JP7178069B2

JP7178069B2 - 除菌剤

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Publication number: JP7178069B2
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Inventors: 和昭浦田
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Publication date: 2022-11-25
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Description

本発明は、除菌剤に関する。

環境負荷や人体への安全性に対する意識の高まりを背景に、天然由来の除菌剤の需要が高まっている。天然由来の除菌剤には、例えば、グレープフルーツ抽出物や茶カテキンなどを利用したものがある。

その他にも、天然由来の除菌剤として、洗浄力、除菌力、および消臭力を有するナノソイ・コロイド（登録商標）を利用したものがある。ナノソイ・コロイドは、少なくとも大豆脂肪酸といった植物脂肪酸（不飽和脂肪酸）、レシチン、および精製水を混合し、高速で撹拌して生成された、ナノ化した植物脂肪酸を含む水溶性コロイド溶液である（特許文献１，２、および非特許文献１参照）。

ナノソイ・コロイドは、ブラウン運動を行い、対象物に付着した油といった汚れ成分のイオン結合を破壊し、微生物が食べやすくすることで対象物を洗浄することができる。また、ナノソイ・コロイドは、菌やウイルスの周りを取り囲み、それらの構成分子を引き抜くため、菌はただの細胞に、ウイルスはタンパク質へと変化させることにより、除菌ができる。

特許４１３３８２３号特開２０１５－５４９６６号公報

ＷＩＴｇｒｏｕｐインターネット＜ＵＲＬ：http://wit-g.com/＞、［２０２１年３月２５日検索］

現在、ナノソイ・コロイドは、用途に応じて、主に原液を水もしくはお湯で５～１０００倍に希釈して用いられている。希釈して用いるナノソイ・コロイド以外の洗剤も、水もしくはお湯で希釈するものがほとんどである。ところで、原液を希釈して用いる場合に、希釈濃度や希釈液の種類によって効果が変わることがある。そこで、ナノソイ・コロイドといった、微粒子化（好ましくは、ナノ化）した大豆脂肪酸（不飽和脂肪酸）を含む水溶性コロイド溶液を、水またはお湯以外の希釈液を用いることで、原液を水またはお湯で希釈した場合の効果を向上させることや、異なる効果を生じることが考えられる。

そこで、本発明は、上記事実を考慮して、微粒子化した大豆脂肪酸（不飽和脂肪酸）を含む水溶性コロイド溶液を弱アルカリイオン水で希釈し、除菌効果を向上させた除菌剤を提供することを目的とする。

本発明の１又はそれ以上の実施形態は、少なくとも大豆脂肪酸、レシチン、および精製水を混合撹拌して生成された、微細粒子化した大豆脂肪酸を含む水溶性コロイド溶液１体積部に対して、ＰＨ８．８～９．９の弱アルカリイオン水を１．５～１９体積部混和して得られる除菌剤である。

本発明の１又はそれ以上の実施形態は、ＰＨ１０．０～１０．５である除菌剤である。

本発明の１又はそれ以上の実施形態は、前記弱アルカリイオン水が、弱アルカリ温泉水である除菌剤である。

本発明の１又はそれ以上の実施形態は、前記弱アルカリイオン水が、硬度２以下である、除菌剤である。

本発明の１又はそれ以上の実施形態は、前記水溶性コロイド溶液がナノソイ・コロイド（登録商標）であって、および／または前記弱アルカリイオン水が温泉水９９（登録商標）である除菌剤である。

本発明の１又はそれ以上の実施形態は、除菌対象が、大腸菌、サルモネラ菌、黄色ブドウ球菌、緑膿菌、レジオネラ菌、ネコ伝染性腹膜炎ウイルス、およびインフルエンザウイルスからなる群より選ばれる少なくとも１種である除菌剤である。

本発明によれば、微少粒子化した大豆脂肪酸（不飽和脂肪酸）を含む水溶性コロイド溶液を弱アルカリイオン水で希釈し、除菌効果を向上させた除菌剤を提供する。

以下、本発明の除菌剤（以下、本発明除菌剤という）について、説明する。本発明において、除菌剤は、増殖可能な菌やウイルスを対象物から一定数減少させることができるものをいい、除菌効果があるとは、増殖可能な菌やウイルスを対象物から一定数減少させる効果があることをいう。なお、本発明は、以下に説明する内容に限定されるものではなく、その要旨を逸脱しない範囲において、種々変更可能である。

（除菌剤の製法）
本発明除菌剤は、微少粒子化した大豆脂肪酸（不飽和脂肪酸）を含む水溶性コロイド溶液（以下、原液という）と弱アルカリイオン水とを混和して生成する。詳細には、原液１体積部に対して、ＰＨ８．８～９．９の弱アルカリイオン水を１．５～１９体積部混和して生成する。言い換えると、本発明除菌剤は、希釈液に弱アルカリイオン水を用いて、原液を２．５～２０体積倍希釈して生成する。原液１体積部に対し、ＰＨ８．８～９．９の弱アルカリイオン水は、好ましくは４～１４体積部、特に好ましくは、４～９体積部である。生成された本発明の除菌剤は、ｐＨ１０．０～１０．５、好ましくは、ｐＨ１０．１～１０．３、特に好ましくは、ｐＨ１０．２～１０．３である。

希釈方法は、特に制限はなく、原液に弱アルカリイオン水を注いでもよいし、弱アルカリイオン水に原液を注いでもよい。また、注ぐだけで原液と弱アルカリイオン水とは混ざり合うので、注いだ後、撹拌しなくともよい。希釈条件も、特に制限はないが、常温下、大気圧下で行うのが好ましい。

（水溶性コロイド溶液の製法）
次に、原液となる、微少粒子化した大豆脂肪酸（不飽和脂肪酸）を含む水溶性コロイド溶液の製法について説明する。原液は、少なくとも大豆脂肪酸、レシチン、および精製水を混合して、撹拌により分子の切断を行い、ブラウン運動を行うことが可能な大きさの微細粒子（ナノ粒子）とした大豆脂肪酸を含む水溶液である。

微細粒子の大きさは、上述したようにブラウン運動が可能であれば特に限定されないが、好ましくは、ナノサイズである。微細粒子の粒径は、例えば０．１～１０００ｎｍ、１～９００ｎｍ又は５～８００ｎｍである。微細粒子の粒径は、ふるい分け法、沈降法、顕微鏡法、光散乱法、レーザー回折・散乱法、電気的抵抗試験、透過型電子顕微鏡による観察及び走査型電子顕微鏡による観察等の公知の方法で測定できる。粒径は公知の粒度分布計で測定してもよい。粒径は、複数の粒子を測定対象として、平均で表した平均粒径、体積平均粒径及び面積平均粒径等であってもよい。また、粒径は、レーザー回折・散乱法等の測定に基づく個数分布等から算出される平均粒径であってもよい。

例えば、特許文献１の製法では、まず、大豆脂肪酸１４～２２重量部、レシチン２～４重量部、アルカノールアミド６～１４重量部、イソオクチルフェノキシポリエトキシエタノール２５重量部、補助添加剤としてエチレンジアミン四酢酸３重量部、および蒸留水４２重量部を含む混合物を高速で撹拌する。次に、撹拌した混合物に対して鹸化工法を適用して、ブラウン運動を行うことが可能な大きさの微細な分子を含む溶液を得る。そして、溶液に対して水分とＰＨの調節を行って、原液を得る。

また、特許文献２の製法では、大豆脂肪酸３５～４５重量部、レシチン３～５重量部、１．３－ブチレングリコール３～５重量部、精製水４５～５９重量部を混合し、急速正逆回転せん断撹拌機で数分撹拌し、乳化されコロイド状の混合物を生成する。次に、生成したコロイド状の混合物に酸化を防ぐα－トコフェロール３～５重量部と鹸化剤として苛性カリ５～１０重量部を入れて、急速正逆回転せん断撹拌機で数分撹拌し、ナノ化した大豆脂肪酸（不飽和脂肪酸）を含む原液を得る。

（弱アルカリイオン水）
次に、希釈液である弱アルカリイオン水について説明する。希釈液に用いる弱アルカリイオン水は、ｐＨ８．０～１１．０の弱アルカリ性の水であり、好ましくは、ｐＨ８．８～９．９、特に好ましくは、ｐＨ９．５～９．９である。希釈液に用いる弱アルカリイオン水は、水道水の電気分解等により人工的に製造されたものであってもよいが、天然の弱アルカリイオン水であるのが好ましく、より好ましくは、天然の弱アルカリ温泉水であって、例えば、温泉水９９（登録商標エスオーシー株式会社 https://www.onsensui.com/company/）である。

ここで、天然の弱アルカリイオン水とは、世界各地で湧出しているアルカリイオン濃度の高い天然水であり、人工的に製造された弱アルカリイオン水と比べ、ｐＨの経時的変化が小さいまたはないと言われている水である。温泉水９９においては、ペットボトルに密閉された状態で４年間保存しても、ｐＨの変化はほぼない。

希釈液とする弱アルカリイオン水は、軟水であるのが好ましく、特に硬度２以下の軟水であるのが好ましい。カルシウムやマグネシウムの金属イオン含有量が少ない程、微細粒子化した大豆脂肪酸が水中で安定すると考えられるためである。

（希釈倍率とｐＨ）
次に、原液と希釈液との希釈倍率とｐＨについて、原液にナノソイ・コロイド（登録商標）、希釈液に温泉水９９を用いる場合を例に説明する。

後述するように、本発明除菌剤として、原液のナノソイ・コロイドを希釈液の温泉水９９で２．５，５，１０，１５，２０体積倍した除菌剤（以下、それぞれ本発明除菌剤２．５，５，１０，１５，２０という）は、除菌効果を有する。一方、原液のナノソイ・コロイドを希釈液の精製水で５，１０体積倍した除菌剤（以下、それぞれ比較除菌剤５，１０という）も、除菌効果を有する。しかしながら、比較除菌剤５よりも本発明除菌剤５の方が、また、比較除菌剤１０よりも本願除菌剤１０の方が、除菌効果が高い。

これらのことから、本発明除菌剤２．５，５，１０，１５，２０は、原液のナノソイ・コロイドを希釈液の精製水で２．５，５，１０，１５，２０体積倍した除菌剤よりも除菌効果が高いといえる。

ここで、表１に、ナノソイ・コロイド、温泉水９９、およびナノソイ・コロイドを温泉水９９で５，１０，１５，２０体積倍に希釈した際のｐＨを示す。５，１０，１５，２０体積倍に希釈した際のｐＨから、２．５倍希釈した際のｐＨは、１０．４と推定できる。ところで、ナノソイ・コロイドおよび温泉水９９のｐＨには幅があり、ナノソイ・コロイドはｐＨ１０．０～１１．０、温泉水はｐＨ９．５～９．９である。そのため、原液を希温泉水９９で２．５～２０体積倍に希釈した本願除菌剤はｐＨ１０．０～１０．５の範囲にあるといえる。

（除菌剤の保存）
本発明除菌剤は、長期間保存しても除菌の効果を維持できる。ここで、長期間とは、２か月以上、更には半年以上である。一方、原液の希釈液に精製水を用いた場合には、時間の経過とともに除菌効果が下がってくる。これは、本発明除菌剤は、生成後半年以上経過しても、見た目や臭いに変化がないのに対し、比較除菌剤５は、生成後１ヵ月以上経過すると、腐敗臭がしたり水色が変化したりし始める。これは、比較除菌剤５内に菌が繁殖したためであり、比較除菌剤５の除菌効果が下がっていることを示している。このように、本発明除菌剤は、比較除菌剤５よりも除菌効果が長期間維持できる。

（除菌剤の効果）
本発明除菌剤は、大腸菌、サルモネラ属菌、黄色ブドウ球菌、緑膿菌、レジオネラ属菌、黒カビ、ネコ伝染性腹膜炎ウイルス（ＦＩＰＶ）、およびインフルエンザウイルスに対して、除菌効果がある。

具体的には、緑膿菌およびレジオネラ属菌は、本発明除菌剤５を添加後１分で菌数が１／１００以下で菌数が検出できないレベルまで減少し、本発明除菌剤５は緑膿菌およびレジオネラ属菌に対して短時間で強い除菌効果がある。黄色ブドウ球菌は、本発明除菌剤２．５，５，１０，１５，２０を添加後１分で菌数は１／１００以下、５分で菌数が１／１００以下で菌数が検出できないレベルまで減少し、本発明除菌剤２．５，５，１０，１５，２０は黄色ブドウ球菌に対しても短時間で強い除菌効果がある。

大腸菌は、本発明除菌剤５，１０，１５，２０を添加後１分または５分で菌数は１／１０程度、３０分以上で菌数が１／１００以下でほぼ菌数が検出できないレベルまで減少し、時間を要するものの本発明除菌剤５，１０，１５，２０は大腸菌に対して除菌効果がある。また、本発明除菌剤２．５は、大腸菌に添加後１分で菌数が１／１００以下で菌数が検出できないレベルまで減少し、短時間で強い除菌効果がある。黒カビは、本発明除菌剤５を添加後１分で菌数は１／２以下、３０分以上で菌数は１／５以下に減少し、本発明除菌剤５は黒カビに対して弱い除菌効果がある。サルモネラ属菌は、本発明除菌剤５を添加後５分で菌数は１／２程度、３０分以上で菌数は１／３程度に減少し、本発明除菌剤５はサルモネラ属菌に対して弱い除菌効果がある。

これらのことから、本発明除菌剤５の上記細菌への除菌効果の強さは、緑膿菌，レジオネラ属菌＞黄色ブドウ球菌＞大腸菌＞黒カビ＞サルモネラ属菌である。

一方、比較除菌剤５（原液を精製水で５体積倍に希釈したもの）においても、上記細菌に対しての除菌効果があるものの、本発明除菌剤と比較すると除菌効果が低い。例えば、比較除菌剤５では、黄色ブドウ球菌では、菌数が１／１００以下でほぼ菌数が検出できないレベルまで減少するのは添加後３０分以上であり、大腸菌では添加後一時間以上でも菌数が１／１０程度までしか減少しないことから、本発明除菌剤５よりも上記細菌に対する除菌効果が低いといえる。よって、希釈液に精製水ではなく弱アルカリイオン水を用いた本発明除菌剤５は、上記細菌に対して除菌効果が向上している。

ネコ伝染性腹膜炎ウイルス（ＦＩＰＶ）については、原液を弱アルカリイオン水である温泉水９９で２０～１６０倍希釈した本発明除菌剤５よりも希薄な除菌剤を添加した場合に、添加後１０分でネコ伝染性腹膜炎ウイルスを検出限界以下に抑制することができ、除菌効果があった。このことから、本発明除菌剤５よりも希薄な除菌剤でネコ伝染性腹膜炎ウイルス（ＦＩＰＶ）に対する除菌効果があるので、本発明除菌剤５でも、ネコ伝染性腹膜炎ウイルスの除菌効果があるといえる。

一方、原液を精製水で２０～８０倍希釈した比較除菌剤５よりも希薄な除菌剤を添加した場合に、添加後１０分でネコ伝染性腹膜炎ウイルスを検出限界以下に抑制することができ、除菌効果があった。ネコ伝染性腹膜炎ウイルスを検出限界以下に抑制することができる希釈倍率の上限は、希釈液が弱アルカリイオン水である温泉水である場合には１６０倍希釈であったのに対し、希釈液が精製水である場合には、８０倍希釈であることから、比較除菌剤５は本発明除菌剤よりもネコ伝染性腹膜炎ウイルス（ＦＩＰＶ）に対する除菌効果が低いといえる。よって、希釈液に精製水ではなく弱アルカリイオン水を用いた本発明除菌剤５は、ネコ伝染性腹膜炎ウイルス（ＦＩＰＶ）に対して除菌効果が向上している。

インフルエンザウイルスについては、本発明除菌剤５を添加後１分で９９．９９９％の不活性効果があり、本発明除菌剤５はインフルエンザウイルスに対して除菌効果がある。更には、本発明除菌剤５はインフルエンザウイルスに対して殺菌効果があるということができる。

一方、比較除菌剤５では、インフルエンザウイルスに比較除菌剤５を添加後１分で９９．９７５％、５分で９９．９９０％であったことから、比較除菌剤５は本発明除菌剤５よりもインフルエンザウイルスに対する除菌効果または殺菌効果が低いといえる。よって、希釈液に精製水ではなく弱アルカリイオン水を用いた本発明除菌剤５は、インフルエンザウイルスに対して除菌効果または殺菌効果が向上している。

以上説明したように、本発明除菌剤は、微細粒子化した大豆脂肪酸（不飽和脂肪酸）を含む水溶性コロイド溶液（原液）１体積部に対し弱アルカリイオン水（希釈液）を１．５～１９体積部混和して生成される。本発明除菌剤は、大腸菌、サルモネラ属菌、黄色ブドウ球菌、緑膿菌、レジオネラ属菌、黒カビ、ネコ伝染性腹膜炎ウイルス（ＦＩＰＶ）、およびインフルエンザウイルスに対して、除菌効果を有する。本発明除菌剤の除菌効果は、希釈液に精製水を用いた場合と比較して、向上している。

なお、本発明除菌剤に、防腐剤（例えば、フェノキシエタノール、１，２－ヘキサンジオール、天然植物エキス）、酸化防止剤（例えば、ビタミンＥトコフェロール、天然植物エキス）、香料（天然香料や合成香料）などを添加してもよい。

以下に示す実施例１～５を用いて、本発明除菌剤の効果について説明する。実施例において、原液には、ナノソイ・コロイド（株式会社ウイットＮＳＣ－Ｂａｓ）を用いた。希釈液の温泉水９９は、株式会社エスオーシー株式会社のものを用いた。なお、本実施例において、菌数が少なくとも１／２程度以下に減少することを除菌効果があるという。

＜実施例１＞
表２に、原液を温泉水９９で５体積倍希釈して生成した本発明除菌剤５の殺菌試験結果を示す。表３に、原液を精製水で５体積倍希釈して生成した比較除菌剤５の殺菌試験結果を示す。表４に、原液を精製水で１０体積倍希釈して生成した比較除菌剤１０の殺菌試験結果を示す。なお、本殺菌試験は、株式会社微生物研究所に依頼し行った。

本発明除菌剤５および比較除菌剤１０による殺菌試験方法は、大腸菌、サルモネラ属菌、黄色ブドウ球菌、肺炎桿菌、緑膿菌は標準寒天培地（極東製薬工業株式会社）で３５±１℃、２４時間、レジオネラ属菌はＧＶＰＣ寒天培地（日水製薬株式会社）で３５±１℃、３～７日間、黒カビはサブロー寒天培地（極東製薬工業株式会社）で２５±１℃、４８時間培養し、菌体を生理食塩水に懸濁した。それぞれの懸濁液を、Ｖｉ－ＳｐｅｃII（極東製薬株式会社）を用いて吸光度を測定しながら、菌数がおよそ５×１０^６～２×１０^７ＣＦＵ／ｍＬになるよう生理食塩水で希釈し、これを菌液とした。

試験品（本発明除菌剤５、比較除菌剤１０それぞれ）３ｍＬに菌液３０μＬを接種し（これを試験溶液とする。ｎ＝３で行った。）、さらに精製水もしくは温泉水９９の３ｍＬに菌液３０μＬを接種したもの（対象溶液）を同時に作製し、これらを室温で一定時間（初発［対照のみ］、１分、５分、３０分、１時間、２時間）作用させた。作用後、試験溶液、対照溶液を生理食塩水で１００倍希釈し、そこから１００μＬずつ平板培地に塗抹した。その後、大腸菌、サルモネラ属菌、黄色ブドウ球菌、肺炎桿菌、緑膿菌は標準寒天培地で３５±１℃、２４時間、レジオネラ属菌はＧＶＰＣ寒天培地で３５±１℃、３～７日間、黒カビはサブロー寒天培地で２５±１℃、４８時時間培養し、菌のコロニーをカウントした。なお、試験品の殺菌効果無効化のための事前検討として、生理食塩水で１００倍希釈した試験品１ｍＬと、生理食塩水１ｍＬに菌液を１０μＬ接種し、１分後に１００μＬを平板に塗布し、培養後のコロニーの数に差が無いことを確認した。

比較除菌剤５による殺菌試験方法は、大腸菌、黄色ブドウ球菌、緑膿菌は標準寒天培地（極東製薬工業株式会社）で３５±１℃、２４時間、レジオネラ属菌はＧＶＰＣ寒天培地（日水製薬株式会社）で３５±１℃、４８時間培養し、菌体を生理食塩水に懸濁した。それぞれの懸濁液を、ＵＶｍｉｎｉ―１２４０（ＳＨＩＭＡＤＺＵ）を用いて吸光度を測定しながら、菌数がおよそ１～２×１０^７ＣＦＵ／ｍＬになるよう生理食塩水で希釈し、これを菌液とした。

試験品（比較除菌剤５）３ｍＬに菌液３０μＬを接種し（これを試験溶液とする。ｎ＝３で行った。）、これらを室温で一定時間（初発［対照のみ］、１分、５分、３０分、１時間、２時間）作用させた。作用後、試験溶液、対照溶液を生理食塩水で１００倍希釈し、そこから１００μＬずつ平板培地に塗抹した。その後、大腸菌、黄色ブドウ球菌、緑膿菌は標準寒天培地で３５±１℃、２４時間、レジオネラ属菌はＧＶＰＣ寒天培地で３５±１℃、７２時間培養した、菌のコロニーをカウントした。なお、試験品の殺菌効果無効化のための事前検討として、生理食塩水で１００倍希釈した試験品１ｍＬと、生理食塩水１ｍＬに菌液を１０μＬ接種し、１分後に１００μＬを平板に塗布し、培養後のコロニーの数に差が無いことを確認した。

表２，４から、本発明除菌剤５および比較除菌剤１０は、大腸菌、サルモネラ属菌、黄色ブドウ球菌、緑膿菌、レジオネラ属菌に対して、除菌効果があることがわかる。また、表２から、本発明除菌剤５は、更に黒カビにも除菌効果があることがわかる。表３からは、比較除菌剤５は、大腸菌、黄色ブドウ球菌、緑膿菌、レジオネラ属菌に対して、除菌効果があることがわかる。

表２，３から、大腸菌および黄色ブドウ球菌に対して、比較除菌剤５よりも本発明除菌剤５の方が、菌数の減少が早いことがわかる。このことから、同じ希釈倍率において、希釈液を精製水から温泉水９９とすることで、大腸菌および黄色ブドウ球菌において除菌効果が向上していることがわかる。また、表２，４から、希釈倍率が異なるものの、比較除菌剤１０は黒カビに対して除菌効果がほぼないのに対し、本願除菌剤５は、黒カビに対して除菌効果があることから、本願除菌剤５の方が、黒カビに対する除菌効果が向上していることがわかる。

以上のことから、本発明除菌剤５は、大腸菌、サルモネラ属菌、黄色ブドウ球菌、緑膿菌、レジオネラ属菌、黒カビに対する除菌効果があることがわかる。また、原液の希釈液に、精製水用いるよりも温泉水９９を用いた場合の方が、大腸菌、サルモネラ属菌、黄色ブドウ球菌、緑膿菌、レジオネラ属菌、黒カビに対する除菌効果が高いことがわかる。

＜実施例２＞
表５に、原液を温泉水９９で２，５、１０、１５、２０体積倍希釈して生成した本発明除菌剤２，５、１０、１５、２における、大腸菌の殺菌試験結果を示す。表６に、原液を温泉水９９で２，５、１０、１５、２０体積倍希釈して生成した本発明除菌剤２，５、１０、１５、２０における、黄色ブドウ球菌の殺菌試験結果を示す。なお、本殺菌試験は、株式会社日本微生物研究所に依頼し行った。

本殺菌試験方法は、大腸菌、黄色ブドウ球菌は標準寒天培地（極東製薬工業株式会社）で３５±１℃、２４時間培養し、菌体を生理食塩水に懸濁した。それぞれの懸濁液を、吸光度計ＵＶminｉ－１２４０（ＳＨＩＭＡＤＺＵ）を用いて吸光度を測定しながら、菌数がおよそ１～２×１０^７ＣＦＵ／ｍＬになるよう生理食塩水で希釈し、これを菌液とした。

試験品３ｍＬに菌液３０μＬを接種し（これを試験溶液とする。ｎ＝３で行った。）、これらを室温で一定時間（初発［対照のみ］、１分、５分、３０分）作用させた。作用後、試験溶液および対照溶液を生理食塩水で希釈して殺菌作用を無効化した。温泉水２．５倍および人工アルカリイオン水５倍希釈の黄色ブドウ球菌については、１０００倍希釈の場合は１ｍＬを３枚の平板培地に塗抹した。その他の倍率の黄色ブドウ球菌および大腸菌については、１００倍希釈の場合は１００μを平板培地に塗抹した。

その後、大腸菌および黄色ブドウ球菌は、標準寒天培地で３５±１℃、２４時間培養し、菌のコロニーをカウントした。なお、試験品の殺菌効果無効化のための事前検討として、生理食塩水で１００倍希釈した試験品１ｍＬと、生理食塩水１ｍＬに菌液を１０μＬ接種し、１分後に１００μＬを平板に塗布し、培養後のコロニーの数の比較を行った。無効化が確認できなかった温泉水２．５倍および人工アルカリイオン水５倍希釈の黄色ブドウ球菌はについては、１０００倍希釈で同様の実験を行い、無効化が確認できた。

表５，６から、本発明除菌剤は、２．５体積倍、１０体積倍、１５体積倍、２５体積倍に希釈しても大腸菌、黄色ブドウ球菌に除菌効果があることがわかる。本発明除菌剤５の除菌効果の強さが、上述したように緑膿菌，レジオネラ属菌＞黄色ブドウ球菌＞大腸菌＞黒カビ＞サルモネラ属菌であることから、２．５体積倍、１０体積倍、１５体積倍、２５体積倍に希釈した除菌剤は、少なくとも緑膿菌，レジオネラ属菌＞黄色ブドウ球菌＞大腸菌に除菌効果があると言える。

＜実施例３＞
表７に、原液を人工アルカリイオン水で５体積倍希釈して生成した本発明除菌剤の黄色ブドウ球菌の殺菌試験結果を示す。なお、本殺菌試験は、上述した実施例２の黄色ブドウ球菌の殺菌試験と同様の条件で行った。

人工アルカリイオン水とは、水を人工的に電気分解して作られた水であって、本実施例においては、キリンアルカリイオンの水（ｐＨ８．８～９．４硬度５５～５９）を用いた。

表７から、希釈に人工アルカリイオン水を用いても、黄色ブドウ球菌に除菌効果があることがわかる。このことから、天然、人工問わず弱アルカリイオン水で希釈することで、除菌効果が向上することが言える。

＜実施例４＞
表８，９に、希釈液として用いる温泉水９９および人工アルカリイオン水の黄色ブドウ球菌およびレジオネラ菌の殺菌試験結果を示す。なお、黄色ブドウ球菌の本殺菌試験は、上述した実施例２の黄色ブドウ球菌の殺菌試験と同様の条件で行った。レジオネラ菌については以下の通りである。

レジオネラ属菌はＧＶＰＣ寒天培地（日水製薬株式会社）で３５±１℃、４８時間培養し、菌体を生理食塩水に懸濁した。懸濁液を、ＵＶｍｉｎｉ―１２４０（ＳＨＩＭＡＤＺＵ）を用いて吸光度を測定しながら、菌数がおよそ１～２×１０^７ＣＦＵ／ｍＬになるよう生理食塩水で希釈し、これを菌液とした。

試験品３ｍＬに菌液３０μＬを接種し（これを試験溶液とする。ｎ＝３で行った。）、これらを室温で一定時間（初発［対照のみ］、１分、５分、３０分、１時間、２時間）作用させた。作用後、試験溶液、対照溶液を生理食塩水で１００倍希釈し、そこから１００μＬずつ平板培地に塗抹した。その後、レジオネラ属菌は標準寒天培地で３５±１℃、７２時間培養し、菌のコロニーをカウントした。なお、試験品の殺菌効果無効化のための事前検討として、生理食塩水で１００倍希釈した試験品１ｍＬと、生理食塩水１ｍＬに菌液を１０μＬ接種し、１分後に１００μＬを平板に塗布し、培養後のコロニーの数に差が無いことを確認している。

表８，９から、希釈液の温泉水９９および人工アルカリイオン水には除菌効果がほぼないことがわかる。このことから、本発明の除菌剤の除菌効果が向上したのは、希釈液の除菌効果によるものではなく、原液と希釈液との相互作用によるものであると言える。
＜実施例５＞
表１０に、原液を温泉水９９で２０体積倍、４０体積倍、８０体積倍、１６０体積倍、３２０体積倍、および６４０体積倍で希釈した温泉水希釈除菌剤のネコ伝染性腹膜炎ウイルス（ＦＩＰＶ）の増殖抑制効果試験結果を示す。表１１に、原液を精製水で２０体積、４０体積、８０体積、１６０体積、３２０体積、および６４０体積で希釈した水希釈除菌剤のネコ伝染性腹膜炎ウイルス（ＦＩＰＶ）の増殖抑制効果試験結果を示す。なお、本増殖抑制効果試験は、大阪府立大学大学院生命環境研究科獣医学専攻に依頼し行った。

原液を精製水または温泉水９９で、２０体積倍、４０体積倍、８０体積倍、１６０体積倍、３２０体積倍、および６４０体積倍に希釈した各希釈液を、希釈液９：ウイルス液１（体積）の割合で混合し、１０分、３０分、および１時間、室温で反応させた。対象として、精製水あるいは温泉水９９と同割合で混合したウイルス液と反応させた。ウイルスには、ネコ伝染性腹膜炎ウイルス７９－１１４６株（野外分離株）を用いた。

反応後のウイルス液をＤＭＥＭ培地で１０～１０^６倍まで１０段階希釈した。希釈したウイルスをシート状になったｆｃｗｆ細胞に接種し、２日間５％ＣＯ_２存在か３７度で培養後、ウイルスによる細胞変性効果を倒立顕微鏡で観察し、判定を行った。反応ならびにウイルス接種は、２回行い、それぞれについて、５０％組織培養感染量ＴＣＩＤ_５０／ｍＬをＢｅｈｒｅｎｓ－Ｋａｒｂｅｒ法で求めた。結果は２回ともほぼ同じであったので、１回の結果を表５，６とした。なお、細胞は、ネコ胎児由来株化細胞ｆｃｗｆ―４細胞をダルベッコ変法イーグル（ＤＭＥＭ）培地（日水製薬）に１０％濃度で牛胎児血清を加えて培養した。

表１０，１１から、温泉水希釈除菌剤では、１６０体積倍希釈までネコ伝染性腹膜炎ウイルスの増殖を検出限界以下に抑制することができることがわかる。原液を温泉水で１６０倍体積希釈までネコ伝染性腹膜炎ウイルスの増殖を検出限界以下に抑制することができるので、当然、本発明除菌剤についてもネコ伝染性腹膜炎ウイルスの増殖を検出限界以下に抑制することができるということができる。表６から、水希釈除菌剤では、８０体積倍希釈までネコ伝染性腹膜炎ウイルスの増殖を検出限界以下に抑制することができることがわかる。ネコ伝染性腹膜炎ウイルスの増殖を検出限界以下に抑制することができる希釈倍率は、水希釈除菌剤の場合、温泉水希釈除菌剤の１／２であることもわかる。また、表６からは、原液においてもネコ伝染性腹膜炎ウイルスの増殖を検出限界以下に抑制することができることがわかる。

以上のことから、本発明除菌剤は、ネコ伝染性腹膜炎ウイルスへの除菌効果があり、かつ原液の希釈液に、精製水用いるよりも温泉水９９を用いた場合の方が、ネコ伝染性腹膜炎ウイルスへの除菌効果が高いことがわかる。

＜実施例６＞
表１２に、原液を温泉水９９で５体積倍希釈した本発明除菌剤５、および原液を精製水で５体積倍希釈した比較除菌剤５のインフルエンザウイルスの不活性化効果試験結果を示す。なお、本不活性化効果試験は、株式会社食環境衛生研究所に依頼して行った。

本発明除菌剤５および比較除菌剤５それぞれ０．９ｍＬにウイルス液０．１ｍＬを添加して、それぞれの試験混合液を生成した。また、対照として、リン酸緩衝液０．９ｍＬにウイルス液０．１ｍＬを添加して、対照混合液を生成した。試験混合液および対照混合液は、生成後室温（２５℃）にて、試験開始後０，１，５分感作させた。上記の本発明除菌剤５および比較除菌剤５とウイルス液との希釈割合は、事前の細胞毒性試験において、本発明除菌剤５および比較除菌剤５それぞれの１０倍液において、細胞の発育不良が確認されてことにより決定した。インフルエンザウイルスには、ｓｗｉｎｅｉｎｆｌｕｅｎｚａｖｉｒｕｓＨ_１Ｎ_１ＩＯＷＡ株を用い、添加濃度は、１０^５ＴＣＩＤ_５０／ｍＬとした。

試験混合液および対照混合液それぞれについて、感作時間が経過した後、１０倍段階希釈し、９６ｗｅｌｌプレートに培養した細胞に１００μＬずつ接種した。判定は、３７℃、炭酸ガス培養（５％）で５日間培養した後、各ｗｅｌｌ内の培養上清を回収し、赤血球凝集反応によりウイルスの増殖の有無を確認し、その濃度を算出した。なお、細胞には、ＭＤＣＫ細胞（イヌ肝臓由来株化細胞）を用いた。

表１２から、対照では開始５分までウイルス量の変化は見られなかったのに対して、本発明除菌剤５は、開始１分で＜１０^２．５ＴＣＩＤ_５０／ｍＬ（検出限界未満）となっていることがわかる。（対照のウイルス量―本発明除菌剤５のウイルス量／対照のウイルス量）ｘ１００で算出する減少率（％）で表すと、本発明除菌剤５は９９．９９９％以上減少したことがわかる。また、表７から、比較除菌剤５は、開始１分で１０^３．９ＴＣＩＤ_５０／ｍＬ、開始５分後で１０^３．５ＴＣＩＤ_５０／ｍＬとなっていることがわかる。上述した減少率の式において、本発明除菌剤５のウイルス量を比較除菌剤５のウイルス量に代えて減少率を算出すると、開始１分で９９．９７５％減少、開始５分で９９．９９０％減少したことがわかる。

以上のことから、本発明除菌剤５は、インフルエンザウイルスへの不活性化効果があり、かつ原液の希釈液に、精製水用いるよりも温泉水９９を用いた場合の方が、インフルエンザウイルスへの不活性化効果が高いことがわかる。したがって、本発明除菌剤は、インフルエンザウイルスに高い除菌効果を有することわかる。

なお、本実施形態において、原液には、微細粒子化した大豆脂肪酸を含む水溶性コロイド溶液を用いているが、特許文献１，２に記載の方法により微細粒子化できる植物脂肪酸、例えば、米ぬか脂肪酸、コーン油脂肪酸、キャノーラ油脂肪酸、大豆油脂肪酸、オリーブ油脂肪酸、べに花油脂肪酸、パイン油脂肪酸、グレープシードオイル脂肪酸、松の実油脂肪酸、ナッツ油脂肪酸、を含む水溶性コロイド溶液であってもよい。

Claims

微細粒子化した大豆脂肪酸を含む水溶性コロイド溶液１体積部と、ＰＨ８．８～９．９の弱アルカリイオン温泉水を１．５～１９体積部とを含む除菌剤。
ＰＨ１０．０～１０．５である請求項１に記載の除菌剤。
前記弱アルカリ温泉水が、硬度２以下である、請求項１または請求項２に記載の除菌剤。
除菌対象が、大腸菌、サルモネラ菌、黄色ブドウ球菌、緑膿菌、レジオネラ菌、ネコ伝染性腹膜炎ウイルス、およびインフルエンザウイルスからなる群より選ばれる少なくとも１種である請求項１から請求項３のいずれか１項に記載の除菌剤。
少なくとも大豆脂肪酸、レシチン、および精製水を混合撹拌して生成された、微細粒子化した大豆脂肪酸を含む水溶性コロイド溶液１体積部に対して、ＰＨ８．８～９．９の弱アルカリ温泉水を１．５～１９体積部混和して除菌剤を生成するステップを含む除菌剤製造方法。