JP7141084B2 - 複合体、及び複合体の製造方法 - Google Patents
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複合体の第一実施形態は、チタン及びチタン合金の少なくとも一方を含む基材と、上記基材の表面の少なくとも一部を覆う有機層とを備える。上記有機層は、オキシアルキレン基及びホスフェート基を有する含む高分子を含有する。図1は、複合体の一例を示す模式図である。複合体100は、基材10と、有機層20とを備える。複合体は、例えば、生体用に用いられる材料であってよく、医療用に用いられる材料であってもよい。
複合体の製造方法の第一実施形態は、チタン及びチタン合金の少なくとも一方を含む基材の表面を酸処理する第一工程と、酸処理した基材の表面の少なくとも一部にオキシアルキレン基及びホスフェート基を有する高分子を含有する有機層を形成する第二工程と、を備える。
(実施例1)
[ポリ(PEGMA-Phosmer)(ランダム共重合体)の重合]
0.5mMのポリ(エチレングリコール)メチルエーテル メタクリレート(Sigma-Aldrich社製、商品名:PEGMA、分子量:500Da)及び0.5mMのエチレングリコールメタクリレートホスフェート(DAP株式会社製、商品名:Phosmer)を10mLの水に溶解し、窒素雰囲気下で30分間バブリングして酸素を除いた。この水溶液に、少量のメタノールに溶解した0.0128mmolの4’-アゾビス(4-シアノ吉草酸)(和光純薬工業株式会社製、水溶系アゾ開始剤、商品名:V-501)を加えて、重合を開始した。
Ti合金ペレット(0.5cm×0.5cm×1.0mm、東京チタン株式会社製、商品名:Ti-6Al-4V)をイソプロパノール、アセトン、及び水の各溶液中で、30分間ずつ超音波洗浄した。超音波洗浄したTi合金ペレットを風乾した。その後、75℃で1時間濃硫酸中に2時間浸漬して、Ti合金ペレット表面の金属酸化層を除去(酸エッチング)した。酸エッチングによって金属酸化層を除去した後、Ti合金ペレットを蒸留水で超音波洗浄(各5分間で3回洗浄)して、窒素の気流によって乾燥させた。
エチレングリコールメタクリレートホスフェートを用いずに、ポリ(エチレングリコール)メチルエーテル メタクリレートの単独重合を得たこと以外は、実施例1と同様にして重合体(以下、ポリ(PEGMA)と記すこともある。)を合成した。有機層として、ポリ(PEGMA)からなる層を形成することで、複合体を調製した。
有機層を設けず、実施例1と同様にして、UV処理及びO3処理まで行ったTi合金ペレットを、比較例2の評価サンプルとした。
[複合体調製における有機層形成の時間依存性]
UV処理及びO3処理まで行ったTi合金ペレットを、実施例1又は比較例1で調製した重合体の水溶液に浸漬する時間を変化させて、複合体調製時における有機層形成の時間依存性を評価した。図4に結果を示す。なお、比較のために、重合体を含まない水に上記Ti合金ペレットを浸漬させた結果も図4中に示す。
バクテリア付着性試験を行い、複合体のバクテリア付着を抑制する性能を評価した。バクテリアとして、大腸菌(E.Coli)、表皮ブドウ球菌(S.epidermidis)及びストレプトコッカス・ミュータンス菌(S.mutans)を用いた。大腸菌は、LBブロス培地を用いて、細菌密度が約108CFU/mLになるまで37℃の水浴中で100rpmの条件下、振盪しながら培養した。ストレプトコッカス・ミュータンス菌は、ポリペプトン含有栄養培地(ポリペプトン:5g/L、牛肉エキス:3g/L、NaCl:5g/L)を用いて、細菌密度が約108CFU/mLになるまで37℃の水浴中で100rpmの条件下、振盪しながら培養した。また表皮ブドウ球菌は、ブロス培地(BD237500、Sigma-Aldrich)を用いて、細菌密度が約108CFU/mLになるまで37℃の水浴中で100rpmの条件下、振盪しながら培養した。大腸菌ORN178、表皮ブドウ球菌(表皮ブドウ球菌)JCM2414、及びストレプトコッカス・ミュータンス(ミュータンス菌)ATCC25175は、理化学研究所バイオリソースセンターから購入したものを用いた。
バクテリア付着性試験後の複合体をPBSで穏やかに洗浄して、複合体に付着していないバクテリアを除去した。複合体の表面に付着したバクテリアを2.5%のグルタルアルデヒド水溶液を用いて、37℃、24時間かけて複合体に固定化させる処理を行った。この固定化処理の後、複合体を、PBSバッファーで2回洗浄した後、不要なグルタルアルデヒドを除去した。グルタルアルデヒドの除去は、10%エタノール水溶液に5分間、30%エタノール水溶液に5分間、50%エタノール水溶液に5分間、60%グルタルアルデヒド水溶液に5分間、70%グルタルアルデヒドに5分間、80%グルタルアルデヒド水溶液に5分間、90%グルタルアルデヒド水溶液に10分間、100%エタノール(水なし)に10分間、及び再度100%エタノールに10分間浸漬することによって行った。
細胞付着性試験を行い、複合体の細胞生着を促進する性能を評価した。細胞として、MC3T3-E1細胞(マウス由来の骨芽細胞)を用いた。MC3T3-E1細胞は、5%CO2に調製した培地を用いて、37℃の条件下で24時間、48時間、又は72時間、培養した。具体的には、10%の組織培養用牛胎児血清(FBS)及び2%のペニシリン-ストレプトマイシン溶液を補充した培地(Gibco製、商品名:MEMα)を使用した。MC3T3-E1細胞は、東京医科歯科大学から提供されたものを用いた。
細胞接着性試験後の複合体をPBSで穏やかに洗浄して、複合体に付着できていない細胞を除去した。複合体に付着した細胞を4%のホルムアルデヒドで10分間かけて複合体に固定した。その後、PBSで各5分間、3回の洗浄を行った。次に、細胞を0.2%のオクチルフェノールエトキシレート(ダウ・ケミカル日本株式社製、商品名:Triton X-100)で10分間かけて透過処理した。次に、PBSで各5分間、3回の洗浄を行った。透過処理後の細胞を、PBS中の2%のウシ血清アルブミン(BSA)で30分間の条件下で細胞培養を行い、非特異的なタンパク質-タンパク質相互作用をブロックした。さらに、PBSで各5分間、3回の洗浄を行った。
口腔環境下における複合体の性能を評価するため、実施例1で調製した複合体を人工唾液溶液に浸漬して、複合体上へのカルシウム析出及びFn吸着の観察を行った。人工唾液溶液は、塩化カルシウム(CaCl2、1.5mM)、リン酸カリウム(KH2PO4、0.9mM)、塩化カリウム(KCl、130mM)、アジ化ナトリウム(NaN3、1.0mM)、及び4-(2-ヒドロキシエチル)-1-ピペラジンエタンスルホン酸(HEPES、20mM)を含むバッファーを、水酸化カリウム(KOH)を用いてpH7.0に調整したものを用いた。この溶液を毎日交換しながら14日間、37℃でインキュベートした。1日間後、2日間後、7日間後及び14日間後に、浸漬していた複合体を取出し、多量の水で洗浄した後、窒素の気流で乾燥させた。乾燥後の複合体の表面をXPSで解析した。XPSスペクトルにおいてCa(2p)のピークが観測され、Caが析出していること確認した。検出されたCaの濃度をまとめて、図10に示す。図10には、比較のため、比較例2のTi合金ペレットを用いて同様の実験を行った結果を併記した。
Claims (7)
- ステント、インプラント、人工関節、人工骨又は整形外科用固定具に用いられる、請求項1に記載の複合体。
- 前記第二工程では、酸処理した基材の表面に、前記高分子を含有する溶液を接触させることで前記有機層を形成する、請求項4又は5に記載の製造方法。
- 前記第一工程と前記第二工程との間に、酸処理した基材の表面をオゾン処理する工程を備える、請求項4~6のいずれか一項に記載の製造方法。
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WO2017094691A1 (ja) | 2015-11-30 | 2017-06-08 | 国立大学法人筑波大学 | リン酸残基を有するニトロキシラジカル含有共重合体及びその使用 |
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WO2017094691A1 (ja) | 2015-11-30 | 2017-06-08 | 国立大学法人筑波大学 | リン酸残基を有するニトロキシラジカル含有共重合体及びその使用 |
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ACS Biomater. Sci. Eng. ,2,2015年12月28日,205-212 |
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