JP7181891B2 - 微生物学的試験装置、該装置の提供方法および使用 - Google Patents

Description

本発明は一般に微生物学的分析の分野に関する。より詳細には、本発明は、分析対象の液体を試験するための微生物学的試験装置に関し、この液体は、少なくとも１種類の微生物を含む傾向がある。本発明はさらに、該装置を提供するための方法、および少なくとも１種類の微生物を含む傾向がある分析対象の液体を試験するための方法における該装置の使用に関する。

より詳細には本発明は、食品加工、医薬品または化粧品産業の微生物学的試験の分野を対象としている。

本発明は、Ｃｅｎｔｒｅ Ｎａｔｉｏｎａｌ ｄ’Ｅｔｕｄｅｓ Ｓｐａｔｉａｌｅｓ（ＣＮＥＳ）（フランス国立宇宙研究センター）の参加により恩恵を得た研究に従って開発されたものである。

液体中の少なくとも１種類の微生物の存在を、一般にその微生物が存在しないことを示すことができるようことを目的にして、試験することが試みられる状況は数多く存在する。

言うまでもなく、分析対象液体は、生体液（全血、血清、血漿、尿、脳脊髄液、器官分泌物など）であることがある。それにもかかわらず、この液体はさらに、工業用液体、特に食品液体（水、飲料一般、特に果汁、乳、ソーダなど）または製薬もしくは化粧品液体であることもある。

液体に潜在的に含まれる微生物を集め、それらの微生物を培養して、続いてそれらを検出し、それらを計数し、それらの特徴を明らかにし、かつ／またはそれらを同定することができるようにするために、分析対象液体を濾過することを可能にする数多くの試験室技法が知られている。それらの技法は、試験技師にはよく知られているある数のハンドリング操作を必要とする。

これらの技法ではしばしば、チャンバによって境界が画定された閉じられた内部空間を備える濾過装置であって、分析対象液体を受け入れるように構成された濾過装置を使用する必要がある。そのような技法は特に「膜濾過」と呼ばれている。この閉じられた内部空間内に、微生物学的濾過部材、例えば濾過膜が配置され、この微生物学的濾過部材は、閉じられた内部空間内において、閉じられた内部空間の第１の区画を閉じられた内部空間の第２の区画から分離する。この装置は、分析対象液体のための入口ポートを備え、この入口ポートは、閉じられた内部空間の第１の区画に開いている。

文献ＥＰ－１．７８３．４９４の濾過装置など、知られている濾過装置には、外部吸引源に接続されるように構成された吸引ポートが提供されている。したがって、そのような装置の使用では、分析対象液体を入口ポートを通して装置に導入するときに閉じられた内部空間の内側に陰圧を発生させるため、外部吸引源を吸引ポートに接続する必要がある。この陰圧は濾過を促進し、または濾過のために必要でもある。

濾過が実行され、濾過部材上に微生物が保持された後、濾過部材を回収するために装置が開けられ、濾過部材は、微生物のインキュベーションを可能にするために培養装置に移される。

このような技法を試験室で実行することは容易である。

しかしながら、このような技法を、液体が生産、梱包、配送または使用される操業環境、特に工業環境で実行することは困難である。実際、この文脈では、望んでいない微生物による液体の潜在的汚染を検出するための要素を有することができることが有益である。しかしながら、上述の通常の技法では、通常の方法を実行することができる試験室に分析対象液体の試料を輸送する必要がある。実際、これらの通常の操作を、液体の生産、梱包、配送または使用のための工業サイトにおいてｉｎ ｓｉｔｕで実行することを想定することは難しい。これは、このような環境内での汚染された液体の取扱いは、取扱いが不適切であった場合に、汚染を広げる危険性があるためである。さらに、存在する可能性がある微生物を培養する工程は、栄養培地の存在を必要とし、栄養培地の存在は、字義通り、微生物の増殖を促進する。言うまでもなく、このような工業的文脈でそのような栄養培地が導入されることは望ましくない。さらに、通常の検出技法はさらに、偽陽性を防ぐため、分析対象試料を外部の汚染から保護すること、したがってできるだけ無菌の環境で作業することを要求する。

したがって、本発明の目的は、分析対象液体の微生物学的試験のための装置および方法であって、工業的環境を含む微生物学試験室外で使用または実行することも想定可能な特に単純化された試験操作を可能にする装置および方法を提案することにある。

この目的のため、本発明は最初に、少なくとも１種類の微生物を含む傾向がある分析対象液体を試験するための微生物学的試験装置であって、
－ チャンバによって境界が画定された閉じられた内部空間であり、分析対象液体を受け入れるように構成された閉じられた内部空間と、
－ 閉じられた内部空間内に配置された微生物学的濾過部材であり、閉じられた内部空間内において、閉じられた内部空間の第１の区画を閉じられた内部空間の第２の区画から分離する微生物学的濾過部材と、
－ 分析対象液体のための入口ポートであり、閉じられた内部空間の第１の区画に開いた入口ポートと
を備えるタイプの微生物学的試験装置を提供する。

該装置は、使用前の微生物学的試験装置を提供するための構成において、微生物学的試験装置が、閉じられた内部空間の内側に、微生物学的培地の組成物を含む栄養層を備え、栄養層が濾過部材と接触していること、微生物学的試験装置の入口ポートが開放／閉鎖部材を備えること、ならびに、使用前の微生物学的試験装置を提供するための構成において、
－ 入口ポートの開放／閉鎖部材が、入口ポートおよび閉じられた内部空間を空気を通さないよう密に閉鎖するための閉鎖された状態にあり、
－ 開放／閉鎖部材の第１の開放中に、この装置が入口ポートを通した吸引を生じさせることができるように、温度２５℃に対する閉じられた内部空間の内側の絶対ガス圧が、２５℃における標準大気圧１バールよりも厳密に低いこと
を特徴とする。

本発明に基づく装置の他の任意選択の特徴によれば、単独でまたは組合せで以下のことが可能である：
－ 使用前の微生物学的試験装置を提供するための構成において、閉じられた内部空間は一切の外部吸引源から隔離されている。
－ 閉じられた内部空間の第２の区画は、閉じられた内部空間の外側と流体連通したポートを持たない。
－ 使用前の装置を提供するための構成において、栄養層の微生物学的培地は脱水されている。
－ 閉じられた内部空間の第１の区画と第２の区画の間の流体交換は濾過部材を通して起こる。
－ 微生物学的試験装置は、濾過部材および栄養層のための支持体を備える。
－ 濾過部材のための支持体は、閉じられた内部空間を横切って第１の区画と第２の区画の間に広がるスクリーン、例えば多孔プレートの形態に製作されたスクリーンを備える。
－ 栄養層は、濾過部材と濾過部材のための支持体との間に配置されている。
－ 栄養層は、濾過部材と濾過部材のための支持体との間に局所的に固定されている。
－ 濾過部材のための支持体は、第２の区画内に配置された支持仕切りを含む。
－ 第２の区画内の支持仕切りの両側の流体の流れを可能にするため、前記仕切りには孔があけられている。
－ 第２の区画内に吸水材が配置されている。
－ 入口ポートの開放／閉鎖部材は弁を備える。
－ 入口ポートの開放／閉鎖部材は、漏れが生じない密な膜を備え、この膜を破ることによって、入口ポートの開放／閉鎖部材は開放状態に置かれる。
－ 微生物学的試験装置のチャンバは、第２の区画の境界を少なくとも部分的に画定する少なくとも１つの本体を備え、第１の区画の境界を少なくとも部分的に画定するカバーを備え、本体とカバーは、微生物学的試験装置を形成するために一緒に組み立てられる別個の部分から形成されている。
－ 微生物学的試験装置のチャンバは少なくとも１つの透明部分を含む。
－ 入口ポートは、分析対象液体のための別個のいくつかの通路を備える分配器を備える。
－ 入口ポートは、閉じられた内部空間の第１の区画に開いた内側部分と、分析対象液体の容器に接続するための外側部分とを備え、入口ポートの開放／閉鎖部材は、入口ポートの内側部分と外側部分の間に挿入されている。
－ 使用前の微生物学的試験装置を提供するための構成において、閉じられた内部空間の内側の絶対ガス圧は、所定の体積の分析対象試料の進入を、所定の体積の分析対象試料の進入中に内部空間から流体を排出することなしに可能にするような絶対ガス圧である。特に、閉じられた内部空間の内側の絶対ガス圧は、所定の体積の分析対象試料の進入後の内部空間内の最終的な自由容積を内部空間の全容積で除した比を標準大気圧に乗じた積よりも厳密に低いことが好ましい。実際問題として、使用前の微生物学的試験装置を提供するための構成において、閉じられた内部空間の内側の絶対ガス圧は、絶対圧力６００ミリバールよりも厳密に低く、好ましくは絶対圧力３００ミリバールよりも厳密に低く、より優先的には絶対圧力２００ミリバールよりも厳密に低い。

本発明はさらに、少なくとも１種類の微生物を含む傾向がある分析対象液体を試験するための微生物学的試験装置を提供するための方法であって、
－ 分析対象液体を受け入れるように構成された閉じられた内部空間の境界を画定するように提供されたチャンバと、
－ 閉じられた内部空間内に配置されるように、および、閉じられた内部空間内において、閉じられた内部空間の第１の区画を閉じられた内部空間の第２の区画から分離するように提供された微生物学的濾過部材と、
－ 分析対象液体のための入口ポートであり、閉じられた内部空間の第１の区画に開いた入口ポートと
を備える微生物学的試験装置を提供することを含むタイプの方法において、
この方法が、閉じられた内部空間の内側に受け入れられるように提供された栄養層であり、微生物学的培地の組成物を含浸させた栄養層を提供することを含み、栄養層が濾過部材と接触していること、および、
この方法が、微生物学的試験装置を分析対象液体の容器に接続する前に、
－ 閉じられた内部空間の内側の絶対ガス圧を下げる減圧工程と、
－ 閉じられた内部空間を空気を通さないよう密に閉鎖する閉鎖工程と
を逐次的にこの順序で含むこと
を特徴とする方法に関する。

本発明はさらに、少なくとも１種類の微生物を含む傾向がある分析対象液体を試験するための方法における、上に挙げた特徴のうちのいずれか１つの特徴を有する微生物学的試験装置の使用に関する。

この使用はさらに、
－ 分析対象液体の容器を入口ポートに接続することにある工程と、
－ 受器から閉じられた内部空間に向かって分析対象液体が通過することを可能にするために入口ポートの開放／閉鎖部材を開放することにある工程と
を含むことができる。

この使用はさらに、
－ 入口ポートの開放／閉鎖部材を閉鎖することにある後続の工程と、
－ 分析対象液体の容器を外すことにある後続の工程と、
－ 分析対象液体中に潜在的に最初に含まれる微生物を、微生物学的試験装置内でインキュベートすることにある後続の工程と
を含むことができる。

この使用は、微生物学的試験装置のチャンバの透明部分を通して見ることにより、分析対象液体中に潜在的に最初に含まれる微生物を視覚的に検出し、計数し、同定し、かつ／またはその特徴を明らかにすることにあるさらなる後続の工程を含むことができる。

他のさまざまな特徴は、添付図面に関する以下の説明から明らかになる。添付図面は、非限定的な例によって本発明の主題の実施形態を示す。

本発明に基づく装置の第１の例示的実施形態の分解透視図であり、分析対象液体を試験するための微生物学的試験装置１０の例示的実施形態を示し、前記液体は、少なくとも１種類の微生物を含む傾向がある。 組み立てられた図１の装置の透視図であり、分析対象液体を試験するための微生物学的試験装置１０の例示的実施形態を示し、前記液体は、少なくとも１種類の微生物を含む傾向がある。 図２の装置の断面図である。切断面は図１に示されている。分析対象液体を試験するための微生物学的試験装置１０の例示的実施形態を示し、前記液体は、少なくとも１種類の微生物を含む傾向がある。 図１の装置のカバーを下から見た透視図であり、分析対象液体を試験するための微生物学的試験装置１０の例示的実施形態を示し、前記液体は、少なくとも１種類の微生物を含む傾向がある。 本発明に基づく装置の第２の例示的実施形態の分解透視図である。 本発明に基づく装置の第２の例示的実施形態の本体および追加された底部を下から見た透視図である。 図５の装置の断面図である。切断面は図５に示されている。

本発明の目的上、微生物という用語は、特にグラム陽性またはグラム陰性細菌、酵母、アメーバ、ウイルスを包含し、より一般的には、肉眼では見えない単細胞生物であって、試験室内で取り扱うことおよび増やすことができる単細胞生物を包含する。

本発明の好ましい一実施形態によれば、微生物が、グラム陰性もしくはグラム陽性細菌または酵母である。

その第１の例示的実施形態が図１から４に示されており、その第２の例示的実施形態が図５から７に示されているこの微生物学的試験装置は、第１の例示的実施形態に関しては図２および３に、第２の例示的実施形態に関しては図７に示されたその動作状態において、チャンバによって境界が画定された閉じられた内部空間１２であり、分析対象液体を受け入れるように構成された内部空間１２を有する。本質的に、図示されたこれらの２つの例示的実施形態は同時に説明される。これらの例示的実施形態を互いから区別する特徴については該当箇所において言及する。

図示された例では、微生物学的試験装置のチャンバが、少なくとも１つの本体１４およびカバー１６を備える。本体１４とカバー１６は、微生物学的試験装置のチャンバを形成するために一緒に組み立てられる別個の部品から形成されている。カバー１６は、微生物学的試験装置１０の閉じられた内部空間１２の境界を画定するように本体１４を閉じる。したがって、カバー１６は、本体１４の閉鎖を提供するために本体１４の形態と相補的な形態を有する。

図示された例では、本体１４が、底壁１８および周囲側壁２０を、本体の底壁１８とは反対側の端部を通して本体１４が開いているような態様で有する。図示された例では周囲側壁２０が中心軸Ａ１を有する。図示されたケースの底壁１８は、本体１４の中心軸Ａ１に対して直角な横断壁である。第１の例示的実施形態では、底壁１８が、周囲側壁２０とともに単一の部品として製作されているが、第２の例示的実施形態では、底壁１８が、閉じられた内部空間１２を底側から閉じる別個の部品の形態で製作されている。底壁１８が別個の部品の形態で製作されているケースでは、底壁１８を、知られている手段によって、例えば単純な滑りばめ（ｓｎｕｇ ｆｉｔｔｉｎｇ）、接着結合（ａｄｈｅｓｉｖｅ ｂｏｎｄｉｎｇ）、溶接、機械的取付け用のクリップを用いたねじ留めなどによって周囲側壁２０に組み付けることができ、次いで、底壁１８が周囲側壁２０に組み付けられたときに、底壁１８が、閉じられた内部空間１２を漏れが生じないよう密に閉じることを保証するため、シールを提供することができる。

説明を明瞭にするため、この説明の残りの部分では、中心軸Ａ１が垂直方向を向いており、底壁１８が、微生物学的試験装置の下端に配置されており、周囲側壁２０が、底壁１８から軸Ａ１の方向に沿って上方へ延びていると考える。しかしながら、垂直、水平の概念、ならびに「頂部」、「底部」、「上部」および「下部」の概念は、図に示された微生物学的試験装置の向きだけに関して互いに対して相対的に使用され、本発明の範囲または使用中の微生物学的試験装置の向きを限定する効果を持たない。

周囲側壁２０は例えば、中心軸Ａ１の周りの回転面（ｓｕｒｆａｃｅ ｏｆ ｒｅｖｏｌｕｔｉｏｎ）である。図示された例では側壁２０が実質的に円筒形である。しかしながら、他の形態を提案することもできる。

その結果、カバー１６は、中心軸Ａ１に対して直角な横断壁２２を有し、この事例では、横断壁２２が、本体１４の周囲側壁２０の上縁２４の幾何学的形状に対応する実質的に円形の形態を有する。図示された例では、カバー１６が、カバーの横断壁２２の下面から下方へ延びる円筒形のスカート２６、この事例では中心軸Ａ１の周りの回転円筒形のスカート２６を有する。円筒形のスカート２６は、中心軸Ａ１の垂直方向に沿って、本体１４の周囲側壁２０の上端の内側で係合するように構成されている。

第１の例示的実施形態では、本体の周囲側壁２０の上端が、中心軸Ａ１の上向きの環状座面２８の境界を画定する横断方向の凹部を内面に有することに留意されたい。円筒形のスカート２６は下縁３０を有し、下縁３０は、カバー１６が本体１４に組み付けられたときに環状座面２８と向き合う。

本発明に基づく微生物学的試験装置１０は、閉じられた内部空間１２内に配置された微生物学的濾過部材３２であって、閉じられた内部空間内において、閉じられた内部空間１２の第１の区画１２ａを閉じられた内部空間１２の第２の区画１２ｂから分離している微生物学的濾過部材３２を備える。

図示された例では、第１の区画１２ａの境界が、少なくとも部分的にカバー１６によって画定されており、第２の区画１２ｂの境界が、少なくとも部分的に本体１４によって画定されている。

実際、微生物学的濾過部材３２は、閉じられた内部空間１２内において、閉じられた内部空間のあらゆる断面に沿って実質的に横断方向に広がっている。この例では、微生物学的濾過部材３２が実質的に平らな形態、このケースでは円板の形態を有する。微生物学的濾過部材３２は、中心軸Ａ１に対して直角に配置されていることが好ましい。

図示されたこの第１の例では微生物学的濾過部材３２が周縁３４を有し、周縁３４は、本体１４の周囲側壁２０の内面の断面と同じ形態および同じ寸法を有する。図示されたこの第１の例では、周縁３４が、直接的または間接的に、本体１４の環状座面２８を軸方向下方へ押すように構成されている。後に示すが、図示されたこの第１の例では、微生物学的濾過部材３２の周縁３４が、カバー１６の円筒形のスカート２６の下縁３０と本体１４の環状座面２８との間に軸方向に動かないよう固定されるように提供されることが好ましい。

微生物学的試験装置は、閉じられた内部空間１２の内側に、微生物学的培地の組成物を含浸させた栄養層３６を備え、栄養層３６は、微生物学的濾過部材３２と接触している。

図示された実施形態では、栄養層３６が、微生物学的濾過部材３２と接触した、微生物学的濾過部材３２とは別個の要素である。前記装置が組み立てられた後、栄養層３６と微生物学的濾過部材３２は、微生物学的試験装置内において互いに接触している。

このケースでは、上述の条件で、栄養層３６が、微生物学的濾過部材３２よりも下に位置することが好ましい。このケースでは、栄養層３６が、閉じられた内部空間１２の第２の区画１２ｂ内に位置する。しかしながら、上述の条件で栄養層が微生物学的濾過部材３２よりも上に位置するとすることを妨げる理由はない。この特定のケースでは、栄養層が、標的微生物の酵素または代謝活性の直接または間接検出を可能にすることを可能にする少なくとも１種類のクロモジェニック（ｃｈｒｏｍｏｇｅｎｉｃ）および／またはフルオロジェニック（ｆｌｕｏｒｏｇｅｎｉｃ）基質を含むと有利である。次いで、前記少なくとも１種類の基質によって生成された視覚的信号が、栄養層の厚さの少なくとも一部分を通して目に見える。

図示された例では、栄養層３６が、実質的に平らな形態、このケースでは円板の形態を有する。栄養層３６は周縁３８を有し、周縁３８は、微生物学的濾過部材３２の周縁３４と一致していることが好ましい。したがって、栄養層３６と濾過部材３２は同じ形態を有する。このことは、図示されたこの第１の例では、周縁３８が、本体１４の環状座面２８と微生物学的濾過部材３２の周縁３４との間に挿入されているときに、環状座面２８を軸方向下方へ押すことができることを意味する。図示されたこの第１の例では、栄養層３６の周縁３８が、微生物学的濾過部材３２の周縁３４と一緒に、カバー１６の円筒形のスカート２６の下縁３０と本体１４の環状座面２８との間に軸方向に動かないよう固定されるように提供されることが好ましい。

本発明の目的上、栄養層３６は、微生物学的培地を含む担体を含む。

この担体は、さまざまな吸収性化合物、好ましくは、レーヨン、綿、天然セルロース繊維、化学的に改質されたセルロース繊維、例えばカルボキシメチルセルロース、吸収性または超吸収性（ｓｕｐｅｒａｂｓｏｒｂｅｎｔ）化学ポリマー、例えばポリアクリル酸塩、アクリル酸／アクリルアミド共重合体などの非常に高い保水能力を有する吸収性化合物に基づくものとすることができる。この担体は、液体の形態の微生物学的培地を含浸させたものとすることができる。有利には、この微生物学的培地を脱水することができる。すなわち、この微生物学的培地は、微生物増殖と両立しない「ＡＷ」（水分活性（ｗａｔｅｒ ａｃｔｉｖｉｔｙ））を有することができる。あるいは、この担体を、乾燥条件下で、粉末の形態の微生物学的培地もしくは微生物学的培地の成分で覆うこと、またはこの担体に、乾燥条件下で、粉末の形態の微生物学的培地もしくは微生物学的培地の成分を含浸させることもできる。あるいは、液体を含浸させ、脱水後に、補足として粉末を加えることもできる。

「微生物学的培地」は、微生物の生存および／または増殖に必要な栄養素、特に糖を含む炭水化物、ペプトン、増殖因子、鉱物塩および／またはビタミンなどのうちの１つまたは複数の栄養素を含む培地を意味するように構成されている。実際問題として、当業者は、標的微生物に応じて、完全に十分に知られている判定基準に従って、および当業者の理解の範囲内で、微生物学的培地を選択する。

栄養層３６は、任意選択の添加物要素（ａｄｄｉｔｉｖｅ ｅｌｅｍｅｎｔ）、例えば
－ 特定の１つの微生物種／株の増殖および発生を別の微生物種／株よりも促進する、抑制因子または抗生物質などの１種類または数種類の選択的作用因子、
－ 緩衝剤、染色剤
を含むことができる。

一般的に言って、栄養層３６はさらに、直接的または間接的に検出可能な信号による標的微生物の酵素または代謝活性の検出を可能にする基質を含むことができる。直接検出のために、この基質を、蛍光標識またはクロモジェニック標識の役目を果たす部分に接続することができる。間接検出のために、本発明に基づく栄養層はさらにｐＨ指示薬を含むことができ、ｐＨ指示薬は、基質の消費によって引き起こされたｐＨの変化に対して感受性であり、標的微生物の増殖を明らかにする。前記ｐＨ指示薬は、クロモフォア（ｃｈｒｏｍｏｐｈｏｒｅ）またはフルオロフォア（ｆｌｕｏｒｏｐｈｏｒｅ）とすることができる。クロモフォアの例としては、ニュートラルレッド、アニリンブルー、ブロモクレゾールブルーが挙げられる。フルオロフォアは例えば、４－メチルウンベリフェロン、ヒドロキシクマリン誘導体またはレゾルフィン誘導体を含む。したがって、本発明に基づく方法を実行するために優先的に使用される蛍光ＰＣ－ＰＬＣ基質は、４－メチルウンベリフェリルコリンフォスフェート（４ＭＵ－ＣＰ）に対応する。

本発明の好ましい一実施形態によれば、使用前の微生物学的試験装置を提供するための構成において、栄養層３６の微生物学的培地は脱水されている。このケースでは、脱水された微生物学的培地を用いた栄養層の担体の乾式含浸の後、栄養層３６をカレンダ加工操作にかけることができる。カレンダ加工は、生成される圧力および加熱温度によって、栄養層の担体内の脱水された微生物学的培地の経時的に安定した保持および維持を可能にし、栄養層内の栄養素および任意選択の添加物要素の保持を保証する。

栄養層３６のカレンダ加工はさらに、栄養層の滑らかで平らな表面を得ることを可能にする。カレンダ加工はさらに、カレンダ加工によって引き起こされる栄養層の圧縮により、カレンダ加工されていない栄養層に比べて栄養層の再水和を速めることを可能にする。担体が繊維から形成されているケースでは、この圧縮が、栄養層３６内に脱水された培地が存在することと相俟って、前記栄養層の毛管能力を大きく増大させ、栄養層を実質的に瞬時に再水和させる。このことは、栄養層の表面に接して配置された別個の微生物学的濾過部材３２の吸引現象にも寄与する可能性がある。したがって、微生物学的濾過部材３２を栄養層３６に押し付けることができ、それによってこれらの２つの要素間に空間がないことまたは要素間の空間が低減することを保証することができる。このことは、微生物学的濾過部材３２の表面全体にわたる微生物の最適な増殖および／または生存にとって有益である。それによって、微生物学的濾過部材３２と栄養層３６とが別個の要素であるときに、それらの要素間の結合部材の存在を回避すること（例えば結合層の存在を回避すること）が可能である。そのような結合部材が、再水和させた栄養層３６から微生物学的濾過部材３２上に存在する微生物への栄養素および任意選択の添加物要素の移動を遅らせ、それによってそれらの微生物の増殖および／または生存の可能性を低減させる限りにおいて、このことは重大な利点となる。

微生物学的濾過部材３２は透水性フィルタを備え、この透水性フィルタは、特にその表面に微生物を保持する。微生物学的濾過部材３２が栄養層３６とは別個であるケースでは、微生物学的濾過部材３２が、微生物学的濾過部材３２の下に位置する栄養層３６に含まれる栄養素および任意選択の添加物要素に対して透過性である。このフィルタは多孔体を含むことができ、この多孔体は、その性質、そのサイズ、その立体配置によってこれらの特性を有する材料から形成されたものとすることができる。この多孔体は、細孔の配置によってこれらの特性を有するものとすることができる。

微生物学的濾過部材３２は例えば、ラテックス、ポリテトラフルオロエチレン、ポリ（ビニリデン）フロリド、ポリカーボネート、ポリスチレン、ポリアミド、ポリスルホン、ポリエーテルスルホン、セルロース、セルロースとニトロセルロースの混合物のうちの１つもしくは複数の材料またはこれらの材料の誘導体に基づくものとすることができる。優先的には、微生物学的濾過部材３２は、栄養層３６に含まれる栄養素および任意選択の添加物要素に対して透過性の多孔膜の形態で製造され、その表面に微生物を保持することができる。微生物学的濾過部材３２は栄養層３６の全体を覆っていることが好ましい。水（および一般的に言って液体）用の現在販売されている精密濾過膜は一般に微生物学的濾過部材３２として使用するのに必要な特性を有していることを本出願の出願人は見出した。それらの精密濾過膜は、取扱い中の引き裂きに対する良好な抵抗性、制御された空隙率、滑らかな表面、薄さ、および大部分の時間の高水準の親水性を得ることを可能にする。一般に白色である精密濾過膜の色は、膜の表面の有色のコロニーの区別を最適化することを可能にする。そのような濾過膜の濾過能力および親水性は、微生物学的濾過部材３２の上面の濾過された細菌、酵母などの反対方向の移動を防止または制限しつつ、（任意選択で再水和後の）栄養層中に存在する栄養素および任意選択の添加物要素の微生物学的濾過部材３２の上面に向かっての移動を可能にし、そのような移動を最適化するために利用される。本出願の目的上、上述の濾過膜は、区別なしに、「濾過膜」、「精密濾過膜」またはそうでなければ「フィルタリング膜」と呼ばれ、これらの表現は互いに同義である。これらの濾過膜は、多孔膜から形成されたグループに含まれる。

微生物学的濾過部材３２は、栄養培地の要素の移動および選択的作用因子または試薬の移動を可能にする。細菌、酵母および糸状菌を濾過部材の表面に保持するために、濾過部材が、０．０１から０．８ミクロンの間、優先的には０．２ミクロンから０．６ミクロンの間の直径を有する細孔を含むと有利である。特定の実施形態によれば、濾過部材が、０．２５ミクロンから０．６ミクロンの間、例えば０．３ミクロンから０．６ミクロンの間またはそうでなければ０．４ミクロンから０．６ミクロンの間の直径を有する細孔を含む。あるいは、濾過部材を、測定可能な細孔を持たない透析膜などの層とすることもできる。

微生物学的濾過部材は例えば、Ｆｉｓｈｅｒ Ｓｃｉｅｎｔｉｆｉｃ Ｃｏｍｐａｎｙ Ｌ．Ｌ．Ｃ（３００ Ｉｎｄｕｓｔｒｙ Ｄｒｉｖｅ，Ｐｉｔｔｓｂｕｒｇｈ，ＰＡ １５２７５，ＵＳＡ）によって販売されている「Ｆｉｓｈｅｒｂｒａｎｄ（商標） Ｇｅｎｅｒａｌ Ｆｉｌｔｒａｔｉｏｎ Ｍｅｍｂｒａｎｅ Ｆｉｌｔｅｒｓ」濾過膜、またはそうでなければＺｅｆｏｎ Ｉｎｔｅｒｎａｔｉｏｎａｌ，Ｉｎｃ．（５３５０ ＳＷ １ｓｔ Ｌａｎｅ，Ｏｃａｌａ，ＦＬ ３４４７４、ＵＳＡ）によって製造されている「Ｎｉｔｒｏｃｅｌｌｕｌｏｓｅ Ｍｅｍｂｒａｎｅ Ｆｉｌｔｅｒｓ」濾過膜、または同種の膜とすることができる。

いくつかの変形実施形態では、栄養層が、微生物学的濾過部材３２と統合されており、微生物学的濾過部材３２が微生物学的培地の担体の役目を果たす。このケースでは、栄養層が微生物学的濾過部材３２と接触していることが理解される。

本発明に基づく微生物学的試験装置１０は、分析対象液体のための入口ポート４０を備える。入口ポート４０は、閉じられた内部空間の境界をチャンバが画定するような態様で微生物学的試験装置１０が組み立てられたときに、例えばカバー１６が本体１４に組み付けられたときに、チャンバによって境界が画定された閉じられた内部空間の内側に、閉じられた内部空間１２の外側から分析対象液体を導入することを可能にする。

図示された例示的実施形態では、入口ポート４０が、閉じられた内部空間１２の第１の区画１２ａに開いた内側部分４２と、分析対象液体の容器に接続するための外側部分４４とを備える。この容器はおそらく、例えば注射器、管、パウチ、漏斗などである。

図示された例では、入口ポート４０が、中心軸Ａ１に沿って垂直に配置されている。有利には、この入口ポートがカバー１６上に配置されており、この事例では例えばカバー１６の横断壁２２の中心に配置されている。

入口ポート４０の内側部分４２は、分析対象液体のための別個のいくつかの通過を備える分配器５６を備えることができる。このような分配器５６は、入口ポート４０を介して導入された分析対象液体を、微生物学的濾過部材３２の表面積のより大きな部分にわたって分配することを促進する。特に、この例示的実施形態のこの構成のケースでは、入口ポート４０の内側部分４２が、オリフィスを有する分配器５６を備えることができる。オリフィスはそれぞれ、中心軸Ａ１に関して半径方向に沿って少なくとも部分的に開いており、オリフィスは、入口ポート４０の中心軸Ａ１の周りを角度に関して一周して分布していることが好ましい。

入口ポート４０の外側接続部分４４は、容器に連結するための要素を備えることができる。外側接続部分４４はそれ自体が漏斗の形状を有することができる。外側接続部分４４はさらに、入口ポート４０に容器をドッキングさせるための機械式ドッキング部材を備えることができる。

入口ポート４０を封鎖するため、微生物学的試験装置１０は、例示的実施形態では入口ポートの内側部分４２と外側部分４４の間に挿入された、開放／閉鎖部材４６を備え、開放／閉鎖部材４６は、開放／閉鎖部材の閉鎖状態において、入口ポート４０を通した微生物学的試験装置１０の閉じられた内部空間１２と外側との間のガスの流通を防ぐ。

入口ポート４０は再閉鎖が可能なポートであることが好ましい。図示のケースであるこのケースでは、開放／閉鎖部材４６が弁を備えることができる。このような弁は、開放状態から閉鎖状態に、および閉鎖状態から再び開放状態に逐次的に何度か切り換えることができるものであることが好ましい。

いくつかのケースでは、開放／閉鎖部材が、漏れが生じない密な膜を備えることができ、この膜を破くことによって開放／閉鎖部材は開放状態に置かれることができる。このシナリオではこの膜を再び閉鎖することはできない。このケースでは、外側接続部分４４に２次的開放／閉鎖部材を追加することにより、入口ポート４０を再び閉鎖することを可能にすることができる。このような２次的開放／閉鎖部材（図示せず）は例えば、キャップ、漏れが生じない密な膜または栓によって形成することができる。

このような２次的開放／閉鎖部材は、上述の弁型開放／閉鎖部材が存在する場合にも提供することができることに留意されたい。このような２次的開放／閉鎖部材は例えば、弁のガスを通さない性質（ｇａｓ－ｔｉｇｈｔｎｅｓｓ）、特に空気を通さない性質（ａｉｒｔｉｇｈｔｎｅｓｓ）を補強すること、特に使用前の装置１０の保管期間中の長期にわたるガスを通さない性質を補強することを可能にする。

両方のケースにおいて、このような２次的開放／閉鎖部材は、使用前の装置１０の保管期間中、入口ポートを汚染から保護することを可能にする。

図示された例では、組み立てられた後に、微生物学的試験装置１０が、閉じられた内部空間１２と外側との間の流体連通のための単一のポート、このケースでは入口ポート４０だけを備える。図示された例では、閉じられた内部空間１２の第２の区画１２ｂに、閉じられた内部空間の外側と流体連通したポートがないことに留意されたい。しかしながら、このことは、微生物学的試験装置１０が、入口ポート４０を含む流体連通のためのいくつかのポートであって、その全てが閉じられた内部空間の第１の区画１２ａに開いたいくつかのポートを備えることができることを妨げない。

これらの例示的実施形態では、微生物学的濾過部材３２の厚さが、微生物学的濾過部材３２の広がりに比べて小さい。例えば、濾過部材の直径は５０ミリメートルよりも大きく、例えば８０から１００ミリメートルの間にある。濾過部材の厚さは数ミリメートル程度であり、一般に５ミリメートル未満である。

微生物学的試験装置１０が、微生物学的濾過部材３２および栄養層３６のための支持体４８を備えることも有利である。

支持体４８は、微生物学的濾過部材３２および栄養層３６を、第１の区画１２ａと第２の区画１２ｂの間のそれらの位置に保持することを可能にする。

図示された第１の例示的実施形態では、微生物学的濾過部材３２および栄養層３６のための支持体４８が、第２の区画１２ｂ内に配置された支持仕切り５０を含む。

例えば、支持仕切り５０は、平らな形態を有することができ、それぞれ、中心軸Ａ１を含む半径方向平面（ｒａｄｉａｌ ｐｌａｎｅ）内に配置することができる。支持仕切り５０は例えば、本体１４の底壁１８から延びることができ、微生物学的濾過部材３２および栄養層３６が直接的または間接的に垂直方向下方へ押すことができる上縁５２を有することができる。図示されたこの第１の例では、それぞれの支持仕切り５０が、直径に沿って第２の区画１２ｂの全体を横切って延びており、したがって、本体１４の周囲側壁２０の直径に沿って対向する２つの部分によって横断方向の限界が定められている。この特定の実施形態では、支持仕切り５０が、その上縁５２を介してその支持機能を果たすことが理解される。図示された例では、支持仕切り５０の上縁５２が全て、中心軸Ａ１に対して直角な同じ横断面内にある。

それにもかかわらず、支持仕切り５０自体の間で、支持仕切り５０は、支持仕切り５０自体の間で、第２の区画１２ｂ内において、この第２の区画１２ｂの下位区画（ｓｕｂｄｉｖｉｓｉｏｎ）の境界を画定している。第２の区画１２ｂ内のこのような支持仕切り５０の両側の流体の流れを可能にするため、前記仕切りに孔をあけることができる。図示された例では、支持仕切り５０に貫通開口５４を設けることが選択されており、貫通開口５４は、これらの支持仕切り５０のうちの１つの支持仕切り５０によって分離された第２の区画１２ｂの隣り合う２つの下位区画間の流体連通を可能にする。これらの貫通開口５４は任意選択である。図示された例では、貫通開口５４が、実質的に中間に位置する低い１つの点から中心軸Ａ１の方向に沿って第２の区画１２ｂ内を上方へ延びるスリットの形態で形成されており、上縁５２で開く形で開いている。これらの貫通開口は全体的に見て異なる幾何学的形状を有することができ、例えば穴、特に丸穴の形態で形成することができる。貫通開口は必ず上縁５２で開いているとは限らない。

図示された例では、支持仕切り５０がさらに、装置のチャンバを機械的に補強すること、特に、チャンバの内側と外側の間の圧力の差に対するチャンバの抵抗性をより高めることを可能にする。

微生物学的濾過部材３２のための支持体４８はさまざまに製作することができる。例えば、中心軸Ａ１に対して直角な横断面内に広がるスクリーンの形態で支持体４８を製作することができる。そのようなスクリーンは例えば、本体１４の座面２８に載せることによって支持することができる。微生物学的濾過部材３２のための支持体は、本体１４の横断方向の底壁１８から軸Ａ１の方向に沿って垂直に延びる１本または複数本の柱の形態で製作することができる。微生物学的濾過部材３２のための支持体は、周囲側壁２０の内面から横断方向に延びる１本または複数本の腕木（ｂｒａｃｋｅｔ）の形態で製作することもできる。

図５から７に示された第２の例では、濾過部材のための支持体４８がスクリーン４９を構成している。このようなスクリーンは、交差したワイヤのネットワークによってまたは交差したバーのネットワークによって形成することができる。図５から７に示された例では、このスクリーンが、第１の区画と第２の区画の間に中心軸Ａ１に対して直角に広がる多孔プレート（ｐｅｒｆｏｒａｔｒｅｄ ｐｌａｔｅ）によって形成されている。図示されたケースでは、このスクリーン４９が、本体１４の周囲側壁２０とともに単一の部品として製作されている。多孔プレートの形態のこのスクリーン４９は、特に微生物学的濾過部材３２があまり硬くない場合に、微生物学的濾過部材３２のためのより良好な支持を提供することが理解される。その結果、特に濾過工程を実行するときに、微生物学的濾過部材３２および栄養層３６の平面度がより良好になる。

図示された例では、このプレートが、本体１４内で、本体１４の内径の全体にわたって広がっている。このプレートは、周囲側壁２０の円筒形の内面から中心軸Ａ１に向かって半径方向に広がる環状外周部分５１を有する。プレートの外周部分５１は中実である。すなわち孔があけられていない。このプレートは、この外周部分の中心に、孔のあいた中心部分を有し、この部分がスクリーン４９を形成している。孔のあいた中心部分４９の上面は、外周部分の上面から一段下がっている。このようにすると、外周部分５１が、プレートの上面に、凹部の境界を画定し、凹部の直径は、孔のあいた中心部分４９の直径に一致する。図示された例では、濾過部材３２および栄養層３６が、凹部の直径に等しいかまたはそれよりも小さい外径を有する。したがって、この凹部に、濾過部材３２および栄養層３６を収容することができ、この凹部に入れられた濾過部材３２および栄養層３６は半径方向に動かない。第１の例示的実施形態とは違い、この第２の例示的実施形態では、濾過部材３２および栄養層３６が、カバー１６と本体１４の間に締め付けられていないことに留意されたい。

下から見た図である図６では、第２の例示的実施形態が、第２の区画１２ｂ内に仕切り５３を備えていることに留意されたい。仕切り５３は、濾過部材を直接に支持する機能に加えて、第１の例示的実施形態の支持仕切りと同じ機能および実質的に同じ幾何学的形状を有する。

支持体４８は、閉じられた内部空間の第１の区画と第２の区画の間の流体の流れに対して限られた抵抗または無視できる抵抗を形成するように寸法が決められる。多孔プレートのケースでは、例えば、中心軸Ａ１に沿った投影内の孔５５の累積の全表面積が、濾過部材３２の表面積の少なくとも３０％、好ましくは濾過部材の表面積の少なくとも５０％に相当することが保証される。多孔プレートは、濾過部材３２の表面積の少なくとも５０％、好ましくは少なくとも７０％に相当する画定された円の内側に分布した多数の孔５５を有する（より小さな円が全ての孔を含む）。想定される例では、孔５５の数が２０よりも多く、好ましくは５０よりも多い。しかしながら、より大きな孔を使用したり、任意選択で例えば星形、扇形などの異なる幾何学的形状を使用したりすれば、より少数の孔を使用することもできる。

図示された例では、微生物学的濾過部材３２のための支持体４８が、本体１４とともに単一の部品として製作されている。しかしながら、この支持体を、１つまたは複数の独立した部品の形態で製作することもできる。そのような部品は、単純に第２の区画１２ｂの内側に置くことができ、または、例えば接着結合によって、溶接によって、スナップ留めによって、もしくはインタロッキングによって本体１４に組み付けることができる。

図示された例では、微生物学的濾過部材３２と濾過部材のための支持体４８との間に栄養層３６が配置されていることに留意されたい。

有利には、栄養層３６は、微生物学的濾過部材３２と微生物学的濾過部材３２の支持体４８との間に局所的に固定されると規定することが可能である。例えば、カバー１６が支持要素を備えることができ、これらの支持要素は例えば、微生物学的試験装置が組み立てられたときにカバー１６のこれらの支持要素と支持体４８との間に微生物学的濾過部材３２および栄養層３６が固定されるような態様で、１つまたは複数の支持仕切り５０の上縁に対応する。図示された例では、微生物学的試験装置の中心で微生物学的濾過部材３２および栄養層３６を支持体４８に押し付けるためのそのような支持要素を、分配器５６が下面に有する。

図示された例では、閉じられた内部空間１２の第２の区画１２ｂの容積が閉じられた内部空間の第１の区画１２ａの容積よりも大きい。閉じられた内部空間１２の第２の区画１２ｂの容積は、閉じられた内部空間の第１の区画１２ａの容積の少なくとも２倍、好ましくは少なくとも３倍であることが好ましい。一実施形態では、１００ミリリットル試料を分析するように構成された装置に関して、この体積の分析対象液体の全体を含むことができるようにするために、閉じられた内部空間１２の第２の区画１２ｂの容積が、例えば少なくとも１００ミリリットル、好ましくは１００ミリリットル超、１５０ミリリットル未満である。チャンバによって境界が画定された閉じられた内部空間の全容積は例えば１２０から３００ミリリットルの間であり、この全容積は例えば１５０ミリリットルである。

使用前の微生物学的試験装置１０を提供するための構成では、開放／閉鎖部材４６が、入口ポート４０および閉じられた内部空間１２を空気を通さないよう密に閉鎖する閉鎖状態にある。

したがって、提供するためのこの構成では、微生物学的試験装置１０が、漏れが生じないよう密に閉鎖されており、チャンバによって境界が画定された閉じられた内部空間１２と外側との間の可能なガス連通がない。提供するためのこの構成では、チャンバによって境界が画定されたこの閉じられた内部空間１２の内側に、微生物学的濾過部材３２および栄養層３６が含まれており、それによって、分析対象液体からの潜在的な微生物を微生物学的濾過部材３２上に集めるため、ならびに検出、計数、特徴付けおよび／または同定目的でそれらの微生物を増殖させることを可能にするために分析対象液体を濾過するための、そのまま使用できる微生物学的試験装置を形成している。

さらに、使用前の微生物学的試験装置１０を提供するためのこの構成では、閉じられた内部空間の内側の絶対ガス圧が、開放／閉鎖部材４６の第１の開放中に、この装置が、入口ポートを通した吸引を生じさせることができるような初期減圧圧力値にある。

上の２つの段落の結果は、使用前の微生物学的試験装置１０を提供するためのこの構成においては、チャンバによって境界が画定されたこの閉じられた内部空間１２に試料を導入する前に、チャンバによって境界が画定されたこの閉じられた内部空間１２の内側に、微生物学的濾過部材３２および微生物学的培地の組成物を含む栄養層３６が含まれており、閉じられた内部空間の内側の絶対ガス圧が、開放／閉鎖部材４６の第１の開放中に、この装置が、入口ポートを通した吸引を生じさせることができるような初期減圧圧力値にあるというものである。

この目的のため、温度２５℃に対する閉じられた内部空間（１２）の内側の絶対ガス圧の初期減圧圧力値が、２５℃における標準大気圧１バールよりも厳密に低い。

実際問題として、この吸引現象を反映して、開放／閉鎖部材の最初の開放中の所定の体積の液体の装置の内部空間への進入は、内部空間内の初期圧力が大気圧に等しいケースよりも迅速になる。

初期減圧圧力の精確な値が精確に分かっている必要はないことに留意されたい。実際、この値はとりわけ、所定の体積の分析対象試料の少なくとも一部または全部を装置の内側に吸引するのに十分なものとなるように決定される。

この値は、装置の内側に分析対象試料を入れるために標準大気圧よりも高い圧力を分析対象試料にかける必要なしに、所定の体積の分析対象試料の全体を装置が装置の内側に吸引することができる十分なものとなるように決定されることが好ましい。

この初期減圧圧力値は、所定の体積の分析対象試料の進入中に内部空間から流体を排出することなしに所定の体積の分析対象試料の全体が内部空間に進入すること可能にする十分に低いものであることが好ましい。このことは、装置内への試料全体の容易な進入を保証することを可能にする。このことはさらに、装置内への試料の進入中に、装置内に最初から含まれている要素、特に培地の要素が外部へ広がることを防ぐことを可能にする。

当業者は、任意選択の少数の試験によって補足された初期評価により、装置の所望の初期減圧圧力を、装置を使用するために想定される条件（装置のチャンバによって境界が画定された閉じられた内部空間１２の全容積、試料の体積、装置を使用するときの温度および圧力条件など）に応じて決定することができる。

実際問題として、所望の初期減圧圧力は以下のように求めることができる。チャンバによって境界が画定された閉じられた内部空間１２の全容積ＶＴを考える。続いて、分析を実行するために装置１０に導入することができることが望まれる分析対象試料の所定の体積ＶＥを決定する。続いて、これらの値から、所定の体積の分析対象試料が内部空間に進入した後の内部空間内の最終的な自由容積ＶＬを導き出す。したがって、この最終的な自由容積ＶＬは、チャンバによって境界が画定された閉じられた内部空間１２の全容積ＶＴから、分析を実行するために装置１０に導入することができることが望まれる分析対象試料の所定の体積ＶＥを引いたものに等しい。
ＶＬ＝ＶＴ－ＶＥ

次いで、試料を含む液体だけが導入され、温度はあまり変動しないと仮定して、試料の進入の直前の瞬間とこの試料の進入の直後の瞬間との間のチャンバによって境界が画定された閉じられた内部空間１２内の条件の変動に、理想気体の法則を近似として適用する。試料のこの進入を反映して、提供するためのこの構成における閉じられた内部空間の内側の絶対ガス圧の値である初期減圧圧力値Ｐｉから、所定の体積の分析対象試料の進入後の内部空間の内側の絶対ガス圧値である最終的な値Ｐｆに圧力が変動する。

したがって、下式が得られ、
Ｐｆ×ＶＬ＝Ｐｆ×（ＶＴ－ＶＥ）＝Ｐｉ×ＶＴ
この式は下式を与える。
Ｐｉ＝Ｐｆ×（ＶＴ－ＶＥ）／ＶＴ＝Ｐｆ×ＶＬ／ＶＴ

この式から、使用前の微生物学的試験装置１０を提供するための構成では、初期減圧圧力と呼ばれる閉じられた内部空間１２の内側の絶対ガス圧が、所定の体積の分析対象試料の進入後の内部空間内の最終的な自由容積を内部空間の全容積で除した比を大気圧に乗じた積よりも厳密に低いことが好ましいことが導き出される。

実際問題として、標準大気圧の値は、２５℃において１バールに任意に固定することができる。

実際問題として、試料の体積ＶＥは一般に、少なくとも２０ミリリットル、好ましくは少なくとも５０ミリリットル、より優先的には少なくとも１００ミリリットルでなければならないと考えられる。他方、試料の体積ＶＥは一般に、３００ミリリットル以下、好ましくは２００ミリリットル以下、より優先的には１５０ミリリットル以下でなければならないと考えられる。

内部空間の全容積ＶＴが１５０ミリリットルである装置のケースでは、１００ミリリットルの試料体積ＶＥに対して、上記の迅速な計算が、絶対圧力３３３ミリバールよりも厳密に低い、使用前の装置を提供するための構成における閉じられた内部空間１２の内側の絶対ガス圧の所望の初期減圧圧力を与える。しかしながら、実際問題として、定式化されたこの仮説と実験の現実との間の相違に関連する近似を考慮して、絶対圧力３００ミリバールよりも厳密に低い初期減圧圧力を提供することが好ましい。より優先的には、特に装置内への試料の急速な進入を促すために、絶対圧力２００ミリバールよりも厳密に低い初期圧力を提供することが好ましい。

したがって、内部空間の全容積ＶＴが３００ミリリットルである装置に関しては、絶対圧力６６６ミリバールよりも厳密に低い所望の初期減圧圧力が決定され、好ましくは、絶対圧力６００ミリバールよりも厳密に低い初期減圧圧力、より優先的には絶対圧力４００ミリバールよりも厳密に低い初期減圧圧力が決定されることが好ましいことに留意されたい。

上記の値は、所与の装置および所与の使用条件に対するものを含む、指示的な値であることに留意されたい。実際、装置内の初期減圧圧力が上記の値よりも現実に低い方がよりいっそう好都合であろう。

実際問題として、これらの値は、本発明に基づく装置を開発するための基礎の役目を果たすことができ、装置の適切な動作を可能にする製造条件は、少数のルーチンの試験によって容易に決定される。

したがって、上記の値は、たとえそれが、不確実性が５０ミリバールという大きなものになる場合を含め、初期減圧圧力の実際の値に関する不確実性に帰着する場合であっても、入口ポートの入り口に開放／閉鎖部材４６にできるだけ近づけてマノメータを接続することによって測定することができる。

このことは、微生物学的試験装置を準備するときに、閉じられた内部空間内に少なくとも部分的な真空が生み出されることを意味する。この少なくとも部分的な真空は例えば、真空下での組立て、または少なくとも、いずれのケースでも２５℃において１バールよりも厳密に低い所望の初期減圧圧力よりも低い圧力もしくは所望の初期減圧圧力に等しい圧力の下での組立てによって生み出されたもの、あるいは微生物学的試験装置の組立て後の閉じられた内部空間の減圧によって生み出されたものとすることができる。

使用前の微生物学的試験装置１０を提供するためのこの構成では、閉じられた内部空間が一切の外部吸引源から隔離されていることが理解される。したがって、このことは、閉鎖状態にあるチャンバおよび入口ポート４０が、ガスを通さない、特に空気を通さないものであると規定する必要性を説明する。このことは、当業者に知られている手段によって達成される。

したがって、図示された例では、カバー１６と本体１４が、空気を通さないよう密に組み立てられている。

この組立てを、例えば微生物学的濾過部材３２を取り出すために使用後に破壊することなく微生物学的試験装置を開けることを可能にする、分解することができる組立てとすることができる。分解することができる組立ては、例えばカバー１６上および本体１６上にそれぞれ配置された相補的なねじ山を使用して生み出すことができる。図示された構成では、このような相補的なねじ山（図示せず）をそれぞれ、カバー１６の円筒形のスカート２６の外面および本体１４の周縁側壁２０の上端の内面に適合することができる。分解することができる組立ての別の可能な例は、バヨネット組立てのシステムによって得ることができる。分解することができる組立てのさらに別の例は、外部組立てフランジを提供することによって、または本体１４にカバー１６を組み付けるためのねじを提供することによって得ることができる。

この組立てを、使用後に破壊することなく微生物学的試験装置１０を開けることを可能にしない、例えば接着結合による、溶接によるまたはリベット締めによる、分解することができない組立てとすることもできる。

必要なガスを通さない性質、特に空気を通さない性質を提供するため、特に分解することができる組立てのケースでは、本体１４とカバー１６の間に１つまたは複数のシール（図示せず）を提供することが可能である。

使用前に微生物学的試験装置を提供するための構成では、栄養層３６の微生物学的培地が脱水されていると有利である。次いで、使用時にこの微生物学的培地が再水和されると規定される。この再水和は、分析対象液体自体によって達成されてもよい。

実際、微生物学的濾過部材３２および栄養層３６は、閉じられた内部空間の第１の区画１２ａと第２の区画１２ｂとの間の流体交換が、微生物学的濾過部材３２および栄養層３６を通して起こるように配置される。したがって、流体が、微生物学的濾過部材３２または栄養層３６を迂回して、第１の区画１２ａから第２の区画１２ｂに移動することを不可能にすることが可能である。図示された実施形態では、このことが、微生物学的濾過部材３２および栄養層３６が、微生物学的試験装置の閉じられた内部空間１２の断面の全体にわたって、閉じられた内部空間の第１の区画１２ａと第２の区画１２ｂの間に広がっていることによって可能になる。

有利には、第２の区画内に吸水材が配置されていると規定することができる。図示された例では、支持仕切り５０間の第２の区画１２ｂの１つ、いくつかまたは全ての下位区画にそのような材料を配置することができる。吸収材は、さまざまな吸収性化合物、好ましくは、レーヨン、綿、天然セルロース繊維、化学的に改質されたセルロース繊維、例えばカルボキシメチルセルロース、吸収性または超吸収性化学ポリマー、例えばポリアクリル酸塩、アクリル酸／アクリルアミド共重合体などの非常に高い保水能力を有する吸収性化合物に基づくものとすることができる。したがって、このような材料は、Ｔｅｃｈｎｉｃａｌ Ａｂｓｏｒｂｅｎｔｓ Ｌｉｍｉｔｅｄ（１ Ｍｏｏｄｙ Ｌａｎｅ，Ｇｒｅａｔ Ｃｏａｔｅｓ、Ｇｒｉｍｓｂｙ，ＤＮ３１ ２ＳＳ，Ｕｎｉｔｅｄ Ｋｉｎｇｄｏｍ）から、「Ｓｕｐｅｒ Ａｂｓｏｒｂｅｎｔ Ｆｉｂｒｅ（ＳＡＦ（登録商標））」の商品名のものを入手することができる。

有利には、微生物学的試験装置のチャンバをポリマー材料でできたものとすることができる。しかしながら、少なくとも部分的にガラスから製作することを含め、他の材料からチャンバを製作することも可能である。図示された例では、本体１４、カバー１６および支持体４８を、同じ材料でできたものまたは異なる材料でできたものとすることができる。

微生物学的試験装置のチャンバは、少なくとも１つの透明部分を含むことが好ましい。特に、この透明部分は、第１の区画１２ａの方を向いた微生物学的濾過部材３２の上面の少なくとも一部分を観察者が見ることができるように配置することができる。この透明部分は、第１の区画１２ａの方を向いた微生物学的濾過部材３２の上面の全体を観察者が見ることができるように配置されていることが好ましい。これが好ましいのは、この面が、インキュベーション後に潜在的微生物が目に見える面であるためである。したがって、図示された例では、チャンバの透明部分が、少なくともカバー１６の横断壁２２に配置されていることが好ましい。カバー１６の全体を透明とすることができる。いくつかの実施形態では、チャンバの全体が透明な材料でできていると規定される。チャンバの透明部分は例えばポリ（メタクリル酸メチル）（ＰＭＭＡ）またはガラスでできている。

したがって、上述の微生物学的試験装置は、少なくとも１種類の微生物を含む傾向がある分析対象液体を試験するための方法において使用されるように構成されている。

そのような使用では、微生物学的試験装置が、前もって、使用前に提供するための構成で提供される。上に示したとおり、この構成では、微生物学的試験装置が、閉じられた内部空間１２内に漏れが生じないよう密に含まれる微生物学的濾過部材３２および栄養層３６を有し、この閉じられた内部空間内では、いずれのケースでも、温度２５℃に対する閉じられた内部空間の内側の絶対ガス圧に対して、初期減圧圧力に対応する、１バールよりも厳密に低い陰圧レベルが優勢である。

少なくとも１種類の微生物を含む傾向がある分析対象液体を試験するための微生物学的試験装置を提供するためには、最初に、
－ 分析対象液体を受け入れるように構成された閉じられた内部空間１２の境界を画定するように提供されたチャンバであり、例えば本体１４およびカバー１６の形態のチャンバと、
－ 閉じられた内部空間１２内に配置されるように、および、閉じられた内部空間内において、閉じられた内部空間の第１の区画１２ａを閉じられた内部空間の第２の区画１２ｂから分離するように提供された微生物学的濾過部材３２と、
－ 閉じられた内部空間の第１の区画１２ａに開くように提供された、分析対象液体のための入口ポート４０であり、例えば、閉じられた内部空間の第１の区画１２ａに開くように提供された内側部分４２と外側接続部分４４とを備えることができる入口ポート４０と
を上述のとおり備える微生物学的試験装置を提供する必要がある。

さらに、使用前に提供するための方法は、閉じられた内部空間の内側に受け入れられるように提供された栄養層３６であり、微生物学的培地の組成物を含む栄養層３６を提供することを含み、栄養層３６は濾過部材と接触するように構成されている。上に示したとおり、この栄養層３６は、微生物学的濾過部材３２とは別個のものとすることができ、または、変形実施形態として、栄養層と微生物学的濾過部材とが互いに統合されていると規定することが可能である。

本発明によれば、提供するための構成にある微生物学的試験装置を提供するための方法は、使用する前に、したがって分析対象液体の容器に接続する前に、
－ 閉じられた内部空間１２の内側の絶対ガス圧を下げる減圧工程と、
－ 閉じられた内部空間１２を空気を通さないよう密に閉鎖する閉鎖工程と
を逐次的にこの順序で含む。

この減圧工程の時点で、上述の要素を備える微生物学的試験装置１０は、チャンバが閉鎖されており、上記の要素を含むような形で既に組み立てられたものとすることができることに留意されたい。このケースでは、微生物学的試験装置の閉じられた内部空間１２を吸引源、例えば真空ポンプに、例えば入口ポート４０を通して接続することにより、減圧工程を実行することができ、したがって入口ポート４０は開放状態にある。それによって、所望の初期減圧圧力まで圧力を下げる。この初期減圧圧力は、いずれのケースでも温度２５℃に対して１バールよりも厳密に低い。

別の変形実施形態では、減圧工程が組立工程に付随して実行される。実際、図示された例では例えば、チャンバを閉鎖することを可能にする、したがって閉じられた内部空間１２の境界を画定することを可能にする、本体１４へのカバー１６の組付けを、所望の初期減圧圧力に等しいかまたはそれよりも低い絶対ガス圧下で、すなわち特に温度２５℃に対する１バールよりも厳密に低い圧力下で実行することができると規定することが可能である。

上記第１のケースでは、閉鎖工程が、所望の初期減圧圧力に等しいかまたはそれよりも低い絶対ガス圧がまだ存在している間に、入口ポート４０の弁を閉じること、またはシール膜を配置することにあることができる。上記第２のケースでは、閉鎖工程が、本体１４にカバー１６を漏れが生じないよう密に組み付けることにあることができる。このことはチャンバを閉鎖することを可能にする。このケースでは、入口ポート４０の開放／閉鎖部材が予め閉鎖状態にあることが好ましい。

このようにして、チャンバによって境界が画定された閉じられた内部空間１２の内側に微生物学的濾過部材３２および栄養層３６が位置し、閉じられた内部空間１２が、初期減圧圧力と呼ばれる所定の初期陰圧レベルにある、提供するための構成にある微生物学的試験装置１０を得る。この所定の初期陰圧レベルは、所定のしきい値よりも低い閉じられた内部空間内のガス圧に対応し、この所定のしきい値は、それ自体が標準大気圧よりも厳密に低く、この所定のしきい値は例えば、２５℃に対して絶対圧力２００ミリバールである。

提供するためのこの構成で微生物学的試験装置の保管、輸送などを実施することができること、および提供するためのこの構成では、微生物学的試験装置の閉じられた内部空間１２に分析対象液体が導入されていないことに留意されたい。

本発明に基づく微生物学的試験装置の使用は、閉じられた内部空間１２の内側に入口ポート４０を介して分析対象液体を導入することに対応する。この導入は一般に、分析対象液体が入った容器を入口ポート４０に接続することに対応する。このような接続は、容器と入口ポート４０との間に流体接続が確立されていると単純に仮定するさまざまな形態をとることができる。この接続は、流体を通さない接続、好ましくはガスを通さない接続、特に空気を通さない接続であることが好ましい。この接続は、容器と入口ポート４０との間の機械的ドッキングを含むことができる。

したがって、本発明に基づく微生物学的試験装置の使用は、
－ 分析対象液体の容器を入口ポート４０に、特に例示的実施形態では入口ポート４０の外側接続部分４２に接続することにある工程と、
－ 容器から微生物学的試験装置の閉じられた内部空間１２に向かって分析対象液体が通過することを可能にするために入口ポートの開放／閉鎖部材４６を開放することにある工程と
を含む。

入口ポートの開放／閉鎖部材４６を開放するこの工程は、提供するための方法中の閉じられた内部空間１２を漏れが生じないよう密に閉鎖するための閉鎖工程後の開放／閉鎖部材の第１の開放である。

所定の初期陰圧レベルが特に重要な役割を有するのはこの工程においてである。実際、この陰圧の存在は、微生物学的試験装置の閉じられた内部空間１２への分析対象液体の導入を促進する。このことは、一方で、分析対象液体が初期に例えば大気圧である場合に、分析対象液体に吸引現象が加えられることによる。他方では、このことが、この所定の陰圧レベルを反映して、分析対象液体の導入前に微生物学的試験装置内に存在するガスが、分析対象液体の導入中に対応する量のガスを微生物学的試験装置が排出する必要がないよう、少量であることによる。このことは、微生物学的試験装置の閉じられた内部空間内への分析対象液体の進入を容易にするだけでなく、最初に微生物学的試験装置内に含まれていた粒子または分子が外部へ放出されることも防ぐ。

微生物学的試験装置の使用の、開放／閉鎖部材の開放が容器から閉じられた内部空間１２への分析対象液体の通過を可能にするこの工程の間、閉じられた内部空間１２を一切の外部吸引源から隔離することができることに留意されたい。実際、この吸引は、提供するための方法中に閉じられた内部空間１２を空気を通さないよう密に閉鎖するための閉鎖工程後の装置の最初の開放の前に装置内に初期減圧圧力が存在するおかげで有利に得られる。

したがって、本発明に基づく微生物学的試験装置１０への入口ポート４０を通した分析対象液体の導入は、最初に、閉じられた内部空間１２の第１の区画１２ａに液体が導入され、次いで、分析対象液体が、微生物学的濾過部材３２とおのずと接触することを可能にする。したがって、分析対象液体は、潜在的微生物のうちの少なくとも一部、特に想定される試験の標的である微生物が微生物学的濾過部材３２によって保持されるような形で、この微生物学的濾過部材３２によって濾過される。他方、分析対象液体の液体部分は、閉じられた内部空間１２の第２の区画１２ｂの方へ移動する。そのためには、少なくともこの工程に関しては、微生物学的試験装置が、図に示された向きを向いており、閉じられた内部空間１２の第２の区画１２ｂが第１の区画よりも下に位置し、これらの２つの区画が、図示された例ではそのときには水平な１つの平面に沿って広がっている微生物学的濾過部材３２によって互いに分離されていることが有利であることが理解される。

分析対象液体は栄養層３６の再水和を可能にする。栄養層３６は濾過部材と接触しているため、栄養素および任意選択の添加物要素は、微生物学的濾過部材３２によって保持されている微生物の方へ移動することができる。したがって、微生物学的試験装置１０が有利な環境、特に有利な温度の下に置かれている場合、微生物学的試験装置１０を開ける必要なしに、いずれにしても微生物学的試験装置１０のチャンバから微生物学的濾過部材３２を取り出す必要なしに、微生物学的試験装置１０自体の内側で微生物のインキュベーションを達成することが可能である。

したがって、本発明に基づく微生物学的試験装置１０の使用は、微生物学的試験装置の閉じられた内部空間１２の内側に分析対象液体を導入する工程の後に、
－ 入口ポート４０の開放／閉鎖部材４６を閉鎖することにある後続の工程と、
－ 分析対象液体中に潜在的に最初に含まれる微生物を、微生物学的試験装置内でインキュベートすることにある後続の工程と
を含むことができる。

そのようなインキュベーション期間の後、この使用は、特に微生物学的試験装置のチャンバの透明部分を通して見ることにより、分析対象液体中に潜在的に最初に含まれる微生物を視覚的に検出し、計数し、同定し、かつ／またはその特徴を明らかにすることにある後続の工程を含むことができる。ここでも、微生物学的試験装置１０を開ける必要なしにこの試験工程を実行することができ、したがって、潜在的微生物がその上に位置する微生物学的濾過部材３２は、微生物学的試験装置１０の閉じられた内部空間内に留まる。

本発明には本発明の範囲を逸脱しないさまざまな変更が加えられる可能性があるため、本発明は、記載された例および図示された例だけに限定されない。

Claims (23)

1. 少なくとも１種類の微生物を含む傾向がある分析対象液体を試験するための微生物学的試験装置（１０）であって、
   － チャンバによって境界が画定された閉じられた内部空間（１２）であり、分析対象液体を受け入れるように構成された閉じられた内部空間（１２）と、
   － 閉じられた内部空間（１２）内に配置された微生物学的濾過部材（３２）であり、閉じられた内部空間内において、閉じられた内部空間の第１の区画（１２ａ）を閉じられた内部空間の第２の区画（１２ｂ）から分離する微生物学的濾過部材（３２）と、
   － 分析対象液体のための入口ポート（４０）であり、閉じられた内部空間の第１の区画（１２ａ）に開いた入口ポート（４０）と
   を備えるタイプの微生物学的試験装置（１０）において、
   微生物学的試験装置（１０）が、閉じられた内部空間の内側に、微生物学的培地の組成物を含む栄養層（３６）を備え、栄養層（３２）が濾過部材（３２）と接触していること、微生物学的試験装置の入口ポート（４０）が開放／閉鎖部材（４６）を備えること、ならびに、使用前の微生物学的試験装置（１０）を提供するための構成において、
   － 入口ポート（４０）の開放／閉鎖部材（４６）が、入口ポート（４０）および閉じられた内部空間（１２）を空気を通さないよう密に閉鎖するための閉鎖状態にあり、
   － 開放／閉鎖部材（４６）の第１の開放中に、この装置が入口ポートを通した吸引を生じさせることができるように、温度２５℃に対する閉じられた内部空間（１２）の内側の絶対ガス圧が、２５℃における標準大気圧１バールよりも厳密に低いこと
   を特徴とする微生物学的試験装置（１０）。
2. 使用前の微生物学的試験装置（１０）を提供するための構成において、閉じられた内部空間（１２）が一切の外部吸引源から隔離されていることを特徴とする、請求項１に記載の微生物学的試験装置。
3. 使用前の装置（１０）を提供するための構成において、栄養層（３６）の微生物学的培地が脱水されていることを特徴とする、請求項１または２に記載の微生物学的試験装置。
4. 濾過部材（３２）および栄養層（３６）のための支持体（４８）を備えることを特徴とする、請求項１から３のいずれか一項に記載の微生物学的試験装置。
5. 栄養層（３６）が、濾過部材（３２）と濾過部材（３２）のための支持体（４８）との間に局所的に固定されていることを特徴とする、請求項４に記載の微生物学的試験装置。
6. 濾過部材（３２）のための支持体（４８）が、第２の区画（１２ｂ）内に配置された支持仕切り（５０）を含むことを特徴とする、請求項４または５に記載の微生物学的試験装置。
7. 濾過部材（３２）のための支持体（４８）が、閉じられた内部空間を横切って第１の区画（１２ａ）と第２の区画（１２ｂ）の間に広がるスクリーン（４９）を備えることを特徴とする、請求項４または５に記載の微生物学的試験装置。
8. 第２の区画（１２ｂ）内に吸水材が配置されていることを特徴とする、請求項１から７のいずれか一項に記載の微生物学的試験装置。
9. 入口ポート（４０）の開放／閉鎖部材（４６）が弁を備えることを特徴とする、請求項１から８のいずれか一項に記載の微生物学的試験装置。
10. 微生物学的試験装置のチャンバが、第２の区画（１２ｂ）の境界を少なくとも部分的に画定する少なくとも１つの本体（１４）を備え、第１の区画（１２ａ）の境界を少なくとも部分的に画定するカバー（１６）を備え、本体とカバーが、微生物学的試験装置を形成するために一緒に組み立てられる別個の部分から形成されていることを特徴とする、請求項１から９のいずれか一項に記載の微生物学的試験装置。
11. 微生物学的試験装置のチャンバが少なくとも１つの透明部分を含むことを特徴とする、請求項１から１０のいずれか一項に記載の微生物学的試験装置。
12. 入口ポート（４０）が、分析対象液体のための別個のいくつかの通路を備える分配器（５６）を備えることを特徴とする、請求項１から１１のいずれか一項に記載の微生物学的試験装置。
13. 使用前の微生物学的試験装置（１０）を提供するための構成において、閉じられた内部空間（１２）の内側の絶対ガス圧が、所定の体積の分析対象試料の進入を、所定の体積の分析対象試料の進入中に内部空間から流体を排出することなしに可能にするような絶対ガス圧であることを特徴とする、請求項１から１２のいずれか一項に記載の微生物学的試験装置。
14. 使用前の微生物学的試験装置（１０）を提供するための構成において、閉じられた内部空間（１２）の内側の絶対ガス圧が、所定の体積の分析対象試料の進入後の内部空間内の最終的な自由容積を内部空間の全容積で除した比を標準大気圧に乗じた積よりも厳密に低いことを特徴とする、請求項１から１３のいずれか一項に記載の微生物学的試験装置。
15. 使用前の微生物学的試験装置（１０）を提供するための構成において、温度２５℃に対する閉じられた内部空間（１２）の内側の絶対ガス圧が、絶対圧力６００ミリバールよりも厳密に低く、好ましくは絶対圧力３００ミリバールよりも厳密に低く、より優先的には絶対圧力２００ミリバールよりも厳密に低いことを特徴とする、請求項１から１４のいずれか一項に記載の微生物学的試験装置。
16. 少なくとも１種類の微生物を含む傾向がある分析対象液体を試験するための微生物学的試験装置を提供するための方法であって、
    － 分析対象液体を受け入れるように構成された閉じられた内部空間（１２）の境界を画定するように提供されたチャンバと、
    － 閉じられた内部空間内に配置されるように、および、閉じられた内部空間内において、閉じられた内部空間の第１の区画（１２ａ）を閉じられた内部空間の第２の区画（１２ｂ）から分離するように提供された微生物学的濾過部材（３２）と、
    － 分析対象液体のための入口ポート（４０）であり、閉じられた内部空間（１２）の第１の区画（１２ａ）に開いた入口ポート（４０）と
    を備える微生物学的試験装置（１０）を提供することを含むタイプの方法において、
    この方法が、閉じられた内部空間（１２）の内側に受け入れられるように提供された栄養層（３２）であり、微生物学的培地の組成物を含む栄養層（３２）を提供することを含み、栄養層（３６）が濾過部材（３２）と接触していること、および、
    この方法が、微生物学的試験装置（１０）を分析対象液体の容器に接続する前に、
    － 温度２５℃に対する閉じられた内部空間（１２）の内側の絶対ガス圧を、１バールよりも厳密に低い圧力まで下げる減圧工程と、
    － 閉じられた内部空間（１２）を空気を通さないよう密に閉鎖する閉鎖工程と
    を逐次的にこの順序で含むこと
    を特徴とする方法。
17. 所定の体積の分析対象試料の進入を、所定の体積の分析対象試料の進入中に内部空間から流体を排出することなしに可能にするような値まで、減圧工程が、閉じられた内部空間（１２）の内側の絶対ガス圧を下げることを特徴とする、請求項１６に記載の方法。
18. 所定の体積の分析対象試料の進入後の内部空間内の最終的な自由容積を内部空間の全容積で除した比を標準大気圧に乗じた積よりも厳密に低い値まで、減圧工程が、閉じられた内部空間（１２）の内側の絶対ガス圧を下げることを特徴とする、請求項１６または１７に記載の微生物学的試験方法。
19. 絶対圧力６００ミリバールよりも厳密に低く、好ましくは絶対圧力３００ミリバールよりも厳密に低く、より優先的には絶対圧力２００ミリバールよりも厳密に低い値まで、減圧工程が、温度２５℃に対する閉じられた内部空間（１２）の内側の絶対ガス圧を下げることを特徴とする、請求項１６から１８のいずれか一項に記載の微生物学的試験方法。
20. 少なくとも１種類の微生物を含む傾向がある分析対象液体を試験するための方法における請求項１から１５のいずれか一項に記載の微生物学的試験装置の使用。
21. － 分析対象液体の容器を入口ポート（４０）に接続することにある工程と、
    － 受器から閉じられた内部空間（１２）に向かって分析対象液体が通過することを可能にするために入口ポート（４０）の開放／閉鎖部材（４６）を開放することにある工程と
    含むことを特徴とする、請求項２０に記載の使用。
22. － 入口ポート（４０）の開放／閉鎖部材（４６）を閉鎖することにある後続の工程と、
    － 分析対象液体の容器を外すことにある後続の工程と、
    － 分析対象液体中に潜在的に最初に含まれる微生物を、微生物学的試験装置（１０）内でインキュベートすることにある後続の工程と
    を含むことを特徴とする、請求項２１に記載の使用。
23. 微生物学的試験装置（１０）のチャンバの透明部分を通して見ることにより、分析対象液体中に潜在的に最初に含まれる微生物を視覚的に検出し、計数し、同定し、かつ／またはその特徴を明らかにすることにある後続の工程を含むことを特徴とする、請求項２２に記載の使用。

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