JP7207394B2 - 微小粒子の吸引条件の最適化方法、微小粒子分取用装置、微小粒子分取用システム及び微小粒子分取用プログラム - Google Patents
微小粒子の吸引条件の最適化方法、微小粒子分取用装置、微小粒子分取用システム及び微小粒子分取用プログラム Download PDFInfo
- Publication number
- JP7207394B2 JP7207394B2 JP2020502874A JP2020502874A JP7207394B2 JP 7207394 B2 JP7207394 B2 JP 7207394B2 JP 2020502874 A JP2020502874 A JP 2020502874A JP 2020502874 A JP2020502874 A JP 2020502874A JP 7207394 B2 JP7207394 B2 JP 7207394B2
- Authority
- JP
- Japan
- Prior art keywords
- microparticles
- velocity
- microparticle
- adjustment
- suction
- Prior art date
- Legal status (The legal status is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the status listed.)
- Active
Links
- 239000011859 microparticle Substances 0.000 title claims description 709
- 238000000034 method Methods 0.000 title claims description 166
- 238000005194 fractionation Methods 0.000 title claims description 112
- 239000007788 liquid Substances 0.000 claims description 200
- 239000002245 particle Substances 0.000 claims description 166
- 239000010419 fine particle Substances 0.000 claims description 82
- 230000001965 increasing effect Effects 0.000 claims description 25
- 230000003247 decreasing effect Effects 0.000 claims description 18
- 239000011325 microbead Substances 0.000 claims description 16
- 238000009826 distribution Methods 0.000 claims description 6
- 230000003750 conditioning effect Effects 0.000 claims description 5
- 239000000523 sample Substances 0.000 description 134
- 238000005516 engineering process Methods 0.000 description 63
- 238000001514 detection method Methods 0.000 description 59
- 230000008569 process Effects 0.000 description 32
- 238000005457 optimization Methods 0.000 description 24
- 230000003287 optical effect Effects 0.000 description 14
- 238000010586 diagram Methods 0.000 description 13
- 239000012530 fluid Substances 0.000 description 11
- 210000004027 cell Anatomy 0.000 description 7
- 238000000926 separation method Methods 0.000 description 7
- 230000007423 decrease Effects 0.000 description 6
- 230000005284 excitation Effects 0.000 description 6
- 238000012545 processing Methods 0.000 description 6
- 230000009467 reduction Effects 0.000 description 6
- 230000008859 change Effects 0.000 description 5
- 239000000463 material Substances 0.000 description 5
- 239000000758 substrate Substances 0.000 description 5
- 239000002699 waste material Substances 0.000 description 5
- -1 polypropylene Polymers 0.000 description 4
- 238000004458 analytical method Methods 0.000 description 3
- 239000011324 bead Substances 0.000 description 3
- 230000000694 effects Effects 0.000 description 3
- 230000006870 function Effects 0.000 description 3
- 230000001678 irradiating effect Effects 0.000 description 3
- 244000005700 microbiome Species 0.000 description 3
- 229920003229 poly(methyl methacrylate) Polymers 0.000 description 3
- 239000004926 polymethyl methacrylate Substances 0.000 description 3
- 239000012488 sample solution Substances 0.000 description 3
- 239000000126 substance Substances 0.000 description 3
- 238000012546 transfer Methods 0.000 description 3
- 229920000089 Cyclic olefin copolymer Polymers 0.000 description 2
- 239000004743 Polypropylene Substances 0.000 description 2
- 239000004793 Polystyrene Substances 0.000 description 2
- VYPSYNLAJGMNEJ-UHFFFAOYSA-N Silicium dioxide Chemical compound O=[Si]=O VYPSYNLAJGMNEJ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 238000011161 development Methods 0.000 description 2
- 239000004205 dimethyl polysiloxane Substances 0.000 description 2
- 238000001917 fluorescence detection Methods 0.000 description 2
- 239000011521 glass Substances 0.000 description 2
- 238000005286 illumination Methods 0.000 description 2
- 239000002502 liposome Substances 0.000 description 2
- 239000003550 marker Substances 0.000 description 2
- 229910052751 metal Inorganic materials 0.000 description 2
- 239000002184 metal Substances 0.000 description 2
- 210000003463 organelle Anatomy 0.000 description 2
- 229920000435 poly(dimethylsiloxane) Polymers 0.000 description 2
- 229920000515 polycarbonate Polymers 0.000 description 2
- 239000004417 polycarbonate Substances 0.000 description 2
- 229920001155 polypropylene Polymers 0.000 description 2
- 229920002223 polystyrene Polymers 0.000 description 2
- CHRJZRDFSQHIFI-UHFFFAOYSA-N 1,2-bis(ethenyl)benzene;styrene Chemical compound C=CC1=CC=CC=C1.C=CC1=CC=CC=C1C=C CHRJZRDFSQHIFI-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 241000894006 Bacteria Species 0.000 description 1
- 241000196324 Embryophyta Species 0.000 description 1
- 241000588724 Escherichia coli Species 0.000 description 1
- 241000233866 Fungi Species 0.000 description 1
- 108091005461 Nucleic proteins Proteins 0.000 description 1
- 239000004698 Polyethylene Substances 0.000 description 1
- 240000004808 Saccharomyces cerevisiae Species 0.000 description 1
- 241000723873 Tobacco mosaic virus Species 0.000 description 1
- 241000700605 Viruses Species 0.000 description 1
- 229910052782 aluminium Inorganic materials 0.000 description 1
- XAGFODPZIPBFFR-UHFFFAOYSA-N aluminium Chemical compound [Al] XAGFODPZIPBFFR-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 210000004102 animal cell Anatomy 0.000 description 1
- FFBHFFJDDLITSX-UHFFFAOYSA-N benzyl N-[2-hydroxy-4-(3-oxomorpholin-4-yl)phenyl]carbamate Chemical compound OC1=C(NC(=O)OCC2=CC=CC=C2)C=CC(=C1)N1CCOCC1=O FFBHFFJDDLITSX-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 210000000601 blood cell Anatomy 0.000 description 1
- 238000004364 calculation method Methods 0.000 description 1
- 238000006243 chemical reaction Methods 0.000 description 1
- 210000000349 chromosome Anatomy 0.000 description 1
- 238000004891 communication Methods 0.000 description 1
- 238000011109 contamination Methods 0.000 description 1
- 238000012937 correction Methods 0.000 description 1
- 238000007872 degassing Methods 0.000 description 1
- 230000006866 deterioration Effects 0.000 description 1
- 230000002708 enhancing effect Effects 0.000 description 1
- 239000007850 fluorescent dye Substances 0.000 description 1
- 239000007863 gel particle Substances 0.000 description 1
- PCHJSUWPFVWCPO-UHFFFAOYSA-N gold Chemical compound [Au] PCHJSUWPFVWCPO-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 239000004816 latex Substances 0.000 description 1
- 229920000126 latex Polymers 0.000 description 1
- 229920002521 macromolecule Polymers 0.000 description 1
- 239000000696 magnetic material Substances 0.000 description 1
- 238000004519 manufacturing process Methods 0.000 description 1
- 210000003470 mitochondria Anatomy 0.000 description 1
- 238000012986 modification Methods 0.000 description 1
- 230000004048 modification Effects 0.000 description 1
- 238000000465 moulding Methods 0.000 description 1
- 102000039446 nucleic acids Human genes 0.000 description 1
- 108020004707 nucleic acids Proteins 0.000 description 1
- 150000007523 nucleic acids Chemical class 0.000 description 1
- 229920000573 polyethylene Polymers 0.000 description 1
- 238000002360 preparation method Methods 0.000 description 1
- 102000004169 proteins and genes Human genes 0.000 description 1
- 238000000746 purification Methods 0.000 description 1
- 210000003705 ribosome Anatomy 0.000 description 1
- 239000010703 silicon Substances 0.000 description 1
- 229910052710 silicon Inorganic materials 0.000 description 1
- 239000000377 silicon dioxide Substances 0.000 description 1
- 238000010408 sweeping Methods 0.000 description 1
- 238000012795 verification Methods 0.000 description 1
Images
Classifications
-
- G—PHYSICS
- G01—MEASURING; TESTING
- G01N—INVESTIGATING OR ANALYSING MATERIALS BY DETERMINING THEIR CHEMICAL OR PHYSICAL PROPERTIES
- G01N15/00—Investigating characteristics of particles; Investigating permeability, pore-volume or surface-area of porous materials
- G01N15/10—Investigating individual particles
- G01N15/14—Optical investigation techniques, e.g. flow cytometry
- G01N15/1484—Optical investigation techniques, e.g. flow cytometry microstructural devices
-
- G—PHYSICS
- G01—MEASURING; TESTING
- G01N—INVESTIGATING OR ANALYSING MATERIALS BY DETERMINING THEIR CHEMICAL OR PHYSICAL PROPERTIES
- G01N15/00—Investigating characteristics of particles; Investigating permeability, pore-volume or surface-area of porous materials
- G01N15/10—Investigating individual particles
- G01N15/14—Optical investigation techniques, e.g. flow cytometry
- G01N15/1404—Handling flow, e.g. hydrodynamic focusing
-
- G—PHYSICS
- G01—MEASURING; TESTING
- G01N—INVESTIGATING OR ANALYSING MATERIALS BY DETERMINING THEIR CHEMICAL OR PHYSICAL PROPERTIES
- G01N15/00—Investigating characteristics of particles; Investigating permeability, pore-volume or surface-area of porous materials
- G01N15/10—Investigating individual particles
- G01N15/14—Optical investigation techniques, e.g. flow cytometry
- G01N15/1456—Optical investigation techniques, e.g. flow cytometry without spatial resolution of the texture or inner structure of the particle, e.g. processing of pulse signals
- G01N15/1459—Optical investigation techniques, e.g. flow cytometry without spatial resolution of the texture or inner structure of the particle, e.g. processing of pulse signals the analysis being performed on a sample stream
-
- G—PHYSICS
- G01—MEASURING; TESTING
- G01N—INVESTIGATING OR ANALYSING MATERIALS BY DETERMINING THEIR CHEMICAL OR PHYSICAL PROPERTIES
- G01N15/00—Investigating characteristics of particles; Investigating permeability, pore-volume or surface-area of porous materials
- G01N15/10—Investigating individual particles
- G01N15/14—Optical investigation techniques, e.g. flow cytometry
- G01N15/149—Optical investigation techniques, e.g. flow cytometry specially adapted for sorting particles, e.g. by their size or optical properties
-
- G—PHYSICS
- G01—MEASURING; TESTING
- G01N—INVESTIGATING OR ANALYSING MATERIALS BY DETERMINING THEIR CHEMICAL OR PHYSICAL PROPERTIES
- G01N15/00—Investigating characteristics of particles; Investigating permeability, pore-volume or surface-area of porous materials
- G01N15/10—Investigating individual particles
- G01N2015/1006—Investigating individual particles for cytology
-
- G—PHYSICS
- G01—MEASURING; TESTING
- G01N—INVESTIGATING OR ANALYSING MATERIALS BY DETERMINING THEIR CHEMICAL OR PHYSICAL PROPERTIES
- G01N15/00—Investigating characteristics of particles; Investigating permeability, pore-volume or surface-area of porous materials
- G01N15/10—Investigating individual particles
- G01N15/14—Optical investigation techniques, e.g. flow cytometry
- G01N2015/1486—Counting the particles
Landscapes
- Chemical & Material Sciences (AREA)
- Dispersion Chemistry (AREA)
- Physics & Mathematics (AREA)
- Health & Medical Sciences (AREA)
- Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
- Analytical Chemistry (AREA)
- Biochemistry (AREA)
- General Health & Medical Sciences (AREA)
- General Physics & Mathematics (AREA)
- Immunology (AREA)
- Pathology (AREA)
- Automatic Analysis And Handling Materials Therefor (AREA)
- Apparatus Associated With Microorganisms And Enzymes (AREA)
Description
微小粒子を含む液体が通流される主流路の所定の位置で、微小粒子が通過する時点を検知し、
微小粒子吸引流路により所定の吸引力で微小粒子を前記主流路から前記微小粒子吸引流路内に吸引し、
前記微小粒子吸引流路内に吸引された微小粒子の数をカウントする工程、及び
微小粒子が前記主流路の所定の位置を通過した時点から前記吸引が行われるまでの時間と前記カウントした微小粒子の数とに基づいて、
前記微小粒子吸引流路による吸引が行われるべき、前記所定の位置を通過したときからの経過時間を決定する工程、
を含む技術である(請求項1)。
しかし、前記技術の開発を更に進め、微小粒子の分取性能をより向上させることが望まれる。
すなわち、本技術は、
シース液及び微小粒子含有サンプル液が通流する主流路と、前記微小粒子を吸引する圧力室とを含む、微小粒子分取用マイクロチップを用いて、
前記主流路に前記シース液及び前記微小粒子含有サンプル液を通流し、前記主流路の所定の位置で微小粒子が通過する時点を検知して個々の微小粒子の速度Vのデータを取得する工程、及び
前記個々の微小粒子の速度Vのデータに基づいて、前記微小粒子を吸引する圧力を制御する工程
を含む、微小粒子の吸引条件の最適化方法を提供する。
前記方法において、一定時間での微小粒子の平均速度Vave、個々の微小粒子中の最大速度Vmax及び最低速度Vminの少なくとも一つのデータを取得する工程を含むことができる。
また、前記一定時間での微小粒子の平均速度Vave、個々の微小粒子中の最大速度Vmax及び最低速度Vminの少なくとも一つのデータ及び前記個々の微小粒子の速度Vのデータに基づいて、前記微小粒子を吸引する圧力を制御する工程を含むことができる。
更に、V/Vaveで算出される指標に反比例して、前記微小粒子を吸引する圧力を制御する工程を含むことができる。
ここで、平均速度Vaveは、一定時間内の微小粒子の速度のハーゲンポアズイユ分布に基づいて計算することができる。
あるいは、V/Vmaxで算出される指標に反比例して、前記微小粒子を吸引する圧力を制御する工程を含むことができる。
また、前記主流路の所定の位置から分取する位置まで微小粒子が通過する時間tに基づいて、前記個々の微小粒子の速度Vのデータを取得することができる。
また、前記微小粒子が、微小粒子含有サンプル液の略中心部を通流するとき、前記時間tでの個々の微小粒子中の最高速度Vmaxにおける前記圧力室の圧力がVaveのときよりも大きくすることができる。
あるいは、前記微小粒子が、微小粒子含有サンプル液の略最外部を通流するとき、前記時間tでの個々の微小粒子中の最低速度Vminにおける圧力室の圧力がVaveのときよりも小さくすることができる。
前記微小粒子は、光照射により検出が可能なマイクロビーズとすることができる。なお、マイクロビーズは、下記の調整用微小粒子として使用することができる。
その他、本技術における微小粒子として、細胞、微生物、およびリボゾームなどの生態関連微小粒子などを用いることができる。
シース液及び微小粒子含有サンプル液が通流する主流路と、微小粒子を吸引する圧力室とを含む、微小粒子分取用マイクロチップを用いて、
前記主流路に前記シース液及び調整用微小粒子含有サンプル液を通流し、前記主流路の所定の位置で前記調整用微小粒子が通過する時点を検知して個々の調整用微小粒子の速度Vのデータを取得する工程、
前記調整用微小粒子を所定の吸引力で前記主流路から前記圧力室へ吸引する工程、
前記圧力室に吸引された前記調整用微小粒子の数をカウントする工程、及び
前記調整用微小粒子が前記主流路の所定の位置を通過した時点から前記吸引が行われるまでの時間と前記カウントした調整用微小粒子の数とに基づいて、吸引が行われるべき、前記所定の位置を通過したときからの経過時間を決定する工程、
前記主流路に前記調整用微小粒子含有サンプル液よりも多量のサンプル液を通流し、前記主流路の所定の位置で前記調整用微小粒子が通過する時点を検知しての個々の調整用微小粒子の速度Vデータと、一定時間での平均速度Vaveのデータを取得する工程、
V/Vaveで算出される指標に反比例して、前記調整用微小粒子を吸引する圧力室の圧力を制御し、前記圧力室への前記調整用微小粒子の分取を実行する工程
を含む、微小粒子の吸引条件の最適化方法を提供する。
本技術は、前記圧力室への前記調整用微小粒子の分取を実行する工程後に、再度前記圧力室に吸引された前記調整用微小粒子の数をカウントする工程を含み、
前記圧力室への前記調整用微小粒子の分取の実行回数と、分取済みの前記調整用微小粒子の粒子数カウント数とを対比し、前記調整用微小粒子の全部を分取していないと判定されるときは、前記圧力室の圧力を大きく及び/又は小さくして、分取済みの前記調整用微小粒子の粒子数カウント数が通流した前記調整用微小粒子の全部と略同数となる定数を算出することを含むことができる。
シース液及び微小粒子含有サンプル液が通流する主流路と、前記微小粒子を吸引する圧力室とを含む、微小粒子分取用マイクロチップと、
前記主流路に前記シース液及び前記微小粒子含有サンプル液を通流し、前記主流路の所定の位置で微小粒子が通過する時点を検知して個々の微小粒子の速度Vのデータを取得する速度データ取得部と、
前記個々の微小粒子の速度Vのデータに基づいて、前記微小粒子を吸引する圧力を制御する圧力制御部とを含む、微小粒子分取用装置を提供する。
シース液及び微小粒子含有サンプル液が通流する主流路と、前記微小粒子を吸引する圧力室とを含む、微小粒子分取用マイクロチップと、
前記主流路に前記シース液及び前記微小粒子含有サンプル液を通流し、前記主流路の所定の位置で微小粒子が通過する時点を検知して個々の微小粒子の速度Vのデータを取得する速度データ取得装置と、
前記個々の微小粒子の速度Vのデータに基づいて、前記微小粒子を吸引する圧力を制御する圧力制御装置と、
前記圧力を制御するプログラムが組み込まれたコンピュータと
を含む、微小粒子分取用システムを提供する。
シース液及び微小粒子含有サンプル液が通流する主流路と、微小粒子を吸引する圧力室とを含む、微小粒子分取用マイクロチップを用いて、
前記主流路に前記シース液及び前記微小粒子含有サンプル液を通流し、前記主流路の所定の位置で微小粒子が通過する時点を検知して個々の微小粒子の速度Vのデータと、一定時間での微小粒子の平均速度Vaveのデータを取得し、V/Vaveで算出される指標に反比例して、前記圧力室の吸引力を制御すること、
をコンピュータに実行させる、微小粒子分取用プログラムを提供する。
あるいは、シース液及び微小粒子含有サンプル液が通流する主流路と、微小粒子を吸引する圧力室とを含む、微小粒子分取用マイクロチップを用いて、
前記主流路に前記シース液及び調整用微小粒子含有サンプル液を通流し、前記主流路の所定の位置で前記調整用微小粒子が通過する時点を検知して調整用微小粒子の速度データを取得すること、
前記圧力室による所定の吸引力で前記調整用微小粒子を前記主流路から前記圧力室へ吸引すること、
前記圧力室に吸引された前記調整用微小粒子の数をカウントすること、及び
前記調整用微小粒子が前記主流路の所定の位置を通過した時点から前記吸引が行われるまでの時間と前記カウントした調整用微小粒子の数とに基づいて、吸引が行われるべき、前記所定の位置を通過したときからの経過時間を決定すること、
前記主流路に前記調整用微小粒子含有サンプル液よりも多量のサンプル液を通流し、前記主流路の所定の位置で前記調整用微小粒子が通過する時点を検知して個々の調整用微小粒子の速度Vのデータと、一定時間での調整用微小粒子の平均速度Vaveのデータを取得し、V/Vaveで算出される指標に反比例して、前記圧力室の吸引力を制御し、前記圧力室への前記調整用微小粒子の分取を実行すること、
をコンピュータに実行させる、微小粒子分取用プログラムを提供する。
なお、本技術により奏される効果は、ここに記載された効果に必ずしも限定されるものではなく、本明細書中に記載されたいずれかの効果であってもよい。
1.関連技術の説明
1-1.微小粒子分取用マイクロチップ
1-2.微小粒子分取用装置
1-3.微小粒子分取のための動作原理
2.微小粒子の吸引条件最適化方法
2-1.基本となる吸引条件最適化方法I
2-2.基本となる吸引条件最適化方法II
2-3.微小粒子の吸引時の現象
2-4.サンプルコアのサイズに対応した吸引条件最適化方法
3.微小粒子吸引制御の実施態様
3-1.実施態様I
3-2.実施態様II
4.微小粒子分取用プログラム
5.微小粒子分取用システム
1-1.微小粒子分取用マイクロチップ
目的の微小粒子を分取する技術を、図1を参照しながら以下に説明する。図1は、微小粒子の分取を行うためのマイクロチップの一例の模式図である。
回収されるべきでない粒子が粒子分取流路109へと入ることを防ぐために、ゲート流インレット112が備えられていてもよい。当該ゲート流インレット112からシース液が導入され、粒子分取流路109から主流路105への方向の流れが形成されることで、回収されるべきでない粒子が粒子分取流路109へと入ることが防がれる。
このようにして、微小粒子は、分取部107において分取される。
本技術に従う微小粒子分取用装置は、本技術の最適化方法を実行する。当該最適化方法は、例えば、前記1-1.微小粒子分取用マイクロチップにおいて行うことができる。すなわち、本技術に従う微小粒子分取用装置は、当該マイクロチップを備えることができるが、これに限定されない。なお、微小粒子分取用マイクロチップは、容易に交換可能でディスポーザブルでもよい。
前記主流路に前記シース液及び前記微小粒子含有サンプル液を通流し、前記主流路の所定の位置で微小粒子が通過する時点を検知して個々の微小粒子の速度Vのデータを取得する速度データ取得部と、
前記速度Vのデータに基づいて、前記微小粒子を吸引する圧力を制御する圧力制御部とを含む。
前記粒子数カウント工程で得られたデータは、データ処理部において、前記粒子分取流路へと吸引が行われるべき、前記所定の位置を通過したときからの経過時間を決定することに用いられる。
また、例えば2つの光が照射されることで、当該2つの光の間の距離と当該2つの光の間を微小粒子が通過に要した時間とから、当該微小粒子の流路内での速度が算出される。すなわち、第1及び第2の光照射部、並びに第1及び第2の検出部から速度が算出される。
また、本技術に用いる微小粒子分取用装置はさらに、分取された微小粒子の検出のための暗視野照明系、及び/又は、分取部を観察するためのカメラ観察系を有してもよい。さらに、本技術に用いる微小粒子分取用装置は、当該カメラ観察系により観察される視野を照明する透過照明系を有してもよい。
また、本技術の微小粒子分取用装置は、前記第2の光照射部から照射された光により生じた光を検出するための第2の検出部をさらに含んでもよい。
前記光照射部は蛍光励起用の光を、マイクロチップ内を通流する微小粒子に照射する。前記第2の光照射部は、微小粒子が微小粒子分取流路内に分取されたことを検出する為の光を照射する。
前記検出部は、前方散乱光検出系及び蛍光検出系を有する。これら検出系によって、前記光照射部からの微小粒子への光の照射により生じた光の検出が行われる。検出された光に基づき、微小粒子が分取されるべきかの判別が、以下で述べる進行方向制御部により行われる。また、検出された光に基づき、微小粒子の前記所定の位置の通過が、上記制御部によって検出される。また、検出された光に基づき、微小粒子の通過速度の算出が、上記制御部によって行われる。
前記第2の検出部は、前記第2の光照射部から微小粒子への光の照射により生じた光の検出が行われる。当該光の検出によって、微小粒子が微小粒子吸引流路内に吸引されたことが検出される。当該第2の検出部により検出される光は、好ましくは前方散乱光であり、当該前方散乱光は好ましくは蛍光マーカーに依存しないものでよい。
また、前記光照射部による光の照射により生じた前方散乱光は、対物レンズを通った後に、前方散乱光検出系により検出される。当該対物レンズの開口数(NA)は好ましくは0.05~1.0、より好ましくは0.1~0.5、更に好ましくは0.3とすることができる。
また、これら対物レンズの視野内に、前記光照射位置があってよく、好ましくは前記光照射位置及び分岐部分の両方があってもよい。
図4に、微小粒子分取用マイクロチップの主流路から分取部における光学系構成の一例を示す。
前記第1の光照射部には488nmの光が照射され、前記第2の光照射部には638nmの光が照射される。これらに対応する第1と第2の検出部の間隔は80μmである。第1の検出部における信号検出後、この間を微小粒子が流れ、第2の検出部における信号が検出される。これにより微小粒子が流れる速度を算出することができる。
また、第2の検出部から700μm先を分取部とし、分取部を中心としたΦ350nmの前記調整用カメラ観察視野を設置し、分取部を通過した微小粒子を観察することができる。
図5に、本技術における微小粒子分取のための動作原理を示す。
微小粒子含有サンプル液は、前記微小粒子分取用マイクロチップのインレット部よりサンプル流として図5中の矢印方向に流れてゆくが、主流路を流れる微小粒子に対して光が照射された結果生じた散乱光及び/又は蛍光の情報を精度良く読み取るためには、微小粒子を光照射の焦点位置に正確にかつ1個ずつ通過させる必要がある。よって、前述したように、微小粒子含有サンプル液の流れを包み込むシース液を流し、微小粒子含有サンプル液が中心の流れ(以下、中心部分の流れを「サンプルコア」ともいう)を作成する必要がある。
一方で、散乱光及び/又は蛍光の情報により分取対象であると判断された微小粒子は、圧力室をアクチュエータにより高速変形させることで微小な負圧を発生させ、前記分取部(三分岐点)より吸引操作を行い、粒子分取流路に流し込む。
吸引チャンバーの変形量及び流路内の流れ変化に対する影響度が小さいので、分取の為の吸引量(体積)が小さいと高速動作が可能であり、分取処理として高いスループットを稼ぐことが可能である。ただし、吸引量が少な過ぎると、混入防止を担っているゲート流に勝ることが出来ず、分取されるべき微小粒子を吸引することができず、分取動作を達成することができない。
故に、分取処理の高スループットを保ちつつ、ロバスト性を有した分取性能を達成するためには、流れてくる個々の微小粒子の速度(V)を精度良く検知し、個々の細胞に合わせた最適なタイミング(T)、かつ最適な吸引量(D)で分取動作を実行する必要がある。
2-1.基本となる吸引条件最適化方法I
前述の吸引のタイミング及び/又は吸引力を最適化するべく、前記特願2017-102694の微小粒子の吸引条件の最適化方法技術が開発された。以下に、当該技術について概略を示すが、詳細は、前記特願2017-102694の明細書を参照されたい。
上記方法の実施態様の一例を、以下で図6を参照しながら説明する。図6は、基本となる吸引条件最適化方法のフローチャートを示す。
図6の粒子数カウント工程S301は、微小粒子が前記主流路上の所定の位置を通過したときから所定の時間T0が経過した時点において前記微小粒子吸引流路による吸引を所定の吸引力D0にて行うという条件下で行われる。該条件で微小粒子分取手順を前記マイクロチップにおいて実行し、当該分取手順を実行した結果前記微小粒子吸引流路内に吸引された微小粒子の数がカウントされる。
例えば、当該時間T0は、前記所定の位置を通過した時点から、吸引力D0にて吸引した場合に微小粒子吸引流路内に微小粒子が吸引される領域内のいずれかの位置に到達した時点までの時間である。又は、前記所定の位置を通過した時点から当該領域に到達する前の時点までの時間であってもよい。
微小粒子分取手順においては、既知の数の微小粒子を含むサンプル液を用いることができる。微小粒子の数は、当業者により適宜設定されてよく、例えば10~1000、特には30~500、より特には50~300である。微小粒子分取手順において、既知の数の微小粒子を含むサンプル液が、サンプル液インレット101から導入され、そして、サンプル液流路102中を進み、かつ、シース液が、シース液インレット103から導入され、そして、シース液流路104を進む。当該、サンプル液及びシース液は合流して層流を形成し、そして、層流は主流路105を分取部107に向かって流れる。当該層流に対して、検出領域106において、光が照射される。微小粒子が当該検出領域を通過することで、微小粒子から散乱光及び/又は蛍光が生じる。この散乱光及び/又は蛍光を検出した場合にのみ、当該微小粒子が、前記所定の位置を通過したときから所定の時間T0が経過した時点において、吸引力D0での吸引が行われる。例えば100の微小粒子を含むサンプル液を用いた微小粒子分取手順では、夫々の微小粒子について吸引が行われ、すなわち100回吸引が行われる。
前記生物学的微小粒子には、各種細胞を構成する染色体、リポソーム、ミトコンドリア、オルガネラ(細胞小器官)などが含まれる。前記細胞には、動物細胞(血球系細胞など)および植物細胞が含まれる。前記微生物には、大腸菌などの細菌類、タバコモザイクウイルスなどのウイルス類、イースト菌などの菌類などが含まれる。さらに、前記生物学的微小粒子には、核酸、タンパク質、これらの複合体などの生物学的高分子も包含される。また、前記合成粒子は、例えば有機若しくは無機高分子材料又は金属などからなる粒子でよい。前記有機高分子材料には、ポリスチレン、スチレン・ジビニルベンゼン、及びポリメチルメタクリレートなどが含まれる。前記無機高分子材料には、ガラス、シリカ、及び磁性体材料などが含まる。前記金属には、金コロイド及びアルミなどが含まれる。微小粒子の形状は、一般には球形又は略球形であってよく、又は非球形であってもよい。微小粒子の大きさ及び質量は、マイクロチップの流路のサイズによって当業者により適宜選択される。マイクロチップの流路のサイズは、微小粒子の大きさ及び質量によって適宜選択される。本技術において、微小粒子には、必要に応じて化学的又は生物学的な標識、例えば蛍光色素など、を取り付けられることができる。当該標識によって、当該微小粒子の検出がより容易になる。取り付けられるべき標識は、当業者により適宜選択できる。
図6の繰り返す工程S302では、微小粒子が前記主流路の所定の位置を通過した時点から前記吸引が行われるまでの時間を変更して前記粒子数カウント工程を繰り返される。例えば、前記T0をより長い及び/又はより短い種々の時間Tnに変更したこと以外は同じようにして、前記粒子数カウント工程が繰り返される。時間Tnは、例えばマイクロチップのサイズ、所定の吸引力を適用した場合に当該吸引力が及ぶ領域、及び/又は公差などを考慮して、当業者により適宜設定される。繰り返す工程S302において、種々の時間Tnのそれぞれについて粒子数カウント工程が行われることで、種々の時間Tnのそれぞれについて粒子数カウント結果が得られる。
図6の吸引が行なわれるべき時間を決定する工程S303では、粒子数カウント工程S301において、又は、粒子数カウント工程S301及び繰り返す工程S302においてカウントされた微小粒子の数に基づいて、前記微小粒子吸引流路による吸引が行われるべき、前記所定の位置を通過したときからの経過時間が決定される。その結果、微小粒子の吸引が行われるべき時点が最適化される。また、当該決定は、所定のプログラムを実行する制御部などによって、自動的に行われる。
図9は、微小粒子が前記主流路上の所定の位置を通過したときから所定の時間T0が経過した時点において前記微小粒子吸引流路による吸引を所定の吸引力D0にて行うという条件下で、微小粒子分取手順を行っている場合の流路内の状況を示す模式図である。図9において、微小粒子吸引流路の入り口から照射領域に向かって楕円状に広がっている領域601が、吸引力D0にて吸引した場合に微小粒子吸引流路内に微小粒子が吸引される領域である。図9において、前記所定の位置は、2つの光照射位置のうち、微小粒子吸引流路からより遠いほうのものである。前記所定の位置を通った微小粒子602は、所定の時間T0が経過することで、前記所定の位置から距離Y0だけ進み、図9に示されるとおりの位置にいる。前記所定の位置を通過したときから前記所定の時間T0が経過した時点において前記微小粒子吸引流路による吸引を所定の吸引力D0にて行う場合、微小粒子602は、領域601内にいるので、微小粒子吸引流路内に吸い込まれる。
なお、図9に示されるとおり、微小粒子が前記所定の位置を通過後前記所定の時間T0が経過した時点において、当該微小粒子は理論的には領域601内にいる。しかしながら、例えば形成されている層流の状況、粒子の形状、及び/又は実際の吸引力などの要因によって、微小粒子吸引流路内に吸い込まれない場合もある。
また、図9において、時間T0を減少させたTjにおいて吸引を行う場合、微小粒子は例えば位置604にいる。位置604にいる場合に吸引力D0にて吸引を行っても、微小粒子は領域601の外にいるので、微小粒子吸引流路内に吸い込まれない。
なお、図9に示されるとおり、微小粒子が前記所定の位置を通過後前記時間Ti又はTjが経過した時点において、当該微小粒子は理論的には領域601の外にいる。しかしながら、例えば形成されている層流の状況、粒子の形状、及び/又は実際の吸引力などの要因によって、微小粒子吸引流路内に吸い込まれる場合もある。
本技術の微小粒子の吸引条件の最適化方法は、吸引力を変更して前記粒子数カウント工程及び/又は前記繰り返し工程を繰り返す第2の繰り返し工程をさらに含んでもよい。本技術の最適化方法が、当該第2の繰り返し工程を含む場合、前記決定する工程において、前記粒子数カウント工程及び/又は前記繰り返す工程並びに前記第2の繰り返し工程においてカウントされた微小粒子の数に基づき、前記微小粒子吸引流路による吸引が行われるべき、前記所定の位置を微小粒子が通過したときからの経過時間及び微小粒子の吸引に適用されるべき吸引力が決定される。
当該本技術の最適化方法が当該第2の繰り返し工程を含む場合のフローチャートの一例を図10に示す。図10において、工程S401及びS402は、上記2-1.基本となる吸引条件最適化方法Iで説明した工程S301及びS302と同じである。そのため、これら工程についての説明は省略する。
図10の第2の繰り返し工程S403では、前記吸引力D0をより大きい及び/又は小さい種々の吸引力Dnに変更したこと以外は同じようにして、前記粒子数カウント工程及び/又は前記繰り返す工程が繰り返される。好ましくは、図10の第2の繰り返し工程S403では、前記吸引力D0を小さい種々の吸引力Dnに変更したこと以外は同じようにして、粒子数カウント工程S401及び繰り返す工程S402が繰り返される。吸引力Dnは、例えば微小粒子吸引流路に設けられる吸引手段の仕様、マイクロチップのサイズ、所定の吸引力を適用した場合に当該吸引力が及ぶ領域、及び/又は公差などの要因を考慮して、当業者により適宜設定される。繰り返す工程S403において、種々の吸引力Dnのそれぞれについて粒子数カウント工程が行われることで、種々の吸引力Dnのそれぞれについて粒子数カウント結果が得られる。
図10の吸引が行なわれるべき時間及び/又は適用されるべき吸引力を決定する工程S404では、粒子数カウント工程S401、繰り返す工程S402、及び第2の繰り返し工程S403においてカウントされた微小粒子の数に基づいて、前記微小粒子吸引流路による吸引が行われるべき、前記所定の位置を通過したときからの経過時間及び/又は微小粒子の吸引に適用されるべき吸引力が決定される。その結果、微小粒子の吸引が行われるべき時点及び適用されるべき吸引力が最適化される。また、当該決定は、例えば所定のプログラムを実行する制御部などによって、自動的に行われる。
あるいは、所定の数以上微小粒子がカウントされる場合の時間Tn及び吸引力Dnの組合せのうちから、吸引力が最小となる吸引力Dが適用されるべき吸引力として決定され、かつ、当該決定された吸引力において所定の数以上微小粒子がカウントされる複数の経過時間のうちの中央の値が、吸引が行われるべき経過時間として決定されてもよい。
あるいは、所定の数以上微小粒子がカウントされかつ吸引力が最小となる時間及び吸引力の組合せが2以上ある場合は、これら組合せのうちから任意の時間及び吸引力の組合せを、前記吸引が行われるべき経過時間及び適用されるべき吸引力として決定してもよい。又は、所定の数以上微小粒子がカウントされかつ吸引力が最小となる時間及び吸引力の組合せが2以上ある場合において、当該吸引力の最小値が適用されるべき吸引力として決定され、かつ、複数の時間のうち中央の値が、前記吸引が行われるべき経過時間として決定されてもよい。
図9は、上記で説明したとおり、微小粒子分取手順を行っている場合の流路内の状況を示す模式図である。上記でも説明したとおり、前記所定の位置を通過したときから前記所定の時間T0が経過した時点において前記微小粒子吸引流路による吸引を所定の吸引力D0にて行う場合、微小粒子602は、領域601内にいるので、微小粒子吸引流路内に吸い込まれる。
また、前記所定の位置を通った微小粒子803は、所定の時間T1が経過することで、前記所定の位置から粒子は距離Y1だけ進み、図11に示されるとおりの位置にいる。前記所定の位置を通過したときから前記所定の時間T1が経過した時点において前記微小粒子吸引流路による吸引を所定の吸引力Dnにて行う場合、微小粒子803は、領域801内にいるので、微小粒子吸引流路内に吸い込まれる。
以上のとおり、吸引力が小さければ小さいほど、吸引力が及ぶ領域がより狭くなる。
例えば、当該成功率が最も高くかつ吸引力が最も小さい場合の時間T及び吸引力Dが、前記吸引が行われるべき経過時間及び適用されるべき吸引力として決定される。
あるいは、所定の率以上の成功率の場合の時間Tn及び吸引力Dnの組合せのうちから、吸引力が最小となる時間T及び吸引力Dを、前記吸引が行われるべき経過時間及び適用されるべき吸引力として決定してもよい。
あるいは、所定の率以上の成功率を達成しかつ吸引力が最小となる時間及び吸引力の組合せが2以上ある場合は、これら組合せのうちから任意の時間及び吸引力の組合せを、前記吸引が行われるべき経過時間及び適用されるべき吸引力として決定してもよい。又は、所定の率以上の成功率を達成しかつ吸引力が最小となる時間及び吸引力の組合せが2以上ある場合において、当該吸引力の最小が適用されるべき吸引力として決定され、かつ、複数の時間のうち中央の値が、前記吸引が行われるべき経過時間として決定されてもよい。
好ましい実施態様に従い、前記第2の繰り返し工程S404において、吸引力は前記吸引力D0から所定の割合で段階的に減少され、かつ、前記第2の繰り返し工程は、前記微小粒子吸引流路内に吸引された微小粒子の数がいずれの経過時間の場合においても0となる結果が得られるまで行われうる。この場合、前記決定する工程において、前記いずれの経過時間の場合においても0となる結果が得られた場合の吸引力から所定の割合で増加させた吸引力が、微小粒子の吸引に適用されるべき吸引力として決定されうる。これにより、吸引力の最適化が自動的に行われうる。
吸引力を前記吸引力D0から減少させた場合の流路内の状況の変化は、図9及び図11を参照して上記で説明したとおりである。前記所定の割合及び前記減少の段階の数は、上記(1)において説明したとおりである。
前記微小粒子の吸引条件の最適化方法の技術においては、サンプルコアがシース流に対して非常に小さい状態で行うものである。
すなわち、サンプルコア内部に流れる微小粒子の速度は一定であると仮定し、最適な微小粒子分取タイミング、及び微小粒子含有サンプル液の分取吸引量(アクチュエータ駆動力)となるよう吸引を行っている。このように、サンプルコアの微小粒子に速度差を生じない状況であれば、シース流の速度が変化したとしてもその微小粒子の速度に最適な分取タイミングを自動的に算出することが可能となっている。
微小粒子含有サンプル液の濃度調整は、一般的に、後述の微小粒子分取用装置に微小粒子含有サンプル液をセットする前処理として行うので、装置が処理している間には濃度調整を実施せず、サンプル液の送液量で微小粒子が1秒間に通過する数(以下、「サンプルイベントレート」ということがある。)を調整する。そのため、微小粒子分取用マイクロチップの主流路におけるサンプルコアのサイズは、微小粒子含有サンプル液の送液量で決定され、微小粒子濃度が薄いサンプル液であってもサンプルイベントレートを高くする場合には、微小粒子含有サンプル液の送液量を増加させる必要があり、サンプルコアのサイズも大きくなる。
微小粒子の分取は、圧力室を動作させ微小な負圧を発生させることで粒子の吸引を行う方式であるため、サンプルコアのサイズが大きくなった場合、主流路中心に位置するサンプル吸引口から遠い位置を通過する粒子が多く存在し、サンプルコアのサイズが小さい場合の分取吸引量(アクチュエータの駆動力)では安定して吸引することができない。
このような状況においては、分取吸引量が固定のままでは良好な分取性能を実現することができず、微小粒子の通過位置に適応した吸引量の最適制御が求められる。
そこで、本技術では以下のような吸引条件最適化方法を開発した。
一般的なマイクロ空間の流体送液において、送液された液体の速度は、流体の粘性と壁面からの影響を受けハーゲンポアズイユ流となることが広く知られている。
V:一定時間(例えば1秒間)での一群の微小粒子の個々の速度
Vave:前記一群の微小粒子の速度の平均
Vmax:前記一群の微小粒子中における個々の微小粒子のうち、最速となる個の微小粒子速度
Vmin:前記一群の微小粒子中における個々の微小粒子のうち、最低速度となる個の微小粒子速度
ここで、一定時間とは、前記主流路の所定の位置から分取する位置まで微小粒子が通過する時間とすることができる。この時間を時間tとすることができる。
前記ハーゲンポアズイユ現象に基づけば、一般的に、通常の流路内の粒子速度は、流路中心からの距離をXとすると、Xの二乗に比例して遅くなり、式1:Y=Vmax-X2で表される。
本技術で前記V/Vaveを用いているが、前記個々の微小粒子の計測した速度を前述のようにVaveで正規化しているので、速度によらず同じ係数を使用することができる。
前記主流路に前記シース液及び前記微小粒子含有サンプル液を通流し、前記主流路の所定の位置で微小粒子が通過する時点を検知して個々の微小粒子の速度Vのデータを取得する工程、及び
前記速度データにおいて、前記一定時間での微小粒子の平均速度Vaveとし、V/Vaveで算出される指標に反比例して、アクチュエータの駆動を制御する工程
を含めればよい。
また、回収されるべき粒子の純度を非常に高くすべく、純度を優先する純化処理以外の、濃縮処理(回収されるべき微小粒子の純度は低いが大量の微小粒子を処理する)の場合などのサンプルコアのサイズが大きなソーティング状態においても、良好な微小粒子分取特性を維持することが可能となる。
本技術の一実施態様としては、例えば、
シース液及び微小粒子含有サンプル液が通流する主流路と、アクチュエータの駆動により微小粒子を吸引する圧力室とを含む、微小粒子分取用マイクロチップにおいて、
前記主流路に前記シース液及び調整用微小粒子含有サンプル液を通流し、前記主流路の所定の位置で前記調整用微小粒子が通過する時点を検知して調整用微小粒子の速度Vのデータを取得する工程、
前記調整用微小粒子を所定の吸引力で前記主流路から前記圧力室へ吸引する工程、
前記圧力室に吸引された前記調整用微小粒子の数をカウントする粒子数カウント工程、及び
前記調整用微小粒子が前記主流路の所定の位置を通過した時点から前記吸引が行われるまでの時間と前記カウントした調整用微小粒子の数とに基づいて、吸引が行われるべき、前記所定の位置を通過したときからの経過時間を決定する工程、
前記主流路に前記調整用微小粒子含有サンプル液よりも多量のサンプル液を通流し、前記主流路の所定の位置で前記調整用微小粒子が通過する時点を検知して個々の調整用微小粒子の速度Vのデータを取得する工程、及び
一定時間での前記多量のサンプル液の個々の調整用微小粒子の速度Vのデータと、前記一定時間での調整用微小粒子の平均速度Vaveのデータから、V/Vaveで算出された指標に反比例して、圧力室の圧力を制御し、前記圧力室への前記調整用微小粒子の分取を実行する工程
を含む方法で、微小粒子の吸引条件を最適化することができる。
図6でいえば、工程S301中の分取手段及び/又は工程S302中の分取手順に微小粒子の速度データ取得工程とアクチュエータの駆動制御工程を組み込めばよい。
前記圧力室への前記調整用微小粒子の分取を実行する工程後に、前記圧力室に吸引された前記調整用微小粒子の数をカウントする粒子数カウント工程を更に含み、
前記圧力室への前記調整用微小粒子の分取の実行回数と、分取済みの前記調整用微小粒子の粒子数カウント数とを対比し、前記調整用微小粒子の全部を分取していないと判定されるときは、前記アクチュエータの駆動を大きく及び/又は小さくして、分取済みの前記調整用微小粒子の粒子数カウント数が通流した前記調整用微小粒子の全部と略同数となる定数を算出することを含むようにしてもよい。
図10でいえば、工程S401、S402、S403のいずれかの工程、又は適宜組み合わせた工程、あるいは全ての工程中の分取手順に微小粒子の速度データ取得工程とアクチュエータの駆動制御工程を組み込めばよい。
具体例として、本技術の微小粒子の吸引条件の最適化方法の調整手順の例を説明する。
当該例では、本技術の微小粒子吸引の最適化方法において、微小粒子分取用マイクロチップの圧力室に係るアクチュエータの駆動力及び動作を調整するときには、例えば、光照射による散乱光の検出が可能なマイクロビーズを調整用微小粒子として用いる。
そして、散乱光から得られる調整用マイクロビーズの挙動の情報に基づいて、微小粒子の分取タイミングT、及び吸引力Dの最適化を下記調整手順1~15にて実施する。なお、アクチュエータとしてピエゾ素子を用いた。
更に詳細な具体例として、図16に示すフローチャートにより、本技術の微小粒子の吸引条件の最適化を行うことが挙げられる。
以下、図16の各プロセスを説明する。なお、アクチュエータとしてピエゾ素子を用いた。
なお、プロセス8からプロセス13が、ソーティング自動調整シーケンスである。
前記プロセス9からプロセス11を、例えば20回繰り返す。
なお、プロセス9からプロセス13までを繰り返すようにしてもよい。
調整用マイクロビーズを全部取得するまで、ステップ16及び17を繰り返すようにしてもよい。
以上のプロセス15から17までが、吸引量補正シーケンスとなる。
以上で自動調整シーケンスを終了する。
本技術は、前記微小粒子の吸引条件の最適化方法を行うために、微小粒子分取用装置を制御する機能をコンピュータに実現させる微小粒子分取用プログラムも提供する。
(A)シース液及び微小粒子含有サンプル液が通流する主流路と、微小粒子を吸引する圧力室とを含む、微小粒子分取用マイクロチップを用いて、
前記主流路に前記シース液及び前記微小粒子含有サンプル液を通流し、前記主流路の所定の位置で微小粒子が通過する時点を検知して個々の微小粒子の速度Vのデータを取得すること、及び
(F)一定時間での微小粒子の平均速度Vaveのデータを取得し、V/Vaveで算出される指標に反比例して、前記圧力室の吸引力を制御すること
をコンピュータに実行させるプログラムである。
(B)所定の吸引力で前記調整用微小粒子を前記主流路から前記圧力室へ吸引すること、(C)前記圧力室に吸引された前記調整用微小粒子の数をカウントすること、及び
(D)前記調整用微小粒子が前記主流路の所定の位置を通過した時点から前記吸引が行われるまでの時間と前記カウントした調整用微小粒子の数とに基づいて、前記微小粒子吸引流路による吸引が行われるべき、前記所定の位置を通過したときからの経過時間を決定すること、及び
(E)前記主流路に前記調整用微小粒子含有サンプル液よりも多量のサンプル液を通流し、前記主流路の所定の位置で前記調整用微小粒子が通過する時点を検知して個々の調整用微小粒子の速度Vのデータを取得すること、
をコンピュータに実行させるプログラムであってもよい。
本技術は、前記微小粒子の吸引条件の最適化方法を行うことができる微小粒子分取用システムも提供する。
シース液及び微小粒子含有サンプル液が通流する主流路と、前記微小粒子を吸引する圧力室とを含む、微小粒子分取用マイクロチップと、
前記主流路に前記シース液及び前記微小粒子含有サンプル液を通流し、前記主流路の所定の位置で微小粒子が通過する時点を検知して個々の微小粒子の速度Vのデータを取得する速度データ取得装置と、
前記個々の微小粒子の速度Vのデータに基づいて、前記微小粒子を吸引する圧力を制御する圧力制御装置と、
前記圧力を制御するプログラムが組み込まれたコンピュータを含む。
コンピュータとして、例えば前記(A)と(F)のプログラムが組み込まれたコンピュータ、前記(A)、(B)、(C)、(D)、(E)及び(F)のプログラムが組み込まれたコンピュータを用いればよい。
[1] シース液及び微小粒子含有サンプル液が通流する主流路と、前記微小粒子を吸引する圧力室とを含む、微小粒子分取用マイクロチップを用いて、
前記主流路に前記シース液及び前記微小粒子含有サンプル液を通流し、前記主流路の所定の位置で微小粒子が通過する時点を検知して個々の微小粒子の速度Vのデータを取得する工程、及び
前記個々の微小粒子の速度Vのデータに基づいて、前記微小粒子を吸引する圧力を制御する工程
を含む、微小粒子の吸引条件の最適化方法。
[2] 一定時間での微小粒子の平均速度Vave、個々の微小粒子中の最大速度Vmax及び最低速度Vminの少なくとも一つのデータを取得する工程を含む、[1]に記載の方法。
[3] 前記一定時間での微小粒子の平均速度Vave、個々の微小粒子中の最大速度Vmax及び最低速度Vminの少なくとも一つのデータ及び前記個々の微小粒子の速度Vのデータに基づいて、前記微小粒子を吸引する圧力を制御する工程を含む、[2]に記載の方法。
[4] V/Vaveで算出される指標に反比例して、前記微小粒子を吸引する圧力を制御する工程を含む、[2]又は[3]に記載の方法。
[5] 一定時間内の微小粒子の速度のハーゲンポアズイユ分布に基づいて、平均速度Vaveを計算する、[2]~[4]のいずれかに記載の方法。
[6] V/Vmaxで算出される指標に反比例して、前記微小粒子を吸引する圧力を制御する工程を含む、[2]~[5]のいずれかに記載の方法。
[7] 前記主流路の所定の位置から分取する位置まで微小粒子が通過する時間tに基づいて、前記個々の微小粒子の速度Vのデータを取得する、[1]~[6]のいずれかに記載の方法。
[8]前記微小粒子を吸引する圧力を制御する工程において、前記圧力はアクチュエータの駆動による、[1]~[7]のいずれかに記載の方法。
[9] 前記微小粒子が、微小粒子含有サンプル液の略中心部を通流するとき、前記時間tでの個々の微小粒子中の最高速度Vmaxにおける前記圧力室の圧力がVaveのときよりも大きい、[7]又は[8]に記載の方法。
[10] 前記微小粒子が、微小粒子含有サンプル液の略最外部を通流するとき、前記時間tでの個々の微小粒子中の最低速度Vminにおける圧力室の圧力がVaveのときよりも小さい、[7]~[9]のいずれかに記載の方法。
[11] 前記微小粒子が、光照射により検出が可能なマイクロビーズである、[1]~[10]のいずれかに記載の方法。
[12] シース液及び微小粒子含有サンプル液が通流する主流路と、微小粒子を吸引する圧力室とを含む、微小粒子分取用マイクロチップを用いて、
前記主流路に前記シース液及び調整用微小粒子含有サンプル液を通流し、前記主流路の所定の位置で前記調整用微小粒子が通過する時点を検知して個々の調整用微小粒子の速度Vのデータを取得する工程、
前記調整用微小粒子を所定の吸引力で前記主流路から前記圧力室へ吸引する工程、
前記圧力室に吸引された前記調整用微小粒子の数をカウントする工程、及び
前記調整用微小粒子が前記主流路の所定の位置を通過した時点から前記吸引が行われるまでの時間と前記カウントした調整用微小粒子の数とに基づいて、吸引が行われるべき、前記所定の位置を通過したときからの経過時間を決定する工程、
前記主流路に前記調整用微小粒子含有サンプル液よりも多量のサンプル液を通流し、前記主流路の所定の位置で前記調整用微小粒子が通過する時点を検知しての個々の調整用微小粒子の速度Vデータと、一定時間での平均速度Vaveのデータを取得する工程、
V/Vaveで算出される指標に反比例して、前記調整用微小粒子を吸引する圧力室の圧力を制御し、前記圧力室への前記調整用微小粒子の分取を実行する工程
を含む、微小粒子の吸引条件の最適化方法。
[13] 前記圧力室への前記調整用微小粒子の分取を実行する工程後に、再度前記圧力室に吸引された前記調整用微小粒子の数をカウントする工程を含み、
前記圧力室への前記調整用微小粒子の分取の実行回数と、分取済みの前記調整用微小粒子の粒子数カウント数とを対比し、前記調整用微小粒子の全部を分取していないと判定されるときは、前記圧力室の圧力を大きく及び/又は小さくして、分取済みの前記調整用微小粒子の粒子数カウント数が通流した前記調整用微小粒子の全部と略同数となる定数を算出することを含む、[12]に記載の方法。
[14] シース液及び微小粒子含有サンプル液が通流する主流路と、前記微小粒子を吸引する圧力室とを含む、微小粒子分取用マイクロチップと、
前記主流路に前記シース液及び前記微小粒子含有サンプル液を通流し、前記主流路の所定の位置で微小粒子が通過する時点を検知して個々の微小粒子の速度Vのデータを取得する速度データ取得部と、
前記個々の微小粒子の速度Vのデータに基づいて、前記微小粒子を吸引する圧力を制御する圧力制御部とを含む、微小粒子分取用装置。
[15] シース液及び微小粒子含有サンプル液が通流する主流路と、前記微小粒子を吸引する圧力室とを含む、微小粒子分取用マイクロチップと、
前記主流路に前記シース液及び前記微小粒子含有サンプル液を通流し、前記主流路の所定の位置で微小粒子が通過する時点を検知して個々の微小粒子の速度Vのデータを取得する速度データ取得装置と、
前記個々の微小粒子の速度Vのデータに基づいて、前記微小粒子を吸引する圧力を制御する圧力制御装置と、
前記圧力を制御するプログラムが組み込まれたコンピュータと
を含む、微小粒子分取用システム。
[16] シース液及び微小粒子含有サンプル液が通流する主流路と、微小粒子を吸引する圧力室とを含む、微小粒子分取用マイクロチップを用いて、
前記主流路に前記シース液及び前記微小粒子含有サンプル液を通流し、前記主流路の所定の位置で微小粒子が通過する時点を検知して個々の微小粒子の速度Vのデータと、一定時間での微小粒子の平均速度Vaveのデータを取得し、V/Vaveで算出される指標に反比例して、前記圧力室の吸引力を制御すること、
をコンピュータに実行させる、微小粒子分取用プログラム。
[17] シース液及び微小粒子含有サンプル液が通流する主流路と、微小粒子を吸引する圧力室とを含む、微小粒子分取用マイクロチップを用いて、
前記主流路に前記シース液及び調整用微小粒子含有サンプル液を通流し、前記主流路の所定の位置で前記調整用微小粒子が通過する時点を検知して調整用微小粒子の速度データを取得すること、
前記圧力室による所定の吸引力で前記調整用微小粒子を前記主流路から前記圧力室へ吸引すること、
前記圧力室に吸引された前記調整用微小粒子の数をカウントすること、及び
前記調整用微小粒子が前記主流路の所定の位置を通過した時点から前記吸引が行われるまでの時間と前記カウントした調整用微小粒子の数とに基づいて、吸引が行われるべき、前記所定の位置を通過したとき
からの経過時間を決定すること、
前記主流路に前記調整用微小粒子含有サンプル液よりも多量のサンプル液を通流し、前記主流路の所定の位置で前記調整用微小粒子が通過する時点を検知して個々の調整用微小粒子の速度Vのデータと、一定時間での調整用微小粒子の平均速度Vaveのデータを取得し、V/Vaveで算出される指標に反比例して、前記圧力室の吸引力を制御し、前記圧力室への前記調整用微小粒子の分取を実行すること、
をコンピュータに実行させる、微小粒子分取用プログラム。
101 サンプル液インレット
102 サンプル液流路
103 シース液インレット
104 シース液流路
105 主流路
106 検出領域
107 分取部
108 分岐流路(廃棄流路)
109 粒子分取流路
110 分岐流路末端
111 分取流路末端
112 ゲート流インレット
201 オリフィス部
202 光照射領域
601 吸引力D0にて吸引した場合に微小粒子吸引流路内に微小粒子が吸引される領域602 微小粒子
801 吸引力Dnにて吸引した場合に微小粒子吸引流路内に微小粒子が吸引される領域802 微小粒子
901 吸引力Dzにて吸引した場合に微小粒子吸引流路内に微小粒子が吸引される領域
Claims (15)
- シース液及び微小粒子含有サンプル液が通流する主流路と、前記微小粒子を吸引する圧力室とを含む、微小粒子分取用マイクロチップを用いて、
前記主流路に前記シース液及び前記微小粒子含有サンプル液を通流し、前記主流路の所定の位置で微小粒子が通過する時点を検知して個々の微小粒子の速度Vのデータを取得する工程、
一定時間での微小粒子の平均速度V ave 、個々の微小粒子の速度Vにおける最大速度V max 及び最低速度V min の少なくとも一つのデータを取得する工程、及び
前記一定時間での微小粒子の平均速度V ave 、個々の微小粒子の速度Vにおける最大速度V max 及び最低速度V min の少なくとも一つのデータ及び前記個々の微小粒子の速度Vのデータに基づいて、前記微小粒子を吸引する圧力を制御する工程、
を含む、微小粒子の吸引条件の最適化方法。 - V/Vaveで算出される指標に反比例して、前記微小粒子を吸引する圧力を制御する工程を含む、請求項1に記載の方法。
- 一定時間内の微小粒子の速度のハーゲンポアズイユ分布に基づいて、平均速度Vaveを計算する、請求項1又は2に記載の方法。
- V/Vmaxで算出される指標に反比例して、前記微小粒子を吸引する圧力を制御する工程を含む、請求項1に記載の方法。
- 前記主流路の所定の位置から分取する位置まで微小粒子が通過する時間tに基づいて、前記個々の微小粒子の速度Vのデータを取得する、請求項1から4のいずれか一項に記載の方法。
- 前記微小粒子を吸引する圧力を制御する工程において、前記圧力はアクチュエータの駆動による、請求項1から5のいずれか一項に記載の方法。
- 前記微小粒子が、微小粒子含有サンプル液の略中心部を通流するとき、前記時間tでの個々の微小粒子の速度Vにおける最高速度Vmax の際の前記圧力室の圧力がVaveのときよりも大きい、請求項5に記載の方法。
- 前記微小粒子が、微小粒子含有サンプル液の略最外部を通流するとき、前記時間tでの個々の微小粒子の速度Vにおける最低速度Vmin の際の前記圧力室の圧力がVaveのときよりも小さい、請求項5に記載の方法。
- 前記微小粒子が、光照射により検出が可能なマイクロビーズである、請求項1から8のいずれか一項に記載の方法。
- シース液及び微小粒子含有サンプル液が通流する主流路と、微小粒子を吸引する圧力室とを含む、微小粒子分取用マイクロチップを用いて、
前記主流路に前記シース液及び調整用微小粒子含有サンプル液を通流し、前記主流路の所定の位置で前記調整用微小粒子が通過する時点を検知して個々の調整用微小粒子の速度Vのデータを取得する工程、
前記調整用微小粒子を所定の吸引力で前記主流路から前記圧力室へ吸引する工程、
前記圧力室に吸引された前記調整用微小粒子の数をカウントする工程、及び
前記調整用微小粒子が前記主流路の所定の位置を通過した時点から前記吸引が行われるまでの時間と前記カウントした調整用微小粒子の数とに基づいて、吸引が行われるべき、前記所定の位置を通過したときからの経過時間を決定する工程、
前記主流路に前記調整用微小粒子含有サンプル液よりも多量のサンプル液を通流し、前記主流路の所定の位置で前記調整用微小粒子が通過する時点を検知しての個々の調整用微小粒子の速度Vデータと、一定時間での平均速度Vaveのデータを取得する工程、
V/Vaveで算出される指標に反比例して、前記調整用微小粒子を吸引する圧力室の圧力を制御し、前記圧力室への前記調整用微小粒子の分取を実行する工程を含む、微小粒子の吸引条件の最適化方法。 - 前記圧力室への前記調整用微小粒子の分取を実行する工程後に、再度前記圧力室に吸引された前記調整用微小粒子の数をカウントする工程を含み、
前記圧力室への前記調整用微小粒子の分取の実行回数と、分取済みの前記調整用微小粒子の粒子数カウント数とを対比し、前記調整用微小粒子の全部を分取していないと判定されるときは、前記圧力室の圧力を大きく及び/又は小さくして、分取済みの前記調整用微小粒子の粒子数カウント数が通流した前記調整用微小粒子の全部と略同数となる定数を算出することを含む、請求項10に記載の方法。 - シース液及び微小粒子含有サンプル液が通流する主流路と、前記微小粒子を吸引する圧力室とを含む、微小粒子分取用マイクロチップと、
前記主流路に前記シース液及び前記微小粒子含有サンプル液を通流し、前記主流路の所定の位置で微小粒子が通過する時点を検知して個々の微小粒子の速度Vのデータを取得する速度データ取得部と、
前記個々の微小粒子の速度Vのデータに基づいて、前記微小粒子を吸引する圧力を制御する圧力制御部と、
を含み、
前記速度データ取得部は、一定時間での微小粒子の平均速度V ave 、個々の微小粒子の速度Vにおける最大速度V max 及び最低速度V min の少なくとも一つのデータを取得し、
前記圧力制御部は、前記一定時間での微小粒子の平均速度V ave 、個々の微小粒子の速度Vにおける最大速度V max 及び最低速度V min の少なくとも一つのデータ及び前記個々の微小粒子の速度Vのデータに基づいて、前記微小粒子を吸引する圧力を制御する、微小粒子分取用装置。 - シース液及び微小粒子含有サンプル液が通流する主流路と、前記微小粒子を吸引する圧力室とを含む、微小粒子分取用マイクロチップと、
前記主流路に前記シース液及び前記微小粒子含有サンプル液を通流し、前記主流路の所定の位置で微小粒子が通過する時点を検知して個々の微小粒子の速度Vのデータを取得する速度データ取得装置と、
前記個々の微小粒子の速度Vのデータに基づいて、前記微小粒子を吸引する圧力を制御する圧力制御装置と、
前記圧力を制御するプログラムが組み込まれたコンピュータと、
を含み、
前記速度データ取得装置は、一定時間での微小粒子の平均速度V ave 、個々の微小粒子の速度Vにおける最大速度V max 及び最低速度V min の少なくとも一つのデータを取得し、
前記圧力制御装置は、前記一定時間での微小粒子の平均速度V ave 、個々の微小粒子の速度Vにおける最大速度V max 及び最低速度V min の少なくとも一つのデータ及び前記個々の微小粒子の速度Vのデータに基づいて、前記微小粒子を吸引する圧力を制御する、微小粒子分取用システム。 - シース液及び微小粒子含有サンプル液が通流する主流路と、微小粒子を吸引する圧力室とを含む、微小粒子分取用マイクロチップを用いて、
前記主流路に前記シース液及び前記微小粒子含有サンプル液を通流し、前記主流路の所定の位置で微小粒子が通過する時点を検知して個々の微小粒子の速度Vのデータと、一定時間での微小粒子の平均速度Vaveのデータを取得し、V/Vaveで算出される指標に反比例して、前記圧力室の吸引力を制御すること、
をコンピュータに実行させる、微小粒子分取用プログラム。 - シース液及び微小粒子含有サンプル液が通流する主流路と、微小粒子を吸引する圧力室とを含む、微小粒子分取用マイクロチップを用いて、
前記主流路に前記シース液及び調整用微小粒子含有サンプル液を通流し、前記主流路の所定の位置で前記調整用微小粒子が通過する時点を検知して調整用微小粒子の速度データを取得すること、
前記圧力室による所定の吸引力で前記調整用微小粒子を前記主流路から前記圧力室へ吸引すること、
前記圧力室に吸引された前記調整用微小粒子の数をカウントすること、及び
前記調整用微小粒子が前記主流路の所定の位置を通過した時点から前記吸引が行われるまでの時間と前記カウントした調整用微小粒子の数とに基づいて、吸引が行われるべき、前記所定の位置を通過したときからの経過時間を決定すること、
前記主流路に前記調整用微小粒子含有サンプル液よりも多量のサンプル液を通流し、前記主流路の所定の位置で前記調整用微小粒子が通過する時点を検知して個々の調整用微小粒子の速度Vのデータと、一定時間での調整用微小粒子の平均速度Vaveのデータを取得し、V/Vaveで算出される指標に反比例して、前記圧力室の吸引力を制御し、前記圧力室への前記調整用微小粒子の分取を実行すること、
をコンピュータに実行させる、微小粒子分取用プログラム。
Applications Claiming Priority (3)
Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
---|---|---|---|
JP2018037468 | 2018-03-02 | ||
JP2018037468 | 2018-03-02 | ||
PCT/JP2019/002659 WO2019167510A1 (ja) | 2018-03-02 | 2019-01-28 | 微小粒子の吸引条件の最適化方法、微小粒子分取用装置、微小粒子分取用システム及び微小粒子分取用プログラム |
Publications (2)
Publication Number | Publication Date |
---|---|
JPWO2019167510A1 JPWO2019167510A1 (ja) | 2021-02-18 |
JP7207394B2 true JP7207394B2 (ja) | 2023-01-18 |
Family
ID=67806015
Family Applications (1)
Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
---|---|---|---|
JP2020502874A Active JP7207394B2 (ja) | 2018-03-02 | 2019-01-28 | 微小粒子の吸引条件の最適化方法、微小粒子分取用装置、微小粒子分取用システム及び微小粒子分取用プログラム |
Country Status (5)
Country | Link |
---|---|
US (1) | US20210372917A1 (ja) |
JP (1) | JP7207394B2 (ja) |
CN (1) | CN111771116B (ja) |
DE (1) | DE112019001098T5 (ja) |
WO (1) | WO2019167510A1 (ja) |
Families Citing this family (4)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
EP4019947A4 (en) * | 2019-11-06 | 2023-09-27 | Sony Group Corporation | OPTICAL MEASURING DEVICE AND INFORMATION PROCESSING SYSTEM |
JP6745559B1 (ja) * | 2020-03-24 | 2020-08-26 | 株式会社Cybo | イメージングフローサイトメーター、ソート方法、及びキャリブレーション方法 |
CN114441269B (zh) * | 2022-02-14 | 2023-08-08 | 华北电力大学(保定) | 一种大气气溶胶的成分与数量检测装置 |
CN116355725B (zh) * | 2023-03-07 | 2024-04-05 | 广州市艾贝泰生物科技有限公司 | 分配器、分配装置及分配方法 |
Citations (4)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
JP2005524831A (ja) | 2002-04-17 | 2005-08-18 | サイトノーム インコーポレーテッド | 粒子を選別する方法および装置 |
WO2011067961A1 (ja) | 2009-12-02 | 2011-06-09 | 独立行政法人科学技術振興機構 | 流路デバイス及びそれを含むサンプル処理装置 |
US20120078531A1 (en) | 2009-03-10 | 2012-03-29 | The Regents Of The University Of California | Fluidic flow cytometry devices and particle sensing based on signal-encoding |
JP2014202573A (ja) | 2013-04-04 | 2014-10-27 | ソニー株式会社 | 粒子分取装置及び粒子分取方法 |
Family Cites Families (14)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
US6432630B1 (en) * | 1996-09-04 | 2002-08-13 | Scandinanian Micro Biodevices A/S | Micro-flow system for particle separation and analysis |
DE10031200A1 (de) * | 2000-06-27 | 2002-01-17 | Emitec Emissionstechnologie | Partikelfalle zum Abscheiden von Partikeln aus dem Strom eines Fluids, Verfahren zum Abscheiden von Partikeln aus dem Strom eines Fluids und Verwendung einer Partikelfalle |
KR100670590B1 (ko) * | 2005-10-05 | 2007-01-17 | 주식회사 디지탈바이오테크놀러지 | 확장된 채널을 가진 마이크로칩 및 이를 이용하는 미세입자 분석 장치 |
US9063117B2 (en) * | 2007-02-21 | 2015-06-23 | Paul L. Gourley | Micro-optical cavity with fluidic transport chip for bioparticle analysis |
JP2010038866A (ja) * | 2008-08-08 | 2010-02-18 | Sony Corp | マイクロチップ、微小粒子分取装置及び送流方法 |
JP2011145185A (ja) * | 2010-01-15 | 2011-07-28 | Sony Corp | 流路構造、マイクロチップ及び送流方法 |
EP4191227A1 (en) * | 2010-01-15 | 2023-06-07 | On-chip Biotechnologies Co., Ltd. | Disposable chip-type flow cell and flow cytometer using the same |
WO2014062719A2 (en) * | 2012-10-15 | 2014-04-24 | Nanocellect Biomedical, Inc. | Systems, apparatus, and methods for sorting particles |
US9551645B2 (en) * | 2014-07-10 | 2017-01-24 | Kinetic River Corp. | Flow cytometry apparatus and methods |
KR101662808B1 (ko) * | 2014-11-28 | 2016-10-14 | 한국과학기술연구원 | 나선형 분지채널을 이용한 미세유체칩 여과 장치 및 방법 |
CN108291186B (zh) * | 2015-12-01 | 2021-09-28 | 株式会社日立高新技术 | 细胞分析器件、装置及使用了该装置的细胞分析方法 |
EP4390369A2 (en) * | 2016-11-19 | 2024-06-26 | Cytek Biosciences, Inc. | Flow cytometry systems with stepper flow control valve |
BR112019011460A2 (pt) * | 2016-12-09 | 2019-10-15 | Koninklijke Philips Nv | módulo sensor a laser, dispositivo de comunicação móvel, método de detecção de partícula e produto de programa de computador |
WO2019049944A1 (en) * | 2017-09-07 | 2019-03-14 | Sony Corporation | PARTICLE CAPTURE CHAMBER, PARTICLE CAPTURE CHIP, PARTICLE CAPTURE METHOD, APPARATUS, AND PARTICLE ANALYSIS SYSTEM |
-
2019
- 2019-01-28 JP JP2020502874A patent/JP7207394B2/ja active Active
- 2019-01-28 CN CN201980015251.8A patent/CN111771116B/zh active Active
- 2019-01-28 US US16/976,060 patent/US20210372917A1/en active Pending
- 2019-01-28 WO PCT/JP2019/002659 patent/WO2019167510A1/ja active Application Filing
- 2019-01-28 DE DE112019001098.0T patent/DE112019001098T5/de active Pending
Patent Citations (4)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
JP2005524831A (ja) | 2002-04-17 | 2005-08-18 | サイトノーム インコーポレーテッド | 粒子を選別する方法および装置 |
US20120078531A1 (en) | 2009-03-10 | 2012-03-29 | The Regents Of The University Of California | Fluidic flow cytometry devices and particle sensing based on signal-encoding |
WO2011067961A1 (ja) | 2009-12-02 | 2011-06-09 | 独立行政法人科学技術振興機構 | 流路デバイス及びそれを含むサンプル処理装置 |
JP2014202573A (ja) | 2013-04-04 | 2014-10-27 | ソニー株式会社 | 粒子分取装置及び粒子分取方法 |
Also Published As
Publication number | Publication date |
---|---|
CN111771116A (zh) | 2020-10-13 |
CN111771116B (zh) | 2024-03-05 |
DE112019001098T5 (de) | 2021-02-04 |
US20210372917A1 (en) | 2021-12-02 |
WO2019167510A1 (ja) | 2019-09-06 |
JPWO2019167510A1 (ja) | 2021-02-18 |
Similar Documents
Publication | Publication Date | Title |
---|---|---|
JP7367805B2 (ja) | 微小粒子の吸引条件の最適化方法及び微小粒子分取装置 | |
JP7338336B2 (ja) | 微小粒子分取装置、細胞治療薬製造装置、微小粒子分取方法、及びプログラム | |
JP7207394B2 (ja) | 微小粒子の吸引条件の最適化方法、微小粒子分取用装置、微小粒子分取用システム及び微小粒子分取用プログラム | |
JP6136843B2 (ja) | 粒子分取装置、粒子分取方法及びプログラム | |
JP4661942B2 (ja) | マイクロチップとその流路構造 | |
JP6447506B2 (ja) | 粒子分取装置及び粒子分取方法 | |
JP5905317B2 (ja) | 微小粒子分取装置におけるキャリブレーション方法及び該装置 | |
US20220184623A1 (en) | Microchip and microparticle fractionating device | |
EP3633347B1 (en) | Method for optimizing suction conditions for microparticles, and microparticle separation device | |
JP6237806B2 (ja) | 微小粒子分取装置 | |
JP2011064706A (ja) | マイクロチップとその流路構造 | |
JP5098650B2 (ja) | 微小粒子の送流方法及び分析方法、並びに微小粒子分析用基板 | |
US20240165621A1 (en) | Biological particle sorting device and method for adjusting sorting condition in biological particle sorting device | |
WO2023153297A1 (ja) | 微小粒子分取装置及び微小粒子分取方法 |
Legal Events
Date | Code | Title | Description |
---|---|---|---|
A621 | Written request for application examination |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A621 Effective date: 20211210 |
|
A131 | Notification of reasons for refusal |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A131 Effective date: 20221115 |
|
A521 | Request for written amendment filed |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A523 Effective date: 20221118 |
|
TRDD | Decision of grant or rejection written | ||
A01 | Written decision to grant a patent or to grant a registration (utility model) |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A01 Effective date: 20221206 |
|
A61 | First payment of annual fees (during grant procedure) |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A61 Effective date: 20221219 |
|
R151 | Written notification of patent or utility model registration |
Ref document number: 7207394 Country of ref document: JP Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: R151 |