JP7213019B2 - Blood uric acid level reducing agent and xanthine oxidase inhibitor - Google Patents
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Description
本発明は、アブラナ属植物又はその抽出物を有効成分として含有する血中尿酸値低減剤とキサンチンオキシダーゼ阻害剤に関する。 TECHNICAL FIELD The present invention relates to a blood uric acid level-lowering agent and a xanthine oxidase inhibitor containing a plant of the genus Brassica or an extract thereof as an active ingredient.
尿酸はプリン体の代謝産物であり、体内で産生された後に尿や便を通して排出される。生体においては、プリン体からの尿酸の産生と排出のバランスを取ることにより、体内のプリン体の量が一定になるように維持されている。しかし、遺伝的要因や環境要因などにより、そのバランスが崩れて体内の尿酸値が上昇することがあり、血中尿酸値が7.0mg/dLを超えると高尿酸血症と判定される(非特許文献1)。 Uric acid is a metabolite of purines and is excreted through urine and feces after being produced in the body. In living organisms, the amount of purines in the body is kept constant by balancing the production and excretion of uric acid from purines. However, genetic and environmental factors can disrupt this balance and increase the uric acid level in the body. Patent document 1).
血中尿酸値と疾患の関係については、血中尿酸値が7.0mg/dLを超えた高尿酸血症では痛風関節炎のリスクが高まること、血中尿酸値と慢性腎臓病(CKD)の発症や進展と関係すること、また血中尿酸値が上昇するにつれてメタボリックシンドロームの頻度が高くなる、などの報告がある(非特許文献1)。 Regarding the relationship between blood uric acid levels and diseases, hyperuricemia with blood uric acid levels exceeding 7.0 mg/dL increases the risk of gouty arthritis, and blood uric acid levels and the onset of chronic kidney disease (CKD). It has been reported that the frequency of metabolic syndrome increases as the blood uric acid level increases (Non-Patent Document 1).
高尿酸血症の治療剤としては、尿酸合成阻害、尿酸排泄促進、プリン体吸収抑制、等の作用を有するものが知られている。尿酸合成阻害剤として、キサンチンオキシダーゼ阻害剤が知られている。 As therapeutic agents for hyperuricemia, those having actions such as inhibition of uric acid synthesis, promotion of uric acid excretion, and inhibition of purine absorption are known. Xanthine oxidase inhibitors are known as uric acid synthesis inhibitors.
キサンチンオキシダーゼは体内における尿酸の生合成に関わる酵素であり、キサンチンからの尿酸の合成を担っている。そして、アロプリノールなどのキサンチンオキシダーゼ阻害剤が、尿酸値低減剤として高尿酸血症の治療に用いられている。しかし、アロプリノールを腎不全の患者に過剰投与すると、オキシプリノールの蓄積に関連した副作用の危険性が高まる可能性があるとされる(非特許文献1)。 Xanthine oxidase is an enzyme involved in the biosynthesis of uric acid in the body, and is responsible for the synthesis of uric acid from xanthine. Xanthine oxidase inhibitors such as allopurinol are used as uric acid level-lowering agents for the treatment of hyperuricemia. However, overdosing of allopurinol to patients with renal failure may increase the risk of side effects associated with oxypurinol accumulation (Non-Patent Document 1).
高尿酸血症や痛風の予防や改善を目的とする場合、日常生活において長期間手軽に摂取できる尿酸値低減剤が好ましい。例えば、天然物由来の有効成分を含有する尿酸値低減剤が好適と考えられる。これまで、プリン体の吸収抑制作用を有する天然物として、キトサン(特許文献1)、水溶性食物繊維(特許文献2)、活性炭(特許文献3)、ε-ポリリジン(特許文献4)等が報告されている。また、キサンチンオキシダーゼ阻害活性を有する天然物として、ブドウ抽出物(特許文献5)、エラグ酸(特許文献6)、エピガロカテキンガレート(特許文献7)等が報告されている。さらに、尿酸の排泄促進作用を有する天然物として、シークヮーサー果皮(特許文献8)が報告されている。 For the purpose of preventing or improving hyperuricemia or gout, a uric acid level-lowering agent that can be easily taken in daily life for a long period of time is preferable. For example, a uric acid level-lowering agent containing an active ingredient derived from a natural product is considered suitable. So far, chitosan (Patent Document 1), water-soluble dietary fiber (Patent Document 2), activated carbon (Patent Document 3), ε-polylysine (Patent Document 4), etc. have been reported as natural products having purine absorption inhibitory action. It is Grape extract (Patent Document 5), ellagic acid (Patent Document 6), epigallocatechin gallate (Patent Document 7), etc. have been reported as natural products having xanthine oxidase inhibitory activity. Furthermore, shikuwasa pericarp (Patent Document 8) has been reported as a natural product having a uric acid excretion promoting effect.
上記したように、高尿酸血症・痛風の予防や改善のために、安全性に優れ、日常生活において長期間手軽に摂取できる血中尿酸値低減剤が求められている。そこで本発明は、新たな天然物由来の有効成分を含有し、高尿酸血症・痛風の予防や改善に有用な剤を提供することを目的とする。 As described above, in order to prevent and improve hyperuricemia and gout, there is a demand for a blood uric acid level-lowering agent that is excellent in safety and can be easily taken in daily life for a long period of time. Accordingly, an object of the present invention is to provide an agent containing a new active ingredient derived from a natural product and useful for preventing or improving hyperuricemia/gout.
本発明者らは、アブラナ属植物が有する生理作用について詳細に検討した。その結果、アブラナ属植物の一種であるケール又はその抽出物が血中尿酸値低減作用を有すること、さらに、ケール又はその抽出物が高いキサンチンオキシダーゼ阻害活性を有することを見出し、本発明を完成した。 The present inventors have studied in detail the physiological effects of plants belonging to the genus Brassica. As a result, the present inventors have found that kale, which is a kind of plant belonging to the genus Brassica, or an extract thereof has a blood uric acid level-lowering effect, and that kale or an extract thereof has a high xanthine oxidase inhibitory activity, thereby completing the present invention. .
本発明の1つの様相は、アブラナ属植物又はアブラナ属植物の抽出物を有効成分として含有する血中尿酸値低減剤である。 One aspect of the present invention is a blood uric acid level-lowering agent containing a plant of the genus Brassica or an extract of a plant of the genus Brassica as an active ingredient.
好ましくは、前記アブラナ属植物がケールである。 Preferably, the Brassica plant is kale.
好ましくは、前記血中尿酸値低減剤は経口投与されるものである。 Preferably, the blood uric acid level-lowering agent is orally administered.
好ましくは、前記血中尿酸値低減剤は食品組成物である。 Preferably, the blood uric acid level-lowering agent is a food composition.
本発明の他の様相は、アブラナ属植物又はアブラナ属植物の抽出物を有効成分として含有するキサンチンオキシダーゼ阻害剤である。 Another aspect of the present invention is a xanthine oxidase inhibitor containing a Brassica plant or an extract of a Brassica plant as an active ingredient.
好ましくは、前記アブラナ属植物がケールである。 Preferably, the Brassica plant is kale.
好ましくは、前記キサンチンオキシダーゼ阻害剤は経口投与されるものである。 Preferably, said xanthine oxidase inhibitor is orally administered.
好ましくは、前記キサンチンオキシダーゼ阻害剤は食品組成物である。 Preferably, said xanthine oxidase inhibitor is a food composition.
好ましくは、前記キサンチンオキシダーゼ阻害剤は高尿酸血症又は痛風の予防又は改善に用いられる。 Preferably, the xanthine oxidase inhibitor is used to prevent or improve hyperuricemia or gout.
本発明によれば、天然物由来の有効成分を含有し、安全性に優れた血中尿酸値低減剤とキサンチンオキシダーゼ阻害剤を提供することができる。 INDUSTRIAL APPLICABILITY According to the present invention, it is possible to provide a blood uric acid level-lowering agent and a xanthine oxidase inhibitor that contain active ingredients derived from natural products and are excellent in safety.
本発明の血中尿酸値低減剤とキサンチンオキシダーゼ阻害剤(以下、本発明の剤と総称することがある)は、アブラナ属植物又はアブラナ属植物の抽出物を有効成分として含有するものである。 The blood uric acid level-lowering agent and the xanthine oxidase inhibitor of the present invention (hereinafter sometimes collectively referred to as the agent of the present invention) contain a plant of the genus Brassica or an extract of a plant of the genus Brassica as an active ingredient.
本発明におけるアブラナ属植物とは、アブラナ科(Brassicaceae)アブラナ属(Brassica)に属する植物を指す。アブラナ属植物の具体例としては、ケール、ブロッコリー、ブロッコリースプラウト、キャベツ、白菜、カリフラワー、メキャベツ、タイサイ、ミズナ、スグキナ、小松菜、からし菜、かぶ、等が挙げられる。これらのアブラナ属植物については、1種のみ用いてもよいし、2種以上を併用してもよい。このうち、本発明ではアブラナ属植物として、少なくとも、ケールを用いることが好ましい。 The Brassica plant in the present invention refers to a plant belonging to the Brassicaceae Brassica genus. Specific examples of plants of the genus Brassica include kale, broccoli, broccoli sprouts, cabbage, Chinese cabbage, cauliflower, Brussels sprouts, Taisai, mizuna, sugukina, Japanese mustard spinach, mustard greens, and turnips. These plants of the genus Brassica may be used alone, or two or more of them may be used in combination. Among these, it is preferable to use at least kale as the plant belonging to the genus Brassica in the present invention.
本発明で用いるアブラナ属植物の植物体部位としては特に限定されず、例えば、葉、茎、根、種子、花蕾等を挙げることができる。これらの植物体部位については、1種のみ用いてもよいし、2種以上を併用してもよい。本発明では葉と茎が好ましく用いられ、葉が特に好ましく用いられる。 The plant parts of the Brassica plant used in the present invention are not particularly limited, and examples thereof include leaves, stems, roots, seeds, and flower buds. These plant body parts may be used alone or in combination of two or more. In the present invention, leaves and stems are preferably used, and leaves are particularly preferably used.
本発明の剤に含まれるアブラナ属植物の形態としては特に限定されず、例えば、植物体部位(葉、茎など)の乾燥物(自然乾燥物、熱乾燥物、凍結乾燥物を含む)及びその粉砕物、を挙げることができる。その他、前記植物体部位を圧搾して得られる圧搾汁及び圧搾かす(搾りかす)を挙げることができる。これらの1又は2以上の形態からなるアブラナ属植物が、本発明の剤の有効成分となり得る。 The form of the Brassica plant contained in the agent of the present invention is not particularly limited. pulverized products can be mentioned. In addition, squeezed juice and squeezed lees obtained by squeezing the plant parts can be mentioned. A Brassica plant having one or more of these forms can serve as an active ingredient of the agent of the present invention.
本発明の剤に含まれるアブラナ属植物の抽出物としては特に限定されず、公知の抽出方法を用いて得ることができる。抽出対象としては、植物体部位そのものの他、前記した植物体部位の乾燥物や粉砕物が挙げられる。抽出に用いる溶媒は、水系溶媒でもよいし、非水系溶媒でもよい。抽出方法としては、浸漬、煎出、浸出、等が挙げられる。植物体部位等から抽出した一次抽出物をさらに精製した精製物を、有効成分たるアブラナ属植物の抽出物として用いてもよい。精製操作としては、脱塩、塩析、再結晶、クロマトグラフィー、膜分離、等が挙げられる。 The extract of the Brassica plant contained in the agent of the present invention is not particularly limited, and can be obtained using a known extraction method. Examples of the object to be extracted include the plant body part itself, as well as the dried and pulverized plant body parts described above. The solvent used for extraction may be an aqueous solvent or a non-aqueous solvent. Extraction methods include immersion, decoction, leaching, and the like. A purified product obtained by further purifying a primary extract extracted from a plant body part or the like may be used as an extract of a plant of the genus Brassica as an active ingredient. Purification operations include desalting, salting out, recrystallization, chromatography, membrane separation, and the like.
本発明の剤の投与経路としては、経口投与が代表的である。その他、非経口投与の例としては、経皮投与が挙げられる。その他、静脈内、皮下、筋肉、腹腔内、脳室内、等の各投与経路が挙げられる。 Oral administration is typical as the administration route of the agent of the present invention. Other examples of parenteral administration include transdermal administration. Other routes of administration include intravenous, subcutaneous, intramuscular, intraperitoneal, intracerebroventricular, and the like.
本発明の剤の投与量については、対象疾患等(例えば、高尿酸血症・痛風)、投与目的(例えば、予防か改善か)、有効成分の種類、投与経路、投与対象者の年齢や体重、等に応じて適宜設定することができる。高尿酸血症・痛風の予防を目的とする場合には、例えば、本発明の剤を日常的かつ継続的に経口摂取することが好ましい。アブラナ属植物は食用として広く用いられているものが多く、食経験が豊富で安全性に優れている。そのため、本発明の剤は長期間継続して摂取するのに適している。 Regarding the dosage of the agent of the present invention, the target disease etc. (e.g., hyperuricemia, gout), administration purpose (e.g., prevention or improvement), type of active ingredient, administration route, age and weight of the subject of administration , etc., can be set as appropriate. For the purpose of preventing hyperuricemia and gout, for example, it is preferable to orally ingest the agent of the present invention on a daily and continuous basis. Many plants of the genus Brassica are widely used as food, and have a wide range of food experiences and are excellent in safety. Therefore, the agent of the present invention is suitable for long-term continuous ingestion.
一例として、成人男性(体重60kg)の場合には、1日あたり、ケールの葉290g~830g相当、好ましく350g~750g相当、より好ましくは450g~650g相当が摂取されるように、継続的に本発明の剤を摂取すればよい。これにより、健常人の場合は高尿酸血症・痛風の予防効果が期待できる。また、高尿酸血症・痛風を発症しているか兆候がある者の場合には、血中尿酸値の上昇が抑えられ、高尿酸血症・痛風の改善効果が期待できる。
なお、動物実験で得られた用量データから、ヒト等価用量(HED)を算出することができる。
As an example, in the case of an adult male (
The human equivalent dose (HED) can be calculated from dose data obtained from animal experiments.
本発明の剤におけるアブラナ属植物又はアブラナ属植物の抽出物の含有量については、前記した、対象疾患等(例えば、高尿酸血症・痛風)、投与目的(例えば、予防か改善か)、有効成分の種類、投与経路、投与対象者の年齢や体重、等に応じて適宜設定することができる。本発明の剤は、アブラナ属植物の植物体部位の前記乾燥物や粉砕物からなるものであってもよい。 Regarding the content of the Brassica plant or Brassica plant extract in the agent of the present invention, the above-mentioned target diseases (e.g., hyperuricemia/gout), purpose of administration (e.g., prevention or improvement), efficacy It can be appropriately set according to the type of component, administration route, age and weight of the subject of administration, and the like. The agent of the present invention may consist of the dried or pulverized plant parts of Brassica plants.
本発明の剤は、例えば、医薬組成物、食品組成物、又は化粧品用組成物であり得る。好ましい実施形態では、本発明の剤は食品組成物である。 The agent of the present invention can be, for example, a pharmaceutical composition, a food composition, or a cosmetic composition. In a preferred embodiment, the agent of the invention is a food composition.
食品組成物の例としては各種の加工食品が挙げられ、さらに、健康食品、機能性食品、健康補助食品、栄養機能食品、特別用途食品、機能性表示食品、特定保健用食品、病者用食品等の健康食品、が含まれる。その他、動物用サプリメントも含まれる。
本発明の剤を、他の飲食品に添加して機能性を付与する添加剤として用いることもできる。すなわち、本発明の剤を任意の飲食品に添加することにより、血中尿酸値低減効果やキサンチンオキシダーゼ阻害効果を付与することができる。この場合の添加対象としては特に限定はなく、全ての飲食品を対象とすることができる。
Examples of food compositions include various processed foods, health foods, functional foods, health supplements, nutritional functional foods, foods for special dietary uses, foods with function claims, foods for specified health uses, and foods for the sick. and other health foods. Others include animal supplements.
The agent of the present invention can also be used as an additive to add functionality to other foods and drinks. That is, by adding the agent of the present invention to any food or drink, the blood uric acid level reducing effect and the xanthine oxidase inhibitory effect can be imparted. In this case, the addition target is not particularly limited, and all food and drink can be targeted.
本発明の剤は、液体、半固体、固体のいずれの形態でもよい。医薬組成物とする場合の経口投与用の剤形としては、散剤、顆粒剤、細粒剤、錠剤、カプセル剤、シロップ剤、ドロップ剤、等が挙げられる。サプリメント等の食品組成物についても同様である。 The agent of the present invention may be in liquid, semi-solid or solid form. Dosage forms for oral administration in the case of pharmaceutical compositions include powders, granules, fine granules, tablets, capsules, syrups, drops, and the like. The same applies to food compositions such as supplements.
本発明の剤には、その性能を損なわない範囲内において、他の成分をさらに含有させてもよい。例えば、医薬品、食品、化粧品等に添加し得る各種の担体や基剤をさらに含有させてもよい。具体的には、賦形剤、安定化剤、結合剤、崩壊剤、溶解補助剤、張化剤、緩衝剤、等をさらに含有させてもよい。また、食品組成物とする場合には、糖類(ショ糖、果糖、乳糖、糖アルコールなど)、アミノ酸類、酸類(クエン酸、酒石酸など)、ビタミン類(ビタミンCなど)、増粘剤、色素、香料、等をさらに含有させてもよい。 The agent of the present invention may further contain other ingredients within the range that does not impair its performance. For example, various carriers and bases that can be added to pharmaceuticals, foods, cosmetics and the like may be further included. Specifically, excipients, stabilizers, binders, disintegrants, solubilizers, tonicity agents, buffers, and the like may be further contained. In the case of food compositions, sugars (sucrose, fructose, lactose, sugar alcohols, etc.), amino acids, acids (citric acid, tartaric acid, etc.), vitamins (vitamin C, etc.), thickeners, pigments , fragrance, etc. may be further included.
以下、実施例をもって本発明をさらに具体的に説明するが、本発明はこれらの実施例に限定されない。 EXAMPLES The present invention will be described in more detail with reference to examples below, but the present invention is not limited to these examples.
本実施例では、ケールを摂取させたラットにおける血中尿酸値の変化を調べた。 In this example, changes in blood uric acid levels in rats fed with kale were investigated.
(1)試験方法
Wisterラット(6週齢)を、コントロール群5匹とケール投与群5匹の2群に群分けを行った。2群とも予備飼育として標準食(AIN93G)の自由摂取下で1週間飼育を行った後に、試験飼料としてコントロール群には高尿酸誘導食を、ケール投与群にはケール(商品名「こいあおな」(登録商標)、日本製粉株式会社)の葉の乾燥粉末を添加した高尿酸誘導食(高尿酸誘導食+ケール)を自由摂取させた。
各群に投与した飼料の栄養成分を表1に示す。すなわち、各飼料の栄養成分は、ほぼ同等であった。
(1) Test method Wister rats (6 weeks old) were divided into two groups, a control group of 5 rats and a kale-administered group of 5 rats. Both groups were preliminarily fed with a standard diet (AIN93G) for 1 week. (registered trademark), Nippon Flour Mills Co., Ltd.).
Table 1 shows the nutritional components of the feed administered to each group. That is, the nutritional components of each feed were almost the same.
各飼料投与から0、1、4、7、10、13日後に採血し、血清を採取した。除タンパク処理として、20μLの血清に200μLの0.3mol/Lの過塩素酸を加えた。氷上で30分静置した後、10000rpmで10分遠心し、上清を回収した。200μLの上清に同量の0.2mol/Lリン酸水素二ナトリウム水溶液を加え、C18逆相カラムを用いたHPLCに供した。 Blood was collected 0, 1, 4, 7, 10 and 13 days after administration of each feed, and serum was collected. For deproteinization, 200 μL of 0.3 mol/L perchloric acid was added to 20 μL of serum. After standing on ice for 30 minutes, it was centrifuged at 10000 rpm for 10 minutes and the supernatant was recovered. The same amount of 0.2 mol/L disodium hydrogen phosphate aqueous solution was added to 200 μL of the supernatant, and subjected to HPLC using a C18 reverse phase column.
<HPLC条件>
・カラム:Inertsil ODS-3、粒子径4μm、内径4.6mm、長さ250mm(ジーエルサイエンス社)
・溶離液:A:74mM リン酸バッファー(pH2.2)、B:メタノール
A:B=98:2
・カラム温度:40℃
・検出波長:284nm
<HPLC conditions>
・Column: Inertsil ODS-3,
・ Eluent: A: 74 mM phosphate buffer (pH 2.2), B: methanol
A:B=98:2
・Column temperature: 40°C
・Detection wavelength: 284 nm
(2)結果
結果を図1、図2に示す。図1は血清中尿酸値の変化を表すグラフであり、縦軸は血清中尿酸値変化量(mg/dL)、横軸は飼育日数(日)である。○はケール投与群、■はコントロール群であり、各プロットとも平均値±標準誤差で表してある。図2は投与後10日の血清中尿酸値を表すグラフである。
図1、図2に示すように、ケール投与群(高尿酸誘導食+ケール)はコントロール群(高尿酸誘導食)に比べて、1日、10日、13日後において有意に低い値を示した(Mann-WhitneyのU検定にて、1日目と13日目:p<0.05、10日目:p<0.01)。以上のことから、ケールの植物体部位が血中尿酸値低減効果を有することが明らかとなった。
(2) Results Results are shown in FIGS. FIG. 1 is a graph showing changes in serum uric acid levels, where the vertical axis represents changes in serum uric acid levels (mg/dL), and the horizontal axis represents the number of days of breeding (days). ◯ indicates the kale-administered group, and ▪ indicates the control group. FIG. 2 is a graph showing serum
As shown in FIGS. 1 and 2, the kale-administered group (hyperuric acid-inducing diet + kale) showed significantly lower values after 1, 10, and 13 days than the control group (high-uric acid-inducing diet). (Mann-Whitney U test,
本実施例では、ケール抽出物が有するキサンチンオキシダーゼ阻害活性を調べた。 In this example, the xanthine oxidase inhibitory activity of the kale extract was examined.
(1)ケール抽出物の調製
ケールの葉を凍結乾燥し、ケール凍結乾燥粉末を得た。100℃で30分加熱したケール凍結乾燥粉末2gに水を20mL加え、1時間振とうした。さらにヘキサンを20mL加えて1時間振とうした後、遠心分離を行い、水層とヘキサン層に分離した。水層を採取し、終濃度90%となるようにエタノールを加えてエタノール沈殿を行った。遠心分離して上清を回収して乾固し、水に溶解した。この溶解液をC18固相抽出カラムに通し、吸着されずに出てきたフロースルー液を乾固し、ケール水抽出画分(ケール抽出物)を得た。下記試験に供するサンプルとして、10mg/mL、100mg/mL、500mg/mLの3種類の濃度のサンプルを調製した。
(1) Preparation of Kale Extract Kale leaves were freeze-dried to obtain freeze-dried kale powder. 20 mL of water was added to 2 g of freeze-dried kale powder heated at 100° C. for 30 minutes, and the mixture was shaken for 1 hour. After adding 20 mL of hexane and shaking for 1 hour, centrifugation was performed to separate the aqueous layer and the hexane layer. The aqueous layer was collected, ethanol was added to the final concentration of 90%, and ethanol precipitation was performed. After centrifugation, the supernatant was recovered, dried and dissolved in water. This solution was passed through a C18 solid-phase extraction column, and the flow-through liquid that came out without being adsorbed was dried to obtain an aqueous kale extract (kale extract). Samples with three concentrations of 10 mg/mL, 100 mg/mL, and 500 mg/mL were prepared as samples to be subjected to the following tests.
(2)試験方法
720μLの0.1Mリン酸カリウムバッファー(pH7.5)、352μLの精製水、48μLのサンプルを混合した。さらに0.1Mリン酸カリウムバッファー(pH7.5)に溶解した0.04unit/mL牛ミルク由来キサンチンオキシダーゼ80μLを加え、37℃で10分間インキュベートした。0.1mMキサンチンを1200μL加え、37℃で30分インキュベートし酵素反応を行った。200μLの1N塩酸を加え、反応を停止させた。反応液を実施例1と同条件のHPLCに供し、尿酸値を測定した。キサンチンオキシダーゼ阻害活性は、水(コントロール)を添加した場合に生成した尿酸を100としたときの、サンプル(ケール水抽出画分)を添加した場合に生成した尿酸の割合で評価した。同時に、ケール水抽出画分に代えてアロプリノール(公知のキサンチンオキシダーゼ阻害剤)を用いて同様の操作を行い、反応系が正常に機能していることを確認した。
(2) Test method 720 µL of 0.1 M potassium phosphate buffer (pH 7.5), 352 µL of purified water, and 48 µL of sample were mixed. Further, 80 μL of 0.04 unit/mL bovine milk-derived xanthine oxidase dissolved in 0.1 M potassium phosphate buffer (pH 7.5) was added and incubated at 37° C. for 10 minutes. 1200 μL of 0.1 mM xanthine was added and incubated at 37° C. for 30 minutes for enzymatic reaction. 200 μL of 1N hydrochloric acid was added to stop the reaction. The reaction solution was subjected to HPLC under the same conditions as in Example 1, and the uric acid level was measured. The xanthine oxidase inhibitory activity was evaluated by the ratio of uric acid produced when the sample (kale water extract fraction) was added to the uric acid produced when water (control) was added as 100. At the same time, the same procedure was performed using allopurinol (a known xanthine oxidase inhibitor) in place of the aqueous kale extract, and it was confirmed that the reaction system functioned normally.
(3)結果
図3に結果を示す。図3の縦軸はキサンチンオキシダーゼ相対活性(%)を表す。すなわち、ケール水抽出画分にキサンチンオキシダーゼ阻害活性が認められ、さらに濃度依存性が認められた。以上のことから、ケールの植物体部位がキサンチンオキシダーゼ阻害作用を有することが明らかとなった。
(3) Results The results are shown in FIG. The vertical axis in FIG. 3 represents xanthine oxidase relative activity (%). That is, xanthine oxidase inhibitory activity was observed in the water-extracted kale fraction, and concentration dependence was also observed. From the above, it was clarified that the plant parts of kale have xanthine oxidase inhibitory activity.
Claims (4)
ケールの葉の凍結乾燥粉末を100℃で30分加熱した後、水を加えて1時間振とうし、さらにヘキサンを加えて振とうし、遠心分離を行った後の水層を採取し、
採取した前記水層に、終濃度90%となるようにエタノールを加えてエタノール沈殿を行って、上清を回収し、
回収した前記上清をC18固相抽出カラムに通し、吸着しないフロースルー液をケール水抽出画分として取得し、
前記ケール水抽出画分を前記ケールの抽出物として用いる、
キサンチンオキシダーゼ阻害剤の製造方法。 A method for producing a xanthine oxidase inhibitor containing a kale extract as an active ingredient, comprising:
After heating the freeze-dried powder of kale leaves at 100° C. for 30 minutes, water was added and the mixture was shaken for 1 hour. ,
Ethanol is added to the collected aqueous layer so that the final concentration is 90%, ethanol precipitation is performed, and the supernatant is recovered,
The collected supernatant is passed through a C18 solid-phase extraction column to obtain a non-adsorbed flow-through liquid as a kale water extraction fraction,
using the kale water extract fraction as the kale extract;
A method for producing a xanthine oxidase inhibitor.
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松仁会医学誌, 2000, Vol.39 No.2, p.159-163 |
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