JP7127930B2 - 高速ブロッティング装置及びその用途 - Google Patents
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Description
ドライ式組み立てモジュールの組み立てのために、高速ウエット式タンパク質ブロッティングシステムは、通常使用される従来のスポンジまたは濾紙の代わりに新しい親水性多孔質スポンジを使用し得る。スポンジの優れた弾力性は、ポリアクリルアミドゲル及び転写膜の間に、十分な圧力を加え得る。加えて、スポンジの効率的な吸湿性は、スポンジを予め湿らせる必要なしにサンドイッチ組み立てのための新しいドライ式組み立て方法を可能にし得る。
ドライ式組み立てモジュールが、組み立てられ、電子ノードに応じてタンパク質ブロッティングチャンバー内に配置されると(図2)、転写緩衝液は、液体転写緩衝液処理システムの制御下で、チャンバーにポンプ移送することができる。次に、電圧は、ポリアクリルアミドゲルから膜へのタンパク質の転写を開始するために、印加することができる。
電圧が印加されていると、タンパク質(タンパク質複合体)は、膜に転写することができる。同時に、転写緩衝溶液中のイオンは、電子駆動力下で枯渇させることができる。
セミドライ式ブロッティングの別の問題は、同時に複数の標的タンパク質を転写する必要がある時に生じ得る。転写効率が、転写しやすいタンパク質に十分であるが、転写しにくいタンパク質に十分ではないことがあるので、転写しやすい(例えば、小さいタンパク質)及び転写しにくい(例えば、大きいタンパク質)場合の転写効率は、等しい転写結果を可能にし得ない。
より高いブロッティング効率のために、多数の実験が、転写溶液を最適化するために行われた。安全性及び効率を増加させるための種々の溶媒を試験した。例えば、試験された製剤の一部は、安全性の問題及びより良好なブロッティング/転写結果のために、エタノール、イソプロパノール、エタンジオールなどの他のアルコールと、メタノールを置換することを含んでいた。種々の緩衝イオンを試験した。例えば、膜上の小さいフラグメントを捕捉するために、CAPSを使用し、より大きいタンパク質の転写のための補助に、SDSを使用した。さらに、9~11.5の異なるpHを試験した。全ての結果を、従来のウエット式転写及びセミドライ式ブロッティング(iblot及びTurbo)と比較した。
Claims (24)
- ウエット式タンパク質ブロッティングシステムであって、前記ウエット式タンパク質ブロッティングシステムが、
a.予め湿らせたゲル、予め湿らせた膜、及び乾燥したスポンジを含む、ドライ式組み立てモジュール、
b.タンパク質ブロッティングチャンバー、
c.液体転写緩衝液処理システム、ならびに
d.制御パネル及び電源、
を含み、前記組み立てモジュールは前記タンパク質ブロッティングチャンバー中に配置されている、前記ウエット式タンパク質ブロッティングシステム。 - 前記ドライ式組み立てモジュールが、圧力をかけることが可能な構造体をさらに含む、請求項1に記載のウエット式タンパク質ブロッティングシステム。
- 前記構造体が、弾性材料を含む、請求項2に記載のウエット式タンパク質ブロッティングシステム。
- 前記弾性材料が、ステンレス鋼ばね、スポンジ、濾紙、及びシリカゲルからなる群より選択される、請求項3に記載のウエット式タンパク質ブロッティングシステム。
- ウエット式タンパク質ブロッティングシステムであって、前記ウエット式タンパク質ブロッティングシステムは、
a.圧力をかけることが可能なゲルホルダーを含むドライ式組み立てモジュールと、ここで、前記ドライ式組み立てモジュールは、
i.乾燥した第1のスポンジ、
ii.予め湿らせた膜、
iii.少なくとも1つのタンパク質を含むポリアクリルアミドゲル、及び
iv.乾燥した第2のスポンジ、
をさらに含み、ここで、上記(i)~(iv)が、前記ゲルホルダー内で順番に組み立てられ、
b.タンパク質ブロッティングチャンバー、
c.液体転写緩衝液処理システム、及び
d.制御パネル及び電源、
を含む、ウエット式タンパク質ブロッティングシステム。 - 前記ゲルホルダーが、陰極を含む第1のフレーム構造体及び陽極を含む第2のフレーム構造体を含み、前記第1のフレーム構造体及び前記第2のフレーム構造体が、ヒンジで接続されている、請求項5に記載のウエット式タンパク質ブロッティングシステム。
- 陰極を含む前記第1のフレーム構造体及び陽極を含む前記第2のフレーム構造体がさらに、前記弾性材料を含む、請求項6に記載のウエット式タンパク質ブロッティングシステム。
- 前記弾性材料が、鉄メッシュ、布地、ステンレス鋼ばね、スポンジ、濾紙、及びシリカゲルからなる群より選択される、請求項7に記載のウエット式タンパク質ブロッティングシステム。
- 前記ドライ式組み立てモジュールが、前記タンパク質ブロッティングチャンバー内に配置されている、請求項1~8のいずれか1項に記載のウエット式タンパク質ブロッティングシステム。
- 前記タンパク質ブロッティングチャンバーが、前記液体転写緩衝液処理システムに接続されている少なくとも1つの入口管及び前記液体転写緩衝液処理システムまたは廃棄容器に接続されている少なくとも1つの出口管を含む、請求項1~9のいずれか1項に記載のウエット式タンパク質ブロッティングシステム。
- 前記液体転写緩衝液処理システムが、前記タンパク質ブロッティングチャンバー内の前記転写緩衝液を交換または補充することが可能である、請求項1~10のいずれか1項に記載のウエット式タンパク質ブロッティングシステム。
- 前記液体転写緩衝液処理システムが、少なくとも1つのポンプを含み、前記少なくとも1つのポンプが、単方向または双方向のいずれかで前記転写緩衝液をポンプ移送することが可能である、請求項11に記載のウエット式タンパク質ブロッティングシステム。
- 前記液体転写緩衝液処理システムが、転写緩衝液容器に接続されている少なくとも1つの管及び前記タンパク質ブロッティングチャンバーに接続されている少なくとも1つの管を含む、請求項11または12に記載のウエット式タンパク質ブロッティングシステム。
- 前記液体転写緩衝液処理システムが、前記タンパク質ブロッティングチャンバーに様々な組成の2つ以上の転写緩衝液を提供することが可能である、請求項11~13のいずれか1項に記載のウエット式タンパク質ブロッティングシステム。
- 前記液体転写緩衝液処理システムが、2つの以上の転写緩衝液容器に接続されている2つ以上の管を含む、請求項14に記載のウエット式タンパク質ブロッティングシステム。
- 前記液体転写緩衝液処理システムが、前記タンパク質ブロッティングチャンバー内の前記転写緩衝液の転写緩衝能の喪失を検出することが可能であり、転写緩衝能の前記喪失を検出する時に、前記液体転写緩衝液処理システムが、前記転写緩衝液を交換または補充する、請求項11~15のいずれか1項に記載のウエット式タンパク質ブロッティングシステム。
- 転写緩衝能が喪失した前記転写緩衝液が、前記同じ組成を含む転写緩衝液を交換または補充される、請求項16に記載のウエット式タンパク質ブロッティングシステム。
- 転写緩衝能が喪失した前記転写緩衝液が、異なる組成を含む転写緩衝液で交換または補充される、請求項16に記載のウエット式タンパク質ブロッティングシステム。
- 前記タンパク質ブロッティングチャンバーが、温度制御構造体を含む、請求項1~18のいずれか1項に記載のウエット式タンパク質ブロッティングシステム。
- 前記温度制御構造体が、前記タンパク質ブロッティングチャンバーに接続されている少なくとも1つの放熱器を含む、請求項19に記載のウエット式タンパク質ブロッティングシステム。
- 前記少なくとも1つの放熱器が、少なくとも1つのフィンまたは中空管である、請求項20に記載のウエット式タンパク質ブロッティングシステム。
- 前記少なくとも1つのフィンまたは中空管が、アルミニウム、銅、アルミニウム合金、及び銅合金からなる群より選択される金属を含む、請求項21に記載のウエット式タンパク質ブロッティングシステム。
- 前記温度制御構造体が、水循環系システム、電子Peltier冷却/加熱システム、または冷凍圧縮機から選択される、請求項19に記載のウエット式タンパク質ブロッティングシステム。
- 前記タンパク質ブロッティングチャンバーが、前記転写緩衝液の前記温度を検出する温度センサーを含む、請求項19~23のいずれか1項に記載のウエット式タンパク質ブロッティングシステム。
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