Group 16 element; R 1 to R 8 each independently represent a substituted or unsubstituted aliphatic hydrocarbon group, a substituted or unsubstituted aromatic Represents an aromatic hydrocarbon group R 9 to R 12 each independently represents a substituted or unsubstituted aromatic hydrocarbon ring or a substituted or unsubstituted heterocyclic ring R 13 and R 14 each independently hydrogen atom, substituted or unsubstituted aliphatic hydrocarbon group, -P(=O)R 15 R 16 , -C(=O)R 17 , -S(=O) 2 R 18 , -SiR 19 R 20 R 21. R 15 and R 16 each independently represent a hydrogen atom, a hydroxyl group, a substituted or unsubstituted aliphatic hydrocarbon group, a substituted or unsubstituted aromatic hydrocarbon group, a substituted or unsubstituted alkoxyl group, represents a substituted or unsubstituted aryloxy group, R 17 represents a hydrogen atom, a substituted or unsubstituted aliphatic hydrocarbon group, or a substituted or unsubstituted aromatic hydrocarbon group, R 18 represents a hydrogen atom or a hydroxyl group , represents a substituted or unsubstituted aliphatic hydrocarbon group, or a substituted or unsubstituted aromatic hydrocarbon group, and each of R 19 to R 21 independently represents a substituted or unsubstituted aliphatic hydrocarbon group, a substituted or unsubstituted represents a substituted aromatic hydrocarbon group, and Y 1 - represents an anion.)
一般式(2)
(式中、X9~X16は、それぞれ独立に、第16族元素を表す。R22~R29は、それぞれ独立に、置換または無置換の脂肪族炭化水素基、置換または無置換の芳香族炭化水素基を表す。R30~R33は、それぞれ独立に、置換または無置換の芳香族炭化水素環、置換または無置換の複素環を表す。R34は、水素原子、置換または無置換の脂肪族炭化水素基、-P(=O)R35R36、-C(=O)R37、-S(=O)2R38、-SiR39R40R41を表す。R35及びR36は、それぞれ独立に、水酸基、置換もしくは無置換の脂肪族炭化水素基、置換もしくは無置換の芳香族炭化水素基、置換もしくは無置換のアルコキシル基、置換もしくは無置換のアリールオキシ基を表す。R37は、水素原子、置換もしくは無置換の脂肪族炭化水素基、置換もしくは無置換の芳香族炭化水素基を表す。R38は、水素原子、水酸基、置換もしくは無置換の脂肪族炭化水素基、置換もしくは無置換の芳香族炭化水素基を表す。R39~R41は、それぞれ独立に、置換もしくは無置換の脂肪族炭化水素基、置換もしくは無置換の芳香族炭化水素基を表す。) (In the formula, X 9 to X 16 each independently represent a Group 16 element; R 22 to R 29 each independently represent a substituted or unsubstituted aliphatic hydrocarbon group, a substituted or unsubstituted aromatic each of R 30 to R 33 independently represents a substituted or unsubstituted aromatic hydrocarbon ring or a substituted or unsubstituted heterocyclic ring R 34 represents a hydrogen atom or a substituted or unsubstituted -P(=O)R 35 R 36 , -C(=O)R 37 , -S(=O) 2 R 38 , -SiR 39 R 40 R 41. R 35 and Each R 36 independently represents a hydroxyl group, a substituted or unsubstituted aliphatic hydrocarbon group, a substituted or unsubstituted aromatic hydrocarbon group, a substituted or unsubstituted alkoxyl group, or a substituted or unsubstituted aryloxy group. R 37 represents a hydrogen atom, a substituted or unsubstituted aliphatic hydrocarbon group or a substituted or unsubstituted aromatic hydrocarbon group, R 38 represents a hydrogen atom, a hydroxyl group or a substituted or unsubstituted aliphatic hydrocarbon R 39 to R 41 each independently represent a substituted or unsubstituted aliphatic hydrocarbon group or a substituted or unsubstituted aromatic hydrocarbon group. )
本発明により、生体内で鮮明かつ深部に及ぶ、安定したイメージングを行う蛍光標識剤を提供できるようになった。 INDUSTRIAL APPLICABILITY According to the present invention, it is possible to provide a fluorescent labeling agent capable of performing clear and stable imaging in vivo.
以下、本発明を詳細に説明するが、本発明はこれらに限定されるものではない。
まず、一般式(1)および(2)中の基について説明する。はじめに、R1~R8、R22~R29における無置換の脂肪族炭化水素基および無置換の芳香族炭化水素基について説明する。これらはいずれも一価の脂肪族炭化水素基および芳香族炭化水素基を指す。
The present invention will be described in detail below, but the present invention is not limited to these.
First, groups in general formulas (1) and (2) are described. First, unsubstituted aliphatic hydrocarbon groups and unsubstituted aromatic hydrocarbon groups for R 1 to R 8 and R 22 to R 29 are explained. Both refer to monovalent aliphatic and aromatic hydrocarbon groups.
脂肪族炭化水素基としては、アルキル基、シクロアルキル基等が挙げられる。
ここで、アルキル基としては、メチル基、エチル基、プロピル基、イソプロピル基、ブチル基、イソブチル基、sec-ブチル基、tert-ブチル基、ペンチル基、イソペンチル基、ヘキシル基、ヘプチル基、オクチル基、デシル基、ドデシル基、ペンタデシル基、オクタデシル基等が挙げられる。アルキル基の炭素数は、1~18であることが好ましい。
An alkyl group, a cycloalkyl group, etc. are mentioned as an aliphatic hydrocarbon group.
Here, the alkyl group includes a methyl group, an ethyl group, a propyl group, an isopropyl group, a butyl group, an isobutyl group, a sec-butyl group, a tert-butyl group, a pentyl group, an isopentyl group, a hexyl group, a heptyl group and an octyl group. , decyl group, dodecyl group, pentadecyl group, octadecyl group and the like. The number of carbon atoms in the alkyl group is preferably 1-18.
また、シクロアルキル基としては、シクロプロピル基、シクロブチル基、シクロペンチル基、シクロヘキシル基、シクロヘプチル基、シクロオクチル基、シクロオクタデシル基等が挙げられる。シクロアルキル基の炭素数は、3~18であることが好ましい。 Moreover, the cycloalkyl group includes a cyclopropyl group, a cyclobutyl group, a cyclopentyl group, a cyclohexyl group, a cycloheptyl group, a cyclooctyl group, a cyclooctadecyl group and the like. The cycloalkyl group preferably has 3 to 18 carbon atoms.
芳香族炭化水素基としては、単環、縮合環、環集合およびこれらの組合せからなる芳香族炭化水素基が挙げられる。 Aromatic hydrocarbon groups include aromatic hydrocarbon groups consisting of single rings, condensed rings, ring assemblies and combinations thereof.
ここで、単環芳香族炭化水素基としては、フェニル基、o-トリル基、m-トリル基、p-トリル基、2,4-キシリル基、p-クメニル基、メシチル基等が挙げられる。単環芳香族炭化水素基の炭素数は、6~18であることが好ましい。 Here, the monocyclic aromatic hydrocarbon group includes phenyl group, o-tolyl group, m-tolyl group, p-tolyl group, 2,4-xylyl group, p-cumenyl group, mesityl group and the like. The monocyclic aromatic hydrocarbon group preferably has 6 to 18 carbon atoms.
また、縮合環芳香族炭化水素基としては、1-ナフチル基、2-ナフチル基、1-アントリル基、2-アントリル基、9-アントリル基、1-フェナンスリル基、9-フェナンスリル基、1-アセナフチル基等が挙げられる。縮合環芳香族炭化水素基の炭素数は、10~18であることが好ましい。 Further, as the condensed ring aromatic hydrocarbon group, 1-naphthyl group, 2-naphthyl group, 1-anthryl group, 2-anthryl group, 9-anthryl group, 1-phenanthryl group, 9-phenanthryl group, 1-acenaphthyl and the like. The condensed ring aromatic hydrocarbon group preferably has 10 to 18 carbon atoms.
また、環集合芳香族炭化水素基としては、o-ビフェニリル基、m-ビフェニリル基、p-ビフェニリル基等が挙げられる。環集合芳香族炭化水素基の炭素数は、12~18であることが好ましい。 Examples of the ring-assembled aromatic hydrocarbon group include o-biphenylyl group, m-biphenylyl group, p-biphenylyl group and the like. The number of carbon atoms in the ring-assembled aromatic hydrocarbon group is preferably 12-18.
次に、R9~R12、R30~R33における無置換の芳香族炭化水素環および無置換の複素環について説明する。これらはいずれも一般式(1)または一般式(2)で示されたフタロシアニン環と縮合する環を意味する。ここで、芳香族炭化水素環としては、ベンゼン環、ナフタレン環等の芳香族炭化水素環が挙げられる。 Next, the unsubstituted aromatic hydrocarbon ring and unsubstituted heterocyclic ring for R 9 to R 12 and R 30 to R 33 will be explained. Each of these means a ring condensed with the phthalocyanine ring represented by general formula (1) or general formula (2). Here, the aromatic hydrocarbon ring includes aromatic hydrocarbon rings such as benzene ring and naphthalene ring.
また、複素環としては、脂肪族複素環、芳香族複素環が挙げられる。ここで、脂肪族複素環としては、イミダゾリジン環、2-イミダゾリン環、ピロリジン環、2-ピロリン環、ピペリジン環、ピペラジン環等の脂肪族複素環が挙げられる。 Moreover, an aliphatic heterocyclic ring and an aromatic heterocyclic ring are mentioned as a heterocyclic ring. Here, the aliphatic heterocycles include aliphatic heterocycles such as imidazolidine ring, 2-imidazoline ring, pyrrolidine ring, 2-pyrroline ring, piperidine ring and piperazine ring.
また、芳香族複素環としては、イミダゾール環、チアゾール環、ピリジン環、ピラジン環等の芳香族複素環が挙げられる。
次に、R13~R21、R34~R41における基について説明する。R13~R21、R34~R41において、無置換の脂肪族炭化水素基および無置換の芳香族炭化水素基は、上で説明したR1~R8、R22~R29における無置換の脂肪族炭化水素基および無置換の芳香族炭化水素基と同義である。
Moreover, aromatic heterocycles, such as an imidazole ring, a thiazole ring, a pyridine ring, a pyrazine ring, are mentioned as an aromatic heterocycle.
Next, groups for R 13 to R 21 and R 34 to R 41 will be explained. The unsubstituted aliphatic hydrocarbon group and the unsubstituted aromatic hydrocarbon group for R 13 to R 21 and R 34 to R 41 are the unsubstituted is synonymous with an aliphatic hydrocarbon group and an unsubstituted aromatic hydrocarbon group.
アルコキシル基としては、直鎖又は分岐アルコキシル基が挙げられ、具体的には、メトキシ基、エトキシ基、プロポキシ基、イソプロポキシ基、n-ブトキシ基、イソブトキシ基、tert-ブトキシ基、ネオペンチルオキシ基、2,3-ジメチル-3-ペンチルオキシ基、n-へキシルオキシ基、n-オクチルオキシ基、ステアリルオキシ基、2-エチルへキシルオキシ基等が挙げられる。アルコキシル基の炭素数は、1~6が好ましい。 Alkoxyl groups include linear or branched alkoxyl groups, and specific examples include methoxy, ethoxy, propoxy, isopropoxy, n-butoxy, isobutoxy, tert-butoxy, and neopentyloxy groups. , 2,3-dimethyl-3-pentyloxy group, n-hexyloxy group, n-octyloxy group, stearyloxy group, 2-ethylhexyloxy group and the like. The alkoxyl group preferably has 1 to 6 carbon atoms.
アリールオキシ基としては、アリールオキシ基中のアリール基が、単環または縮合環であるアリールオキシ基等が挙げられる。単環のアリールオキシ基であることが好ましい。 Examples of the aryloxy group include aryloxy groups in which the aryl group in the aryloxy group is monocyclic or condensed. A monocyclic aryloxy group is preferred.
ここで、単環のアリールオキシ基としては、フェノキシ基、p-メチルフェノキシ基等が挙げられる。また、縮合環のアリールオキシ基としては、ナフチルオキシ基、アンスリルオキシ基等が挙げられる。アリールオキシ基の炭素数は、6~12であることが好ましい。 Here, the monocyclic aryloxy group includes a phenoxy group, p-methylphenoxy group and the like. Moreover, a naphthyloxy group, an anthryloxy group, etc. are mentioned as an aryloxy group of a condensed ring. The aryloxy group preferably has 6 to 12 carbon atoms.
X1~X8は、第16族元素であり、酸素、硫黄、セレン、テルル等が挙げられる。この内、酸素、硫黄、セレンが好ましく、合成の容易さや安定性の点で酸素、硫黄がより好ましい。
Y1
-は、一価のアニオンであり、特に限定されないが、ハロゲンイオン、水酸化物イオン、非求核性アニオン等が挙げられる。非求核性アニオンとしては、BF4
-、PF6
-、B(C6H5)4
-、B(C6F5)4
-等が挙げられるが、安定性の点でPF6
-が好ましい。
X 1 to X 8 are group 16 elements such as oxygen, sulfur, selenium and tellurium. Among these, oxygen, sulfur and selenium are preferred, and oxygen and sulfur are more preferred in terms of ease of synthesis and stability.
Y 1 — is a monovalent anion, and includes, but is not limited to, halogen ions, hydroxide ions, non-nucleophilic anions, and the like. Examples of non-nucleophilic anions include BF 4 − , PF 6 − , B ( C 6 H 5 ) 4 − , B(C 6 F 5 ) 4 − and the like. preferable.
上記で説明した、脂肪族炭化水素基、芳香族炭化水素基、芳香族炭化水素環、脂肪族複素環、芳香族複素環、アルコキシル基、アリールオキシ基は、さらに他の置換基によって置換されていても良い。そのような置換基としては、ハロゲン原子や、シリル基、シアノ基、アミノ基や、前述の脂肪族炭化水素基、芳香族炭化水素基、アルコキシル基、アリ-ルオキシ基等が挙げられる。その他、構造中の一部が、エーテル基(エーテル結合)やカルボニルオキシ基(エステル結合)等の原子団に置換されていても良い。例えば、置換脂肪族複素環としては、以下のようなものを挙げることができる。 The aliphatic hydrocarbon group, aromatic hydrocarbon group, aromatic hydrocarbon ring, aliphatic heterocyclic ring, aromatic heterocyclic ring, alkoxyl group, and aryloxy group described above are further substituted with other substituents. can be Examples of such substituents include halogen atoms, silyl groups, cyano groups, amino groups, and the aforementioned aliphatic hydrocarbon groups, aromatic hydrocarbon groups, alkoxyl groups, and aryloxy groups. In addition, part of the structure may be substituted with an atomic group such as an ether group (ether bond) or a carbonyloxy group (ester bond). For example, substituted aliphatic heterocycles include the following.
また、置換芳香族複素環としては、以下のようなものを挙げることができる。 Moreover, the following can be mentioned as a substituted aromatic heterocycle.
本発明のリンフタロシアニンは、中心配位元素としてリンを有し、フタロシアニン環のα位に16族元素が結合した構造を有することが特徴である。上記α位に電子供与性基が導入されると、フタロシアニンの最高被占軌道(HOMO)の軌道エネルギーレベルが、α位に電子供与性基を有さないよりも上昇し、フタロシアニンの最低空軌道(LUMO)エネルギー準位の差(エネルギーギャップ)が小さくなるため、1000nm以上の長波長領域に吸収および蛍光波長を示すようになると考えられる。電子供与性基としては、上記α位に16族元素を直接結合した構造であることが効果的である。このような16族元素としては、酸素、硫黄、セレンが好ましく、合成の容易さや安定性の点で酸素、硫黄がより好ましい。 The phosphorus phthalocyanine of the present invention is characterized by having phosphorus as a central site element and having a structure in which a Group 16 element is bonded to the α-position of the phthalocyanine ring. When an electron-donating group is introduced at the α-position, the orbital energy level of the highest occupied molecular orbital (HOMO) of phthalocyanine rises compared to having no electron-donating group at the α-position, and the lowest unoccupied orbital of phthalocyanine Since the difference (energy gap) between the (LUMO) energy levels becomes smaller, it is considered that absorption and fluorescence wavelengths are exhibited in the long wavelength region of 1000 nm or longer. As the electron-donating group, it is effective to have a structure in which a Group 16 element is directly bonded to the α-position. As such a group 16 element, oxygen, sulfur and selenium are preferable, and oxygen and sulfur are more preferable in terms of ease of synthesis and stability.
一般式(1)で表されるリンフタロシアニンは、公知の方法で合成された一般式(3)で表される無金属フタロシアニンに、オキシハロゲン化リンを反応した後、アルコールまたは酸性化合物と反応させ、更に、アルカリ金属塩と反応させることにより合成できる。 The phosphorus phthalocyanine represented by the general formula (1) is obtained by reacting a metal-free phthalocyanine represented by the general formula (3) synthesized by a known method with a phosphorus oxyhalide and then reacting it with an alcohol or an acidic compound. Furthermore, it can be synthesized by reacting with an alkali metal salt.
原料であるフタロニトリル誘導体が非対称の構造である場合、得られるフタロシアニンは置換基の位置が異なる異性体の混合物として得られる。本明細書においては、異性体の構造のうち一例を示す。 When the starting phthalonitrile derivative has an asymmetric structure, the obtained phthalocyanine is obtained as a mixture of isomers having different substituent positions. An example of the structure of the isomer is shown herein.
一般式(3)
General formula (3)
(式中、X1~X8は、それぞれ独立に、第16族元素を表す。R1~R8は、それぞれ独立に、置換または無置換の脂肪族炭化水素基、置換または無置換の芳香族炭化水素基を表す。R9~R12は、それぞれ独立に、置換または無置換の芳香族炭化水素環、置換または無置換の複素環を表す。) (Wherein, X 1 to X 8 each independently represent a Group 16 element; R 1 to R 8 each independently represent a substituted or unsubstituted aliphatic hydrocarbon group, a substituted or unsubstituted aromatic represents an aromatic hydrocarbon group, and each of R 9 to R 12 independently represents a substituted or unsubstituted aromatic hydrocarbon ring or a substituted or unsubstituted heterocyclic ring.)
オキシハロゲン化リンとしては、オキシ塩化リン、オキシ臭化リン等が挙げられる。オキシハロゲン化リンの使用量は、一般式(3)で表される無金属フタロシアニン1モルに対し、1倍モル~50倍モル、好ましくは5倍モル~30倍モルである。反応温度は0~120℃、好ましくは10~100℃である。反応時間は10分~20時間、好ましくは1時間~5時間である。反応においては、溶媒を使用することが好ましい。反応に使用される溶媒としては、ピリジン、キノリン、トリエチルアミン、ジメチルアセトアミド(DMAC)、ジメチルホルムアミド(DMF)、ジメチルイミダゾリジノン(DMI)、ジメチルスルホキシド(DMSO)等が挙げられる。溶媒の使用量は一般式(3)で表される無金属フタロシアニンの1~200倍容量、好ましくは10~100倍容量である。 Phosphorus oxyhalides include phosphorus oxychloride and phosphorus oxybromide. The phosphorus oxyhalide is used in an amount of 1 to 50-fold mol, preferably 5 to 30-fold mol, per 1 mol of the metal-free phthalocyanine represented by the general formula (3). The reaction temperature is 0 to 120°C, preferably 10 to 100°C. The reaction time is 10 minutes to 20 hours, preferably 1 hour to 5 hours. It is preferred to use a solvent in the reaction. Solvents used in the reaction include pyridine, quinoline, triethylamine, dimethylacetamide (DMAC), dimethylformamide (DMF), dimethylimidazolidinone (DMI), dimethylsulfoxide (DMSO) and the like. The amount of the solvent to be used is 1 to 200 times the volume of the metal-free phthalocyanine represented by general formula (3), preferably 10 to 100 times the volume.
アルコールまたは酸性化合物の使用量は、一般式(3)で表される無金属フタロシアニン1モルに対し、5倍モル~5000倍モル、好ましくは10倍モル~3000倍モルである。反応温度は0~65℃、好ましくは10~40℃である。 反応時間は5分~10時間、好ましくは15分~2時間である。反応においては、溶媒を使用することが好ましい。反応に使用される溶媒としてはクロロホルム、ジクロロメタン、ジクロロエタン、トリクロロエタン、クロロベンゼン、ジクロロベンゼン等のハロゲン系溶媒、或いはベンゼン、トルエン、キシレン等の芳香族系溶媒が挙げられる。溶媒の使用量は、一般式(3)で表される無金属フタロシアニンの1~300倍容量、好ましくは5~200倍容量である。アルカリ金属塩の使用量は一般式(3)で表される無金属フタロシアニン1モルに対し、1倍モル~10倍モル、好ましくは1倍モル~5倍モルである。反応温度は0~100℃、好ましくは10~40℃である。 反応時間は5分~24時間、好ましくは1時間~15時間である。 The alcohol or acidic compound is used in an amount of 5 to 5,000 mols, preferably 10 to 3,000 mols per 1 mol of the metal-free phthalocyanine represented by the general formula (3). The reaction temperature is 0-65°C, preferably 10-40°C. The reaction time is 5 minutes to 10 hours, preferably 15 minutes to 2 hours. It is preferred to use a solvent in the reaction. Solvents used in the reaction include halogen solvents such as chloroform, dichloromethane, dichloroethane, trichloroethane, chlorobenzene and dichlorobenzene, and aromatic solvents such as benzene, toluene and xylene. The amount of the solvent used is 1 to 300 times the volume of the metal-free phthalocyanine represented by general formula (3), preferably 5 to 200 times the volume. The alkali metal salt is used in an amount of 1 to 10 mol, preferably 1 to 5 mol, per 1 mol of the metal-free phthalocyanine represented by the general formula (3). The reaction temperature is 0-100°C, preferably 10-40°C. The reaction time is 5 minutes to 24 hours, preferably 1 hour to 15 hours.
一般式(2)で表されるリンフタロシアニンは、公知の方法で合成された一般式(4)で表される無金属フタロシアニンに、オキシハロゲン化リンを反応した後、水と反応させることにより合成できる。その後、アルコールまたは酸性化合物と反応させることで、軸置換基を導入することができる。 The phosphorus phthalocyanine represented by the general formula (2) is synthesized by reacting a metal-free phthalocyanine represented by the general formula (4) synthesized by a known method with phosphorus oxyhalide and then reacting it with water. can. Subsequent reaction with alcohols or acidic compounds can introduce axial substituents.
原料であるフタロニトリル誘導体が非対称の構造である場合、得られるフタロシアニンは置換基の位置が異なる異性体の混合物として得られる。本明細書においては、異性体の構造のうち一例を示す。 When the starting phthalonitrile derivative has an asymmetric structure, the obtained phthalocyanine is obtained as a mixture of isomers having different substituent positions. An example of the structure of the isomer is shown herein.
一般式(4)
(式中、X9~X16は、それぞれ独立に、第16族元素を表す。R22~R29は、それぞれ独立に、置換または無置換の脂肪族炭化水素基、置換または無置換の芳香族炭化水素基を表す。R30~R33は、それぞれ独立に、置換または無置換の芳香族炭化水素環、置換または無置換の複素環を表す。) (In the formula, X 9 to X 16 each independently represent a Group 16 element; R 22 to R 29 each independently represent a substituted or unsubstituted aliphatic hydrocarbon group, a substituted or unsubstituted aromatic each of R 30 to R 33 independently represents a substituted or unsubstituted aromatic hydrocarbon ring or a substituted or unsubstituted heterocyclic ring.)
オキシハロゲン化リンとしては、オキシ塩化リン、オキシ臭化リン等が挙げられる。オキシハロゲン化リンの使用量は、一般式(4)で表される無金属フタロシアニン1モルに対し、1倍モル~50倍モル、好ましくは5倍モル~30倍モルである。反応温度は0~120℃、好ましくは10~100℃である。反応時間は10分~48時間、好ましくは5時間~30時間である。反応においては、溶媒を使用することが好ましい。反応に使用される溶媒としては、ピリジン、キノリン、トリエチルアミン、ジメチルアセトアミド(DMAC)、ジメチルホルムアミド(DMF)、ジメチルイミダゾリジノン(DMI)、ジメチルスルホキシド(DMSO)等が挙げられる。溶媒の使用量は一般式(4)で表される無金属フタロシアニンの1~300倍容量、好ましくは10~150倍容量である。 Phosphorus oxyhalides include phosphorus oxychloride and phosphorus oxybromide. The phosphorus oxyhalide is used in an amount of 1 to 50-fold mol, preferably 5 to 30-fold mol, per 1 mol of the metal-free phthalocyanine represented by general formula (4). The reaction temperature is 0 to 120°C, preferably 10 to 100°C. The reaction time is 10 minutes to 48 hours, preferably 5 hours to 30 hours. It is preferred to use a solvent in the reaction. Solvents used in the reaction include pyridine, quinoline, triethylamine, dimethylacetamide (DMAC), dimethylformamide (DMF), dimethylimidazolidinone (DMI), dimethylsulfoxide (DMSO) and the like. The amount of the solvent to be used is 1 to 300 times the volume of the metal-free phthalocyanine represented by general formula (4), preferably 10 to 150 times the volume.
水の使用量は、一般式(4)で表される無金属フタロシアニン1モルに対し、5倍モル~5000倍モル、好ましくは10倍モル~3000倍モルである。アルコールまたは酸性化合物の使用量は、一般式(4)で表される無金属フタロシアニン1モルに対し、5倍モル~5000倍モル、好ましくは10倍モル~3000倍モルである。反応温度は0~65℃、好ましくは10~40℃である。 反応時間は5分~10時間、好ましくは15分~2時間である。反応においては、溶媒を使用することが好ましい。反応に使用される溶媒としてはクロロホルム、ジクロロメタン、ジクロロエタン、トリクロロエタン、クロロベンゼン、ジクロロベンゼン等のハロゲン系溶媒、或いはベンゼン、トルエン、キシレン等の芳香族系溶媒が挙げられる。溶媒の使用量は、一般式(4)で表される無金属フタロシアニンの1~300倍容量、好ましくは5~200倍容量である。 The amount of water to be used is 5 to 5,000 mols, preferably 10 to 3,000 mols per 1 mol of the metal-free phthalocyanine represented by the general formula (4). The alcohol or acidic compound is used in an amount of 5 to 5,000 mols, preferably 10 to 3,000 mols per 1 mol of the metal-free phthalocyanine represented by the general formula (4). The reaction temperature is 0-65°C, preferably 10-40°C. The reaction time is 5 minutes to 10 hours, preferably 15 minutes to 2 hours. It is preferred to use a solvent in the reaction. Solvents used in the reaction include halogen solvents such as chloroform, dichloromethane, dichloroethane, trichloroethane, chlorobenzene and dichlorobenzene, and aromatic solvents such as benzene, toluene and xylene. The amount of the solvent used is 1 to 300 times the volume of the metal-free phthalocyanine represented by general formula (4), preferably 5 to 200 times the volume.
(蛍光標識剤)
本発明の蛍光標識剤は、一般式(1)または一般式(2)で表されるリンフタロシアニンを含んでなることを特徴とする。本発明の蛍光標識剤の用途は特に限定されないが、例えば、タンパク質や生体内の低分子化合物を蛍光ラベルすることで、生体内での挙動を可視化することが挙げられる。これらの用途の場合、水中で蛍光標識剤が蛍光を発光する必要があるが、蛍光標識剤を水溶性とするか、水中に分散させることが好ましい。例えば、リンフタロシアニンにスルホン酸ナトリウム基やポリエチレングリコール基などを導入することにより水溶性とすることができるが、蛍光発光強度や分散安定性、耐光性の観点から、両親媒性物質とリンフタロシアニンを含む粒子を水中に分散させた分散体として使用することが好ましい。
(Fluorescent labeling agent)
The fluorescent labeling agent of the present invention is characterized by comprising a phosphorous phthalocyanine represented by general formula (1) or general formula (2). The use of the fluorescent labeling agent of the present invention is not particularly limited, but examples include visualization of in vivo behavior by fluorescently labeling proteins and low-molecular-weight compounds in vivo. For these uses, the fluorescent labeling agent needs to emit fluorescence in water, and it is preferable that the fluorescent labeling agent is water-soluble or dispersed in water. For example, phosphorus phthalocyanine can be made water-soluble by introducing a sodium sulfonate group or a polyethylene glycol group. It is preferable to use as a dispersion in which the particles containing the particles are dispersed in water.
さらに、標的選択性を持たせるために、リンフタロシアニンを含む粒子に、ターゲット分子に結合する物質を修飾することが好ましい。ターゲット分子に結合する物質としては、ターゲット分子と特異的に結合する一次抗体、その一次抗体に結合する二次抗体、アビジン、ビオチンあるいは糖鎖などが挙げられる。 Furthermore, in order to impart target selectivity, it is preferable to modify the particles containing phosphorus phthalocyanine with a substance that binds to the target molecule. Substances that bind to target molecules include primary antibodies that specifically bind to target molecules, secondary antibodies that bind to the primary antibodies, avidin, biotin, sugar chains, and the like.
(両親媒性物質)
水系で非水溶性の有機色素を使用する場合、両親媒性物質等で可溶化する方法が知られている。両親媒性物質とは、一つの分子内に親水基と疎水基を有する分子の総称であり、代表的なものとして界面活性剤やリン脂質等がある。両親媒性物質は一種類のみを使用してもよく、二種類以上を混合して使用してもよい。本実施形態に関わる両親媒性物質としては、特に限定されることはなく、本発明のリンフタロシアニンを可溶化することができればいかなるものでもよい。
(Amphiphile)
When a water-insoluble organic dye is used in an aqueous system, a method of solubilizing it with an amphipathic substance or the like is known. An amphipathic substance is a general term for molecules having a hydrophilic group and a hydrophobic group in one molecule, and typical examples thereof include surfactants and phospholipids. Only one type of amphiphilic substance may be used, or two or more types may be mixed and used. The amphiphilic substance related to this embodiment is not particularly limited, and any amphiphilic substance can be used as long as it can solubilize the phosphorous phthalocyanine of the present invention.
界面活性剤としては、非イオン性界面活性剤、カチオン性界面活性剤、アニオン性界面活性剤等を挙げることができる。
非イオン性界面活性剤としては、例えば、Tween(登録商標)20、Tween(登録商標)40、Tween(登録商標)60、Tween(登録商標)80等のポリオキシエチレンソルビタン系脂肪酸エステル、Cremophor(登録商標)EL、Cremophor(登録商標)RH60等のポリオキシエチレンヒマシ油誘導体、Solutol(登録商標)HS15等の12-ヒドロキシステアリン酸-ポリエチレングリコールコポリマー、Triton(登録商標)X-100、Triton(登録商標)X-114等のオクチルフェノールエトキシレート等を挙げることができる。
Examples of surfactants include nonionic surfactants, cationic surfactants, anionic surfactants, and the like.
Examples of nonionic surfactants include polyoxyethylene sorbitan fatty acid esters such as Tween (registered trademark) 20, Tween (registered trademark) 40, Tween (registered trademark) 60 and Tween (registered trademark) 80, Cremophor ( EL, polyoxyethylene castor oil derivatives such as Cremophor® RH60, 12-hydroxystearic acid-polyethylene glycol copolymers such as Solutol® HS15, Triton® X-100, Triton® (trademark) X-114 and other octylphenol ethoxylates.
カチオン性界面活性剤としては、例えば、塩化ステアリルトリメチルアンモニウム、塩化ラウリルトリメチルアンモニウム等のアルキルトリメチルアンモニウム塩、塩化セチルピリジニウム等のアルキルピリジニウム塩、塩化ジステアリルジメチルアンモニウム、ジアルキルジメチルアンモニウム塩、塩化ポリ(N,N’-ジメチル-3,5-メチレンピペリジニウム)等のアルキル四級アンモニウム塩、アルキルジメチルベンジルアンモニウム塩、アルキルイソキノリニウム塩、ジアルキルモリホニウム塩、ポリオキシエチレンアルキルアミン、アルキルアミン塩、ポリアミン脂肪酸誘導体、アミルアルコール脂肪酸誘導体、塩化ベンザルコニウム、塩化ベンゼトニウム、ポリビニルアルコール、ポリオキシエチレンポリオキシプロピレングリコール、ポリエチレングリコール-ポリアルキル、ポリエチレングリコール-ポリ乳酸、ポリエチレングリコール-ポリカプロラクトン、ポリエチレングリコール-ポリグリコール酸、ポリエチレングリコール-ポリ(ラクチド-グリコリド)等のブロック共重合体等を挙げることができる。 Examples of cationic surfactants include alkyltrimethylammonium salts such as stearyltrimethylammonium chloride and lauryltrimethylammonium chloride, alkylpyridinium salts such as cetylpyridinium chloride, distearyldimethylammonium chloride, dialkyldimethylammonium salts, poly(N ,N'-dimethyl-3,5-methylenepiperidinium), alkyldimethylbenzylammonium salts, alkylisoquinolinium salts, dialkylmorphonium salts, polyoxyethylenealkylamines, alkylamines Salt, polyamine fatty acid derivative, amyl alcohol fatty acid derivative, benzalkonium chloride, benzethonium chloride, polyvinyl alcohol, polyoxyethylene polyoxypropylene glycol, polyethylene glycol-polyalkyl, polyethylene glycol-polylactic acid, polyethylene glycol-polycaprolactone, polyethylene glycol block copolymers such as polyglycolic acid, polyethylene glycol-poly(lactide-glycolide), and the like.
アニオン性界面活性剤としては、例えば、ドデシル硫酸ナトリウム、ドデシルベンゼンスルホネート、デシルベンゼンスルホネート、ウンデシルベンゼンスルホネート、トリデシルベンゼンスルホネート、ノニルベンゼンスルホネート並びにこれらのナトリウム、カリウム及びアンモニウム塩等が挙げられる。 Examples of anionic surfactants include sodium dodecylsulfate, dodecylbenzenesulfonate, decylbenzenesulfonate, undecylbenzenesulfonate, tridecylbenzenesulfonate, nonylbenzenesulfonate and sodium, potassium and ammonium salts thereof.
本発明における蛍光標識剤は、本発明のリンフタロシアニンを含有していれば、必要に応じてその他の成分を含有していてもよい。その他の成分としては、例えば、水や両親媒性物質等が挙げられる。 As long as the fluorescent labeling agent of the present invention contains the phosphorous phthalocyanine of the present invention, it may contain other components as necessary. Other components include, for example, water and amphiphilic substances.
(蛍光標識剤の作製方法)
本発明における蛍光標識剤の作製方法は、特に限定されないが、例えば、本発明のリンフタロシアニンと両親媒性物質を有機溶媒中に溶解した後、有機溶媒を留去し、水に再溶解させる方法、あるいは本発明のリンフタロシアニンと両親媒性物質を有機溶媒に溶解した溶液に水を注入し、有機溶媒を留去する方法等を挙げることができる。
(Method for producing fluorescent labeling agent)
The method for producing the fluorescent labeling agent of the present invention is not particularly limited, but for example, a method of dissolving the phosphorous phthalocyanine of the present invention and an amphiphilic substance in an organic solvent, distilling off the organic solvent, and redissolving in water. Alternatively, a method of injecting water into a solution in which the phosphorus phthalocyanine of the present invention and an amphiphilic substance are dissolved in an organic solvent and distilling off the organic solvent can be used.
前者の方法では、有機溶媒の留去が容易であり、本発明のリンフタロシアニンと両親媒性物質の濃度も比較的容易に見積もることができるといった利点がある。有機溶媒の留去には、エバポレーター等による減圧留去装置が好適に用いられる。溶媒留去時の温度は、15℃から有機溶媒の沸点温度の範囲内で任意に設定することができる。水に再溶解させるときは、プロペラ撹拌機、タービン撹拌機、ボルテックスミキサー、撹拌子を用いたマグネティックスターラーによる撹拌、あるいは超音波照射装置による分散等が好適に用いられる。また、コロイドミル等を併用してもよい。 The former method is advantageous in that the organic solvent can be easily distilled off and the concentrations of the phosphorus phthalocyanine of the present invention and the amphiphilic substance can be estimated relatively easily. A vacuum distillation device such as an evaporator is preferably used for distilling off the organic solvent. The temperature at which the solvent is distilled off can be arbitrarily set within the range from 15° C. to the boiling point temperature of the organic solvent. When re-dissolving in water, stirring by a propeller stirrer, turbine stirrer, vortex mixer, or magnetic stirrer using a stirrer, or dispersion by an ultrasonic irradiation device, or the like is preferably used. Also, a colloid mill or the like may be used in combination.
後者の方法では、ミセル粒子を均一に調製し易いといった利点がある。有機溶媒に溶解した溶液に水を注入するとき、溶液は撹拌あるいは超音波照射した状態とし、水を短時間で注入することが好ましい。撹拌は上記と同様の装置で行うことができる。水注入時の温度は、15℃から有機溶媒の沸点より5℃低い温度の範囲内で任意に設定することができる。有機溶媒の留去は、撹拌あるいは超音波照射した状態で常圧の下に留去する方法、あるいはエバポレーター等により減圧留去する方法が好ましい。溶媒留去時の温度は、15℃から有機溶媒の沸点温度の範囲内で任意に設定することができる。 The latter method has the advantage of facilitating uniform preparation of micellar particles. When injecting water into a solution dissolved in an organic solvent, it is preferred that the solution is stirred or irradiated with ultrasonic waves, and the water is injected in a short period of time. Stirring can be performed with the same equipment as described above. The temperature at which water is injected can be arbitrarily set within a range from 15° C. to a temperature 5° C. lower than the boiling point of the organic solvent. Evaporation of the organic solvent is preferably carried out under normal pressure while being stirred or irradiated with ultrasonic waves, or under reduced pressure using an evaporator or the like. The temperature at which the solvent is distilled off can be arbitrarily set within the range from 15° C. to the boiling point temperature of the organic solvent.
上記の作製方法で使用される有機溶媒としては、ヘキサン、シクロへキサン、およびヘプタン等の炭化水素類、アセトン、メチルエチルケトン等のケトン類、ジエチルエーテル、テトラヒドロフラン等のエーテル類、ジクロロメタン、クロロホルム、四塩化炭素、ジクロロエタン、トリクロロエタン等のハロゲン化炭化水素類、ベンゼン、トルエン等の芳香族炭化水素、酢酸エチル、酢酸ブチル等のエステル類、N,N-ジメチルホルムアミド、ジメチルスルホキシド、N-メチル-2-ピロリドン等の非プロトン性極性溶媒類、ピリジン誘導体等を挙げることができる。これらの溶媒は、単独で使用してもよく、混合して使用してもよい。また、上記方法にて作製した蛍光標識剤を透析にかけることで、有機溶媒を除去してもよい。 Examples of organic solvents used in the above production method include hydrocarbons such as hexane, cyclohexane, and heptane, ketones such as acetone and methyl ethyl ketone, ethers such as diethyl ether and tetrahydrofuran, dichloromethane, chloroform, and tetrachloride. Carbon, halogenated hydrocarbons such as dichloroethane and trichloroethane, aromatic hydrocarbons such as benzene and toluene, esters such as ethyl acetate and butyl acetate, N,N-dimethylformamide, dimethylsulfoxide, N-methyl-2-pyrrolidone and aprotic polar solvents such as pyridine derivatives. These solvents may be used alone or in combination. Alternatively, the organic solvent may be removed by dialysis of the fluorescent labeling agent produced by the above method.
上記の作製方法で使用される水としては、イオン交換水、蒸留水、あるいは超純水を挙げることができる。細胞を扱う場合は、生理条件に近づけるために水に塩を加えた生理食塩水、さらにリン酸緩衝剤を加えたリン酸緩衝生理食塩水等を好適に用いることができる。 As water used in the above preparation method, ion-exchanged water, distilled water, or ultrapure water can be mentioned. When dealing with cells, physiological saline in which salt is added to water to approximate physiological conditions, phosphate-buffered saline in which a phosphate buffer is further added, and the like can be preferably used.
以下に、本発明を実施例に基づいて説明するが、本発明はこれによって限定されるものではない。なお、実施例中、特に断りのない限り、「部」とは、「モル部」を表し、「%」は「質量%」をそれぞれ表す。 EXAMPLES The present invention will be described below based on examples, but the present invention is not limited by these. In the examples, unless otherwise specified, "part" represents "mole part" and "%" represents "% by mass".
(製造例1)フタロニトリル誘導体1の製造
窒素雰囲気下、1,4-ジヒドロキシ-2,3-ナフタレンジカルボニトリル1部と水素化ナトリウム(パラフィン含有純度60%)2.1部を脱水ジメチルアセトアミド50部中25℃にて15分間攪拌した。その後、ヨウ化エチル2部を添加し、80℃にて9時間攪拌した。冷却後、メタノール350部を添加し、析出物をろ過により取り出し、80℃で乾燥させることで、フタロニトリル誘導体1を0.9部得た。
(Production Example 1) Production of phthalonitrile derivative 1 Under a nitrogen atmosphere, 1 part of 1,4-dihydroxy-2,3-naphthalene dicarbonitrile and 2.1 parts of sodium hydride (paraffin-containing purity 60%) were combined with dehydrated dimethylacetamide. Stirred for 15 minutes at 25° C. in 50 parts. After that, 2 parts of ethyl iodide was added, and the mixture was stirred at 80° C. for 9 hours. After cooling, 350 parts of methanol was added, and the precipitate was taken out by filtration and dried at 80° C. to obtain 0.9 parts of phthalonitrile derivative 1.
(製造例2~23)フタロニトリル誘導体2~23の製造
製造例1で使用した1,4-ジヒドロキシ-2,3-ナフタレンジカルボニトリルおよびヨウ化エチルを、それぞれ表1に示す、Aで挙げた化合物およびBで挙げた化合物に変更した以外は、製造例1と同様に製造して、表1に示す、フタロニトリル誘導体2~23を得た。尚、表1に示す、Aで挙げた化合物およびBで挙げた化合物は、製造例1における1,4-ジヒドロキシ-2,3-ナフタレンジカルボニトリルおよびヨウ化エチルと同モル量使用した。
(Production Examples 2 to 23) Production of phthalonitrile derivatives 2 to 23 1,4-dihydroxy-2,3-naphthalenedicarbonitrile and ethyl iodide used in Production Example 1 are listed in A, shown in Table 1, respectively. Phthalonitrile derivatives 2 to 23 shown in Table 1 were obtained in the same manner as in Production Example 1, except that the compound was changed to the compound listed in B and the compound listed in B. The compounds listed in A and B shown in Table 1 were used in the same molar amounts as 1,4-dihydroxy-2,3-naphthalenedicarbonitrile and ethyl iodide in Production Example 1.
(製造例24)フタロニトリル誘導体24の製造
1,4-ジヒドロキシ-2,3-ナフタレンジカルボニトリル1部と炭酸カリウム4部、トシルクロライド2部をアセトン20部中内温55℃にて4.5時間還流した。冷却後、水330部を加え、1時間攪拌し、析出物をろ過により取り出し、60℃で乾燥させることで、1,4-ビス(p-トルエンスルホニルオキシ)-2,3-ナフタレンジカルボニトリルを0.7部得た。1,4-ビス(p-トルエンスルホニルオキシ)-2,3-ナフタレンジカルボニトリル0.7部とベンゼンチオール1.4部、炭酸カリウム2.8部をジメチルスルホキシド100部中25℃にて23時間攪拌した。水330部で反応を停止し、クロロホルム80部で抽出を行った。抽出液を無水硫酸マグネシウムで水分を除去した後、酢酸エチル/ヘキサンでカラムクロマトグラフィーを行い、フタロニトリル誘導体24を0.3部得た。
(Production Example 24) Production of phthalonitrile derivative 24 1 part of 1,4-dihydroxy-2,3-naphthalenedicarbonitrile, 4 parts of potassium carbonate and 2 parts of tosyl chloride were mixed in 20 parts of acetone at an internal temperature of 55°C. Reflux for 5 hours. After cooling, 330 parts of water was added, and the mixture was stirred for 1 hour. The precipitate was filtered out and dried at 60°C to obtain 1,4-bis(p-toluenesulfonyloxy)-2,3-naphthalenedicarbonitrile. 0.7 parts of 0.7 parts of 1,4-bis(p-toluenesulfonyloxy)-2,3-naphthalenedicarbonitrile, 1.4 parts of benzenethiol, and 2.8 parts of potassium carbonate in 100 parts of dimethyl sulfoxide at 25° C. 23 Stirred for hours. The reaction was stopped with 330 parts of water and extracted with 80 parts of chloroform. After removing water from the extract with anhydrous magnesium sulfate, column chromatography was performed with ethyl acetate/hexane to obtain 0.3 part of phthalonitrile derivative 24 .
(製造例25~39)フタロニトリル誘導体25~39の製造
製造例24で使用した1,4-ジヒドロキシ-2,3-ナフタレンジカルボニトリルおよびベンゼンチオールを、それぞれ表2に示す、Cで挙げた化合物およびDで挙げた化合物に変更した以外は、製造例24と同様に製造して、表2に示すフタロニトリル誘導体25~39を得た。尚、表2に示す、Cで挙げた化合物およびDで挙げた化合物は、製造例24における1,4-ジヒドロキシ-2,3-ナフタレンジカルボニトリルおよびベンゼンチオールと同モル量使用した。
(Production Examples 25 to 39) Production of phthalonitrile derivatives 25 to 39 The 1,4-dihydroxy-2,3-naphthalenedicarbonitrile and benzenethiol used in Production Example 24 are shown in Table 2 and listed in C, respectively. Phthalonitrile derivatives 25 to 39 shown in Table 2 were obtained in the same manner as in Production Example 24 except that the compound and the compound listed in D were changed. The compounds listed in C and D shown in Table 2 were used in the same molar amounts as 1,4-dihydroxy-2,3-naphthalenedicarbonitrile and benzenethiol in Production Example 24.
(製造例40)フタロニトリル誘導体40の製造
2,6-ジメトキシ-4,5-ジアミノフタロニトリル1部とパラホルムアルデヒド1部をアセトニトリル20部に溶解させ、30%過酸化水素水30部と濃塩酸10部を添加した。25℃にて2時間攪拌した後、水500部に炭酸水素ナトリウム5部を溶解した水溶液を添加し、析出した固体をろ取し、水170部で洗浄を行った。80℃で乾燥させた後、窒素雰囲気下、脱水ジメチルアセトアミド4部と水素化ナトリウム(パラフィン含有純度60%)0.9部を添加し、25℃にて、15分攪拌した。その後、ヨウ化エチル0.9部を添加し、80℃にて9時間攪拌した。冷却後、水170部を添加し、析出物をろ過により取り出し、80℃で乾燥させることで、フタロニトリル誘導体40を0.8部得た。
(Production Example 40) Production of phthalonitrile derivative 40 1 part of 2,6-dimethoxy-4,5-diaminophthalonitrile and 1 part of paraformaldehyde were dissolved in 20 parts of acetonitrile, followed by 30 parts of 30% hydrogen peroxide solution and concentrated hydrochloric acid. 10 parts were added. After stirring at 25° C. for 2 hours, an aqueous solution prepared by dissolving 5 parts of sodium hydrogencarbonate in 500 parts of water was added, and the precipitated solid was collected by filtration and washed with 170 parts of water. After drying at 80°C, 4 parts of dehydrated dimethylacetamide and 0.9 parts of sodium hydride (paraffin-containing purity 60%) were added under nitrogen atmosphere, and stirred at 25°C for 15 minutes. After that, 0.9 part of ethyl iodide was added, and the mixture was stirred at 80° C. for 9 hours. After cooling, 170 parts of water was added, and the precipitate was taken out by filtration and dried at 80° C. to obtain 0.8 parts of phthalonitrile derivative 40 .
(製造例41~43)フタロニトリル誘導体41~43の製造
製造例40で使用した2,6-ジメトキシ-4,5-ジアミノフタロニトリル、パラホルムアルデヒド、ヨウ化エチルを、それぞれ表3に示す、Eで挙げた化合物、Fで挙げた化合物、Gで挙げた化合物に変更した以外は、製造例40と同様に製造して、表3に示す、フタロニトリル誘導体41~43を得た。尚、表3に示す、Eで挙げた化合物、Fで挙げた化合物、Gで挙げた化合物は、製造例40における2,6-ジメトキシ-4,5-ジアミノフタロニトリル、パラホルムアルデヒド、ヨウ化エチルと同モル量使用した。
(Production Examples 41 to 43) Production of phthalonitrile derivatives 41 to 43 2,6-dimethoxy-4,5-diaminophthalonitrile, paraformaldehyde, and ethyl iodide used in Production Example 40 are shown in Table 3, E Phthalonitrile derivatives 41 to 43 shown in Table 3 were obtained in the same manner as in Production Example 40, except that the compounds listed in 1, the compounds listed in F, and the compounds listed in G were changed. In addition, the compounds listed in E, the compounds listed in F, and the compounds listed in G shown in Table 3 are 2,6-dimethoxy-4,5-diaminophthalonitrile, paraformaldehyde, and ethyl iodide in Production Example 40. was used in the same molar amount as
(製造例44)フタロニトリル誘導体44の製造
2,6-ジメトキシ-4,5-ジアミノフタロニトリル1部と1,1’-カルボニルジイミダゾール1部をアセトニトリル20部に溶解させ、30%過酸化水素水30部と濃塩酸10部を添加した。25℃にて2時間攪拌した後、水500部に炭酸水素ナトリウム5部を溶解した水溶液を添加し、析出した固体をろ取し、水170部で洗浄を行った。80℃で乾燥させた後、窒素雰囲気化、脱水ジメチルアセトアミド4部と水素化ナトリウム(パラフィン含有純度60%)2.0部を添加し、25℃にて、15分攪拌した。その後、ヨウ化エチル2.0部を添加し、80℃にて9時間攪拌した。冷却後、水170部を添加し、析出物をろ過により取り出し、80℃で乾燥させることで、フタロニトリル誘導体44を0.8部得た。
(Production Example 44) Production of phthalonitrile derivative 44 1 part of 2,6-dimethoxy-4,5-diaminophthalonitrile and 1 part of 1,1'-carbonyldiimidazole were dissolved in 20 parts of acetonitrile and mixed with 30% hydrogen peroxide. 30 parts of water and 10 parts of concentrated hydrochloric acid were added. After stirring at 25° C. for 2 hours, an aqueous solution prepared by dissolving 5 parts of sodium hydrogencarbonate in 500 parts of water was added, and the precipitated solid was collected by filtration and washed with 170 parts of water. After drying at 80°C, 4 parts of dehydrated dimethylacetamide and 2.0 parts of sodium hydride (paraffin-containing purity 60%) were added under nitrogen atmosphere and stirred at 25°C for 15 minutes. After that, 2.0 parts of ethyl iodide was added, and the mixture was stirred at 80° C. for 9 hours. After cooling, 170 parts of water was added, and the precipitate was taken out by filtration and dried at 80°C to obtain 0.8 parts of phthalonitrile derivative 44.
(製造例45~47)フタロニトリル誘導体45~47の製造
製造例44で使用した2,6-ジメトキシ-4,5-ジアミノフタロニトリルおよびヨウ化エチルを、それぞれ表4に示す、Hで挙げた化合物およびIで挙げた化合物に変更した以外は、製造例44と同様に製造して、表4に示す、フタロニトリル誘導体45~47を得た。尚、表4に示す、Hで挙げた化合物およびIで挙げた化合物は、製造例44における2,6-ジメトキシ-4,5-ジアミノフタロニトリルおよびヨウ化エチルと同モル量使用した。
(Production Examples 45 to 47) Production of phthalonitrile derivatives 45 to 47 2,6-dimethoxy-4,5-diaminophthalonitrile and ethyl iodide used in Production Example 44 are shown in Table 4 and listed as H. Phthalonitrile derivatives 45 to 47 shown in Table 4 were obtained in the same manner as in Production Example 44 except that the compound and the compound listed in I were changed. The compounds listed for H and the compounds listed for I shown in Table 4 were used in the same molar amounts as 2,6-dimethoxy-4,5-diaminophthalonitrile and ethyl iodide in Production Example 44.
(製造例48)無金属フタロシアニン1の製造
1-ブタノール1部に金属リチウム7部を溶解させたリチウム溶液に、フタロニトリル誘導体1を1部添加し、内温110℃にて5.5時間攪拌した。メタノール10部と塩酸1部を加え、室温にて3時間攪拌した後、析出物をろ過により取り出し、60℃で乾燥させ、表5に記載した構造を有する無金属フタロシアニン1を0.2部得た。
(Production Example 48) Production of metal-free phthalocyanine 1 1-To a lithium solution prepared by dissolving 7 parts of metallic lithium in 1 part of butanol, 1 part of phthalonitrile derivative 1 was added, and the mixture was stirred at an internal temperature of 110°C for 5.5 hours. bottom. After adding 10 parts of methanol and 1 part of hydrochloric acid and stirring at room temperature for 3 hours, the precipitate was taken out by filtration and dried at 60° C. to obtain 0.2 parts of metal-free phthalocyanine 1 having the structure shown in Table 5. rice field.
(製造例49~94)無金属フタロシアニン2~47の製造
製造例48で使用したフタロニトリル誘導体1を、表5に示すフタロニトリル誘導体を等モル部に変更した以外は、製造例48と同様に製造して、それぞれ対応する無金属フタロシアニン2~47を得た。
(Production Examples 49 to 94) Production of metal-free phthalocyanines 2 to 47 In the same manner as in Production Example 48, except that the phthalonitrile derivative 1 used in Production Example 48 was changed to an equimolar part of the phthalonitrile derivative shown in Table 5. were prepared to give the corresponding metal-free phthalocyanines 2-47, respectively.
(実施例1)リンフタロシアニン1の製造
窒素雰囲気下、無金属フタロシアニン1を1部ピリジン10部に溶解させ、リン酸オキシブロミド15.7部を加え、80℃にて3時間攪拌した。冷却後、エバポレーターを用いてピリジンを除去し、エタノール150部とジクロロメタン50部を加え1時間25℃にて攪拌した。その後、ヘキサフルオロリン酸カリウムを15部加え、25℃にて12時間攪拌した。ジクロロメタンとヘキサンを用いて再結晶を行い、表6に示す構造を有するリンフタロシアニン1を0.4部得た。得られたリンフタロシアニン1の構造は、マススペクトル(ブルカーダルトニクス社製、AutoflexII)、によって同定した。マススペクトルでは、m/z(positive)=1187.32(理論値1186.30)、m/z(negative)=143.54(理論値114.96)に分子イオンピークが検出され、表6に記載したリンフタロシアニン1の構造を有することを確認した。
(Example 1) Production of phosphorus phthalocyanine 1 Under a nitrogen atmosphere, 1 part of metal-free phthalocyanine 1 was dissolved in 10 parts of pyridine, 15.7 parts of phosphoric acid oxybromide was added, and the mixture was stirred at 80°C for 3 hours. After cooling, pyridine was removed using an evaporator, 150 parts of ethanol and 50 parts of dichloromethane were added, and the mixture was stirred at 25° C. for 1 hour. After that, 15 parts of potassium hexafluorophosphate was added, and the mixture was stirred at 25° C. for 12 hours. Recrystallization was performed using dichloromethane and hexane to obtain 0.4 parts of phosphorus phthalocyanine 1 having the structure shown in Table 6. The structure of the obtained phosphorous phthalocyanine 1 was identified by mass spectroscopy (Autoflex II, manufactured by Bruker Daltonics). In the mass spectrum, molecular ion peaks were detected at m/z (positive) = 1187.32 (theoretical value 1186.30) and m/z (negative) = 143.54 (theoretical value 114.96). It was confirmed to have the structure of phosphorus phthalocyanine 1 described.
(実施例2~47)リンフタロシアニン2~47の製造
実施例1で使用した無金属フタロシアニン1およびエタノールを、それぞれ表6に示す、無金属フタロシアニンおよびJで挙げた化合物に変更した以外は、実施例1と同様に製造して、表6に示すリンフタロシアニン2~47を得た。尚、それぞれ表6に示す、無金属フタロシアニンおよびJで挙げた化合物は、実施例1における無金属フタロシアニン1およびエタノールと同モル量使用した。得られたリンフタロシアニン2~47の構造は、マススペクトルによって同定し、表6に示した構造を有することが確認された。表7にマススペクトルの分析結果を示す。
(実施例48)リンフタロシアニン48の製造
窒素雰囲気下、無金属フタロシアニン1を1部ピリジン10部に溶解させ、リン酸オキシブロミド15.7部を加え、80℃にて3時間攪拌した。冷却後、エバポレーターを用いてピリジンを除去し、リン酸ジフェニル10部、ジメチルスルホキシド150部を加え、85℃で3時間反応させた後、反応溶液を水150部に添加した。析出物をろ過し、ジクロロメタン80部に溶解させた。その後、ヘキサフルオロリン酸カリウムを15部加え、25℃にて12時間攪拌した。ジクロロメタンとヘキサンを用いて再結晶を行い、表8に示す構造を有するリンフタロシアニン48を0.1部得た。得られたリンフタロシアニン48の構造は、マススペクトル、によって構造を同定した。マススペクトルでは、m/z(positive)=1595.57(理論値1594.54)、m/z(negative)=143.87(理論値144.96)に分子イオンピークが検出され、表8に記載したリンフタロシアニン48の構造を有することを確認した。
(Example 48) Production of phosphorus phthalocyanine 48 Under a nitrogen atmosphere, 1 part of metal-free phthalocyanine 1 was dissolved in 10 parts of pyridine, 15.7 parts of phosphoric acid oxybromide was added, and the mixture was stirred at 80°C for 3 hours. After cooling, pyridine was removed using an evaporator, 10 parts of diphenyl phosphate and 150 parts of dimethylsulfoxide were added, reacted at 85° C. for 3 hours, and then the reaction solution was added to 150 parts of water. The precipitate was filtered and dissolved in 80 parts of dichloromethane. After that, 15 parts of potassium hexafluorophosphate was added, and the mixture was stirred at 25° C. for 12 hours. Recrystallization was performed using dichloromethane and hexane to obtain 0.1 part of phosphorus phthalocyanine 48 having the structure shown in Table 8. The structure of the obtained phosphorus phthalocyanine 48 was identified by mass spectroscopy. In the mass spectrum, molecular ion peaks were detected at m/z (positive) = 1595.57 (theoretical value 1594.54) and m/z (negative) = 143.87 (theoretical value 144.96). It was confirmed to have the structure of phosphorus phthalocyanine 48 described.
(実施例49~73)リンフタロシアニン49~73の製造
実施例48で使用した無金属フタロシアニン1およびリン酸ジフェニル、ヘキサフルオロリン酸カリウムを、それぞれ表8に示す、無金属フタロシアニンおよびK、Fで挙げた化合物に変更した以外は、実施例48と同様に製造して、表8に示すリンフタロシアニン49~73を得た。尚、それぞれ表8に示す、無金属フタロシアニンおよびK、Fで挙げた化合物は、実施例48における無金属フタロシアニン1およびリン酸ジフェニル、ヘキサフルオロリン酸カリウムと同モル量使用した。得られたリンフタロシアニン49~73の構造は、マススペクトルによって同定し、表8に示した構造を有することが確認された。表9にマススペクトルの分析結果を示す。
(Examples 49 to 73) Production of phosphorus phthalocyanines 49 to 73 The metal-free phthalocyanine 1, diphenyl phosphate, and potassium hexafluorophosphate used in Example 48 were converted into metal-free phthalocyanine, K, and F, respectively, shown in Table 8. Phosphorus phthalocyanines 49 to 73 shown in Table 8 were obtained in the same manner as in Example 48, except that the listed compounds were used. The metal-free phthalocyanine and the compounds listed for K and F shown in Table 8 were used in the same molar amounts as the metal-free phthalocyanine 1, diphenyl phosphate and potassium hexafluorophosphate in Example 48. The structures of the obtained phosphorous phthalocyanines 49-73 were identified by mass spectroscopy and confirmed to have the structures shown in Table 8. Table 9 shows the results of mass spectrum analysis.
(実施例74)リンフタロシアニン74の製造
窒素雰囲気下、ピリジン10部に無金属フタロシアニン1を1部溶解させ、リン酸オキシブロミド15.7部を添加後、80℃で1時間攪拌を行った。次に、反応物を25℃まで冷却し、水200部を添加し、析出した固体をろ過後、水200部で洗浄を行った。その後、イオン交換水を200部添加し、2時間攪拌を行った。ろ過後、80℃で乾燥し、0.6部の表10に示すリンフタロシアニン74を得た。得られたリンフタロシアニン74の構造は、マススペクトルによって同定した。マススペクトルでは、m/z(positive)=1129.98(理論値1129.18)に分子イオンピークが検出され、表10に記載したリンフタロシアニン74の構造を有することを確認した。
(Example 74) Production of phosphorus phthalocyanine 74 Under a nitrogen atmosphere, 1 part of metal-free phthalocyanine 1 was dissolved in 10 parts of pyridine, 15.7 parts of phosphoric acid oxybromide was added, and the mixture was stirred at 80°C for 1 hour. Next, the reactant was cooled to 25° C., 200 parts of water was added, and the precipitated solid was filtered and washed with 200 parts of water. After that, 200 parts of ion-exchanged water was added and stirred for 2 hours. After filtration, it was dried at 80° C. to obtain 0.6 parts of phosphorus phthalocyanine 74 shown in Table 10. The structure of the obtained phosphorus phthalocyanine 74 was identified by mass spectroscopy. In the mass spectrum, a molecular ion peak was detected at m/z (positive)=1129.98 (theoretical value: 1129.18), confirming that the compound had the structure of phosphorus phthalocyanine 74 shown in Table 10.
(実施例75~77)リンフタロシアニン75~77の製造
実施例74で使用した無金属フタロシアニン1とイオン交換水を、表10に示す、無金属フタロシアニンとGで挙げた化合物に変更した以外は、実施例74と同様に製造して、表10に示すリンフタロシアニン75~77を得た。尚、それぞれ表10に示す、無金属フタロシアニンとGで挙げた化合物は、実施例74における無金属フタロシアニン1及びイオン交換水と同モル量使用した。得られたリンフタロシアニン75~77の構造は、マススペクトルによって同定し、表10に示した構造を有することを確認した。表11にマススペクトルの分析結果を示す。
(Examples 75 to 77) Production of phosphorus phthalocyanines 75 to 77 Except that the metal-free phthalocyanine 1 and ion-exchanged water used in Example 74 were changed to the metal-free phthalocyanine and compounds listed in G shown in Table 10, Phosphorus phthalocyanines 75 to 77 shown in Table 10 were obtained in the same manner as in Example 74. The metal-free phthalocyanine and the compound listed as G shown in Table 10 were used in the same molar amounts as the metal-free phthalocyanine 1 and ion-exchanged water in Example 74. The structures of the obtained phosphorus phthalocyanines 75-77 were identified by mass spectroscopy and confirmed to have the structures shown in Table 10. Table 11 shows the results of mass spectrum analysis.
(実施例78)リンフタロシアニン78の製造
窒素雰囲気下、ピリジン10部に無金属フタロシアニン1を1部溶解させ、リン酸オキシブロミド15.7部を添加後、80℃で1時間攪拌を行った。次に、反応物を25℃まで冷却し、水200部を添加し、析出した固体をろ過後、水200部で洗浄を行った。ジメチルスルホキシド150部に溶解させ、リン酸ジフェニル10部を添加後、90℃で6時間反応を行った。その後、反応物を25℃まで冷却し、水200部を添加し、析出した固体をろ過後、水200部で洗浄を行った。80℃で乾燥し、0.6部の表10に示すリンフタロシアニン78を得た。得られたリンフタロシアニン78の構造は、マススペクトルによって同定した。マススペクトルでは、m/z(positive)=1362.24(理論値1361.35)に分子イオンピークが検出され、表12に記載したリンフタロシアニン78の構造を有することを確認した。
(Example 78) Production of phosphorus phthalocyanine 78 Under a nitrogen atmosphere, 1 part of metal-free phthalocyanine 1 was dissolved in 10 parts of pyridine, 15.7 parts of phosphoric acid oxybromide was added, and the mixture was stirred at 80°C for 1 hour. Next, the reactant was cooled to 25° C., 200 parts of water was added, and the precipitated solid was filtered and washed with 200 parts of water. After dissolving in 150 parts of dimethyl sulfoxide and adding 10 parts of diphenyl phosphate, reaction was carried out at 90° C. for 6 hours. Thereafter, the reactant was cooled to 25° C., 200 parts of water was added, and the precipitated solid was filtered and washed with 200 parts of water. Drying at 80° C. gave 0.6 parts of phosphorus phthalocyanine 78 shown in Table 10. The structure of the obtained phosphorus phthalocyanine 78 was identified by mass spectroscopy. In the mass spectrum, a molecular ion peak was detected at m/z (positive)=1362.24 (theoretical value: 1361.35), confirming that the compound had the structure of phosphorus phthalocyanine 78 shown in Table 12.
(実施例79~82)リンフタロシアニン79~82の製造
実施例78で使用した無金属フタロシアニンとリン酸ジフェニルを、表12に示す、無金属フタロシアニンとHで挙げた化合物に変更した以外は、実施例78と同様に製造して、表12に示すリンフタロシアニン79~82を得た。尚、それぞれ表12に示す、無金属フタロシアニン及びHで挙げた化合物は、実施例78における無金属フタロシアニン及びリン酸ジフェニルと同モル量使用した。得られたリンフタロシアニン79~82の構造は、マススペクトルによって同定し、表12に示した構造を有することが確認された。表13にマススペクトルの分析結果を示す。
(実施例83)リンフタロシアニンを含む蛍光標識剤D-1の調整
リンフタロシアニン1を1質量部、両親媒性物質としてポリエチレングリコール(PEG)・ポリカプロラクトン(PCL)ブロック共重合体(シグマアルドリッチ社製、PEG分子量5000、PCL分子量5000)100質量部をアセトン20000質量部に溶解した。得られたアセトン溶液を25℃で撹拌下、水25000質量部を滴下した。さらに、25℃で12時間撹拌することでアセトンを留去した後、0.45μmナイロン製メンブレンフィルターでろ過して、リンフタロシアニン1がPEG-PCLミセル内に可溶化された分散体からなる蛍光標識剤D-1を作製した。
(Example 83) Preparation of fluorescent labeling agent D-1 containing phosphorous phthalocyanine 1 part by mass of phosphorous phthalocyanine 1, polyethylene glycol (PEG)/polycaprolactone (PCL) block copolymer (manufactured by Sigma-Aldrich Co., Ltd.) as an amphipathic substance , PEG molecular weight 5000, PCL molecular weight 5000) was dissolved in 20000 parts by weight of acetone. 25000 parts by mass of water was added dropwise to the obtained acetone solution while stirring at 25°C. Furthermore, after acetone was distilled off by stirring at 25 ° C. for 12 hours, it was filtered through a 0.45 μm nylon membrane filter, and the phosphor phthalocyanine 1 was solubilized in the PEG-PCL micelles. Agent D-1 was prepared.
(実施例84~164)リンフタロシアニンを含む蛍光標識剤D-2~D-82の調整
実施例83で使用したリンフタロシアニン1を、表14に示すリンフタロシアニンに変更した以外は、実施例83と同様に作製して、それぞれ対応する分散体D2~D82を得た。尚、リンフタロシアニンは、実施例83におけるリンフタロシアニン1と同モル量使用した。
(Examples 84 to 164) Preparation of phosphorous phthalocyanine-containing fluorescent labeling agents D-2 to D-82 Similarly, dispersions D2 to D82 corresponding to each were obtained. Phosphorus phthalocyanine was used in the same molar amount as phosphorus phthalocyanine 1 in Example 83.
(比較例1)蛍光標識材S-1の調整
1000nm以上の波長領域に蛍光を発する色素として、リンフタロシアニンを比較化合物であるシアニン色素IR1061(2,6-ジフェニル-4-[2-[2-クロロ-3-[2-(2,6-ジフェニル-1-チア-2,5-シクロヘキサジエン-4-イリデン)エチリデン]-1-シクロへキセニル]エテニル]-1-チアベンゼン-1-イウム・テトラフルオロボレート)に変更した以外は、実施例83と同様に作製し、分散体S-1を得た。尚、IR1061は、実施例83におけるリンフタロシアニン1と同モル量使用した。
(Comparative Example 1) Preparation of Fluorescent Labeling Material S-1 As a dye that emits fluorescence in a wavelength region of 1000 nm or more, phosphorus phthalocyanine was used as a comparative compound, cyanine dye IR1061 (2,6-diphenyl-4-[2-[2- Chloro-3-[2-(2,6-diphenyl-1-thia-2,5-cyclohexadien-4-ylidene)ethylidene]-1-cyclohexenyl]ethenyl]-1-thiabenzene-1-ium tetra Dispersion S-1 was obtained in the same manner as in Example 83, except that it was changed to fluoroborate). IR1061 was used in the same molar amount as phosphorus phthalocyanine 1 in Example 83.
(蛍光標識剤の蛍光強度評価)
HeLa細胞を96ウェルプレートに播種(5×103cell/well)し、10%Fetal Bovine Serum(FBS)および1%ペニシリン―ストレプトマイシンを含ませたMinimum Essential Media(MEM)を用いて、インキュベーター(37℃、5%CO2含有Air、加湿環境)内で24時間培養した。その後、培地を取り除き、実施例83~164、比較例1にて作製した各分散体を水で10倍希釈したものを添加し、インキュベーター内に24時間静置した後、リン酸緩衝食塩水(PBS)で洗浄した。In vivо蛍光イメージングシステム(島津製作所社製、SAI-1000)を用いて、蛍光強度評価を行った。分散体S-1の最大蛍光強度を1とした時の、各々の蛍光標識剤の蛍光強度を算出した。蛍光強度の相対値が2以上である場合、各リンフタロシアニンは蛍光標識剤としての特性が良好であるといえる。表15に蛍光強度評価結果を示す。
△:蛍光強度1以上、2未満(不良)
〇:蛍光強度2以上、4未満(良好)
◎:蛍光強度4以上(極めて良好)
(Evaluation of fluorescence intensity of fluorescent labeling agent)
HeLa cells were seeded in a 96-well plate (5 × 10 3 cells/well), and 10% Fetal Bovine Serum (FBS) and 1% penicillin-streptomycin-containing Minimum Essential Media (MEM) was used to incubate (37 °C, 5% CO2 -containing Air, humidified environment) for 24 hours. Thereafter, the medium was removed, and each dispersion prepared in Examples 83 to 164 and Comparative Example 1 was diluted 10-fold with water, added, left to stand for 24 hours in an incubator, and then phosphate-buffered saline ( PBS). Fluorescence intensity was evaluated using an in vivo fluorescence imaging system (SAI-1000 manufactured by Shimadzu Corporation). When the maximum fluorescence intensity of Dispersion S-1 is assumed to be 1, the fluorescence intensity of each fluorescent labeling agent was calculated. When the relative value of the fluorescence intensity is 2 or more, it can be said that each phosphorous phthalocyanine has good properties as a fluorescent labeling agent. Table 15 shows the fluorescence intensity evaluation results.
△: fluorescence intensity 1 or more, less than 2 (defective)
○: fluorescence intensity 2 or more, less than 4 (good)
◎: fluorescence intensity of 4 or more (extremely good)
(蛍光標識剤の耐光性評価)
作製した分散体D-1~D-82、S-1について、光安定性を評価するため、In vivо蛍光イメージングシステム(島津製作所社製、SAI-1000)を用いて30分間光照射し、光照射前後の吸収スペクトルを分光光度計(日立ハイテクノロジーズ社製、U-4100)を用いてそれぞれ測定した。光照射前の最大吸収波長の吸光度I0と光照射後の最大吸収波長の吸光度I1を記録し、I1/I0値を耐光性の指標とした。評価が〇であれば良好である。表11に耐光性評価結果を示す。
〇:I1/I0が0.9以上(良好)
×:I1/I0が0.9未満(不良)
(Evaluation of light resistance of fluorescent labeling agent)
For the prepared dispersions D-1 to D-82 and S-1, in order to evaluate the photostability, an in vivo fluorescence imaging system (manufactured by Shimadzu Corporation, SAI-1000) was used to irradiate light for 30 minutes. Absorption spectra before and after irradiation were measured using a spectrophotometer (U-4100, manufactured by Hitachi High-Technologies Corporation). The absorbance I0 at the maximum absorption wavelength before light irradiation and the absorbance I1 at the maximum absorption wavelength after light irradiation were recorded, and the I1 / I0 value was used as an index of light resistance. If the evaluation is 0, it is good. Table 11 shows the light resistance evaluation results.
○: I 1 /I 0 is 0.9 or more (good)
×: I 1 /I 0 is less than 0.9 (defective)
本発明のリンフタロシアニンを用いて作製した分散体D-1~D-82(実施例83164)は、いずれも1000nm以上の長波長領域に強い蛍光を発することが観察され、分散体S-1(比較例1)よりも蛍光強度、耐光性が良好であった。このことから、本発明のフタロシアニンは、優れた蛍光標識剤としての特性を有することが明らかとなった。 Dispersions D-1 to D-82 (Example 83164) prepared using the phosphorus phthalocyanine of the present invention were all observed to emit strong fluorescence in the long wavelength region of 1000 nm or longer. Fluorescence intensity and light resistance were better than those of Comparative Example 1). This demonstrates that the phthalocyanine of the present invention has excellent properties as a fluorescent labeling agent.
Claims (2)
一般式(1)
(式中、X1~X8は、それぞれ独立に、第16族元素を表す。R1~R8は、それぞれ独立に、置換または無置換の脂肪族炭化水素基、置換または無置換の芳香族炭化水素基を表す。R9~R12は、それぞれ独立に、置換または無置換の芳香族炭化水素環、置換または無置換の複素環を表す。
R13及びR14は、それぞれ独立に、水素原子、置換または無置換の脂肪族炭化水素基、-P(=O)R15R16、-C(=O)R17、-S(=O)2R18、-SiR19R20R21を表す。R15及びR16は、それぞれ独立に、水素原子、水酸基、置換もしくは無置換の脂肪族炭化水素基、置換もしくは無置換の芳香族炭化水素基、置換もしくは無置換のアルコキシル基、置換もしくは無置換のアリールオキシ基を表す。R17は、水素原子、置換もしくは無置換の脂肪族炭化水素基、置換もしくは無置換の芳香族炭化水素基を表す。R18は、水素原子、水酸基、置換もしくは無置換の脂肪族炭化水素基、置換もしくは無置換の芳香族炭化水素基を表す。R19~R21は、それぞれ独立に、置換もしくは無置換の脂肪族炭化水素基、置換もしくは無置換の芳香族炭化水素基を表す。Y1 -は、アニオンを表す。)
一般式(2)
(式中、X9~X16は、それぞれ独立に、第16族元素を表す。R22~R29は、それぞれ独立に、置換または無置換の脂肪族炭化水素基、置換または無置換の芳香族炭化水素基を表す。R30~R33は、それぞれ独立に、置換または無置換の芳香族炭化水素環、置換または無置換の複素環を表す。
R34は、水素原子、置換または無置換の脂肪族炭化水素基、-P(=O)R35R36、-C(=O)R37、-S(=O)2R38、-SiR39R40R41を表す。R35及びR36は、それぞれ独立に、水酸基、置換もしくは無置換の脂肪族炭化水素基、置換もしくは無置換の芳香族炭化水素基、置換もしくは無置換のアルコキシル基、置換もしくは無置換のアリールオキシ基を表す。R37は、水素原子、置換もしくは無置換の脂肪族炭化水素基、置換もしくは無置換の芳香族炭化水素基を表す。R38は、水素原子、水酸基、置換もしくは無置換の脂肪族炭化水素基、置換もしくは無置換の芳香族炭化水素基を表す。R39~R41は、それぞれ独立に、置換もしくは無置換の脂肪族炭化水素基、置換もしくは無置換の芳香族炭化水素基を表す。) A fluorescent labeling agent comprising a phosphorus phthalocyanine represented by the following general formula (1) or (2).
General formula (1)
(Wherein, X 1 to X 8 each independently represent a Group 16 element; R 1 to R 8 each independently represent a substituted or unsubstituted aliphatic hydrocarbon group, a substituted or unsubstituted aromatic R 9 to R 12 each independently represent a substituted or unsubstituted aromatic hydrocarbon ring or a substituted or unsubstituted heterocyclic ring.
R 13 and R 14 each independently represent a hydrogen atom, a substituted or unsubstituted aliphatic hydrocarbon group, -P(=O)R 15 R 16 , -C(=O)R 17 , -S(=O ) 2 R 18 , —SiR 19 R 20 R 21 . R 15 and R 16 each independently represent a hydrogen atom, a hydroxyl group, a substituted or unsubstituted aliphatic hydrocarbon group, a substituted or unsubstituted aromatic hydrocarbon group, a substituted or unsubstituted alkoxyl group, a substituted or unsubstituted represents an aryloxy group of R 17 represents a hydrogen atom, a substituted or unsubstituted aliphatic hydrocarbon group, or a substituted or unsubstituted aromatic hydrocarbon group. R 18 represents a hydrogen atom, a hydroxyl group, a substituted or unsubstituted aliphatic hydrocarbon group, or a substituted or unsubstituted aromatic hydrocarbon group. R 19 to R 21 each independently represent a substituted or unsubstituted aliphatic hydrocarbon group or a substituted or unsubstituted aromatic hydrocarbon group. Y 1 - represents an anion. )
general formula (2)
(In the formula, X 9 to X 16 each independently represent a Group 16 element; R 22 to R 29 each independently represent a substituted or unsubstituted aliphatic hydrocarbon group, a substituted or unsubstituted aromatic R 30 to R 33 each independently represent a substituted or unsubstituted aromatic hydrocarbon ring or a substituted or unsubstituted heterocyclic ring.
R 34 is a hydrogen atom, a substituted or unsubstituted aliphatic hydrocarbon group, -P(=O)R 35 R 36 , -C(=O)R 37 , -S(=O) 2 R 38 , -SiR 39 R 40 R 41 . R 35 and R 36 each independently represent a hydroxyl group, a substituted or unsubstituted aliphatic hydrocarbon group, a substituted or unsubstituted aromatic hydrocarbon group, a substituted or unsubstituted alkoxyl group, a substituted or unsubstituted aryloxy represents a group. R37 represents a hydrogen atom, a substituted or unsubstituted aliphatic hydrocarbon group, or a substituted or unsubstituted aromatic hydrocarbon group. R38 represents a hydrogen atom, a hydroxyl group, a substituted or unsubstituted aliphatic hydrocarbon group, or a substituted or unsubstituted aromatic hydrocarbon group. R 39 to R 41 each independently represent a substituted or unsubstituted aliphatic hydrocarbon group or a substituted or unsubstituted aromatic hydrocarbon group. )
一般式(1)
(式中、X1~X8は、それぞれ独立に、第16族元素を表す。R1~R8は、それぞれ独立に、置換または無置換の脂肪族炭化水素基、置換または無置換の芳香族炭化水素基を表す。R9~R12は、それぞれ独立に、置換または無置換の芳香族炭化水素環、置換または無置換の複素環を表す。R13及びR14は、それぞれ独立に、水素原子、置換または無置換の脂肪族炭化水素基、-P(=O)R15R16、-C(=O)R17、-S(=O)2R18、-SiR19R20R21を表す。R15及びR16は、それぞれ独立に、水素原子、水酸基、置換もしくは無置換の脂肪族炭化水素基、置換もしくは無置換の芳香族炭化水素基、置換もしくは無置換のアルコキシル基、置換もしくは無置換のアリールオキシ基を表す。R17は、水素原子、置換もしくは無置換の脂肪族炭化水素基、置換もしくは無置換の芳香族炭化水素基を表す。R18は、水素原子、水酸基、置換もしくは無置換の脂肪族炭化水素基、置換もしくは無置換の芳香族炭化水素基を表す。R19~R21は、それぞれ独立に、置換もしくは無置換の脂肪族炭化水素基、置換もしくは無置換の芳香族炭化水素基を表す。Y1 -は、アニオンを表す。)
一般式(2)
(式中、X9~X16は、それぞれ独立に、第16族元素を表す。R22~R29は、それぞれ独立に、置換または無置換の脂肪族炭化水素基、置換または無置換の芳香族炭化水素基を表す。R30~R33は、それぞれ独立に、置換または無置換の芳香族炭化水素環、置換または無置換の複素環を表す。R34は、水素原子、置換または無置換の脂肪族炭化水素基、-P(=O)R35R36、-C(=O)R37、-S(=O)2R38、-SiR39R40R41を表す。R35及びR36は、それぞれ独立に、水酸基、置換もしくは無置換の脂肪族炭化水素基、置換もしくは無置換の芳香族炭化水素基、置換もしくは無置換のアルコキシル基、置換もしくは無置換のアリールオキシ基を表す。R37は、水素原子、置換もしくは無置換の脂肪族炭化水素基、置換もしくは無置換の芳香族炭化水素基を表す。R38は、水素原子、水酸基、置換もしくは無置換の脂肪族炭化水素基、置換もしくは無置換の芳香族炭化水素基を表す。R39~R41は、それぞれ独立に、置換もしくは無置換の脂肪族炭化水素基、置換もしくは無置換の芳香族炭化水素基を表す。
Phosphorus phthalocyanine represented by the following general formula (1) or general formula (2).
General formula (1)
(Wherein, X 1 to X 8 each independently represent a Group 16 element; R 1 to R 8 each independently represent a substituted or unsubstituted aliphatic hydrocarbon group, a substituted or unsubstituted aromatic Represents an aromatic hydrocarbon group R 9 to R 12 each independently represents a substituted or unsubstituted aromatic hydrocarbon ring or a substituted or unsubstituted heterocyclic ring R 13 and R 14 each independently hydrogen atom, substituted or unsubstituted aliphatic hydrocarbon group, -P(=O)R 15 R 16 , -C(=O)R 17 , -S(=O) 2 R 18 , -SiR 19 R 20 R 21. R 15 and R 16 each independently represent a hydrogen atom, a hydroxyl group, a substituted or unsubstituted aliphatic hydrocarbon group, a substituted or unsubstituted aromatic hydrocarbon group, a substituted or unsubstituted alkoxyl group, represents a substituted or unsubstituted aryloxy group, R 17 represents a hydrogen atom, a substituted or unsubstituted aliphatic hydrocarbon group, or a substituted or unsubstituted aromatic hydrocarbon group, R 18 represents a hydrogen atom or a hydroxyl group , represents a substituted or unsubstituted aliphatic hydrocarbon group, or a substituted or unsubstituted aromatic hydrocarbon group, and each of R 19 to R 21 independently represents a substituted or unsubstituted aliphatic hydrocarbon group, a substituted or unsubstituted represents a substituted aromatic hydrocarbon group, and Y 1 - represents an anion.)
general formula (2)
(In the formula, X 9 to X 16 each independently represent a Group 16 element; R 22 to R 29 each independently represent a substituted or unsubstituted aliphatic hydrocarbon group, a substituted or unsubstituted aromatic each of R 30 to R 33 independently represents a substituted or unsubstituted aromatic hydrocarbon ring or a substituted or unsubstituted heterocyclic ring R 34 represents a hydrogen atom or a substituted or unsubstituted -P(=O)R 35 R 36 , -C(=O)R 37 , -S(=O) 2 R 38 , -SiR 39 R 40 R 41. R 35 and Each R 36 independently represents a hydroxyl group, a substituted or unsubstituted aliphatic hydrocarbon group, a substituted or unsubstituted aromatic hydrocarbon group, a substituted or unsubstituted alkoxyl group, or a substituted or unsubstituted aryloxy group. R 37 represents a hydrogen atom, a substituted or unsubstituted aliphatic hydrocarbon group or a substituted or unsubstituted aromatic hydrocarbon group, R 38 represents a hydrogen atom, a hydroxyl group or a substituted or unsubstituted aliphatic hydrocarbon R 39 to R 41 each independently represent a substituted or unsubstituted aliphatic hydrocarbon group or a substituted or unsubstituted aromatic hydrocarbon group.
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ZHOU, Yang et al.,Theranostics,2016年,6(5),688-697,DOI: 10.7150/thno.14555 |
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