JP7082045B2 - 糖標的化治療剤 - Google Patents

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Description

関連出願の相互参照
本出願は、出典明示によりその全体が組み込まれる「糖標的化治療剤」とそれぞれ題される、２０１５年９月１９日に出願された米国特許出願番号１４／８５９，２９２号、および２０１６年６月１７日に出願された米国特許出願番号１５／１８５，５６４号の優先権を主張する。
配列表の参照
ＥＦＳ－Ｗｅｂを介してＡＳＣＩＩテキストファイルとして提出された配列表は、米国特許法３５Ｕ．Ｓ．Ｃ．コード１．５２（ｅ）に従い出典明示により組み込まれる。配列表についてＡＳＣＩＩテキストファイルの名称はＡＮＯＫ００１Ｐ１ＷＯ＿ＳＴ２５．ＴＸＴであり、ＡＳＣＩＩテキストファイルの作成日は２０１６年９月１４日であり、かつＡＳＣＩＩテキストファイルのサイズは４７．４ＫＢである。
技術分野
本明細書で開示される本発明の幾つかの実施形態は、移植拒絶、自己免疫疾患、アレルギー（例えば、食物アレルギー）、および治療薬に対する免疫応答の治療において有用である薬学的に許容可能な組成物に関する。
技術に関する説明
様々なアプローチが、望ましくない免疫応答を引き出す抗原に対する寛容を誘導するために使用されてきた。いくつかのアプローチは特定の細胞への抗原の標的化を利用する。米国出願番号第２０１２／００３９９８９号、第２０１２／０１７８１３９号およびＷＯ２０１３／１２１２９６は、寛容化についての抗原提示における赤血球の役割を活用するための赤血球への抗原の標的化を記載する。
細胞標的化アプローチを使用する今日までに発生した肯定的な結果にもかかわらず、代替アプローチ可能性は関心のあるところのままである。具体的には、本明細書で開示される幾つかの実施形態は、肝臓における１つ以上の細胞型を標的化し、その結果寛容が望まれる抗原を標的化される１つ以上の細胞型に送達し、それにより抗原のプロセシングを誘導し、かつ抗原に対する免疫寛容を誘導するよう構成された組成物に関する。以下でより詳細に示される抗原は、治療薬、タンパク質、タンパク質フラグメント、タンパク質またはタンパク質フラグメントの抗原模倣（例えば、ミモトープ）を含むことができる。抗原のさらなる型は以下でより詳細に議論される。幾つかの実施形態ではかかる組成物の方法および使用もまた提供される。
幾つかの実施形態では、式１を含む化合物が提供される：
Figure 0007082045000001
 ここで、ｍは約１から１０の整数であり、Ｘは抗原性領域を含む分子を含み、Ｙは以下からなる群から選択される式を有するリンカー部分であり：
Figure 0007082045000002
 ここで、左の括弧“（”は、Ｘへの結合を示し、右または下の括弧および“）”は、ＹおよびＺ間の結合を示し、ｎは約１から１００の整数であり、本願のｐは約２から１５０の整数であり、本願のｑは約１から４４の整数であり、本願のＲ８は－ＣＨ２－または－ＣＨ２－ＣＨ２－Ｃ（ＣＨ３）（ＣＮ）－であり；かつ本願のＲ９は直接結合または－ＣＨ２－ＣＨ２－－ＮＨ－Ｃ（Ｏ）－であり、かつＺは肝臓標的化部分を含む。幾つかの実施形態では、Ｘは抗原性領域を含むタンパク質またはタンパク質フラグメントである。幾つかの実施形態では、Ｚはガラクトースであり、一方でいくつかの実施形態では、Ｚはグルコースである。幾つかの実施形態では、Ｚはガラクトサミンであり、一方でいくつかの実施形態ではＺはグルコサミンである。幾つかの実施形態では、グルコースまたはガラクトースのアルファアノマーは組成物において使用される。幾つかの実施形態では、グルコースまたはガラクトースのベータアノマーは組成物において使用される。幾つかの実施形態では、アルファおよびベータアノマーの混合物が使用され、任意にグルコースおよびガラクトースの混合物を含む。幾つかの実施形態では、ＺはＮ－アセチルガラクトサミンであり、一方でいくつかの実施形態ではＺはＮ－アセチルグルコサミンである。幾つかの実施形態では、グルコサミンまたはガラクトサミンのアルファアノマーは組成物において使用される。幾つかの実施形態では、グルコサミンまたはガラクトサミンのアルファアノマーは組成物において使用される。幾つかの実施形態では、アルファおよびベータアノマーの混合物が使用され、任意にグルコサミンおよびガラクトサミンの混合物を含む。同様に、幾つかの実施形態では、アルファアノマー、ベータアノマー、またはＮ－アセチルガラクトサミンまたはＮ－アセチルグルコサミンのアルファおよびベータアノマーの組み合わせ。任意のアルファまたはベータアノマー型の任意の肝臓標的化糖の組み合わせ、および糖の任意の組み合わせは様々な実施形態で利用され得る。幾つかの実施形態では、ＹはＹｍまたはＹｎを含み、ｍは１から５であり、ｎは７５から８５であり、ｐは８５から９５であり、かつｑは２から６である。幾つかの実施形態では、ｍは１から３であり、ｎは７９であり、ｐは９０であり、かつｑは４である。幾つかの実施形態では、Ｘはインスリン、プロインスリン、プレプロインスリン、グルテン、グリアジン、ミエリン塩基性タンパク質、ミエリンオリゴデンドロサイト糖タンパク質およびプロテオリピドタンパク質、第ＶＩＩＩ因子、第ＩＸ因子、アスパラギナーゼ、ウリカーゼおよび上記のいずれかに記載のフラグメントからなる群から選択される。幾つかの実施形態では、抗原Ｘは全長タンパク質ではない。例えば、いくつかの実施形態では、抗原は全長グリアジン、インスリン、またはプロインスリンではない。幾つかの実施形態では、抗原Ｘはタンパク質のフラグメントではない。幾つかの実施形態では、ｍは３を超えない、ｎは８０を超えない、ｐは１００を超えない、かつｑは５を超えない。
幾つかの実施形態では、Ｙは以下の式を有するリンカー部分である。
Figure 0007082045000003
幾つかの実施形態では、Ｙは以下の式を有するリンカー部分である。
Figure 0007082045000004
幾つかの実施形態では、Ｙは以下の式を有するリンカー部分である。
Figure 0007082045000005
 幾つかの実施形態では、Ｙは以下の式を有するリンカー部分である。
Figure 0007082045000006
いくつかの実施形態では、肝臓標的化部分の組み合わせが利用され得るのと同様に、本明細書で開示されるリンカーの組み合わせが使用されてもよい。
下記により詳細に示されるように、寛容が望まれ得る抗原の多様性が存在する。これらは、対象が抗原に曝される場合に有害な免疫応答をもたらす外因性抗原を含んでもよいがこれらに限られない。幾つかの実施形態では、有害な免疫応答は、抗原の摂取、例えば、経口または経鼻的に、またはいくつかのその他の粘膜経路を介する、の結果である。これらの経路は、例えば、食物抗原の場合であり得る。いくつかの実施形態では、抗原が意図的に対象に投与されてもよく、例えば、対象が受けている疾患または条件を処置するための治療用組成物の投与である。さらなる別の実施形態では、抗原は対象により産生されてもよく、例えば、自己免疫抗原である。例えば、幾つかの実施形態では、Ｘは移植レシピエントが望ましくない免疫応答を発症する外来性移植抗原またはその免疫寛容誘導部分を含む。幾つかの実施形態では、Ｘは患者が望ましくない免疫応答を発症する外来性食物、動物、植物または環境の抗原またはその免疫寛容誘導部分を含む。幾つかの実施形態では、Ｘは患者が望ましくない免疫応答を発症する外来性治療薬またはその免疫寛容誘導部分を含む。幾つかの実施形態では、Ｘは患者が望ましくない免疫応答を発症する内在性型に対する合成自己抗原またはその免疫寛容誘導部分を含む。
上記よりさらに詳細には、幾つかの実施形態では、Ｘが食物抗原である化合物が提供される。いくつかのかかる実施形態では、Ｘは１つ以上のコンアラキン（Ａｒａ ｈ １）、アレルゲンＩＩ（Ａｒａ ｈ ２）、ピーナッツアグルチニン、コングルチン（Ａｒａ ｈ ６）、ａ－ラクトアルブミン（ＡＬＡ）、ラクトトランスフェリン、Ｐｅｎ ａ １ アレルゲン（Ｐｅｎ ａ １）、アレルゲン Ｐｅｎ ｍ ２（Ｐｅｎ ｍ ２）、トロポミオシン速筋型アイソフォーム、高分子量グルテニン、低分子量グルテニン、アルファ－グリアジン、ガンマ－グリアジン、オメガ－グリアジン、ホルデイン、セカリン、およびアベニンである。これらの抗原のいずれかに記載のフラグメントおよび／またはこれらの抗原のいずれかに記載のミモトープはまた、幾つかの実施形態において使用される。幾つかの実施形態では、Ｘがグルテン、高分子量グルテニン、低分子量グルテニン、アルファ－グリアジン、ガンマ－グリアジン、オメガ－グリアジン、ホルデイン、セカリン、およびアベニンならびにそれらのフラグメントからなる群から選択される。幾つかの実施形態では、Ｘがグルテン、高分子量グルテニン、低分子量グルテニン、アルファ－グリアジン、ガンマ－グリアジン、およびオメガ－グリアジンならびにそれらのフラグメントからなる群から選択される。幾つかの実施形態では、Ｘはグルテンまたはそのフラグメントである。幾つかの実施形態では、Ｘはグリアジンまたはそのフラグメントである。
幾つかの実施形態では、Ｘが治療薬である化合物が提供される。幾つかの実施形態では、Ｘが第ＶＩＩ因子、第ＩＸ因子、アスパラギナーゼ、およびウリカーゼならびにそれらのフラグメントからなる群から選択される。幾つかの実施形態では、Ｘが、第ＶＩＩ因および第ＩＸ因子ならびにそれらのフラグメントからなる群から選択される治療薬。幾つかの実施形態では、Ｘは第ＶＩＩＩ因子またはそのフラグメントからなる群から選択される治療薬である。幾つかの実施形態では、Ｘが治療薬である場合に、化合物は血友病の治療薬に対して発症される免疫応答の治療、予防、減少、またはその他改善において使用され得る。本明細書中に記載されるように、上記の抗原の任意の抗原部分のミモトープは幾つかの実施形態において使用され得る。
幾つかの実施形態では、Ｘはアスパラギナーゼまたはそのフラグメントを含む。幾つかの実施形態では、Ｘはウリカーゼまたはそのフラグメントを含む。幾つかのかかる実施形態では、化合物は抗腫瘍性薬剤に対して発症される免疫応答の治療、予防、減少、またはその他改善において使用され得る。本明細書中に記載されるように、上記の抗原の任意の抗原部分のミモトープは幾つかの実施形態において使用され得る。
幾つかの実施形態では、Ｘは自己免疫疾患と関連する。例えば、幾つかの実施形態では、関連自己免疫疾患は１つ以上のＩ型糖尿病、多発性硬化症、関節リウマチ、白斑、ぶどう膜炎、尋常性天疱瘡および視神経脊髄炎である。
幾つかの実施形態では、自己免疫疾患がＩ型糖尿病であり、かつＸはインスリンまたはそのフラグメントを含む。幾つかの実施形態では、自己免疫疾患がＩ型糖尿病であり、かつＸはプロインスリンまたはそのフラグメントを含む。幾つかの実施形態では、自己免疫疾患がＩ型糖尿病であり、かつＸはプレプロインスリンまたはそのフラグメントを含む。本明細書中に記載されるように、上記の抗原の任意の抗原部分のミモトープは幾つかの実施形態において使用され得る。幾つかの実施形態では、これらの抗原の組み合わせは、インスリン経路に沿った複数の点で自己抗原に対する免疫応答を減少させるのに役立ち得る免疫寛容誘導化合物に組み込まれ得る。
幾つかの実施形態では、自己免疫疾患がＩ多発性硬化症であり、かつＸはミエリン塩基性タンパク質またはそのフラグメントを含む。幾つかの実施形態では、自己免疫疾患がＩ多発性硬化症であり、かつＸはミエリンオリゴデンドロサイト糖タンパク質またはそのフラグメントを含む。幾つかの実施形態では、自己免疫疾患がＩ多発性硬化症であり、かつＸはミエリンプロテオリピドタンパク質またはそのフラグメントを含む。本明細書中に記載されるように、上記の抗原の任意の抗原部分のミモトープは幾つかの実施形態において使用され得る。幾つかの実施形態では、これらの抗原の組み合わせは、ミエリン形成またはミエリン修復を制御する酵素経路に沿った複数の点で自己抗原に対する免疫応答を減少させるのに役立ち得る免疫寛容誘導化合物に組み込まれ得る。
幾つかの実施形態では、自己免疫疾患は関節リウマチであり、かつＸは、フィブリノーゲン、ビメンチン、コラーゲンタイプＩＩ、アルファエノラーゼならびにそれらのフラグメントからなる群から選択される。
幾つかの実施形態では、自己免疫疾患は白斑であり、かつＸはＰｍｅｌ１７、チロシナーゼならびにそれらのフラグメントからなる群から選択される。
幾つかの実施形態では、自己免疫疾患はぶどう膜炎であり、かつＸはレチナールアレスチンおよび光受容体間レチノイド結合タンパク質（ＩＲＢＰ）ならびにそれらのフラグメントからなる群から選択される。
幾つかの実施形態では、自己免疫疾患は尋常性天疱瘡であり、かつＸはデスモグレイン３、１および４、ペンファキシン（ｐｅｍｐｈａｘｉｎ）、デスモコリン、プラコグロビン、ペルプラキン（ｐｅｒｐｌａｋｉｎ）、デスモプラキン、アセチルコリン受容体ならびにそれらのフラグメントからなる群から選択される。
幾つかの実施形態では、自己免疫疾患は視神経脊髄炎であり、かつＸはアクアポリン４またはそのフラグメントである。
本明細書中に記載されるように、上記の（またはそうでなければ本明細書で開示される）自己抗原の任意の抗原部分のミモトープは幾つかの実施形態において使用され得る。
幾つかの実施形態では、Ｘに対する寛容を誘導することにおける使用のための上記に開示される（またはそうでなければ本明細書で開示される）化合物の使用もまた提供される。
幾つかの実施形態では、上記に開示される（またはそうでなければ本明細書で開示される）化合物を含む薬学的に許容可能な組成物もまた提供される。Ｘに対する寛容を誘導することにおけるかかる組成物の使用もまた提供される。幾つかの実施形態では、薬学的に許容可能な組成物は、Ｘが食物抗原、治療薬、自己抗原、またはそのフラグメント、リンカーＹ、および肝臓標的化部分Ｚがグルコース、ガラクトース、グルコサミン、ガラクトサミン、Ｎ－アセチルグルコサミン、およびＮ－アセチルガラクトサミンから選択される化合物、からなる、または実質的にからなる。
上記に開示される（またはそうでなければ本明細書で開示される）化合物を投与することを含む、対象が望ましくない免疫応答を発症できる抗原に対する寛容を誘導する方法もまた、本明細書で提供される。幾つかの実施形態では、対象が抗原に曝される前に化合物が投与される。しかしながら、幾つかの実施形態では、対象が抗原に曝された後に化合物が投与される。幾つかの実施形態では、投与は、化合物の少なくとも１つの静脈内を含む（例えば、ボーラス（ｂｏｌｕｓ）用量、それに続いて一連の任意の維持用量）。
幾つかの実施形態では、対象が望ましくない免疫応答を発症する抗原またはその免疫寛容誘導部分に対する寛容を誘導するための医薬の製造における上記に開示される（またはそうでなければ本明細書で開示される）化合物の使用が提供される。
本明細書で開示される幾つかの実施形態では、対象における免疫寛容を誘導するための組成物およびそれを達成するための組成物の方法および使用が提供される。幾つかの実施形態では、対象が抗原に対する望ましくない免疫応答を発症するため、免疫寛容が望まれる。実施形態に応じて、抗原は、１つ以上の多様な抗原、例えば、摂取される食物抗原などの外来性抗原、または対象に与えられる治療薬の抗原部分であり得る。さらなる実施形態では、抗原は、対象の免疫系が認識できない（または限られた程度でのみ自己として認識する）自己抗原であり得、従って、免疫応答を引き起こし、自己免疫障害につながる。
幾つかの実施形態では式１、を含む組成物が提供される：
Figure 0007082045000007
 ここで、ｍは約１から１０の整数であり、Ｘは食物抗原、治療薬、自己抗原、かかる抗原のいずれかに記載のフラグメント、またはかかる抗原のいずれかに記載のミモトープを含み、Ｙは以下の式を有するリンカー部分であり：
Figure 0007082045000008
 ここで：左の括弧“（”は、Ｘへの結合を示し、右または下の括弧および“）”は、ＹおよびＺ間の結合を示し、ｎは約７０から８５の整数であり、本願のｐは約８５から９５の整数であり、本願のｑは約１から１０の整数であり、本願のＲ８は－ＣＨ２－または－ＣＨ２－ＣＨ２－Ｃ（ＣＨ３）（ＣＮ）－であり；かつ本願のＲ９は直接結合または－ＣＨ２－ＣＨ２－－ＮＨ－Ｃ（Ｏ）－であり；かつＺはグルコースまたはガラクトースを含む肝臓標的化部分を含む。幾つかの実施形態では、ｍは１から３であり、ｎは７９であり、ｐは９０であり、かつｑは４である。幾つかの実施形態では、Ｘはインスリン、プロインスリン、プレプロインスリン、グルテン、グリアジン、ミエリン塩基性タンパク質、ミエリンオリゴデンドロサイト糖タンパク質およびプロテオリピドタンパク質、第ＶＩＩＩ因子、第ＩＸ因子、アスパラギナーゼ、ウリカーゼおよび上記のいずれかに記載のフラグメントからなる群から選択される。幾つかの実施形態では、組成物は、抗原Ｘ、リンカーＹおよび肝臓標的化部分Ｚ、からなる、または実質的にからなる。
幾つかの実施形態では、式１を含む化合物が提供される：
Figure 0007082045000009
 ここで、ｍは約１から１０の整数であり、Ｘはインスリン、プロインスリン、プレプロインスリン、グルテン、グリアジン、ミエリン塩基性タンパク質、ミエリンオリゴデンドロサイト糖タンパク質およびプロテオリピドタンパク質、第ＶＩＩＩ因子、第ＩＸ因子、アスパラギナーゼ、ウリカーゼおよび上記のいずれかに記載のフラグメントからなる群から選択され、Ｙは以下の式を有するリンカー部分であり、
Figure 0007082045000010
 ここで、左の括弧“（”は、Ｘへの結合を示し、右または下の括弧および“）”は、ＹおよびＺ間の結合を示し、ｎは約７０から８５の整数であり、本願のｐは約８５から９５の整数であり、本願のｑは約１から１０の整数であり、本願のＲ８は－ＣＨ２－または－ＣＨ２－ＣＨ２－Ｃ（ＣＨ３）（ＣＮ）－であり；かつ本願のＲ９は直接結合または－ＣＨ２－ＣＨ２－－ＮＨ－Ｃ（Ｏ）－であり、かつＺは糖部分を含む肝臓標的化部分を含む。幾つかの実施形態では、ｍは１から３であり、ｎは７９であり、ｐは９０であり、かつｑは４である。幾つかの実施形態では、Ｚはグルコース、グルコサミン、ガラクトース、ガラクトサミン、Ｎ－アセチルガラクトサミンおよびＮ－アセチルグルコサミンからなる群から選択される。
幾つかの実施形態では、２，５－ジオキソピロリジン－１－イル プロピルカーボネート－リンカーおよび／または２－（エチルジスルファニル）エチル エチルカルバミン酸－リンカーが使用され得る。
幾つかの実施形態では、式１の化合物を含む組成物が提供される：
Figure 0007082045000011
 ここで：
ｍは約１から１０の整数であり；
Ｘは患者が望ましくない免疫応答を発症する抗原を含み、ここで、抗原は食物抗原、治療薬、自己抗原、またはかかる抗原のいずれかに記載のフラグメントであり；
Ｙは以下からなる群から選択される式を有するリンカー部分であり、
Figure 0007082045000012
Figure 0007082045000013
 ここで、左の括弧“（”は、Ｘへの結合を示し、本願の右“）”は、Ｚへの結合を示し、本願の下“）”は、Ｚへの結合を示し、ここで、本願のｎは約１から約８０の整数であり、本願のｑは約１から約４の整数であり、本願のｐは約１から約９０の整数であり、本願のＲ８は－ＣＨ２－または－ＣＨ２－ＣＨ２－Ｃ（ＣＨ３）（ＣＮ）－であり、かつＺはアシアロ糖タンパク質受容体を発現する肝臓細胞を特異的に標的化する、１つ以上の肝臓標的化部分を含む。
組成物の幾つかの実施形態では、ｍは１から４であり、Ｙは以下の式を有するリンカー部分であり：
Figure 0007082045000014
 かつＺは１つ以上のガラクトース、ガラクトサミン、またはＮ－アセチルガラクトサミンを含む肝臓標的化部分を含む。
幾つかの実施形態では、ｍが１から４の整数であると解決（ｒｅｓｏｌｖｅｄ）され、Ｙは以下の式を有するリンカー部分であり：
Figure 0007082045000015
 、かつＺは１つ以上のグルコース、グルコサミン、またはＮ－アセチルグルコサミンを含む肝臓標的化部分を含む。
幾つかの実施形態では、式１（Ｘ－［－Ｙ－－－Ｚ］ｍ）の組成物が提供され、ここでｍは約１から１００の整数であり、Ｘは患者が望ましくない免疫応答を発症する抗原、もしくはその免疫寛容誘導部分を含み、またはＸは循環タンパク質もしくはペプチドまたは抗体に特異的に結合する抗体、抗体フラグメントまたはリガンドを含み、循環タンパク質もしくはペプチドまたは抗体は移植拒絶、治療薬に対する免疫応答、自己免疫疾患、過敏症および／またはアレルギーに原因的に関与し、Ｙはリンカー部分を含み、かつＺは肝臓標的化部分を含む。幾つかの実施形態では、Ｚはガラクトース、ガラクトサミン、Ｎ－アセチルガラクトサミン、グルコース、グルコサミンまたはＮ－アセチルグルコサミンを含む。
幾つかの実施形態では、Ｙが、Ｎ－ヒドロキシスクシンイミジルリンカー、マレイミドリンカー、ビニルスルホンリンカー、ピリジルジチオール－ポリ（エチレングリコール）リンカー、ピリジルジチオールリンカー、ｎ－ニトロフェニルカーボネートリンカー、ＮＨＳ－エステルリンカー、およびニトロフェノキシポリ（エチレングリコール）エステルリンカーから選択される。いくつかの実施形態では、ＹはＸに特異的に結合する抗体、抗体フラグメント、ペプチドまたは他のリガンド、ジスルファニルエチルエステル、式ＹａからＹｐの１つにより表される構造を含み：
Figure 0007082045000016
Figure 0007082045000017
Figure 0007082045000018
Figure 0007082045000019
 および
Figure 0007082045000020
 またはＹは式Ｙ’－ＣＭＰにより表される部分を有する。
Figure 0007082045000021
かかる実施形態では、左の括弧“（”は、ＸおよびＹ間の結合を示し、右または下の括弧および“）”は、ＹおよびＺ間の結合を示し、ｎは約１から１００の整数であり、ｑは約１から４４の整数であり、Ｒ８は－ＣＨ２－または－ＣＨ２－ＣＨ２－Ｃ（ＣＨ３）（ＣＮ）－であり、Ｙ’はＹの残存部分を表し；かつＷは、同一のＷ１基のポリマーを表し、またはＷは同一のまたは異なるＷ１およびＷ２基の共重合体またはランダム共重合体であり、ここで：
Figure 0007082045000022
 であり、かつ、ここで、ｐは２から約１５０の整数であり、Ｒ９は直接結合、－ＣＨ２－ＣＨ２－－ＮＨ－Ｃ（Ｏ）－または－ＣＨ２－ＣＨ２－（Ｏ－ＣＨ２－ＣＨ２）ｔ－ＮＨ－Ｃ（Ｏ）－であり、ｔは１から５の整数であり；かつＲ１０は脂肪族基、アルコールまたは脂肪族アルコールである。１つのかかる実施形態では、ｍは１から３であり、Ｙは式Ｙｍにより表される、ここで、Ｒ８は－ＣＨ２－ＣＨ２－Ｃ（ＣＨ３）（ＣＮ）－であり、かつＷはＷ１およびＷ２のブロック共重合体により表され、ここでＲ９は－ＣＨ２－ＣＨ２－（Ｏ－ＣＨ２－ＣＨ２）ｔ－ＮＨ－Ｃ（Ｏ）－であり、ｔは１であり、およびＲ１０は２－ヒドロキシプロピルである；かつＺは１つ以上のガラクトース、ガラクトサミン、Ｎ－アセチルガラクトサミン、グルコース、グルコサミン、Ｎ－アセチルグルコサミンを含む肝臓標的化部分を含む。幾つかの実施形態では、Ｚは対応する糖のβ－アノマーである。
幾つかのさらなる実施形態では、組成物は、対象が望ましくない免疫応答を発症する抗原に対する寛容を誘導するために提供され、組成物は式１の化合物（式１（Ｘ－［－Ｙ－－－Ｚ］ｍ）を含み、ここでｍは約１から１０の整数であり、Ｘは患者が望ましくない免疫応答を発症する抗原を含み、ここで、抗原は食物抗原、治療薬、自己抗原、またはかかる抗原のいずれかに記載のフラグメントであり、Ｙは以下からなる群から選択される式を有するリンカー部分であり：
Figure 0007082045000023
Figure 0007082045000024
 ここで、左の括弧“（”は、Ｘへの結合を示し、右または下の括弧および“）”は、ＹおよびＺ間の結合を示し、ｎは約１から１００の整数であり、本願のｐは約２から１５０の整数であり、本願のｑは約１から４４の整数であり、本願のＲ８は－ＣＨ２－または－ＣＨ２－ＣＨ２－Ｃ（ＣＨ３）（ＣＮ）－であり、かつ本願のＲ９は直接結合または－ＣＨ２－ＣＨ２－－ＮＨ－Ｃ（Ｏ）－であり、かつＺはガラクトース、ガラクトサミン、またはＮ－アセチルガラクトサミンを含む。
かかる組成物の幾つかの実施形態では、ｍは１から３であり、Ｙは以下の式を有するリンカー部分であり：
Figure 0007082045000025
 ここで、ＣＨ２－ＣＨ２－－ＮＨ－Ｃ（Ｏ）－；かつＺは１つ以上のガラクトース、ガラクトサミン、またはＮ－アセチルガラクトサミンを含む肝臓標的化部分を含む。幾つかの実施形態では、Ｚは選択された部分のβ－アノマーである。
上述のように、幾つかの実施形態では、Ｘは自己抗原であり、かつ望ましくない免疫応答は自己免疫応答である。
様々な自己抗原が本明細書で開示されるが、幾つかの特定の実施形態では、Ｘはミエリンオリゴデンドロサイト糖タンパク質またはミエリンプロテオリピドタンパク質である。かかる実施形態では、対象が経験する望ましくない免疫応答は多発性硬化症と関連する。さらなる実施形態では、Ｘはインスリン、プロインスリン、またはプレプロインスリンであり、ここで、望ましくない免疫応答は糖尿病と関連する。多発性硬化症、糖尿病またはその他の自己免疫疾患と関連するということは、かかる自己免疫状態の正式な診断を必ずしも必要とする必要は無く、むしろ、特定の自己免疫障害の共通の症状または特徴に関連していることを理解されたい。
さらなる実施形態では、本明細書中に記載されるように、望ましくない免疫応答はタンパク質薬または非ヒトおよび／または非哺乳動物種由来の薬などの治療薬に対して生じ得る。例えば、幾つかの実施形態では、Ｘは第ＶＩＩＩ因子、第ＩＸ因子、またはその他の止血誘導薬などの治療薬である。かかる実施形態では、望ましくない免疫応答は薬剤に対するものであり、かつ関連疾患は血友病であり、自己免疫応答のために改善することができない（組成物の非存在下では）。しかしながら、組成物が薬剤に対する寛容を誘導し、薬剤への応答を減少させ、血友病の症状を減少させるのを助けるため、組成物の投与に際して、血友病を改善できる。さらなる別の実施形態では、Ｘはアスパラギナーゼおよびウリカーゼなどの治療薬である。上述のように、望ましくない免疫応答はかかる薬剤の投与から生じ得、それらが非ヒト供給源に由来するためである。これらの薬剤に対する寛容を誘導する本明細書で開示される組成物の能力は、これらの薬剤が治療を必要とする対象により使用される続けることを可能にする一方で、免疫反応からの副作用が、減少され、軽減され、排除され、またはその他改善される。
幾つかの実施形態では、Ｘは食物抗原である。多くの食物抗原が摂取時にアレルギーを引き起こすことが知られているが、幾つかの実施形態では、Ｘは、以下からなる群から選択される、コンアラキン（Ａｒａ ｈ １）、アレルゲンＩＩ（Ａｒａ ｈ ２）、ピーナッツアグルチニン、コングルチン（Ａｒａ ｈ ６）、ａ－ラクトアルブミン（ＡＬＡ）、ラクトトランスフェリン、Ｐｅｎ ａ １ アレルゲン（Ｐｅｎ ａ １）、アレルゲン Ｐｅｎ ｍ ２（Ｐｅｎ ｍ ２）、トロポミオシン速筋型アイソフォーム、高分子量グルテニン、低分子量グルテニン、アルファ－グリアジン、ガンマ－グリアジン、オメガ－グリアジン、ホルデイン、セカリン、およびアベニン。幾つかの実施形態では、本明細書で開示される、Ｘが食物抗原である組成物での治療は、対象が抗原に対する有意に減少した免疫応答を有することを可能にし、例えば、多くのピーナッツアレルギーは非常に深刻であり、ピーナッツ粉塵または油への曝露がアナフィラキシーを引き起こす。いくつかの実施形態では、治療は、抗原へのこのような偶発的な曝露に対する応答を減少させ、および／または排除する。さらなる実施形態では、治療は、対象が、抗原が由来する食物を摂取可能にし、免疫応答は制限されている、または有害ではない。
幾つかの実施形態では、対象への組成物の投与は、抗原単独の投与から生じる抗原特異的Ｔ細胞の増殖と比較して、抗原特異的Ｔ細胞の増殖のより大きな程度をもたらす。かかる実施形態では、抗原特異的Ｔ細胞の増殖は、自己／非自己として抗原をプロセシングする分子プロセシングマシーナリーへの抗原の送達（組成物を介する）は、抗原単独の投与に対して増強されることを示す。換言すれば、かかる実施形態では、標的化送達は効率的である。さらなる別の実施形態では、本明細書で開示される組成物の投与は、抗原単独の投与から生じる抗原特異的Ｔ細胞上の疲弊マーカーまたはアポトーシスのマーカーの発現と比較して、抗原特異的Ｔ細胞上の疲弊マーカーまたはアポトーシスのマーカーのより大きい発現をもたらす。これは、目的の抗原に対するＴ細胞の活性における特異的減少および／または目的の抗原に対するＴ細胞の欠失の指標となる。幾つかの実施形態では、寛容の誘導のこれらの分子特性は、抗原に曝される場合に対象が、以前経験したであろう免疫応答症状の減少または改善の前触れである。
幾つかの実施形態では、Ｚは、炭水化物である肝臓標的化部分を含む。幾つかの実施形態では、炭水化物は短鎖炭水化物である。幾つかの実施形態では、Ｚは糖である。幾つかの実施形態では、Ｚはガラクトース、ガラクトサミン、Ｎ－アセチルガラクトサミン、グルコース、グルコサミン、またはＮ－アセチルグルコサミンである。幾つかの実施形態では、Ｚについてグルコース、グルコサミン、またはＮ－アセチルグルコサミンが使用される場合、免疫寛容の誘導はより大きい。さらなる別の実施形態では、肝臓標的化部分が糖であり、かつ糖がβ－アノマー配座である場合に、免疫寛容の誘導における増強が達成され得る。幾つかの実施形態では、Ｚはガラクトース、ガラクトサミン、Ｎ－アセチルガラクトサミン、グルコース、グルコサミン、またはＮ－アセチルグルコサミンであり、かつＹにそのＣ１、Ｃ２またはＣ６でコンジュゲートされている。
単独投与される場合（例えば、現在開示される組成物なしで）、有害な免疫応答を生ずるであろう抗原に対する寛容を誘導する方法もまた本明細書に提供される。かかる方法は実施形態に応じて、抗原への暴露の前または後のいずれかの投与を含む。幾つかの実施形態では、曝露前の投与は予防的効果に役立ち、幾つかの実施形態では、免疫応答を実質的に回避するかまたは有意に減少させる。組成物の投与は、静脈内、筋肉内、経口、経皮、または他の注入経路を含むが、これに限定されない様々な方法を介して行うことができる。投与は毎日、毎週、1日に複数回、または必要に応じて行うことができる（例えば、予期される曝露の前に）。
抗原への曝露後の望ましくない免疫応答の治療のための、本明細書で開示される組成物の使用もまた本明細書で提供される。本明細書中に記載されるように、かかる使用は、抗原への曝露から（または自己免疫設定におけるものなどの有害な免疫効果の前に）の予防的効果のためおよび／または症状を減少させるためであり得る。例えば、治療抗原への曝露、食物抗原への曝露、または自己抗原に対する免疫応答からの有害な効果に起因する望ましくない副作用の治療のための式１に記載の組成物の使用が本明細書中に提供される。本明細書で開示される組成物は、かかる使用、例えば、経口、ＩＶ、ＩＭ、またはその他の適切な経路による、と関連する対象への投与に適している。本明細書で開示される組成物の使用は、幾つかの実施形態では、意外にも目的の抗原への有害な免疫応答の減少、排除または改善をもたらす。
さらなる組成物およびそれらを使用する方法が、本明細書に提供される。例えば、幾つかの実施形態では、機能的に類似の天然タンパク質の産生の欠損を有する対象における治療用タンパク質に対する寛容を誘導するための薬学的に許容可能な組成物が提供され、式１（Ｘ－［－Ｙ－－－Ｚ］ｍ）の化合物を含み、ここでｍは約１から１０の整数であり、Ｘは抗原タンパク質またはタンパク質フラグメントを含み、Ｙは式Ｙａ、式Ｙｃ、式Ｙｍ、式Ｙｎからなる群から選択される式を有するリンカー部分であり、ここで、左の括弧“（”は、Ｘへの結合を示し、右または下の括弧および“）”は、ＹおよびＺ間の結合を示し、ｎは約１から１００の整数であり、本願のｐは約２から１５０の整数であり、本願のｑは約１から４４の整数であり、本願のＲ８は－ＣＨ２－または－ＣＨ２－ＣＨ２－Ｃ（ＣＨ３）（ＣＮ）－であり、ここで、本願のＲ９は直接結合または－ＣＨ２－ＣＨ２－－ＮＨ－Ｃ（Ｏ）－であり、かつＺはガラクトース、ガラクトサミン、またはＮ－アセチルガラクトサミンを含む。
組成物の幾つかの実施形態では、ｍは１から３であり、Ｙは以下の式を有するリンカー部分であり：
Figure 0007082045000026
 、ここで、ＣＨ２－ＣＨ２－－ＮＨ－Ｃ（Ｏ）－、かつＺは１つ以上のグルコース、グルコサミン、Ｎ－アセチルグルコサミン、ガラクトース、ガラクトサミン、またはＮ－アセチルガラクトサミンを含む肝臓標的化部分を含む。幾つかの実施形態では、ガラクトース、ガラクトサミン、またはＮ－アセチルガラクトサミンはβ－アノマーである。幾つかの実施形態では、ガラクトース、ガラクトサミン、Ｎ－アセチルガラクトサミン、グルコース、グルコサミン、またはＮ－アセチルグルコサミンの組み合わせが使用される。
機能的に類似の天然タンパク質の産生の欠損を有する対象における治療用タンパク質に対する寛容を誘導する薬学的に許容可能な組成物もまた、本明細書で提供され、式１の化合物（Ｘ－［－Ｙ－－－Ｚ］ｍ）を含み、ここでｍは約１から１０の整数であり、Ｘは抗原タンパク質またはタンパク質フラグメントを含み、Ｙは式Ｙａ、式Ｙｃ、式Ｙｍ、または式Ｙｍからなる群から選択される式を有するリンカー部分であり、ここで、左の括弧“（”は、Ｘへの結合を示し、本願の右“）”は、Ｚへの結合を示し、本願の下“）”は、Ｚへの結合を示し、ここで、本願のｎは約１から約８０の整数であり、本願のｑは約１から約４の整数であり、本願のｐは約１から約９０の整数であり、本願のＲ８は－ＣＨ２－または－ＣＨ２－ＣＨ２－Ｃ（ＣＨ３）（ＣＮ）－であり、かつ本願のＷは式Ｗ１またはＷ２基のポリマーを表し、またはＷは、式Ｗ１またはＷ２の共重合体であり、ここで：
Figure 0007082045000027
 、ここでＲ９は直接結合、－ＣＨ２－ＣＨ２－－ＮＨ－Ｃ（Ｏ）－または－ＣＨ２－ＣＨ２－（Ｏ－ＣＨ２－ＣＨ２）ｔ－ＮＨ－Ｃ（Ｏ）－であり、ｔは１から５の整数であり、Ｒ１０は脂肪族基、アルコールまたは脂肪族アルコールである；かつＺは、グルコース、グルコサミン、Ｎ－アセチルグルコサミン、ガラクトース、ガラクトサミン、またはＮ－アセチルガラクトサミンを含む。幾つかの実施形態では、ガラクトース、ガラクトサミン、またはＮ－アセチルガラクトサミンはβ－アノマーである。幾つかの実施形態では、ガラクトース、ガラクトサミン、Ｎ－アセチルガラクトサミン、グルコース、グルコサミン、またはＮ－アセチルグルコサミンの組み合わせが使用される。組成物の幾つかの実施形態では、ｍは１から３であり、Ｙは式Ｙｍにより表される、ここで、Ｒ８は－ＣＨ２－ＣＨ２－Ｃ（ＣＨ３）（ＣＮ）－であり、かつＷはＷ１およびＷ２のブロック共重合体により表され、ここでＲ９は－ＣＨ２－ＣＨ２－（Ｏ－ＣＨ２－ＣＨ２）ｔ－ＮＨ－Ｃ（Ｏ）－であり、ｔは１であり、かつＲ１０は２－ヒドロキシプロピルである；かつＺは１つ以上のグルコース、グルコサミン、Ｎ－アセチルグルコサミン、ガラクトース、ガラクトサミン、またはＮ－アセチルガラクトサミンを含む肝臓標的化部分を含む。幾つかの実施形態では、ガラクトース、ガラクトサミン、またはＮ－アセチルガラクトサミンはβ－アノマーである。幾つかの実施形態では、ガラクトース、ガラクトサミン、Ｎ－アセチルガラクトサミン、グルコース、グルコサミン、またはＮ－アセチルグルコサミンの組み合わせが使用される。
幾つかの実施形態では、Ｘはミエリン塩基性タンパク質、ミエリンオリゴデンドロサイト糖タンパク質、またはミエリンプロテオリピドタンパク質の抗原性領域を含む。さらなる実施形態では、Ｘは第ＶＩＩＩ因子、第ＩＸ因子、インスリン、ウリカーゼ、ＰＡＬ、またはアスパラギナーゼの抗原性領域を含む。さらなる実施形態では、Ｘはコンアラキン（Ａｒａ ｈ １）、アレルゲンＩＩ（Ａｒａ ｈ ２）、ピーナッツアグルチニン、コングルチン（Ａｒａ ｈ ６）、ａ－ラクトアルブミン（ＡＬＡ）、ラクトトランスフェリン、Ｐｅｎ ａ １ アレルゲン（Ｐｅｎ ａ １）、アレルゲン Ｐｅｎ ｍ ２（Ｐｅｎ ｍ ２）、トロポミオシン速筋型アイソフォーム、高分子量グルテニン、低分子量グルテニン、アルファ－グリアジン、ガンマ－グリアジン、オメガ－グリアジン、ホルデイン、セカリン、およびアベニンなどの外来性抗原を含む。
さらに、式１の化合物（Ｘ－［－Ｙ－－－Ｚ］ｍ）を含む組成物が本明細書で提供され、ここでｍは約１から１００の整数であり、Ｘは患者が望ましくない免疫応答を発症する抗原、もしくはその免疫寛容誘導部分を含み、またはＸは循環タンパク質もしくはペプチドまたは抗体に特異的に結合する抗体、抗体フラグメントまたはリガンドを含み、循環タンパク質もしくはペプチドまたは抗体は移植拒絶、治療薬に対する免疫応答、自己免疫疾患、過敏症および／またはアレルギーに原因的に関与し、Ｙはリンカー部分を含み、かつＺは肝臓標的化部分を含む。
幾つかの実施形態では、Ｚはガラクトース、ガラクトサミン、Ｎ－アセチルガラクトサミン、グルコース、グルコサミンまたはＮ－アセチルグルコサミンである。ガラクトース、ガラクトサミン、Ｎ－アセチルガラクトサミン、グルコース、グルコサミンまたはＮ－アセチルグルコサミンの組み合わせはまた、幾つかの実施形態において使用されてもよい。さらに、幾つかの実施形態では、ガラクトース、ガラクトサミン、Ｎ－アセチルガラクトサミン、グルコース、グルコサミンまたはＮ－アセチルグルコサミンは任意にβアノマーである。幾つかの実施形態では、ＺはＹにそのＣ１、Ｃ２またはＣ６でコンジュゲートされている。
幾つかの実施形態では、Ｙが、Ｎ－ヒドロキシスクシンイミジルリンカー、マレイミドリンカー、ビニルスルホンリンカー、ピリジルジチオール－ポリ（エチレングリコール）リンカー、ピリジルジチオールリンカー、ｎ－ニトロフェニルカーボネートリンカー、ＮＨＳ－エステルリンカー、およびニトロフェノキシポリ（エチレングリコール）エステルリンカーから選択される。幾つかの実施形態では、ＹはＸに特異的に結合する抗体、抗体フラグメント、ペプチドまたは他のリガンド、ジスルファニルエチルエステル、式ＹａからＹｐの１つにより表される構造を含み、またはＹは式Ｙ’－ＣＭＰにより表される部分を有し：
Figure 0007082045000028
 、ここで、左の括弧“（”は、ＸおよびＹ間の結合を示し、右または下の括弧および“）”は、ＹおよびＺ間の結合を示し、ｎは約１から１００の整数であり、ｑは約１から４４の整数であり、Ｒ８は－ＣＨ２－または－ＣＨ２－ＣＨ２－Ｃ（ＣＨ３）（ＣＮ）－であり、Ｙ’はＹの残存部分を表す、およびＷは、同一のＷ１基のポリマーを表し、またはＷは同一のまたは異なるＷ１およびＷ２基の共重合体またはランダム共重合体であり、ここで：
Figure 0007082045000029
 、ここで、ｐは２から約１５０の整数であり、Ｒ９は直接結合、－ＣＨ２－ＣＨ２－－ＮＨ－Ｃ（Ｏ）－または－ＣＨ２－ＣＨ２－（Ｏ－ＣＨ２－ＣＨ２）ｔ－ＮＨ－Ｃ（Ｏ）－であり、ｔは１から５の整数であり；かつＲ１０は脂肪族基、アルコールまたは脂肪族アルコールである。
いくつかのかかる実施形態では、ｎは約４０から８０であり、ｐは約１０から１００であり、ｑは約３から２０であり、Ｒ８は－ＣＨ２－ＣＨ２－Ｃ（ＣＨ３）（ＣＮ）－であり、Ｒ９が－ＣＨ２－ＣＨ２－－ＮＨ－Ｃ（Ｏ）－である場合、ＺはそのＣ１でコンジュゲートされたグルコース、ガラクトース、Ｎ－アセチルガラクトサミンまたはＮ－アセチルグルコサミンであり、かつＷが共重合体である場合、Ｒ１０は２－ヒドロキシプロピルである。いくつかの実施形態では、Ｙは式Ｙａ、式Ｙｂ、式Ｙｃ、式Ｙｆ、式Ｙｇ、式Ｙｈ、式Ｙｉ、式Ｙｋ、式Ｙｍまたは式Ｙｎを含む。いくつかの実施形態では、Ｙは式Ｙａ、式Ｙｂ、式Ｙｃ、式Ｙｍまたは式Ｙｎを含む。さらなる別の実施形態では、Ｙは式Ｙａ、式Ｙｂ、式Ｙｃ、式Ｙｍまたは式Ｙｎを含む。
幾つかの実施形態では、Ｘは移植レシピエントが望ましくない免疫応答を発症する外来性移植抗原、患者が望ましくない免疫応答を発症する外来性食物、動物、植物または環境の抗原、患者が望ましくない免疫応答を発症する外来性治療薬、または患者が望ましくない免疫応答を発症する内在性型に対する合成自己抗原、もしくはその免疫寛容誘導部分を含む。様々な抗原の特定の実施例は本明細書で開示される。
かかる治療を必要とする哺乳動物に有効量の式１の化合物（Ｘ－［－Ｙ－－－Ｚ］ｍ）を含む組成物を投与することによる、抗原に対する望ましくない免疫応答のための治療方法もまた、本明細書で提供され、ここでｍは約１から１００の整数であり、Ｘは患者が望ましくない免疫応答を発症する抗原、もしくはその免疫寛容誘導部分を含み、またはＸは循環タンパク質もしくはペプチドまたは抗体に特異的に結合する抗体、抗体フラグメントまたはリガンドを含み、循環タンパク質もしくはペプチドまたは抗体は移植拒絶、治療薬に対する免疫応答、自己免疫疾患、過敏症および／またはアレルギーに原因的に関与し、Ｙはリンカー部分を含み、かつＺはグルコシル化肝臓標的化部分を含む。
幾つかのかかる実施形態では、Ｘは患者が望ましくない免疫応答を発症する抗原、もしくはその免疫寛容誘導部分を含み、およびＹはＸに特異的に結合する抗体、抗体フラグメント、ペプチドまたは他のリガンド、ジスルファニルエチルエステル、式ＹａからＹｐの１つにより表される構造を含み、またはＹは式Ｙ’－ＣＭＰにより表される部分を有する、ここで、左の括弧“（”は、ＸおよびＹ間の結合を示し、右または下の括弧および“）”は、ＹおよびＺ間の結合を示し、ｎは約１から１００の整数であり、ｑは約１から４４の整数であり、Ｒ８は－ＣＨ２－または－ＣＨ２－ＣＨ２－Ｃ（ＣＨ３）（ＣＮ）－であり、Ｙ’はＹの残存部分を表す、およびＷは、同一のＷ１基のポリマーを表し、またはＷは同一のまたは異なるＷ１およびＷ２基の共重合体またはランダム共重合体であり、ここで：
Figure 0007082045000030
 ｐは２から約１５０の整数であり、Ｒ９は直接結合、－ＣＨ２－ＣＨ２－－ＮＨ－Ｃ（Ｏ）－または－ＣＨ２－ＣＨ２－（Ｏ－ＣＨ２－ＣＨ２）ｔ－ＮＨ－Ｃ（Ｏ）－であり、ｔは１から５の整数であり、かつＲ１０は脂肪族基、アルコールまたは脂肪族アルコールである。幾つかのかかる治療方法の実施形態では、Ｘは抗体、抗体フラグメントまたはリガンドを含み、かつ組成物がＸに特異的に結合する循環タンパク質もしくはペプチドまたは抗体のクリアランスのために投与され、循環タンパク質もしくはペプチドまたは抗体が移植拒絶、治療薬に対する免疫応答、自己免疫疾患、過敏症および／またはアレルギーに原因的に関与する。
さらなる別の実施形態では、Ｘは抗体、抗体フラグメントまたはリガンドを含み、かつ組成物は、移植拒絶、治療薬に対する免疫応答、自己免疫疾患、過敏症および／またはアレルギーに原因的に関与する抗体の濃度を患者の血中で少なくとも５０％ｗ／ｗまで減少させるように有効量で投与でき、投与後約１２から約４８時間の間の時間で測定される。
幾つかのかかる治療実施形態では、組成物が抗原部分Ｘに関する患者の寛容化のために投与される。
幾つかの実施形態では、Ｘは移植レシピエントが望ましくない免疫応答を発症する外来性移植抗原、患者が望ましくない免疫応答を発症する外来性食物、動物、植物または環境の抗原、患者が望ましくない免疫応答を発症する外来性治療薬、または患者が望ましくない免疫応答を発症する内在性型に対する合成自己抗原、もしくはその免疫寛容誘導部分を含む。
本明細書で開示される幾つかの実施形態は、式１の化合物を含む組成物を提供する：
Figure 0007082045000031
 ここで：
ｍは約１から１００の整数であり；
Ｘは患者が望ましくない免疫応答を発症する抗原、もしくはその免疫寛容誘導部分を含み；または
Ｘは循環タンパク質もしくはペプチドまたは抗体に特異的に結合する抗体、抗体フラグメントまたはリガンドを含み、循環タンパク質もしくはペプチドまたは抗体は移植拒絶、治療薬に対する免疫応答、自己免疫疾患、過敏症および／またはアレルギーに原因的に関与し；
Ｙはリンカー部分を含み；かつ
Ｚは肝臓標的化部分を含む。
Ｚはまた、はガラクトース、ガラクトサミン、Ｎ－アセチルガラクトサミン、グルコース、グルコサミンまたはＮ－アセチルグルコサミンを含むことができ、例えば、ＹにそのＣ１、Ｃ２またはＣ６でコンジュゲートされている。Ｎ－アセチルガラクトサミンおよびガラクトースと同様に、Ｎ－アセチルグルコサミンおよびグルコースは異なるレクチン受容体に結合する。下記の実施例では、実験データ（および本出願の全開示）は、Ｎ－アセチルグルコサミンとしてのＺの選択はＮ－アセチルガラクトサミンで達成されるものと比較して上昇したレベルの制御性Ｔ細胞応答をもたらすことを示す。幾つかの実施形態では、これは意外にも増強した免疫寛容の誘導および／または対象の血液からの抗原のクリアランスをもたらす。
ＹはＮ－ヒドロキシスクシンイミジルリンカー、マレイミドリンカー、ビニルスルホンリンカー、ピリジルジチオール－ポリ（エチレングリコール）リンカー、ピリジルジチオールリンカー、ｎ－ニトロフェニルカーボネートリンカー、ＮＨＳ－エステルリンカー、およびニトロフェノキシポリ（エチレングリコール）エステルリンカーから選択され得る。
Ｙはまた、以下を含み得る：Ｘに特異的に結合する抗体、抗体フラグメント、ペプチドまたは他のリガンド；ジスルファニルエチルエステル；式ＹａからＹｐの１つにより表される構造：
Figure 0007082045000032
Figure 0007082045000033
Figure 0007082045000034
Figure 0007082045000035
 またはＹは式Ｙ’－ＣＭＰにより表される部分を有し：
Figure 0007082045000036
 ここで：
左の括弧“（”は、ＸおよびＹ間の結合を示し；
右または下の括弧および“）”は、ＹおよびＺ間の結合を示し；
ｎは約１から１００の整数であり；
ｑは約１から４４の整数であり；
Ｒ８は－ＣＨ２－または－ＣＨ２－ＣＨ２－Ｃ（ＣＨ３）（ＣＮ）－であり；
Ｙ’はＹの残存部分を表す（例えば、ＨＳ－ＰＥＧ）；かつ
Ｗは、同一のＷ１基のポリマーを表す、またはＷは同一のまたは異なるＷ１およびＷ２基の共重合体（好ましくはランダム共重合体）、ここで：
Figure 0007082045000037
 ここで：
ｐは２から約１５０の整数であり；
Ｒ９は直接結合、－ＣＨ２－ＣＨ２－－ＮＨ－Ｃ（Ｏ）－（すなわちエチルアセトアミド基または“ＥｔＡｃＮ”）または－ＣＨ２－ＣＨ２－（Ｏ－ＣＨ２－ＣＨ２）ｔ－ＮＨ－Ｃ（Ｏ）－（すなわちペグ化エチルアセトアミド基または“Ｅｔ－ＰＥＧｔ－ＡｃＮ”）であり、
ｔは１から５の整数であり、（特に１から３、およびより具体的には１または２）；かつ
Ｒ１０は脂肪族基、アルコールまたは脂肪族アルコールである。いくつかの実施形態では、Ｒ１０はＣｆアルキルまたはＣｆアルキルＯＨｇであり、ここで、ｆは独立して０から１０の整数であり、かつｇは独立して０から１０の整数である。いくつかの実施形態では、Ｒ１０は２－ヒドロキシプロピルである。
幾つかの実施形態では、特定のリンカーが好ましい。例えば、幾つかの実施形態では、Ｙｍに記載のリンカーは意外にも効果的な寛容エンドポイントが得られる。さらなる実施形態では、式Ｙｎに記載のリンカーは意外にも効果的な寛容エンドポイントが得られる。さらなる別の実施形態では、Ｆ１ｍ’－ＯＶＡ－ｍ１－３－ｎ７９－ｐ９０－ｑ４－ＣＭＰ－ポリ－（ＥｔＰＥＧ１ＡｃＮ－１ＮＡｃＧＬＵ３０－ｒａｎ－ＨＰＭＡ６０の製剤は特に効果的な寛容関連エンドポイントを達成する。幾つかの実施形態では、これらのリンカーの組み合わせは相乗的な効果、および免疫寛容誘導におけるよりさらに予期できない増加をもたらす。
上記の別の態様では、ｎは約４０から８０であり、ｐは約１０から１００であり、ｑは約３から２０であり、Ｒ８は－ＣＨ２－ＣＨ２－Ｃ（ＣＨ３）（ＣＮ）－であり；かつＲ９が－ＣＨ２－ＣＨ２－－ＮＨ－Ｃ（Ｏ）－である場合、ＺはそのＣ１でコンジュゲートされたガラクトースまたはＮ－アセチルガラクトサミンである。
上記のさらに別の態様では、Ｙは式Ｙａ、式Ｙｂ、式Ｙｈ、式Ｙｉ、式Ｙｋ、式Ｙｍまたは式Ｙｎ、特に式Ｙａ、式Ｙｂ、式Ｙｍまたは式Ｙｎを含む。
Ｘは以下をさらに含むことができる：移植レシピエントが望ましくない免疫応答を発症する外来性移植抗原；患者が望ましくない免疫応答を発症する外来性食物、動物、植物または環境の抗原；患者が望ましくない免疫応答を発症する外来性治療薬；または患者が望ましくない免疫応答を発症する内在性型に対する合成自己抗原、もしくはその免疫寛容誘導部分。
本開示はまた、かかる治療を必要とする哺乳動物に本明細書で開示される式１の化合物を含む有効量の組成物を投与することによる、抗原に対する望ましくない免疫応答のための治療方法に関連する。いくつかのかかる方法では、組成物は循環タンパク質もしくはペプチドまたは抗体が移植拒絶、治療薬に対する免疫応答、自己免疫疾患、過敏症および／またはアレルギーに原因的に関与する抗原部分Ｘに特異的に結合する循環タンパク質もしくはペプチドまたは抗体のクリアランスのために投与され得る。組成物が移植拒絶、治療薬に対する免疫応答、自己免疫疾患、過敏症および／またはアレルギーに原因的に関与する抗体の濃度を患者の血中で少なくとも５０％ｗ／ｗまで減少させるように有効量で投与でき、投与後約１２から約４８時間の間の時間で測定される。当該組成物は、抗原部分Ｘに関する患者の寛容化のために投与され得る。
図１Ａ－１Ｄは、ガラクトースコンジュゲートの異なる細胞取り込みを示す一連のグラフである。図１Ａは、Ｆ１ａＡ－ＰＥ－ｍ４－ｎ８０（Ｇａｌ－ＰＥ）がＰＥを肝臓の類洞内皮細胞（ＬＳＥＣ）へ優先的に標的化することを示す。図１Ｂは、Ｆ１ａＡ－ＰＥ－ｍ４－ｎ８０（Ｇａｌ－ＰＥ）がＰＥを肝臓のクッパー細胞（ＫＣ）へ優先的に標的化することを示す。図１Ｃは、Ｆ１ａＡ－ＰＥ－ｍ４－ｎ８０（Ｇａｌ－ＰＥ）がＰＥを肝細胞へ優先的に標的化することを示す。図１Ｄは、Ｆ１ａＡ－ＰＥ－ｍ４－ｎ８０（Ｇａｌ－ＰＥ）がＰＥを肝臓のその他の抗原提示細胞（ＡＰＣｓ）へ優先的に標的化することを示す。＊＝Ｐ＜０．０５。 図２は、Ｇａｌ－ＯＶＡ処置群に見られる最も大きな増殖を伴う、Ｆ１ａＡ－ＯＶＡ－ｍ４－ｎ８０（Ｇａｌ－ＯＶＡ）、ＯＶＡまたは生理食塩水（すなわちナイーブ）で処置されたマウスにおけるＯＴ－Ｉ ＣＤ８＋Ｔ細胞の増殖を示すグラフである。 図３Ａ－３ＢはＴ細胞上のマーカー発現に関するデータを示す一連のグラフである。図３Ａは、ｇａｌ－ＯＶＡ－処置群で最も大きいレベルのＰＤ－１を伴う、生理食塩水、ＯＶＡまたはＦ１ａＡ－ＯＶＡ－ｍ４－ｎ８０（ＧＡＬ－ＯＶＡ）で処置された増殖性Ｔ細胞の世代におけるＰＤ－１（“ＰＤ１＋”）を発現するＯＴ－Ｉ ＣＤ８＋Ｔ細胞の割合を示す。図３Ｂは、ｇａｌ－ＯＶＡ－処置群において最も大きいレベルのアネキシン－Ｖ＋細胞を伴う、生理食塩水、ＯＶＡまたはＦ１ａＡ－ＯＶＡ－ｍ４－ｎ８０（ＧＡＬ－ＯＶＡ）で処置された増殖性Ｔ細胞の世代におけるホスファチジルセリン（“アネキシンＶ＋”として染色される）を発現するＯＴ－Ｉ ＣＤ８＋Ｔ細胞の割合を示す。 図４は、ガラクトースコンジュゲーション［Ｆ１ａＡ－ＯＶＡ－ｍ４－ｎ８０（Ｇａｌ－ＯＶＡ）］がＯＶＡ特異的抗体力価（Ａｂ力価ｌｏｇ－１で示される）により決定されるＯＶＡの免疫原性を減少させることを示すグラフである。 図５は、経時的な反復用量でのＦ１ａＡ－ＯＶＡ－ｍ４－ｎ８０（Ｇａｌ－ＯＶＡ）の投与がマウスの血清からＯＶＡ特異的抗体を枯渇させることができることを示す。 図６Ａ－６Ｆは、ＯＶＡ特異的免疫応答の軽減に関するデータを示す。図６Ａは、ＯＶＡおよびＬＰＳでチャレンジされたマウスにおける免疫応答を示す。図６Ｂは、ＯＶＡで処置されたマウスにおける免疫応答を示す一方で、図６Ｃは、ナイーブマウスにおける免疫応答を示す。図６Ｄおよび６Ｅ（それぞれ）は、Ｆ１ａＡ－ＯＶＡ－ｍ４－ｎ８０（ｍＧａｌ－ＯＶＡ；６Ｄ）およびＦ１ｂ－ＯＶＡ－ｍ１－ｎ４４－ｐ３４（ｐＧａｌ－ＯＶＡ；６Ｅ）がＯＶＡおよびアジュバントＬＰＳでの皮内チャレンジ後の流入領域リンパ節におけるＯＶＡ特異的免疫応答を軽減できることを示す。図６Ｆは親出願のものであり、本開示の一部を形成しない。 図７Ａ－７Ｂは、Ｆ１ａＡ－ＯＶＡ－ｍ４－ｎ８０およびＦ１ｂ－ＯＶＡ－ｍ１－ｎ４４－ｐ３４の特性評価を示す。図７Ａは、Ｆ１ａＡ－ＯＶＡ－ｍ４－ｎ８０（白三角形）、Ｆ１ｂ－ＯＶＡ－ｍ１－ｎ４４－ｐ３４（塗りつぶした円）およびコンジュゲートされていないＯＶＡ（実線）のサイズ排除ＨＰＬＣ形跡を示す。左へのシフトは分子量の増加を表す。図７Ｂは、ＯＶＡコンジュゲーション後の増加した分子量を実証するポリアクリルアミドゲルを示す：（１．）コンジュゲートされていないＯＶＡ、（２．）Ｆ１ａＡ－ＯＶＡ－ｍ４－ｎ８０および（３．）Ｆ１ｂ－ＯＶＡ－ｍ１－ｎ４４－ｐ３４。 図８Ａ－８Ｂは、Ｆ１ｍ’－ＯＶＡ－ｍ１－３－ｎ７９－ｐ９０－ｑ４－ＣＭＰ－ポリ－（ＥｔＰＥＧ１ＡｃＮ－１ＮＡｃＧＬＵ３０－ｒａｎ－ＨＰＭＡ６０［標識化ＯＶＡ－ｐ（Ｇｌｕ－ＨＰＭＡ）および塗りつぶした円として示される］またはＦ１ｍ’－ＯＶＡ－ｍ１－３－ｎ７９－ｐ９０－ｑ４－ＣＭＰ－ポリ－（ＥｔＰＥＧ１ＡｃＮ－１ＮＡｃＧＡＬ３０－ｒａｎ－ＨＰＭＡ６０［標識化ＯＶＡ－ｐ（Ｇａｌ－ＨＰＭＡ）および塗りつぶしたダイヤモンドとして示される］の投与後の抗原特異的免疫応答における減少に関するデータを示す。図８Ａは、ＣＤ４５．１＋マウスにおける抗原チャレンジの４日後に流入領域リンパ節（鼠径および膝窩）から定量されるＯＴＩ ＣＤ８＋Ｔ細胞集団（ＣＤ３ｅ＋／ＣＤ８α＋／ＣＤ４５．２＋）のフローサイトメトリーの検出を示す。ＯＴ－Ｉ ＣＤ８＋Ｔ細胞における有意な減少を、ＯＶＡ－ｐ（Ｇａｌ－ＨＰＭＡ）およびＯＶＡ－ｐ（Ｇｌｕ－ＨＰＭＡ）の投与後に検出した。図８Ｂは、ＣＤ４５．１＋マウスにおける抗原チャレンジの４日後に流入領域リンパ節（鼠径および膝窩）から定量されるＯＴＩＩ ＣＤ４＋Ｔ細胞集団（ＣＤ３ｅ＋／ＣＤ４＋／ＣＤ４５．２＋）のフローサイトメトリーの検出を示す。ＯＴ－ＩＩ ＣＤ４＋Ｔ細胞における有意な減少は、ＯＶＡ－ｐ（Ｇａｌ－ＨＰＭＡ）およびＯＶＡ－ｐ（Ｇｌｕ－ＨＰＭＡ）の投与後に検出した＊＝Ｐ＜０．０５、＊＊＝Ｐ＜０．０１；＃＝Ｐ＜０．０５、＃＃＝Ｐ＜０．０１（＃はナイーブ動物と比較して有意性を表す）。 図９Ａ－９Ｂは、抗原チャレンジ後のマウスのリンパ節および脾臓における抗原特異的制御性Ｔ細胞の増加に関するデータを示す。図９Ａは、ＣＤ４５．１＋マウスにおける抗原チャレンジの４日後にリンパ節から収集されるＯＴＩＩ Ｔ制御細胞（ＣＤ３ｅ＋ＣＤ４＋ ＣＤ４５．２＋ ＣＤ２５＋ ＦｏｘＰ３＋）における、Ｆ１ｍ’－ＯＶＡ－ｍ１－３－ｎ７９－ｐ９０－ｑ４－ＣＭＰ－ポリ－（ＥｔＰＥＧ１ＡｃＮ－１ＮＡｃＧＬＵ３０－ｒａｎ－ＨＰＭＡ６０［標識化ＯＶＡ－ｐ（Ｇｌｕ－ＨＰＭＡ）および塗りつぶした円として示される］およびＦ１ｍ’－ＯＶＡ－ｍ１－３－ｎ７－ｐ９０－ｑ４－ＣＭＰ－ポリ－（ＥｔＰＥＧ１ＡｃＮ－１ＮＡｃＧＡＬ３０－ｒａｎ－ＨＰＭＡ６０［標識化ＯＶＡ－ｐ（Ｇａｌ－ＨＰＭＡ）および塗りつぶしたダイヤモンドとして示される］誘導増加のフローサイトメトリーの検出を示す。図９Ｂは、ＯＶＡまたは生理食塩水（すなわちチャレンジ）で処置された動物と比較してＯＶＡ－ｐ（Ｇｌｕ－ＨＰＭＡ）またはＯＶＡ－ｐ（Ｇａｌ－ＨＰＭＡ）で処置されたマウスの脾臓からの対応する解析を示す＊＝Ｐ＜０．０５、＊＊＝Ｐ＜０．０１；＊＊＊＝Ｐ＜０．００１；＃＝Ｐ＜０．０１、＃＃＝Ｐ＜０．０１；＃＃＃＝Ｐ＜０．００１（＃はナイーブ動物と比較して有意性を表す）。 図１０は、ＣＤ４５．１＋マウスにおける抗原チャレンジの４日後の抗原特異的エフェクター細胞（ＩＦＮγ＋ＯＴＩ ＣＤ８＋Ｔ細胞（ＣＤ３ｅ＋ＣＤ８α＋ＣＤ４５．２＋ ＩＦＮγ＋）の割合における減少に関するフローサイトメトリーデータを示す。Ｆ１ｍ’－ＯＶＡ－ｍ１－３－ｎ７９－ｐ９０－ｑ４－ＣＭＰ－ポリ－（ＥｔＰＥＧ１ＡｃＮ－１ＮＡｃＧＬＵ３０－ｒａｎ－ＨＰＭＡ６０［標識化ＯＶＡ－ｐ（Ｇｌｕ－ＨＰＭＡ）および塗りつぶした円として示される］またはＦ１ｍ’－ＯＶＡ－ｍ１－３－ｎ７９－ｐ９０－ｑ４－ＣＭＰ－ポリ－（ＥｔＰＥＧ１ＡｃＮ－１ＮＡｃＧＡＬ３０－ｒａｎ－ＨＰＭＡ６０［標識化ＯＶＡ－ｐ（Ｇａｌ－ＨＰＭＡ）および塗りつぶしたダイヤモンドとして示される］コンジュゲートで処置されたマウスはＯＶＡまたは生理食塩水（すなわちチャレンジ）で処置されたマウスと比較して抗原チャレンジ後の有意に少ないＩＦＮγ＋ ＯＴＩ ＣＤ８＋Ｔ細胞を生成した＊＝Ｐ＜０．０１、＊＊＝Ｐ＜０．０１；＃＃＝Ｐ＜０．０１（＃はナイーブ動物と比較して有意性を表す）。 図１１Ａ－１１Ｂは、ＯＴＩＩ養子移入モデルにおけるＴ細胞欠失および制御に関するデータを示し、ここで、ＯＴＩＩ細胞（ＣＤ４５．２＋マウスからのＣＤ４＋Ｔ細胞）をＣＤ４５．１＋レシピエントに養子移入し、Ｆ１ｍ’－ＯＶＡ－ｍ１－３－ｎ７９－ｐ９０－ｑ４－ＣＭＰ－ポリ－（ＥｔＰＥＧ１ＡｃＮ－１ＮＡｃＧＡＬ３０－ｒａｎ－ＨＰＭＡ６０［“ＯＶＡ－ｐ（Ｇａｌ－ＨＰＭＡ）”］またはＦ１ｍ’－ＯＶＡ－ｍ１－３－ｎ７９－ｐ９０－ｑ４－ＣＭＰ－ポリ－（ＥｔＰＥＧ１ＡｃＮ－１ＮＡｃＧＬＵ３０－ｒａｎ－ＨＰＭＡ６０［“ＯＶＡ－ｐ（Ｇｌｕ－ＨＰＭＡ）”］、またはポリマーに結合していないＯＶＡ［“ＯＶＡ”］で処置され、Ｔ制御性応答を誘導し、ワクチン媒介抗原チャレンジへの引き続く応答を予防する。３ｘ１０５ＣＦＳＥ－標識化ＯＴＩおよび３ｘ１０５ＣＦＳＥ－標識化ＯＴＩＩ細胞の両方を０日目にＣＤ４５．１＋マウス（群あたりｎ＝８マウス）へ養子移入した。１、４および７日目に、免疫寛容誘導用量またはコントロール用量を投与した。１つのレジメンでは、ＯＶＡは、１日に２．５μｇ、４日に２．５μｇ、および７日に１６μｇの用量で提供した。他には、ＯＶＡは、同一の総用量について、１日に７μｇ、４日に７μｇ、および７日に７μｇの用量で提供した。同様に、ｐＧａｌ－ＯＶＡおよびｐＧｌｕ－ＯＶＡをそれぞれその他の群に同一の用量で１日に２．５μｇ、４日に２．５μｇ、および７日に１６μｇまたは１日に７μｇ、４日に７μｇ、および７日に７μｇ、ここですべての用量はＯＶＡ等価用量ベースである、を投与した。最終群では、同日に生理食塩水を投与した。１４日目に、レシピエントマウスをその後皮内注射によりリポ多糖（５０ｎｇ）でアジュバントされたＯＶＡ（１０μｇ）でチャレンジした。１９日目に流入領域リンパ節の特性評価を行い、欠失が実際に起こったかどうか、および養子移入した細胞から制御性Ｔ細胞が誘導されたかどうかを決定した。図１１Ａは、チャレンジ後に存在するＯＴＩＩ細胞の数を示し、かつ図１１Ｂは、ＦｏｘＰ３＋ＣＤ２５＋細胞（Ｔ制御性細胞のマーカー）の頻度を示す。＊および＃は、ｐ＜０．０５を示し、＊＊および＃＃は、ｐ＜０．０１を示し、かつ＃＃＃は、Ｐ＜０．００１を示す。 図１２Ａ－１２Ｂは、ＯＴＩ養子移入モデルにおけるＴ細胞欠失および制御に関するデータを示し、ＯＴＩ細胞（ＣＤ４５．２＋マウスからのＣＤ８＋Ｔ細胞）をＣＤ４５．１＋レシピエントに養子移入した、Ｆ１ｍ’－ＯＶＡ－ｍ１－３－ｎ７９－ｐ９０－ｑ４－ＣＭＰ－ポリ－（ＥｔＰＥＧ１ＡｃＮ－１ＮＡｃＧＡＬ３０－ｒａｎ－ＨＰＭＡ６０［“ＯＶＡ－ｐ（Ｇａｌ－ＨＰＭＡ）”］またはＦ１ｍ’－ＯＶＡ－ｍ１－３－ｎ７９－ｐ９０－ｑ４－ＣＭＰ－ポリ－（ＥｔＰＥＧ１ＡｃＮ－１ＮＡｃＧＬＵ３０－ｒａｎ－ＨＰＭＡ６０［“ＯＶＡ－ｐ（Ｇｌｕ－ＨＰＭＡ）”］、またはポリマーに結合していないＯＶＡ［“ＯＶＡ”］で処置され、Ｔ制御性応答を誘導し、ワクチン媒介抗原チャレンジへの引き続く応答を予防する。３ｘ１０５ＣＦＳＥ－標識化ＯＴＩおよび３ｘ１０５ＣＦＳＥ－標識化ＯＴＩＩ細胞の両方を０日目にＣＤ４５．１＋マウス（群あたりｎ＝８マウス）へ養子移入した。１、４および７日目に、免疫寛容誘導用量またはコントロール用量を投与した。１つのレジメンでは、ＯＶＡは、１日に２．５μｇ、４日に２．５μｇ、および７日に１６μｇの用量で提供した。他には、ＯＶＡは、同一の総用量について、１日に７μｇ、４日に７μｇ、および７日に７μｇの用量で提供した。同様に、ｐＧａｌ－ＯＶＡおよびｐＧｌｕ－ＯＶＡをそれぞれその他の群に同一の用量で１日に２．５μｇ、４日に２．５μｇ、および７日に１６μｇまたは１日に７μｇ、４日に７μｇ、および７日に７μｇ、ここですべての用量はＯＶＡ等価用量ベースである、を投与した。最終群では、同日に生理食塩水を投与した。１４日目に、レシピエントマウスをその後皮内注射によりリポ多糖（５０ｎｇ）でアジュバントされたＯＶＡ（１０μｇ）でチャレンジした。１９日目に流入領域リンパ節の特性評価を行い、欠失が実際に起こったかどうか、およびＴ細胞がそれらのサイトカイン発現を介して抗原再曝露に応答性かどうかを決定した。図１２Ａは、チャレンジ後に存在するＯＴＩ細胞の数を示し、かつ図１２Ｂは、ＩＦＮγ－発現細胞（アネルギーを示すその欠如）の頻度を示す。＊および＃は、ｐ＜０．０５を示し、＊＊および＃＃は、ｐ＜０．０１を示す）。 図１３は、血糖レベルに関するデータを示す。マウスをＦ１ｍ’－Ｐ３１－ｍ１－３－ｎ７９－ｐ９０－ｑ４－ＣＭＰ－ポリ－（ＥｔＰＥＧ１ＡｃＮ－１ＮＡｃＧＬＵ３０－ｒａｎ－ＨＰＭＡ６０［標識化Ｐ３１－ｐ（Ｇｌｕ－ＨＰＭＡ）］、Ｆ１ｍ’－Ｐ３１－ｍ１－３－ｎ７９－ｐ９０－ｑ４－ＣＭＰ－ポリ－（ＥｔＰＥＧ１ＡｃＮ－１ＮＡｃＧＡＬ３０－ｒａｎ－ＨＰＭＡ６０［標識化Ｐ３１－ｐ（Ｇａｌ－ＨＰＭＡ）コンジュゲート（または生理食塩水）で処置した。Ｐ３１－ｐ（Ｇｌｕ－ＨＰＭＡ）またはＰ３１－ｐ（Ｇａｌ－ＨＰＭＡ）を受ける動物は４２日間正常な血糖レベルを維持した一方で、Ｐ３１または生理食塩水で処置された動物は５－１０日で急速な高血糖を発症し、本明細書で開示されるコンジュゲートがＴ細胞誘導性自己免疫性糖尿病からマウスを保護することを実証した。 図１４は、非肥満糖尿病（ＮＯＤ）マウスにおける自発性糖尿病の生成に関するデータを示す。Ｆ１ｃ’－インスリン－Ｂ－ｍ１－ｎ４－ｐ９０－ＣＭＰ－ポリ－（ＥｔＰＥＧ１ＡｃＮ－１ＮＡｃＧＬＵ３０－ｒａｎ－ＨＰＭＡ６０で処置されたマウスは塗りつぶした四角として示される。Ｆ１ｃ’－インスリン－Ｂ－ｍ１－ｎ４－ｐ９０－ＣＭＰ－ポリ－（ＥｔＰＥＧ１ＡｃＮ－１ＮＡｃＧＡＬ３０－ｒａｎ－ＨＰＭＡ６０で処置されたマウスは塗りつぶした三角形として示される。生理食塩水で処置されたマウスは塗りつぶしたダイヤモンドとして示される。式１の化合物で動物を処置することは、生理食塩水で処置された動物と比較してＮＯＤマウスにおける糖尿病発症の発生率を減少させた。 図１５Ａ－１５Ｂは、合成糖ポリマーに結合されたモデル抗原ＯＶＡの生体分布に関するデータを示し、脾臓における取り込みを制限しながら肝臓における取り込みを示す。Ａ．ＯＶＡ（１）または様々な糖ポリマーにコンジュゲートされたＯＶＡ（２－５）で処置された動物から取得された灌流した肝臓の蛍光シグナル。Ｂ．ＯＶＡ（１）または様々な糖ポリマーにコンジュゲートされたＯＶＡ（２－５）で処置された動物から取得された脾臓の蛍光画像。製剤は以下の通りである：１．ＯＶＡ、２．ＯＶＡ－ｐ（Ｇａｌβ－ＨＰＭＡ）、３．ＯＶＡ－ｐ（Ｇａｌ－ＨＰＭＡ）、４．ＯＶＡ－ｐ（Ｇｌｕβ－ＨＰＭＡ）、５．ＯＶＡ－ｐ（Ｇｌｕ－ＨＰＭＡ）。 図１６Ａ－１６Ｆは、リンカー部分を比較する実験に関するデータを示す。ＯＶＡ－ｐ（Ｇａｌ－ＨＰＭＡ）、ＯＶＡ－ｐ（Ｇｌｕ－ＨＰＭＡ）、ＯＶＡ－ｐ（Ｇａｌβ－ＨＰＭＡ）、およびＯＶＡ－ｐ（Ｇｌｕβ－ＨＰＭＡ）コンジュゲートを合成し、かつ抗原特異的Ｔ細胞アネルギーを誘導し、かつ長期のメモリーに関与するＴ細胞集団排除を排除するそれらの能力について試験した。図１６Ａは、７日間の実験のための治療レジメンの模式図を示す。図１６Ｂは、ＣＳＦＥ希釈によりアッセイされる増殖性ＯＴＩ脾臓Ｔ細胞の割合を示す。図１６Ｃは、ＯＶＡ－糖ポリマーコンジュゲートまたは遊離ＯＶＡで処置された動物の脾臓におけるアネキシンＶ＋ＯＴＩ Ｔ細胞の割合を示す。図１６Ｄは、ＰＤ－１＋脾臓ＯＴＩ細胞の割合を示す。図１６Ｅは、ＯＴＩ集団におけるＴメモリー細胞の割合を示す、ここで、Ｔメモリー細胞はＣＤ６２Ｌ＋およびＣＤ４４＋として規定された。図１６Ｆは、ＣＤ１２７を発現するＯＴＩ細胞の割合を示す。特に注目すべきことは、意外にも、α－配座と比較してβ－配座のグルコースまたはガラクトースを利用する組成物の増強した有効性である。＊＝Ｐ＜０．０５ ＊＊＝Ｐ＜０．０１；＃＝Ｐ＜０．０５、＃＃＝Ｐ＜０．０１および＃＃＃＝Ｐ＜０．００１（＃はＯＶＡ単独で処置された動物と比較して有意性を表す）。 図１７は、ナイーブ、コントロール、および実験群における糖尿病の症状の発症に関するデータを示す。 図１８は、トランスファーされたＴ細胞における長く持続する寛容の誘導の評価に関する実験において使用される様々な処置群および実験的タイムラインを示す。 図１９Ａ－１９Ｂは、リンパ節におけるＴ細胞組成物に関するデータを示す。図１９Ａは、様々な処置群における抗原チャレンジ後の残存するＯＴＩ細胞を示す（総ＣＤ８＋細胞の割合として）。図１９Ｂは、様々な処置群における抗原チャレンジ後の残存するＯＴＩＩ細胞を示す（総ＣＤ４＋細胞の割合として）。 図２０は、内在性のＴ細胞における長く持続する寛容の誘導の評価に関する実験において使用される様々な処置群および実験的タイムラインを示す。 図２１Ａ－２１Ｂは、リンパ節におけるＴ細胞組成物に関するデータを示す。図２１Ａは、様々な処置群における抗原チャレンジ後の残存するＯＴＩ細胞を示す（総ＣＤ８＋細胞の割合として）。図２１Ｂは、様々な処置群における抗原チャレンジ後の残存するＯＴＩＩ細胞を示す（総ＣＤ４＋細胞の割合として）。 図２２は、抗体応答を予防的に減少させるための本明細書で開示される組成物の能力を評価するために使用される実験設計を示す。 図２３は、様々な処置群におけるマウスからの抗アスパラギナーゼ抗体の量に関する実験データを示す。 図２４Ａ－２４Ｂは、ミエリンオリゴデンドロサイト糖タンパク質（ＭＯＧ）に対する寛容を評価することにおいて使用される実験設計および組成物を示す。図２４Ａは、ドナーマウスを免疫し、かつレシピエントマウスを処置することにおいて使用される実験的プロトコルを示す。図２４Ｂは、本明細書で開示される幾つかの実施形態に従って、免疫寛容誘導組成物の一実施例を示す。 図２５Ａ－２５Ｂは、免疫寛容誘導組成物の第一の濃度を使用するＭＯＧに対する寛容の誘導に関する実験データを示す。図２５Ａは、様々な処置群における疾患発症の遅延に関するデータを示す。図２５Ｂは、様々な処置群における減量の減少に関するデータを示す。 図２６Ａ－２６Ｂは、免疫寛容誘導組成物のさらなる濃度を使用するＭＯＧに対する寛容の誘導に関する実験データを示す。図２６Ａは、様々な処置群における疾患発症の遅延に関するデータを示す。図２６Ｂは、様々な処置群における減量の減少に関するデータを示す。 図２７Ａ－２７Ｅは、ベータ配座のｐＧａｌおよびｐＧｌｕ組成物の生体分布に関する実験データを示す。図２７Ａは、肝臓におけるＬＳＥＣへの様々なコンジュゲートを介するＯＶＡの標的化を示す。図２７Ｂは、肝臓におけるクッパー細胞への様々なコンジュゲートを介するＯＶＡの標的化を示す。図２７Ｃは、肝臓におけるＣＤ１１ｃ＋細胞への様々なコンジュゲートを介するＯＶＡの標的化を示す。図２７Ｄは、肝臓における肝細胞への様々なコンジュゲートを介するＯＶＡの標的化を示す。図２７Ｅは、肝臓における星状細胞への様々なコンジュゲートを介するＯＶＡの標的化を示す。
詳細な説明
２つの公知のアシアロ糖タンパク質受容体（“ＡＳＧＰＲ”）は、肝細胞および肝臓類洞内皮細胞（または“ＬＳＥＣ”）上に発現される。その他のガラクトース／ガラクトサミン／Ｎ－アセチルガラクトサミン受容体は複数の細胞型［例えば、樹状細胞、肝細胞、ＬＳＥＣ、およびクッパー細胞］上に様々な形態で確認され得る。グルコース、グルコサミンおよびＮ－アセチルグルコサミンの分子標的および細胞標的が対応するガラクトース異性体のそれらから区別できるが、いくつかの例において、Ｚがグリコシル化部分である対応する式１の化合物が比較的効果的であるが、本明細書で開示されるいくつかの実施形態では、それらが意外にも効果的であることが見出された。樹状細胞は、“プロフェッショナルな抗原提示細胞”と考えられ、それは、それらの主要な機能が、免疫応答を生成するための免疫系に抗原を提示することだからである。肝臓内のいくつかの細胞は、抗原を提示することができると知られているが、肝臓が免疫寛容誘導に関与していることはより知られている。肝臓は、免疫寛容誘導臓器であると理解されている。例えば、移植臓器の１つが肝臓である場合、複数の臓器移植の事例では、より低い拒絶の発生率が報告されている。ＬＳＥＣの事例は、当該文献よりも新しく；結果的に、免疫寛容誘導および／または炎症性免疫応答の緩和におけるそれらの役割は、未だ広く認められておらず、またはあまり理解されていない。しかしながら、それらはまた、抗原特異的な寛容の誘導において重要な役割を果たしうることが明らかになってきている。
赤血球表面の特有の特徴の１つは、その糖鎖付加、すなわち、かなりの数のグリコシル化タンパク質の存在である。実際に、グリコホリン（例えば、グリコホリンＡ）は、赤血球結合のための標的として利用されてきた。グリコホリンは、共有結合で付着した多くの糖鎖を有するタンパク質であり、終末端はシアル酸である。赤血球が古くなり、かつクリアランスの機が熟すと、そのグリコホリンの末端シアル酸は、失われる傾向があり、遊離末端でＮ－アセチルガラクトサミンを残す。Ｎ－アセチルガラクトサミンは肝細胞関連ＡＳＧＰＲにより選択的に受け取られるリガンドであり、肝細胞によるＮ－アセチルガラクトサミン－含有物質の結合、ならびに肝臓におけるそれらの引き続く取り込みおよびプロセシングにつながる。
これまでに、肝臓の標的化をもたらす様式での治療薬の糖鎖付加は、治療薬の乏しい循環半減期をもたらす肝臓による初回通過クリアランスのために回避されるべきであると当業者に理解されている。同様に、いくつかのモノクローナル抗体は、それらのＦｃ受容体への最適な結合のために、ＡＳＮ２９７で特異的にグリコシル化される必要がある。驚いたことに、ガラクトシル化およびグルコシル化は免疫寛容誘導を誘導する様式で使用できることがここに見出され、本明細書に開示される。
本開示は、幾つかの実施形態では、肝臓、特に肝細胞、ＬＳＥＣ、クッパー細胞および／または星状細胞、より特には肝細胞および／またはＬＳＥＣへの送達のため（および、それらによる取り込みのため）に標的化されるある特定の治療用組成物、ならびに、さらにより特には、特異的にＡＳＧＰＲに結合するある特定の治療用組成物を提供する。肝臓標的化は、治療の２つの機構：寛容化およびクリアランスを容易にする。寛容化は、アポトーシス細胞をクリアランスする際および免疫系により“自己（ｓｅｌｆ）”として認識されるそれらのタンパク質をプロセシングする際の肝臓の役割、並びに免疫寛容のための周辺タンパク質をサンプリングする際の肝臓の役割を活用する。クリアランスは、毒素、ポリペプチド等を急速に除去および分解することによる血液精製における肝臓の役割を活用する。肝臓へのこれらの組成物の標的化は、ガラクトシル化部分（いくつかの実施形態では分子中のその他のまたは任意の炭素でコンジュゲーションを伴うが、例えば、ガラクトース、ガラクトサミンおよびＮ－アセチルガラクトサミン、特にＣ１、Ｃ２またはＣ６でコンジュゲートされている）により、またはかかる肝臓標的化が望ましいポリペプチドを脱－シアル化することにより達成される。ガラクトシル化またはグルコシル化部分は、抗原に化学的にコンジュゲートされ、または組換えにより融合されうる一方で、脱シアル化は抗原ポリペプチド上のガラクトース様部分を晒す。当該抗原は、内在性（自己抗原）または外因性（外来性抗原）であり得、限定されないが：移植患者が望ましくない免疫応答（例えば、移植拒絶）を発症する外来性の移植抗原、患者が望ましくない免疫（例えば、アレルギー性または過敏症）応答を発症する外来性の食物、動物、植物もしくは環境の抗原、患者が望ましくない免疫応答（例えば、過敏症および／または減少治療活性）を発症する治療薬、患者が望ましくない免疫応答（例えば、自己免疫疾患）を発症する自己抗原、またはそれらの免疫寛容誘導部分（例えば、フラグメントまたはエピトープ）；を含み；これらの組成物は、抗原に対する寛容化を誘導するために有用である。あるいは、ガラクトシル化または他の肝臓標的化部分は、循環タンパク質もしくはペプチドまたは抗体に特異的に結合する、抗体、抗体フラグメントもしくはリガンドにコンジュゲートでき、当該循環タンパク質もしくはペプチドまたは抗体は、移植拒絶、治療薬に対する免疫応答、自己免疫疾患、および／またはアレルギー（上述されるように）に原因的に関与し；これらの組成物は、循環タンパク質、ペプチドまたは抗体をクリアランスするために有用である。従って、本開示の組成物は、実施形態に応じて、望ましくない免疫応答、例えば、移植拒絶、治療薬に対する免疫応答、自己免疫疾患、および／またはアレルギー治療するために使用されうる。少なくとも１つの薬学的に許容可能な賦形剤と混合される治療有効量の本開示の組成物を含有する医薬組成物もまた提供される。別の態様では、本開示は、移植拒絶、治療薬に対する応答、自己免疫疾患またはアレルギーなどの望ましくない免疫応答の治療のための方法を提供する。
定義
本明細書中で使用されるように、以下の単語および語句は使用される文脈が他のことを示す場合を除き、下記に記載される意味を有すると一般に意図される。
文脈が明らかに別段の指示をしない限り、単数形“ａ”、“ａｎ、”および“ｔｈｅ”は、複数の対象を含む。
“約”という用語は、数値に関連して使用される場合、典型的により低い限界、すなわち、例えば、指示される数値より５－１０％小さい値を有し、かつ高い限界、すなわち、例えば、指示される数値より５－１０％大きい値を有する範囲以内の数値を包含することを意味する。記載のエンドポイントを含む、開示される範囲内の任意の値もまた含まれる。
本明細書中で使用されるように、“抗原”は、Ｔ細胞受容体、主要組織適合遺伝子複合体クラスＩおよびＩＩ、Ｂ細胞受容体または抗体などの適応免疫応答の受容体のための標的として機能する任意の物質である。いくつかの実施形態では、抗原は体内から由来してもよい（例えば“自己（ｓｅｌｆ）”、“自己（ａｕｔｏ）”または“内在性の”）。さらなる実施形態では、例えば、吸入、摂取、注射、または移植、経皮的に、により入り込み、抗原が体外から由来してもよい（“非自己”、“外来性の（ｆｏｒｅｉｇｎ）”または“外因性の（外因性）”）。いくつかの実施形態では、外因性抗原は体内で生化学的に修飾されていてもよい。外来性抗原は、食物抗原、動物抗原、植物抗原、環境抗原、治療薬、同種移植において存在する抗原を含むが、これらに限定されない。
本明細書で使用される“抗原結合分子”は、分子、特に免疫グロブリン分子などのタンパク質に関し、エピトープへの結合（いくつかの実施形態での特異的な結合）を提供している抗体可変領域を含有する。抗体可変領域は、例えば、完全な抗体、抗体フラグメント、ならびに抗体もしくは抗体フラグメントの組換え誘導体中に存在しうる。本明細書で使用される抗体の“抗原結合フラグメント”（または“結合部分”）という用語は、標的配列に特異的に結合する能力を保持する１つ以上の抗体のフラグメントを指す。抗体可変領域を含有する抗原結合フラグメントは、“Ｆｖ”、“Ｆａｂ”、および“Ｆ（ａｂ’）２”領域、“単一ドメイン抗体（ｓｄＡｂ）”、“ナノボディー”、“一本鎖Ｆｖ（ｓｃＦｖ）”フラグメント、“直列型のｓｃＦｖｓ”（ＶＨＡ－ＶＬＡ－ＶＨＢ－ＶＬＢ）、“ダイアボディー（ｄｉａｂｏｄｉｅｓ）”、“トリアボディー（ｔｒｉａｂｏｄｉｅｓ）”または“トリボディー（ｔｒｉｂｏｄｉｅｓ）”、“一本鎖ダイアボディー（ｓｃＤｂ）”、および“二重特異的なＴ細胞エンゲージャー（ｂｉ－ｓｐｅｃｉｆｉｃ Ｔ－ｃｅｌｌ ｅｎｇａｇｅｒｓ）（ＢｉＴＥｓ）”を含む（限定なし）。
本明細書中で使用されるように、“化学改変”は、ポリペプチドの１つ以上のアミノ酸の天然に存在する化学構造における変化を指す。かかる改変は側鎖または末端にすることができ、例えば、アミノ末端またはカルボキシル末端を変化させる。いくつかの実施形態では、ポリペプチドを他の材料に連結させ、または治療薬に付着させるために都合よく使用されうる化学基を作製するために、改変は有用である。
“含む（ｉｎｃｌｕｄｉｎｇ）”、“含有する”、または“により特徴づけられる”と同義の“含む（ｃｏｍｐｒｉｓｉｎｇ）”という用語は、包括的もしくは非限定的であり、かつ付加的な列挙されていない要素または方法工程を除外しない。“からなる”という語句は、任意の要素、工程、または特定されない成分を除外する。“本質的に～からなる”という語句は、特定される材料もしくは工程の主題が記載される範囲を限定し、かつそれらは、その基礎および新規の特徴に実質的に影響しない。実施形態が本明細書中で“を含む（ｃｏｍｐｒｉｓｉｎｇ）”という用語で記載される場合は、“からなる”および／または“実質的にからなる”という用語で記載されるその他類似の実施形態もまた提供されると理解される。移行句として特許請求の範囲において使用される場合、それぞれは、別々に解釈されるべきであり、かつ適切な法的および事実的な文脈で解釈されるべきである（例えば、“を含む（ｃｏｍｐｒｉｓｉｎｇ）”はよりオープンエンドな句であるが、“からなる（ｃｏｎｓｉｓｔｉｎｇ）”がより排他的であり、かつ“実質的にからなる”が中盤を達成すると考えられる）。
“保存的変化”は、活性を変化させずに一般にアミノ酸配列に対してなすことができる。これらの変化は、“保存的置換”または“変異”と称され；すなわち、特定のサイズまたは特徴を有するアミノ酸の群に属するアミノ酸を別のアミノ酸と置換することができる。アミノ酸配列についての置換物は、そのアミノ酸が属するクラスの他のメンバーから選択することができる。例えば、非極性（疎水性）アミノ酸は、アラニン、ロイシン、イソロイシン、バリン、プロリン、フェニルアラニン、トリプトファン、メチオニン、およびチロシンを含む。極性の中性のアミノ酸はグリシン、セリン、スレオニン、システイン、チロシン、アスパラギンおよびグルタミンを含む。正電荷の（塩基性）アミノ酸は、アルギニン、リジンおよびヒスチジンを含む。負電荷の（酸性）アミノ酸は、アスパラギン酸およびグルタミン酸を含む。かかる置換は、ポリアクリルアミドゲル電気泳動または等電点により決定される見かけ上の分子量に実質的に影響すると予想されない。保存的置換はまた、配列の光学異性体を他の光学異性体に置換すること、具体的には配列の１つ以上残基についてＤアミノ酸をＬアミノ酸に置換することを含む。さらに、配列中のアミノ酸全部がＤからＬへの異性体置換を受けうる。例示的保存的置換は、正電荷を維持するＡｒｇをＬｙｓへ、およびその逆；負電荷を維持するＡｓｐをＧｌｕへ、およびその逆；ＴｈｒをＳｅｒへ、結果、遊離ＯＨが維持される；ならびに遊離ＮＨ２を維持するＡｓｎをＧｌｎへの置換を含むが、これらに限定されない。化学誘導体化のための要求が生じるならば、保存的置換のさらに別のタイプは、望ましい化学反応性を有するアミノ酸が化学的コンジュゲーション反応のための反応性部位を付与するために導入される場合を構成する。かかるアミノ酸は、Ｃｙｓ（スルフヒドリル基を挿入する）、Ｌｙｓ（第一級アミンを挿入する）、ＡｓｐおよびＧｌｕ（カルボン酸基を挿入する）、またはケトン、アジド、アルキン、アルケン、およびテトラジン側鎖を含有する特殊な非標準アミノ酸を含むが、これらに限定されない。遊離ＮＨ２またはＳＨを有するアミノ酸の保存的置換または付加は、式１のリンカーおよびガラクトシル化部分との化学的コンジュゲーションのために特に有利でありうる。さらに、ポリペプチド配列または対応する核酸配列は、いくつかの場合において、ポリペプチドまたは核酸フラグメントの機能の喪失なく作製されうる。置換は、例えば、１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０、１５、２０、２５、３０、３５、４０、４５、５０以上の残基を含みうる（列挙されたものの間の任意の数の置換を含む）。本発明において使用可能な変異体は、２００まで（例えば、１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０、１５、２０、２５、３０、３５、４０、４５、５０、５５、６０、６５、７０、７５、８０、８５、９０、９５、１００、１１０、１２０、１３０、１４０、１５０、１６０、１７０、１８０、１９０、または２００まで、記載されているものの間の任意の数字を含む）の総数のアミノ酸配列における変化（例えば交換、挿入、欠失、Ｎ末端切断（切断（ｔｒａｎｃａｔｉｏｎ））、および／またはＣ末端切断）を示してもよい。幾つかの実施形態では、変化の数は２００より大きい。さらに、幾つかの実施形態では、変異体は、参照（例えば、未改変のまたは天然の配列）と機能的同等性の程度を示すポリペプチド配列または対応する核酸配列を含む。幾つかの実施形態では、変異体は、未改変のまたは天然の参照配列と約８０％、約８５％、約９０％、約９５％、約９７％、約９８％、約９９％の機能的同等性（および列挙したものの間の任意の程度の機能的同等性）を示す。本明細書に記載されるアミノ酸残基は、標準ポリペプチド命名法、Ｊ．Ｂｉｏｌ．Ｃｈｅｍ．，（１９６９）、２４３，３５５２－３５５９に合わせて一文字アミノ酸表記または三文字略称のいずれかを利用する。全てのアミノ酸残基配列は、アミノ末端からカルボキシ末端の従来の方向における左右配向を有する式により本明細書に表される。
“有効量”または“治療有効量”という用語は、かかる治療を必要とする哺乳類に投与される場合に下記に規定される治療を達成するために十分な本開示の組成物の量を指す。この量は、治療される対象および疾患状態、対象の体重および年齢、疾患状態の重症度、選択される特定の本開示の組成物、投与のタイミング、投与の様式等に従う投薬レジメンに、依存して変動するだろう。そして、それら全ては当業者により容易に決定されうる。
抗原決定基としても知られている“エピトープ”は、巨大分子、例えばタンパク質のセグメントであり、適応免疫系により、例えば抗体、Ｂ細胞、主要組織適合遺伝子複合体分子、またはＴ細胞により認識される。エピトープは、抗体またはその抗原結合フラグメントに結合することが可能な巨大分子の部分またはセグメントである。この文脈において、“結合”という用語は、特に、特異的な結合に関する。本発明の幾つかの実施形態の文脈において、“エピトープ”という用語は、免疫系により認識されるタンパク質またはポリタンパク質のセグメントをことが好ましい。
ガラクトースという用語は、開鎖型でおよび環状型で両方存在し、Ｄ－およびＬ－異性体を有する単糖を指す。環状型では２つのアノマー、すなわちアルファおよびベータがある。アルファ型において、Ｃ１アルコール基はアキシアル位にあり、一方でベータ型において、Ｃ１アルコール基はエクアトリアル位にある。特に、“ガラクトース”は、環状六員環ピラノース、より特にはＤ－異性体、およびさらにより具体的にはアルファ－Ｄ－型（α－Ｄ－ガラクトピラノース）を指し、その正式名称は（２Ｒ，３Ｒ，４Ｓ，５Ｒ，６Ｒ）－６－（ヒドロキシメチル）テトラヒドロ－２Ｈ－ピラン－２，３，４，５－テトラオールである。グルコースはガラクトースのエピマーであり；正式名称は（２Ｒ，３Ｒ，４Ｓ，５Ｓ，６Ｒ）－６－（ヒドロキシメチル）テトラヒドロ－２Ｈ－ピラン－２，３，４，５－テトラオールである。ガラクトースおよびグルコースの構造および番号付けは、立体化学的説明の２つの非限定的な例を与えて示される。
Figure 0007082045000038
 “ガラクトシル化部分”という用語は、肝臓標的化部分の特定のタイプを指す。ガラクトシル化部分はガラクトース、ガラクトサミンおよび／またはＮ－アセチルガラクトサミン残基を含むが、これらに限定されない。“グルコシル化部分”は、肝臓標的化部分の別の特定のタイプを指し、かつグルコース、グルコサミンおよび／またはＮ－アセチルグルコサミンを含むがこれらに限られない。
“肝臓標的化部分”という用語は、例えばポリペプチドを肝臓に導く能力を有する部分を指す。肝細胞、類洞上皮細胞、クッパー細胞、星状細胞、および／または樹状細胞を含むが、これらに限定されない異なる細胞タイプを、肝臓は含む。典型的には、肝臓標的化部分は、これらの細胞の１つ以上へポリペプチドを導く。それぞれの肝細胞の表面上で、受容体は存在し、肝臓標的化部分を認識し、および肝臓標的化部分に特異的に結合する。
“肝臓標的化部分”という用語は、例えばポリペプチドを肝臓に導く能力を有する部分を指す。肝細胞、類洞上皮細胞、クッパー細胞、星状細胞、および／または樹状細胞を含むが、これらに限定されない異なる細胞タイプを、肝臓は含む。典型的には、肝臓標的化部分は、これらの細胞の１つ以上へポリペプチドを導く。それぞれの肝細胞の表面上で、受容体は存在し、肝臓標的化部分を認識し、および肝臓標的化部分に特異的に結合する。肝臓標的化は、ガラクトシル化またはグルコシル化部分への抗原もしくはリガンドの化学的コンジュゲーション、潜在的なガラクトシルまたはグルコシル部分を晒すための抗原もしくはリガンドの脱シアル化、または抗原またはリガンドへの内在性の抗体の特異的な結合により達成でき、ここで抗原またはリガンドは：潜在的なガラクトシルまたはグルコシル部分を晒すために脱シアル化され、ガラクトシル化またはグルコシル化部分にコンジュゲートされる。天然に存在する脱シアル化タンパク質は、本開示の或る実施形態の範囲内に包含されない。
様々な置換基のために提供される“数値”および“範囲”は、記載の範囲内の全ての整数を包含するように意図される。例えば、約１から１００、特に約８から９０、およびより特に約４０から８０のエチレングリコール基を含む混合物であって、典型的にｎ±約１０％（または１から約２５、±３より小さい整数について）として特定される整数を包含する混合物を表す整数としてｎを規定する場合、ｎは、約１から１００の整数（例えば、１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０、１１、１２、１３、１４、１５、１６、１７、１８、１９、２０、２２、２５、３０、３４、３５、３７、４０、４１、４５、５０、５４、５５、５９、６０、６５、７０、７５、８０、８２、８３、８５、８８、９０、９５、９９、１００、１０５または１１０、または範囲のエンドポイントを含む列挙されたものとの間の任意のもの）とすることができ、かつ開示される混合物は、１－４、２－４、２－６、３－８、７－１３、６－１４、１８－２３、２６－３０、４２－５０、４６－５７、６０－７８、８５－９０、９０－１１０および１０７－１１３エチレングリコール基などの範囲を包含すると理解されるべきである。併用の用語“約”および“±１０％”または“±３”は、どこで使用されても同等の範囲のための特異的な裏付けを開示し、および提供すると理解されるべきである。
“任意の”または“任意に”という用語は、引き続いて記載される事象もしくは状況が起こっても起こらなくてもよいこと、ならびに、当該記載は事象もしくは状況が起こる実例、およびそれが起こらない実例を含むことを意味する。
特定の標的に特異的に結合するペプチドは、その標的に対する“リガンド”と称される。
翻訳後修飾（例えば、リン酸化または糖鎖付加）ならびに／または付加的なポリペプチドを有する複合体形成、ならびに／または核酸および／もしくは炭水化物、または他の分子とのマルチサブユニット複合体への合成に関係なく、“ポリペプチド”は、アミノ酸残基の鎖を指す用語である。従ってプロテオグリカンはまた本明細書でポリペプチドと称される。長いポリペプチド（約５０アミノ酸超を有する）は、“タンパク質”と称される。短いポリペプチド（約５０アミノ酸以下を有する）は、“ペプチド”と称される。サイズ、アミノ酸組成および三次元構造に依存して、ある特定のポリペプチドは、“抗原結合分子”、“抗体”、“抗体フラグメント”または“リガンド”と称されうる。ポリペプチドは、多くの方法により産生でき、その多くは当該技術分野でよく知られている。例えば、ポリペプチドを、抽出により（例えば、単離細胞から）、ポリペプチドをコードする組換え核酸の発現により、または化学合成により、得ることができる。ポリペプチドは、例えば、組換え技術、およびコードされるポリペプチドの発現のために宿主細胞へ導入される（例えば、形質転換または遺伝子導入により）ポリペプチドをコードする発現ベクターにより産生されうる。
本明細書で使用される、“薬学的に許容可能な担体”または“薬学的に許容可能な賦形剤”は、任意の、および全ての溶媒、分散媒、被膜、抗菌および抗真菌剤、等張剤および吸収遅延剤等を含む。薬学的に活性な物質のためのかかる媒質および薬剤の使用は、当該技術分野でよく知られている。任意の従来の媒質もしくは薬剤が活性成分と不適合である限りを除いて、治療用組成物におけるその使用が想定される。補助的な活性成分はまた、当該組成物に組み込まれうる。
ポリペプチドに関して本明細書で使用される“精製”という用語は、化学合成されており、従って他のポリペプチドにより実質的に汚染されていないポリペプチド、またはほとんどの自然に付随する他の細胞成分（例えば、他の細胞タンパク質、ポリヌクレオチド、または細胞成分）から分離され、または単離されているポリペプチドを指す。精製ポリペプチドの例は、乾燥重量で少なくとも７０％で、自然に伴うタンパク質および天然に存在する有機物分子からフリーであるポリペプチドである。従って精製ポリペプチドの調製は、例えば、乾燥重量で少なくとも８０％、少なくとも９０％、または少なくとも９９％ポリペプチドでありうる。ポリペプチドはまた、精製または標識（例えば、親和性マトリックスへの取り込み、顕微鏡での可視化）を容易にするタグ配列（例えば、ポリヒスチジンタグ、ｍｙｃタグ、ＦＬＡＧ（登録商標）タグ、または他の親和性タグ）を含有するよう設計されうる。従って別段の指示がない限り、ポリペプチドを含む精製組成物は精製ポリペプチドを指す。“単離され”という用語は、本開示のポリペプチドまたは核酸がそれらの自然環境中ではないことを示す。従って本開示の単離産物は、培養上清に含有され、部分的に濃縮され、異種由来から産生され、ベクターにクローニングされ、またはビヒクルを用いて製剤化等されうる。
“ランダム共重合体”という用語は、２つ以上のモノマーを混合して同時に重合させた産物を指し、ここで、ポリマー鎖中で任意の所定の部位で所定のモノマー単位を見出す確率はその場所で隣接単位（ｎｅｉｇｈｂｏｒｉｎｇ ｕｎｉｔ）の性質とは無関係です（ベルヌーイ分布）。従って、Ｗｐとして同定される可変基がランダム共重合体を表す場合、鎖は、２から約１５０のＷ１およびＷ２基までの任意の配列を含むことができ、例えば：－Ｗ１－Ｗ２－Ｗ１－Ｗ２－；－Ｗ２－Ｗ１－Ｗ２－Ｗ１－；－Ｗ１－Ｗ１－Ｗ１－Ｗ２－；－Ｗ１－Ｗ１－Ｗ２－Ｗ２－；－Ｗ１－Ｗ２－Ｗ２－Ｗ１－；－Ｗ１－Ｗ２－Ｗ１－Ｗ２－Ｗ２－Ｗ１－Ｗ２－Ｗ１－；－Ｗ１－Ｗ１－Ｗ２－Ｗ２－Ｗ１－Ｗ２－Ｗ２－Ｗ１－；かつＷ２－Ｗ２－Ｗ１－Ｗ２－Ｗ１－Ｗ１－Ｗ１－Ｗ２－Ｗ２－Ｗ１－Ｗ２－Ｗ２－Ｗ１；等無限に、ここで、Ｚは様々なＷ１基に付着され、かつＷ１およびＷ２基自体は同一であり得、または異なり得る。
“配列同一性”という用語は、ポリペプチド（または核酸）配列比較に関して使用される。この表現は特に配列同一性の割合を指し、例えばそれぞれの参照ポリペプチドまたはそれぞれの参照ポリヌクレオチドと少なくとも８０％、少なくとも８１％、少なくとも８２％、少なくとも８３％、少なくとも８４％、少なくとも８５％、少なくとも８６％、少なくとも８７％、少なくとも８８％、少なくとも８９％、少なくとも９０％、少なくとも９１％、少なくとも９２％、少なくとも９３％、少なくとも９４％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、または少なくとも９９％の配列同一性の割合を指す。問題とするポリペプチドおよび参照ポリペプチドは、特に、一続きの２０、３０、４０、４５、５０、６０、７０、８０、９０、１００以上のアミノ酸に渡ってまたは参照ポリペプチドの全長に渡って示される配列同一性を示す。
生物学の分野で一般に使用されるように、“特異的な結合”という用語は非標的組織と比較して相対的に高い親和性で標的に結合する分子を指し、例えば静電相互作用、ファンデルワールス相互作用、水素結合等の複数の非共有結合性の相互作用を一般に伴う。特異的な結合の相互作用は、抗体－抗原結合、酵素－基質結合、およびある特定のタンパク質－受容体相互作用を特徴づける；一方で、かかる非標的結合が重要でない程度まで随時、それらの特異的な標的加えて組織に、かかる分子は結合するかも知れない、高－親和性結合対はまだ、特異的な結合の定義内に入りうる。
“治療（ｔｒｅａｔｍｅｎｔ）”または“治療（ｔｒｅａｔｉｎｇ）”という用語は、哺乳類における疾患または障害の任意の治療を意味し：
疾患もしくは障害を予防することもしくは保護すること、すなわち、臨床症状が発症しないようにすること；
疾患もしくは障害を阻害すること、すなわち、臨床症状の発症を抑止もしくは抑制すること；ならびに／または
疾患もしくは障害を軽減すること、すなわち、臨床症状の退縮を引き起こすことを含む。
“望ましくない免疫応答”という用語は、対象の免疫系による反応を指し、それは所定の状況で望ましくない。もしかかる反応が疾病または障害の予防、減少、または治癒につながらず、代わりに障害または疾病を引き起こし、増強しまたは悪化させる、あるいは、障害または疾患の誘導または悪化に関連するならば、当該免疫系の反応は望ましくない。典型的には、もし免疫系の反応が不適当な標的に対して向けられるならば、免疫系の反応は、疾病を引き起こし、増強しまたは悪化させる。例示的に、望ましくない免疫応答は、移植拒絶、治療薬に対する免疫応答、自己免疫疾患、ならびにアレルギー性もしくは過敏症を含むが、これらに限定されない。
“変異体”という用語は、その長さ、配列、または構造における１つ以上の変化により由来されるタンパク質（または核酸）と比較して異なるタンパク質（または核酸）として理解されている。タンパク質変異体が由来するポリペプチドはまた、親ポリペプチドまたはポリヌクレオチドとしてよく知られている。“変異体”という用語は、親分子の“フラグメント”または“誘導体”を含む。典型的には、“フラグメント”は、長さまたはサイズにおいて親分子より小さく、一方で“誘導体”は、親分子と比較してそれらの配列または構造における１つ以上差異を示す。改変分子はまた、例えば翻訳後修飾タンパク質（例えばグリコシル化、リン酸化、ユビキチン化、パルミトイル化、もしくはタンパク分解的切断タンパク質）およびメチル化ＤＮＡなどの改変核酸が包含されるが、これらに限定されない。ＲＮＡ－ＤＮＡハイブリッドなどの異なる分子の混合物はまた、“変異体”という用語により包含されるが、限定されない。天然に存在する、および人工的に構築された変異体は、本明細書で使用される“変異体”という用語により包含されると理解されている。さらに、変異体が親分子の少なくとも１つの生物学的活性を示す、たとえば、機能的に活性であるという場合に、本発明において使用可能な変異体はまた、親分子の相同体、オルソログ、もしくはパラログ、または人工的に構築された変異体に由来してもよい。変異体は、それが由来する親ポリペプチドへのある特定の配列同一性の度合により特徴づけられうる。より正確には、本開示の文脈におけるタンパク質変異体は、その親ポリペプチドへの少なくとも８０％の配列同一性を示してもよい。好ましくは、タンパク質変異体の配列同一性は一続きの２０、３０、４０、４５、５０、６０、７０、８０、９０、１００以上のアミノ酸に渡る。上述のように、幾つかの実施形態では、変異体は未改変のまたは天然の参照配列と約８０％、約８５％、約９０％、約９５％、約９７％、約９８％、約９９％（および列挙したものの間の機能的同等性の任意の程度）の機能的同等性を示す。
組成物
本開示の一態様は、式１により表される組成物、医薬品製剤、およびかかる組成物を利用する治療方法に関し：
Figure 0007082045000039
 ここで：
ｍは約１から１００の整数であり、特には約１から２０であり、およびもっとも特には１から約１０であり；
Ｘは抗原部分、特に患者が望ましくない免疫応答を発症する外来性抗原もしくは自己抗原、またはかかる抗原部分の免疫寛容誘導部分（例えば、フラグメントまたはエピトープ）であり；
Ｙはリンカー部分もしくは直接結合、またはＸに特異的に結合する抗体、抗体フラグメント、ペプチドもしくは他のリガンドであり；かつ
Ｚは肝臓標的化部分、特にガラクトシル化またはグルコシル化部分である。それぞれの抗原、抗体、抗体フラグメントもしくはリガンドがリンカー、ガラクトシル化またはグルコシル化部分が結合されうる部位（主にＮ末端のアミン、リジン残基およびシステイン残基）の個々の数および密度を有するとされる中で、式１におけるｍについての値は、Ｘの性質に依存するだろう。リジンまたはシステイン残基を加えることにより、かかる部位の限定数を有する抗原は、例えばＮまたはＣ末端で、誘導体化されうる（任意に切断可能なリンカー、特に免疫プロテアソーム切断部位を有するリンカーを介して）。一般に、式１の組成物におけるガラクトシル化／グルコシル化の十分な度合を提供することは、肝細胞による取り込みを容易にするするために好ましい。本開示の医薬品製剤および方法は、それぞれ異なるＸ部分（例えば、特定の望ましくない免疫応答に関連するいくつかのエピトープ）を担う式１の組成物の混合物を利用することができる。
式１の組成物は、反応式に関して下記に記載される式１ａから１ｐにより説明されるように、Ｘが、移植レシピエントが望ましくない免疫応答（例えば、移植拒絶）を発症する外来性移植抗原、患者が望ましくない免疫応答（例えば、アレルギーまたは過敏症）を発症する外来性食物、動物、植物または環境の抗原、患者が望ましくない免疫応答を発症する外来性治療薬（例えば、過敏症および／または減少治療活性）、または患者が望ましくない免疫応答（例えば、自己免疫疾患）を発症する自己抗原であり；Ｙは式ＹａからＹｐのリンカーであり；かつ／またはＺはガラクトース、ガラクトサミン、Ｎ－アセチルガラクトサミン、グルコース、グルコサミンまたはＮ－アセチルグルコサミンである、亜属を含む。
さらなる実施形態では、式１の組成物において、Ｘは循環タンパク質もしくはペプチドまたは抗体に特異的に結合する抗体、抗体フラグメントまたはリガンドであり得、循環タンパク質もしくはペプチドまたは抗体が移植拒絶、治療薬に対する免疫応答、自己免疫疾患、過敏症および／またはアレルギーに原因的に関与する。
抗原
式１の組成物におけるＸとして利用される抗原はタンパク質またはペプチドであり得、例えば抗原は、完全なもしくは部分的な治療薬、完全長の移植タンパク質もしくはそのペプチド、完全長の自己抗原もしくはそのペプチド、完全長のアレルゲンもしくはそのペプチド、ならびに／または核酸、または上述の抗原の模倣体であってもよい。カテゴリーまたは任意の特定の疾患もしくは反応との関連性における任意の特定の抗原のリストは、別のカテゴリーの部分と考えられ、または別の疾患または反応に関連する抗原を排除しない。
本開示の実行において利用される抗原は、以下の１つ以上であり得る：
・ 抗体フラグメント、ならびに抗体および抗体フラグメントとの融合タンパク質を含む、タンパク質、ペプチド、抗体および抗体様分子である治療薬。これらは、ヒト、非ヒト（マウスなど）および非天然（すなわち、設計された）タンパク質、抗体、キメラ抗体、ヒト化抗体、ならびに例えばフィブロネクチン、ＤＡＲＰｉｎ、ノッチン等の非抗体結合スキャフォールドを含む。
・ 移植レシピエントが望ましくない免疫応答を発症するヒト同種移植抗原。
・ 望ましくない自己免疫応答を引き起こす自己抗原。自己抗原は、自己免疫疾患患者における内在性の起源のものである一方で、本開示の組成物において利用されるポリペプチドは、典型的に外因的に合成される（発生源から精製され、濃縮されることとは対照的に）と当業者は認識するだろう。
・ 患者が望ましくない免疫応答を経験する食物、動物、植物および環境の抗原などの外来性抗原。治療用のタンパク質はまた、その外因的起源に起因する外来性抗原と考えら得る一方で、本開示の記載を明確にするために、かかる治療剤は別々の群として記載されていると当業者は認識するだろう。同様に、植物または動物抗原は食すことができ、かつ食物抗原と考えられ、かつ環境抗原は植物から由来してもよい。それらは、しかしながら、全て外来性抗原である。簡潔性の観点で、当業者が、特に詳細な説明および実施例に照らして、本開示の組成物において利用されうる抗原を認識できるかかる潜在的に重複する群の全てを区別し、および規定するように記載する試みはなされないだろう。
抗原は、完全タンパク質、完全タンパク質の部分、ペプチド等とすることができ、かつリンカーおよび／もしくはガラクトシル化部分への付着のために誘導体化でき（上述のように）、変異体とすることができ、および／もしくは特に配列同一性を維持して保存的置換を含有することができ、ならびに／または脱シアル化することができる。
抗原が治療用タンパク質、ペプチド、抗体または抗体様分子である実施形態では、特異的な抗原は、以下から選択され得る：アバタセプト、アブシキシマブ、アダリムマブ、アデノシンデアミナーゼ、アド－トラスツズマブエムタンシン、アガルシダーゼアルファ、アガルシダーゼベータ、アルデスロイキン（Ａｌｄｅｓｌｕｋｉｎ）、アルグルセラーゼ、アルグルコシダーゼアルファ、α－１－プロテアーゼ阻害剤、アナキンラ、アニストレプラーゼ（アニソイル化プラスミノーゲンストレプトキナーゼ活性化複合体）、アンチトロンビンＩＩＩ、抗胸腺細胞グロブリン、アルテプラーゼ（Ａｔｅｐｌａｓｅ）、ベバシズマブ、ビバリルジン、ボツリヌス毒素Ａ型、ボツリヌス毒素Ｂ型、Ｃ１－エステラーゼ阻害剤、カナキヌマブ、カルボキシペプチダーゼＧ２（グルカルピダーゼおよびＶｏｒａｘａｚｅ）、セルトリズマブ ペゴル、セツキシマブ、コラゲナーゼ、マムシ類（Ｃｒｏｔａｌｉｄａｅ）免疫Ｆａｂ、ダルベポエチン－α、デノスマブ、ジゴキシン免疫Ｆａｂ、ドルナーゼアルファ、エクリズマブ、エタネルセプト、第ＶＩＩａ因子、第ＶＩＩＩ因子、第ＩＸ因子、第ＸＩ因子、第ＸＩＩＩ因子、フィブリノーゲン、フィルグラスチム、ガルスルファーゼ、ゴリムマブ、酢酸ヒストレリン、ヒアルロニダーゼ、イデュルスルファーゼ、イミグルセラーゼ、インフリキシマブ、インスリン［組み換え体ヒトインスリン（“ｒＨｕ インスリン”）およびウシインスリンを含む］、インターフェロン－α２ａ、インターフェロン－α２ｂ、インターフェロン－β１ａ、インターフェロン－β１ｂ、インターフェロン－γ１ｂ、イピリムマブ、Ｌ－アルギナーゼ、Ｌ－アスパラギナーゼ、Ｌ－メチオニナーゼ（ｍｅｔｈｉｏｎａｓｅ）、ラクターゼ、ラロニダーゼ、レピルジン／ヒルジン、メカセルミン、メカセルミンリンファバート、メトキシナタリズマブ、オクトレオチド、オファツムマブ、オプレルベキン、膵臓アミラーゼ、膵臓リパーゼ、パパイン、Ｐｅｇ－アスパラギナーゼ、Ｐｅｇ－ドキソルビシン ＨＣｌ、ＰＥＧ－エポエチン－β、ＰＥＧフィルグラスチム、Ｐｅｇ－インターフェロン－α２ａ、ＰＥＧ－インターフェロン－α２ｂ、ペグロチカーゼ、ペグビソマント、フェニルアラニンアンモニアリアーゼ（ＰＡＬ）、プロテインＣ、ラスブリカーゼ（ウリカーゼ）、サクロシダーゼ、サケカルシトニン、サルグラモスチム、ストレプトキナーゼ、テネクテプラーゼ、テリパラチド、トシリズマブ（アトリズマブ）、トラスツズマブ、１型アルファ－インターフェロン、ウステキヌマブ、ｖＷ因子。治療用のタンパク質は天然の供給源から獲得され（例えば、濃縮され、かつ精製される）、または例えば、組換えにより合成され得、ならびに典型的にはＩｇＧ モノクローナルもしくはフラグメントまたは融合物である抗体治療剤を含む。
特定の治療用タンパク質、ペプチド、抗体または抗体様分子は、アブシキシマブ、アダリムマブ、アガルシダーゼアルファ、アガルシダーゼベータ、アルデスロイキン、アルグルコシダーゼアルファ、第ＶＩＩＩ因子、第ＩＸ因子、インフリキシマブ、インスリン（ｒＨｕ インスリンを含む）、Ｌ－アスパラギナーゼ、ラロニダーゼ、ナタリズマブ、オクトレオチド、フェニルアラニンアンモニアリアーゼ（ＰＡＬ）、またはラスブリカーゼ（ウリカーゼ）および一般に様々な形式のＩｇＧ モノクローナル抗体を含む。
別の特定の群は、止血剤（第ＶＩＩＩ因子および第ＩＸ因子）、インスリン（ｒＨｕ インスリンを含む）、ならびに非ヒト治療ウリカーゼ、ＰＡＬおよびアスパラギナーゼを含む。
血液学および移植における望ましくない免疫応答は、自己免疫性再生不良性貧血、移植拒絶（一般に）、および移植片対宿主病（骨髄移植拒絶）を含む。抗原がヒト同種移植抗原である実施形態では、特定の配列は：様々なＭＨＣクラスＩおよびＭＨＣクラスＩＩハプロタイプタンパク質（例えば、組織の交差適合試験において同定されるドナー／レシピエント差異）のサブユニットならびにＲｈＣＥ、Ｋｅｌｌ、Ｋｉｄｄ、ＤｕｆｆｙおよびＳｓを含む少数の血液型抗原上の単一アミノ酸多型から選択されうる。かかる組成物は、所定のドナー／レシピエントの対のために個々に調製されうる。
抗原が自己抗原である実施形態では、特異的な抗原（およびそれらが関連する自己免疫疾患）は以下から選択され得る：
・ １型糖尿病において、幾つかの主要抗原は：インスリン、プロインスリン、プレプロインスリン、グルタミン酸デカルボキシラーゼ－６５（ＧＡＤ－６５またはグルタミン酸デカルボキシラーゼ２）、ＧＡＤ－６７、グルコース－６ホスファターゼ２（ＩＧＲＰまたは膵島特異的グルコース６ホスファターゼ触媒サブユニット関連タンパク質）、インスリノーマ－関連タンパク質２（ＩＡ－２）、およびインスリノーマ－関連タンパク質２β（ＩＡ－２β）と同定され；他の抗原は、ＩＣＡ６９、ＩＣＡ１２（ＳＯＸ－１３）、カルボキシペプチダーゼＨ、Ｉｍｏｇｅｎ ３８、ＧＬＩＭＡ ３８、クロモグラニン－Ａ、ＨＳＰ－６０、カルボキシペプチダーゼＥ、ペリフェリン、２型グルコース輸送体、肝細胞癌－腸－膵臓／膵臓の関連タンパク質、Ｓ１００β、グリア線維性酸性タンパク質、再生遺伝子ＩＩ、膵臓十二指腸ホメオボックス１、筋強直性ジストロフィーキナーゼ、膵島特異的グルコース－６－ホスファターゼ触媒サブユニット－関連タンパク質、およびＳＳＴ Ｇ－タンパク質共役型受容体１－５を含む。インスリンは自己抗原および治療用のタンパク質抗原の両方として特徴づけられうる抗原の一例であることに留意すべきである。例えば、ｒＨｕ インスリンおよびウシインスリンは治療用のタンパク質抗原（望ましくない免疫攻撃の対象である）であり、一方で内在性ヒトインスリンは自己抗原（望ましくない免疫攻撃の対象である）である。内在性ヒトインスリンは、医薬組成物において利用されるためには入手可能ではないので、組換え型が本開示の組成物の或る実施形態において利用される。
○ 本開示の組成物において有用な外因的に得られる形態を含むヒトインスリンは、以下の配列を有する（ＵＮＩＰＲＯＴ Ｐ０１３０８）：
ＭＡＬＷＭＲＬＬＰＬ ＬＡＬＬＡＬＷＧＰＤ ＰＡＡＡＦＶＮＱＨＬ ＣＧＳＨＬＶＥＡＬＹ ＬＶＣＧＥＲＧＦＦＹ ＴＰＫＴＲＲＥＡＥＤ ＬＱＶＧＱＶＥＬＧＧ ＧＰＧＡＧＳＬＱＰＬ ＡＬＥＧＳＬＱＫＲＧ ＩＶＥＱＣＣＴＳＩＣ ＳＬＹＱＬＥＮＹＣＮ（配列番号：１）。
本開示の組成物において有用な外因的に得られる形態を含むＧＡＤ－６５は、以下の配列を有する（ＵＮＩＰＲＯＴ Ｑ０５３２９）：
ＭＡＳＰＧＳＧＦＷＳ ＦＧＳＥＤＧＳＧＤＳ ＥＮＰＧＴＡＲＡＷＣ ＱＶＡＱＫＦＴＧＧＩ ＧＮＫＬＣＡＬＬＹＧ ＤＡＥＫＰＡＥＳＧＧ ＳＱＰＰＲＡＡＡＲＫ ＡＡＣＡＣＤＱＫＰＣ ＳＣＳＫＶＤＶＮＹＡ ＦＬＨＡＴＤＬＬＰＡ ＣＤＧＥＲＰＴＬＡＦ ＬＱＤＶＭＮＩＬＬＱ ＹＶＶＫＳＦＤＲＳＴ ＫＶＩＤＦＨＹＰＮＥ ＬＬＱＥＹＮＷＥＬＡ ＤＱＰＱＮＬＥＥＩＬ ＭＨＣＱＴＴＬＫＹＡ ＩＫＴＧＨＰＲＹＦＮ ＱＬＳＴＧＬＤＭＶＧ ＬＡＡＤＷＬＴＳＴＡ ＮＴＮＭＦＴＹＥＩＡ ＰＶＦＶＬＬＥＹＶＴ ＬＫＫＭＲＥＩＩＧＷ ＰＧＧＳＧＤＧＩＦＳ ＰＧＧＡＩＳＮＭＹＡ ＭＭＩＡＲＦＫＭＦＰ ＥＶＫＥＫＧＭＡＡＬ ＰＲＬＩＡＦＴＳＥＨ ＳＨＦＳＬＫＫＧＡＡ ＡＬＧＩＧＴＤＳＶＩ ＬＩＫＣＤＥＲＧＫＭ ＩＰＳＤＬＥＲＲＩＬ ＥＡＫＱＫＧＦＶＰＦ ＬＶＳＡＴＡＧＴＴＶ ＹＧＡＦＤＰＬＬＡＶ ＡＤＩＣＫＫＹＫＩＷ ＭＨＶＤＡＡＷＧＧＧ ＬＬＭＳＲＫＨＫＷＫ ＬＳＧＶＥＲＡＮＳＶ ＴＷＮＰＨＫＭＭＧＶ ＰＬＱＣＳＡＬＬＶＲ ＥＥＧＬＭＱＮＣＮＱ ＭＨＡＳＹＬＦＱＱＤ ＫＨＹＤＬＳＹＤＴＧ ＤＫＡＬＱＣＧＲＨＶ ＤＶＦＫＬＷＬＭＷＲ ＡＫＧＴＴＧＦＥＡＨ ＶＤＫＣＬＥＬＡＥＹ ＬＹＮＩＩＫＮＲＥＧ ＹＥＭＶＦＤＧＫＰＱ ＨＴＮＶＣＦＷＹＩＰ ＰＳＬＲＴＬＥＤＮＥ ＥＲＭＳＲＬＳＫＶＡ ＰＶＩＫＡＲＭＭＥＹ ＧＴＴＭＶＳＹＱＰＬ ＧＤＫＶＮＦＦＲＭＶ ＩＳＮＰＡＡＴＨＱＤ ＩＤＦＬＩＥＥＩＥＲ ＬＧＱＤＬ（配列番号：２）。
○ 本開示の組成物において有用な外因的に得られる形態を含むＩＧＲＰは、以下の配列を有する（ＵＮＩＰＲＯＴ ＱＮ９ＱＲ９）：
ＭＤＦＬＨＲＮＧＶＬＩＩＱＨＬＱＫＤＹＲＡＹＹＴＦＬＮＦＭＳＮＶＧＤＰＲＮＩＦＦＩＹＦＰＬＣＦＱＦＮＱＴＶＧＴＫＭＩＷＶＡＶＩＧＤＷＬＮＬＩＦＫＷＩＬＦＧＨＲＰＹＷＷＶＱＥＴＱＩＹＰＮＨＳＳＰＣＬＥＱＦＰＴＴＣＥＴＧＰＧＳＰＳＧＨＡＭＧＡＳＣＶＷＹＶＭＶＴＡＡＬＳＨＴＶＣＧＭＤＫＦＳＩＴＬＨＲＬＴＷＳＦＬＷＳＶＦＷＬＩＱＩＳＶＣＩＳＲＶＦＩＡＴＨＦＰＨＱＶＩＬＧＶＩＧＧＭＬＶＡＥＡＦＥＨＴＰＧＩＱＴＡＳＬＧＴＹＬＫＴＮＬＦＬＦＬＦＡＶＧＦＹＬＬＬＲＶＬＮＩＤＬＬＷＳＶＰＩＡＫＫＷＣＡＮＰＤＷＩＨＩＤＴＴＰＦＡＧＬＶＲＮＬＧＶＬＦＧＬＧＦＡＩＮＳＥＭＦＬＬＳＣＲＧＧＮＮＹＴＬＳＦＲＬＬＣＡＬＴＳＬＴＩＬＱＬＹＨＦＬＱＩＰＴＨＥＥＨＬＦＹＶＬＳＦＣＫＳＡＳＩＰＬＴＶＶＡＦＩＰＹＳＶＨＭＬＭＫＱＳＧＫＫＳＱ（配列番号：３）。
・ 橋本甲状腺炎およびグレーブス病を含む甲状腺の自己免疫疾患において、主要な抗原は、チログロブリン（ＴＧ）、甲状腺ペルオキシダーゼ（ＴＰＯ）および甲状腺刺激ホルモン受容体（ＴＳＨＲ）を含み；他の抗原は、ナトリウムヨウ素共輸送体（ＮＩＳ）およびメガリンを含む。甲状腺関連眼疾患および皮膚症において、ＴＳＨＲを含む甲状腺自己抗原に加えて、抗原はインスリン様成長因子１受容体である。副甲状腺機能低下症において、主要な抗原はカルシウム感受性受容体である。
・ アジソン病において、主要な抗原は、２１－ヒドロキシラーゼ、１７α－ヒドロキシラーゼ、およびＰ４５０側鎖切断酵素（Ｐ４５０ｓｃｃ）を含み；他の抗原は、ＡＣＴＨ受容体、Ｐ４５０ｃ２１およびＰ４５０ｃ１７を含む。
・ 早期卵巣機能不全において、主要抗原は、ＦＳＨ受容体およびα－エノラーゼを含む。
・ 自己免疫性下垂体炎または下垂体自己免疫疾患において、主要抗原は、脳下垂体特異的タンパク質因子（ＰＧＳＦ）１ａおよび２を含み；別の抗原は２型ヨードチロニンデヨージナーゼである。
・ 多発性硬化症において、主要抗原は、ミエリン塩基性タンパク質（“ＭＢＰ”）、ミエリンオリゴデンドロサイト糖タンパク質（“ＭＯＧ”）およびミエリンプロテオリピドタンパク質（“ＰＬＰ”）を含む。
○ 本開示の組成物において有用な外因的に得られる形態を含むＭＢＰは、以下の配列を有する（ＵＮＩＰＲＯＴ Ｐ０２６８６）：
ＭＧＮＨＡＧＫＲＥＬＮＡＥＫＡＳＴＮＳＥＴＮＲＧＥＳＥＫＫＲＮＬＧＥＬＳＲＴＴＳＥＤＮＥＶＦＧＥＡＤＡＮＱＮＮＧＴＳＳＱＤＴＡＶＴＤＳＫＲＴＡＤＰＫＮＡＷＱＤＡＨＰＡＤＰＧＳＲＰＨＬＩＲＬＦＳＲＤＡＰＧＲＥＤＮＴＦＫＤＲＰＳＥＳＤＥＬＱＴＩＱＥＤＳＡＡＴＳＥＳＬＤＶＭＡＳＱＫＲＰＳＱＲＨＧＳＫＹＬＡＴＡＳＴＭＤＨＡＲＨＧＦＬＰＲＨＲＤＴＧＩＬＤＳＩＧＲＦＦＧＧＤＲＧＡＰＫＲＧＳＧＫＤＳＨＨＰＡＲＴＡＨＹＧＳＬＰＱＫＳＨＧＲＴＱＤＥＮＰＶＶＨＦＦＫＮＩＶＴＰＲＴＰＰＰＳＱＧＫＧＲＧＬＳＬＳＲＦＳＷＧＡＥＧＱＲＰＧＦＧＹＧＧＲＡＳＤＹＫＳＡＨＫＧＦＫＧＶＤＡＱＧＴＬＳＫＩＦＫＬＧＧＲＤＳＲＳＧＳＰＭＡＲＲ（配列番号：４）。
○ 本開示の組成物において有用な外因的に得られる形態を含むＭＯＧは、以下の配列を有する（ＵＮＩＰＲＯＴ Ｑ１６６５３）：
ＭＡＳＬＳＲＰＳＬＰＳＣＬＣＳＦＬＬＬＬＬＬＱＶＳＳＳＹＡＧＱＦＲＶＩＧＰＲＨＰＩＲＡＬＶＧＤＥＶＥＬＰＣＲＩＳＰＧＫＮＡＴＧＭＥＶＧＷＹＲＰＰＦＳＲＶＶＨＬＹＲＮＧＫＤＱＤＧＤＱＡＰＥＹＲＧＲＴＥＬＬＫＤＡＩＧＥＧＫＶＴＬＲＩＲＮＶＲＦＳＤＥＧＧＦＴＣＦＦＲＤＨＳＹＱＥＥＡＡＭＥＬＫＶＥＤＰＦＹＷＶＳＰＧＶＬＶＬＬＡＶＬＰＶＬＬＬＱＩＴＶＧＬＩＦＬＣＬＱＹＲＬＲＧＫＬＲＡＥＩＥＮＬＨＲＴＦＤＰＨＦＬＲＶＰＣＷＫＩＴＬＦＶＩＶＰＶＬＧＰＬＶＡＬＩＩＣＹＮＷＬＨＲＲＬＡＧＱＦＬＥＥＬＲＮＰＦ（配列番号：５）。
○ 本開示の組成物において有用な外因的に得られる形態を含むＰＬＰは、以下の配列を有する（ＵＮＩＰＲＯＴ Ｐ６０２０１）：
ＭＧＬＬＥＣＣＡＲＣＬＶＧＡＰＦＡＳＬＶＡＴＧＬＣＦＦＧＶＡＬＦＣＧＣＧＨＥＡＬＴＧＴＥＫＬＩＥＴＹＦＳＫＮＹＱＤＹＥＹＬＩＮＶＩＨＡＦＱＹＶＩＹＧＴＡＳＦＦＦＬＹＧＡＬＬＬＡＥＧＦＹＴＴＧＡＶＲＱＩＦＧＤＹＫＴＴＩＣＧＫＧＬＳＡＴＶＴＧＧＱＫＧＲＧＳＲＧＱＨＱＡＨＳＬＥＲＶＣＨＣＬＧＫＷＬＧＨＰＤＫＦＶＧＩＴＹＡＬＴＶＶＷＬＬＶＦＡＣＳＡＶＰＶＹＩＹＦＮＴＷＴＴＣＱＳＩＡＦＰＳＫＴＳＡＳＩＧＳＬＣＡＤＡＲＭＹＧＶＬＰＷＮＡＦＰＧＫＶＣＧＳＮＬＬＳＩＣＫＴＡＥＦＱＭＴＦＨＬＦＩＡＡＦＶＧＡＡＡＴＬＶＳＬＬＴＦＭＩＡＡＴＹＮＦＡＶＬＫＬＭＧＲＧＴＫＦ（配列番号：６）。
○ 多発性硬化症を治療するための本開示の組成物において有用なペプチド／エピトープは、式１の組成物において個々に、または式１の組成物の混合物においてともに、いくつかのまたは全ての以下の配列を含む：
■ ＭＢＰ１３－３２：ＫＹＬＡＴＡＳＴＭＤＨＡＲＨＧＦＬＰＲＨ（配列番号：７）；
■ ＭＢＰ８３－９９：ＥＮＰＷＨＦＦＫＮＩＶＴＰＲＴＰ（配列番号：８）；
■ ＭＢＰ１１１－１２９：ＬＳＲＦＳＷＧＡＥＧＱＲＰＧＦＧＹＧＧ（配列番号：９）；
■ ＭＢＰ１４６－１７０：ＡＱＧＴＬＳＫＩＦＫＬＧＧＲＤＳＲＳＧＳＰＭＡＲＲ（配列番号：１０）；
■ ＭＯＧ１－２０：ＧＱＦＲＶＩＧＰＲＨＰＩＲＡＬＶＧＤＥＶ（配列番号：１１）；
■ ＭＯＧ３５－５５：ＭＥＶＧＷＹＲＰＰＦＳＲＷＨＬＹＲＮＧＫ（配列番号：１２）；かつ
■ ＰＬＰ１３９－１５４：ＨＣＬＧＫＷＬＧＨＰＤＫＦＶＧＩ（配列番号：１３）。
・ 関節リウマチにおいて、主要抗原は、コラーゲンＩＩ、免疫グロブリン結合タンパク質、免疫グロブリンＧのフラグメント結晶化領域、二本鎖ＤＮＡ、ならびに関節リウマチの病態において関与されるタンパク質の自然なおよびシトルリン化形態を含み、フィブリン／フィブリノーゲン、ビメンチン、コラーゲンＩおよびＩＩ、ならびにアルファ－エノラーゼを含む。
・ 自己免疫胃炎において、主要抗原はＨ＋、Ｋ＋－ＡＴＰａｓｅである。
・ 悪性貧血（ｐｅｒｎｉｃｉｏｕｓ ａｎｇｅｍｉｓ）において、主要抗原は、内因子である。
・ セリアック病において、主要抗原は組織トランスグルタミナーゼ並びにグルテンまたはアルファ－、ガンマ－、およびオメガ－グリアジン、グルテニン、ホルデイン、セカリン、およびアベニンなどのグルテン様タンパク質の天然および脱アミドされた形態である。例えば、セリアック病の主要な抗原は、アルファグリアジンであると同時に、アルファグリアジンは、組織グルタミナーゼが、アルファグリアジンのグルタミンをグルタミン酸に変換することによる脱アミドを通じて、体において、より免疫原性に変わると当業者は認識するだろう。従って、アルファグリアジンが最初の外来性食物抗原であると同時に、一度体において改変されてより免疫原性になると、それは自己抗原として特徴づけられ得る。
・ 白斑において、主要な抗原は、チロシナーゼ、ならびにチロシナーゼ関連タンパク質１および２である。
○ 本開示の組成物において有用な外因的に得られる形態を含むＭＡＲＴ１、Ｔ細胞１により認識されるメラノーマ抗原、メランＡは、以下の配列を有する（ＵＮＩＰＲＯＴ Ｑ１６６５５）：
ＭＰＲＥＤＡＨＦＩＹＧＹＰＫＫＧＨＧＨＳＹＴＴＡＥＥＡＡＧＩＧＩＬＴＶＩＬＧＶＬＬＬＩＧＣＷＹＣＲＲＲＮＧＹＲＡＬＭＤＫＳＬＨＶＧＴＱＣＡＬＴＲＲＣＰＱＥＧＦＤＨＲＤＳＫＶＳＬＱＥＫＮＣＥＰＶＶＰＮＡＰＰＡＹＥＫＬＳＡＥＱＳＰＰＰＹＳＰ（配列番号：１４）。
○ 本開示の組成物において有用な外因的に得られる形態を含むチロシナーゼは、以下の配列を有する（ＵＮＩＰＲＯＴ Ｐ１４６７９）：
ＭＬＬＡＶＬＹＣＬＬＷＳＦＱＴＳＡＧＨＦＰＲＡＣＶＳＳＫＮＬＭＥＫＥＣＣＰＰＷＳＧＤＲＳＰＣＧＱＬＳＧＲＧＳＣＱＮＩＬＬＳＮＡＰＬＧＰＱＦＰＦＴＧＶＤＤＲＥＳＷＰＳＶＦＹＮＲＴＣＱＣＳＧＮＦＭＧＦＮＣＧＮＣＫＦＧＦＷＧＰＮＣＴＥＲＲＬＬＶＲＲＮＩＦＤＬＳＡＰＥＫＤＫＦＦＡＹＬＴＬＡＫＨＴＩＳＳＤＹＶＩＰＩＧＴＹＧＱＭＫＮＧＳＴＰＭＦＮＤＩＮＩＹＤＬＦＶＷＭＨＹＹＶＳＭＤＡＬＬＧＧＳＥＩＷＲＤＩＤＦＡＨＥＡＰＡＦＬＰＷＨＲＬＦＬＬＲＷＥＱＥＩＱＫＬＴＧＤＥＮＦＴＩＰＹＷＤＷＲＤＡＥＫＣＤＩＣＴＤＥＹＭＧＧＱＨＰＴＮＰＮＬＬＳＰＡＳＦＦＳＳＷＱＩＶＣＳＲＬＥＥＹＮＳＨＱＳＬＣＮＧＴＰＥＧＰＬＲＲＮＰＧＮＨＤＫＳＲＴＰＲＬＰＳＳＡＤＶＥＦＣＬＳＬＴＱＹＥＳＧＳＭＤＫＡＡＮＦＳＦＲＮＴＬＥＧＦＡＳＰＬＴＧＩＡＤＡＳＱＳＳＭＨＮＡＬＨＩＹＭＮＧＴＭＳＱＶＱＧＳＡＮＤＰＩＦＬＬＨＨＡＦＶＤＳＩＦＥＱＷＬＲＲＨＲＰＬＱＥＶＹＰＥＡＮＡＰＩＧＨＮＲＥＳＹＭＶＰＦＩＰＬＹＲＮＧＤＦＦＩＳＳＫＤＬＧＹＤＹＳＹＬＱＤＳＤＰＤＳＦＱＤＹＩＫＳＹＬＥＱＡＳＲＩＷＳＷＬＬＧＡＡＭＶＧＡＶＬＴＡＬＬＡＧＬＶＳＬＬＣＲＨＫＲＫＱＬＰＥＥＫＱＰＬＬＭＥＫＥＤＹＨＳＬＹＱＳＨＬ（配列番号：１５）。
○ 本開示の組成物において有用な外因的に得られる形態を含むメラニン形成細胞タンパク質ＰＭＥＬ、ｇｐ１００は、以下の配列を有する（ＵＮＩＰＲＯＴ Ｐ４０９６７）：
ＭＤＬＶＬＫＲＣＬＬＨＬＡＶＩＧＡＬＬＡＶＧＡＴＫＶＰＲＮＱＤＷＬＧＶＳＲＱＬＲＴＫＡＷＮＲＱＬＹＰＥＷＴＥＡＱＲＬＤＣＷＲＧＧＱＶＳＬＫＶＳＮＤＧＰＴＬＩＧＡＮＡＳＦＳＩＡＬＮＦＰＧＳＱＫＶＬＰＤＧＱＶＩＷＶＮＮＴＩＩＮＧＳＱＶＷＧＧＱＰＶＹＰＱＥＴＤＤＡＣＩＦＰＤＧＧＰＣＰＳＧＳＷＳＱＫＲＳＦＶＹＶＷＫＴＷＧＱＹＷＱＶＬＧＧＰＶＳＧＬＳＩＧＴＧＲＡＭＬＧＴＨＴＭＥＶＴＶＹＨＲＲＧＳＲＳＹＶＰＬＡＨＳＳＳＡＦＴＩＴＤＱＶＰＦＳＶＳＶＳＱＬＲＡＬＤＧＧＮＫＨＦＬＲＮＱＰＬＴＦＡＬＱＬＨＤＰＳＧＹＬＡＥＡＤＬＳＹＴＷＤＦＧＤＳＳＧＴＬＩＳＲＡＬＶＶＴＨＴＹＬＥＰＧＰＶＴＡＱＶＶＬＱＡＡＩＰＬＴＳＣＧＳＳＰＶＰＧＴＴＤＧＨＲＰＴＡＥＡＰＮＴＴＡＧＱＶＰＴＴＥＶＶＧＴＴＰＧＱＡＰＴＡＥＰＳＧＴＴＳＶＱＶＰＴＴＥＶＩＳＴＡＰＶＱＭＰＴＡＥＳＴＧＭＴＰＥＫＶＰＶＳＥＶＭＧＴＴＬＡＥＭＳＴＰＥＡＴＧＭＴＰＡＥＶＳＩＶＶＬＳＧＴＴＡＡＱＶＴＴＴＥＷＶＥＴＴＡＲＥＬＰＩＰＥＰＥＧＰＤＡＳＳＩＭＳＴＥＳＩＴＧＳＬＧＰＬＬＤＧＴＡＴＬＲＬＶＫＲＱＶＰＬＤＣＶＬＹＲＹＧＳＦＳＶＴＬＤＩＶＱＧＩＥＳＡＥＩＬＱＡＶＰＳＧＥＧＤＡＦＥＬＴＶＳＣＱＧＧＬＰＫＥＡＣＭＥＩＳＳＰＧＣＱＰＰＡＱＲＬＣＱＰＶＬＰＳＰＡＣＱＬＶＬＨＱＩＬＫＧＧＳＧＴＹＣＬＮＶＳＬＡＤＴＮＳＬＡＶＶＳＴＱＬＩＭＰＧＱＥＡＧＬＧＱＶＰＬＩＶＧＩＬＬＶＬＭＡＶＶＬＡＳＬＩＹＲＲＲＬＭＫＱＤＦＳＶＰＱＬＰＨＳＳＳＨＷＬＲＬＰＲＩＦＣＳＣＰＩＧＥＮＳＰＬＬＳＧＱＱＶ（配列番号：１６）。
・ 重症筋無力症において、主要抗原はアセチルコリン受容体である。
・ 尋常性天疱瘡および変異体において、主要抗原はデスモグレイン３、１および４であり；他の抗原は、ペンファキシン（ｐｅｍｐｈａｘｉｎ）、デスモコリン、プラコグロビン、ペルプラキン、デスモプラキン、およびアセチルコリン受容体を含む。
・ 水疱性類天疱瘡において、主要抗原は、ＢＰ１８０およびＢＰ２３０を含み；他の抗原は、プレクチンおよびラミニン５を含む。
・ ジューリング疱疹状皮膚炎において、主要抗原は、筋内膜および組織トランスグルタミナーゼを含む。
・ 後天性表皮水疱症において、主要抗原はコラーゲンＶＩＩである。
・ 全身性硬化症において、主要な抗原は、マトリックスメタロプロテイナーゼ１および３、コラーゲン－特異的分子シャペロン熱ショックタンパク質４７、フィブリリン－１、ならびにＰＤＧＦ受容体を含み；他の抗原は、Ｓｃｌ－７０、Ｕ１ ＲＮＰ、Ｔｈ／Ｔｏ、Ｋｕ、Ｊｏ１、ＮＡＧ－２、セントロメアタンパク質、トポイソメラーゼＩ、核小体タンパク質、ＲＮＡポリメラーゼＩ、ＩＩおよびＩＩＩ、ＰＭ－Ｓｌｃ、フィブリラリン、ならびにＢ２３を含む。
・ 混合性結合組織病において、主要抗原はＵ１ｓｎＲＮＰである。
・ シェーグレン症候群において、主要な抗原は核抗原ＳＳ－ＡおよびＳＳ－Ｂであり；他の抗原は、フォドリン、ポリ（ＡＤＰ－リボース）ポリメラーゼおよびトポイソメラーゼ、ムスカリン受容体、ならびにＦｃ－γ受容体ＩＩＩｂを含む。
・ 全身性エリテマトーデスにおいて、主要な抗原は、“スミス抗原”、ＳＳ－Ａ、ハイモビリティ・グループ・ボックス１（ＨＭＧＢ１）、ヌクレオソーム、ヒストンタンパク質および二本鎖ＤＮＡを含む核タンパク質（これらに対して、疾病過程において自己抗体が作製される）を含む。
・ グッドパスチャー症候群において、主要な抗原は、コラーゲンＩＶを含む糸球体基底膜タンパク質を含む。
・ リウマチ性心疾患において、主要な抗原は、心筋ミオシンである。
・ 多腺性自己免疫症候群１型において、抗原は、芳香族Ｌ－アミノ酸デカルボキシラーゼ、ヒスチジンデカルボキシラーゼ、システインスルフィン酸デカルボキシラーゼ、トリプトファンヒドロキシラーゼ、チロシンヒドロキシラーゼ、フェニルアラニンヒドロキシラーゼ、肝臓Ｐ４５０チトクロームＰ４５０ １Ａ２もしくは２Ａ６、ＳＯＸ－９、ＳＯＸ－１０、カルシウム感知受容体タンパク質、ならびに１型インターフェロンのインターフェロンアルファ、ベータおよびオメガを含む。
・ 視神経脊髄炎において、主要抗原はＡＱＰ４である。
○ 本開示の組成物において有用な外因的に得られる形態を含むアクアポリン４は、以下の配列を有する（ＵＮＩＰＲＯＴ Ｐ５５０８７）：
ＭＳＤＲＰＴＡＲＲＷＧＫＣＧＰＬＣＴＲＥＮＩＭＶＡＦＫＧＶＷＴＱＡＦＷＫＡＶＴＡＥＦＬＡＭＬＩＦＶＬＬＳＬＧＳＴＩＮＷＧＧＴＥＫＰＬＰＶＤＭＶＬＩＳＬＣＦＧＬＳＩＡＴＭＶＱＣＦＧＨＩＳＧＧＨＩＮＰＡＶＴＶＡＭＶＣＴＲＫＩＳＩＡＫＳＶＦＹＩＡＡＱＣＬＧＡＩＩＧＡＧＩＬＹＬＶＴＰＰＳＶＶＧＧＬＧＶＴＭＶＨＧＮＬＴＡＧＨＧＬＬＶＥＬＩＩＴＦＱＬＶＦＴＩＦＡＳＣＤＳＫＲＴＤＶＴＧＳＩＡＬＡＩＧＦＳＶＡＩＧＨＬＦＡＩＮＹＴＧＡＳＭＮＰＡＲＳＦＧＰＡＶＩＭＧＮＷＥＮＨＷＩＹＷＶＧＰＩＩＧＡＶＬＡＧＧＬＹＥＹＶＦＣＰＤＶＥＦＫＲＲＦＫＥＡＦＳＫＡＡＱＱＴＫＧＳＹＭＥＶＥＤＮＲＳＱＶＥＴＤＤＬＩＬＫＰＧＶＶＨＶＩＤＶＤＲＧＥＥＫＫＧＫＤＱＳＧＥＶＬＳＳＶ（配列番号：１７）。
・ ぶどう膜炎において、主要抗原は、網膜Ｓ－抗原または“Ｓ－アレスチン”および光受容体間レチノイド結合タンパク（ＩＲＢＰ）またはレチノール結合タンパク質３を含む。
○ 本開示の組成物において有用な外因的に得られる形態を含むＳ－アレスチンは、以下の配列を有する（ＵＮＩＰＲＯＴ Ｐ１０５２３）：
ＭＡＡＳＧＫＴＳＫＳ ＥＰＮＨＶＩＦＫＫＩ ＳＲＤＫＳＶＴＩＹＬ ＧＮＲＤＹＩＤＨＶＳ ＱＶＱＰＶＤＧＶＶＬ ＶＤＰＤＬＶＫＧＫＫ ＶＹＶＴＬＴＣＡＦＲ ＹＧＱＥＤＩＤＶＩＧ ＬＴＦＲＲＤＬＹＦＳ ＲＶＱＶＹＰＰＶＧＡ ＡＳＴＰＴＫＬＱＥＳ ＬＬＫＫＬＧＳＮＴＹ ＰＦＬＬＴＦＰＤＹＬ ＰＣＳＶＭＬＱＰＡＰ ＱＤＳＧＫＳＣＧＶＤ ＦＥＶＫＡＦＡＴＤＳ ＴＤＡＥＥＤＫＩＰＫ ＫＳＳＶＲＬＬＩＲＫ ＶＱＨＡＰＬＥＭＧＰ ＱＰＲＡＥＡＡＷＱＦ ＦＭＳＤＫＰＬＨＬＡ ＶＳＬＮＫＥＩＹＦＨ ＧＥＰＩＰＶＴＶＴＶ ＴＮＮＴＥＫＴＶＫＫ ＩＫＡＦＶＥＱＶＡＮ ＶＶＬＹＳＳＤＹＹＶ ＫＰＶＡＭＥＥＡＱＥ ＫＶＰＰＮＳＴＬＴＫ ＴＬＴＬＬＰＬＬＡＮ ＮＲＥＲＲＧＩＡＬＤ ＧＫＩＫＨＥＤＴＮＬ ＡＳＳＴＩＩＫＥＧＩ ＤＲＴＶＬＧＩＬＶＳ ＹＱＩＫＶＫＬＴＶＳ ＧＦＬＧＥＬＴＳＳＥ ＶＡＴＥＶＰＦＲＬＭ ＨＰＱＰＥＤＰＡＫＥ ＳＹＱＤＡＮＬＶＦＥ ＥＦＡＲＨＮＬＫＤＡ ＧＥＡＥＥＧＫＲＤＫ ＮＤＶＤＥ（配列番号：１８）。
○ 本開示の組成物において有用な外因的に得られる形態を含むＩＲＢＰは、以下の配列を有する（ＵＮＩＰＲＯＴ Ｐ１０７４５）：
ＭＭＲＥＷＶＬＬＭＳＶＬＬＣＧＬＡＧＰＴＨＬＦＱＰＳＬＶＬＤＭＡＫＶＬＬＤＮＹＣＦＰＥＮＬＬＧＭＱＥＡＩＱＱＡＩＫＳＨＥＩＬＳＩＳＤＰＱＴＬＡＳＶＬＴＡＧＶＱＳＳＬＮＤＰＲＬＶＩＳＹＥＰＳＴＰＥＰＰＰＱＶＰＡＬＴＳＬＳＥＥＥＬＬＡＷＬＱＲＧＬＲＨＥＶＬＥＧＮＶＧＹＬＲＶＤＳＶＰＧＱＥＶＬＳＭＭＧＥＦＬＶＡＨＶＷＧＮＬＭＧＴＳＡＬＶＬＤＬＲＨＣＴＧＧＱＶＳＧＩＰＹＩＩＳＹＬＨＰＧＮＴＩＬＨＶＤＴＩＹＮＲＰＳＮＴＴＴＥＩＷＴＬＰＱＶＬＧＥＲＹＧＡＤＫＤＶＶＶＬＴＳＳＱＴＲＧＶＡＥＤＩＡＨＩＬＫＱＭＲＲＡＩＶＶＧＥＲＴＧＧＧＡＬＤＬＲＫＬＲＩＧＥＳＤＦＦＦＴＶＰＶＳＲＳＬＧＰＬＧＧＧＳＱＴＷＥＧＳＧＶＬＰＣＶＧＴＰＡＥＱＡＬＥＫＡＬＡＩＬＴＬＲＳＡＬＰＧＶＶＨＣＬＱＥＶＬＫＤＹＹＴＬＶＤＲＶＰＴＬＬＱＨＬＡＳＭＤＦＳＴＶＶＳＥＥＤＬＶＴＫＬＮＡＧＬＱＡＡＳＥＤＰＲＬＬＶＲＡＩＧＰＴＥＴＰＳＷＰＡＰＤＡＡＡＥＤＳＰＧＶＡＰＥＬＰＥＤＥＡＩＲＱＡＬＶＤＳＶＦＱＶＳＶＬＰＧＮＶＧＹＬＲＦＤＳＦＡＤＡＳＶＬＧＶＬＡＰＹＶＬＲＱＶＷＥＰＬＱＤＴＥＨＬＩＭＤＬＲＨＮＰＧＧＰＳＳＡＶＰＬＬＬＳＹＦＱＧＰＥＡＧＰＶＨＬＦＴＴＹＤＲＲＴＮＩＴＱＥＨＦＳＨＭＥＬＰＧＰＲＹＳＴＱＲＧＶＹＬＬＴＳＨＲＴＡＴＡＡＥＥＦＡＦＬＭＱＳＬＧＷＡＴＬＶＧＥＩＴＡＧＮＬＬＨＴＲＴＶＰＬＬＤＴＰＥＧＳＬＡＬＴＶＰＶＬＴＦＩＤＮＨＧＥＡＷＬＧＧＧＶＶＰＤＡＩＶＬＡＥＥＡＬＤＫＡＱＥＶＬＥＦＨＱＳＬＧＡＬＶＥＧＴＧＨＬＬＥＡＨＹＡＲＰＥＶＶＧＱＴＳＡＬＬＲＡＫＬＡＱＧＡＹＲＴＡＶＤＬＥＳＬＡＳＱＬＴＡＤＬＱＥＶＳＧＤＨＲＬＬＶＦＨＳＰＧＥＬＶＶＥＥＡＰＰＰＰＰＡＶＰＳＰＥＥＬＴＹＬＩＥＡＬＦＫＴＥＶＬＰＧＱＬＧＹＬＲＦＤＡＭＡＥＬＥＴＶＫＡＶＧＰＱＬＶＲＬＶＷＱＱＬＶＤＴＡＡＬＶＩＤＬＲＹＮＰＧＳＹＳＴＡＩＰＬＬＣＳＹＦＦＥＡＥＰＲＱＨＬＹＳＶＦＤＲＡＴＳＫＶＴＥＶＷＴＬＰＱＶＡＧＱＲＹＧＳＨＫＤＬＹＩＬＭＳＨＴＳＧＳＡＡＥＡＦＡＨＴＭＱＤＬＱＲＡＴＶＩＧＥＰＴＡＧＧＡＬＳＶＧＩＹＱＶＧＳＳＰＬＹＡＳＭＰＴＱＭＡＭＳＡＴＴＧＫＡＷＤＬＡＧＶＥＰＤＩＴＶＰＭＳＥＡＬＳＩＡＱＤＩＶＡＬＲＡＫＶＰＴＶＬＱＴＡＧＫＬＶＡＤＮＹＡＳＡＥＬＧＡＫＭＡＴＫＬＳＧＬＱＳＲＹＳＲＶＴＳＥＶＡＬＡＥＩＬＧＡＤＬＱＭＬＳＧＤＰＨＬＫＡＡＨＩＰＥＮＡＫＤＲＩＰＧＩＶＰＭＱＩＰＳＰＥＶＦＥＥＬＩＫＦＳＦＨＴＮＶＬＥＤＮＩＧＹＬＲＦＤＭＦＧＤＧＥＬＬＴＱＶＳＲＬＬＶＥＨＩＷＫＫＩＭＨＴＤＡＭＩＩＤＭＲＦＮＩＧＧＰＴＳＳＩＰＩＬＣＳＹＦＦＤＥＧＰＰＶＬＬＤＫＩＹＳＲＰＤＤＳＶＳＥＬＷＴＨＡＱＶＶＧＥＲＹＧＳＫＫＳＭＶＩＬＴＳＳＶＴＡＧＴＡＥＥＦＴＹＩＭＫＲＬＧＲＡＬＶＩＧＥＶＴＳＧＧＣＱＰＰＱＴＹＨＶＤＤＴＮＬＹＬＴＩＰＴＡＲＳＶＧＡＳＤＧＳＳＷＥＧＶＧＶＴＰＨＶＶＶＰＡＥＥＡＬＡＲＡＫＥＭＬＱＨＮＱＬＲＶＫＲＳＰＧＬＱＤＨＬ（配列番号：１９）。
抗原が望ましくない免疫応答が発症し得る、食物抗原などの外来性抗原である実施形態では、特異的な抗原は以下であり得る：
・ ピーナッツ由来のもの：コンアラキン（Ａｒａ ｈ １）、アレルゲンＩＩ（Ａｒａ ｈ ２）、ピーナッツアグルチニン、コングルチン（Ａｒａ ｈ ６）；
○ コンアラキンは、例えば、ＵＮＩＰＲＯＴ Ｑ６ＰＳＵ６として同定される配列を有する
・ リンゴ由来のもの：３１ｋｄａの主要アレルゲン／疾病寛容タンパク質相同体（Ｍａｌ ｄ ２）、脂質転移タンパク質前駆物質（Ｍａｌ ｄ ３）、主要アレルゲンＭａｌ ｄ １．０３Ｄ（Ｍａｌ ｄ １）；
・ 乳由来のもの：α－ラクトアルブミン（ＡＬＡ）、ラクトトランスフェリン；キウイ由来のもの：アクチニジン（Ａｃｔ ｃ １、Ａｃｔ ｄ １）、フィトシスタチン、タウマチン－様タンパク質（Ａｃｔ ｄ ２）、キウェリン（Ａｃｔ ｄ ５）；
・ 卵白由来のもの：オボムコイド、オボアルブミン、オボトランスフェリン、および リゾチーム；
・ 卵黄由来のもの：リベチン、アポビチリン（ａｐｏｖｉｔｉｌｌｉｎ）、およびボスベチン（ｖｏｓｖｅｔｉｎ）；
・ カラシナ由来のもの：２Ｓ アルブミン（Ｓｉｎ ａ １）、１１Ｓ グロブリン（Ｓｉｎ ａ ２）、ｌｉｐｉｄ ｔｒａｎｓｆｅｒ タンパク質（Ｓｉｎ ａ ３）、プロフィリン（Ｓｉｎ ａ ４）；
・ セロリ由来のもの：プロフィリン（Ａｐｉ ｇ ４）、高分子量糖タンパク質（Ａｐｉ ｇ ５）；
・ エビ由来のもの：Ｐｅｎ ａ １ アレルゲン（Ｐｅｎ ａ １）、アレルゲン Ｐｅｎ ｍ ２（Ｐｅｎ ｍ ２）、トロポミオシン速筋型アイソフォーム；
・ コムギおよび／またはその他の穀類由来のもの：高分子量グルテニン、低分子量グルテニン、アルファ－、ガンマ－およびオメガ－グリアジン、ホルデイン、セカリンおよび／またはアベニン；
○ セリアック病を治療するための本開示の組成物において有用なペプチド／エピトープは、式１の組成物において個々に、または式１の組成物の混合物においてとともにいくつかのまたは全ての以下の配列を含む：
■ ＤＱ－２関連、天然型（ｎａｔｉｖｅ）アルファ－グリアジン“３３－ｍｅｒ”：
ＬＱＬＱＰＦＰＱＰＱＬＰＹＰＱＰＱＬＰＹＰＱＰＱＬＰＹＰＱＰＱＰＦ（配列番号：２０）
■ ＤＱ－２関連、脱アミド化アルファ－グリアジン“３３－ｍｅｒ”：
ＬＱＬＱＰＦＰＱＰＥＬＰＹＰＱＰＥＬＰＹＰＱＰＥＬＰＹＰＱＰＱＰＦ（配列番号：２１）
■ ＤＱ－８関連、アルファ－グリアジン：
ＱＱＹＰＳＧＱＧＳＦＱＰＳＱＱＮＰＱ（配列番号：２２）
■ ＤＱ－８関連、オメガ－グリアジン（コムギ、Ｕ５ＵＡ４６）：
ＱＰＦＰＱＰＥＱＰＦＰＷ（配列番号：２３）
・ イチゴ由来のもの：主要イチゴアレルギーＦｒａ ａ １－Ｅ（Ｆｒａ ａ １）；ならびに
・ バナナ由来のもの：プロフィリン（Ｍｕｓ ｘｐ １）。
抗原が動物、植物および環境の抗原などの望ましくない免疫応答が発症する外来性抗原である実施形態では、特異的な抗原は例えば、以下であり得る：以下の由来のタンパク質またはペプチドを含む、ネコ、マウス、イヌ、ウマ、ハチ、ホコリ、樹木およびセイタカアワダチソウであり得る：
・ クサ（ｗｅｅｄ）（ブタクサアレルゲンａｍｂ ａ １、２、３、５、および６、ならびにＡｍｂ ｔ ５；アカザ（ｐｉｇｗｅｅｄ） Ｃｈｅ ａ ２および５；ならびに他のクサアレルゲンＰａｒ ｊ １、２、および３、ならびにＰａｒ ｏ １を含む）；
・ クサ（ｇｒａｓｓ）（主要アレルゲンＣｙｎ ｄ １、７、および１２；Ｄａｃ ｇ １、２、および５；Ｈｏｌ Ｉ １．０１２０３；Ｌｏｌ ｐ １、２、３、５、および１１；Ｍｅｒ ａ １；Ｐｈａ ａ １；Ｐｏａ ｐ １および５を含む）；
・ ブタクサおよび他のクサ由来の花粉（ナガバギシギシ（ｃｕｒｌｙ ｄｏｃｋ）、シロザ（ｌａｍｂｓ ｑｕａｒｔｅｒｓ）、アカザ、オオバコ、ヒメスイバ、およびヤマヨモギを含む）、クサ（ｇｒａｓｓ）（バミューダグラス、ジョンソングラス、ケンタッキーグラス、オーチャードグラス、ハルガヤ、およびオオアワガエリを含む）、および樹木（キササゲ、ニレ、ヒッコリー、オリーブ、ペカン、アメリカスズカケノキ、およびクルミを含む）；
・ ホコリ（ヤケヒョウヒダニ種由来の、例えばＤｅｒ ｐ １、２、３、４、５、６、７、８、９、１０、１１、１４、１５、１８、２０、２１、および２３；コナヒョウヒダニ種由来の、例えばＤｅｒ ｆ １、２、３、６、７、１０、１１、１３、１４、１５、１６、１８、２２、および２４；熱帯タマニクダニ種由来の、例えばＢｌｏ ｔ １、２、３、４、５、６、１０、１１、１２、１３、１９、および２１の主要アレルゲンを含み；さらに、シワチリダニ（Ｅｕｒｏｇｌｙｐｈｕｓ ｍａｙｎｅｉ）由来のアレルゲンＥｕｒ ｍ ２、ケナガコダニ由来のアレルゲンＴｙｒ ｐ １３、ならびにアレルゲンＢｌａ ｇ １、２、および４；ゴキブリ由来のＰｅｒ ａ １、３、および７を含む）；
・ ペット（ネコ、イヌ、げっ歯類、および家畜を含み；主要ネコアレルゲンは、Ｆｅｌ ｄ １から８、ネコＩｇＡ、ＢＬａ ｇ ２、およびネコアルブミンを含み；主要イヌアレルゲンは、Ｃａｎ ｆ １から６、およびイヌアルブミンを含む）；
・ 主要アレルゲンＡｐｉ ｍ １から１２を含むハチの針；ならびに
・ アスペルギルス属およびペニシリウム属の種、並びにアルテルナリア・アルテルナータ（Ａｌｔｅｒｎａｒｉａ ａｌｔｅｒｎａｔａ）、ダビディエラ・タシアナ（Ｄａｖｉｄｉｅｌｌａ ｔａｓｓｉａｎａ）、および紅色白癬菌種由来のアレルゲンを含む、真菌。
当業者によって理解されるように、患者を試験して、望ましくない免疫応答を発症したことがある抗原を同定することができ、かつタンパク質、ペプチド等を当該抗原に基づいて開発でき、本開示の組成物におけるＸとして組み込むことができる。
シアル化抗原、抗体、抗体フラグメント
以下は、糖鎖付加が特異的にＡＳＧＰＲを標的とするようにしておくために除去されうるシアル化を有する抗原、抗体、抗体フラグメントの非限定例である：卵胞刺激ホルモン（ＦＳＨ）、ヒト絨毛性ゴナドトロピン（ＨＣＧ）、黄体形成ホルモン（ＬＨ）、オステオポンチン、甲状腺刺激ホルモン（ＴＳＨ）、アガルシダーゼアルファ、アガルシダーゼベータ（ＦＡＢＲＡＺＹＭＥ（登録商標）；ジェンザイム）、エポエチンアルファおよびエポエチンベータ、フォリトロピンアルファ（ＧＯＮＡＬ－Ｆ（登録商標）；メルク／セローノ）およびフォリトロピンベータ（ＦＯＬＬＩＳＴＩＭ（登録商標）；シェリング・プラウ）、インスリン成長因子結合タンパク質６（ＩＧＦＢＰ－６）、ルトロピンアルファ（ＬＵＶＥＲＩＳ（登録商標）；メルク／セローノ）、トランスフォーミング増殖因子β１、アンチトロンビン（ＡＴｒｙｎ（登録商標）／ＴＲＯＭＢＡＴＥ－ＩＩＩ（登録商標）；ジェンザイム／タレクリス・バイオセラピューティクス）、甲状腺刺激ホルモンアルファ（ＴＨＹＲＯＧＥＮ（登録商標）；ジェンザイム）、レノグラスチム、サルグラモスチム（ＬＥＵＫＩＮＥ（登録商標）；ジェンザイム）、インターロイキン－３、プロウロキナーゼ、リンホトキシン、Ｃ１－エステラーゼ阻害剤（Ｂｅｒｉｎｅｒｔ（登録商標）；ＣＳＬ）、ＩｇＧ－様抗体、インターフェロンベータ、活性化凝固第ＶＩＩ因子（ＮＯＶＯＳＥＶＥＮ（登録商標）；ノボ・ノルディスク）、活性化凝固第ＶＩＩＩ因子（モロクトコグアルファ）、活性化凝固第ＩＸ因子（ノナコグアルファ）（ＢＥＮＥＦＩＸ（登録商標）；ワイス）、ならびにｐ５５腫瘍壊死受容体融合タンパク質。（Ｂｙｒｎｅ ｅｔ ａｌ．，Ｄｒｕｇ Ｄｉｓｃｏｖｅｒｙ Ｔｏｄａｙ，Ｖｏｌ １２，Ｎｏ．７／８，ｐａｇｅｓ ３１９－３２６，Ａｐｒ．２００７ ａｎｄ Ｓｏｌａ ｅｔ ａｌ．，ＢｉｏＤｒｕｇｓ．２０１０；２４（１）：９－２１を参照されたい）。以前に高グリコシル化され、かつ肝細胞－ＡＳＧＰＲ標的化のために脱シアル化されうる薬学的に関連するタンパク質は：インターフェロンアルファおよびガンマ、黄体形成ホルモン、Ｆｖ抗体フラグメント、アスパラギナーゼ、コリンエステラーゼ、ダルベポエチンアルファ（ＡｒａＮＥＳＰ（登録商標）；アムジェン）、トロンボポエチン、レプチン、ＦＳＨ、ＩＦＮ－α２、血清アルブミン、およびコリフォリトロピンアルファを含む。
細菌または酵母において産生されるタンパク質（アルギナーゼ、いくつかのインスリン、およびウリカーゼなど）を含む、シアル酸で正常に終わらないグリカンを有するタンパク質は、脱シアル化の影響を受けないだろう。
公的に入手可能なＵＮＩＰＲＯＴなどの参照は、全てではないがほとんどの目的の抗原、抗体、抗体フラグメントおよびリガンド上での脱シアル化のための部位の、存在および位置を開示すると当業者は認識するだろう。
抗体およびペプチドリガンド
抗体、抗体フラグメントまたはリガンドを利用する実施形態では、かかる部分は、標的とされる循環タンパク質もしくはペプチドまたは抗体に特異的に結合するために選択され、かつ循環している標的とされる部分の肝臓の取り込みをもたらし、おそらく標的化部分を有する付加物として、究極的に、循環している標的とされる部分のクリアランスおよび不活性化をもたらす。例えば、肝臓標的化第ＶＩＩＩ因子は、循環第ＶＩＩＩ因子抗体に結合し、かつクリアランスするだろう。当業者は、かかる部分の同定のための手順を熟知しているだろう。
リンカー
本開示の組成物において利用されるリンカー（式１における“Ｙ”）は、Ｎ－ヒドロキシスクシンイミジルリンカー、マレイミドリンカー、ビニルスルホンリンカー、ピリジルジチオール－ポリ（エチレングリコール）リンカー、ピリジルジチオールリンカー、ｎ－ニトロフェニルカーボネートリンカー、ＮＨＳ－エステルリンカー、ニトロフェノキシポリ（エチレングリコール）エステルリンカー等を含み得る。
リンカーの１つの特定の基は、下記の式Ｙ’－ＣＭＰのリンカーを含む（ここで、Ｙ’は、リンカーの残存部分を示し、かつＲ９かつＺは規定されている）。より具体的には式Ｙ’－ＣＭＰを含むリンカーの基において、幾つかの実施形態では、Ｒ９は置換基エチルアセトアミド基であり、ならびにさらにより具体的にはＮ－アセチルガラクトサミンまたはＮ－アセチルグルコサミンのＣ１とコンジュゲートされたエチルアセトアミドである。
Figure 0007082045000040
 式Ｙ’－ＣＭＰ
ジチオール含有リンカー、特にジスルファニルエチルカルバミン酸含有リンカー（Ｘの遊離アミンを含む名称、そうでなければＸの遊離アミンを含まない“ジスルファニルエチルエステル”と命名される）は、例えば下記に説明されるように（ここで、Ｙ’は、リンカーの残存部分を示し、かつＸ’およびＺは規定されている）、いったん細胞の内側に入るとその最初の形態において抗原を切断し、かつ解放する能力を有するので、本開示の組成物において特に有利である。
Figure 0007082045000041
 特に式Ｙａから式Ｙｐにおいて下記に説明されるリンカーに関して：
左の括弧“（”は、ＸおよびＹ間の結合を示し；
右または下の括弧“）”は、ＹおよびＺ間の結合を示し；
ｎは約１から１００、特に約８から９０（例えば、７、８、９、１０、１１、１２、１３、１４、１５、１６、１７、１８、１９、２０、２５、３０、３５、４０、４５、５０、５５、６０、６５、７０、７５、８０、８５、９０または９５）、より具体的には約４０から８０（例えば、３９、４０、４３、４５、４６、４８、５０、５２、５３、５５、５７、６０、６２、６５、６６、６８、７０、７３、７５、７８、８０または８１）のエチレングリコール基を含む混合物を表す整数であり、ここで、混合物は典型的には、ｎ±１０％として特定される整数を包含し；
ｐは約２から１５０、特に約２０から１００（例えば、１８、１９、２０、２５、３０、３５、４０、４５、５０、５５、６０、６５、７０、７５、８０、８５、９０、９５、１００または１０５）およびより具体的には約３０から４０（例えば、２８、２９、３０、３１、３２、３３、３４、３５、３６、３７、３８、３９、４０、４１、４２、４３または４４）を含む混合物を表す整数であり、ここで、混合物は典型的には、ｐ±１０％として特定される整数を包含し；
ｑは約１から４４、特に約３から２０（例えば、３、４、５、６、７、８、９、１０、１１、１２、１３、１４、１５、１６、１７、１８、１９、２０、２１または２２）およびより具体的には約４から１２（例えば、４、５、６、７、８、９、１０、１１、１２または１３）を含む混合物を表す整数であり、ここで、混合物は典型的には、ｑ±１０％として特定される整数を包含し；かつ
Ｒ８は－ＣＨ２－（“メチル”）または－ＣＨ２－ＣＨ２－Ｃ（ＣＨ３）（ＣＮ）－（“１－シアノ－１－メチル－プロピル”または“ＣＭＰ”）である。
Ｙ’はＹの残存部分を表し（例えば、ＨＳ－ＰＥＧ）；かつ
Ｗは、同一のＷ１基のポリマーを表し、またはＷは同一のまたは異なるＷ１およびＷ２基の共重合体（好ましくはランダム共重合体）であり、ここで：
Figure 0007082045000042
 ここで：
ｐは２から約１５０の整数であり；
Ｒ９は直接結合、－ＣＨ２－ＣＨ２－－ＮＨ－Ｃ（Ｏ）－（すなわちエチルアセトアミド基または“ＥｔＡｃＮ”）または－ＣＨ２－ＣＨ２－（Ｏ－ＣＨ２－ＣＨ２）ｔ－ＮＨ－Ｃ（Ｏ）－（すなわちペグ化エチルアセトアミド基または“Ｅｔ－ＰＥＧｔ－ＡｃＮ”）であり
ｔは１から５の整数であり、（特に１から３、およびより具体的には１または２）；かつ
Ｒ１０は脂肪族基、アルコールまたは脂肪族アルコール、特にＮ－（２－ヒドロキシプロピル）メチルアクリルアミドであり；かつ
Ｚ（示されず）はガラクトース、グルコース、ガラクトサミン、グルコサミン、Ｎ－アセチルガラクトサミンまたはＮ－アセチルグルコサミンである。
式ＹａからＹｐ
Figure 0007082045000043
Figure 0007082045000044
Figure 0007082045000045
 （式Ｙｎのリンカーは、疎水性抗原へのコンジュゲーションに特に適切なＹｎを与えるある特定の前駆物質を介して合成され得る。）
Figure 0007082045000046
 式ＹｈからＹｎとして上記に示されるリンカーは、分離せずに利用される異性体として合成される。例えば、式Ｙｈ、Ｙｉ、ＹｊおよびＹｎのリンカーは、下記に説明される８、９－ジヒドロ－１Ｈ－ジベンゾ［ｂ、ｆ］［１、２、３］トリアゾロ［４、５－ｄ］アゾシン－８イルおよび８、９－ジヒドロ－３Ｈ－ジベンゾ［ｂ、ｆ］［１、２、３］トリアゾロ［４、５－ｄ］アゾシン－８イル構造の混合物だろう。
Figure 0007082045000047
式Ｙｋ、ＹＬおよびＹｍのリンカーは、下記に説明される８、９－ジヒドロ－１Ｈ－ジベンゾ［３、４：７、８］シクロオクタ［１、２－ｄ］［１、２、３］トリアゾール－８－イルおよび８、９－ジヒドロ－１Ｈ－ジベンゾ［３、４：７、８］シクロオクタ［１、２－ｄ］［１、２、３］トリアゾール－９－イル構造の混合物だろう。
Figure 0007082045000048
 かかる異性体の混合物の存在は、かかるリンカーを利用する組成物の機能性を損なわない。
肝臓標的化部分
本開示の組成物において利用されるガラクトシル化部分は、組成物を肝細胞へ標的とするのに（例えば、肝細胞に特異的に結合すること）役立ち、かつ以下から選択され得る：ガラクトース、ガラクトサミンまたはＮ－アセチルガラクトサミン。本開示の組成物において利用されるグルコシル化部分は、組成物を肝細胞へ標的とするのに（例えば、肝細胞またはＬＳＥＣに特異的に結合すること）役立ち、かつ以下から選択され得る：グルコース、グルコサミンまたはＮ－アセチルグルコサミン。ガラクトースのＣ３／Ｃ４－ジオールアンカー側のいずれかを改変しながら、ＡＳＧＰＲ親和性が保持されうることが報告されており（Ｍａｍｉｄｙａｌａ，Ｓｒｅｅｍａｎ Ｋ．，ｅｔ ａｌ．，Ｊ．Ａｍ．Ｃｈｅｍ．Ｓｏｃ．２０１２，１３４，１９７８－１９８１）、従って幾つかの実施形態において使用されるコンジュゲーションの箇所は、特にＣ１、Ｃ２およびＣ６である。
特定の肝臓標的化部分は、Ｃ１またはＣ６でコンジュゲートされたガラクトースまたはグルコース、Ｃ２でコンジュゲートされたガラクトサミンまたはグルコサミンおよびＣ６でコンジュゲートされたＮ－アセチルガラクトサミンまたはＮ－アセチルグルコサミンを含む。その他の特定の肝臓標的化部分は、Ｃ２でコンジュゲートされた、より具体的にはＣＨ２であるＲ９置換基を有するリンカーにコンジュゲートされたＮ－アセチルガラクトサミンまたはＮ－アセチルグルコサミンを含む。さらにその他の特定の肝臓標的化部分は、Ｃ１でコンジュゲートされた、より具体的にはエチルアセトアミド基であるＲ９置換基を有するリンカーにコンジュゲートされたガラクトース、ガラクトサミン、Ｎ－アセチルガラクトサミン、グルコース、グルコサミンまたはＮ－アセチルグルコサミンを含む。
命名法
式１の組成物は、ＩＵＰＡＣおよび慣用名の組み合わせを使って命名され得る。例えば、式１に対応する化合物、ここでＸはシクロブチル部分（例示の目的のための抗原の代わりに示される）であり、Ｙは式Ｙａであり、ｍは１であり、ｎは４であり、かつＺはＮ－アセチルガラクトサミン－２－イルまたはＮ－アセチルグルコサミン－２－イルである：
Figure 0007082045000049
 は、（Ｚ）－（２１－シクロブチル－１－オキソ－１－（（２，４，５－トリヒドロキシ－６－（ヒドロキシメチル）テトラヒドロ－２Ｈ－ピラン－３－イル）アミノ）－４，７，１０，１３－テトラオキサ－１６，１７－ジチアヘンイコサン（ｄｉｔｈｉａｈｅｎｉｃｏｓａｎ）－２１－イリデン）トリアズ－１－イン－２－イウムクロライドと命名され得、それ故にＸが組織トランスグルタミナーゼである対応する本開示の組成物は（Ｚ）－（２１－（組織トランスグルタミナーゼ）－１－オキソ－１－（（２，４，５－トリヒドロキシ－６－（ヒドロキシメチル）テトラヒドロ－２Ｈ－ピラン－３－イル）アミノ）－４，７，１０，１３－テトラオキサ－１６，１７－ジチアヘンイコサン（ｄｉｔｈｉａｈｅｎｉｃｏｓａｎ）－２１－イリデン）トリアズ－１－イン－２－イウムクロライドと命名され得る。Ｘ’が組織トランスグルタミナーゼであり、ｍが２であり、ｎが４でありかつＺ’がＮ－アセチルガラクトサミン－２－イルまたはＮ－アセチルグルコサミン－２－イルである本開示の対応する組成物は、（３Ｚ）－（（組織トランスグルタミナーゼ）－１，３－ジルビス（１－オキソ－１－（（２，４，５－トリヒドロキシ－６－（ヒドロキシメチル）テトラヒドロ－２Ｈ－ピラン－３－イル）アミノ）－４，７，１０，１３－テトラオキサ－１６，１７－ジチアヘンイコサン（ｄｉｔｈｉａｈｅｎｉｃｏｓａｎ）－２１－イル－２１－イリデン））ビス（トリアズ－１－イン－２－イウム）クロライドと命名され得る。
簡潔性の観点で、式１の組成物は、Ｘおよび式１ａから１ｐの１つに対応する物（反応式において説明される）と、それに続く変数ｍ、ｎ、ｐおよび／もしくはｑ、Ｒ８、Ｒ９ならびに、それがコンジュゲートされたガラクトシル化部分および位置の同定のための整数の記載を参照することにより、代替命名系を使って命名され得る。いくつかの実施形態では、Ｗが共重合体である化合物は、“Ｙ基”に続いて“プライム”の文字により指定され（例えば、Ｆ１ｃ’）かつコモノマーの数および同定を含む。この系のもとでは、Ｘがオボアルブミンであり、ｍが２であり、ｎが４であり、かつＺがＮ－アセチルガラクトサミン－２－イルである式１ａの組成物は、“Ｆ１ａ－ＯＶＡ－ｍ２－ｎ４－２ＮＡｃＧＡＬ”と命名され得る。Ｘはオボアルブミンであり、ｍは２であり、ｎは４でありかつＺはＮ－アセチルグルコサミン－２－イルである式１ａの対応する組成物は、“Ｆ１ａ－ＯＶＡ－ｍ２－ｎ４－２ＮＡｃＧＬＵ”と命名され得る。
同様に、以下の式１の組成物は、
Figure 0007082045000050
 “２－（（２－（（（３－（３－（２２－（（３－アセトアミド－４，５－ジヒドロキシ－６－（ヒドロキシメチル）テトラヒドロ－２Ｈ－ピラン－２－イル）オキシ）－１６－シアノ－１６，１８－ジメチル－１３，１９－ジオキソ－１８－（（フェニルカルボノチオイル）チオ）－３，６，９，１２－テトラオキサ－２０－アザドコシル）－３，９－ジヒドロ－８Ｈ－ジベンゾ［ｂ，ｆ］［１，２，３］トリアゾロ［４，５－ｄ］アゾシン－８－イル）－３－オキソプロピル）カルバモイル）オキシ）エチル）ジスルファニル）エチルインスリンカルボキシレート”と命名され得る。異性体は：
Figure 0007082045000051
 “２－（（２－（（（３－（１－（２２－（（３－アセトアミド－４，５－ジヒドロキシ－６－（ヒドロキシメチル）テトラヒドロ－２Ｈ－ピラン－２－イル）オキシ）－１６－シアノ－１６，１８－ジメチル－１３，１９－ジオキソ－１８－（（フェニルカルボノチオイル）チオ）－３，６，９，１２－テトラオキサ－２０－アザドコシル）－１，９－ジヒドロ－８Ｈ－ジベンゾ［ｂ，ｆ］［１，２，３］トリアゾロ［４，５－ｄ］アゾシン－８－イル）－３－オキソプロピル）カルバモイル）－オキシ）エチル）ジスルファニル）エチルインスリンカルボキシレート”と命名され得る（正式名称との差異を同定する際に、便宜のために太字のハイライトが加えられる）。本開示のための採用された命名系を利用すると、両方の異性体は、“Ｆ１ｎ－インスリン－ｍ１－ｎ１－ｐ１－ｑ４－ＣＭＰ－ＥｔＡｃＮ－１ＮＡｃＧＡＬ”（または糖環について立体化学が示されていないので““Ｆ１ｎ－インスリン－ｍ１－ｎ１－ｐ１－ｑ４－ＣＭＰ－ＥｔＡｃＮ－１ＮＡｃＧＬＵ”）と命名され得、ここでＣＭＰは、Ｒ８が１－シアノ－１－メチル－プロピルであることを示し、ＥｔＡｃＮは、Ｒ９がエチルアセトアミドであることを示し、かつ１ＮＡｃＧＡＬは、Ｚ”がＣ１でコンジュゲートされたＮ－アセチルガラクトサミンであることを示す。Ｚの名称の前の略称ＥｔＡｃＮの非存在は、Ｒ９が直接結合であることを示すだろう。
以下の式１の組成物は、Ｗが共重合体である化合物を例示し：
Figure 0007082045000052
 かつ２－（２－（２－（２－（ＱＱＹＰＳＧＱＧＳＦＱＰＳＱＱＮＰＱＧＧＧＳＣ－スルファニル）エトキシ）エトキシ）エトキシ）エチル ６，１０－ビス（（２－（２－（（（２Ｒ，３Ｒ，４Ｒ，５Ｓ，６Ｒ）－３－アセトアミド－４，５－ジヒドロキシ－６－（ヒドロキシメチル）テトラヒドロ－２Ｈ－ピラン－２－イル）オキシ）エトキシ）エチル）カルバモイル）－４－シアノ－１３－（（２－ヒドロキシプロピル）アミノ）－８－（（２－ヒドロキシプロピル）カルバモイル）－４，６，８，１０，１２－ペンタメチル－１３－オキソ－１２－（（フェニルカルボノチオイル）チオ）トリデカノエートと命名され得る。本開示について採用された命名系を利用して、化合物は、“Ｆ１ｃ’－ＤＱ８－関連アルファグリアジン－ｍ１－ｎ４－ｐ４－ＣＭＰ－ポリ－（ＥｔＰＥＧ１ＡｃＮ－１ＮＡｃＧＬＵ２－ＨＰＭＡ２）”と命名され得る。
本開示の組成物の調製
例えば、Ｚｈｕ，Ｌ．，ｅｔ ａｌ．，Ｂｉｏｃｏｎｊｕｇａｔｅ Ｃｈｅｍ．２０１０，２１，２１１９－２１２７において記載される手順を適応させることにより、式１の組成物は調製されうる。ある特定の式１の組成物の合成はまた、反応式１から１４に関して下記に記載される。他の合成アプローチは、当業者にとって明らかであろう。
式１０１（下記）はＸの代替表示であり、
Figure 0007082045000053
 ここで、Ｒ１は、リンカーへのコンジュゲーションのための到達できるようにするためにＸの三次元構造上に位置する遊離表面アミノ（－ＮＨ２）もしくはチオール（－ＳＨ）部分であり、かつＸ’は、同定される遊離アミノ基を除くＸの残りを表す［（Ｘ”は、遊離チオール基を除くＸの残りを表す反応式において使用される］。Ｘの正体（ｉｄｅｎｔｉｔｙ）に依存して、少なくとも１つの（Ｎ末端のアミン）が存在するだろう、そして、約１から１００の整数である、より典型的には、１もしくは約４から２０、ならびにもっとも典型的には１から約１０であるｍにより表されるように、複数のＲ１基（主にリジン残基またはジスルフィド結合に関与するシステイン残基に由来する）が存在できる。
反応式において利用される変数は、上記に規定され、加えて以下を含み、それらは特定の反応式または工程に関してでなければ、任意の特異的な指標のこれらの意味が存在しないと理解されるべきである。
・ Ｒ２はＯＨ、または保護基であり；
・ Ｒ３はＯＨ、ＮＨ２、ＮＨＡｃ、保護基またはＮＨ－保護基であり；
・ Ｒ４はＯＨ、または保護基であり；
・ Ｒ５はＯＨ、または保護基であり；
・ Ｒ６はＯＨ、または保護基であり；
・ Ｚ’はＣ１もしくはＣ６でコンジュゲートされたガラクトースもしくはグルコース、Ｃ２でコンジュゲートされたガラクトサミンもしくはグルコサミンまたはＣ６でコンジュゲートされたＮ－アセチルガラクトサミンもしくはＮ－アセチルグルコサミンであり；
・ Ｒ８は－ＣＨ２－または－ＣＨ２－ＣＨ２－Ｃ（ＣＨ３）（ＣＮ）－であり；かつ
・ Ｒ９は直接結合であり、かつＺ”はＣ２でコンジュゲートされたＮ－アセチルガラクトサミンであり；または
・ Ｒ９はエチルアセトアミドまたはペグ化エチルアセトアミド基であり、かつＺ”はＣ１でコンジュゲートされたガラクトース、グルコース、ガラクトサミン、グルコサミン、Ｎ－アセチルガラクトサミンまたはＮ－アセチルグルコサミンである。
合成反応パラメータ
“溶媒”、“不活性有機溶媒”または“不活性溶媒”という用語は、それらと組み合わせて記載されている反応の条件のもとでは不活性な溶媒［例えば、ベンゼン、トルエン、アセトニトリル、テトラヒドロフラン（“ＴＨＦ”）、ジメチルホルムアミド（“ＤＭＦ”）、クロロホルム、メチレンクロライド（またはジクロロメタン）、ジエチルエーテル、メタノール、ピリジン等を含む］を意味する。もし反対に特定されなければ、本開示の反応において使用される溶媒は、不活性有機溶媒である。
“ｑ．ｓ．”という用語は、述べられた機能を達成する、例えば、溶液を望ましい容積（すなわち、１００％）へともたらすのに十分な量を加えることを意味する。
所望であれば、例えば、濾過、抽出、結晶化、カラムクロマトグラフィー、薄層クロマトグラフィーもしくは厚層クロマトグラフィー、遠心性サイズ排除クロマトグラフィー、高速液体クロマトグラフィー、再結晶、昇華、高速タンパク質液体クロマトグラフィー、ゲル電気泳動、透析、またはこれらの手順組み合わせなどの、任意の適切な分離または精製手順により、本明細書に記載される化合物および中間体の単離および精製が影響されうる。適切な分離および単離手順の特定の例示を、下記の実施例の出典明示により得ることができる。しかしながら、他の同等の分離または単離手順はまた、やはり、使用され得る。
別段の特定がない限り（実施例を含む）、全ての反応は、標準大気圧（約１気圧）ならびに周囲の（もしくは室温の）温度（約２０℃）、約ｐＨ７．０－８．０で行われる。
反応産物の特性評価は、通例の手段、例えば、プロトンおよびカーボンＮＭＲ、質量分析法、サイズ排除クロマトグラフィー、赤外分光法、ゲル電気泳動により行われる。
反応式１は、Ｚがガラクトース、グルコース、ガラクトサミン、グルコサミン、Ｎ－アセチルガラクトサミンまたはＮ－アセチルグルコサミンであり得る式１の組成物の調製を説明する。その点において、および上記に規定されているように、反応式１において利用されるようなＺ’は、Ｃ１およびＣ６でコンジュゲートされ、かつ以下の式１に記載の構造に対応するガラクトースまたはグルコースを包含する：
Figure 0007082045000054
 、
Ｃ２でコンジュゲートされ、かつ以下の式１に記載の構造に対応するガラクトサミンまたはグルコサミン、
Figure 0007082045000055
 およびＣ６でコンジュゲートされ、かつ以下の式１に記載の構造に対応するＮ－アセチルガラクトサミンまたはＮ－アセチルグルコサミン。
Figure 0007082045000056
反応式１
Figure 0007082045000057
Figure 0007082045000058
 反応式１、工程１において上記で説明されるように、ｐＨ約８．０、約１時間でトラウト試薬（式１０２）との接触により遊離表面アミノ基（式１０１’）を有する抗原、抗体、抗体フラグメントまたはリガンド上に表面チオール基が生成でき、例えば、遠心性サイズ排除クロマトグラフィーを介して、未反応のトラウト試薬が除去されている式１０３’を与える。下記に示される２つの構造は、反応式１、工程１の産物を説明し、それぞれＸ上に最初に確認される遊離表面アミノ基を示し（すなわち、式１０３’、ここでＸ’は同定される遊離表面アミノ基を除くＸの残りを表す）、および遊離表面アミノ基を省略する（すなわち、式１０３）。これは、Ｘおよび式１０１間として説明される区別に似ている。慣習がその後の反応式において続いた。
Figure 0007082045000059
 反応式１、工程２において、ピリジルジチオール－ポリ（エチレングリコール）－ＮＨＳエステル（式１０４）をガラクトサミンまたはグルコサミン（Ｒ３はＮＨ２でありかつＲ２、Ｒ４、Ｒ５およびＲ６はＯＨである式１０５）と約ｐＨ８、約１時間で攪拌しながら接触させて式１０６Ａの対応するピリジルジチオール－ポリ（エチレングリコール）－糖を与え、さらに精製せずに使用され得る。
反応式１、工程３において、４，４’－ジチオジピリジン（式１０７）をチオール－ポリ（エチレングリコール）プロピオン酸（式１０８）と接触させて、対応するピリジルジチオール－ポリ（エチレングリコール）プロピオン酸（式１０９）を与える。
反応式１、工程４において、式１０９の酸を式１０５の保護されるガラクトースまたはＮ－アセチルガラクトサミン、ここでＲ２はＯＨであり、かつＲ３、Ｒ４、Ｒ５およびＲ６は保護基（“ＰＧ”）であり、ここでＲ６はＯＨであり、かつＲ２、Ｒ３、Ｒ４およびＲ５はＰＧであり、またはここでＲ６はＮ－アセチルであり、およびＲ２、Ｒ３、Ｒ４およびＲ５はＰＧである、と接触させて式１０６Ｂ、１０６Ｃおよび１０６Ｄの対応するピリジルジチオール－ポリ（エチレングリコール）－糖を与え、脱保護後に使用され得る。
反応式１、工程５において、工程１の産物（式１０３’）の攪拌溶液に過剰（ｍの値に対応する）の工程２または工程４の産物（式１０６、すなわち１０６Ａ、１０６Ｂ、１０６Ｃまたは１０６Ｄ）を約１時間加え、それに続いて遠心性サイズ排除クロマトグラフィーで任意の遊離残存反応物を除去して式１ａに記載の対応産物、それぞれ、式１ａＡ、式１ａＢ、式１ａＣおよび式１ａＤを得る。
式１ａに対応する組成物は、それぞれ、例えば、以下の通りに命名され得る：
“Ｆ１ａＡ－Ｘ’－ｍｍ－ｎｎ”または“Ｆ１ａ－Ｘ’－ｍｍ－ｎｎ－２ＮＧＡＬ”
“Ｆ１ａＢ－Ｘ’－ｍｍ－ｎｎ”または“Ｆ１ａ－Ｘ’－ｍｍ－ｎｎ－１ＧＡＬ”
“Ｆ１ａＣ－Ｘ’－ｍｍ－ｎｎ”または“Ｆ１ａ－Ｘ’－ｍｍ－ｎｎ－６ＧＡＬ”
“Ｆ１ａＤ－Ｘ’－ｍｍ－ｎｎ”または“Ｆ１ａ－Ｘ’－ｍｍ－ｎｎ－６ＮＡｃＧＡＬ”
“Ｆ１ａＡ－Ｘ’－ｍｍ－ｎｎ”または“Ｆ１ａ－Ｘ’－ｍｍ－ｎｎ－２ＮＧＬＵ”
“Ｆ１ａＢ－Ｘ’－ｍｍ－ｎｎ”または“Ｆ１ａ－Ｘ’－ｍｍ－ｎｎ－１ＧＬＵ”
“Ｆ１ａＣ－Ｘ’－ｍｍ－ｎｎ”または“Ｆ１ａ－Ｘ’－ｍｍ－ｎｎ－６ＧＬＵ”
“Ｆ１ａＤ－Ｘ’－ｍｍ－ｎｎ”または“Ｆ１ａ－Ｘ’－ｍｍ－ｎｎ－６ＮＡｃＧＬＵ”
それぞれ、式１０６Ａ－Ｄに記載の中間体を利用する産物として作製される。
反応式２－１４は、Ｗが同一のＷ１基のポリマーである化合物の調製を説明する。それらと利用される命名法の目的のため、特に明記されている場合を除き、Ｚ”は、Ｃ２でコンジュゲートされたＮ－アセチルガラクトサミンまたはＮ－アセチルグルコサミンを指す：
Figure 0007082045000060
 またはＣ１でコンジュゲートされたガラクトース、グルコース、ガラクトサミン、グルコサミン、Ｎ－アセチルガラクトサミンまたはＮ－アセチルグルコサミンを指す。幾つかの実施形態によれば、収率を改善するために、Ｃ１コンジュゲート組成物は合成中に、例えば、Ｃ３ヒドロキシルでアミンを環化すること、および保護されるガラクトサミンのリンカーの隣接部分への組み込み後に脱保護することにより保護され得ることに留意すべきである。
ガラクトースまたはグルコースをメタクリル化することにより、例えば、ガラクトサミンまたはグルコサミンおよびメタクリル酸無水物を接触させ、それに続いて適切な溶媒においてアゾビスイソブチロニトリル（ＡＩＢＮ）の存在下で，凍結融解サイクルで開始し、それに続いて約６０－８０℃、好ましくは７０℃で約５－８好ましくは約６時間加熱する、対応するＲＡＦＴ薬剤の可逆的付加－開裂連鎖移動（ＲＡＦＴ）重合により、式２０１、４０１、５０１、６０１、７０１、８０３および１４０１のポリ（ガラクトースメタクリル酸）およびポリ（グルコースメタクリル酸）反応物は調製され得る。低級アルカノール、好ましくはメタノールにおいて、ポリマーを沈殿することができる。
反応式２
Figure 0007082045000061
 反応式２において説明されるように、例えば、反応式１、工程１（式１０３’）に関して記載される、調製される遊離表面チオール基を有する抗原、抗体、抗体フラグメントまたはリガンドを、過剰（ｍの値に対応する）の式２０１のピリジルジチオール－ポリ（エチレングリコール）と約１時間接触させて式１ｂによる対応産物を得る。
式１ｂの組成物は、以下の通り命名され得る：
“Ｆ１ｂ－Ｘ’－ｍｍ－ｎｎ－ｐｐ－２ＮＡｃＧＡＬ”、“Ｆ１ｂ－Ｘ’－ｍｍ－ｎｎ－ｐｐ－２ＮＡｃＧＬＵ”または“Ｆ１ｂ－Ｘ’－ｍｍ－ｎｎ－ｐｐ－ＥｔＡｃＮ－Ｚ”。
例えば、Ｘ’がウリカーゼであり、ｍが１であり、ｎが４であり、ｐが４であり、かつＺ”がＣ２でコンジュゲートされたＮ－アセチルガラクトサミンである式１ｂの組成物は“Ｆ１ｂ－ウリカーゼ－ｍ１－ｎ４－ｐ４－２ＮＡｃＧＡＬ”または“３０－（ウリカーゼ）－３，５，７，９－テトラメチル－１２－オキソ－１－フェニル－１－チオキソ－３，５，７，９－テトラキス（（２，４，５－トリヒドロキシ－６－（ヒドロキシメチル）テトラヒドロ－２Ｈ－ピラン－３－イル）カルバモイル）－１３，１６，１９，２２－テトラオキサ－２，２５，２６－トリチアトリアコンタン－３０－イミニウム”と命名され得る。
反応式３
Figure 0007082045000062
 反応式３において説明されるように、天然型の遊離表面チオール基（システイン）を有する抗原、抗体、抗体フラグメントまたはリガンド［式１０１に対応し、かつここで当該用語が引き続いて利用されるように、Ｘ”は、同定される遊離表面チオール基を除くＸを表すことを説明する式１０１”］を、過剰（ｍの値に対応する）の式２０１のピリジルジチオール－ポリ（エチレングリコール）と接触させて式１ｃによる対応産物を得る。
式１ｃに対応する組成物は、以下の通り命名され得る：
“Ｆ１ｃ－Ｘ’－ｍｍ－ｎｎ－ｐｐ－２ＮＡｃＧＡＬ”、“Ｆ１ｃ－Ｘ’－ｍｍ－ｎｎ－ｐｐ－２ＮＡｃＧＬＵ”または“Ｆ１ｃ－Ｘ’－ｍｍ－ｎｎ－ｐｐ－ＥｔＡｃＮ－Ｚ”。
反応式４
Figure 0007082045000063
 反応式４において説明されるように、式１０１”の天然型の遊離表面チオール基を有する抗原、抗体、抗体フラグメントまたはリガンドを、過剰（ｍの値に対応する）の式４０１のピリジルジチオールと接触させて式１ｄによる対応産物を得る。
式１ｄに対応する組成物は、以下の通り命名され得る：
“Ｆ１ｄ－Ｘ’－ｍｍ－ｐｐ－２ＮＡｃＧＡＬ”、“Ｆ１ｄ－Ｘ’－ｍｍ－ｐｐ－２ＮＡｃＧＬＵ”または“Ｆ１ｄ－Ｘ’－ｍｍ－ｐｐ－ＥｔＡｃＮ－Ｚ”。
反応式５
Figure 0007082045000064
 反応式５において説明されるように、式１０１’の天然型の遊離表面アミノ基を有する抗原、抗体、抗体フラグメントまたはリガンドを、過剰（ｍの値に対応する）の式５０１のｎ－ニトロフェニルカーボネートと接触させて式１ｅによる対応産物を得る。
式１ｅに対応する組成物は、以下の通り命名され得る：
“Ｆ１ｅ－Ｘ’－ｍｍ－ｐｐ－２ＮＡｃＧＡＬ”、“Ｆ１ｅ－Ｘ’－ｍｍ－ｐｐ－２ＮＡｃＧＬＵ”または“Ｆ１ｅ－Ｘ’－ｍｍ－ｐｐ－ＥｔＡｃＮ－Ｚ”。
反応式６
Figure 0007082045000065
 反応式６において説明されるように、式１０１’の天然型の遊離表面アミノ基を有する抗原、抗体、抗体フラグメントまたはリガンドを、過剰（ｍの値に対応する）の式６０１のｎ－ニトロフェニルカーボネートポリ（エチレングリコール）エステルと接触させて式１ｆによる対応産物を得る。
式１ｆに対応する組成物は、以下の通り命名され得る：
“Ｆ１ｆ－Ｘ’－ｍｍ－ｎｎ－ｐｐ－２ＮＡｃＧＡＬ”、“Ｆ１ｆ－Ｘ’－ｍｍ－ｎｎ－ｐｐ－２ＮＡｃＧＬＵ”または“Ｆ１ｆ－Ｘ’－ｍｍ－ｎｎ－ｐｐ－ＥｔＡｃＮ－Ｚ”。
反応式７
Figure 0007082045000066
 反応式７において説明されるように、式１０１’の天然型の遊離表面アミノ基を有する抗原、抗体、抗体フラグメントまたはリガンドを、過剰（ｍの値に対応する）の式７０１のＮＨＳ－エステルポリ（エチレングリコール）エステルと接触させて式１ｇによる対応産物を得る。
式１ｇに対応する組成物は、以下の通り命名され得る：
“Ｆ１ｇ－Ｘ’－ｍｍ－ｐｐ－２ＮＡｃＧＡＬ”、“Ｆ１ｇ－Ｘ’－ｍｍ－ｐｐ－２ＮＡｃＧＬＵ”または“Ｆ１ｇ－Ｘ’－ｍｍ－ｐｐ－ＥｔＡｃＮ－Ｚ”
反応式８
Figure 0007082045000067
 反応式８、工程１において説明されるように、式１０１’の天然型の遊離表面アミノ基を有する抗原、抗体、抗体フラグメントまたはリガンドを、式８０１のクリックケミストリーのための過剰（ｍの値に対応する）のアミン－反応性リンカーと接触させて式８０２による対応産物を得る。
反応式８、工程２において、式８０２の産物を、その後式８０３のガラクトース（アミン）ポリマーの同等量（再度ｍの値に対応する）と接触させて式１ｈによる対応する異性体産物を得る。上記に説明される２つの異性体は、式８０２の三重結合を有する式８０３のアジドの非特異的な環化を生じる。かかる非特異的な環化は、他の組成物の合成において起こり、ここでＹは式ＹｈからＹｎから選択されるが、それぞれの実例において説明されないだろう。
式１ｈに対応する組成物は、以下の通り命名され得る：
“Ｆ１ｈ－Ｘ’－ｍｍ－ｎｎ－ｐｐ－ｑｑ－２ＮＡｃＧＡＬ”、“Ｆ１ｈ－Ｘ’－ｍｍ－ｎｎ－ｐｐ－ｑｑ－２ＮＡｃＧＬＵ”または“Ｆ１ｈ－Ｘ’－ｍｍ－ｎｎ－ｐｐ－ｑｑ－ＥｔＡｃＮ－Ｚ”。
反応式９
Figure 0007082045000068
 反応式９、工程１において説明されるように、式１０１”の天然型の遊離表面チオール基を有する抗原、抗体、抗体フラグメントまたはリガンドを、式９０１のクリックケミストリーのための過剰（ｍの値に対応する）のチオール－反応性リンカーと接触させて式９０２”による対応産物を得る。
反応式９、工程２において、式９０２”の産物を、その後式８０３のガラクトース（アミン）ポリマーの同等量（再度ｍの値に対応する）と接触させて式１ｉによる対応する異性体産物を得る。
式１ｉに対応する組成物は、以下の通り命名され得る：
“Ｆ１ｉ－Ｘ’－ｍｍ－ｎｎ－ｐｐ－ｑｑ－２ＮＡｃＧＡＬ”、“Ｆ１ｉ－Ｘ’－ｍｍ－ｎｎ－ｐｐ－ｑｑ－２ＮＡｃＧＬＵ”または“Ｆ１ｉ－Ｘ’－ｍｍ－ｎｎ－ｐｐ－ｑｑ－ＥｔＡｃＮ－Ｚ”。
反応式９に関して記載される手順に従い、出発物質１０１”を式１０３’の化合物（トラウト試薬で誘導体化される）に置換することにより、下記に示されるように式１ｊの対応する異性体産物が得られる。
Figure 0007082045000069
 式１ｊに対応する組成物は、以下の通り命名され得る：
“Ｆ１ｊ－Ｘ’－ｍｍ－ｎｎ－ｐｐ－ｑｑ－２ＮＡｃＧＡＬ”、“Ｆ１ｊ－Ｘ’－ｍｍ－ｎｎ－ｐｐ－ｑｑ－２ＮＡｃＧＬＵ”または“Ｆ１ｊ－Ｘ’－ｍｍ－ｎｎ－ｐｐ－ｑｑ－ＥｔＡｃＮ－Ｚ”。
反応式１０
Figure 0007082045000070
Figure 0007082045000071
 反応式１０、工程１において説明されるように、式１０１”の天然型の遊離表面チオール基を有する抗原、抗体、抗体フラグメントまたはリガンドを、式１００１のクリックケミストリーのための過剰（ｍの値に対応する）のチオール－反応性リンカーと接触させて式１００２による対応産物を得る。
反応式１０、工程２において、式１００２の産物を、その後式８０３のガラクトース（アミン）ポリマーの同等量（再度ｍの値に対応する）と接触させて式１ｋによる対応する異性体産物を得る。
式１ｋに対応する組成物は、以下の通り命名され得る：
“Ｆ１ｋ－Ｘ’－ｍｍ－ｎｎ－ｐｐ－ｑｑ－２ＮＡｃＧＡＬ”、“Ｆ１ｋ－Ｘ’－ｍｍ－ｎｎ－ｐｐ－ｑｑ－２ＮＡｃＧＬＵ”または“Ｆ１ｋ－Ｘ’－ｍｍ－ｎｎ－ｐｐ－ｑｑ－ＥｔＡｃＮ－Ｚ”。
反応式１０に関して記載される手順に従い、出発物質１０１”を式１０３’の化合物（トラウト試薬で誘導体化される）に置換することにより、下記に示されるように式１Ｌの対応する異性体産物が得られる。
Figure 0007082045000072
 式１Ｌに対応する組成物は、以下の通り命名され得る：
“Ｆ１Ｌ－Ｘ’－ｍｍ－ｎｎ－ｐｐ－ｑｑ－２ＮＡｃＧＡＬ”、“Ｆ１Ｌ－Ｘ’－ｍｍ－ｎｎ－ｐｐ－ｑｑ－２ＮＡｃＧＬＵ”または“Ｆ１Ｌ－Ｘ’－ｍｍ－ｎｎ－ｐｐ－ｑｑ－ＥｔＡｃＮ－Ｚ”。
反応式１１
Figure 0007082045000073
Figure 0007082045000074
 反応式１１、工程１において説明されるように、ガラクトース、保護されるガラクトサミンまたはＮ－アセチル－Ｄ－ガラクトサミン（式１１０１、ここでそれぞれＲ３およびＲ４はＯＨであり、Ｒ３はＮＨ－保護基であり（例えば、Ｒ４で環化される）またはＲ３はＮＨＡｃであり、かつＲ４はＯＨである）を２－クロロエタン－１－オールと接触させて、それに続いて冷却およびアセチルクロライドを滴下する。溶液を室温に加温し、かつその後７０℃に数時間加熱する。エタノールを粗産物に加え、かつ得られる溶液を炭素存在下で攪拌し、その後濾過し、それに続いて溶媒除去し、式１１０２の対応産物を得る。
反応式１１、工程２において説明されるように、式１１０２の産物を過剰のアジ化ナトリウムに加え、かつ９０℃に数時間加熱し、その後濾過し、それに続いて溶媒除去し式１１０３の対応産物を得る。
反応式１１、工程３において説明されるように、式１１０３の産物をパラジウム炭素およびエタノールの溶液に加え、かつ水素ガス（３気圧）のもとで数時間撹拌し、その後濾過し、それに続いて溶媒除去し式１１０４の対応産物を得る。
反応式１１、工程４において説明されるように、式１１０４の産物をメタクリル酸無水物の溶液に加える。トリエチルアミンを加えて、かつ反応を２時間撹拌し、それに続いて溶媒除去および単離により式１１０５の対応産物を得る。
反応式１１、工程５において説明されるように、アジド－改変ｕＲＡＦＴ剤（式１１０６）をアゾビスイソブチロニトリルを有する式１１０５の産物の溶液に加えて、４凍結脱気サイクルに供し、かつその後７０℃で撹拌する。数時間後式１１０７の対応するポリマー産物を低級アルカノールの添加により沈殿させ、それに続いて溶媒除去する。ここでＲ３はＮＨ－保護基であり（例えば、Ｒ４で環化される）、保護基はこの箇所で除去される。
反応式１１、工程６において説明されるように、式１０１’の天然型の遊離表面アミノ基を有する抗原、抗体、抗体フラグメントまたはリガンドをｐＨ８．０緩衝液に加え、かつ過剰（ｍの値に対応する）の式１１０８のジオキソピロリジンと攪拌しながら接触させる。１時間後、未反応の式１１０８を除去し、かつ得られる式１１０９の産物はさらに精製せずに使用される。
反応式１１、工程７において説明されるように、式１１０７の産物をｐＨ８．０緩衝液に加え、そして式１１０９の産物に加える。２時間撹拌後、過剰の式１１０７を除去し、式１ｍの対応する異性体産物を得る。
工程５において式１１０５の産物をＮ－（２，４，５－トリヒドロキシ－６－（ヒドロキシメチル）テトラヒドロ－２Ｈ－ピラン－３－イル）メタクリルアミドに置換し、かつ工程６および７を続行することにより、Ｚ”がＣ２でコンジュゲートされたＮ－アセチルガラクトサミンである式１ｍの対応する異性体産物が得られる。
式１ｍに対応する組成物は、以下の通り命名され得る：
“Ｆ１ｍ－Ｘ’－ｍｍ－ｎｎ－ｐｐ－ｑｑ－ＥｔＡｃＮ－Ｚ”、ここでＺ”は１ＧＡＬ、１ＮＧＡＬ、１ＮＡｃＧＡＬ、“Ｆ１ｍ－Ｘ’－ｍｍ－ｎｎ－ｐｐ－ｑｑ－２ＮＡｃＧＡＬ”または“Ｆ１ｍ－Ｘ’－ｍｍ－ｎｎ－ｐｐ－ｑｑ－２ＮＡｃＧＬＵ”（または対応する１ＧＡＬ、１ＧＬＵ、１ＮＧＡＬ、１ＮＧＬＵ、１ＮＡｃＧＡＬまたは１ＮＡｃＧＬＵ化合物）である。
反応式１２
Figure 0007082045000075
 反応式１２の合成アプローチは、有機溶媒の使用のために疎水性の抗原、抗体、抗体フラグメントおよびリガンド（例えば、インスリン）に特に適している。
反応式１２、工程１において説明されるように、式１０１’の天然型の遊離表面アミノ基を有する抗原、抗体、抗体フラグメントまたはリガンドを、トリエチルアミンを含有する有機溶媒（例えば、ＤＭＦ）において溶解する。これに、式１２０１の化合物の量（ｍの値に対応する）を加え、それに続いて撹拌およびｔ－ブチルメチルエーテルを加える。式１２０２の対応産物を沈殿物として回収する。
式１２０２の産物を有機溶媒において再懸濁し、かつ式１１０７（例えば、反応式１１に関して記載されるように得られる）の量（ｍの値に対応する）を加え、それに続いて撹拌する。当該反応産物をジクロロメタンの添加を介して沈殿させ、それに続いて濾過および溶媒除去した。精製（例えば、ＰＢＳにおける再懸濁、それに続く遠心性サイズ排除クロマトグラフィー）は、式１ｎの対応する異性体産物を得る。
式１ｎに対応する組成物は、以下の通り命名され得る：
“Ｆ１ｎ－Ｘ’－ｍｍ－ｎｎ－ｐｐ－ｑｑ－ＥｔＡｃＮ－Ｚ”、ここでＺ”は１ＧＡＬ、１ＮＧＡＬ、１ＮＡｃＧＡＬ、１ＧＬＵ、１ＮＧＬＵ、１ＮＡｃＧＬＵ、または
“Ｆ１ｍ－Ｘ’－ｎｍ－ｎｎ－ｐｐ－ｑｑ－２ＮＡｃＧＡＬ”または“Ｆ１ｍ－Ｘ’－ｎｍ－ｎｎ－ｐｐ－ｑｑ－２ＮＡｃＧＬＵ”である。
反応式１３
Figure 0007082045000076
 反応式１３、工程１において、ニトロフェノキシカルボニル－オキシアルキルジチオール－ポリ（エチレングリコール）－ＮＨＳエステル（式１３０１）をガラクトース、ガラクトサミンまたはＮ－アセチルガラクトサミン（式１０５）と接触させて、他の２つの説明される産物と一緒に、式１３０２の対応産物を与え、式１３０２の望ましいニトロフェノキシカルボニルジチオール－ポリ（エチレングリコール）－カルボキシエチルガラクトース、ガラクトサミンまたはＮ－アセチルガラクトサミンは次の工程に進む前に単離される。
反応式１３、工程２において説明されるように、式１０１’の天然型の遊離表面アミノ基を有する抗原、抗体、抗体フラグメントまたはリガンドを過剰（ｍの値に対応する）の式１３０２の産物と接触させて式１ｏに記載の対応産物を得る。
式１ｏに対応する組成物は、以下の通り命名され得る：
“Ｆ１ｏ－Ｘ’－ｍｍ－ｎｎ－Ｚ’。”
反応式１４
Figure 0007082045000077
 反応式１４において説明されるように、天然型の遊離表面アミノ基を有する抗原、抗体、抗体フラグメントまたはリガンド（式１０１’）を過剰（ｍの値に対応する）の式１４０１のピリジルジチオール－ポリ（エチレングリコール）－ＮＨＳエステルと接触させて式１ｐに記載の対応産物を得る。
式１ｐに対応する組成物は、以下の通り命名され得る：
“Ｆ１ｐ－Ｘ’－ｍｍ－ｎｎ－ｐｐ－２ＮＡｃＧＡＬ”、“Ｆ１ｐ－Ｘ’－ｍｍ－ｎｎ－ｐｐ－２ＮＡｃＧＬＵ”または“Ｆ１ｐ－Ｘ’－ｍｍ－ｎｎ－ｐｐ－ＥｔＡｃＮ－Ｚ”。
反応式１５－１８は、Ｗが同一のまたは異なるＷ１およびＷ２基の共重合体である化合物の調製を説明する。
反応式１５
Figure 0007082045000078
Figure 0007082045000079
Figure 0007082045000080
 反応式１５、工程１において説明されるように、ガラクトースまたはグルコース（Ｒ３およびＲ４がＯＨである式１１０１）、保護されるガラクトサミンまたは保護されるグルコサミン（式１１０１、ここでＲ３がＮＨ－保護基、例えば、Ｒ４で環化される）またはＮ－アセチル－Ｄ－ガラクトサミンまたはＮ－アセチル－Ｄ－グルコサミン（式１１０１、ここでＲ３はＮＨＡｃであり、かつＲ４はＯＨである）を式１５０１の２－（ポリ－（２－クロロエトキシ）エトキシ）エタン－１－オール（ここで、ｔは１から５である）と接触させて、それに続いて冷却およびアセチルクロライドを滴下する。溶液を室温に加温し、かつその後７０℃に数時間加熱する。エタノールを粗産物に加え、かつ得られる溶液を炭素存在下で攪拌し、その後濾過し、それに続いて溶媒除去し、式１５０２の対応産物を得る。
反応式１５、工程２において説明されるように、式１５０２の産物を過剰のアジ化ナトリウムに加え、かつ９０℃に数時間加熱し、その後濾過し、それに続いて溶媒除去し式１５０３の対応産物を得る。
反応式１５、工程３において説明されるように、式１５０３の産物をパラジウム炭素およびエタノールの溶液に加え、かつ水素ガス（３気圧）のもとで数時間撹拌し、その後濾過し、それに続いて溶媒除去し式１５０４の対応産物を得る。
反応式１５、工程４において説明されるように、式１５０４の産物をメタクリル酸無水物の溶液に加える。トリエチルアミンを加えて、かつ反応を２時間撹拌し、それに続いて溶媒除去および単離により式１５０５の対応産物を得る。あるいは、ペンタフルオロフェニルメタクリル酸（または別のアクリル化剤）が式１５０５の対応産物を調製するために使用され得る。いくつかの実施形態では、式１５０４の産物をＤＭＦに加える。トリエチルアミン（例えば、有機塩基）が加えられ、かつ混合物が冷却される（例えば、氷浴を使用して４℃に）。その後、ペンタフルオロフェニルメタクリル酸（または別のアクリル化剤）が加えられる（例えば、一定の攪拌を伴う滴下）。ある時間の期間（例えば、３０分）後に、冷却（例えば、氷浴）が除去され、かつ反応はある時間の期間（例えば、４時間）室温攪拌される。いくつかの実施形態では、溶媒はその後除去される。いくつかの実施形態では、産物はフラッシュクロマトグラフィーを使用して精製される。
反応式１５、工程５において説明されるように、式１１０６のアジド－改変ｕＲＡＦＴ剤および式１５０６のメタクリルアミドをアゾビスイソブチロニトリルを有する式１５０５の産物の溶液に加えて、４凍結脱気サイクルに供し、かつその後７０℃で撹拌する。数時間後、式１５０７の対応するランダム共重合体産物を低級アルカノールまたはアセトンの添加により沈殿させ、それに続いて溶媒除去する。ここでＲ３はＮＨ－保護基（例えば、Ｒ４で環化される）であり、保護基はこの箇所で除去される。
反応式１５、工程６において説明されるように、式１５０７の産物をｐＨ８．０緩衝液に加え、そして式１１０９の産物（例えば、反応式１１に関して記載されるように調製される）に加える。２時間撹拌後、過剰の式１１０９を除去し式１ｍ’の対応する異性体ランダム共重合体産物を得る。
工程５において式１５０５の２以上のメタクリルアミド（例えば、グルコースおよびガラクトースメタクリルアミド、またはｔについて異なる値を有する２つ以上のメタクリルアミド）および／または式１５０６の２つ以上のメタクリルアミドを加えること、および工程６を続行することにより、Ｒ３および／またはＰＥＧ（“ｔ”）および／またはＲ１０基の混合物を有する式１ｍ’の対応産物、すなわちＷが異なるＷ１およびＷ２基のランダム共重合体である式１の化合物が得られる。
式１ｍ’に対応する組成物は、以下の通り命名され得る：
“Ｆ１ｍ’－Ｘ’－ｍｍ－ｎｎ－ｐｐ－ｑｑ－Ｒ８－ポリ－（Ｗ１ ｔＺ”Ｗ１ｐ－ｒａｎ－Ｗ２ Ｗ２ｐ）”。
反応式１６
Figure 0007082045000081
Figure 0007082045000082
 反応式１６、工程１において説明されるように、式１６０１の化合物を反応式１５、工程５の条件と類似の条件下で、式１５０５および１５０６の化合物と接触させて、式１６０２の対応する化合物を得る。
いくつかの実施形態では、化合物１６０１ａ（１６０１の実施形態）を形成するために以下の合成が行われる。
Figure 0007082045000083
いくつかの実施形態では、ｔは約１から約１０の整数であり、または約１から約５である。いくつかの実施形態では、オリゴエチレングリコール（１６５０）を、ｐ－トルエンスルホニルクロライド（または脱離基で１６５０を官能基化することができるいくつかのその他の薬剤）と反応させ、オリゴエチレングリコールモノｐ－トルエンスルホネート（１６５１）（または脱離基で官能基化されるいくつかのその他のオリゴエチレングリコール）を形成する。いくつかの実施形態では、化合物１６５１を、チオ酢酸カリウムと反応させて化合物１６５２を形成することができる。いくつかの実施形態では、化合物１６５２を、２，２－ジチオジピリジンと反応させて化合物１６５３を形成できる。いくつかの実施形態では、化合物１６５３を化合物１６５４に結合させ化合物１６０１ａを形成する。
反応式１６、工程２において説明されるように、式１６０２の化合物を反応式１５、工程６の条件と類似の条件下で式１０１”の化合物と接触させて、式１ｃ’の対応する化合物を得る。
式１ｃ’に対応する組成物は、以下の通り命名され得る：
“Ｆ１ｃ’－Ｘ’－ｍｍ－ｎｎ－ｐｐ－Ｒ８－ポリ－（Ｗ１ ｔＺ”－ｒａｎ－Ｗ２）”。
反応式１７
Figure 0007082045000084
 反応式１７、工程１において説明されるように、式６００’の化合物を反応式１５、工程５の条件と類似の条件下で、式１５０５および１５０６の化合物と接触させて、式６０１’の対応する化合物を得る。
反応式１７、工程２において説明されるように、式６０１’の化合物を反応式１５、工程６の条件と類似の条件下で式１０１’の化合物と接触させて式１ｆ’の対応する化合物を得る。
式１ｆ’に対応する組成物は、以下の通り命名され得る：
“Ｆ１ｆ’－Ｘ’－ｍｍ－ｎｎ－ｐｐ－Ｒ８－ポリ－（Ｗ１ ｔＺ”－ｒａｎ－Ｗ２）”。
反応式１８
Figure 0007082045000085
 反応式１８、工程１において説明されるように、式７００’の化合物を反応式１５、工程５の条件と類似の条件下で、式１５０５および１５０６の化合物と接触させて、式７０１’の対応する化合物を得る。
反応式１８、工程２において説明されるように、式７０１’の化合物を反応式１５、工程６の条件と類似の条件下で式１０１’の化合物と接触させて式１ｇ’の対応する化合物を得る。
式１ｇ’に対応する組成物は、以下の通り命名され得る：
“Ｆ１ｇ’－Ｘ’－ｍｍ－ｐｐ－Ｒ８－ポリ－（Ｗ１ ｔＺ”－ｒａｎ－Ｗ２）”。
特定のプロセスおよび最終工程
式１０３’の化合物を過剰（ｍの値に対応する）の式１０６の化合物と接触させて式１ａの対応産物を与える。
式１０３’の化合物を過剰（ｍの値に対応する）の式２０１の化合物と接触させて式１ｂの対応産物を与える。
式８０２、９０２または１００２の化合物を過剰（ｍの値に対応する）の式８０３の化合物と接触させてそれぞれ式１ｈ、式１ｉまたは式１ｋの対応産物を与える。
式１１０９の化合物を過剰（ｍの値に対応する）の式１１０７の化合物と接触させて式１ｍの対応産物を与え、特にｎは約８０であり、ｐは約３０であり、ｑは約４であり、かつ抗原の機能であるｍは約２から１０である。
式１２０２の化合物を過剰（ｍの値に対応する）の式１１０７の化合物と接触させて式１ｎの対応産物を与え、特にｎは約１であり、ｐは約３０であり、ｑは約４であり、かつ抗原の機能であるｍは約２から１０である。
式１５０７の化合物を式１１０９の化合物と接触させて式１ｍ’の対応産物を与え、特にｎは約４であり、ｐは約９０であり、ｑは約４であり、ｔは約１または２であり、Ｒ３はＮＨＡｃであり、Ｒ４はＯＨであり、Ｒ８はＣＭＰであり、Ｒ１０は２－ヒドロキシプロピルであり、かつ抗原の機能であるｍは約１から１０である。
式１０１”の化合物を式１６０２の化合物と接触させて式１ｃ’の対応産物を与え、特にｎは約４であり、ｐは約９０であり、ｔは約１または２であり、Ｒ３はＮＨＡｃであり、Ｒ４はＯＨであり、Ｒ８はＣＭＰであり、Ｒ１０は２－ヒドロキシプロピルであり、かつ抗原の機能であるｍは約１から１０である。
式１０１’の化合物を式６０１’の化合物と接触させて式１ｆ’の対応産物を与え、特にｎは約４であり、ｐは約９０であり、ｔは約１または２であり、Ｒ３はＮＨＡｃであり、Ｒ４はＯＨであり、Ｒ８はＣＭＰであり、Ｒ１０は２－ヒドロキシプロピルであり、かつ抗原の機能であるｍは約１から１０である。
式１０１’の化合物を式７０１’の化合物と接触させて式１ｇ’の対応産物を与え、特にｎは約４であり、ｐは約９０であり、ｔは約１または２であり、Ｒ３はＮＨＡｃであり、Ｒ４はＯＨであり、Ｒ８はＣＭＰであり、Ｒ１０は２－ヒドロキシプロピルであり、かつ抗原の機能であるｍは約１から１０である。
特定の組成物
非限定例として、当該組成物、医薬品製剤、製造方法および本開示の使用のための好ましい特定の基は、式１の置換基群の以下の組み合わせおよび並べ替えである（それぞれ、優先の増加順にサブグループ化される）
・ Ｘは移植レシピエントが望ましくない免疫応答を発症する外来性移植抗原、患者が望ましくない免疫応答を発症する外来性抗原、患者が望ましくない免疫応答を発症する治療用タンパク質、患者が望ましくない免疫応答を発症する自己抗原、もしくはその免疫寛容誘導部分である。
・ Ｘは以下から選択される患者が望ましくない免疫応答を発症する治療用タンパク質である：アバタセプト、アブシキシマブ、アダリムマブ、アデノシンデアミナーゼ、アド－トラスツズマブエムタンシン、アガルシダーゼアルファ、アガルシダーゼベータ、アルデスロイキン、アルグルセラーゼ、アルグルコシダーゼアルファ、α－１－プロテアーゼ阻害剤、アナキンラ、アニストレプラーゼ（アニソイル化プラスミノーゲンストレプトキナーゼ活性化複合体）、アンチトロンビンＩＩＩ、抗胸腺細胞グロブリン、アルテプラーゼ（Ａｔｅｐｌａｓｅ）、ベバシズマブ、ビバリルジン、ボツリヌス毒素Ａ型、ボツリヌス毒素Ｂ型、Ｃ１－エステラーゼ阻害剤、カナキヌマブ、カルボキシペプチダーゼＧ２（グルカルピダーゼおよびＶｏｒａｘａｚｅ）、セルトリズマブ ペゴル、セツキシマブ、コラゲナーゼ、マムシ類（Ｃｒｏｔａｌｉｄａｅ）免疫Ｆａｂ、ダルベポエチン－α、デノスマブ、ジゴキシン免疫Ｆａｂ、ドルナーゼアルファ、エクリズマブ、エタネルセプト、第ＶＩＩａ因子、第ＶＩＩＩ因子、第ＩＸ因子、第ＸＩ因子、第ＸＩＩＩ因子、フィブリノーゲン、フィルグラスチム、ガルスルファーゼ、ゴリムマブ、酢酸ヒストレリン、ヒアルロニダーゼ、イデュルスルファーゼ、イミグルセラーゼ、インフリキシマブ、インスリン（を含むｉｎｇ ｒＨｕ インスリンおよびウシインスリン）、インターフェロン－α２ａ、インターフェロン－α２ｂ、インターフェロン－β１ａ、インターフェロン－β１ｂ、インターフェロン－γ１ｂ、イピリムマブ、Ｌ－アルギナーゼ、Ｌ－アスパラギナーゼ、Ｌ－メチオニナーゼ（ｍｅｔｈｉｏｎａｓｅ）、ラクターゼ、ラロニダーゼ、レピルジン／ヒルジン、メカセルミン、メカセルミンリンファバート、メトキシオファツムマブ、ナタリズマブ、オクトレオチド、オプレルベキン、膵臓アミラーゼ、膵臓リパーゼ、パパイン、Ｐｅｇ－アスパラギナーゼ、Ｐｅｇ－ドキソルビシン ＨＣｌ、ＰＥＧ－エポエチン－β、ＰＥＧフィルグラスチム、Ｐｅｇ－インターフェロン－α２ａ、ＰＥＧ－インターフェロン－α２ｂ、ペグロチカーゼ、ペグビソマント、フェニルアラニンアンモニアリアーゼ（ＰＡＬ）、プロテインＣ、ラスブリカーゼ（ウリカーゼ）、サクロシダーゼ、サケカルシトニン、サルグラモスチム、ストレプトキナーゼ、テネクテプラーゼ、テリパラチド、トシリズマブ（アトリズマブ）、トラスツズマブ、１型アルファ－インターフェロン、ウステキヌマブ、およびｖＷ因子。
○ とりわけＸはアブシキシマブ、アダリムマブ、アガルシダーゼアルファ、アガルシダーゼベータ、アルデスロイキン、アルグルコシダーゼアルファ、第ＶＩＩＩ因子、第ＩＸ因子、インフリキシマブ、Ｌ－アスパラギナーゼ、ラロニダーゼ、ナタリズマブ、オクトレオチド、フェニルアラニンアンモニアリアーゼ（ＰＡＬ）、またはラスブリカーゼ（ウリカーゼ）である。
■ 特にＸは第ＶＩＩＩ因子、第ＩＸ因子、ウリカーゼ、ＰＡＬまたはアスパラギナーゼである。
・ Ｘは１型糖尿病、小児多発性硬化症、若年性関節リウマチ、セリアック病、または全身性脱毛症を治療するために選択される自己抗原ポリペプチドである。
○ とりわけＸは新規発症１型糖尿病、小児多発性硬化症またはセリアック病を治療するために選択される自己抗原ポリペプチドである。
・ Ｘは患者が望ましくない免疫応答を発症する外来性抗原である
○ ピーナッツ由来のもの、コンアラキン（Ａｒａ ｈ １）を含む
○ コムギ由来のもの、天然型アルファ－グリアジン“３３－ｍｅｒ”（配列番号：２０）、脱アミド化アルファ－グリアジン“３３－ｍｅｒ”（配列番号：２１）、アルファ－グリアジン（配列番号：２２）およびオメガ－グリアジン（配列番号：２３）を含む。
○ ネコ由来のもの、Ｆｅｌ ｄ １Ａ（ＵＮＩＰＲＯＴ Ｐ３０４３８）およびネコアルブミン（ＵＮＩＰＲＯＴ Ｐ４９０６４）を含む。
○ イヌ由来のもの、Ｃａｎ ｆ １（ＵＮＩＰＲＯＴ Ｏ１８８７３）およびイヌアルブミン（ＵＮＩＰＲＯＴ Ｐ４９８２２）を含む。
・ Ｘは移植レシピエントが望ましくない免疫応答を発症する外来性移植抗原、例えば、ヒト白血球抗原タンパク質である。
・ Ｘは循環タンパク質もしくはペプチドまたは抗体に特異的に結合する抗体、抗体フラグメントまたはリガンドであり、循環タンパク質もしくはペプチドまたは抗体は移植拒絶、治療薬に対する免疫応答、自己免疫疾患、および／またはアレルギーを生じさせる。
○ とりわけＸは内在性の循環タンパク質もしくはペプチドまたは抗体に結合する。
・ Ｙは以下から選択されるリンカーであり：式Ｙａ、式Ｙｂ、式Ｙｈ、式Ｙｉ、式Ｙｋ、式Ｙｍ、式Ｙｎ、式Ｙｏおよび式Ｙｐ。
○ とりわけｎは８から９０±１０％であり、ｐは２０から１００±１０％であり、かつｑは３から２０±３である。
■ 特にｎは４０から８０±１０％であり、ｐは３０から４０±１０％であり、かつｑは４から１２±３である。
○ とりわけＹは式Ｙａ、式Ｙｂ、式Ｙｍまたは式Ｙｎである。
■ 特にｎは８から９０±１０％であり、ｐは２０から１００±１０％であり、かつｑは３から２０±３である。
・ より具体的にはｎは４０から８０±１０％であり、ｐは３０から４０±１０％であり、かつｑは４から１２±３である。
■ 特にＺはエチルアセトアミド基を介してＹにコンジュゲートされる。
・ より具体的にはＺはそのＣ１でＹにコンジュゲートされる。
○ より具体的にはＲ８はＣＭＰである。
・ より具体的にはＲ８はＣＭＰである。
■ 特にＲ８はＣＭＰである。
・ Ｙは以下から選択されるリンカーである：式Ｙｃ、式Ｙｆ、式Ｙｇおよび式Ｙｍ。
○ とりわけＷｐはランダム共重合体であり、Ｒ９はＥｔ－ＰＥＧｔ－ＡｃＮであり、かつＲ１０は２－ヒドロキシプロピルである。
■ 特にｔは１または２であり
・ より具体的にはｔは１である。
■ 特にｐは約９０であり、かつ約３０Ｗ１および６０Ｗ２コモノマーを含む。
・ Ｚはガラクトース、ガラクトサミン、Ｎ－アセチルガラクトサミン、グルコース、グルコサミンまたはＮ－アセチルグルコサミンである。
○ とりわけＺはＣ１、Ｃ２またはＣ６でコンジュゲートされたガラクトースまたはＮ－アセチルガラクトサミンである。
■ 特にＺはＣ１またはＣ２でコンジュゲートされたガラクトースまたはＮ－アセチルガラクトサミンである。
・ より具体的にはＺはＣ１でコンジュゲートされたＮ－アセチルガラクトサミンである。
○ とりわけＺはＣ１、Ｃ２またはＣ６でコンジュゲートされたグルコースまたはＮ－アセチルグルコサミンである。
■ 特にＺはＣ１またはＣ２でコンジュゲートされたグルコースまたはＮ－アセチルグルコサミンである。
・ より具体的にはＺはＣ１でコンジュゲートされたＮ－アセチルグルコサミンである。
上記に記載される群およびサブグループのそれぞれは個々に好ましく、かつさらに好ましい本開示の態様を記載するために組み合わせることができ、例えば限定するものではないが、以下の通りである：
・ Ｘは１型糖尿病、小児多発性硬化症、若年性関節リウマチ、セリアック病、または全身性脱毛症を治療するために選択される自己抗原ポリペプチドである。
○ とりわけＸは新規発症１型糖尿病、小児多発性硬化症またはセリアック病を治療するために選択される自己抗原ポリペプチドである。
■ 特にＹは以下から選択されるリンカーである：式Ｙａ、式Ｙｂ、式Ｙｃ、式Ｙｆ、式Ｙｇ、式Ｙｈ、式Ｙｉ、式Ｙｋ、式Ｙｍ、式Ｙｎ、式Ｙｏおよび式Ｙｐ。
・ とりわけＷｐはＲ９はＥｔ－ＰＥＧｔ－ＡｃＮであるＷ１ポリマーであり、またはＲ９はＥｔ－ＰＥＧｔ－ＡｃＮであり、かつＲ１０は２－ヒドロキシプロピルであるランダム共重合体である。
○ 特にｔは１または２であり
■ より具体的にはｔは２である。
■ より具体的にはｔは１である。
○ 特にｐは約９０であり
■ より具体的にはＷｐはランダム共重合体であり、かつ約３０Ｗ１および６０Ｗ２コモノマーを含む。
・ とりわけｎは８から９０±１０％であり、ｐは２０から１００±１０％であり、かつｑは３から２０±３である。
○ 特にｎは４０から８０±１０％であり、ｐは３０から４０±１０％であり、かつｑは４から１２±３である。
・ とりわけＹは式Ｙａ、式Ｙｂ、式Ｙｍまたは式Ｙｎである。
○ 特にｎは８から９０±１０％であり、ｐは２０から１００±１０％であり、かつｑは３から２０±３である。
■ より具体的にはｎは４０から８０±１０％であり、ｐは３０から４０±１０％であり、かつｑは４から１２±３である。
・ さらにより具体的にはＺはエチルアセトアミド基を介してＹにコンジュゲートされる。
■ より具体的にはＺはエチルアセトアミド基を介してＹにコンジュゲートされる。
○ 特にＺはエチルアセトアミド基を介してＹにコンジュゲートされる。
・ とりわけＺがガラクトース、ガラクトサミンまたはＮ－アセチルガラクトサミンである。
○ 特にＺはＣ１、Ｃ２またはＣ６でコンジュゲートされたガラクトースまたはＮ－アセチルガラクトサミンである。
■ より具体的にはＺはＣ１またはＣ２でコンジュゲートされたガラクトースまたはＮ－アセチルガラクトサミンである。
・ さらにより具体的にはＺはＣ１でコンジュゲートされたＮ－アセチルガラクトサミンである。
・ とりわけＺはグルコース、グルコサミンまたはＮ－アセチルグルコサミンである。
○ 特にＺはＣ１、Ｃ２またはＣ６でコンジュゲートされたグルコースまたはＮ－アセチルグルコサミンである。
■ より具体的にはＺはＣ１またはＣ２でコンジュゲートされたグルコースまたはＮ－アセチルグルコサミンである。
・ さらにより具体的にはＺはＣ１でコンジュゲートされたＮ－アセチルグルコサミンである。
■ 特にＹは以下から選択されるリンカーであり：式Ｙｃ、式Ｙｆ、式Ｙｇおよび式Ｙｍ。
・ とりわけＷｐはランダム共重合体であり、Ｒ９はＥｔ－ＰＥＧｔ－ＡｃＮであり、かつＲ１０は２－ヒドロキシプロピルである。
○ 特にｔは１または２であり
■ より具体的にはｔは１である。
○ 特にｐは約９０であり、かつ約３０Ｗ１および６０Ｗ２コモノマーを含む。
■ 特にＹは以下から選択されるリンカーであり：式Ｙｃおよび式Ｙｍ。
・ とりわけＷｐはランダム共重合体であり、Ｒ９はＥｔ－ＰＥＧｔ－ＡｃＮであり、かつＲ１０は２－ヒドロキシプロピルである。
○ 特にｔは１または２であり
■ より具体的にはｔは１である。
○ 特にｐは約９０であり、かつ約３０Ｗ１および６０Ｗ２コモノマーを含む。
■ 特にＺがガラクトース、ガラクトサミンまたはＮ－アセチルガラクトサミンである。
・ とりわけＺはＣ１、Ｃ２またはＣ６でコンジュゲートされたガラクトースまたはＮ－アセチルガラクトサミンである。
○ 特にＺはＣ１またはＣ２でコンジュゲートされたガラクトースまたはＮ－アセチルガラクトサミンである。
■ より具体的にはＺはＣ１でコンジュゲートされたＮ－アセチルガラクトサミンである。
■ 特にＺはグルコース、グルコサミンまたはＮ－アセチルグルコサミンである。
・ とりわけＺはＣ１、Ｃ２またはＣ６でコンジュゲートされたグルコースまたはＮ－アセチルグルコサミンである。
○ より具体的にはＺはＣ１またはＣ２でコンジュゲートされたグルコースまたはＮ－アセチルグルコサミンである。
■ さらにより具体的にはＺはＣ１でコンジュゲートされたＮ－アセチルグルコサミンである。
○ とりわけＹは以下から選択されるリンカーであり：式Ｙａ、式Ｙｂ、式Ｙｈ、式Ｙｉ、式Ｙｋ、式Ｙｍ、式Ｙｎ、式Ｙｏおよび式Ｙｐ。
■ 特にＹは以下から選択されるリンカーであり：式Ｙｃ、式Ｙｆ、式Ｙｇおよび式Ｙｍ。
・ とりわけＷｐはランダム共重合体であり、Ｒ９はＥｔ－ＰＥＧｔ－ＡｃＮであり、かつＲ１０は２－ヒドロキシプロピルである。
○ 特にｔは１または２であり
■ より具体的にはｔは１である。
○ 特にｐは約９０であり、かつ約３０Ｗ１および６０Ｗ２コモノマーを含む。
■ 特にＹは以下から選択されるリンカーであり：式Ｙｃおよび式Ｙｍ。
・ とりわけＷｐはランダム共重合体であり、Ｒ９はＥｔ－ＰＥＧｔ－ＡｃＮであり、かつＲ１０は２－ヒドロキシプロピルである。
○ 特にｔは１または２であり
■ より具体的にはｔは１である。
○ 特にｐは約９０であり、かつ約３０Ｗ１および６０Ｗ２コモノマーを含む。
■ 特にｎは８から９０±１０％であり、ｐは２０から１００±１０％であり、かつｑは３から２０±３である。
・ より具体的にはｎは４０から８０±１０％であり、ｐは３０から４０±１０％であり、かつｑは４から１２±３である。
■ 特にＹは式Ｙａ、式Ｙｂ、式Ｙｍまたは式Ｙｎである。
・ より具体的にはｎは８から９０±１０％であり、ｐは２０から１００±１０％であり、かつｑは３から２０±３である。
○ さらに好ましくはｎは４０から８０±１０％であり、ｐは３０から４０±１０％であり、かつｑは４から１２±３である。
・ より具体的にはＺはエチルアセトアミド基を介してＹにコンジュゲートされる。
○ とりわけＺがガラクトース、ガラクトサミンまたはＮ－アセチルガラクトサミンである。
■ 特にＺはＣ１、Ｃ２またはＣ６でコンジュゲートされたガラクトースまたはＮ－アセチルガラクトサミンである。
・ より具体的にはＺはＣ１またはＣ２でコンジュゲートされたガラクトースまたはＮ－アセチルガラクトサミンである。
○ さらに好ましくはＺはＣ１でコンジュゲートされたＮ－アセチルガラクトサミンである。
・ より具体的にはＹは以下から選択されるリンカーであり：式Ｙｃ、式Ｙｆ、式Ｙｇおよび式Ｙｍ。
○ とりわけＷｐはランダム共重合体であり、Ｒ９はＥｔ－ＰＥＧｔ－ＡｃＮであり、かつＲ１０は２－ヒドロキシプロピルである。
■ 特にｔは１または２であり
・ より具体的にはｔは１である。
■ 特にｐは約９０であり、かつ約３０Ｗ１および６０Ｗ２コモノマーを含む。
○ とりわけＺはグルコース、グルコサミンまたはＮ－アセチルグルコサミンである。
■ 特にＺはＣ１、Ｃ２またはＣ６でコンジュゲートされたグルコースまたはＮ－アセチルグルコサミンである。
・ より具体的にはＺはＣ１またはＣ２でコンジュゲートされたグルコースまたはＮ－アセチルグルコサミンである。
○ さらに好ましくはＺはＣ１でコンジュゲートされたＮ－アセチルグルコサミンである。
・ より具体的にはＹは以下から選択されるリンカーであり：式Ｙｃ、式Ｙｆ、式Ｙｇおよび式Ｙｍ。
○ とりわけＷｐはランダム共重合体であり、Ｒ９はＥｔ－ＰＥＧｔ－ＡｃＮであり、かつＲ１０は２－ヒドロキシプロピルである。
■ 特にｔは１または２であり
・ より具体的にはｔは１である。
■ 特にｐは約９０であり、かつ約３０Ｗ１および６０Ｗ２コモノマーを含む。
・ より具体的にはＹは以下から選択されるリンカーであり：式Ｙｃおよび式Ｙｍ。
○ とりわけＷｐはランダム共重合体であり、Ｒ９はＥｔ－ＰＥＧｔ－ＡｃＮであり、かつＲ１０は２－ヒドロキシプロピルである。
■ 特にｔは１または２であり
・ より具体的にはｔは１である。
■ 特にｐは約９０であり、かつ約３０Ｗ１および６０Ｗ２コモノマーを含む。
・ ｍは約１から１００の整数である。
○ ｍは１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０、１１、１２、１３、１４、１５、１６、１７、１８、１９、２０、２５、３０、３５、４０、４５、５０、５５、６０、６５、７０、７５、８０、８５、９０、９５、１００または１１０である。
○ 特にｍは約１から２０である。
■ ｍは１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０、１１、１２、１３、１４、１５、１６、１７、１８、１９、２０、２１または２２である。
■ より具体的にはｍは約１０である。
・ ｍは９、１０または１１である。
ｎは約１から１００を含む混合物を表す整数である。
○ ｎは１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０、１１、１２、１３、１４、１５、１６、１７、１８、１９、２０、２２、２５、３０、３４、３５、３７、４０、４１、４５、５０、５４、５５、５９、６０、６５、７０、７５、８０、８２、８３、８５、８８、９０、９５、９９、１００、１０５または１１０である。
■ 特にｎは約８から９０である。
■ 特にｎは８、９、１０、１１、１２、１３、１４、１５、１６、１７、１８、１９、２０、２２、２５、３０、３４、３５、３７、４０、４１、４５、５０、５４、５５、５９、６０、６５、７０、７５、８０、８２、８３、８５、８８、９０、９５または９９である。
・ より具体的には、ｎは約４０から８０である。
・ より具体的には、ｎは３７、４０、４１、４５、５０、５４、５５、５９、６０、６５、７０、７５、８０、８２、８３または８８である。
○ ｎは範囲１－４、２－４、２－６、３－８、７－１３、６－１４、１５－２５、２６－３０、４２－５０、４６－５７、６０－８２、８５－９０、９０－１１０および１０７－１１３を包含する混合物を表す。
■ 特にｎは範囲７－１３、６－１４、１５－２５、２６－３０、４２－５０、４６－５７、６０－８２、８５－９０および８２－９９を包含する混合物を表す。
・ より具体的には、ｎは範囲３６－４４、４２－５０、４６－５７、６０－８２および７５－８５を包含する混合物を表す。
○ ｐは約２から１５０を含む混合物を表す整数である。
■ ｐは２、３、４、５、６、７、８、９、１０、１１、１２、１３、１４、１５、１６、１７、１８、１９、２０、２５、３０、３５、４０、４５、５０、５５、６０、６５、７０、７５、８０、８５、９０、９５、１００、１１０、１２０、１３０、１４０、１５０、１６０または１６５である。
■ 特にｎは約１から１００を含む混合物を表す整数である。
・ 特にｎは１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０、１１、１２、１３、１４、１５、１６、１７、１８、１９、２０、２２、２５、３０、３４、３５、３７、４０、４１、４５、５０、５４、５５、５９、６０、６５、７０、７５、８０、８２、８３、８５、８８、９０、９５、９９、１００、１０５または１１０である。
○ より具体的にはｎは約８から９０である。
○ より具体的には、ｎは８、９、１０、１１、１２、１３、１４、１５、１６、１７、１８、１９、２０、２２、２５、３０、３４、３５、３７、４０、４１、４５、５０、５４、５５、５９、６０、６５、７０、７５、８０、８２、８３、８５、８８、９０、９５または９９である。
■ さらにより具体的にはｎは約４０から８０である。
■ さらにより具体的には、ｎは３７、４０、４１、４５、５０、５４、５５、５９、６０、６５、７０、７５、８０、８２、８３または８８である。
・ より具体的にはｐは１８であり、１９、２０、２５、３０、３５、４０、４５、５０、５５、６０、６５、７０、７５、８０、８５、９０、９５、１００または１１０である。
○ 特にｎは約１から１００を含む混合物を表す整数である。
■ 特にｎは１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０、１１、１２、１３、１４、１５、１６、１７、１８、１９、２０、２２、２５、３０、３４、３５、３７、４０、４１、４５、５０、５４、５５、５９、６０、６５、７０、７５、８０、８２、８３、８５、８８、９０、９５、９９、１００、１０５または１１０である。
・ より具体的にはｎは約８から９０である。
・ より具体的には、ｎは８、９、１０、１１、１２、１３、１４、１５、１６、１７、１８、１９、２０、２２、２５、３０、３４、３５、３７、４０、４１、４５、５０、５４、５５、５９、６０、６５、７０、７５、８０、８２、８３、８５、８８、９０、９５または９９である。
○ さらにより具体的にはｎは約４０から８０である。
○ さらにより具体的には、ｎは３７、４０、４１、４５、５０、５４、５５、５９、６０、６５、７０、７５、８０、８２、８３または８８である。
○ より具体的にはｐは２７であり、２８、２９、３０、３１、３２、３３、３４、３５、３６、３７、３８、３９、４０、４１、４２、４３、または４４である。
■ 特にｎは１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０、１１、１２、１３、１４、１５、１６、１７、１８、１９、２０、２２、２５、３０、３４、３５、３７、４０、４１、４５、５０、５４、５５、５９、６０、６５、７０、７５、８０、８２、８３、８５、８８、９０、９５、９９、１００、１０５または１１０である。
・ より具体的にはｎは約８から９０である。
・ より具体的には、ｎは８、９、１０、１１、１２、１３、１４、１５、１６、１７、１８、１９、２０、２２、２５、３０、３４、３５、３７、４０、４１、４５、５０、５４、５５、５９、６０、６５、７０、７５、８０、８２、８３、８５、８８、９０、９５または９９である。
○ さらにより具体的にはｎは約４０から８０である。
○ さらにより具体的には、ｎは３７、４０、４１、４５、５０、５４、５５、５９、６０、６５、７０、７５、８０、８２、８３または８８である。
○ ｑは約１から４４を含む混合物を表す整数である。
■ ｑは１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０、１１、１２、１３、１４、１５、１６、１７、１８、１９、２０、２５、３０、３５、４０、４４または４８である。
有用性、試験および投与
一般的有用性
本開示の組成物は、他の用途の中で、当業者に理解されるような、移植拒絶、治療薬に対する免疫応答、自己免疫疾患、および食物アレルギーの治療を含む様々な用途での使用を見出す。
好ましい実施形態では、本開示の組成物を調節する、特には、抗原特異的な望ましくない免疫応答をダウンレギュレートするために使用する。
さらなる実施形態では、患者において内在的に生成される抗体（すなわち、患者に投与される外来性でない抗体）、ペプチド等を含む、自己免疫および関連する病変、アレルギー、炎症性免疫応答、ならびにアナフィラキシーを引き起こす、循環特異的な望ましくないタンパク質に結合し、かつクリアランスするのに、本開示の組成物は有用である。
本開示に記載の幾つかの実施形態では、免疫系を特異的にダウンレギュレートする抗原提示細胞を介する提示のため、または望ましくない循環タンパク質のクリアランスのため、抗原は肝臓へ標的化される。以前の肝臓標的化の使用、例えば米国第２０１３／００７８２１６号に記載されるものとは、これは別個であり、ここでは、ＤＯＭ２６ｈ－１９６－６１などの肝臓標的化分子の目的は、線維症、肝炎、硬変および肝臓癌などの肝疾患を治療する治療薬の送達であった。
幾つかの実施形態によれば、本開示は、限定されないが、以下を含む、自己抗原および外来性抗原への望ましくない免疫応答を治療する組成物および方法を提供する：移植患者が望ましくない免疫応答（例えば、移植拒絶）を発症する外来性の移植抗原、患者が望ましくない免疫応答（例えば、アレルギー性または過敏症）を発症する外来性抗原、患者が望ましくない免疫応答（例えば、過敏症および／または減少治療活性）を発症する治療薬、患者が望ましくない免疫応答（例えば、自己免疫疾患）を発症する自己抗原。
本明細書で提供される方法および組成物を使って治療することができる自己免疫疾患状態は以下を含むが、これらに限定されない：急性散在性脳脊髄炎（ＡＤＥＭ）；急性間質性アレルギー性腎炎（薬物アレルギー）；急性壊死性出血性白質脳炎；アジソン病；円形脱毛症；全身性脱毛症；強直性脊椎炎；若年性関節炎；乾癬性関節炎；リウマチ性関節炎；アトピー性皮膚炎；自己免疫性再生不良性貧血；自己免疫性胃炎；自己免疫性肝炎；自己免疫性下垂体炎；自己免疫性卵巣炎；自己免疫性精巣炎；多腺性自己免疫症候群１型；多腺性自己免疫症候群２型；自己免疫性甲状腺炎；ベーチェット病；閉塞性細気管支炎；水疱性類天疱瘡；セリアック病；チャーグ・ストラウス症候群；慢性炎症性脱髄性多発神経炎；瘢痕性類天疱瘡；クローン病；コクサッキー心筋炎；ジューリング疱疹状皮膚炎；糖尿病（１型）；結節性紅斑；後天性表皮水疱症、巨細胞性動脈炎（側頭動脈炎）；巨細胞性心筋炎；グッドパスチャー症候群；グレーブス病；ギラン・バレー症候群；橋本脳症；橋本甲状腺炎；ＩｇＧ４－関連硬化性疾患；ランバート・イートン症候群；混合性結合組織病；ムッハ・ハーベルマン病；多発性硬化症；重症筋無力症；視神経炎；視神経脊髄炎；尋常性天疱瘡およびバリアント型；悪性貧血；下垂体自己免疫疾患；多発性筋炎；心膜切開後症候群；早発卵巣不全；原発性胆汁性肝硬変；原発性硬化性胆管炎；乾癬；リウマチ性心疾患；シェーグレン症候群；全身性エリテマトーデス；全身性硬化症；潰瘍性大腸炎；未分化型結合組織病（ＵＣＴＤ）；ぶどう膜炎；白斑；ならびにウェゲナー肉芽腫症。
本明細書で提供される方法および組成物を使って治療することができる自己免疫疾患状態の特定の群は以下を含むが、これらに限定されない：急性壊死性出血性白質脳炎；アジソン病；乾癬性関節炎；リウマチ性関節炎；自己免疫性再生不良性貧血；自己免疫性下垂体炎；自己免疫性胃炎；多腺性自己免疫症候群１型；水疱性類天疱瘡；セリアック病；コクサッキー心筋炎；ジューリング疱疹状皮膚炎；糖尿病（１型）；後天性表皮水疱症；巨細胞性心筋炎；グッドパスチャー症候群；グレーブス病；橋本甲状腺炎；混合性結合組織病；多発性硬化症；重症筋無力症；視神経脊髄炎；悪性貧血；尋常性天疱瘡およびバリアント型；下垂体自己免疫疾患；早発卵巣不全；リウマチ性心疾患；全身性硬化症；シェーグレン症候群；全身性エリテマトーデス；ならびに白斑。
望ましくない免疫応答を発症する食物抗原などの抗原を利用する実施形態では、例えば：ピーナッツ、リンゴ、乳、卵白、卵黄、カラシナ、セロリ、エビ、コムギ（および他の穀類）、イチゴおよびバナナに対する反応のために治療を提供することができる。
望ましくない免疫応答を発症したことがある外来性抗原、および抗原に基づいて開発されうる本開示の組成物を開示するために患者が試験されうることを、当業者は理解するだろう。
試験
本開示の組成物および方法の有用性を確立するには、肝臓における抗原提示細胞への結合における特異性（特には、肝細胞に結合すること、具体的にはＡＳＧＰＲ）が、初期に決定されるべきである。本開示の組成物において、これは、例えば、マーカー（蛍光マーカーフィコエリトリン（“ＰＥ”）など）を利用することにより達成されうる。当該組成物を適切な実験対象に投与する。コントロール、例えば、コンジュゲートされていないＰＥ、またはビヒクル（生理食塩水）を、対象の他の群に投与する。組成物およびコントロールを、１から５時間の間循環させ、その後対象の脾臓および肝臓を収集し、かつ蛍光について測定する。蛍光が確認される特定の細胞を引き続いて同定することができる。この様式において試験される場合、本開示の組成物は、コンジュゲートされていないＰＥまたは媒体と比較して、肝臓の抗原提示細胞において濃度のより高いレベルを示す。
抗原単独または単なるビヒクルの投与と比較して、オボアルブミン（“ＯＶＡ”）などの知られた抗原を組み込む本開示の組成物の投与への応答において、ＯＴ－Ｉ ＣＤ８＋細胞（宿主マウスへ移植される）の増殖を測定することにより、免疫調節における有効性を試験することができる。この様式において試験される場合、本開示の組成物は、抗原単独またはビヒクルと比較して、増加したＣＤ８＋Ｔ細胞クロスプライミングを示してＯＴ－I細胞増殖の増加を示す。機能的なエフェクター表現型へと拡張されているＴ細胞を、増殖かつ拡張されているものから区別するために、増殖性のＯＴ－Ｉ ＣＤ８＋Ｔ細胞を、消耗の分子サイン［ｐｒｏｇｒａｍｍｅｄ ｄｅａｔｈ－１（ＰＤ－１）、ＦａｓＬ、およびその他など］、並びにアポトーシス、ひいては除去の特徴としてのアネキシンＶ結合について、表現型的に分析することができる。ＯＴ－Ｉ ＣＤ８＋Ｔ細胞はまた、機能的な非応答性、ひいては抗原への免疫寛容を実証するために、アジュバントを有する抗原チャレンジへのそれらの応答性について評価することができる。そうするために、本開示の組成物の宿主マウスへの投与それに続く抗原チャレンジ後に細胞を、炎症性のサインについて分析する。この様式において試験される場合、本開示の組成物は、コントロール群と比較して非常に低レベル（例えば、バックグラウンド）のＯＶＡへの炎症性のＯＴ－Ｉ ＣＤ８＋Ｔ細胞応答、ひいては免疫寛容を示すことを実証する。
抗原単独または単なるビヒクルの投与と比較して、ＯＶＡなどの知られた抗原を組み込む本開示の組成物を投与すること、および得られる抗体のレベルを測定することにより、体液性免疫応答を試験することができる。この様式において試験される場合、本開示の組成物は、それらの投与およびビヒクルの投与に応答する非常に低（例えば、バックグラウンド）レベルの抗体形成、および抗原の投与に応答する有意により高いレベルの抗体形成を示す。
抗原に対する寛容化における有効性を、体液性免疫応答に関して上記のように試験することができ、ここで、本開示の組成物での治療後数週間、対象の群を抗原単独の投与によりチャレンジし、それに続いて抗原に対する抗体のレベルを測定した。この様式において試験される場合、前処理されていない群と比較して、かかる組成物で前処理されている群において、本開示の組成物は抗原のチャレンジに応答する低レベルの抗体形成を示す。
疾病に焦点をあてる実験モデルは当業者よく知られており、かつ、自己免疫および寛容のＮＯＤ（または非肥満性糖尿病）マウスモデルならびにヒト炎症性脱髄疾患、多発性硬化症のためのＥＡＥ（実験的自己免疫性脳脊髄炎）モデルを含む。特には、ＮＯＤマウスは、自発性の自己免疫性糖尿病（ヒトにおける１ａ型糖尿病と同様）を発症する。ＮＯＤマウスの群を、試験化合物または陰性コントロールで治療し、それに続いて血糖を測定する。治療の成功は、ヒトにおいて糖尿病を治療する可能性、または他の自己免疫疾患の治療へのアプローチのための機構の証明に対応する。（例えば、Ａｎｄｅｒｓｏｎ ａｎｄ Ｂｌｕｅｓｔｏｎｅ，Ａｎｎｕ．Ｒｅｖ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．２００５；２３：４４７－８５を参照されたい。）
投与
本開示の組成物を、治療的に有効な薬用量、例えば、以前に記載される疾病状態のための治療を提供するために十分な薬用量で投与する。本開示の化合物または薬学的に許容可能なその塩の投与は、同様の有用性果たす薬のための任意の許容される投与様式を介することができる。
ヒト薬用量レベルは未だ、本開示の化合物について最適化されていないが、これらは最初、マウスについて投与された約１０μｇから１００μｇの用量と推定することができる。一般に、個々のヒト用量は、約０．０１から２．０ｍｇ／ｋｇ体量、好ましくは約０．１から１．５ｍｇ／ｋｇ体量、およびもっとも好ましくは約０．３から１．０ｍｇ／ｋｇ体量である。治療を、一日または数日の期間投与することができ、かつ数日の間隔、１もしくは数週間、または１もしくは数ヶ月繰り返すことができる。投与は、単一用量として（例えば、急速投与として）または初期の急速投与としてであり、それに続いて時間とともに例えば、１から７日、完全用量の残存部分の連続的な注入でありうる。投与される活性化合物の量はもちろん、以下の任意のまたは全てに依存するだろう：治療される対象および疾病の状態、苦痛の重症度、投与の様式およびスケジュールならびに処方する医師の判断。それはまた、抗原、抗体、抗体フラグメントもしくはリガンドの分子量並びにリンカーのサイズに依存するであろう投与される量と認識されるだろう。
本開示の組成物を単独または他の薬学的に許容可能な賦形剤との組み合わせのいずれかで投与することができる。全ての典型的な投与経路が想定され、（例えば、経口、局所的、経皮的、注射（筋肉内、静脈内、または動脈内））それは現在注射に適切な液体薬用量形態を提供することが好ましい。製剤は、従来の医薬品の担体もしくは賦形剤ならびに本開示の組成物もしくは薬学的に許容可能なその塩を典型的に含む。さらに、これらの組成物は、本開示の組成物において利用される抗原（Ｘ）に対応する治療用のタンパク質、ペプチド、抗体もしくは抗体様分子、ならびに抗葉酸、免疫抑制剤、細胞増殖抑制剤、有糸分裂阻害剤、および抗代謝物、またはそれらの組み合わせを含む、免疫調節薬として作用することができかつ、より具体的にはＢ細胞に抑制性効果を有することができる他の活性の薬を含む他の薬用の薬、医薬品の薬、担体等を含むことができるが、これらに限定されない。
一般に、意図される投与様式に依存し、薬学的に許容可能な組成物は、本開示の組成物の重量で約０．１％から９５％、好ましくは約０．５％から５０％を含有し、残りが適切な医薬品の賦形剤、担体等であるだろう。０．００５％から９５％の範囲において、無毒性担体からなるバランスのとれた活性成分を含有する薬用量形態または組成物を調製することができる。
液体薬学的に投与可能な組成物を、例えば、溶解、分散等により調製することができる。本開示の活性の組成物（例えば、凍結乾燥した粉末）および例えば、水（注射用の水）、生理食塩水、水性ブドウ糖、グリセリン、グリコール、エタノール等（ガラクトースを除く）などの担体における任意の医薬品のアジュバントは、それによって溶液または懸濁液を形成する。所望であれば、投与される医薬組成物はまた、微量な量の湿潤剤、乳化剤、安定化剤、可溶化剤、ｐＨ緩衝作用剤等、例えば、酢酸ナトリウム、クエン酸ナトリウム、シクロデキストリン誘導体、ソルビタンモノラウレート、トリエタノールアミン酢酸およびトリエタノールアミンオレイン酸等、浸透圧調節物質、アミノ酸、糖および炭水化物、タンパク質およびポリマー、塩、界面活性物質、キレート剤および抗酸化剤、保存料、ならびに特異的なリガンドなどの無毒性補助物質を含むことができる。かかる薬用量形態を調製する実際の方法はよく知られており、または当業者に明らかであろう；例えば、Ｒｅｍｉｎｇｔｏｎ：Ｔｈｅ Ｓｃｉｅｎｃｅ ａｎｄ Ｐｒａｃｔｉｃｅ ｏｆ Ｐｈａｒｍａｃｙ，Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ Ｐｒｅｓｓ，２２ｎｄ Ｅｄｉｔｉｏｎ，２０１２を参照されたい。投与される組成物または製剤は、任意の事象において、治療される対象の症状を治療するのに有効な量の活性化合物の量を含有するだろう。
以下の実施例は、上記に記載される開示の使用様式をより十分に記載する、並びに様々な本開示の態様を実施するために想定される最上の様式を記載するのに役立つ。決してこれらの実施例は、本開示の真の範囲を限定するものと理解されるべきではなく、むしろ例示の目的で提示される。本明細書に引用される全ての引用文献は、出典明示によりそれらの全体が組み込まれる。
実施例１
Ｆ１ａＡ－ＯＶＡ－ｍ４－ｎ８０（またはＦ１ａ－ＯＶＡ－ｍ４－ｎ８０－２ＮＧＡＬ）
１Ａ． Ｘ’がＯＶＡであり、かつｍが４である式１０３’
エンドトキシンフリーのチューブにおいて、ＯＶＡ（５．０ｍｇ、０．０００１２ｍｍｏｌ）を、５ｍＭ ＥＤＴＡを含有する１００μｌのｐＨ８．０ ＰＢＳに加え、撹拌した。別々に、１ｍｇのトラウト試薬を１００μｌのｐＨ７．０ ＰＢＳに溶解し、ついで、このようにして得られた１６μｌ（０．００１１９ｍｍｏｌ）のトラウト試薬溶液を、撹拌を続けてＯＶＡの撹拌溶液に加えた。１時間後、式１０３’の対応産物を得るために遠心性サイズ排除カラムを使って過剰トラウト試薬を除去した。
１Ｂ． ｎが８０である式１０６Ａ
エンドトキシンフリーのチューブにおいて、ガラクトサミン（１０．０ｍｇ、０．０４６３８ｍｍｏｌ）を５ｍＭ ＥＤＴＡを含有する１００μｌのｐＨ８．０ ＰＢＳにおいて攪拌しながら溶解させた。１００μｌのｐＨ７．０ ＰＢＳにおいて溶解されるピリジルジチオール－ポリ（エチレングリコール）－ＮＨＳエステル（ｎが８０である式１０４）（１６．２３ｍｇ、０．００４６４ｍｍｏｌ）をガラクトサミンの攪拌溶液に加えた。１時間後、得られたピリジルジチオール－ポリ（エチレングリコール）－Ｎ－アセチルガラクトサミン（式１０６Ａ）をさらに精製せずに使用するよう準備した。
１Ｃ． Ｘ’がＯＶＡであり、ｍが４であり、ｎが８０である（かつＺ’はＣ２ガラクトサミンである式１ａＡ）
実施例１Ａにおいて調製される式１０３’の精製ＯＶＡ－トラウトコンジュゲーション体に、実施例１Ｂにおいて調製される式１０６Ａの撹拌産物を直接加えた。１時間後、反応混合物を通過させることにより、遠心性サイズ排除カラムから得られる式１ａの産物を精製した。特性評価（ＵＨＰＬＣ ＳＥＣ、ゲル電気泳動）で産物の正体を確認した。（図５を参照されたい。）
１Ｄ． 式１０３’の他の化合物
実施例１Ａに記載される手順に従い、かつＯＶＡを以下に置換することにより：
・ アブシキシマブ、
・ アダリムマブ、
・ アガルシダーゼアルファ、
・ アガルシダーゼベータ、
・ アルデスロイキン、
・ アルグルコシダーゼアルファ、
・ 第ＶＩＩＩ因子、
・ 第ＩＸ因子、
・ Ｌ－アスパラギナーゼ、
・ ラロニダーゼ、
・ オクトレオチド、
・ フェニルアラニンアンモニアリアーゼ、
・ ラスブリカーゼ、
・ インスリン（配列番号：１）、
・ ＧＡＤ－６５（配列番号：２）、
・ ＩＧＲＰ（配列番号：３）
・ ＭＢＰ（配列番号：４）、
・ ＭＯＧ（配列番号：５）、
・ ＰＬＰ（配列番号：６）、
・ ＭＢＰ１３－３２（配列番号：７）、
・ ＭＢＰ８３－９９（配列番号：８）、
・ ＭＢＰ１１１－１２９（配列番号：９）、
・ ＭＢＰ１４６－１７０（配列番号：１０）、
・ ＭＯＧ１－２０（配列番号：１１）、
・ ＭＯＧ３５－５５（配列番号：１２）、
・ ＰＬＰ１３９－１５４（配列番号：１３）、
・ ＭＡＲＴ１（配列番号：１４）、
・ チロシナーゼ（配列番号：１５）、
・ ＰＭＥＬ（配列番号：１６）、
・ アクアポリン４（配列番号：１７）、
・ Ｓ－アレスチン（配列番号：１８）、
・ ＩＲＢＰ（配列番号：１９）、
・ コンアラキン（ＵＮＩＰＲＯＴ Ｑ６ＰＳＵ６）、
・ 天然型アルファ－グリアジン“３３－ｍｅｒ”（配列番号：２０）、
・ 脱アミド化アルファ－グリアジン“３３－ｍｅｒ”（配列番号：２１）、
・ アルファ－グリアジン（配列番号：２２）、
・ オメガ－グリアジン（配列番号：２３）、
・ Ｆｅｌ ｄ １Ａ（ＵＮＩＰＲＯＴ Ｐ３０４３８）、
・ ネコアルブミン（ＵＮＩＰＲＯＴ Ｐ４９０６４）、
・ Ｃａｎ ｆ １（ＵＮＩＰＲＯＴ Ｏ１８８７３）、
・ イヌアルブミン（ＵＮＩＰＲＯＴ Ｐ４９８２２）、および
・ ＲｈＣＥ（ＵＮＩＰＲＯＴ Ｐ１８５７７）、
式１０３’の以下の対応する化合物が得られ、ここで：
・ Ｘはアブシキシマブであり、かつｍは１０であり、
・ Ｘはアダリムマブであり、かつｍは１１であり、
・ Ｘはアガルシダーゼアルファであり、かつｍは１４であり、
・ Ｘはアガルシダーゼベータであり、かつｍは１４であり、
・ Ｘはアルデスロイキンであり、かつｍは６であり、
・ Ｘはアルグルコシダーゼアルファであり、かつｍは１３であり、
・ Ｘは第ＶＩＩＩ因子であり、かつｍは１００であり、
・ Ｘは第ＩＸ因子であり、かつｍは１８であり、
・ ＸはＬ－アスパラギナーゼであり、かつｍは５であり、
・ Ｘはラロニダーゼであり、かつｍは７であり、
・ Ｘはオクトレオチドであり、かつｍは１であり、
・ Ｘはフェニルアラニンアンモニアリアーゼであり、かつｍは１２であり、
・ Ｘはラスブリカーゼであり、かつｍは１２であり、
・ Ｘはインスリン（配列番号：１）であり、かつｍは２であり、
・ ＸはＧＡＤ－６５（配列番号：２）であり、かつｍは８であり、
・ ＸはＩＧＲＰ（配列番号：３）であり、かつｍは７であり、
・ ＸはＭＢＰ（配列番号：４）であり、かつｍは６であり、
・ ＸはＭＯＧ（配列番号：５）であり、かつｍは５であり、
・ ＸはＰＬＰ（配列番号：６）であり、かつｍは８であり、
・ ＸはＭＢＰ１３－３２（配列番号：７）であり、かつｍは１であり、
・ ＸはＭＢＰ８３－９９（配列番号：８）であり、かつｍは１であり、
・ ＸはＭＢＰ１１１－１２９（配列番号：９）であり、かつｍは１であり、
・ ＸはＭＢＰ１４６－１７０（配列番号：１０）であり、かつｍは２であり、
・ ＸはＭＯＧ１－２０（配列番号：１１）であり、かつｍは１であり、
・ ＸはＭＯＧ３５－５５（配列番号：１２）であり、かつｍは２であり、
・ ＸはＰＬＰ１３９－１５４（配列番号：１３）であり、かつｍは３であり、
・ ＸはＭＡＲＴ１（配列番号：１４）であり、かつｍは４であり、
・ Ｘはチロシナーゼ（配列番号：１５）であり、かつｍは８であり、
・ ＸはＰＭＥＬ（配列番号：１６）であり、かつｍは５であり、
・ Ｘはアクアポリン４（配列番号：１７）であり、かつｍは４であり、
・ ＸはＳ－アレスチン（配列番号：１８）であり、かつｍは１２であり、
・ ＸはＩＲＢＰ（配列番号：１９）であり、かつｍは２１であり、
・ Ｘはコンアラキンであり、かつｍは２１であり、
・ Ｘは天然型アルファ－グリアジン“３３－ｍｅｒ”（配列番号：２０）であり、かつｍは１であり、
・ Ｘは脱アミド化アルファ－グリアジン“３３－ｍｅｒ”（配列番号：２１）であり、かつｍは１であり、
・ Ｘはアルファ－グリアジン（配列番号：２２）であり、かつｍは１であり、
・ Ｘはオメガ－グリアジン（配列番号：２３）であり、かつｍは１であり、
・ ＸはＦｅｌ ｄ １であり、かつｍは４であり、
・ Ｘはネコアルブミンであり、かつｍは１６であり、
・ ＸはＣａｎ ｆ １であり、かつｍは６であり、
・ Ｘはイヌアルブミンであり、かつｍは２３であり、かつ
・ ＸはＲｈＣＥであり、かつｍは１０である。
１Ｅ． 式１ａＡの他の化合物
実施例１Ｃに記載される手順に従い、かつ式１０３’の化合物を置換することにより、例えば、実施例１Ｄで得られるように、式１ａＡの以下の対応する化合物が得られる：
・ Ｆ１ａＡ－アブシキシマブ－ｍ１０－ｎ８０、
・ Ｆ１ａＡ－アダリムマブ－ｍ１１－ｎ８０、
・ Ｆ１ａＡ－アガルシダーゼアルファ－ｍ１４－ｎ８０、
・ Ｆ１ａＡ－アガルシダーゼベータ－ｍ１４－ｎ８０、
・ Ｆ１ａＡ－アルデスロイキン－ｍ６－ｎ８０、
・ Ｆ１ａＡ－アルグルコシダーゼアルファ－ｍ１３－ｎ８０、
・ Ｆ１ａＡ－第ＶＩＩＩ因子－ｍ１００－ｎ８０、
・ Ｆ１ａＡ－第ＩＸ因子－ｍ１８－ｎ８０、
・ Ｆ１ａＡ－Ｌ－アスパラギナーゼ－ｍ５－ｎ８０、
・ Ｆ１ａＡ－ラロニダーゼ－ｍ７－ｎ８０、
・ Ｆ１ａＡ－オクトレオチド－ｍ１－ｎ８０、
・ Ｆ１ａＡ－フェニルアラニンアンモニアリアーゼ－ｍ１２－ｎ８０、
・ Ｆ１ａＡ－ラスブリカーゼ－ｍ１２－ｎ８０、
・ Ｆ１ａＡ－インスリン－ｍ２－ｎ８０、
・ Ｆ１ａＡ－ＧＡＤ－６５－ｍ８－ｎ８０、
・ Ｆ１ａＡ－ＩＧＲＰ－ｍ７－ｎ８０、
・ Ｆ１ａＡ－ＭＢＰ－ｍ６－ｎ８０、
・ Ｆ１ａＡ－ＭＯＧ－ｍ５－ｎ８０、
・ Ｆ１ａＡ－ＰＬＰ－ｍ８－ｎ８０、
・ Ｆ１ａＡ－ＭＢＰ１３－３２－ｍ１－ｎ８０、
・ Ｆ１ａＡ－ＭＢＰ８３－９９－ｍ１－ｎ８０、
・ Ｆ１ａＡ－ＭＢＰ１１１－１２９－ｍ１－ｎ８０、
・ Ｆ１ａＡ－ＭＢＰ１４６－１７０－ｍ２－ｎ８０、
・ Ｆ１ａＡ－ＭＯＧ１－２０－ｍ１－ｎ８０、
・ Ｆ１ａＡ－ＭＯＧ３５－５５－ｍ２－ｎ８０、
・ Ｆ１ａＡ－ＰＬＰ１３９－１５４－ｍ３－ｎ８０、
・ Ｆ１ａＡ－ＭＡＲＴ１－ｍ４－ｎ８０、
・ Ｆ１ａＡ－チロシナーゼ－ｍ８－ｎ８０、
・ Ｆ１ａＡ－ＰＭＥＬ－ｍ５－ｎ８０、
・ Ｆ１ａＡ－アクアポリン４－ｍ４－ｎ８０、
・ Ｆ１ａＡ－Ｓ－アレスチン－ｍ１２－ｎ８０、
・ Ｆ１ａＡ－ＩＲＢＰ－ｍ２１－ｎ８０、
・ Ｆ１ａＡ－コンアラキン－ｍ２１－ｎ８０、
・ Ｆ１ａＡ－天然型アルファ－グリアジン“３３－ｍｅｒ”－ｍ１－ｎ８０、
・ Ｆ１ａＡ－脱アミド化アルファ－グリアジン“３３－ｍｅｒ”－ｍ１－ｎ８０、
・ Ｆ１ａＡ－アルファ－グリアジン－ｍ１－ｎ８０、
・ Ｆ１ａＡ－オメガ－グリアジン－ｍ１－ｎ８０、
・ Ｆ１ａＡ－Ｆｅｌ ｄ １－ｍ４－ｎ８０、
・ Ｆ１ａＡ－ネコアルブミン－ｍ１６－ｎ８０、
・ Ｆ１ａＡ－Ｃａｎ ｆ １－ｍ６－ｎ８０、
・ Ｆ１ａＡ－イヌアルブミン－ｍ２３－ｎ８０、および
・ Ｆ１ａＡ－ＲｈＣＥ－ｍ１０－ｎ８０。
１Ｆ． 式１０６Ａの他の化合物
実施例１Ｂに記載される手順に従い、かつピリジルジチオール－ポリ（エチレングリコール）－ＮＨＳエステル（ｎが８０である式１０４）を以下に置換することにより：
・ ｎが１２である式１０４
・ ｎが３３である式１０４
・ ｎが４０である式１０４
・ ｎが４３である式１０４
・ ｎが５０である式１０４
・ ｎが６０である式１０４
・ ｎが７５である式１０４、および
・ ｎが８０である式１０４、
式１０６Ａの以下の対応する化合物が得られ、ここで：
・ ｎは１２であり、
・ ｎは３３であり、
・ ｎは４０であり、
・ ｎは４３であり、
・ ｎは５０であり、
・ ｎは６０であり、
・ ｎは７５であり、および
・ ｎは８４である。
１Ｇ． 式１ａＡの他の化合物
実施例１Ｅに記載される手順に従い、かつ式１０６Ａの化合物を実施例１Ｆで得られた化合物に置換することにより、式１ａＡの対応する化合物が得られる、ここでｎは１２、３３、４０、４３、５０、６０、７５および８４であり：
・ Ｆ１ａＡ－インスリン－ｍ２－ｎ１２、
・ Ｆ１ａＡ－インスリン－ｍ２－ｎ３３、
・ Ｆ１ａＡ－インスリン－ｍ２－ｎ４０、
・ Ｆ１ａＡ－インスリン－ｍ２－ｎ４３、
・ Ｆ１ａＡ－インスリン－ｍ２－ｎ５０、
・ Ｆ１ａＡ－インスリン－ｍ２－ｎ６０、
・ Ｆ１ａＡ－インスリン－ｍ２－ｎ７５、および
・ Ｆ１ａＡ－インスリン－ｍ２－ｎ８４などである。
１Ｈ． 式１ａＡの他の化合物
同様に、実施例１Ａ－Ｇに記載される手順に従い、かつグルコサミン化合物をガラクトサミンに置換することにより、Ｚ’がＣ２グルコサミンである式１ａＡの対応する化合物が得られる。
実施例２
Ｆ１ｂ－ＯＶＡ－ｍ１－ｎ４－ｐ３４－２ＮＡｃＧＡＬ
２Ａ． Ｘ’はオボアルブミンであり、かつｍは１である式１０３’
エンドトキシンフリーのチューブにおいて、ＯＶＡ（６．５ｍｇ、０．０００１５５ｍｍｏｌ）を、５ｍＭ ＥＤＴＡを含有する２００μｌのｐＨ８．０ ＰＢＳに加え、撹拌した。別々に、１ｍｇのトラウト試薬を１００μｌのｐＨ７．０ ＰＢＳに溶解し、かつ４３μｌ（０．００３１０ｍｍｏｌ）のこのようにして得られるトラウト試薬溶液を、撹拌を続けてＯＶＡの撹拌溶液に加えた。１時間後、式１０３’の産物を得るために遠心性サイズ排除カラムを使って未反応のトラウト試薬を除去した。
２Ｂ． Ｘ’がオボアルブミンであり、ｍが１であり、ｎが４であり、ｐが３４であり、Ｒ９が直接結合であり、かつＺ”が２ＮＡｃＧＡＬである式１ｂ
微小遠心チューブにおいて、ポリ（ガラクトサミンメタクリル酸）－（ピリジルジスルフィド）（式２０１）（２０．０ｍｇ、０．００２０ｍｍｏｌ）を５ｍＭ ＥＤＴＡを含有する５０μｌのｐＨ８．０ ＰＢＳにおいて可溶化した。これに、実施例２Ａ由来の精製ＯＶＡ－トラウト産物を加え、それに続いて１時間撹拌した。反応混合物を通過させることにより、遠心性サイズ排除カラムから得られる式１ｂの産物を精製した。特性評価（ＵＨＰＬＣ ＳＥＣ、ゲル電気泳動）で産物の正体を確認した。（図５を参照されたい。）
２Ｃ． 式１ｂの他の化合物
実施例２Ｂに記載される手順に従い、かつ式１０３’の化合物を置換することにより、例えば実施例１Ｄにおいて得られるように、式１ｂの以下の対応する化合物が得られる：
・ Ｆ１ｂ－アブシキシマブ－ｍ１０－ｎ４－ｐ３４－２ＮＡｃＧＡＬ、
・ Ｆ１ｂ－アダリムマブ－ｍ１１－ｎ４－ｐ３４－２ＮＡｃＧＡＬ、
・ Ｆ１ｂ－アガルシダーゼアルファ－ｍ１４－ｎ４－ｐ３４－２ＮＡｃＧＡＬ、
・ Ｆ１ｂ－アガルシダーゼベータ－ｍ１４－ｎ４－ｐ３４－２ＮＡｃＧＡＬ、
・ Ｆ１ｂ－アルデスロイキン－ｍ６－ｎ４－ｐ３４－２ＮＡｃＧＡＬ、
・ Ｆ１ｂ－アルグルコシダーゼアルファ－ｍ１３－ｎ４－ｐ３４－２ＮＡｃＧＡＬ、
・ Ｆ１ｂ－第ＶＩＩＩ因子－ｍ１００－ｎ４－ｐ３４－２ＮＡｃＧＡＬ、
・ Ｆ１ｂ－第ＩＸ因子－ｍ１８－ｎ４－ｐ３４－２ＮＡｃＧＡＬ、
・ Ｆ１ｂ－Ｌ－アスパラギナーゼ－ｍ５－ｎ４－ｐ３４－２ＮＡｃＧＡＬ、
・ Ｆ１ｂ－ラロニダーゼ－ｍ７－ｎ４－ｐ３４－２ＮＡｃＧＡＬ、
・ Ｆ１ｂ－オクトレオチド－ｍ１－ｎ４－ｐ３４－２ＮＡｃＧＡＬ、
・ Ｆ１ｂ－フェニルアラニンアンモニアリアーゼ－ｍ１２－ｎ４－ｐ３４－２ＮＡｃＧＡＬ、
・ Ｆ１ｂ－ラスブリカーゼ－ｍ１２－ｎ４－ｐ３４－２ＮＡｃＧＡＬ、
・ Ｆ１ｂ－インスリン－ｍ２－ｎ４－ｐ３４－２ＮＡｃＧＡＬ、
・ Ｆ１ｂ－ＧＡＤ－６５－ｍ８－ｎ４－ｐ３４－２ＮＡｃＧＡＬ、
・ Ｆ１ｂ－ＩＧＲＰ－ｍ７－ｎ４－ｐ３４－２ＮＡｃＧＡＬ、
・ Ｆ１ｂ－ＭＢＰ－ｍ６－ｎ４－ｐ３４－２ＮＡｃＧＡＬ、
・ Ｆ１ｂ－ＭＯＧ－ｍ５－ｎ４－ｐ３４－２ＮＡｃＧＡＬ、
・ Ｆ１ｂ－ＰＬＰ－ｍ８－ｎ４－ｐ３４－２ＮＡｃＧＡＬ、
・ Ｆ１ｂ－ＭＢＰ１３－３２－ｍ１－ｎ４－ｐ３４－２ＮＡｃＧＡＬ、
・ Ｆ１ｂ－ＭＢＰ８３－９９－ｍ１－ｎ４－ｐ３４－２ＮＡｃＧＡＬ、
・ Ｆ１ｂ－ＭＢＰ１１１－１２９－ｍ１－ｎ４－ｐ３４－２ＮＡｃＧＡＬ、
・ Ｆ１ｂ－ＭＢＰ１４６－１７０－ｍ２－ｎ４－ｐ３４－２ＮＡｃＧＡＬ、
・ Ｆ１ｂ－ＭＯＧ１－２０－ｍ１－ｎ４－ｐ３４－２ＮＡｃＧＡＬ、
・ Ｆ１ｂ－ＭＯＧ３５－５５－ｍ２－ｎ４－ｐ３４－２ＮＡｃＧＡＬ、
・ Ｆ１ｂ－ＰＬＰ１３９－１５４－ｍ３－ｎ４－ｐ３４－２ＮＡｃＧＡＬ、
・ Ｆ１ｂ－ＭＡＲＴ１－ｍ４－ｎ４－ｐ３４－２ＮＡｃＧＡＬ、
・ Ｆ１ｂ－チロシナーゼ－ｍ８－ｎ４－ｐ３４－２ＮＡｃＧＡＬ、
・ Ｆ１ｂ－ＰＭＥＬ－ｍ５－ｎ４－ｐ３４－２ＮＡｃＧＡＬ、
・ Ｆ１ｂ－アクアポリン４－ｍ４－ｎ４－ｐ３４－２ＮＡｃＧＡＬ、
・ Ｆ１ｂ－Ｓ－アレスチン－ｍ１２－ｎ４－ｐ３４－２ＮＡｃＧＡＬ、
・ Ｆ１ｂ－ＩＲＢＰ－ｍ２１－ｎ４－ｐ３４－２ＮＡｃＧＡＬ、
・ Ｆ１ｂ－コンアラキン－ｍ２１－ｎ４－ｐ３４－２ＮＡｃＧＡＬ、
・ Ｆ１ｂ－天然型アルファ－グリアジン“３３－ｍｅｒ”－ｍ１－ｎ４－ｐ３４－２ＮＡｃＧＡＬ、
・ Ｆ１ｂ－脱アミド化アルファ－グリアジン“３３－ｍｅｒ”－ｍ１－ｎ４－ｐ３４－２ＮＡｃＧＡＬ、
・ Ｆ１ｂ－アルファ－グリアジン－ｍ１－ｎ４－ｐ３４－２ＮＡｃＧＡＬ、
・ Ｆ１ｂ－オメガ－グリアジン－ｍ１－ｎ４－ｐ３４－２ＮＡｃＧＡＬ、
・ Ｆ１ｂ－Ｆｅｌ ｄ １－ｍ４－ｎ４－ｐ３４－２ＮＡｃＧＡＬ、
・ Ｆ１ｂ－ネコアルブミン－ｍ１６－ｎ４－ｐ３４－２ＮＡｃＧＡＬ、
・ Ｆ１ｂ－Ｃａｎ ｆ １－ｍ６－ｎ４－ｐ３４－２ＮＡｃＧＡＬ、
・ Ｆ１ｂ－イヌアルブミン－ｍ２３－ｎ４－ｐ３４－２ＮＡｃＧＡＬ、および
・ Ｆ１ｂ－ＲｈＣＥ－ｍ１０－ｎ４－ｐ３４－２ＮＡｃＧＡＬ。
１Ｄ．式１ｂのその他の化合物
同様に、実施例２Ｂ－Ｃに記載される手順に従い、かつ化合物ポリ（グルコサミンメタクリル酸）－（ピリジルジスルフィド）またはポリ（ガラクトサミンメタクリル酸）－（ピリジルジスルフィド）を置換することにより、Ｚ”が２－ＮＡｃＧＬＵである式１ｂの対応する化合物が得られる。
実施例３
Ｆ１ｆ－ＯＶＡ－ｍ１－ｎ４－ｐ３３－２ＮＡｃＧＡＬ
３Ａ． Ｘ’がオボアルブミンであり、かつｍが１であり、ｎが４であり、ｐが３３であり、Ｒ９が直接結合であり、かつＺ”が２ＮＡｃＧＡＬである式１ｆ
エンドトキシンフリーのチューブにおいて、ＯＶＡ（４．０ｍｇ、０．００００９５２３８１ｍｍｏｌ）を、０．１ｍｌのｐＨ７．４ ＰＢＳに加え、攪拌した。別々に、ｎが４であり、かつｐが３３である式６０１のポリ－（ｎ－アセチルガラクトサミン）－ｐ－ニトロフェニル（ｎｉｔｒｏｐｈｅｎｙｏｌ）カーボネート（３３．０ｍｇ、０．００２３８０９５２ｍｍｏｌ）を１００μｌのｐＨ７．５ ＰＢＳに加え、溶解されるまでボルテックスした。２つの溶液を合わせ、当該混合物を激しく１時間撹拌した。式１ｆの産物を得るために混合物をその後収集し、ｐＨ７．４ ＰＢＳに対して３日間透析した（３０ｋＤａ分子量カットオフ）。
３Ｂ． Ｘ’はオボアルブミンであり、かつｍは１であり、ｎは４であり、ｐは３３であり、Ｒ９は直接結合であり、かつＺ”は２ＮＡｃＧＬＵである式１ｆ
同様に、実施例３Ａの手順に従い、かつポリ－（ｎ－アセチルガラクトサミン）－ｐ－ニトロフェニル（ｎｉｔｒｏｐｈｅｎｙｏｌ）カーボネートをポリ－（ｎ－アセチルグルコサミン）－ｐ－ニトロフェニル（ｎｉｔｒｏｐｈｅｎｙｏｌ）カーボネートに置換することにより、Ｚ”が２ＮＡｃＧＬＵである式１ｆの対応する化合物が得られる。
実施例４
Ｆ１ｇ－ＰＶＡ－ｍ１－ｐ９０－２ＮＡｃＧＡＬ
４Ａ． Ｘ’がオボアルブミンであり、かつｍが１であり、ｐが９０であり、Ｒ９が直接結合であり、かつＺ”が２ＮＡｃＧＡＬである式１ｇ
エンドトキシンフリーのチューブにおいて、ＯＶＡ（５．０ｍｇ、０．０００１１９０４８ｍｍｏｌ）を、０．２ｍｌのｐＨ７．４ ＰＢＳに加え、攪拌した。攪拌溶液に０．４ｍｌのｐＨ７．４ ＰＢＳにおいて溶解される７５ｍｇ（０．００２９７６１９ｍｍｏｌ）のポリ（ガラクトサミンメタクリル酸）－ＮＨＳ（式７０１）を加えた。混合物を２時間攪拌した。式１ｇの産物を得るために混合物をその後収集し、ｐＨ７．４ ＰＢＳに対して３日間透析した（３０ｋＤａ分子量カットオフ）。
４Ｂ． Ｘ’がオボアルブミンであり、かつｍが１であり、ｐが９０であり、Ｒ９が直接結合であり、かつＺ”が２ＮＡｃＧＬＵである式１ｇ
同様に、実施例４Ａの手順に従い、かつポリ（ガラクトサミンメタクリル酸）－ＮＨＳをポリ（グルコサミンメタクリル酸）－ＮＨＳに置換することにより、Ｚ”が２ＮＡｃＧＬＵである式１ｇの対応する化合物が得られる。
実施例５
Ｆ１ｈ－ＯＶＡ－ｍ２－ｎ４５－ｐ５５－ｑ４－２ＮＡｃＧＡＬ
５Ａ． Ｘ’がオボアルブミンであり、ｍが２であり、かつｎが４５である式８０２’
エンドトキシンフリーのチューブにおいて、ＯＶＡ（３．０ｍｇ、０．００００７１４２８６ｍｍｏｌ）を、５ｍＭ ＥＤＴＡを含有する１５０μｌのｐＨ８．０ ＰＢＳに加え、攪拌した。ＤＭＦにおいて溶解されるジベンゾシクロオクチン－ＰＥＧ－（ｐ－ニトロフェニルカーボネート）（式８０１）（５．２６５ｍｇ、０．００２１４２８５７ｍｍｏｌ）をＯＶＡ溶液に加え、１時間攪拌した。式８０２’の産物を得るために遠心性サイズ排除カラムを使用して過剰ジベンゾシクロオクチン－ＰＥＧ－（ｐ－ニトロフェニルカーボネート）を除去した。
５Ｂ． Ｘ’がオボアルブミンであり、ｍが２であり、ｎが４５であり、ｐが５５であり、ｑが４であり、Ｒ８がＣＨ２であり、Ｒ９が直接結合であり、かつＺ”が２ＮＡｃＧＡＬである式１ｈ
ポリ（ガラクトサミンメタクリル酸）－Ｎ３（ｐが５５であり、ｑが４であり、かつＺ”がＮ－アセチルガラクトサミンである式８０３）（３３ｍｇ、０．００２１４２８５７ｍｍｏｌ）を１００μｌのｐＨ７．４ ＰＢＳに溶解し、攪拌しながら実施例５Ａの産物に加えた。１時間後、得られる式１ｈの産物を遠心性サイズ排除クロマトグラフィーにより精製した。
５Ｃ． Ｘ’はオボアルブミンであり、ｍは２であり、ｎは４５であり、ｐは５５であり、ｑは４であり、Ｒ８はＣＨ２であり、Ｒ９は直接結合であり、かつＺ”は２ＮＡｃＧＬＵである式１ｈ
同様に、実施例５Ｂの手順に従い、かつポリ（ガラクトサミンメタクリル酸）－ＮＨＳをポリ（グルコサミンメタクリル酸）－ＮＨＳに置換することにより、Ｚ”が２ＮＡｃＧＬＵである式１ｈの対応する化合物が得られる。
実施例６
Ｆ１ｊ－ＯＶＡ－ｍ１０－ｎ４５－ｐ５５－ｑ４－２ＮＡｃＧＡＬ
６Ａ． Ｘ’がオボアルブミンであり、かつｍが１０である式１０３’
エンドトキシンフリーのチューブにおいて、ＯＶＡ（５．０ｍｇ、０．０００１９ｍｍｏｌ）を、５ｍＭ ＥＤＴＡを含有する１５０μｌのｐＨ８．０ ＰＢＳに加え、攪拌した。別々に、１ｍｇのトラウト（Ｔａｕｔ）試薬を１００μｌのｐＨ７．０ ＰＢＳに溶解し、１６μｌ（０．００１９ｍｍｏｌ）のこのようにして得られたトラウト試薬溶液を撹拌を続けてＯＶＡの撹拌溶液に加えた。１時間後、式１０３’の産物を得るために遠心性サイズ排除カラムを使用して未反応のトラウト試薬を除去した。
６Ｂ． Ｘ’がオボアルブミンであり、ｍが１０であり、かつｎが４５である式９０２”
ジベンゾシクロオクチン－ＰＥＧ－（ピリジルジスルフィド）（ｎが４５である式９０１）（６．０ｍｇ、０．００２３８ｍｍｏｌ）をＤＭＦに溶解し、得られる溶液を実施例６Ａで得られたＯＶＡ溶液に加え、１時間攪拌した。式９０２”の産物を得るために遠心性サイズ排除クロマトグラフィーを使用して過剰ジベンゾシクロオクチン－ＰＥＧ－（ピリジルジスルフィド）を除去した。
６Ｃ． Ｘ’がオボアルブミンであり、ｍが１０であり、ｎが４５であり、ｐが５５であり、ｑが４であり、Ｒ８がＣＨ２であり、Ｒ９が直接結合であり、かつＺ”が２ＮＡｃＧＡＬである式１ｊ
ポリ（ガラクトサミンメタクリル酸）－Ｎ３（ｐが５５であり、ｑが４であり、かつＺ”あＮ－アセチルガラクトサミンである式８０３）（３６ｍｇ、０．００２３８ｍｍｏｌ）を１５０μｌのｐＨ７．４ ＰＢＳに溶解し、攪拌しながら実施例６Ｂの産物に加えた。１時間後、得られる式１ｊの産物を遠心性サイズ排除クロマトグラフィーにより精製した（過剰ｐ（ＧＭＡ）－Ｎ３が除去される）。特性評価（ＵＨＰＬＣ ＳＥＣ、ゲル電気泳動）で産物の正体を確認した。
６Ｄ． Ｘ’がオボアルブミンであり、ｍが１０であり、ｎが４５であり、ｐが５５であり、ｑが４であり、Ｒ８がＣＨ２であり、Ｒ９が直接結合であり、かつＺ”が２ＮＡｃＧＬＵである式１ｊ
同様に、実施例６Ｃの手順に従い、かつポリ（ガラクトサミンメタクリル酸）－ＮＨＳをポリ（グルコサミンメタクリル酸）－ＮＨＳに置換することにより、Ｚ”が２ＮＡｃＧＬＵである式１ｊの対応する化合物が得られる。
実施例７
Ｆ１Ｌ－ＯＶＡ－ｍ２－ｎ８０－ｐ５５－ｑ４－２ＮＡｃＧＡＬ
７Ａ． Ｘ’はオボアルブミンであり、ｍは２であり、かつｎは８０である式１００２
ジベンゾシクロオクチン－ＰＥＧ－（ピリジルジスルフィド）（ｎが８０である式１００１）（９．０ｍｇ、０．００２３８ｍｍｏｌ）をＤＭＦに溶解し、得られる溶液を式１０３’の精製ＯＶＡ溶液（Ｘ’はオボアルブミンであり、かつｍは２である）に加え、例えば、実施例６Ａに記載されるように調製し、１時間攪拌した。式１００２の産物を得るために遠心性サイズ排除クロマトグラフィーを使用して過剰ジベンゾシクロオクチン－ＰＥＧ－（ピリジルジスルフィド）を除去した。
７Ｂ． Ｘ’がオボアルブミンであり、ｍが２であり、ｎが８０であり、ｐが５５であり、ｑが４であり、Ｒ８がＣＨ２であり、Ｒ９が直接結合であり、かつＺ”が２ＮＡｃＧＡＬである式１Ｌ
ポリ（ガラクトサミンメタクリル酸）－Ｎ３（ｐが５５であり、ｑが４であり、かつＺ”がＮ－アセチルガラクトサミンである式８０３）（３６ｍｇ、０．００２３８ｍｍｏｌ）を１５０μｌのｐＨ７．４ ＰＢＳに溶解し、攪拌しながら実施例７Ａの産物に加えた。１時間後、得られる式１Ｌの産物を遠心性サイズ排除クロマトグラフィーにより精製した（過剰ポリ（ガラクトサミンメタクリル酸）－Ｎ３が除去される）。特性評価（ＵＨＰＬＣ ＳＥＣ、ゲル電気泳動）で産物の正体を確認した。
７Ｃ． Ｘ’がオボアルブミンであり、ｍが２であり、ｎが８０であり、ｐが５５であり、ｑが４であり、Ｒ８がＣＨ２であり、Ｒ９が直接結合であり、かつＺ”が２ＮＡｃＧＬＵである式１Ｌ
同様に、実施例７Ｂの手順に従い、かつポリ（ガラクトサミンメタクリル酸）－ＮＨＳをポリ（グルコサミンメタクリル酸）－ＮＨＳに置換することにより、Ｚ”が２ＮＡｃＧＬＵである式１ｊＬの対応する化合物が得られる。
実施例８
ポリ（ガラクトサミンメタクリル酸）ポリマーの調製
８Ａ． ガラクトサミンメタクリル酸
攪拌されたガラクトサミン塩酸塩（２．１５ｇ、１０．０ｍｍｏｌ）に０．５Ｍナトリウムメトキシド（２２ｍｌ、１１．０ｍｍｏｌ）を加えた。３０分後、メタクリル酸無水物（１４．６９４ｇ、１１．０ｍｍｏｌ）を加え、４時間連続して攪拌した。得られるガラクトサミンメタクリル酸をロータリーエバポレーター（ｒｏｔＯＶＡｐ）を介してシリカゲルに装填し、ＤＣＭ：ＭｅＯＨ（８５：１５）を使用してカラムクロマトグラフィーを介して精製した。
８Ｂ． ｎが４であり、かつｐが３０である式２０１
ガラクトースメタクリル酸（６００ｍｇ、２．４３ｍｍｏｌ）、２－（２－（２－（２－（ピリジン－２－イルジスルファニル）エトキシ）エトキシ）エトキシ）エチル２－（（フェニルカルボノチオイル）チオ）アセテート（４４．８ｍｇ、０．０８１ｍｍｏｌ）およびＡＩＢＮ（３．１７４０８９０６９ｍｇ、０．０１６ｍｍｏｌ）をシュレンクフラスコにおいて１．５ｍｌのＤＭＦに加えた。反応混合物を４凍結融解サイクルに供し、その後７０℃で６時間攪拌した。式２０１の望ましいポリマー産物を１２ｍｌのメタノールで沈殿させ、過剰溶媒を減圧下で除去した。
８Ｃ． ｎが４であり、かつｐが３０である式２０１
同様に、実施例８Ｂの手順に従い、かつガラクトースメタクリル酸をグルコースメタクリル酸に置換することにより、対応するポリ（グルコサミンメタクリル酸）ポリマーが得られる。
実施例９
Ｆ１ａＡ－ＰＥ－ｍ３－ｎ８０の調製
９Ａ． Ｘ’がフィコエリスリンである式１０３’
エンドトキシンフリーのチューブにおいて、フィコエリスリン（“ＰＥ”）（Ｐｉｅｒｃｅから購入される）（２００μｌ、０．０００００４ｍｍｏｌ）を、５ｍＭ ＥＤＴＡを含有する５０μｌのｐＨ８．０ ＰＢＳに加え、攪拌した。別々に、１ｍｇのトラウト（Ｔａｕｔ）試薬を１００μｌのｐＨ７．０ ＰＢＳに溶解し、２μｌ（０．０００１３ｍｍｏｌ）のこのようにして得られたトラウト試薬溶液を撹拌を続けてＰＥの攪拌溶液に加えた。１時間後、式１０３’の産物を得るために遠心性サイズ排除カラムを使用して過剰トラウト試薬を除去した。
９Ｂ． ｎが８０である式１０６Ａ
エンドトキシンフリーのチューブにおいて、ガラクトサミン（７．０ｍｇ、０．０３２４６ｍｍｏｌ）を５ｍＭ ＥＤＴＡを含有する１００μｌのｐＨ８．０ ＰＢＳにおいて攪拌しながら溶解させた。５０μｌのｐＨ７．０ ＰＢＳにおいて溶解されるピリジルジチオール－ポリ（エチレングリコール）－ＮＨＳエステル（ｎが８０である式１０４）（１６．２３ｍｇ、０．００４６４ｍｍｏｌ）をガラクトサミンの攪拌溶液に加えた。１時間後、得られる式１０６Ａの産物をさらに精製せずに使用するよう準備した。
９Ｃ． Ｘ’がフィコエリスリンであり、ｍが３であり、ｎが８０であり、かつＺ’がガラクトサミンである式１ａ
実施例９Ａにおいて調製された精製ＰＥ－トラウトコンジュゲートに実施例９Ｂにおいて調製された式１０６Ａの攪拌産物を直接加えた。１時間後、得られる式１ａの産物を、反応混合物を遠心性サイズ排除カラムに通すことにより精製した。特性評価（ＵＨＰＬＣ ＳＥＣ、ゲル電気泳動）で産物の正体を確認した。
９Ｄ． Ｘ’がフィコエリスリンであり、ｍが３であり、ｎが８０であり、かつＺ’がグルコサミンである式１ａ
同様に、実施例９ＢおよびＣの手順に従い、かつガラクトサミンをグルコサミンに置換することにより、Ｚ”がグルコサミンである式１ａの対応する化合物が得られる。
実施例１０
肝臓の分布
１０Ａ． 例えば、実施例９に記載されるようにＦ１ａＡ－ＰＥ－ｍ３－ｎ８０を調製した。無菌の生理食塩水において３０μｇ／１００μｌ溶液を注射のために調製した。
Ｃ５７ ｂｌａｃｋ ６マウスの３つの群うちの１つ（群当たり３）に尾静脈注射を介して、Ｆ１ａＡ－ＰＥ－ｍ３－ｎ８０溶液（３０μｇ）を投与した。２つのマウスの他の群は、１００μｌの生理食塩水または生理食塩水媒体において等量のフィコエリトリンを受けた。投与後３時間、これらの動物の肝臓および脾臓を収集し、これらの臓器における細胞蛍光のレベルを、細胞ＰＥ含量の指標として、フローサイトメトリーにより決定した。
図１Ａ－１Ｄに示されるように、Ｆ１ａＡ－ＰＥ－ｍ３－ｎ８０で処置されたマウスの肝臓からの類洞内皮細胞（ＬＳＥＣ）（１Ａ）、肝細胞（１Ｃ）、クッパー細胞（ＫＣ）（１Ｂ）、およびその他の抗原提示細胞（ＡＰＣ）（１Ｄ）はＰＥ溶液を受けた動物と比較して蛍光において少なくとも３倍の増加を示した。３群から収集された脾臓細胞において、蛍光における検出可能な差異は見出されなかった。これらの結果は、Ｆ１ａＡ－ＰＥ－ｍ３－ｎ８０が、肝臓における抗原提示細胞に結合するのに十分な特異性を有することを確認する。
１０Ｂ． 実施例１０Ａに記載される手順に従い、かつＦ１ａＡ－ＰＥ－ｍ３－ｎ８０を化合物Ｆ１ｂ－ＰＥ－ｍ３－ｎ４－ｐ３４－２ＮＡｃＧＡＬ、Ｆ１ｆ－ＰＥ－ｍ３－ｎ４－ｐ３３－２ＮＡｃＧＡＬ、Ｆ１ｇ－ＰＥ－ｍ３－ｐ９０－２ＮＡｃＧＡＬ、Ｆ１ｈ－ＰＥ－ｍ３－ｎ４５－ｐ５５－ｑ４－２ＮＡｃＧＡＬ、Ｆ１ｊ－ＰＥ－ｍ３－ｎ４５－ｐ５５－ｑ４－２ＮＡｃＧＡＬ、Ｆ１Ｌ－ＰＥ－ｍ３－ｎ８０－ｐ５５－ｑ４－２ＮＡｃＧＡＬ、Ｆ１ｍ－ＰＥ－ｍ３－ｎ８０－ｐ３０－ｑ４－ＣＭＰ－２ＮＨＡｃ、Ｆ１ｍ－ＰＥ－ｍ３－ｎ６２－ｐ３０－ｑ８－ＣＭＰ－２ＯＨ、Ｆ１ｎ－ＰＥ－ｍ３－ｎ１－ｐ３０－ｑ４－ＣＭＰ－２ＮＨＡｃおよびＦ１ｎ－ＰＥ－ｍ３－ｎ３３－ｐ３０－ｑ８－ＣＭＰ－２ＯＨに置換することにより、例えば、実施例２Ｂ、３、４、５Ｂ、６Ｂ、７Ｂ、１５Ｇ、１５Ｌ、１６Ｂおよび１６ＦにおけるＸの置換により実施例９に関して記載されるように調製される、それぞれ化合物Ｆ１ｂ－ＰＥ－ｍ３－ｎ４－ｐ３４－２ＮＡｃＧＡＬ、Ｆ１ｆ－ＰＥ－ｍ３－ｎ４－ｐ３３－２ＮＡｃＧＡＬ、Ｆ１ｇ－ＰＥ－ｍ３－ｐ９０－２ＮＡｃＧＡＬ、Ｆ１ｈ－ＰＥ－ｍ３－ｎ４５－ｐ５５－ｑ４－２ＮＡｃＧＡＬ、Ｆ１ｊ－ＰＥ－ｍ３－ｎ４５－ｐ５５－ｑ４－２ＮＡｃＧＡＬ、Ｆ１Ｌ－ＰＥ－ｍ３－ｎ８０－ｐ５５－ｑ４－２ＮＡｃＧＡＬ、Ｆ１ｍ－ＰＥ－ｍ３－ｎ８０－ｐ３０－ｑ４－ＣＭＰ－２ＮＨＡｃ、Ｆ１ｍ－ＰＥ－ｍ３－ｎ６２－ｐ３０－ｑ８－ＣＭＰ－２ＯＨ、Ｆ１ｎ－ＰＥ－ｍ３－ｎ１－ｐ３０－ｑ４－ＣＭＰ－２ＮＨＡｃおよびＦ１ｎ－ＰＥ－ｍ３－ｎ３３－ｐ３０－ｑ８－ＣＭＰ－２ＯＨと化合物Ｆ１ａＡ－ＰＥ－ｍ３－ｎ８０が、肝臓における抗原提示細胞に結合するのに十分な特異性を有することが確認される。
１０Ｃ． 実施例１０Ａおよび１０Ｂに記載される手順に従い、かつガラクトシル化化合物を対応するグルコシル化化合物に置換することにより、グルコシル化（ｇｌｕｃｏｌｓｙｌａｔｅｄ）化合物が、肝臓における抗原提示細胞に結合するのに十分な特異性を有することが確認される。
実施例１１
抗原特異的ＯＴ１ ＣＤ８＋Ｔ細胞の増殖
１１Ａ． 例えば、実施例１に記載される合成Ｆ１ａＡ－ＯＶＡ－ｍ４－ｎ８０を注射のための１０μｇ／１００μｌ生理食塩水溶液として調製した。０日目に、１０６ ＯＴ－Ｉ Ｔ細胞を蛍光標識し、ＣＤ４５．２マウス（群あたり５）の３群に尾静脈注射を介して養子移入した。翌日（すなわち１日目）、それぞれ３群のマウスに尾静脈注射を介してそれぞれ、１０μｇのＦ１ａＡ－ＯＶＡ－ｍ４－ｎ８０、ＯＶＡまたは生理食塩水を投与した。６日目に、動物を屠殺し、脾臓増殖性ＯＴ－Ｉ細胞の割合を蛍光活性化細胞選別を介して決定した。
この研究の結果（図２を参照されたい）は、Ｆ１ａＡ－ＯＶＡ－ｍ４－ｎ８０（図２における“Ｇａｌ－ＯＶＡ”）で処置されたマウスにおける増殖性ＯＴＩ Ｔ細胞の割合がＯＶＡまたは生理食塩水（図２における“ナイーブ”）で処置されたマウスの脾臓における増殖性ＯＴＩ細胞の割合より有意に大きいことを示す。ＯＴＩ細胞－増殖における増加は、その他の治療法に対してＦ１ａＡ－ＯＶＡ－ｍ４－ｎ８０で処置された動物における増加したＣＤ８＋Ｔ細胞クロスプライミングを実証する。実施例１２の結果に応じて、これらの結果は、抗原を肝臓に標的化するＦ１ａＡ－ＯＶＡ－ｍ４－ｎ８０の能力がＯＶＡ特異的ＯＴＩ Ｔ細胞への肝臓における抗原提示細胞によるＯＶＡ提示を増加させることを示す。
１１Ｂ． 拡張および除去されているものから機能的なエフェクター表現型に拡張されているＴ細胞を区別するために、増殖性ＯＴＩ ＣＤ８＋Ｔ細胞をアポトーシスひいては欠失の特徴としてアネキシン－Ｖ結合を介することによるホスファチジルセリン曝露並びに疲弊マーカーｐｒｏｇｒａｍｍｅｄ ｄｅａｔｈ－１（ＰＤ－１）について解析した，。図３Ａ－３Ｂに示されるように、Ｆ１ａＡ－ＯＶＡ－ｍ４－ｎ８０（図３Ａ－３Ｂにおける“Ｇａｌ－ＯＶＡ”）は、可溶性ＯＶＡよりはるかに多い数のアネキシン－Ｖ＋およびＰＤ－１＋増殖性ＯＴＩ ＣＤ８＋Ｔ細胞を誘導した。これらのデータは、本明細書で開示される幾つかの実施形態に従って、寛容が誘導される抗原を本明細書で開示されるリンカーおよび肝臓標的化部分に結合させることが、免疫学的に機能的な能力を有するＴ細胞の意外にも増強した世代をもたらすことを実証する。
１１Ｃ． 実施例１１Ａおよび１１Ｂに記載される手順に従い、かつＦ１ａＡ－ＯＶＡ－ｍ４－ｎ８を例えば、実施例３Ａ、４Ａ、５Ｂ、６Ｃ、７Ｂおよび１９Ｇに記載される、得られる式１の化合物に置換することにより、実施例３Ａ、４Ａ、５Ｂ、６Ｃ、７Ｂおよび１９Ｇからの化合物が可溶性ＯＶＡよりはるかに多い数のアネキシン－Ｖ＋およびＰＤ－１＋増殖性ＯＴＩ ＣＤ８＋Ｔ細胞を誘導することが示されます。
１１Ｄ． 実施例１１Ａおよび１１Ｂに記載される手順に従い、かつＦ１ａＡ－ＯＶＡ－ｍ４－ｎ８を例えば、実施例１Ｅ、１Ｇ、２Ｃ、１５Ｉ、１５Ｌ、１６Ｂ、１６Ｄおよび１６Ｆに記載される、得られた式１および２の化合物に置換することにより、かつＯＶＡをそれぞれＸに対応する抗原（またはＸ’またはＸ”）に置換することにより、実施例１Ｅ、１Ｇ、２Ｃ、１５Ｉ、１５Ｌ、１６Ｂ、１６Ｄおよび１６Ｆからの化合物が、可溶性抗原Ｘよりはるかに多い数のアネキシン－Ｖ＋およびＰＤ－１＋増殖性ＯＴＩ ＣＤ８＋Ｔ細胞を誘導することが示される。
１１Ｅ． 実施例１１Ａ－Ｄに記載される手順に従い、かつガラクトシル化化合物を対応するグルコシル化化合物に置換することにより、グルコシル化（ｇｌｕｃｏｌｓｙｌａｔｅｄ）化合物が可溶性抗原Ｘよりはるかに多い数のアネキシン－Ｖ＋およびＰＤ－１＋増殖性ＯＴＩ ＣＤ８＋Ｔ細胞を誘導することが確認される。
実施例１２
Ｆ１ａＡ－ＯＶＡ－ｍ４－ｎ８はＯＶＡ特異的抗体応答を誘導しない
１２Ａ． Ｆ１ａＡ－ＯＶＡ－ｍ４－ｎ８に対する体液性免疫応答を評価するために、我々は、Ｆ１ａＡ－ＯＶＡ－ｍ４－ｎ８またはＯＶＡのいずれかの毎週のｉ．ｖ．注射でマウスを処置し、血液中のＯＶＡ特異的抗体のレベルを測定した。実験の０、７、および１４日目に、マウスに以下の１つを含有する１００μｌの生理食塩水のｉ．ｖ．注射を投与した：１．）６μｇのＯＶＡ；２．）６μｇのＦ１ａＡ－ＯＶＡ－ｍ４－ｎ８；３．）３０μｇのＯＶＡ；４．）３０μｇのＦ１ａＡ－ＯＶＡ－ｍ４－ｎ８、または５．）生理食塩水単独。それぞれの群は５マウスを含有した。１９日目に、頬の穿刺を介してマウスから採血し、それぞれのマウスの血液におけるＯＶＡ特異的抗体の力価をＥＬＩＳＡを介して決定した。この研究の結果は、を示す ６および３０μｇのＯＶＡで処置されたマウスは増加したＯＶＡ特異的抗体力価を有するが、６および３０μｇのＦ１ａＡ－ＯＶＡ－ｍ４－ｎ８（図４における“Ｇａｌ－ＯＶＡ”）の両方で処置されたマウスは生理食塩水で処置されたマウス（すなわちビヒクル治療動物）と同様の血液力価を有していた（図４）。例えば、６および３０μｇのＯＶＡで処置されたマウスはそれぞれ３．５および２．５の平均抗体力価を有し；一方で、６および３０μｇのＯＶＡで処置されたマウスはそれぞれ０．７５および０．２５の平均抗体力価を有していた。従って、これらのデータは、免疫寛容が望まれる抗原を本明細書で開示される幾つかの実施形態に記載のリンカーおよび肝臓標的化部分に結合させることが有意に少ない抗原特異的抗体生成をもたらすことを実証する。このように、これらのデータは、本明細書で開示される組成物により、肝臓に送達される抗原への免疫応答が低減されることを実証する。
１２Ｂ． 実施例１２Ａに記載される手順に従い、かつＦ１ａＡ－ＯＶＡ－ｍ４-ｎ８を例えば、実施例３Ａ、４Ａ、５Ｂ、６Ｃ、７Ｂおよび１５Ｇに記載される、得られた式１の化合物に置換することにより、実施例３Ａ、４Ａ、５Ｂ、６Ｃ、７Ｂおよび１５Ｇからの化合物で処置されたマウスが生理食塩水で処置されたマウスと同様のＯＶＡ特異的抗体力価を有することが示される。
１２Ｃ． 実施例１２Ｂに記載される手順に従い、かつＦ１ａＡ－ＯＶＡ－ｍ４-ｎ８を例えば、実施例１Ｅ、１Ｇ、２Ｃ、１５Ｉ、１５Ｌ、１６Ｂ、１６Ｄおよび１６Ｆに記載される、得られた式１の化合物に置換することにより、かつＯＶＡをそれぞれＸ（またはＸ’またはＸ”）に対応する抗原に置換することにより、実施例１Ｅ、１Ｇ、２Ｃ、１５Ｉ、１５Ｌ、１６Ｂ、１６Ｄおよび１６Ｆからの化合物で処置されたマウスが生理食塩水で処置されたマウスと同様の抗原Ｘ－特異的抗体力価を有することが示される。
１２Ｄ． 実施例１２Ａ－Ｃに記載される手順に従い、かつガラクトシル化化合物を対応するグルコシル化化合物に置換することにより、グルコシル化（ｇｌｕｃｏｌｓｙｌａｔｅｄ）化合物が、生理食塩水で処置されたマウスと同様の抗原Ｘ－特異的抗体力価を有することが確認される。
実施例１３
Ｆ１ａＡ－ＯＶＡ－ｍ４－ｎ８は、ＯＶＡ特異的抗体を枯渇させる
１３Ａ． 異なるＯＶＡ－抗体血液力価を有するマウス（それぞれのマウスは０から０．５の力価を有する）を１００μｌ生理食塩水において可溶化した２０μｇのＦ１ａＡ－ＯＶＡ－ｍ４－ｎ８のｉ．ｖ．注射で処置した。マウスに０、５、７、１２、および１４日目にＦ１ａＡ－ＯＶＡ－ｍ４－ｎ８のｉ．ｖ．注射が与えた（Ｆ１ａＡ－ＯＶＡ－ｍ４－ｎ８の注射は“Ｇａｌ－ＯＶＡ”として標識され、図５のｘ軸上に緑矢印として示される）。血清ＯＶＡ特異的抗体を枯渇させるＦ１ａＡ－ＯＶＡ－ｍ４－ｎ８の能力を決定するために、－１日目にマウスから初期抗体力価を確立するために採血し、その後引き続いて、２、６、９、１３、および１６日目に、それぞれのＦ１ａＡ－ＯＶＡ－ｍ４－ｎ８の注射後に採血を実施した。それぞれのマウスについての抗体力価はＥＬＩＳＡを介して決定した。この研究の結果は、Ｆ１ａＡ－ＯＶＡ－ｍ４－ｎ８が、マウスにおける血清抗体レベルを枯渇できることを示す。例えば、第一のＦ１ａＡ－ＯＶＡ－ｍ４－ｎ８注射後１日（すなわち２日）に、陽性ＯＶＡ－抗体力価経験を有するマウスは血清抗体レベルにおいて５から１００倍減少する（図５）。これらの結果は、１９日の実験の過程にわたって、ある特定のマウスについて抗体力価は増加したにもかかわらず、力価レベルは、－１日目に測定される初期の抗体力価に決して達せず、引き続くＦ１ａＡ－ＯＶＡ－ｍ４－ｎ８の用量は、抗体力価におけるこれらの一過性の増加を減少させる際に有効であることを示す。これらの結果は、Ｆ１ａＡ－ＯＶＡ－ｍ４－ｎ８は、血清ＯＶＡ－特異的抗体に結合する特異性を有すること、およびＯＶＡ－特異的な血清抗体を枯渇させるのに必要とされる動態（動態）を有することを実証する。
１３Ｂ． 実施例１３Ａに記載される手順に従い、かつＦ１ａＡ－ＯＶＡ－ｍ４－ｎ８を例えば、実施例３Ａ、４Ａ、５Ｂ、６Ｃ、７Ｂおよび１５Ｇに記載される、得られた式１の化合物に置換することにより、実施例３Ａ、４Ａ、５Ｂ、６Ｃ、７Ｂおよび１５Ｇからの化合物が、血清ＯＶＡ特異的抗体に結合する特異性およびＯＶＡ特異的血清抗体を枯渇させるのに必要とされる動態を有することが示される。
１３Ｃ． 実施例１３Ａに記載される手順に従い、かつＦ１ａＡ－ＯＶＡ－ｍ４－ｎ８を例えば、実施例１Ｅ、１Ｇ、２Ｃ、１０Ｄ、１５Ｉ、１５Ｌ、１６Ｂ、１６Ｄおよび１６Ｆに記載される、得られた式１の化合物に置換することにより、かつＯＶＡをそれぞれＸ（またはＸ’またはＸ”）に対応する抗原に置換することにより、実施例１Ｅ、１Ｇ、２Ｃ、１５Ｉ、１５Ｌ、１６Ｂ、１６Ｄおよび１６Ｆからの化合物が、血清抗原Ｘ－特異的抗体に結合する特異性および抗原Ｘ－特異的血清抗体を枯渇させるのに必要とされる動態を有することが示される。
１３Ｄ． 実施例１３Ａ－Ｃに記載される手順に従い、かつガラクトシル化化合物を対応するグルコシル化化合物に置換することにより、グルコシル化（ｇｌｕｃｏｌｓｙｌａｔｅｄ）化合物が、血清抗原Ｘ－特異的抗体に結合する特異性および抗原Ｘ－特異的血清抗体を枯渇させるのに必要とされる動態を有することが確認される。
実施例１４
寛容モデルへのＯＴ－１ チャレンジ
１４Ａ． 確立された寛容モデルへのＯＴＩチャレンジ（Ｌｉｕ、Ｉｙｏｄａ、ｅｔ ａｌ．，２００２）を使って、ワクチン媒介抗原チャレンジへの引き続く免疫応答を予防するＦ１ａＡ－ＯＶＡ－ｍ４－ｎ８（ｍＧａｌ－ＯＶＡ）およびＦ１ｂ－ＯＶＡ－ｍ１－ｎ４－ｐ３４（ｐＧａｌ－ＯＶＡ）の能力を非常に強い細菌由来のアジュバント（すなわちリポ多糖）を伴うチャレンジでも実証した。寛容化するために、ＯＴＩ ＣＤ８＋（ＣＤ４５．２＋）Ｔ細胞をＣＤ４５．１＋マウスに養子移入（群あたりｎ＝５マウス）後、１および６日目に、１００μｌの生理食塩水中２３３ｎｍｏｌのＦ１ａＡ－ＯＶＡ－ｍ４－ｎ８、Ｆ１ｂ－ＯＶＡ－ｍ１－ｎ４－ｐ３４または可溶性のＯＶＡのいずれかを静脈内に投与した。さらに９日後、移行Ｔ細胞の潜在的な除去を可能にするため、レシピエントマウスをその後皮内注射によりリポ多糖（ＬＰＳ）（５０ｎｇ）でアジュバントされるＯＶＡ（１０μｇ）でチャレンジした。チャレンジ後４日の流入領域リンパ節の特徴は、除去が実際に起こったか否かの決定を可能にする。
１４Ｂ． Ｆ１ａＡ－ＯＶＡ－ｍ４－ｎ８およびＦ１ｂ－ＯＶＡ－ｍ１－ｎ４－ｐ３４の静脈内投与は、ＬＰＳでの抗原チャレンジ前の未改変のＯＶＡで治療されたマウスと比較して、流入領域リンパ節におけるＯＴＩ ＣＤ８＋Ｔ細胞集団における多大な減少を引き起こし、これは除去寛容（ｄｅｌｅｔｉｏｎａｌ ｔｏｌｅｒａｎｃｅ）を示す。例えば、図６Ａ－６Ｆは、Ｆ１ａＡ－ＯＶＡ－ｍ４－ｎ８（ｍＧａｌ－ＯＶＡ）およびＦ１ｂ－ＯＶＡ－ｍ１－ｎ４－ｐ３４（ｐＧａｌ－ＯＶＡ）のいずれかで処置されたマウスからの流入領域リンパ節が、ＯＶＡ－治療されるマウスと比較して９倍超少ないＯＴＩ ＣＤ８＋Ｔ細胞、および抗原の静脈内注射を受けなかったチャレンジコントロールマウスより４３倍超少ない細胞を含有したことを示し；脾臓細胞における応答は同様であった。これらの結果はＦ１ａＡ－ＯＶＡ－ｍ４－ｎ８およびＦ１ｂ－ＯＶＡ－ｍ１－ｎ４－ｐ３４がアジュバントＯＶＡチャレンジ後のＯＶＡ特異的免疫応答を軽減したことを実証すし、従って、本明細書で開示される組成物が免疫寛容の誘導に適していることを確立する。特性評価に関して、図７は、Ｆ１ａＡ－ＯＶＡ－ｍ４－ｎ８０およびＦ１ｂ－ＯＶＡ－ｍ１－ｎ４４－ｐ３４の特性評価を示す。
１４Ｃ． 実施例１４ＡおよびＢに記載される手順に従い、かつＦ１ａＡ－ＯＶＡ－ｍ４－ｎ８およびＦ１ｂ－ＯＶＡ－ｍ１－ｎ４－ｐ３４を例えば、実施例３Ａ、４Ａ、５Ｂ、６Ｃ、７Ｂおよび１５Ｇに記載される、得られた式１の化合物に置換することにより、実施例３Ａ、４Ａ、５Ｂ、６Ｃ、７Ｂおよび１５Ｇからの化合物がアジュバントＯＶＡチャレンジ後のＯＶＡ特異的免疫応答を軽減することが示される。
１４Ｄ． 実施例１４ＡおよびＢに記載される手順に従い、かつＦ１ａＡ－ＯＶＡ－ｍ４－ｎ８およびＦ１ｂ－ＯＶＡ－ｍ１－ｎ４－ｐ３４を例えば、実施例１Ｅ、１Ｇ、２Ｃ、１５Ｉ、１５Ｌ、１６Ｂ、１６Ｄおよび１６Ｆに記載される、得られた式１の化合物に置換することにより、かつＯＶＡをそれぞれＸ（またはＸ’またはＸ”）に対応する抗原に置換することにより、実施例１Ｅ、１Ｇ、２Ｃ、１５Ｉ、１５Ｌ、１６Ｂ、１６Ｄおよび１６Ｆからの化合物がアジュバント抗原Ｘチャレンジ後の抗原Ｘ－特異的免疫応答を軽減することが示される。
１４Ｅ． 実施例１４Ａ－Ｄに記載される手順に従い、かつガラクトシル化化合物を対応するグルコシル化化合物に置換することにより、グルコシル化（ｇｌｕｃｏｌｓｙｌａｔｅｄ）化合物がアジュバント抗原Ｘチャレンジ後の抗原Ｘ－特異的免疫応答を軽減することが確認される。
実施例１５
Ｆ１ｍ－ＯＶＡ－ｍ２－ｎ８０－ｐ３０－ｑ４－ＣＭＰ－２ＮＨＡｃ
１５Ａ． Ｒ３がＮＨＡｃであり、かつＲ４がＯＨである式１１０２
Ｎ－アセチル－Ｄ－ガラクトサミン（Ｒ３がＮＨＡｃであり、かつＲ４がＯＨである式１１０１）（５ｇ、２２．６ｍｍｏｌ）を室温でクロロエタノール（２００ｍｌ）の攪拌溶液に加えた。溶液を４℃に冷却し、アセチルクロライドを、当該溶液に滴下して加えた。当該溶液を室温までし、その後７０℃に加熱した。４時間後、減圧下で未反応のクロロエタノールを除去した。１００ｍｌのエタノールを粗産物に加え、得られる溶液を２時間炭素存在下で撹拌した。溶液を濾過し、減圧下で溶媒を除去した。式１１０２の対応する産物、Ｎ－（２－（２－クロロエトキシ）－４，５－ジヒドロキシ－６－（ヒドロキシメチル）テトラヒドロ－２Ｈ－ピラン－３－イル）アセトアミドをさらに精製せずに使用した。
１５Ｂ． Ｒ３がＮＨＡｃであり、かつＲ４がＯＨである式１１０３
実施例１５Ａにおいて調製されたＮ－（２－（２－クロロエトキシ）－４，５－ジヒドロキシ－６－（ヒドロキシメチル）テトラヒドロ－２Ｈ－ピラン－３－イル）アセトアミド（２ｇ、７．４ｍｍｏｌ）をＤＭＦ（１００ｍｌ）およびアジ化ナトリウム（４ｇ、６１．５ｍｍｏｌ）の攪拌溶液に加えた。当該溶液を１２時間９０℃で加熱し、その後、濾過した。残留している溶媒を減圧下で除去し、粗産物をフラッシュクロマトグラフィー（ジクロロメタンにおいて１０％ＭｅＯＨ）を介して精製し、式１１０３の対応産物Ｎ－（２－（２－アジドエトキシ）－４，５－ジヒドロキシ－６－（ヒドロキシメチル）テトラヒドロ－２Ｈ－ピラン－３－イル）アセトアミドを与えた。
１５Ｃ． Ｒ３がＮＨＡｃであり、かつＲ４がＯＨである式１１０４
実施例１５Ｂにおいて調製されたＮ－（２－（２－アジドエトキシ）－４，５－ジヒドロキシ－６－（ヒドロキシメチル）テトラヒドロ－２Ｈ－ピラン－３－イル）アセトアミド（２ｇ、６．９ｍｍｏｌ）をパラジウム炭素およびエタノールの溶液（５０ｍｌ）に加えた。当該溶液を水素ガス（３気圧）のもとで４時間撹拌した。得られる溶液を濾過し、残留している溶媒を減圧下で除去し、式１１０４の対応産物、Ｎ－（２－（２－アミノエトキシ）－４，５－ジヒドロキシ－６－（ヒドロキシメチル）テトラヒドロ－２Ｈ－ピラン－３－イル）アセトアミドを得、さらに精製せずに使用した。
１５Ｄ． Ｒ３がＮＨＡｃであり、かつＲ４がＯＨである式１１０５
実施例１５Ｃにおいて調製されたＮ－（２－（２－アミノエトキシ）－４，５－ジヒドロキシ－６－（ヒドロキシメチル）テトラヒドロ－２Ｈ－ピラン－３－イル）アセトアミド（１．０ｇ、３．７８ｍｍｏｌ）をＤＭＦ（５０ｍｌ）におけるメタクリル酸無水物の溶液（０．５８３ｇ、３．７８ｍｍｏｌ）に加えた。トリエチルアミンをその後当該溶液に加えて、反応液を２時間室温で撹拌した。２時間後、過剰溶媒を減圧下で除去し、式１１０５の対応産物、Ｎ－（２－（（３－アセトアミド－４，５－ジヒドロキシ－６－（ヒドロキシメチル）テトラヒドロ－２Ｈ－ピラン－２－イル）オキシ）エチル）メタクリルアミドをフラッシュクロマトグラフィーを介して単離した。
１５Ｅ． ｐが３０であり、ｑが４であり、Ｒ３がＮＨＡｃであり、Ｒ４がＯＨであり、かつＲ８がＣＭＰである式１１０７
ｑが４である式１１０６のアジド－改変ｕＲＡＦＴ剤（２８ｍｇ）をＤＭＦにおける実施例１５Ｄにおいて調製されたＮ－（２－（（３－アセトアミド－４，５－ジヒドロキシ－６－（ヒドロキシメチル）テトラヒドロ－２Ｈ－ピラン－２－イル）オキシ）エチル）メタクリルアミド（５７９ｍｇ、１．７４ｍｍｏｌ）およびアゾビスイソブチロニトリル（２．２ｍｇ、０．０１１６ｍｍｏｌ）の溶液に加えた。反応混合物を４凍結脱気サイクルに供し、その後７０℃で攪拌した。１２時間後、ｐが３０であり、かつｑが４である式１１０７のポリマー産物を、メタノールの添加を介して反応混合物から沈殿させた。当該溶媒を、容器を傾けて固形から上清を移し、固形を収集し、残留している溶媒を、減少圧力を介して除去した。
１５Ｆ． Ｘ’がＯＶＡであり、ｍが２であり、かつｎが８０である式１１０９
オボアルブミン（５ｍｇ、０．０００１２ｍｍｏｌ）を、１００μｌのリン酸ナトリウム緩衝液（ｐＨ８．０）に加え、攪拌した。この溶液に５ｍｇの、ｎが８０である式１１０８の化合物を加えた。１時間後、未反応の式１１０８の化合物を遠心性サイズ排除クロマトグラフィーを介して溶液から除去した。式１１０９の対応産物を含有する、得られる緩衝溶液はさらに精製せずに次の反応において使用される。
１５Ｇ． Ｘ’がＯＶＡであり、ｍが２であり、ｎが８０であり、ｐが３０であり、ｑが４であり、Ｒ３がＮＨＡｃであり、かつＲ８がＣＭＰである式１ｍ
実施例１５Ｆにおいて調製された溶液を１０ｍｇの、実施例１５Ｅにおいて調製された式１１０７の産物を含有する１００μｌのリン酸ナトリウム緩衝液（ｐＨ８．０）に加えた。反応液を２時間攪拌し、その後過剰の式１１０７を遠心性サイズ排除クロマトグラフィーを介して除去し、溶液において式１ｍの対応する異性体産物を得、それをさらに精製せずに生物学的な研究において使用した。Ｒ３置換基は２ＮＨＡｃとして標記化合物の名称において示される。
１５Ｈ． 式１１０９の他の化合物
実施例１５Ｆに記載される手順に従い、かつＯＶＡを以下に置換することにより：
・ アブシキシマブ、
・ アダリムマブ、
・ アガルシダーゼアルファ、
・ アガルシダーゼベータ、
・ アルデスロイキン、
・ アルグルコシダーゼアルファ、
・ 第ＶＩＩＩ因子、
・ 第ＩＸ因子、
・ Ｌ－アスパラギナーゼ、
・ ラロニダーゼ、
・ オクトレオチド、
・ フェニルアラニンアンモニアリアーゼ、
・ ラスブリカーゼ、
・ インスリン（配列番号：１）、
・ ＧＡＤ－６５（配列番号：２）、
・ ＩＧＲＰ（配列番号：３）
・ ＭＢＰ（配列番号：４）、
・ ＭＯＧ（配列番号：５）、
・ ＰＬＰ（配列番号：６）、
・ ＭＢＰ１３－３２（配列番号：７）、
・ ＭＢＰ８３－９９（配列番号：８）、
・ ＭＢＰ１１１－１２９（配列番号：９）、
・ ＭＢＰ１４６－１７０（配列番号：１０）、
・ ＭＯＧ１－２０（配列番号：１１）、
・ ＭＯＧ３５－５５（配列番号：１２）、
・ ＰＬＰ１３９－１５４（配列番号：１３）、
・ ＭＡＲＴ１（配列番号：１４）、
・ チロシナーゼ（配列番号：１５）、
・ ＰＭＥＬ（配列番号：１６）、
・ アクアポリン４（配列番号：１７）、
・ Ｓ－アレスチン（配列番号：１８）、
・ ＩＲＢＰ（配列番号：１９）、
・ コンアラキン（ＵＮＩＰＲＯＴ Ｑ６ＰＳＵ６）、
・ 天然型アルファ－グリアジン“３３－ｍｅｒ”（配列番号：２０）、
・ 脱アミド化アルファ－グリアジン“３３－ｍｅｒ”（配列番号：２１）、
・ アルファ－グリアジン（配列番号：２２）、
・ オメガ－グリアジン（配列番号：２３）、
・ Ｆｅｌ ｄ １Ａ（ＵＮＩＰＲＯＴ Ｐ３０４３８）、
・ ネコアルブミン（ＵＮＩＰＲＯＴ Ｐ４９０６４）、
・ Ｃａｎ ｆ １（ＵＮＩＰＲＯＴ Ｏ１８８７３）、
・ イヌアルブミン（ＵＮＩＰＲＯＴ Ｐ４９８２２）、および
・ ＲｈＣＥ（ＵＮＩＰＲＯＴ Ｐ１８５７７）、
式１１０９の以下の対応する化合物が得られ、ここで、ｎは８０であり：
・ Ｘはアブシキシマブであり、かつｍは１０であり、
・ Ｘはアダリムマブであり、かつｍは１１であり、
・ Ｘはアガルシダーゼアルファであり、かつｍは１４であり、
・ Ｘはアガルシダーゼベータであり、かつｍは１４であり、
・ Ｘはアルデスロイキンであり、かつｍは６であり、
・ Ｘはアルグルコシダーゼアルファであり、かつｍは１３であり、
・ Ｘは第ＶＩＩＩ因子であり、かつｍは１００であり、
・ Ｘは第ＩＸ因子であり、かつｍは１８であり、
・ ＸはＬ－アスパラギナーゼであり、かつｍは５であり、
・ Ｘはラロニダーゼであり、かつｍは７であり、
・ Ｘはオクトレオチドであり、かつｍは１であり、
・ Ｘはフェニルアラニンアンモニアリアーゼであり、かつｍは１２であり、
・ Ｘはラスブリカーゼであり、かつｍは１２であり、
・ Ｘはインスリン（配列番号：１）であり、かつｍは２であり、
・ ＸはＧＡＤ－６５（配列番号：２）であり、かつｍは８であり、
・ ＸはＩＧＲＰ（配列番号：３）であり、かつｍは７であり、
・ ＸはＭＢＰ（配列番号：４）であり、かつｍは６であり、
・ ＸはＭＯＧ（配列番号：５）であり、かつｍは５であり、
・ ＸはＰＬＰ（配列番号：６）であり、かつｍは８であり、
・ ＸはＭＢＰ１３－３２（配列番号：７）であり、かつｍは１であり、
・ ＸはＭＢＰ８３－９９（配列番号：８）であり、かつｍは１であり、
・ ＸはＭＢＰ１１１－１２９（配列番号：９）であり、かつｍは１であり、
・ ＸはＭＢＰ１４６－１７０（配列番号：１０）であり、かつｍは２であり、
・ ＸはＭＯＧ１－２０（配列番号：１１）であり、かつｍは１であり、
・ ＸはＭＯＧ３５－５５（配列番号：１２）であり、かつｍは２であり、
・ ＸはＰＬＰ１３９－１５４（配列番号：１３）であり、かつｍは３であり、
・ ＸはＭＡＲＴ１（配列番号：１４）であり、かつｍは４であり、
・ Ｘはチロシナーゼ（配列番号：１５）であり、かつｍは８であり、
・ ＸはＰＭＥＬ（配列番号：１６）であり、かつｍは５であり、
・ Ｘはアクアポリン４（配列番号：１７）であり、かつｍは４であり、
・ ＸはＳ－アレスチン（配列番号：１８）であり、かつｍは１２であり、
・ ＸはＩＲＢＰ（配列番号：１９）であり、かつｍは２１であり、
・ Ｘはコンアラキンであり、かつｍは２１であり、
・ Ｘは天然型アルファ－グリアジン“３３－ｍｅｒ”（配列番号：２０）であり、かつｍは１であり、
・ Ｘは脱アミド化アルファ－グリアジン“３３－ｍｅｒ”（配列番号：２１）であり、かつｍは１であり、
・ Ｘはアルファ－グリアジン（配列番号：２２）であり、かつｍは１であり、
・ Ｘはオメガ－グリアジン（配列番号：２３）であり、かつｍは１であり、
・ ＸはＦｅｌ ｄ １であり、かつｍは４であり、
・ Ｘはネコアルブミンであり、かつｍは１６であり、
・ ＸはＣａｎ ｆ １であり、かつｍは６であり、
・ Ｘはイヌアルブミンであり、かつｍは２３であり、かつ
・ ＸはＲｈＣＥであり、かつｍは１０である。
１５Ｉ． 式１ｍの他の化合物
実施例１５Ｇに記載される手順に従い、かつ式１１０９の化合物を置換することにより、例えば、実施例１５Ｈで得られるように、式１ｍの以下の対応する化合物が得られる：
・ Ｆ１ｍ－アブシキシマブ－ｍ１０－ｎ８０－ｐ３０－ｑ４－ＣＭＰ－２ＮＨＡｃ、
・ Ｆ１ｍ－アダリムマブ－ｍ１１－ｎ８０－ｐ３０－ｑ４－ＣＭＰ－２ＮＨＡｃ、
・ Ｆ１ｍ－アガルシダーゼアルファ－ｍ１４－ｎ８０－ｐ３０－ｑ４－ＣＭＰ－２ＮＨＡｃ、
・ Ｆ１ｍ－アガルシダーゼベータ－ｍ１４－ｎ８０－ｐ３０－ｑ４－ＣＭＰ－２ＮＨＡｃ、
・ Ｆ１ｍ－アルデスロイキン－ｍ６－ｎ８０－ｐ３０－ｑ４－ＣＭＰ－２ＮＨＡｃ、
・ Ｆ１ｍ－アルグルコシダーゼアルファ－ｍ１３－ｎ８０－ｐ３０－ｑ４－ＣＭＰ－２ＮＨＡｃ、
・ Ｆ１ｍ－第ＶＩＩＩ因子－ｍ１００－ｎ８０－ｐ３０－ｑ４－ＣＭＰ－２ＮＨＡｃ、
・ Ｆ１ｍ－第ＩＸ因子－ｍ１８－ｎ８０－ｐ３０－ｑ４－ＣＭＰ－２ＮＨＡｃ、
・ Ｆ１ｍ－Ｌ－アスパラギナーゼ－ｍ５－ｎ８０－ｐ３０－ｑ４－ＣＭＰ－２ＮＨＡｃ、
・ Ｆ１ｍ－ラロニダーゼ－ｍ７－ｎ８０－ｐ３０－ｑ４－ＣＭＰ－２ＮＨＡｃ、
・ Ｆ１ｍ－オクトレオチド－ｍ１－ｎ８０－ｐ３０－ｑ４－ＣＭＰ－２ＮＨＡｃ、
・ Ｆ１ｍ－フェニルアラニンアンモニアリアーゼ－ｍ１２－ｎ８０－ｐ３０－ｑ４－ＣＭＰ－２ＮＨＡｃ、
・ Ｆ１ｍ－ラスブリカーゼ－ｍ１２－ｎ８０－ｐ３０－ｑ４－ＣＭＰ－２ＮＨＡｃ、
・ Ｆ１ｍ－インスリン－ｍ２－ｎ８０－ｐ３０－ｑ４－ＣＭＰ－２ＮＨＡｃ、
・ Ｆ１ｍ－ＧＡＤ－６５－ｍ８－ｎ８０－ｐ３０－ｑ４－ＣＭＰ－２ＮＨＡｃ、
・ Ｆ１ｍ－ＩＧＲＰ－ｍ７－ｎ８０－ｐ３０－ｑ４－ＣＭＰ－２ＮＨＡｃ、
・ Ｆ１ｍ－ＭＢＰ－ｍ６－ｎ８０－ｐ３０－ｑ４－ＣＭＰ－２ＮＨＡｃ、
・ Ｆ１ｍ－ＭＯＧ－ｍ５－ｎ８０－ｐ３０－ｑ４－ＣＭＰ－２ＮＨＡｃ、
・ Ｆ１ｍ－ＰＬＰ－ｍ８－ｎ８０－ｐ３０－ｑ４－ＣＭＰ－２ＮＨＡｃ、
・ Ｆ１ｍ－ＭＢＰ１３－３２－ｍ１－ｎ８０－ｐ３０－ｑ４－ＣＭＰ－２ＮＨＡｃ、
・ Ｆ１ｍ－ＭＢＰ８３－９９－ｍ１－ｎ８０－ｐ３０－ｑ４－ＣＭＰ－２ＮＨＡｃ、
・ Ｆ１ｍ－ＭＢＰ１１１－１２９－ｍ１－ｎ８０－ｐ３０－ｑ４－ＣＭＰ－２ＮＨＡｃ、
・ Ｆ１ｍ－ＭＢＰ１４６－１７０－ｍ２－ｎ８０－ｐ３０－ｑ４－ＣＭＰ－２ＮＨＡｃ、
・ Ｆ１ｍ－ＭＯＧ１－２０－ｍ１－ｎ８０－ｐ３０－ｑ４－ＣＭＰ－２ＮＨＡｃ、
・ Ｆ１ｍ－ＭＯＧ３５－５５－ｍ２－ｎ８０－ｐ３０－ｑ４－ＣＭＰ－２ＮＨＡｃ、
・ Ｆ１ｍ－ＰＬＰ１３９－１５４－ｍ３－ｎ８０－ｐ３０－ｑ４－ＣＭＰ－２ＮＨＡｃ、
・ Ｆ１ｍ－ＭＡＲＴ１－ｍ４－ｎ８０－ｐ３０－ｑ４－ＣＭＰ－２ＮＨＡｃ、
・ Ｆ１ｍ－チロシナーゼ－ｍ８－ｎ８０－ｐ３０－ｑ４－ＣＭＰ－２ＮＨＡｃ、
・ Ｆ１ｍ－ＰＭＥＬ－ｍ５－ｎ８０－ｐ３０－ｑ４－ＣＭＰ－２ＮＨＡｃ、
・ Ｆ１ｍ－アクアポリン４－ｍ４－ｎ８０－ｐ３０－ｑ４－ＣＭＰ－２ＮＨＡｃ、
・ Ｆ１ｍ－Ｓ－アレスチン－ｍ１２－ｎ８０－ｐ３０－ｑ４－ＣＭＰ－２ＮＨＡｃ、
・ Ｆ１ｍ－ＩＲＢＰ－ｍ２１－ｎ８０－ｐ３０－ｑ４－ＣＭＰ－２ＮＨＡｃ、
・ Ｆ１ｍ－コンアラキン－ｍ２１－ｎ８０－ｐ３０－ｑ４－ＣＭＰ－２ＮＨＡｃ、
・ Ｆ１ｍ－天然型アルファ－グリアジン“３３－ｍｅｒ”－ｍ１－ｎ８０－ｐ３０－ｑ４－ＣＭＰ－２ＮＨＡｃ、
・ Ｆ１ｍ－脱アミド化アルファ－グリアジン“３３－ｍｅｒ”－ｍ１－ｎ８０－ｐ３０－ｑ４－ＣＭＰ－２ＮＨＡｃ、
・ Ｆ１ｍ－アルファ－グリアジン－ｍ１－ｎ８０－ｐ３０－ｑ４－ＣＭＰ－２ＮＨＡｃ、
・ Ｆ１ｍ－オメガ－グリアジン－ｍ１－ｎ８０－ｐ３０－ｑ４－ＣＭＰ－２ＮＨＡｃ、
・ Ｆ１ｍ－Ｆｅｌ ｄ １－ｍ４－ｎ８０－ｐ３０－ｑ４－ＣＭＰ－２ＮＨＡｃ、
・ Ｆ１ｍ－ネコアルブミン－ｍ１６－ｎ８０－ｐ３０－ｑ４－ＣＭＰ－２ＮＨＡｃ、
・ Ｆ１ｍ－Ｃａｎ ｆ １－ｍ６－ｎ８０－ｐ３０－ｑ４－ＣＭＰ－２ＮＨＡｃ、
・ Ｆ１ｍ－イヌアルブミン－ｍ２３－ｎ８０－ｐ３０－ｑ４－ＣＭＰ－２ＮＨＡｃ、および
・ Ｆ１ｍ－ＲｈＣＥ－ｍ１０－ｎ８０－ｐ３０－ｑ４－ＣＭＰ－２ＮＨＡｃ。
１５Ｊ． ｐが３０であり、ｑが８であり、Ｒ３がＯＨであり、Ｒ４がＯＨであり、かつＲ８がＣＭＰである式１１０７
実施例１５Ａに記載される手順に従い、かつＮ－アセチル－Ｄ－ガラクトサミンをガラクトースに置換し、かつｑが８である式１１０６のアジド－改変ｕＲＡＦＴ剤を使用することを除き、実施例１５Ｅに記載される手順に従うことにより、ｐが３０であり、ｑが８であり、Ｒ３がＯＨであり、Ｒ４がＯＨであり、かつＲ８がＣＭＰである式１１０７の化合物が得られる。
１５Ｋ． ｎが６２であり、かつＸ’およびｍが実施例１９Ｈにおけるものである式１１０９
実施例１５Ｆに記載される手順に従い、ＯＶＡを実施例１５Ｈに記載される化合物に置換し、ｎが６２である式１１０８の化合物を利用することにより、ｎが６２である式１１０９の対応する化合物が得られる。
１５Ｌ． 式１ｍの他の化合物
実施例１５Ｇに記載される手順に従い、かつ式１１０７の化合物を実施例１５Ｊで得られた化合物に置換し、かつ式１１０９の化合物を実施例１５Ｋで得られた化合物に置換することにより、式１ｍの以下の対応する化合物が得られる：
・ Ｆ１ｍ－アブシキシマブ－ｍ１０－ｎ６２－ｐ３０－ｑ８－ＣＭＰ－２ＯＨ、
・ Ｆ１ｍ－アダリムマブ－ｍ１１－ｎ６２－ｐ３０－ｑ８－ＣＭＰ－２ＯＨ、
・ Ｆ１ｍ－アガルシダーゼアルファ－ｍ１４－ｎ６２－ｐ３０－ｑ８－ＣＭＰ－２ＯＨ、
・ Ｆ１ｍ－アガルシダーゼベータ－ｍ１４－ｎ６２－ｐ３０－ｑ８－ＣＭＰ－２ＯＨ、
・ Ｆ１ｍ－アルデスロイキン－ｍ６－ｎ６２－ｐ３０－ｑ８－ＣＭＰ－２ＯＨ、
・ Ｆ１ｍ－アルグルコシダーゼアルファ－ｍ１３－ｎ６２－ｐ３０－ｑ８－ＣＭＰ－２ＯＨ、
・ Ｆ１ｍ－第ＶＩＩＩ因子－ｍ１００－ｎ６２－ｐ３０－ｑ８－ＣＭＰ－２ＯＨ、
・ Ｆ１ｍ－第ＩＸ因子－ｍ１８－ｎ６２－ｐ３０－ｑ８－ＣＭＰ－２ＯＨ、
・ Ｆ１ｍ－Ｌ－アスパラギナーゼ－ｍ５－ｎ６２－ｐ３０－ｑ８－ＣＭＰ－２ＯＨ、
・ Ｆ１ｍ－ラロニダーゼ－ｍ７－ｎ６２－ｐ３０－ｑ８－ＣＭＰ－２ＯＨ、
・ Ｆ１ｍ－オクトレオチド－ｍ１－ｎ６２－ｐ３０－ｑ８－ＣＭＰ－２ＯＨ、
・ Ｆ１ｍ－フェニルアラニンアンモニアリアーゼ－ｍ１２－ｎ６２－ｐ３０－ｑ８－ＣＭＰ－２ＯＨ、
・ Ｆ１ｍ－ラスブリカーゼ－ｍ１２－ｎ６２－ｐ３０－ｑ８－ＣＭＰ－２ＯＨ、
・ Ｆ１ｍ－インスリン－ｍ２－ｎ６２－ｐ３０－ｑ８－ＣＭＰ－２ＯＨ、
・ Ｆ１ｍ－ＧＡＤ－６５－ｍ８－ｎ６２－ｐ３０－ｑ８－ＣＭＰ－２ＯＨ、
・ Ｆ１ｍ－ＩＧＲＰ－ｍ７－ｎ６２－ｐ３０－ｑ８－ＣＭＰ－２ＯＨ、
・ Ｆ１ｍ－ＭＢＰ－ｍ６－ｎ６２－ｐ３０－ｑ８－ＣＭＰ－２ＯＨ、
・ Ｆ１ｍ－ＭＯＧ－ｍ５－ｎ６２－ｐ３０－ｑ８－ＣＭＰ－２ＯＨ、
・ Ｆ１ｍ－ＰＬＰ－ｍ８－ｎ６２－ｐ３０－ｑ８－ＣＭＰ－２ＯＨ、
・ Ｆ１ｍ－ＭＢＰ１３－３２－ｍ１－ｎ６２－ｐ３０－ｑ８－ＣＭＰ－２ＯＨ、
・ Ｆ１ｍ－ＭＢＰ８３－９９－ｍ１－ｎ６２－ｐ３０－ｑ８－ＣＭＰ－２ＯＨ、
・ Ｆ１ｍ－ＭＢＰ１１１－１２９－ｍ１－ｎ６２－ｐ３０－ｑ８－ＣＭＰ－２ＯＨ、
・ Ｆ１ｍ－ＭＢＰ１４６－１７０－ｍ２－ｎ６２－ｐ３０－ｑ８－ＣＭＰ－２ＯＨ、
・ Ｆ１ｍ－ＭＯＧ１－２０－ｍ１－ｎ６２－ｐ３０－ｑ８－ＣＭＰ－２ＯＨ、
・ Ｆ１ｍ－ＭＯＧ３５－５５－ｍ２－ｎ６２－ｐ３０－ｑ８－ＣＭＰ－２ＯＨ、
・ Ｆ１ｍ－ＰＬＰ１３９－１５４－ｍ３－ｎ６２－ｐ３０－ｑ８－ＣＭＰ－２ＯＨ、
・ Ｆ１ｍ－ＭＡＲＴ１－ｍ４－ｎ６２－ｐ３０－ｑ８－ＣＭＰ－２ＯＨ、
・ Ｆ１ｍ－チロシナーゼ－ｍ８－ｎ６２－ｐ３０－ｑ８－ＣＭＰ－２ＯＨ、
・ Ｆ１ｍ－ＰＭＥＬ－ｍ５－ｎ６２－ｐ３０－ｑ８－ＣＭＰ－２ＯＨ、
・ Ｆ１ｍ－アクアポリン４－ｍ４－ｎ６２－ｐ３０－ｑ８－ＣＭＰ－２ＯＨ、
・ Ｆ１ｍ－Ｓ－アレスチン－ｍ１２－ｎ６２－ｐ３０－ｑ８－ＣＭＰ－２ＯＨ、
・ Ｆ１ｍ－ＩＲＢＰ－ｍ２１－ｎ６２－ｐ３０－ｑ８－ＣＭＰ－２ＯＨ、
・ Ｆ１ｍ－コンアラキン－ｍ２１－ｎ６２－ｐ３０－ｑ８－ＣＭＰ－２ＯＨ、
・ Ｆ１ｍ－天然型アルファ－グリアジン“３３－ｍｅｒ”－ｍ１－ｎ６２－ｐ３０－ｑ８－ＣＭＰ－２ＯＨ、
・ Ｆ１ｍ－脱アミド化アルファ－グリアジン“３３－ｍｅｒ”－ｍ１－ｎ６２－ｐ３０－ｑ８－ＣＭＰ－２ＯＨ、
・ Ｆ１ｍ－アルファ－グリアジン－ｍ１－ｎ６２－ｐ３０－ｑ８－ＣＭＰ－２ＯＨ、
・ Ｆ１ｍ－オメガ－グリアジン－ｍ１－ｎ６２－ｐ３０－ｑ８－ＣＭＰ－２ＯＨ、
・ Ｆ１ｍ－Ｆｅｌ ｄ １－ｍ４－ｎ６２－ｐ３０－ｑ８－ＣＭＰ－２ＯＨ、
・ Ｆ１ｍ－ネコアルブミン－ｍ１６－ｎ６２－ｐ３０－ｑ８－ＣＭＰ－２ＯＨ、
・ Ｆ１ｍ－Ｃａｎ ｆ １－ｍ６－ｎ６２－ｐ３０－ｑ８－ＣＭＰ－２ＯＨ、
・ Ｆ１ｍ－イヌアルブミン－ｍ２３－ｎ６２－ｐ３０－ｑ８－ＣＭＰ－２ＯＨ、および
・ Ｆ１ｍ－ＲｈＣＥ－ｍ１０－ｎ６２－ｐ３０－ｑ８－ＣＭＰ－２ＯＨ。
１５Ｍ． 式１ｍの他の化合物
実施例１５Ａ－Ｌに記載される手順に従い、かつガラクトサミンまたはガラクトースをグルコサミンまたはグルコースに置換することにより、それぞれ式１ｍの対応するグルコシル化化合物が得られる。
実施例１６
Ｆ１ｎ－インスリン－ｍ２－ｎ１－ｐ３０－ｑ４－ＣＭＰ－２ＮＨＡｃ
１６Ａ． Ｘがインスリンであり、ｍが２であり、かつｎが１である式１２０２
組み換え体ヒトインスリン（５ｍｇ）を１０μｌのトリエチルアミンを含有する１００μｌのＤＭＦに加え、インスリンが溶解するまで攪拌した。この溶液にｎが１である式１２０１のリンカー前駆体１０ｍｇ（０．０１６１ｍｍｏｌ）を加え、反応液を攪拌した。１時間後、１．３ｍｌのｔｅｒｔ－ブチルメチルエーテルを式１２０２の対応産物を単離するために加え、沈殿物として回収した。残存するＤＭＦおよびｔｅｒｔ－ブチルメチルエーテルを減圧下で除去した。液体クロマトグラフィー、質量分析およびポリアクリルアミドゲル電気泳動を介する特性評価で産物の正体を確認した。式１２０２の改変インスリン産物をさらに精製せずに使用した。
１６Ｂ． Ｘ’がインスリンであり、ｍが２であり、ｎが１であり、ｐが３０であり、ｑが４であり、かつＲ８がＣＭＰである式１ｎ
実施例１６Ａで得られた式１２０２の産物を１００μｌのＤＭＦで再懸濁した。実施例１５Ｅで得られた式１１０７のポリマー産物（１０ｍｇ）を加え、反応液を１時間攪拌した。１時間後、反応産物をジクロロメタン（１．３ｍｌ）の添加を介して沈殿させた。産物を濾過し、残留している溶媒を減圧下で除去した。粗産物をその後５００μｌのＰＢＳに再懸濁し、低分子成分を式１ｎの対応する異性体産物を得るために遠心性サイズ排除クロマトグラフィーを介して除去した。液体クロマトグラフィー、質量分析およびポリアクリルアミドゲル電気泳動を介する特性評価で産物の正体を確認した。式１２０２の改変インスリン産物をさらに精製せずに使用した。
１６Ｃ． 式１２０２の他の化合物
実施例１６Ａに記載される手順に従い、かつインスリンを以下に置換することにより：
・ アブシキシマブ、
・ アダリムマブ、
・ アガルシダーゼアルファ、
・ アガルシダーゼベータ、
・ アルデスロイキン、
・ アルグルコシダーゼアルファ、
・ 第ＶＩＩＩ因子、
・ 第ＩＸ因子、
・ Ｌ－アスパラギナーゼ、
・ ラロニダーゼ、
・ オクトレオチド、
・ フェニルアラニンアンモニアリアーゼ、
・ ラスブリカーゼ、
・ ＧＡＤ－６５（配列番号：２）、
・ ＩＧＲＰ（配列番号：３）
・ ＭＢＰ（配列番号：４）、
・ ＭＯＧ（配列番号：５）、
・ ＰＬＰ（配列番号：６）、
・ ＭＢＰ１３－３２（配列番号：７）、
・ ＭＢＰ８３－９９（配列番号：８）、
・ ＭＢＰ１１１－１２９（配列番号：９）、
・ ＭＢＰ１４６－１７０（配列番号：１０）、
・ ＭＯＧ１－２０（配列番号：１１）、
・ ＭＯＧ３５－５５（配列番号：１２）、
・ ＰＬＰ１３９－１５４（配列番号：１３）、
・ ＭＡＲＴ１（配列番号：１４）、
・ チロシナーゼ（配列番号：１５）、
・ ＰＭＥＬ（配列番号：１６）、
・ アクアポリン４（配列番号：１７）、
・ Ｓ－アレスチン（配列番号：１８）、
・ ＩＲＢＰ（配列番号：１９）、
・ コンアラキン（ＵＮＩＰＲＯＴ Ｑ６ＰＳＵ６）、
・ 天然型アルファ－グリアジン“３３－ｍｅｒ”（配列番号：２０）、
・ 脱アミド化アルファ－グリアジン“３３－ｍｅｒ”（配列番号：２１）、
・ アルファ－グリアジン（配列番号：２２）、
・ オメガ－グリアジン（配列番号：２３）、
・ Ｆｅｌ ｄ １Ａ（ＵＮＩＰＲＯＴ Ｐ３０４３８）、
・ ネコアルブミン（ＵＮＩＰＲＯＴ Ｐ４９０６４）、
・ Ｃａｎ ｆ １（ＵＮＩＰＲＯＴ Ｏ１８８７３）、
・ イヌアルブミン（ＵＮＩＰＲＯＴ Ｐ４９８２２）、および
・ ＲｈＣＥ（ＵＮＩＰＲＯＴ Ｐ１８５７７）、
式１２０２の以下の対応する化合物が得られ、ここで、ｎは１であり：
・ Ｘはアブシキシマブであり、かつｍは１０であり、
・ Ｘはアダリムマブであり、かつｍは１１であり、
・ Ｘはアガルシダーゼアルファであり、かつｍは１４であり、
・ Ｘはアガルシダーゼベータであり、かつｍは１４であり、
・ Ｘはアルデスロイキンであり、かつｍは６であり、
・ Ｘはアルグルコシダーゼアルファであり、かつｍは１３であり、
・ Ｘは第ＶＩＩＩ因子であり、かつｍは１００であり、
・ Ｘは第ＩＸ因子であり、かつｍは１８であり、
・ ＸはＬ－アスパラギナーゼであり、かつｍは５であり、
・ Ｘはラロニダーゼであり、かつｍは７であり、
・ Ｘはオクトレオチドであり、かつｍは１であり、
・ Ｘはフェニルアラニンアンモニアリアーゼであり、かつｍは１２であり、
・ Ｘはラスブリカーゼであり、かつｍは１２であり、
・ ＸはＧＡＤ－６５（配列番号：２）であり、かつｍは８であり、
・ ＸはＩＧＲＰ（配列番号：３）であり、かつｍは７であり、
・ ＸはＭＢＰ（配列番号：４）であり、かつｍは６であり、
・ ＸはＭＯＧ（配列番号：５）であり、かつｍは５であり、
・ ＸはＰＬＰ（配列番号：６）であり、かつｍは８であり、
・ ＸはＭＢＰ１３－３２（配列番号：７）であり、かつｍは１であり、
・ ＸはＭＢＰ８３－９９（配列番号：８）であり、かつｍは１であり、
・ ＸはＭＢＰ１１１－１２９（配列番号：９）であり、かつｍは１であり、
・ ＸはＭＢＰ１４６－１７０（配列番号：１０）であり、かつｍは２であり、
・ ＸはＭＯＧ１－２０（配列番号：１１）であり、かつｍは１であり、
・ ＸはＭＯＧ３５－５５（配列番号：１２）であり、かつｍは２であり、
・ ＸはＰＬＰ１３９－１５４（配列番号：１３）であり、かつｍは３であり、
・ ＸはＭＡＲＴ１（配列番号：１４）であり、かつｍは４であり、
・ Ｘはチロシナーゼ（配列番号：１５）であり、かつｍは８であり、
・ ＸはＰＭＥＬ（配列番号：２０）であり、かつｍは５であり、
・ Ｘはアクアポリン４（配列番号：２１）であり、かつｍは４であり、
・ ＸはＳ－アレスチン（配列番号：２２）であり、かつｍは１２であり、
・ ＸはＩＲＢＰ（配列番号：１９）であり、かつｍは２１であり、
・ Ｘはコンアラキンであり、かつｍは２１であり、
・ Ｘは天然型アルファ－グリアジン“３３－ｍｅｒ”（配列番号：２０）であり、かつｍは１であり、
・ Ｘは脱アミド化アルファ－グリアジン“３３－ｍｅｒ”（配列番号：２１）であり、かつｍは１であり、
・ Ｘはアルファ－グリアジン（配列番号：２２）であり、かつｍは１であり、
・ Ｘはオメガ－グリアジン（配列番号：２７）であり、かつｍは１であり、
・ ＸはＦｅｌ ｄ １であり、かつｍは４であり、
・ Ｘはネコアルブミンであり、かつｍは１６であり、
・ ＸはＣａｎ ｆ １であり、かつｍは６であり、
・ Ｘはイヌアルブミンであり、かつｍは２３であり、かつ
・ ＸはＲｈＣＥであり、かつｍは１０である。
１６Ｄ． 式１ｎの他の化合物
実施例１６Ｂに記載される手順に従い、かつ式１２０２の化合物を置換することにより、例えば、実施例１６Ｃで得られるように、式１ｍの以下の対応する化合物が得られる：
・ Ｆ１ｎ－アブシキシマブ－ｍ１０－ｎ１－ｐ３０－ｑ４－ＣＭＰ－２ＮＨＡｃ、
・ Ｆ１ｎ－アダリムマブ－ｍ１１－ｎ１－ｐ３０－ｑ４－ＣＭＰ－２ＮＨＡｃ、
・ Ｆ１ｎ－アガルシダーゼアルファ－ｍ１４－ｎ１－ｐ３０－ｑ４－ＣＭＰ－２ＮＨＡｃ、
・ Ｆ１ｎ－アガルシダーゼベータ－ｍ１４－ｎ１－ｐ３０－ｑ４－ＣＭＰ－２ＮＨＡｃ、
・ Ｆ１ｎ－アルデスロイキン－ｍ６－ｎ１－ｐ３０－ｑ４－ＣＭＰ－２ＮＨＡｃ、
・ Ｆ１ｎ－アルグルコシダーゼアルファ－ｍ１３－ｎ１－ｐ３０－ｑ４－ＣＭＰ－２ＮＨＡｃ、
・ Ｆ１ｎ－第ＶＩＩＩ因子－ｍ１００－ｎ１－ｐ３０－ｑ４－ＣＭＰ－２ＮＨＡｃ、
・ Ｆ１ｎ－第ＩＸ因子－ｍ１８－ｎ１－ｐ３０－ｑ４－ＣＭＰ－２ＮＨＡｃ、
・ Ｆ１ｎ－Ｌ－アスパラギナーゼ－ｍ５－ｎ１－ｐ３０－ｑ４－ＣＭＰ－２ＮＨＡｃ、
・ Ｆ１ｎ－ラロニダーゼ－ｍ７－ｎ１－ｐ３０－ｑ４－ＣＭＰ－２ＮＨＡｃ、
・ Ｆ１ｎ－オクトレオチド－ｍ１－ｎ１－ｐ３０－ｑ４－ＣＭＰ－２ＮＨＡｃ、
・ Ｆ１ｎ－フェニルアラニンアンモニアリアーゼ－ｍ１２－ｎ１－ｐ３０－ｑ４－ＣＭＰ－２ＮＨＡｃ、
・ Ｆ１ｎ－ラスブリカーゼ－ｍ１２－ｎ１－ｐ３０－ｑ４－ＣＭＰ－２ＮＨＡｃ、
・ Ｆ１ｎ－ＧＡＤ－６５－ｍ８－ｎ１－ｐ３０－ｑ４－ＣＭＰ－２ＮＨＡｃ、
・ Ｆ１ｎ－ＩＧＲＰ－ｍ７－ｎ１－ｐ３０－ｑ４－ＣＭＰ－２ＮＨＡｃ、
・ Ｆ１ｎ－ＭＢＰ－ｍ６－ｎ１－ｐ３０－ｑ４－ＣＭＰ－２ＮＨＡｃ、
・ Ｆ１ｎ－ＭＯＧ－ｍ５－ｎ１－ｐ３０－ｑ４－ＣＭＰ－２ＮＨＡｃ、
・ Ｆ１ｎ－ＰＬＰ－ｍ８－ｎ１－ｐ３０－ｑ４－ＣＭＰ－２ＮＨＡｃ、
・ Ｆ１ｎ－ＭＢＰ１３－３２－ｍ１－ｎ１－ｐ３０－ｑ４－ＣＭＰ－２ＮＨＡｃ、
・ Ｆ１ｎ－ＭＢＰ８３－９９－ｍ１－ｎ１－ｐ３０－ｑ４－ＣＭＰ－２ＮＨＡｃ、
・ Ｆ１ｎ－ＭＢＰ１１１－１２９－ｍ１－ｎ１－ｐ３０－ｑ４－ＣＭＰ－２ＮＨＡｃ、
・ Ｆ１ｎ－ＭＢＰ１４６－１７０－ｍ２－ｎ１－ｐ３０－ｑ４－ＣＭＰ－２ＮＨＡｃ、
・ Ｆ１ｎ－ＭＯＧ１－２０－ｍ１－ｎ１－ｐ３０－ｑ４－ＣＭＰ－２ＮＨＡｃ、
・ Ｆ１ｎ－ＭＯＧ３５－５５－ｍ２－ｎ１－ｐ３０－ｑ４－ＣＭＰ－２ＮＨＡｃ、
・ Ｆ１ｎ－ＰＬＰ１３９－１５４－ｍ３－ｎ１－ｐ３０－ｑ４－ＣＭＰ－２ＮＨＡｃ、
・ Ｆ１ｎ－ＭＡＲＴ１－ｍ４－ｎ１－ｐ３０－ｑ４－ＣＭＰ－２ＮＨＡｃ、
・ Ｆ１ｎ－チロシナーゼ－ｍ８－ｎ１－ｐ３０－ｑ４－ＣＭＰ－２ＮＨＡｃ、
・ Ｆ１ｎ－ＰＭＥＬ－ｍ５－ｎ１－ｐ３０－ｑ４－ＣＭＰ－２ＮＨＡｃ、
・ Ｆ１ｎ－アクアポリン４－ｍ４－ｎ１－ｐ３０－ｑ４－ＣＭＰ－２ＮＨＡｃ、
・ Ｆ１ｎ－Ｓ－アレスチン－ｍ１２－ｎ１－ｐ３０－ｑ４－ＣＭＰ－２ＮＨＡｃ、
・ Ｆ１ｎ－ＩＲＢＰ－ｍ２１－ｎ１－ｐ３０－ｑ４－ＣＭＰ－２ＮＨＡｃ、
・ Ｆ１ｎ－コンアラキン－ｍ２１－ｎ１－ｐ３０－ｑ４－ＣＭＰ－２ＮＨＡｃ、
・ Ｆ１ｎ－天然型アルファ－グリアジン“３３－ｍｅｒ”－ｍ１－ｎ１－ｐ３０－ｑ４－ＣＭＰ－２ＮＨＡｃ、
・ Ｆ１ｎ－脱アミド化アルファ－グリアジン“３３－ｍｅｒ”－ｍ１－ｎ１－ｐ３０－ｑ４－ＣＭＰ－２ＮＨＡｃ、
・ Ｆ１ｎ－アルファ－グリアジン－ｍ１－ｎ１－ｐ３０－ｑ４－ＣＭＰ－２ＮＨＡｃ、
・ Ｆ１ｎ－オメガ－グリアジン－ｍ１－ｎ１－ｐ３０－ｑ４－ＣＭＰ－２ＮＨＡｃ、
・ Ｆ１ｎ－Ｆｅｌ ｄ １－ｍ４－ｎ１－ｐ３０－ｑ４－ＣＭＰ－２ＮＨＡｃ、
・ Ｆ１ｎ－ネコアルブミン－ｍ１６－ｎ１－ｐ３０－ｑ４－ＣＭＰ－２ＮＨＡｃ、
・ Ｆ１ｎ－Ｃａｎ ｆ １－ｍ６－ｎ１－ｐ３０－ｑ４－ＣＭＰ－２ＮＨＡｃ、
・ Ｆ１ｎ－イヌアルブミン－ｍ２３－ｎ１－ｐ３０－ｑ４－ＣＭＰ－２ＮＨＡｃ、および
・ Ｆ１ｎ－ＲｈＣＥ－ｍ１０－ｎ１－ｐ３０－ｑ４－ＣＭＰ－２ＮＨＡｃ。
１６Ｅ． ｎが３３であり、かつＸ’およびｍが実施例２０Ｃにおけるものである式１２０２
実施例１６Ｆに記載される手順に従い、インスリンを実施例１６Ｃに記載される化合物に置換し、かつｎが３３である式１２０１の化合物を利用することにより、ｎが３３である式１２０２の対応する化合物が得られる。
１６Ｆ． 式１ｎの他の化合物
実施例１６Ｂに記載される手順に従い、かつ式１１０７の化合物を実施例１５Ｊで得られた化合物に置換し、かつ式１２０２の化合物を実施例１６Ｅで得られた化合物に置換することにより、式１ｎの以下の対応する化合物が得られる：
・ Ｆ１ｎ－アブシキシマブ－ｍ１０－ｎ３３－ｐ３０－ｑ８－ＣＭＰ－２ＯＨ、
・ Ｆ１ｎ－アダリムマブ－ｍ１１－ｎ３３－ｐ３０－ｑ８－ＣＭＰ－２ＯＨ、
・ Ｆ１ｎ－アガルシダーゼアルファ－ｍ１４－ｎ３３－ｐ３０－ｑ８－ＣＭＰ－２ＯＨ、
・ Ｆ１ｎ－アガルシダーゼベータ－ｍ１４－ｎ３３－ｐ３０－ｑ８－ＣＭＰ－２ＯＨ、
・ Ｆ１ｎ－アルデスロイキン－ｍ６－ｎ３３－ｐ３０－ｑ８－ＣＭＰ－２ＯＨ、
・ Ｆ１ｎ－アルグルコシダーゼアルファ－ｍ１３－ｎ３３－ｐ３０－ｑ８－ＣＭＰ－２ＯＨ、
・ Ｆ１ｎ－第ＶＩＩＩ因子－ｍ１００－ｎ３３－ｐ３０－ｑ８－ＣＭＰ－２ＯＨ、
・ Ｆ１ｎ－第ＩＸ因子－ｍ１８－ｎ３３－ｐ３０－ｑ８－ＣＭＰ－２ＯＨ、
・ Ｆ１ｎ－Ｌ－アスパラギナーゼ－ｍ５－ｎ３３－ｐ３０－ｑ８－ＣＭＰ－２ＯＨ、
・ Ｆ１ｎ－ラロニダーゼ－ｍ７－ｎ３３－ｐ３０－ｑ８－ＣＭＰ－２ＯＨ、
・ Ｆ１ｎ－オクトレオチド－ｍ１－ｎ３３－ｐ３０－ｑ８－ＣＭＰ－２ＯＨ、
・ Ｆ１ｎ－フェニルアラニンアンモニアリアーゼ－ｍ１２－ｎ３３－ｐ３０－ｑ８－ＣＭＰ－２ＯＨ、
・ Ｆ１ｎ－ラスブリカーゼ－ｍ１２－ｎ３３－ｐ３０－ｑ８－ＣＭＰ－２ＯＨ、
・ Ｆ１ｎ－ＧＡＤ－６５－ｍ８－ｎ３３－ｐ３０－ｑ８－ＣＭＰ－２ＯＨ、
・ Ｆ１ｎ－ＩＧＲＰ－ｍ７－ｎ３３－ｐ３０－ｑ８－ＣＭＰ－２ＯＨ、
・ Ｆ１ｎ－ＭＢＰ－ｍ６－ｎ３３－ｐ３０－ｑ８－ＣＭＰ－２ＯＨ、
・ Ｆ１ｎ－ＭＯＧ－ｍ５－ｎ３３－ｐ３０－ｑ８－ＣＭＰ－２ＯＨ、
・ Ｆ１ｎ－ＰＬＰ－ｍ８－ｎ３３－ｐ３０－ｑ８－ＣＭＰ－２ＯＨ、
・ Ｆ１ｎ－ＭＢＰ１３－３２－ｍ１－ｎ３３－ｐ３０－ｑ８－ＣＭＰ－２ＯＨ、
・ Ｆ１ｎ－ＭＢＰ８３－９９－ｍ１－ｎ３３－ｐ３０－ｑ８－ＣＭＰ－２ＯＨ、
・ Ｆ１ｎ－ＭＢＰ１１１－１２９－ｍ１－ｎ３３－ｐ３０－ｑ８－ＣＭＰ－２ＯＨ、
・ Ｆ１ｎ－ＭＢＰ１４６－１７０－ｍ２－ｎ３３－ｐ３０－ｑ８－ＣＭＰ－２ＯＨ、
・ Ｆ１ｎ－ＭＯＧ１－２０－ｍ１－ｎ３３－ｐ３０－ｑ８－ＣＭＰ－２ＯＨ、
・ Ｆ１ｎ－ＭＯＧ３５－５５－ｍ２－ｎ３３－ｐ３０－ｑ８－ＣＭＰ－２ＯＨ、
・ Ｆ１ｎ－ＰＬＰ１３９－１５４－ｍ３－ｎ３３－ｐ３０－ｑ８－ＣＭＰ－２ＯＨ、
・ Ｆ１ｎ－ＭＡＲＴ１－ｍ４－ｎ３３－ｐ３０－ｑ８－ＣＭＰ－２ＯＨ、
・ Ｆ１ｎ－チロシナーゼ－ｍ８－ｎ３３－ｐ３０－ｑ８－ＣＭＰ－２ＯＨ、
・ Ｆ１ｎ－ＰＭＥＬ－ｍ５－ｎ３３－ｐ３０－ｑ８－ＣＭＰ－２ＯＨ、
・ Ｆ１ｎ－アクアポリン４－ｍ４－ｎ３３－ｐ３０－ｑ８－ＣＭＰ－２ＯＨ、
・ Ｆ１ｎ－Ｓ－アレスチン－ｍ１２－ｎ３３－ｐ３０－ｑ８－ＣＭＰ－２ＯＨ、
・ Ｆ１ｎ－ＩＲＢＰ－ｍ２１－ｎ３３－ｐ３０－ｑ８－ＣＭＰ－２ＯＨ、
・ Ｆ１ｎ－コンアラキン－ｍ２１－ｎ３３－ｐ３０－ｑ８－ＣＭＰ－２ＯＨ、
・ Ｆ１ｎ－天然型アルファ－グリアジン“３３－ｍｅｒ”－ｍ１－ｎ３３－ｐ３０－ｑ８－ＣＭＰ－２ＯＨ、
・ Ｆ１ｎ－脱アミド化アルファ－グリアジン“３３－ｍｅｒ”－ｍ１－ｎ３３－ｐ３０－ｑ８－ＣＭＰ－２ＯＨ、
・ Ｆ１ｎ－アルファ－グリアジン－ｍ１－ｎ３３－ｐ３０－ｑ８－ＣＭＰ－２ＯＨ、
・ Ｆ１ｎ－オメガ－グリアジン－ｍ１－ｎ３３－ｐ３０－ｑ８－ＣＭＰ－２ＯＨ、
・ Ｆ１ｎ－Ｆｅｌ ｄ １－ｍ４－ｎ３３－ｐ３０－ｑ８－ＣＭＰ－２ＯＨ、
・ Ｆ１ｎ－ネコアルブミン－ｍ１６－ｎ３３－ｐ３０－ｑ８－ＣＭＰ－２ＯＨ、
・ Ｆ１ｎ－Ｃａｎ ｆ １－ｍ６－ｎ３３－ｐ３０－ｑ８－ＣＭＰ－２ＯＨ、
・ Ｆ１ｎ－イヌアルブミン－ｍ２３－ｎ３３－ｐ３０－ｑ８－ＣＭＰ－２ＯＨ、および
・ Ｆ１ｎ－ＲｈＣＥ－ｍ１０－ｎ３３－ｐ３０－ｑ８－ＣＭＰ－２ＯＨ。
１６Ｇ． 式１ｎの他の化合物
実施例１６Ａ－Ｆに記載される手順に従い、かつガラクトシル化部分をグルコシル化部分に置換することにより、式１ｎの対応するグルコシル化化合物が得られる。
実施例１７
ｐが９０であり、ｔが１であり、Ｒ３がＮＨＡｃであり、かつＲ４がＯＨである式１５０７
１７Ａ． ｔが１であり、Ｒ３がＮＨＡｃであり、かつＲ４がＯＨである式１５０２
Ｎ－アセチル－Ｄ－グルコサミン（Ｒ３がＮＨＡｃであり、かつＲ４がＯＨである式１１０１）（５．０ｇ、２２．６ｍｍｏｌ）を室温で２－（２－クロロエトキシ）エタン－１－オール（５０ｍｌ）の攪拌溶液に加えた。溶液を４℃に冷却し、アセチルクロライドを、当該溶液に滴下して加えた。当該溶液を室温までし、その後７０℃に加熱した。４時間後、反応混合物を２００ｍｌの酢酸エチルに加えた。形成された沈殿物を収集し、１００ｍｌのエタノールに加え、２時間炭素存在下で撹拌した。溶液を濾過し、減圧下で溶媒を除去した。式１５０２の対応する産物、Ｎ－アセチル－Ｄ－グルコサミン－２－（クロロエトキシ）エタノールをさらに精製せずに使用した。
１７Ｂ． ｔは１であり、Ｒ３はＮＨＡｃであり、かつＲ４はＯＨである式１５０３
Ｎ－アセチル－Ｄ－グルコサミン－２－（クロロエトキシ）エタノール（２．０ｇ、６．１１ｍｍｏｌ）をＤＭＦ（１００ｍｌ）およびアジ化ナトリウム（４．０ｇ、６１．５ｍｍｏｌ）の攪拌溶液に加えた。当該溶液を１２時間９０℃で加熱し、その後、濾過した。残留している溶媒を減圧下で除去し、粗産物をフラッシュクロマトグラフィー（ジクロロメタンにおいて１０％ＭｅＯＨ）を介して精製し、式１５０３の対応産物、Ｎ－アセチル－Ｄ－グルコサミン－２－（ａｚｉｄｅｏエトキシ）エタノールを与えた。
１７Ｃ． ｔが１であり、Ｒ３がＮＨＡｃであり、かつＲ４がＯＨである式１５０４
Ｎ－アセチル－Ｄ－グルコサミン－２－（ａｚｉｄｅｏエトキシ）エタノール（２．０ｇ、５．９ｍｍｏｌ）をパラジウム炭素およびエタノールの溶液（５０ｍｌ）に加えた。当該溶液を水素ガス（３気圧）のもとで４時間撹拌した。得られる溶液を濾過し、残留している溶媒を減圧下で除去し、式１５０４の対応産物、Ｎ－アセチル－Ｄ－グルコサミン－２－（アミノエトキシ（ａｍｉｎｅｏｅｔｈｏｘｙ））エタノールを得た。
１７Ｄ． ｔが１であり、Ｒ３がＮＨＡｃであり、かつＲ４がＯＨである式１５０５
Ｎ－アセチル－Ｄ－グルコサミン－２－（アミノエトキシ（ａｍｉｎｅｏｅｔｈｏｘｙ））エタノール（１．０ｇ、３．２５ｍｍｏｌ）をＤＭＦ（５０ｍｌ）におけるメタクリル酸無水物の溶液（０．５８３ｇ、３．７８ｍｍｏｌ）に加えた。トリエチルアミンをその後当該溶液に加えて、反応液を２時間室温で撹拌した。２時間後、過剰溶媒を減圧下で除去し、式１５０５の対応産物、（（２Ｓ，３Ｓ，４Ｓ，５Ｒ，６Ｓ）－４，５－ジヒドロキシ－６－（ヒドロキシメチル）－２－（２－（２－メタクリルアミドエトキシ）エトキシ）テトラヒドロ－２Ｈ－ピラン－３－イル）カルバミン酸をフラッシュクロマトグラフィーを介して単離した。
１７Ｅ． ｐが９０であり、ｑが４であり、ｔが１であり、Ｒ３がＮＨＡｃであり、Ｒ４がＯＨであり、Ｒ８がＣＭＰであり、かつＲ１０が２－ヒドロキシプロピルである式１５０７
２５ｍｌシュレンクフラスコに式１５０５の化合物、実施例１７Ｄの産物（２７２ｍｇ、０．７２ｍｍｏｌ）、Ｎ－（２－ヒドロキシプロピル）メタクリルアミド（製造元から受け取ったまま使用される“ＨＰＭＡ”）（２１１ｍｇ、１．４７ｍｍｏｌ）、ｑが４であり、かつＲ８はＣＭＰである式１１０６のアジド－改変ｕＲＡＦＴ剤（１０．４１ｍｇ、０．０２１７ｍｍｏｌ）、アゾビス（イソブチロニトリル（ｉｓｏｂｕｔｙｒｏｎｉｔｒｉｌ））（０．９８ｍｇ、０．００５ｍｍｏｌ）、および１．２ｍｌジメチルホルムアミドを充填した。反応混合物を４凍結脱気サイクルに供し、その後２０時間７０℃で攪拌した。アセトン中で反応混合物を沈殿させることにより、式１５０７の対応するランダムポリマー産物を回収した。過剰のアセトンを減圧下で除去してランダムポリマー産物を得、それをさらに精製せずに使用した。
１７Ｆ． Ｎ－アセチル－Ｄ－ガラクトサミンを使用する、ｐが９０であり、ｑが４であり、ｔが１であり、Ｒ３がＮＨＡｃであり、Ｒ４がＯＨであり、Ｒ８がＣＭＰであり、かつＲ１０が２－ヒドロキシプロピルである式１５０７
実施例１７Ａから１７Ｅの手順に従い、かつ実施例１７Ａの手順におけるＮ－アセチル－Ｄ－グルコサミンをＮ－アセチル－Ｄ－ガラクトサミンに置換することにより、式１５０７の対応するガラクトシル化合物が得られた。
１７Ｇ． ｔが１以外である式１５０７の化合物
実施例１７Ａから１７Ｅの手順に従い、かつ２－（２－クロロエトキシ）エタン－１－オールを：
・ ２－（２－（２－クロロエトキシ）エトキシ）エタン－１－オールに置換することにより、ｔが２である式１５０７の対応する化合物を得、
・ ２－（２－（２－（２－クロロエトキシ）エトキシ）エトキシ）エタン－１－オールに置換することにより、ｔが３である式１５０７の対応する化合物を得、
・ ２－（２－（２－（２－（２－クロロエトキシ）エトキシ）エトキシ）エトキシ）エタン－１－オールに置換することにより、ｔが４である式１５０７の対応する化合物を得、
・ ２－（２－（２－（２－（２－（２－クロロエトキシ）エトキシ）エトキシ）エトキシ）エトキシ）エタン－１－オールに置換することにより、ｔが５である式１５０７の対応する化合物を得、かつ
・ ２－（２－（２－（２－（２－（２－（２－クロロエトキシ）エトキシ）エトキシ）エトキシ）エトキシ）エトキシ）エタン－１－オールに置換することにより、ｔが６である式１５０７の対応する化合物を得るだろう。
１７Ｈ． ｔが変化する複数のＷ１基を有する式１５０７の化合物
実施例１７Ｅの手順に従い、かつｔが１である式１５０５の化合物を０．３６ｍｍｏｌのそれぞれｔが２および４である式１５０５（例えば、実施例１７Ａから１７Ｄの手順に従うことにより実施例１７Ｆに記載されるように調製される）に置換することにより、ｔが２である約１５Ｗ１基、ｔが４である１５Ｗ１基および６０であるＷ２基を有する式１５０７の対応するランダム共重合体が得られる。
１７Ｉ． グルコシルおよびガラクトシル部分の混合を有する式１５０７の化合物
実施例１７Ｅの手順に従い、かつ式１５０５の化合物をそれぞれ０．３６ｍｍｏｌのグルコシルおよびガラクトシル式１５０５（例えば、実施例１７Ａから１７Ｄの手順に従うことにより、実施例１７Ｄおよび実施例１７Ｆに記載されるように調製される）に置換することにより、約１５グルコシルＷ１基、１５ガラクトシルＷ１基および６０Ｗ２基を有する式１５０７の対応するランダム共重合体が得られる。
実施例１７．１
ｔが１であり、Ｒ３がＮＨＡｃであり、かつＲ４がＯＨである式１５０７
Figure 0007082045000086
１７．１Ａ． ｔが１であり、Ｒ３がＮＨＡｃであり、かつＲ４がＯＨである式１５０２：２－（２－（２－クロロエトキシ）エトキシ）－α－ＮＡｃ－ガラクトサミン（１５０２．１Ａ）。
塩化アセチル（４．３５ｍＬ、６１．０５ｍｍｏｌ）を２－（２’－クロロエトキシ）エタノール（４０ｍｌ）中のＮＨＡｃ保護Ｄ－ガラクトサミン（１０．０ｇ）の氷冷溶液に滴下した。混合物を４℃で１５分間攪拌し、その後７０℃の油浴に移した。反応を冷却コンデンサーで４時間混合したままにした。その後暗褐色溶液を冷却し、過剰の未反応のクロロエタノールを除去するために酢酸エチルおよびジクロロメタン（３：１、ｖ／ｖ）の４００ｍＬ溶液に注いだ。混合物を３０分間冷凍庫に入れ、その後暗褐色で粘着性の沈殿物からデカントした。沈殿物を無水エタノールに溶解し、活性炭を加えた。懸濁液を１．５時間混合し、その後Ｃｅｌｉｔｅを通して濾過し、エタノールで洗浄した。最後の工程で、真空中でエタノールを蒸発させ、１２．８ｇの産物を得た（１５０２．１Ａ）（９５．２４％収率）。
Figure 0007082045000087
１７．１Ｂ． ｔが１であり、Ｒ３がＮＨＡｃであり、かつＲ４がＯＨである式１５０３；２－（２－（２－アジドエトキシ）エトキシ）－α－ＮＡｃ－ガラクトサミン（１５０３．１Ｂ）。
化合物（１５０２．１Ａ）（５．０ｇ）を２０ｍＬのＮ，Ｎ－ジメチルホルムアミドに溶解した。その溶液に、アジ化ナトリウム（２６６２８－２２－８）（５．０ｇ）を加えた。懸濁液を油浴に入れ、８０℃で一晩攪拌した。一晩後、反応混合物をＣｅｌｉｔｅを通して濾過した。その後溶媒を高圧下で蒸発させて、油状の褐色物質を得た。最終産物をフラッシュクロマトグラフィーを介して精製した（８２．２％収率）。
Figure 0007082045000088
１７．１Ｃ． ｔが１であり、Ｒ３がＮＨＡｃであり、かつＲ４がＯＨである式１５０４；２－（２－（２－アミノエトキシ）エトキシ）－α－ＮＡｃ－ガラクトサミン（１５０４．１Ｃ）。
２０ｍＬのエタノール中の（１５０３．１Ｂ）（５．５ｇ）および１０％パラジウム炭素（ｃａ．５００ｍｇ）の懸濁液を、２バールの水素ガスの初期圧力を有するシュレンクフラスコ中で水素化した。還元プロセスはＴＬＣによって制御した。３時間後、反応が完了し、懸濁液をＣｅｌｉｔｅを通して濾過した（７８％収率）。
Figure 0007082045000089
１７．１Ｄ． ｔが１であり、Ｒ３がＮＨＡｃであり、かつＲ４がＯＨである式１５０５；α－ＮＡｃ－ガラクトサミン（Ｇｌａｃｔｏｓａｍｉｎｅ）－アミン－メタクリル酸（１５０５．１Ｄ）
化合物（１５０４．１Ｃ）（４．５ｇ）を１０ｍＬのＮ，Ｎ－ジメチルホルムアミドに溶解した。その溶液に、トリエチルアミン（３ｍｌ）を加え、混合物を４℃に冷却した。その後、ペンタフルオロフェニルメタクリル酸（１３６４２－９７－２）（４．３８ｍｌ）を一定の攪拌を伴い滴下した。３０分後、氷浴を除去し、反応物を室温で次の４時間撹拌した。次に、溶媒を蒸発させ、残存物をシリカゲルに吸着させた。フラッシュクロマトグラフィー（ジクロロメタン：メタノール９５：５、ｖ／ｖ）を使用する粗物質の精製は、３．８ｇのＮＡｃ－ガラクトサミンモノマー（α－ＮＡｃ－ガラクトサミン（Ｇｌａｃｔｏｓａｍｉｎｅ）－アミン－メタクリル酸（１５０５．１Ｄ））を得る（６４．７３％収率）。
Figure 0007082045000090
テトラエチレングリコールモノｐ－トルエンスルホネート（１６５１ａ）。
テトラエチレングリコール（１６５０ａ）（１１２－６０－７）（２．５ｇ）およびピリジン（１．０ｇ）を５０ｍＬのジクロロメタンに加え、０℃で２０分間攪拌した。その溶液に、１５ｍＬのジクロロメタン中のｐ－トルエンスルホニルクロライド（９８－５９－９）（２．３７）をゆっくり加えた。その後反応混合物を０℃で２時間、それに続いて室温で４時間攪拌した。その後、溶媒を蒸発させ、フラッシュクロマトグラフィー（酢酸エチル：ヘキサン６：４、ｖ／ｖ）を介して粗産物を精製し、１６５１ａを得た（４４％収率）。
Figure 0007082045000091
Ｓ－［２－［２－［２－（２－ヒドロキシエトキシ）エトキシ］エトキシ］エチル］エステル（１６５２ａ）
６５０ｍｌのＤＭＦ中のチオ酢酸カリウム（１０３８７－４０－３）（１０．１ｇ、８８ｍｍｏｌ）の懸濁液に、１００ｍｌのＤＭＦ中の（１６５１ａ）（１５．４ｇ）の溶液を加えた。混合物を室温で１時間、その後９０℃で４時間攪拌した。濾過後、溶媒を減圧下で蒸発させた。残渣を酢酸エチル（１５０ｍｌ）に溶解し、水（２×５０ｍｌ）および塩水（２×５０ｍｌ）で洗浄した。水性洗浄溶液を酢酸エチル（２×５０ｍｌ）で再抽出し、合わせた有機層を硫酸マグネシウムで乾燥させ、減圧下で蒸発させ、黄色の油状産物１６５２ａを得た（４５％収率）
Figure 0007082045000092
２－（２－（２－（２－（ピリジン－２－イルジスルファニル）エトキシ）エトキシ）エトキシ）エタン－１－オール（１６５３ａ）
ナトリウムメトキシド（メタノール中０．５Ｍ、１．４０ｍｌ）をアルゴン雰囲気下で無水メタノール（３ｍｌ）中（１６５２ａ）（７０．９ｍｇ）および２，２－ジチオジピリジン（２１２７－０３－９）（７７．４ｍｇ、０．３５１ｍｍｏｌ）の攪拌溶液に滴下した。２時間後、反応物をシリカで粉末に濃縮し、粗産物をシリカを通してフラッシュクロマトグラフィーにより精製し（１：１ ヘキサン：ＥｔＯＡｃ）、透明で、淡黄色の液体として１６５３ａを得た（２６．３ｍｇ、４４％収率）。
Figure 0007082045000093
ｕＲＡＦＴ剤（１６０１ａ）
化合物１６５３ａ（１ｇ）をＤＣＭ（１５ｍｌ）中の４－シアノ－４－（チオベンゾイルチオ）ペンタン酸（１．１ｇ）（２０１６１１－９２－９）、Ｎ，Ｎ’－ジシクロヘキシルカルボジイミド（５３８－７５－０）（０．５ｇ）および４－ジメチルアミノピリジン（ＤＭＡＰ）（１１２２－５８－３）（０．１ｇ）の攪拌溶液に滴下した。反応物を０℃で２時間攪拌しその後室温に加温した。３時間後、反応物をＣｅｌｉｔｅを通して濾過し、溶媒を減圧を介して除去した。最終産物（１６０１ａ）をフラッシュクロマトグラフィーから回収した（６７％収率）。
Figure 0007082045000094
ｐＧａｌ（１７．１Ｅ）
α－ＮＡｃ－ガラクトサミン（Ｇｌａｃｔｏｓａｍｉｎｅ）－アミン－メタクリル酸（例えば、１５０５．１Ｄ）モノマーを使用して以下の条件を行い、１７．１Ｅを得た。いくつかの実施形態では、代わりにグルコサミンベースのポリマーを得るためにα－ＮＡｃ－グルコサミン－アミン－メタクリル酸モノマー（例えば、１５０５．２Ｄ）を使用できる。いくつかの実施形態では、ａは約０から約１５０、約１から約１００、約１から約５０、約１から約１０、または約１から約５の整数である。いくつかの実施形態では、ｂは約０から約１５０、約１から約１００、約１から約５０、約１から約１０、または約１から約５の整数である。
化合物１６０１ａ、１５０５．１Ｄ、アゾビスイソブチロニトリル（７８－６７－１）、およびＮ－（２－ヒドロキシプロピル）メタクリルアミド（２１４４２－０１－３）をＤＭＦ（１ｍｌ）に加えた。反応混合物を２０時間７０℃で攪拌する前に４凍結脱気サイクルに供した。ポリマー産物をアセトンからの沈殿を介して回収した。減圧下で過剰溶媒を除去した（５５％収率）。
実施例１７．２
ｔが１であり、Ｒ３がＮＨＡｃであり、かつＲ４がＯＨである式１５０７
Figure 0007082045000095
１７．２Ａ． ｔが１であり、Ｒ３がＮＨＡｃであり、かつＲ４がＯＨである式１５０２；２－（２－（２－クロロエトキシ）エトキシ）－α－ＮＡｃ－グルコサミン（１５０２．２Ａ）。
塩化アセチル（７５－３６－５）（４．３５ｍＬ、６１．０５ｍｍｏｌ）を２－（２’－クロロエトキシ）エタノール（６２８－８９－７）（４０ｍｌ）中のＤ－グルコサミン（７５１２－１７－６）（１０．０ｇ）の氷冷溶液に滴下した。混合物を４℃で１５分間攪拌し、その後７０℃の油浴に移した。反応を冷却コンデンサーで４時間混合したままにした。その後暗褐色溶液を冷却し、過剰の未反応のクロロエタノールを除去するために酢酸エチルおよびジクロロメタン（３：１、ｖ／ｖ）の４００ｍＬ溶液に注いだ。混合物を３０分間冷凍庫に入れ、その後暗褐色で粘着性の沈殿物からデカントした。沈殿物を無水エタノールに溶解し、活性炭を加えた。懸濁液を１．５時間混合し、その後Ｃｅｌｉｔｅを通して濾過し、エタノールで洗浄した。最後の工程で、真空中でエタノールを蒸発させ、１５０２．２Ａを得た（７６％収率）。
Figure 0007082045000096
１７．２Ｂ． ｔが１であり、Ｒ３がＮＨＡｃであり、かつＲ４がＯＨである式１５０３；２－（２－（２－アジドエトキシ）エトキシ）－α－ＮＡｃ－グルコサミン（１５０３．２Ｂ）。
化合物（１５０２．２Ａ）（５．０ｇ）を２０ｍｌのＮ，Ｎ－ジメチルホルムアミドに溶解した。その溶液に、アジ化ナトリウム（２６６２８－２２－８）を加えた（５．０ｇ）。懸濁液を油浴に入れ、８０℃で一晩攪拌した。一晩後、反応混合物をＣｅｌｉｔｅを通して濾過した。その後溶媒を高圧下で蒸発させて、油状の褐色物質を得た。最終産物１５０３．２Ｂをフラッシュクロマトグラフィーを介して精製した（７５．４％収率）。
Figure 0007082045000097
１７．２Ｃ． ｔが１であり、Ｒ３がＮＨＡｃであり、かつＲ４がＯＨである式１５０４；２－（２－（２－アミノエトキシ）エトキシ）－α－ＮＡｃ－グルコサミン（１５０４．２Ｃ）。
２０ｍＬのエタノール中の（１５０３．２Ｂ）（５．５ｇ）および１０％パラジウム炭素（ｃａ．５００ｍｇ）の懸濁液を、２バールの水素ガスの初期圧力を有するシュレンクフラスコ中で水素化した。還元プロセスはＴＬＣによって制御した。３時間後、反応が完了し、懸濁液をＣｅｌｉｔｅを通して濾過して１５０４．２Ｃを得た（６５％収率）。
Figure 0007082045000098
１７．２Ｄ． ｔが１であり、Ｒ３がＮＨＡｃであり、かつＲ４がＯＨである式１５０５；α－ＮＡｃ－グルコサミン－アミン－メタクリル酸（１５０５．２Ｄ）。
化合物１５０４．２Ｃ（４．５ｇ）を１０ｍＬのＮ，Ｎ－ジメチルホルムアミドに溶解した。その溶液に、トリエチルアミン（３ｍｌ）を加え、混合物を４℃に冷却した。その後、ペンタフルオロフェニルメタクリル酸（１３６４２－９７－２）（４．３８ｍｌ）を一定の攪拌を伴い滴下した。３０分後、氷浴を除去し、反応物を室温で次の４時間撹拌した。次に、溶媒を蒸発させ、残存物をシリカゲルに吸着させた。フラッシュクロマトグラフィー（ジクロロメタン：メタノール９５：５、ｖ／ｖ）を使用する粗物質の精製は、３．８ｇのＮＡｃ－グルコサミンモノマー１５０５．２Ｄを得る（７４％収率）。
実施例１８
Ｘ’がＯＶＡであり、ｍが１－３であり、ｎが７９であり、ｐが９０であり（３０Ｗ１＋６０Ｗ２）、ｑが４であり、ｔが１であり、Ｒ３がＮＨＡｃであり、Ｒ４がＯＨであり、Ｒ８がＣＭＰであり、かつＲ１０が２－ヒドロキシプロピルである式１ｍ’
１８Ａ． Ｘ’がＯＶＡであり、ｍが１－３であり、かつｎが７９である式１１０９
ｐＨ７．６ ＰＢＳ中の、Ｘ’がＯＶＡである式１０１’の溶液（１０ｍｇのエンドトキシン－遊離オボアルブミン）をエンドトキシンフリーのチューブ中でｎが７９である式１１０８（１０ｍｇ）に加えた。反応混合物を室温で混合した。１時間後、任意のコンジュゲートされていない式１１０８を遠心性サイズ排除クロマトグラフィーを介して除去し、式１１０９の対応産物を得、それをさらに精製せずに使用した。
１８Ｂ． Ｘ’がＯＶＡであり、ｍが１－３であり、ｎが７９であり、ｐが９０であり、ｑが４であり、ｔが１であり、Ｒ３がＮＨＡｃであり、Ｒ４がＯＨであり、Ｒ８がＣＭＰであり、かつＲ１０が２－ヒドロキシプロピルである式１ｍ’
実施例１８Ａで得られた式１１０９溶液を、エンドトキシンフリーのチューブ中で実施例１７Ｅで得られるような式１５０７（２０ｍｇ）に加え、室温で攪拌し、式１ｍ’の対応産物を得（“Ｆ１ｍ’－ＯＶＡ－ｍ１－３－ｎ７９－ｐ９０－ｑ－４－ＣＭＰ－ポリ－（ＥｔＰＥＧ１ＡｃＮ－１ＮＡｃＧＬＵ３０－ｒａｎ－ＨＰＭＡ６０”）、それをＳｕｐｅｒｄｅｘ ２００ ｐｒｅｐ グレードカラムを使用して高速タンパク質（ｆａｓｔ ｐｒｏｔｅｉｎ）液体クロマトグラフィー（ＦＰＬＣ）を介して反応混合物から精製し、さらに精製せずに使用した。
１８Ｃ． Ｎ－アセチル－Ｄ－ガラクトサミンを使用する、Ｘ’がＯＶＡであり、ｍが１－３であり、ｎが７９であり、ｐが９０であり、ｑが４であり、ｔが１であり、Ｒ３がＮＨＡｃであり、Ｒ４がＯＨであり、Ｒ８がＣＭＰであり、かつＲ１０が２－ヒドロキシプロピルである式１ｍ’
実施例１８Ｂの手順に従い、かつ実施例１７Ｆで得られるような式１５０７のガラクトシル化合物を置換することにより、式１ｍ’の対応するガラクトシル化合物が得られた（“Ｆ１ｍ’－ＯＶＡ－ｍ１－３－ｎ７９－ｐ９０－ｑ４－ＣＭＰ－ポリ－（ＥｔＰＥＧ１ＡｃＮ－１ＮＡｃＧＡＬ３０－ｒａｎ－ＨＰＭＡ６０”）。
１８Ｄ． Ｘ’がＯＶＡであり、ｍが１－３であり、ｎが７９であり、ｐが９０であり、ｑが４であり、ｔが１であり、Ｒ３がＮＨＡｃであり、Ｒ４がＯＨであり、Ｒ８がＣＭＰであり、かつＲ１０が２－ヒドロキシプロピルである式１ｍ’の他の化合物
実施例１８Ａ、１８Ｂおよび１８Ｃに記載される手順に従い、かつＯＶＡを以下に置換することにより：
・ アブシキシマブ、
・ アダリムマブ、
・ アガルシダーゼアルファ、
・ アガルシダーゼベータ－、
・ アルデスロイキン、
・ アルグルコシダーゼアルファ、
・ 第ＶＩＩＩ因子、
・ 第ＩＸ因子、
・ Ｌ－アスパラギナーゼ、
・ ラロニダーゼ、
・ オクトレオチド、
・ フェニルアラニンアンモニアリアーゼ、
・ ラスブリカーゼ、
・ ＧＡＤ－６５（配列番号：２）、
・ ＩＧＲＰ（配列番号：３）
・ ＭＢＰ（配列番号：４）、
・ ＭＯＧ（配列番号：５）、
・ ＰＬＰ（配列番号：６）、
・ ＭＢＰ１３－３２（配列番号：７）、
・ ＭＢＰ８３－９９（配列番号：８）、
・ ＭＢＰ１１１－１２９（配列番号：９）、
・ ＭＢＰ１４６－１７０（配列番号：１０）、
・ ＭＯＧ１－２０（配列番号：１１）、
・ ＭＯＧ３５－５５（配列番号：１２）、
・ ＰＬＰ１３９－１５４（配列番号：１３）、
・ ＭＡＲＴ１（配列番号：１４）、
・ チロシナーゼ（配列番号：１５）、
・ ＰＭＥＬ（配列番号：１６）、
・ アクアポリン４（配列番号：１７）、
・ Ｓ－アレスチン（配列番号：１８）、
・ ＩＲＢＰ（配列番号：１９）、
・ コンアラキン（ＵＮＩＰＲＯＴ Ｑ６ＰＳＵ６）、
・ 天然型アルファ－グリアジン“３３－ｍｅｒ”（配列番号：２０）、
・ 脱アミド化アルファ－グリアジン“３３－ｍｅｒ”（配列番号：２１）、
・ アルファ－グリアジン（配列番号：２２）、
・ オメガ－グリアジン（配列番号：２３）、
・ Ｆｅｌ ｄ １Ａ（ＵＮＩＰＲＯＴ Ｐ３０４３８）、
・ ネコアルブミン（ＵＮＩＰＲＯＴ Ｐ４９０６４）、
・ Ｃａｎ ｆ １（ＵＮＩＰＲＯＴ Ｏ１８８７３）、
・ イヌアルブミン（ＵＮＩＰＲＯＴ Ｐ４９８２２）、および
・ ＲｈＣＥ（ＵＮＩＰＲＯＴ Ｐ１８５７７）、
式１ｍ’の以下の対応するグルコシルおよびガラクトシル化合物が得られる：
・ Ｘ’はアブシキシマブであり、かつｍは１０であり、
・ Ｘ’はアダリムマブであり、かつｍは１１であり、
・ Ｘ’はアガルシダーゼアルファであり、かつｍは１４であり、
・ Ｘ’はアガルシダーゼベータであり、かつｍは１４であり、
・ Ｘ’はアルデスロイキンであり、かつｍは６であり、
・ Ｘ’はアルグルコシダーゼアルファであり、かつｍは１３であり、
・ Ｘ’は第ＶＩＩＩ因子であり、かつｍは１００であり、
・ Ｘ’は第ＩＸ因子であり、かつｍは１８であり、
・ Ｘ’はＬ－アスパラギナーゼであり、かつｍは５であり、
・ Ｘ’はラロニダーゼであり、かつｍは７であり、
・ Ｘ’はオクトレオチドであり、かつｍは１であり、
・ Ｘ’はフェニルアラニンアンモニアリアーゼであり、かつｍは１２であり、
・ Ｘ’はラスブリカーゼであり、かつｍは１２であり、
・ Ｘ’はＧＡＤ－６５（配列番号：２）であり、かつｍは８であり、
・ Ｘ’はＩＧＲＰ（配列番号：３）であり、かつｍは７であり、
・ Ｘ’はＭＢＰ（配列番号：４）であり、かつｍは６であり、
・ Ｘ’はＭＯＧ（配列番号：５）であり、かつｍは５であり、
・ Ｘ’はＰＬＰ（配列番号：６）であり、かつｍは８であり、
・ Ｘ’はＭＢＰ１３－３２（配列番号：７）であり、かつｍは１であり、
・ Ｘ’はＭＢＰ８３－９９（配列番号：８）であり、かつｍは１であり、
・ Ｘ’はＭＢＰ１１１－１２９（配列番号：９）であり、かつｍは１であり、
・ Ｘ’はＭＢＰ１４６－１７０（配列番号：１０）であり、かつｍは２であり、
・ Ｘ’はＭＯＧ１－２０（配列番号：１１）であり、かつｍは１であり、
・ Ｘ’はＭＯＧ３５－５５（配列番号：１２）であり、かつｍは２であり、
・ Ｘ’はＰＬＰ１３９－１５４（配列番号：１３）であり、かつｍは３であり、
・ Ｘ’はＭＡＲＴ１（配列番号：１４）であり、かつｍは４であり、
・ Ｘ’はチロシナーゼ（配列番号：１５）であり、かつｍは８であり、
・ Ｘ’はＰＭＥＬ（配列番号：１６）であり、かつｍは５であり、
・ Ｘ’はアクアポリン４（配列番号：１７）であり、かつｍは４であり、
・ Ｘ’はＳ－アレスチン（配列番号：１８）であり、かつｍは１２であり、
・ Ｘ’はＩＲＢＰ（配列番号：１９）であり、かつｍは２１であり、
・ Ｘ’はコンアラキンであり、かつｍは２１であり、
・ Ｘ’は天然型アルファ－グリアジン“３３－ｍｅｒ”（配列番号：２０）であり、かつｍは１であり、
・ Ｘ’は脱アミド化アルファ－グリアジン“３３－ｍｅｒ”（配列番号：２１）であり、かつｍは１であり、
・ Ｘ’はアルファ－グリアジン（配列番号：２２）であり、かつｍは１であり、
・ Ｘ’はオメガ－グリアジン（配列番号：２３）であり、かつｍは１であり、
・ Ｘ’はＦｅｌ ｄ １であり、かつｍは４であり、
・ Ｘ’はネコアルブミンであり、かつｍは１６であり、
・ Ｘ’はＣａｎ ｆ １であり、かつｍは６であり、
・ Ｘ’はイヌアルブミンであり、かつｍは２３であり、かつ
・ Ｘ’はＲｈＣＥであり、かつｍは１０である。
１８Ｅ． 式１ｈ’，１ｉ’、１ｊ’、１ｋ’、１Ｌ’、および１ｎ’の化合物
実施例１８Ｂ、１８Ｃおよび１８Ｄに記載される手順に従い、かつ式１１０９を以下：
・ 式８０２に置換することにより、式１ｈ’の対応するランダム共重合体を得、
・ 式９０２に置換することにより、式１ｉ’の対応するランダム共重合体を得、
・ 式１０３’の化合物で作製された式９０２に置換することにより、式１ｊ’の対応するランダム共重合体を得、
・ 式１００２に置換することにより、式１ｋ’の対応するランダム共重合体を得、
・ 式１０３’の化合物で作製された式１００２に置換することにより、式１Ｌ’の対応するランダム共重合体を得、かつ
・ 式１２０２に置換することにより、式１ｎ’の対応するランダム共重合体を得るだろう。
１８Ｆ． 式１ｈ’，１ｉ’、１ｊ’、１ｋ’、１Ｌ’、１ｍ’および１ｎ’の他の化合物
実施例１８Ｂ、１８Ｃ、１８Ｄおよび１８Ｅに記載される手順に従い、かつ式１５０７を実施例１７Ｇ、１７Ｈおよび１７Ｉに記載されるように調製された化合物に置換することにより、式１ｈ’、１ｉ’、１ｊ’、１ｋ’、１Ｌ’、１ｍ’および１ｎ’の対応する化合物が得られ、ここでｔは１以外であり、複数のｔ基を有し、かつグルコシルおよびガラクトシル部分の混合を有する。
実施例１９
Ｘ”がインスリン－Ｂであり、ｍが１であり、ｎが４であり、ｐが９０であり（３０Ｗ１＋６０Ｗ２）、ｔが１であり、Ｒ３がＮＨＡｃであり、Ｒ４がＯＨであり、Ｒ８がＣＭＰであり、かつＲ１０が２－ヒドロキシプロピルである式１ｃ’
１９Ａ． ｎが４であり、ｐが９０であり、ｔが１であり、Ｒ３がＮＨＡｃであり、Ｒ４がＯＨであり、Ｒ８がＣＭＰであり、かつＲ１０が２－ヒドロキシプロピルである式１６０２
２５ｍｌシュレンクフラスコに（（２Ｓ，３Ｓ，４Ｓ，５Ｒ，６Ｓ）－４，５－ジヒドロキシ－６－（ヒドロキシメチル）－２－（２－（２－メタクリルアミドエトキシ）エトキシ）テトラヒドロ－２Ｈ－ピラン－３－イル）カルバミン酸（２７２ｍｇ、０．７２ｍｍｏｌ）（例えば、実施例１７Ｄに記載されるように調製された式１５０５）、ＨＰＭＡ（２１１ｍｇ、１．４７ｍｍｏｌ）（式１５０６）、ｎが４であり、かつＲ８がＣＭＰである式１６０１のジチオ－ピリジル官能基化ｕＲＡＦＴ剤（１２．５ｍｇ、０．０２１７ｍｍｏｌ）、アゾビス（イソブチロニトリル（ｉｓｏｂｕｔｙｒｏｎｉｔｒｉｌ））（０．９８ｍｇ、０．００５ｍｍｏｌ）、および１．２ｍｌジメチルホルムアミドを充填した。反応混合物を４凍結脱気サイクルに供し、その後２０時間７０℃で攪拌した。式１６０２の対応するランダムポリマー産物（約３０Ｗ１基および約６０Ｗ２基を有する）をアセトン中の反応混合物を沈殿させることにより回収した。過剰アセトンを減圧で除去しランダムポリマー産物を得、それをさらに精製せずに使用した。
１９Ｂ． Ｘ”がインスリン－Ｂであり、ｍが１であり、ｎが４であり、ｐが９０であり（３０Ｗ１＋６０Ｗ２）、ｔが１であり、Ｒ３がＮＨＡｃであり、Ｒ４がＯＨであり、Ｒ８がＣＭＰであり、かつＲ１０が２－ヒドロキシプロピルである式１ｃ’
実施例１９Ａで得られた式１６０２溶液（２０ｍｇ）を２００μｌのジメチルホルムアミドに懸濁し、インスリン－Ｂ（１ｍｇ）を含有するエンドトキシンフリーのチューブに加え、３時間室温で攪拌し、式１ｃ’の対応産物を得た（“Ｆ１ｃ’－インスリン－Ｂ－ｍ１－ｎ４－ｐ９０－ＣＭＰ－ポリ－（ＥｔＰＥＧ１ＡｃＮ－１ＮＡｃＧＬＵ３０－ｒａｎ－ＨＰＭＡ６０”）。反応混合物をその後アセトン中で沈殿させ、Ｓｕｐｅｒｄｅｘ ２００ ｐｒｅｐ グレードカラムを使用して高速タンパク質（ｆａｓｔ ｐｒｏｔｅｉｎ）液体クロマトグラフィー（ＦＰＬＣ）を介して反応混合物から精製し、さらに精製せずに使用した。
１９Ｃ． Ｎ－アセチル－Ｄ－ガラクトサミンを使用する、Ｘ”がインスリン－Ｂであり、ｍが１であり、ｎが４であり、ｐが９０であり（３０Ｗ１＋６０Ｗ２）、ｔが１であり、Ｒ３がＮＨＡｃであり、Ｒ４がＯＨであり、Ｒ８がＣＭＰであり、かつＲ１０が２－ヒドロキシプロピルである式１ｃ’
実施例１９Ａおよび１９Ｂの手順に従い、かつ式１５０５を（（２Ｓ，３Ｓ，４Ｓ，５Ｓ，６Ｓ）－４，５－ジヒドロキシ－６－（ヒドロキシメチル）－２－（２－（２－メタクリルアミドエトキシ）エトキシ）テトラヒドロ－２Ｈ－ピラン－３－イル）カルバミン酸に置換することにより、式１ｃ’の対応するガラクトシル化合物が得られた（“Ｆ１ｃ’－インスリン－Ｂ－ｍ１－ｎ４－ｐ９０－ＣＭＰ－ポリ－（ＥｔＰＥＧ１ＡｃＮ－１ＮＡｃＧＡＬ３０－ｒａｎ－ＨＰＭＡ６０”）。
１９Ｄ． Ｘ”がＰ３１であり、ｍが１であり、ｎが４であり、ｐが９０であり（３０Ｗ１＋６０Ｗ２）、ｔが１であり、Ｒ３がＮＨＡｃであり、Ｒ４がＯＨであり、Ｒ８がＣＭＰであり、かつＲ１０が２－ヒドロキシプロピルである式１ｃ’
実施例１９Ｂおよび１９Ｃの手順に従い、かつインスリン－Ｂを２０ｍｇのＰ３１に置換することにより、Ｘ”がＰ３１である式１ｃ’の対応グルコシルおよびガラクトシル化合物が得られた。
１９Ｅ． 式１ｆ’および１ｇ’の化合物
実施例１９Ａおよび１９Ｂの手順に従い、かつ式１６０１のｕＲＡＦＴ剤を式６００’または７００’のｕＲＡＦＴ剤に置換することにより、式６０１’または７０１’の対応する化合物が得られ、式１０１’の化合物と接触させ、それぞれ式１ｆ’または式１ｇ’の対応する化合物を得た。
実施例２０
寛容モデルに対するＯＴ－１チャレンジ
２０Ａ． 上記実施例１４で示されるように、Ｆ１ａＡ－ＯＶＡ－ｍ４－ｎ８およびＦ１ｂ－ＯＶＡ－ｍ１－ｎ４－ｐ３４はアジュバントＯＶＡチャレンジ後のＯＶＡ特異的免疫応答を軽減した。
２０Ｂ． 全部で３ｘ１０５ＣＦＳＥ－標識化ＯＴＩ ＣＤ８＋Ｔ細胞および３ｘ１０５ＣＦＳＥ－標識化ＯＴＩＩ ＣＤ４＋Ｔ細胞をＣＤ４５．１＋レシピエントマウスに注射した。養子移入後１および６日で、マウスにＯＶＡ、Ｆ１ｍ’－ＯＶＡ－ｍ１－３－ｎ７９－ｐ９０－ｑ４－ＣＭＰ－ポリ－（ＥｔＰＥＧ１ＡｃＮ－１ＮＡｃＧＡＬ３０－ｒａｎ－ＨＰＭＡ６０［“ＯＶＡ－ｐ（Ｇａｌ－ＨＰＭＡ）”］、Ｆ１ｍ’－ＯＶＡ－ｍ１－３－ｎ７９－ｐ９０－ｑ４－ＣＭＰ－ポリ－（ＥｔＰＥＧ１ＡｃＮ－１ＮＡｃＧＬＵ３０－ｒａｎ－ＨＰＭＡ６０［“ＯＶＡ－ｐ（Ｇｌｕ－ＨＰＭＡ）”］または生理食塩水単独を含有する生理食塩水溶液をｉ．ｖ．投与した。その遊離またはコンジュゲートされた形態のＯＶＡを含有する製剤で処置されたそれぞれのマウスは２０μｇＯＶＡのモル当量を受けた。養子移入後１５日で、マウスにそれぞれ後肢の肉球（ｐａｄ）に皮内注射し、２５μＬの生理食塩水中の５μｇのＯＶＡおよび２５ｎｇの超高純度Ｅ．ｃｏｌｉＬＰＳ（ＩｎｖｉｖｏＧｅｎ）でチャレンジした（Ｈｏｃｋ方法：１０μｇのＯＶＡおよび５０ｎｇのＬＰＳの総用量）。チャレンジ４日後にマウスを屠殺し、脾臓および流入領域リンパ節細胞を再刺激のために単離した。細胞内サイトカインのフローサイトメトリー解析について、細胞を１ｍｇ／ｍＬＯＶＡまたは１μｇ／ｍＬのＳＩＩＮＦＥＫＬペプチド（Ｇｅｎｓｃｒｉｐｔ）存在下で３時間再刺激した。ブレフェルジン（Ｂｒｅｆｅｌｄｉｎ）－Ａ（５μｇ／ｍＬ；Ｓｉｇｍａ）を加え、再刺激を、染色およびフローサイトメトリー解析の前にさらに３時間再開した。
図８Ａ－８Ｂに示されるように、ＯＶＡ－ｐ（Ｇａｌ－ＨＰＭＡ）およびＯＶＡ－ｐ（Ｇｌｕ－ＨＰＭＡ）の投与は、ＯＴ－Ｉ細胞（総ＣＤ８＋Ｔ細胞集団のうち）およびＯＴ－ＩＩ細胞（総ＣＤ４＋Ｔ細胞集団のうち）の割合における有意な減少をもたらした。図８Ａは、ＯＶＡ－ｐ（Ｇａｌ－ＨＰＭＡ）およびＯＶＡ－ｐ（Ｇｌｕ－ＨＰＭＡ）投与が、ＯＶＡ単独（例えば、コンジュゲートされていない）の反復投与を受けるマウスと比較してＯＴ－Ｉ細胞を有意に減少させたことを示す。ＯＶＡおよびＬＰＳチャレンジのみを受けるマウス（例えば、生理食塩水注射を受けた）と比較する場合に、減少はさらに大きかった。注目すべきことに、ＯＶＡ－ｐ（Ｇａｌ－ＨＰＭＡ）およびＯＶＡ－ｐ（Ｇｌｕ－ＨＰＭＡ）での処置から生じる減少は、ナイーブマウスと有意に異ならないレベルまでＯＴ－Ｉ細胞レベルを減少させた。同様に、図８Ｂに示されるように、ＯＶＡ－ｐ（Ｇａｌ－ＨＰＭＡ）およびＯＶＡ－ｐ（Ｇｌｕ－ＨＰＭＡ）投与は、コンジュゲートされていないＯＶＡまたはチャレンジ単独を受けるマウスと比較してＯＴ－ＩＩ細胞における有意な減少をもたらした。これらのデータは、抗原としてＯＶＡと遭遇する場合に、反応するように特異的に設計された細胞の産物が減少し、それが、ＯＶＡへの免疫応答における減少を示すことを示す。
さらに、ＯＶＡ－ｐ（Ｇａｌ－ＨＰＭＡ）およびＯＶＡ－ｐ（Ｇｌｕ－ＨＰＭＡ）の投与は、マウスのリンパ節および脾臓における抗原特異的制御性Ｔ細胞における有意な増加をもたらした。図９Ａに示されるように、これらのコンジュゲートのいずれかでの処置はリンパ節におけるＣＤ２５＋／ＦｏｘＰ３＋細胞における有意な増加を誘導した。同様に、図９Ｂは、ＣＤ２５＋／ＦｏｘＰ３＋ＯＴ－ＩＩ細胞における有意な増加を示す（ｖｓ．ナイーブ、チャレンジ（生理食塩水単独）、およびＯＶＡ処置動物）。これらのデータは、制御性Ｔ細胞産物がアップレギュレートされることを示し、免疫系がＯＶＡに対するその応答に関して負に調節される（例えば、応答性が低い、またはより寛容である）ことを示す。
肝臓標的化部分との抗原複合体の送達後の抗原に対する増加した寛容を示す上記のデータをさらに構築すると図１０に示されるデータとなる。この実験では、インターフェロンガンマ（ＩＦＮγ）を発現する細胞の割合を測定した。ＩＦＮγは抗原特異的免疫が発症した後にＣＤ４およびＣＤ８Ｔ細胞により産生される。図１０に示されるように、生理食塩水前チャレンジのみを受けるマウスが、ＩＦＮγを発現する総ＯＴＩ細胞のおよそ６０％を有する。対照的に、ＯＶＡ－処置マウスが、約４０％ＩＦＮγ－発現細胞を有する。ナイーブマウスとほぼ同じで、ＯＶＡ－ｐ（Ｇａｌ－ＨＰＭＡ）およびＯＶＡ－ｐ（Ｇｌｕ－ＨＰＭＡ）－処置マウスのＯＴＩ細胞が、２０％未満のＩＦＮγ陽性細胞を有する。ＩＦＮγにおけるこの有意な減少は、抗原特異的免疫を引き起こす機構の減少を示す。まとめると、本明細書のさらなる開示を考慮して、これらのデータは、肝臓へ抗原を標的化すること、その抗原への抗原特異的免疫応答を減少させることができることを実証する。具体的には、グルコースまたはガラクトースでの標的化は、抗原特異的免疫に関与する細胞集団における有意なシフトをもたらし、シフトは特異的な抗原に対する寛容を実証する。
２０Ｃ．実施例２０Ａまたは２０Ｂに記載される手順に従い、かつ試験したＯＶＡ組成物を式１のその他の組成物に置換し、それに続いてコンジュゲートされていない抗原Ｘでチャレンジすることにより、処置動物は特異的な抗原Ｘに対する寛容を実証する。
実施例２１
寛容モデルに対するＯＴＩ／ＯＴＩＩチャレンジ
実施例２０のモデルさらに、ＯＴＩＩ細胞（ＣＤ８＋Ｔ細胞ＯＴＩ細胞に類似する、ＣＤ４５．２＋マウスからのＣＤ４＋Ｔ細胞である）を使用して、異なる用量レジメンをさらに使用して、Ｔ制御性応答を誘導し、かつワクチン媒介抗原チャレンジへの引き続く応答を予防する、Ｆ１ｍ’－ＯＶＡ－ｍ１－３－ｎ７９－ｐ９０－ｑ４－ＣＭＰ－ポリ－（ＥｔＰＥＧ１ＡｃＮ－１ＮＡｃＧＡＬ３０－ｒａｎ－ＨＰＭＡ６０［“ＯＶＡ－ｐ（Ｇａｌ－ＨＰＭＡ）”］およびＦ１ｍ’－ＯＶＡ－ｍ１－３－ｎ７９－ｐ９０－ｑ４－ＣＭＰ－ポリ－（ＥｔＰＥＧ１ＡｃＮ－１ＮＡｃＧＬＵ３０－ｒａｎ－ＨＰＭＡ６０［“ＯＶＡ－ｐ（Ｇｌｕ－ＨＰＭＡ）”］の能力を実証した。０日目にＣＤ４５．１＋マウス（群あたりｎ＝８マウス）に３ｘ１０５ＣＦＳＥ－標識化ＯＴＩおよび３ｘ１０５ＣＦＳＥ－標識化ＯＴＩＩ細胞を養子移入した。１、４および７日目に、免疫寛容誘導用量またはコントロール用量を投与した。１つのレジメンでは、ＯＶＡは、１日に２．５μｇ、４日に２．５μｇ、および７日に１６μｇの用量で提供した。他には、ＯＶＡは、同一の総用量について、１日に７μｇ、４日に７μｇ、および７日に７μｇの用量で提供した。同様に、ｐＧａｌ－ＯＶＡおよびｐＧｌｕ－ＯＶＡをそれぞれその他の群に同一の用量で１日に２．５μｇ、４日に２．５μｇ、および７日に１６μｇまたは１日に７μｇ、４日に７μｇ、および７日に７μｇ、ここですべての用量はＯＶＡ等価用量ベースである、を投与した。最終群では、同日に生理食塩水を投与した。１４日目に、レシピエントマウスをその後皮内注射によりリポ多糖（５０ｎｇ）でアジュバントされたＯＶＡ（１０μｇ）でチャレンジした。１９日目に流入領域リンパ節の特性評価を行い、欠失が実際に起こったかどうか、および養子移入した細胞から制御性Ｔ細胞が誘導されたかどうかを決定した。
多大な寛容が図１１Ａ－１１Ｂに示されるようにＣＤ４＋Ｔ細胞コンパートメントで誘導された。総細胞頻度の観点では、両方のＯＶＡ－ｐ（Ｇａｌ－ＨＰＭＡ）およびＯＶＡ－ｐ（Ｇｌｕ－ＨＰＭＡ）の両方の用量レジメンは、図１１Ａに示されるように、チャレンジ後の同等の低レベルのＯＴＩＩ細胞をもたらし、ＯＶＡの処置によるものより統計的に低い（＊および＃は、ｐ＜０．０５を示し、＊＊および＃＃は、ｐ＜０．０１を示す。転写因子ＦｏｘＰ３および受容体ＣＤ２５の存在についてフローサイトメトリーにより残っている細胞を解析した場合、ＦｏｘＰ３＋ＣＤ２５＋細胞（Ｔ制御性細胞のマーカー）の数は、図１１Ｂに示されるように、ＯＶＡ単独での処置と比較して統計的に有意に上昇した。ここに、Ｔ制御性細胞の数は、両方のＯＶＡ－ｐ（Ｇａｌ－ＨＰＭＡ）およびＯＶＡ－ｐ（Ｇｌｕ－ＨＰＭＡ）処置での、７μｇ／７μｇ／７μｇ用量レジメンと比較して２．５μｇ／２．５μｇ／１６μｇ用量レジメンで統計的に高かった。
図１２Ａ－１２Ｂに示されるように、多大な寛容はまた、ＣＤ８＋Ｔ細胞コンパートメントにおいて誘導された。総細胞頻度の観点では、両方のＯＶＡ－ｐ（Ｇａｌ－ＨＰＭＡ）およびＯＶＡ－ｐ（Ｇｌｕ－ＨＰＭＡ）の両方の用量レジメンは、図１２Ａに示されるように、チャレンジ後の同等の低レベルのＯＴＩ細胞をもたらし、ＯＶＡの処置によるものより統計的に低い（＊および＃は、ｐ＜０．０５を示し、＊＊および＃＃は、ｐ＜０．０１を示す）。ＯＶＡ抗原への再曝露後のＩＦＮ－γの発現についてフローサイトメトリーにより残っている細胞を解析した場合、この炎症性サイトカインを発現する細胞の頻度は、図１２Ｂに示されるように、両方のＯＶＡ－ｐ（Ｇａｌ－ＨＰＭＡ）およびＯＶＡ－ｐ（Ｇｌｕ－ＨＰＭＡ）処置での７μｇ／７μｇ／７μｇ用量レジメンと比較して２．５μｇ／２．５μｇ／１６μｇ用量レジメンを受ける群において減少した。
実施例２２
ＢＤＣ２．５研究
２２Ａ． トランスジェニックＮＯＤ－ＢＤＣ２．５マウスのＣＤ４＋Ｔ細胞は糖尿病性のＢＤＣ－２．５特異的制御性Ｔ細胞受容体（ＴＣＲ）を発現する。ＢＤＣ２．５Ｔ細胞は膵島ベータ－細胞自己抗原、クロモグラニン－Ａを特異的に標的化する。Ｔ細胞をトランスジェニックＮＯＤ－ＢＤＣ２．５マウスの脾臓から単離し、ＢＤＣ２．５Ｔ細胞受容体を発現するＴ細胞を刺激する、１０％（ｖｏｌ／ｖｏｌ）ＦＢＳ、０．０５ｍＭ β－メルカプトエタノール、１％ピューロマイシン／ストレプトマイシン、および０．５μＭ Ｐ３１ペプチド、膵島ベータ－細胞自己抗原クロモグラニン－Ａのミモトープ補充ＤＭＥＭで４日間培養した。Ｐ３１での刺激後に、細胞を、基底ＤＭＥＭで洗浄し、フローサイトメトリーにより純度を解析し、および５×１０６Ｔ細胞を正常血糖ＮＯＤ／ＳｈｉＬｔＪマウスにｉ．ｖ．注射した。養子移入後８時間および３日に、マウスに生理食塩水、１０μｇＦ１ｃ’－Ｐ３１－ｍ１－ｎ４－ｐ９０－ＣＭＰ－ポリ－（ＥｔＰＥＧ１ＡｃＮ－１ＮＡｃＧＬＵ３０－ｒａｎ－ＨＰＭＡ６０、１０μｇＦ１ｃ’－Ｐ３１－ｍ１－ｎ４－ｐ９０－ＣＭＰ－ポリ－（ＥｔＰＥＧ１ＡｃＮ－１ＮＡｃＧＡＬ３０－ｒａｎ－ＨＰＭＡ６０、または等モル用量のＰ３１ペプチドをｉ．ｖ．投与した。４日目から、ＡｃｃｕＣｈｅｃｋ Ａｖｉｖａ ｇｌｕｃｏｍｅｔｅｒ（Ｒｏｃｈｅ）を使用して非空腹時血糖レベルを測定することにより糖尿病発症をモニターした。マウスは、血糖値≧３００ｍｇ／ｄＬで糖尿病と見なした。２回の高血糖測定後、マウスを安楽死させた。この実験から得られたデータは、図１３の時間経過に示す。示されるように、生理食塩水を受けるマウスは、養子移入の４－８日以内に糖尿病血糖レベルを発症した。同様に、Ｐ３１（コンジュゲートされていない）を受けるマウスは、移入後約７－１０日以内に糖尿病血糖レベルを発症した。全く対照的に、Ｆ１ｃ’－Ｐ３１－ｍ１－ｎ４－ｐ９０－ＣＭＰ－ポリ－（ＥｔＰＥＧ１ＡｃＮ－１ＮＡｃＧＬＵ３０－ｒａｎ－ＨＰＭＡ６０またはＦ１ｃ’－Ｐ３１－ｍ１－ｎ４－ｐ９０－ＣＭＰ－ポリ－（ＥｔＰＥＧ１ＡｃＮ－１ＮＡｃＧＡＬ３０－ｒａｎ－ＨＰＭＡ６０を受けるマウスは、４０日以上比較的安定した血糖値（＜２００ｍｇ／ｄｌ）を維持した。
２２Ｂ． 実施例２１Ａに記載される手順に従い、かつ試験した組成物を式１のその他の組成物に置換することにより、ここで、Ｘがインスリン－Ｂであり、またはプロインスリン、プレプロインスリン、グルタミン酸デカルボキシラーゼ－６５（ＧＡＤ－６５またはグルタミン酸デカルボキシラーゼ２）、ＧＡＤ－６７、グルコース－６ホスファターゼ２（ＩＧＲＰまたは膵島特異的グルコース６ホスファターゼ触媒サブユニット関連タンパク質）、インスリノーマ－関連タンパク質２（ＩＡ－２）、およびインスリノーマ－関連タンパク質２β（ＩＡ－２β）、ＩＣＡ６９、ＩＣＡ１２（ＳＯＸ－１３）、カルボキシペプチダーゼＨ、Ｉｍｏｇｅｎ ３８、ＧＬＩＭＡ ３８、クロモグラニン－Ａ、ＨＳＰ－６０、カルボキシペプチダーゼＥ、ペリフェリン、２型グルコース輸送体、肝細胞癌－腸－膵臓／膵臓の関連タンパク質、Ｓ１００β、グリア線維性酸性タンパク質、再生遺伝子ＩＩ、膵臓十二指腸ホメオボックス１、筋強直性ジストロフィーキナーゼ、膵島特異的グルコース－６－ホスファターゼ触媒サブユニット－関連タンパク質およびＳＳＴ Ｇ－タンパク質共役型受容体１－５である、例えばＦ１ａＡ－インスリン－ｍ２－ｎ８０、Ｆ１ａＡ－インスリン－ｍ２－ｎ１２、Ｆ１ａＡ－インスリン－ｍ２－ｎ３３、Ｆ１ａＡ－インスリン－ｍ２－ｎ４０、Ｆ１ａＡ－インスリン－ｍ２－ｎ４３、Ｆ１ａＡ－インスリン－ｍ２－ｎ５０、Ｆ１ａＡ－インスリン－ｍ２－ｎ６０、Ｆ１ａＡ－インスリン－ｍ２－ｎ７５、Ｆ１ａＡ－インスリン－ｍ２－ｎ８４、Ｆ１ｂ－インスリン－ｍ２－ｎ４－ｐ３４－２ＮＡｃＧＡＬ、Ｆ１ｍ－インスリン－ｍ２－ｎ８０－ｐ３０－ｑ４－ＣＭＰ－２ＮＨＡｃ、Ｆ１ｍ－インスリン－ｍ２－ｎ６２－ｐ３０－ｑ８－ＣＭＰ－２ＯＨ、Ｆ１ｎ－インスリン－ｍ２－ｎ１－ｐ３０－ｑ４－ＣＭＰ－２ＮＨＡｃ、Ｆ１ｃ’－インスリン－Ｂ－ｍ１－ｎ４－ｐ９０－ＣＭＰ－ポリ－（ＥｔＰＥＧ１ＡｃＮ－１ＮＡｃＧＬＵ３０－ｒａｎ－ＨＰＭＡ６０またはＦ１ｃ’－インスリン－Ｂ－ｍ１－ｎ４－ｐ９０－ＣＭＰ－ポリ－（ＥｔＰＥＧ１ＡｃＮ－１ＮＡｃＧＡＬ３０－ｒａｎ－ＨＰＭＡ６０など、処置ＮＯＤマウスにおける血糖値は生理食塩水を受ける動物と比較して安定したままである。
実施例２３
ＮＯＤマウス
２３Ａ． ＮＯＤ／ＳｈｉＬｔマウスなどの非肥満糖尿病（ＮＯＤ）マウスは自己免疫性糖尿病の自発性の発症に感受性で、それは様々な膵臓の自己抗原への自己免疫応答の結果である。膵島への様々な白血球の浸潤により特徴づけられる膵島炎の結果、ＮＯＤマウスにおいて糖尿病を発症する。糖尿病が発症すると、膵島の白血球の浸潤、それに続いてインスリン産生の有意な減少、および血糖レベルにおける対応する増加が起こる。
本開示において提供される糖尿病についての治療、治療のための組成物および方法の有効性を評価するために、５週齢から開始して、ＮＯＤ／ＳｈｉＬｔマウスのコホートで糖尿病発症をＡｃｃｕＣｈｅｃｋ Ａｖｉｖａ ｇｌｕｃｏｍｅｔｅｒ（Ｒｏｃｈｅ）を使用して非空腹時血糖レベルを測定することにより毎週モニターした。６週齢で開始して、マウスをコントロールおよび試験群（それぞれの群についてｎ＝１５）に分け、それぞれ毎週生理食塩水、１０μｇのＦ１ｃ’－インスリン－Ｂ－ｍ１－ｎ４－ｐ９０－ＣＭＰ－ポリ－（ＥｔＰＥＧ１ＡｃＮ－１ＮＡｃＧＬＵ３０－ｒａｎ－ＨＰＭＡ６０、または１０μｇのＦ１ｃ’－インスリン－Ｂ－ｍ１－ｎ４－ｐ９０－ＣＭＰ－ポリ－（ＥｔＰＥＧ１ＡｃＮ－１ＮＡｃＧＬＵ３０－ｒａｎ－ＨＰＭＡ６０（１０μｇ）の静脈内注射で処置した。注射は10週間連続して継続した。糖尿病でない動物の割合を経時的に測定した。マウスは、２連続血糖値≧３００ｍｇ／ｄＬまたは１つの血糖値≧４５０ｍｇ／ｄＬで糖尿病と見なした。糖尿病と考えられるマウスを安楽死させた。
図１４は、上記のようにして得られたデータを、経時的に測定された糖尿病でない動物の割合として示す。Ｆ１ｃ’－インスリン－Ｂ－ｍ１－ｎ４－ｐ９０－ＣＭＰ－ポリ－（ＥｔＰＥＧ１ＡｃＮ－１ＮＡｃＧＬＵ３０－ｒａｎ－ＨＰＭＡ６０で処置されたマウスは塗りつぶした四角として示される。Ｆ１ｃ’－インスリン－Ｂ－ｍ１－ｎ４－ｐ９０－ＣＭＰ－ポリ－（ＥｔＰＥＧ１ＡｃＮ－１ＮＡｃＧＡＬ３０－ｒａｎ－ＨＰＭＡ６０で処置されたマウスは塗りつぶした三角形として示される。生理食塩水で処置されたマウスは塗りつぶしたダイヤモンドとして示される。経時的に生理食塩水処置動物から収集されたデータから容易に理解できるように、早くも１１週齢に自発性の糖尿病があった。有病率は経時的に増加し（グラフの下降傾向で示される）、６０％の試験した動物が２０週までに糖尿病を発症する。図１４に示されるように、ＮＯＤマウスをＦ１ｃ’－インスリン－Ｂ－ｍ１－ｎ４－ｐ９０－ＣＭＰ－ポリ－（ＥｔＰＥＧ１ＡｃＮ－１ＮＡｃＧＬＵ３０－ｒａｎ－ＨＰＭＡ６０またはＦ１ｃ’－インスリン－Ｂ－ｍ１－ｎ４－ｐ９０－ＣＭＰ－ポリ－（ＥｔＰＥＧ１ＡｃＮ－１ＮＡｃＧＡＬ３０－ｒａｎ－ＨＰＭＡ６０のいずれかで処置することは、生理食塩水を受けた動物と比較してＮＯＤマウスにおける糖尿病発症の発生率を減少させた。データは、本明細書で開示されるリンカーおよび肝臓標的化部分と結合されたインスリンの投与が、産生される様々な膵臓の自己抗原に対する自己免疫応答を減少させることによりＩ型糖尿病の発症を首尾よく減少させことができることを実証する。
２３Ｂ． 実施例２２Ａに記載される手順に従い、かつ試験した組成物を式１のその他の組成物に置換することにより、ここで、Ｘはインスリン－Ｂまたはプロインスリン、プレプロインスリン、グルタミン酸デカルボキシラーゼ－６５（ＧＡＤ－６５またはグルタミン酸デカルボキシラーゼ２）、ＧＡＤ－６７、グルコース－６ホスファターゼ２（ＩＧＲＰまたは膵島特異的グルコース６ホスファターゼ触媒サブユニット関連タンパク質）、インスリノーマ－関連タンパク質２（ＩＡ－２）、およびインスリノーマ－関連タンパク質２β（ＩＡ－２β）、ＩＣＡ６９、ＩＣＡ１２（ＳＯＸ－１３）、カルボキシペプチダーゼＨ、Ｉｍｏｇｅｎ ３８、ＧＬＩＭＡ ３８、クロモグラニン－Ａ、ＨＳＰ－６０、カルボキシペプチダーゼＥ、ペリフェリン、２型グルコース輸送体、肝細胞癌－腸－膵臓／膵臓の関連タンパク質、Ｓ１００β、グリア線維性酸性タンパク質、再生遺伝子ＩＩ、膵臓十二指腸ホメオボックス１、筋強直性ジストロフィーキナーゼ、膵島特異的グルコース－６－ホスファターゼ触媒サブユニット－関連タンパク質およびＳＳＴ Ｇ－タンパク質共役型受容体１－５であり、例えば、Ｆ１ａＡ－インスリン－ｍ２－ｎ８０、Ｆ１ａＡ－インスリン－ｍ２－ｎ１２、Ｆ１ａＡ－インスリン－ｍ２－ｎ３３、Ｆ１ａＡ－インスリン－ｍ２－ｎ４０、Ｆ１ａＡ－インスリン－ｍ２－ｎ４３、Ｆ１ａＡ－インスリン－ｍ２－ｎ５０、Ｆ１ａＡ－インスリン－ｍ２－ｎ６０、Ｆ１ａＡ－インスリン－ｍ２－ｎ７５、Ｆ１ａＡ－インスリン－ｍ２－ｎ８４、Ｆ１ｂ－インスリン－ｍ２－ｎ４－ｐ３４－２ＮＡｃＧＡＬ、Ｆ１ｍ－インスリン－ｍ２－ｎ８０－ｐ３０－ｑ４－ＣＭＰ－２ＮＨＡｃ、Ｆ１ｍ－インスリン－ｍ２－ｎ６２－ｐ３０－ｑ８－ＣＭＰ－２ＯＨ、Ｆ１ｎ－インスリン－ｍ２－ｎ１－ｐ３０－ｑ４－ＣＭＰ－２ＮＨＡｃ、Ｆ１ｃ’-Ｐ３１－ｍ１－ｎ４－ｐ９０－ＣＭＰ－ポリ－（ＥｔＰＥＧ１ＡｃＮ－１ＮＡｃＧＬＵ３０－ｒａｎ－ＨＰＭＡ６０またはＦ１ｃ’－Ｐ３１－ｍ１－ｎ４－ｐ９０－ＣＭＰ－ポリ－（ＥｔＰＥＧ１ＡｃＮ－１ＮＡｃＧＡＬ３０－ｒａｎ－ＨＰＭＡ６０など、処置ＮＯＤマウスにおける糖尿病発症の発生率は、生理食塩水を受ける動物と比較して減少した。
実施例２４
生体分布
抗原糖ポリマーコンジュゲートの生体分布を調べるために、我々は、ｐ（Ｇａｌ－ＨＰＭＡ）、ｐ（Ｇｌｕ－ＨＰＭＡ）、ｐ（Ｇａｌβ－ＨＰＭＡ）、またはｐ（Ｇｌｕβ－ＨＰＭＡ）のいずれかにコンジュゲートされた蛍光標識化ＯＶＡまたは蛍光標識化ＯＶＡでＢＡＬＢ／ｃマウスを処置した。ｐ（Ｇａｌ－ＨＰＭＡ）およびｐ（Ｇｌｕ－ＨＰＭＡ）の骨格に付着された糖部分はＣ１位でα－配座におけるポリマーに結合しており、一方で、ｐ（Ｇａｌβ－ＨＰＭＡ）およびｐ（Ｇｌｕβ－ＨＰＭＡ）の骨格に付着された糖はＣ１位でβ－配座におけるポリマーに結合している。ＯＶＡはＤｙ７５０で標識化された。全処置は１４０μｌの尾静脈注射を介してされる。それぞれの動物は蛍光単位に基づいて当量の蛍光コンジュゲートで処置した。３時間後、動物を安楽死させ、それぞれの動物の肝臓を生理食塩水で灌流し、その後肝臓および脾臓の両方を収集し、適切なフィルターセットを備えたＩＶＩＳスペクトルシステムを介して画像化した。
図１５は、ＯＶＡまたはＯＶＡ糖ポリマーコンジュゲートで処置された動物からの肝臓（Ａ）および脾臓（Ｂ）の蛍光シグナルの代表的な画像を示す。製剤は以下の通りである：１．ＯＶＡ、２．Ｆ１ｍ’－ＯＶＡ７５０－ｍ１－３－ｎ７９－ｐ９０-ｑ４－ＣＭＰ－ポリ－（ＥｔＰＥＧ１ＡｃＮ－１ＮＡｃＧＡＬβ３０－ｒａｎ－ＨＰＭＡ６０）［“ＯＶＡ－ｐ（Ｇａｌβ－ＨＰＭＡ）”］、３．Ｆ１ｍ’－ＯＶＡ７５０－ｍ１－３－ｎ７９－ｐ９０－ｑ４－ＣＭＰ－ポリ－（ＥｔＰＥＧ１ＡｃＮ－１ＮＡｃＧＡＬ３０－ｒａｎ－ＨＰＭＡ６０）［“ＯＶＡ－ｐ（Ｇａｌ－ＨＰＭＡ）”］、４．Ｆ１ｍ’－ＯＶＡ７５０－ｍ１－３－ｎ７９－ｐ９０－ｑ４－ＣＭＰ－ポリ－（ＥｔＰＥＧ１ＡｃＮ－１ＮＡｃＧＬＵβ３０－ｒａｎ－ＨＰＭＡ６０）［“ＯＶＡ－ｐ（Ｇｌｕβ－ＨＰＭＡ）”］、５．Ｆ１ｍ’－ＯＶＡ７５０－ｍ１－３－ｎ７９－ｐ９０－ｑ４－ＣＭＰ－ポリ－（ＥｔＰＥＧ１ＡｃＮ－１ＮＡｃＧＬＵ３０－ｒａｎ－ＨＰＭＡ６０）［“ＯＶＡ－ｐ（Ｇｌｕ－ＨＰＭＡ）”］。上述のように処置された動物からの肝臓の画像は、糖ポリマーコンジュゲートがコンジュゲートされていない抗原の取り込みと比較して、有意にそれらの肝臓（または脾臓）にコンジュゲートされた抗原の送達を増強することを示す。コンジュゲートされていないＯＶＡで処置された動物からの肝臓は、ｐ（Ｇａｌ－ＨＰＭＡ）、ｐ（Ｇｌｕ－ＨＰＭＡ）、ｐ（Ｇａｌβ－ＨＰＭＡ）、またはｐ（Ｇｌｕβ－ＨＰＭＡ）のいずれかにコンジュゲートされたＯＶＡで処置された動物からの肝臓と比較して、低い蛍光シグナルを有する。さらに、上述のように処置された動物から取得された脾臓の画像は、抗原を糖ポリマーにコンジュゲートすることは、脾臓への抗原の送達を減少させることを示す。コンジュゲートされていないＯＶＡで処置された動物からの脾臓は、ｐ（Ｇａｌ－ＨＰＭＡ）、ｐ（Ｇｌｕ－ＨＰＭＡ）、ｐ（Ｇａｌβ－ＨＰＭＡ）、またはｐ（Ｇｌｕβ－ＨＰＭＡ）のいずれかにされたコンジュゲートＯＶＡで処置された動物からの脾臓と比較して有意に多くの蛍光シグナルを有する。これらのデータはそれらが本明細書中の実験データにより実証されるように、肝臓および／または脾臓に対して寛容が望まれる抗原の増強した標的化が、抗原への減少した免疫応答をもたらした（すなわち寛容を誘導した）ことを実証することにおいて顕著である。本明細書で開示される幾つかの実施形態に従って、この誘導された寛容は、抗原への曝露に関連するであろう望ましくない免疫応答を治療し、減少させ、予防し、またはその他改善できる。
実施例２５
７日ＯＴＩ／ＯＴＩＩ表現型解析
抗原特異的Ｔ細胞増殖を誘導し、並びに発現およびＴ細胞アネルギーおよび欠失の様々なマーカーの提示をアップレギュレートする、様々な糖ポリマー－抗原コンジュゲートの能力を比較するために、４００，０００カルボキシフルオレセインスクシンイミジルエステル（ＣＳＦＥ）－標識化ＯＴＩ細胞の注入を受けたマウスをＯＶＡまたはｐ（Ｇａｌ－ＨＰＭＡ）、ｐ（Ｇｌｕ－ＨＰＭＡ）、ｐ（Ｇａｌβ－ＨＰＭＡ）、またはｐ（Ｇｌｕβ－ＨＰＭＡ）のいずれかにコンジュゲートされたＯＶＡのいずれかの静脈内注射で処置した（以下の製剤で：Ｆ１ｍ’－ＯＶＡ－ｍ１－３－ｎ７９－ｐ９０－ｑ４－ＣＭＰ－ポリ－（ＥｔＰＥＧ１ＡｃＮ－１ＮＡｃＧＡＬ３０－ｒａｎ－ＨＰＭＡ６０）［“ＯＶＡ－ｐ（Ｇａｌ－ＨＰＭＡ）”］；Ｆ１ｍ’－ＯＶＡ－ｍ１－３－ｎ７９－ｐ９０－ｑ４－ＣＭＰ－ポリ－（ＥｔＰＥＧ１ＡｃＮ－１ＮＡｃＧＬＵ３０－ｒａｎ－ＨＰＭＡ６０）［“ＯＶＡ－ｐ（Ｇｌｕ－ＨＰＭＡ）”］；Ｆ１ｍ’－ＯＶＡ－ｍ１－３－ｎ７９－ｐ９０－ｑ４－ＣＭＰ－ポリ－（ＥｔＰＥＧ１ＡｃＮ－１ＮＡｃＧＡＬβ３０－ｒａｎ－ＨＰＭＡ６０）［“ＯＶＡ－ｐ（Ｇａｌβ－ＨＰＭＡ）”］；Ｆ１ｍ’－ＯＶＡ－ｍ１－３－ｎ７９－ｐ９０－ｑ４－ＣＭＰ－ポリ－（ＥｔＰＥＧ１ＡｃＮ－１ＮＡｃＧＬＵβ３０－ｒａｎ－ＨＰＭＡ６０）［“ＯＶＡ－ｐ（Ｇｌｕβ－ＨＰＭＡ）”］。その遊離またはコンジュゲートされた形態のいずれかのＯＶＡで処置された動物は、実験の１日および３日目に１０μｇのＯＶＡを受けた。実験の詳細のタイムラインは図１６Ａに示される。７日後、マウスを屠殺し、動物の脾臓細胞を収集し、Ｔ細胞アネルギー、欠失、およびメモリーに特徴的な表現型マーカーについてフローサイトメトリーを介して解析した。
図１６Ｂは、ＯＶＡ－糖ポリマーコンジュゲートがコンジュゲートされていないＯＶＡで処置された動物において見られるＯＴＩ増殖の量と比較して多くのＯＴＩ Ｔ細胞増殖を誘導することを示す。上述のように、本明細書で開示される幾つかの実施形態によれば、これらのデータは、本明細書で開示される糖標的化部分が抗原特異的Ｔ細胞増殖－抗原に対する寛容を誘導することにおける重要な工程の増加をもたらすことをさらに支持する。興味深いことに、β－結合糖を含有するＯＶＡ－糖ポリマーコンジュゲートで処置された動物はα－結合を介してポリマーに結合している同一の糖部分を含有する糖ポリマーで処置された動物と比較して、有意に多い増殖を誘導した（例えば、ｐ（Ｇａｌβ－ＨＰＭＡ）ｖｓ．ｐ（Ｇａｌ－ＨＰＭＡ））。意外にも、組成物全体の１つの要素におけるこの配座変化はＴ細胞増殖の観点から増強した有効性をもたらし、出願人は（理論に縛られることなく）組成物の成分とそれらのそれぞれの生理学的標的との相乗的相互作用の結果を信じる。さらに、全ＯＶＡ－糖ポリマーコンジュゲート、ＯＶＡ－ｐ（Ｇａｌ－ＨＰＭＡ）を除く、で処置された動物から取得されたＯＴＩ細胞の集団は、ＯＶＡで処置された動物から取得された細胞と比較してアポトーシスマーカーアネキシンＶ＋の有意に多くの表面発現を示した（図１６Ｃを参照されたい）。上述のデータと一致して、これは、より大きいパーセンテージの抗原特異的Ｔ細胞がアポトーシスカスケードについて標的化されているか、アポトーシスカスケードにあることを示している。図１６Ｄに示されるように、β－結合糖を含有するＯＶＡ－糖ポリマーコンジュゲートで処置された動物から取得されたＯＴＩ細胞は、α－結合並びに遊離ＯＶＡで処置された動物を介してポリマーに結合している同一の糖部分を含有する糖ポリマーで処置された動物と比較してＴ細胞疲弊マーカーＰＤ－１の増加した発現を示した。長期間の寛容を維持するために、治療は、長く持続する抗原特異的メモリーＴ細胞の数をを減少させなければならない。図１６Ｅおよび１６Ｆは、ＯＶＡ－ｐ（Ｇａｌβ－ＨＰＭＡ）およびＯＶＡ－ｐ（Ｇｌｕβ－ＨＰＭＡ）の両方がメモリーＴ細胞についてマーカーを発現するＯＴＩ細胞における有意な減少を誘導することを示す。ＯＶＡ－ｐ（Ｇａｌβ－ＨＰＭＡ）およびＯＶＡ－ｐ（Ｇｌｕβ－ＨＰＭＡ）の両方が遊離ＯＶＡで処置された動物と比較してメモリーＴ細胞の数における５倍減少を誘導する。これらのデータは、本明細書で開示される組成物が抗原（“ゴールドスタンダードな”抗原としてこの分野での一般の受け入れに起因するため、ここではＯＶＡが選択される）に対する寛容を誘導できること、および幾つかの実施形態では、意外にも寛容の誘導を増強できること（抗原特異的Ｔ細胞増殖、抗原特異的Ｔ細胞上の増加したアネキシンＶ発現、抗原特異的Ｔ細胞での増加した疲弊マーカー発現、およびメモリーＴ細胞の減少した発現により少なくとも部分的に表される）をさらに示す。
実施例２６
グルコース－結合抗原－ＢＤＣ２．５研究
この実験は、ＣＤ４ Ｔ細胞駆動自己免疫の発症を阻害するｐ（Ｇｌｕ）－抗原コンジュゲートの能力を試験するために実施した。抗原特異的Ｔ細胞誘導自己免疫性糖尿病のマウスモデルを使用した。自己免疫性糖尿病を糖尿病自己抗原クロモグラニンＡについてＴ細胞受容体を有する活性化ＢＤＣ２．５Ｔ細胞を免疫不全マウスに移すことにより誘導した。レシピエントマウスはその後ｐ３１と呼ばれる自己抗原ペプチドミモトープ、またはｐ３１－ｐ（Ｇｌｕ）コンジュゲートで処置した。
プロトコル：雌のＢＤＣ２．５トランスジェニックマウスから新たに単離した脾臓細胞を、１０％ＦＢＳ、０．０５ｍＭ β－メルカプトエタノール、１％ピューロマイシン／ストレプトマイシン、および０．５μＭ Ｐ３１ペプチド補充ＤＭＥＭで４日間刺激した。刺激後に、細胞を、ＤＭＥＭで洗浄し、ＤＭＥＭで再懸濁し、正常血糖ＮＯＤ／Ｓｃｉｄマウスに静脈内注射した。養子移入後８時間で、マウスに生理食塩水（ナイーブ）、２μｇのｐ３１、またはｐ３１－ｐＧｌｕコンジュゲート（幾つかの実施形態では、アルファ配座が使用され得るが、ベータ配座のグルコースがこの実験において使用される）として２μｇのｐ３１を静脈内投与した。最初の治療後３日で、マウスを生理食塩水、２μｇのｐ３１、またはｐ３１－ｐＧｌｕコンジュゲートとして２μｇのｐ３１で再び処置した。１日目から開始して、それぞれマウスの非空腹時血糖レベルをＡｃｃｕｃｈｅｃｋ Ａｖｉｖａ ｇｌｕｃｏｍｅｔｅｒを使用して測定した。マウスは、１回の血糖測定で４５０ｍｇ／ｄＬ以上、または２連続血糖値が３５０ｍｇ／ｄＬ以上を受けると糖尿病と見なした。全群は７マウスであった。
結果：図１７に示されるように、脾臓細胞の移入の５日以内にナイーブマウスは糖尿病を発症し始めた（高血糖により測定される）。約７日以内に、全てのナイーブマウスが高血糖を発症した。コントロール組成物（ｐ３１；塗りつぶした円）で処置されたこれらのマウスはナイーブマウス後ゆっくりと高血糖を発症し始めた。移入後８日までに、全てのｐ３１－処置マウスが高血糖を発症した。全く対照的に、ｐ３１－ｐ（Ｇｌｕ）コンジュゲートの投与（塗りつぶした三角形）はナイーブ動物およびＰ３１ペプチド単独で処置された動物と比較して有意に長い期間正常な血糖レベルを維持するマウスをもたらす。移入後１５日で、１００％のｐ３１－ｐＧｌｕマウスが正常な血糖レベル有したままであった。
これらの結果はｐ３１－ｐ（Ｇｌｕ）コンジュゲートがマウスにおける高血糖の発症を予防することを実証する。従って、本明細書で開示される幾つかの実施形態では、かかるコンジュゲートは、糖尿病の発症を予防することにおける使用について効果的である。さらなる別の実施形態では、ｐ（Ｇｌｕ）コンジュゲートは、既存の糖尿病の進行を減少させることにおける使用について効果的であり、かつさらなる別の実施形態では、既存の糖尿病を逆転させることにおける使用について効果的である。さらなる実施形態では、膵島ベータ－細胞自己抗原クロモグラニン－Ａのその他のミモトープが使用され得る。さらに、本明細書で開示される幾つかの実施形態によれば、免疫寛容誘導組成物の抗原部分として、完全長のタンパク質としてクロモグラニン－Ａ、またはそれらのフラグメントが利用され得る。さらに、糖尿病に関する本明細書で開示されるその他の抗原は、いくつかの実施形態では、インスリン、プロインスリン、プレプロインスリン、ＧＡＤ－６５、ＧＡＤ－６７、ＩＧＲＰ、ＩＡ－２、ＩＡ－２β、それらのフラグメント、またはそれらのミモトープを含むが、それらに限定されない抗原が使用され得る。抗原に関するその他の糖尿病は、本明細書で開示される。さらに、幾つかの実施形態では、本明細書で開示されるように、その他の自己免疫疾患に関する抗原が使用され得る。さらなる別の実施形態では、ここでクロモグラニンＡが利用されるように、外来性抗原、移植抗原またはその他の型／分類が使用されてもよく、かつ本明細書で開示される組成物の能力の非限定例としてこのモデルを使用して寛容の誘導において使用されてもよい。
実施例２７
寛容のメモリー
本明細書で開示される免疫寛容誘導組成物が寛容のメモリーを確立できることを実証するために以下の実験を実施した。本明細書で開示される免疫寛容誘導組成物（ｐ（Ｇｌｕ）－抗原コンジュゲートが非限定例としてここで使用される）の投与により誘導される制御性Ｔ細胞（Ｔｒｅｇｓ）が治療の最初の投与後の長期の寛容を確立できるかどうかを決定するために、マウスをＯＴＩＩ Ｔ細胞の注入、それに続いてｐ（Ｇｌｕ）－ＯＶＡコンジュゲートの投与で前処理した。これらのマウスをその後、３週間後ＯＶＡ特異的Ｔ細胞の注入および抗原チャレンジでチャレンジした。任意の寛容誘導効果がＴｒｅｇの結果であったことを実証するために、ｐ（Ｇｌｕ）－ＯＶＡで処置されたマウスをＴｒｅｇを枯渇させることが示されている抗ＣＤ２５抗体で注射した。
プロトコル：０日目に、Ｃ５７ＢＬ／６マウスに４５０，０００ ＯＴＩＩ細胞の静脈内注入を受けさせ、その後、１および４日目に生理食塩水または遊離ＯＶＡまたはｐ（Ｇｌｕ）－ＯＶＡコンジュゲートとして１．５μｇのＯＶＡで処置した（ＯＶＡは寛容が望まれる抗原の非限定例として本明細書中に使用される；幾つかの実施形態では、アルファ配座が使用され得るが、ベータ配座のグルコースがこの実験において使用される）。７日目に、マウスは生理食塩水、または遊離ＯＶＡまたはｐ（Ｇｌｕ）－ＯＶＡコンジュゲートとして１５μｇのＯＶＡの最終の治療を受けた。１５日目に、ｐ（Ｇｌｕ）－ＯＶＡで処置された動物の半分を３００μｇの制御性Ｔ細胞（Ｔｒｅｇｓ）を枯渇させることが示されている抗ＣＤ２５抗体の腹腔内注射で処置した。２９日目に、マウスは７５０，０００ ＯＴＩＩ Ｔ細胞および７５０，０００ ＯＴＩ Ｔ細胞の注入を受けた。翌日、動物をそれぞれの４つの足の裏で５μｇのＯＶＡおよび５０ｎｇの超高純度ＬＰＳでチャレンジした。抗原チャレンジ５日後、マウスを屠殺し、流入領域リンパ節におけるＯＴＩおよびＯＴＩＩ Ｔ細胞の数をフローサイトメトリーにより評価した。（群ｎ＝５：チャレンジ（すなわちビヒクル処置動物）、ＯＶＡ、ｐ（Ｇｌｕ）－ＯＶＡ、ｐ（Ｇｌｕ）－ＯＶＡ＋αＣＤ２５）。このプロトコルは模式的に図１８に示される。
結果：この実験の結果は図１９Ａ－１９Ｂに示される。図１９Ａは、抗原チャレンジ後の残存するＯＴＩ Ｔ細胞を示す（総ＣＤ８＋細胞の割合として）。図１９Ｂは、抗原チャレンジ後の残存するＯＴＩＩ Ｔ細胞を示す（総ＣＤ４＋細胞の割合として）。免疫寛容誘導組成物を欠くＬＰＳチャレンジおよびＯＶＡを受けるそれらのマウスは、有意に上昇した流入領域リンパ節におけるＯＴＩおよびＯＴＩＩ細胞を示した。ｐＧｌｕ－ＯＶＡを受けるそれらのマウスは、ＯＴＩおよびＯＴＩＩ細胞の両方における有意な減少を示した。抗ＣＤ２５抗体の投与によるｐＧｌｕ－ＯＶＡによって誘導される寛容の廃止はｐＧｌｕ－ＯＶＡ－誘導寛容におけるＴｒｅｇの役割があることを実証する。まとめると、これらのデータは、本明細書で開示される免疫寛容誘導組成物が制御性Ｔ細胞の誘導を介して長く持続する寛容を誘導できることを示す。長く持続する寛容は、本明細書で開示される組成物の継続的な投与の必要性を減少させる（またはいくつかの実施形態では、排除する）ため、これは幾つかの実施形態では利点である。言われているように、いくつかの実施形態において、反復投与が任意に行われる。
実施例２８
寛容（内在性）のメモリー
本明細書で開示される免疫寛容誘導組成物が、内在性のＴ細胞から寛容のメモリーを確立できることを実証するために以下の実験を実施した。この実験は実施例２７と同様に実施したが、マウスはドナーＯＴＩＩ Ｔ細胞の最初の注入を受けない。
内在性のＴ細胞集団からのＴｒｅｇはｐ（Ｇｌｕ）－抗原コンジュゲートにより誘導され得、長期の寛容を示すかどうかを決定するために、マウスをｐ（Ｇｌｕ）－ＯＶＡコンジュゲートで処置した。それらをその後、ＯＶＡ特異的Ｔ細胞および抗原チャレンジの注入で３週間後チャレンジした。実証された寛容誘導効果が内在性Ｔｒｅｇｓの結果であるかどうか調べるために、マウスをｐ（Ｇｌｕ）－ＯＶＡで処置し、その後抗ＣＤ２５抗体で処置した。
プロトコル：０および３日目に、ＢＬ６／Ｃ５７マウスは生理食塩水または遊離ＯＶＡまたはｐ（Ｇｌｕ）－ＯＶＡコンジュゲートとして１．５μｇのＯＶＡの静脈内注入を受けた（幾つかの実施形態では、アルファ配座が使用され得るが、ベータ配座のグルコースがこの実験において使用される）。６日目に、マウスは生理食塩水、または遊離ＯＶＡまたはｐ（Ｇｌｕ）－ＯＶＡコンジュゲートとして１５μｇのＯＶＡの最終の治療を受けた。１４日目に、ｐ（Ｇｌｕ）－ＯＶＡで処置された動物の半分を３００μｇの抗ＣＤ２５抗体の腹腔内注射で処置した。２８日目に、マウスは７５０，０００ ＯＴＩＩおよび７５０，０００ ＯＴＩ Ｔ細胞の注入を受けた。翌日、動物をそれぞれの４つの足の裏で５μｇのＯＶＡおよび５０ｎｇの超高純度ＬＰＳでチャレンジした。抗原チャレンジ５日後、マウスを屠殺し、流入領域リンパ節におけるＯＴＩおよびＯＴＩＩ Ｔ細胞の数をフローサイトメトリーにより評価した。（群ｎ＝５：チャレンジ（すなわちビヒクル処置動物）、ＯＶＡ、ｐ（Ｇｌｕ）－ＯＶＡ、ｐ（Ｇｌｕ）－ＯＶＡ＋αＣＤ２５）。このプロトコルは模式的に図２０に示される。
結果：この実験の結果は図２１Ａ－２１Ｂに示される。図２１Ａは、抗原チャレンジ後の残存するＯＴＩ Ｔ細胞を示す（総ＣＤ８＋細胞の割合として）。図２１Ｂは、抗原チャレンジ後の残存するＯＴＩＩ Ｔ細胞を示す（総ＣＤ４＋細胞の割合として）。免疫寛容誘導組成物を欠くＬＰＳチャレンジおよびＯＶＡを受けるそれらのマウスは、有意に上昇した流入領域リンパ節におけるＯＴＩおよびＯＴＩＩ細胞を示した。ｐＧｌｕ－ＯＶＡを受けるそれらのマウスは、比較してＯＴＩおよびＯＴＩＩ細胞の両方における有意な減少を示した。抗ＣＤ２５抗体の投与によるｐＧｌｕ－ＯＶＡによって誘導される寛容の廃止は内在性のＴ細胞集団由来のＴｒｅｇがｐＧｌｕ－抗原組成物による寛容誘導において重要な役割を果たすことを実証する。まとめると、これらのデータは、本明細書で開示される免疫寛容誘導組成物が内在性の制御性Ｔ細胞の誘導を介して長く持続する寛容を誘導できることを示す。長く持続する寛容は、本明細書で開示される組成物の継続的な投与の必要性を減少させる（またはいくつかの実施形態では、排除する）ため、これは幾つかの実施形態では利点である。言われているように、いくつかの実施形態において、反復投与が任意に行われる。さらに、これらのデータは、外因性Ｔ細胞でレシピエントのＴ細胞を補充することは寛容の誘導に必要ではないことを示す。むしろ、Ｔ細胞の内在性プールは長期の寛容をもたらすのに適切な数で制御性Ｔ細胞を提供するのに十分である。
実施例２９
免疫寛容誘導組成物の予防的投与は、引き続く抗体生成を減少させる
本明細書で開示されるように、幾つかの実施形態では、免疫寛容誘導組成物は目的の抗原に対する免疫応答の減少、治療、予防またはその他改善に有用である。いくつかの実施形態では、従って、免疫寛容誘導組成物の究極的な使用、例えば、予防 対 治療、組成物の投与を受ける前に対象の現在の状態によって決定される。本実験は本明細書で開示される免疫寛容誘導組成物が免疫寛容誘導組成物の予防的投与を通して特異的な抗原への抗体生成の程度を減少させるために使用され得ることを実証するために行われた。
プロトコル：実験設計を図２２に示す。前処理について、２群あった、ｐ－Ｇｌｕ－アスパラギナーゼ（高用量）を含む１５μｇの免疫寛容誘導組成物を受けるものおよび２．５μｇのｐ－Ｇｌｕ－アスパラギナーゼ（低用量）を受けるもの（幾つかの実施形態では、アルファ配座が使用され得るが、ベータ配座のグルコースがこの実験において使用される）。これらの前処理工程は工程“Ａ”として図２２に示される。アスパラギナーゼは、寛容が望まれる抗原の非限定例としてこの実験において使用されることを留意されたい。上述のように、多くのその他の抗原、それらのフラグメント、またはそれらのミモトープはまた、実施形態により使用され得る。前処理の後、または野生型アスパラギナーゼ（ＷＴ－Ａｓｎ）および混合群の実験プロトコルの開始に、動物に１５μｇのアスパラギナーゼいずれかのまたは１２．５μｇのアスパラギナーゼと２．５μｇのｐＧｌｕ－アスパラギナーゼの組み合わせを投与した。これらの投与は、図２２において工程“Ｂ”としてを示される。全実験群について、工程“Ｃ”は１０μＬの血液試料の収集を表す。
結果：この実験の結果は図２３に示される。およそ２日から始まり、３および４の相対値まで安定して増加する抗アスパラギナーゼ抗体力価における増加を示すトレースはアスパラギナーゼ単独の投与の結果である。対照的に、高用量または低用量アスパラギナーゼのいずれかでの前処理は、抗アスパラギナーゼ抗体の生成を有意に減少させ、および５９日間の試験プロトコールを通して比較的低い値で一貫して抗体力価を保持した。陰性コントロール群（抗原ナイーブ）は、抗原特異的抗体の発症を示さない。
これらのデータは目的の抗原への既存の免疫応答を治療し、または減少させることに加えて、幾つかの実施形態では、本明細書で開示される免疫寛容誘導組成物はまた、最初の免疫応答を予防することにおいて使用され得ることを実証する。この実験に示されるように、前処理として投与された目的の抗原に結合した高および低用量の糖標的化治療剤の両方が目的の抗原に対する抗体の生成を改善した。幾つかの実施形態では、外因性治療薬が患者に投与される場合にかかるアプローチが特に効果的である。いくつかのかかる実施形態では、治療薬に依存して、免疫寛容誘導組成物は、目的の抗原として治療薬全体を含む必要は無い（いくつかの実施形態では、治療薬全体が含まれるが）、むしろ、治療薬のフラグメント、治療薬の特定のエピトープ、または治療薬の抗原性領域のミモトープを含むことができる。いくつかの実施形態では、治療薬がタンパク質薬である。さらに、いくつかの実施形態では、免疫寛容誘導組成物のより長いおよび／またはより頻繁な前処理投与は、目的の抗原に対する抗体の生成をさらにより減少させのに役立ってもよい。しかしながら、いくつかの実施形態では、１回の前処理工程で十分であり得る。
実施例３０
免疫寛容誘導組成物は多発性硬化症を改善する
上述のように、自己免疫応答を含む免疫応答に関連する多様な疾患は、本明細書で開示される免疫寛容誘導組成物の生成および使用を通して治療できる。自己免疫の文脈（ｃｏｎｔｅｘｔ）において使用される非限定例として、本実験は多発性硬化症（ＭＳ）の治療における免疫寛容誘導組成物の有効性を決定するために設計された。
ＭＳ関連免疫寛容誘導組成物を、多発性硬化症のマウスモデル（実験的自己免疫脳脊髄炎、ＥＡＥ）で試験した。モデルにおけるワクチン接種について使用される自己抗原はミエリンオリゴデンドロサイト糖タンパク質（ＭＯＧ）由来のペプチド、アミノ酸番号３５－５５（ＭＯＧ３５－５５；配列番号：２４）であった。モデルにおける治療に使用される自己抗原は少し長いペプチド配列（ＭＯＧ３０－６０；配列番号：２５）であり、上記で特定されるワクチン接種ペプチドを含有していた。その長い治療配列は抗原提示細胞によるプロセシングにするために使用され、その結果、抗原提示細胞による取り込みの不存在下で、可溶性ペプチドが細胞－表面主要組織適合遺伝子複合体に結合する傾向を減少させた。
プロトコル：図２４Ｂに示される治療免疫寛容誘導組成物での実験プロトコルは図２４Ａに示される。ＭＯＧ３５－５５／ＣＦＡで免疫することによりドナーＢ６．ＳＪＬマウスＥＡＥを誘導した。１１日後、それらの脾臓細胞を収集し、を３日間ＭＯＧ３５－５５ペプチド、抗ＩＦＮγ抗体およびＩＬ－１２のある培地で再刺激した。得られた脳炎誘発細胞をマウスのレシピエント群に注射し、ＭＳ症状を発症させた。群サイズはそれぞれ１０マウスであり、その半分を疾患のピーク（１１日）でを屠殺し、半分を実験の最後（２０日）で屠殺した。体重を週に３回測定し、疾患状態を毎日スコア化し、盲検化した。コントロールペプチド（ＭＯＧ３０－６０）、糖標的化ペプチド（ｐＧｌｕ－ＭＯＧ３０－６０；（幾つかの実施形態では、ベータ配座が使用され得るが、アルファ配座のグルコースがこの実験において使用される）、またはビヒクル（生理食塩水）が０、３、および６日目に０．８μｇまたは４．０μｇ用量のいずれかで与えられる。陽性有効性治療コントロール（ＦＴＹ７２０）は研究期間中毎日与えられた。ＦＴＹ７２０（フィンゴリモド）はＭＳについて第ＩＩ相臨床試験で有効であると考えられるｆｉｒｓｔ－ｉｎ－ｃｌａｓｓのスフィンゴシン１－リン酸（Ｓ１Ｐ）受容体モジュレーターである。
図２５Ａは、コントロール動物と比較して疾患発症を遅延させる免疫寛容誘導組成物の能力の評価を示す。見てわかるように、１１日に（コントロール群についての疾患症状のピーク）、０．８μｇのｐＧｌｕ－ＭＯＧ３０－６０の投与（塗りつぶした三角形）は、ＥＡＥ疾患スコアにおける有意な減少をもたらした（ＭＯＧペプチド単独と比較して）。図２５ＢはＭＳと関連する減量の減少に関するデータを示す。ＥＡＥ疾患スコアと同様に、ｐＧｌｕ－ＭＯＧ３０－６０は、実験の１１日に有意に減少した減量を示した（図２５Ｂ；ＭＯＧ単独と比較して）。対照的に、ペプチド単独群およびコントロール群は実験の同じ時点で体重のおよそ２５％の損失を示した。
図２６Ａはより高い、４μｇ用量のｐＧｌｕ－ＭＯＧ３０－６０の疾患発症遅延の評価に対応する。意外にも、疾患発症における遅延は顕著に改善した（ＭＯＧ単独およびＦＴＹ７２０の両方に対して有意であり、処置群におけるマウス（塗りつぶした三角形）は実験１４日まで非ゼロ（ｎｏｎｚｅｒｏ）ＥＡＥ疾患スコアを示さなかった。対照的に、６日までに、それぞれのその他の実験群はＭＳのサインを示し、増加したＥＡＥ疾患スコアにより証明される。再度、ＥＡＥ疾患スコアと同様により高い、４μｇ用量のｐＧｌｕ－ＭＯＧ３０－６０は、減量における有意な減少をもたらした。１１日に、ｐＧｌｕ－ＭＯＧ３０－６０群（閉じた三角形）は本質的に０減量を有していたが、全てのその他の群は体重を失っていた（ＦＴＹ７２０群において～２．５グラムおよびＭＯＧ単独およびコントロール群において～５グラム、図２６Ｂを参照されたい）。従って、より高い、４μｇ用量のｐＧｌｕ－ＭＯＧ３０－６０は（ＭＯＧ単独およびＦＴＹ７２０の両方に対して）実質的に全ての実験にわたって持続した体重の保持を有意に改善した。
上述のように、この特定の実験は、本明細書で開示される幾つかの実施形態に記載の免疫寛容誘導組成物が、対象が目的の抗原、ここでは自己免疫疾患、多発性硬化症に関連する抗原を生成する免疫応答を減少させるためにどのように使用され得るかの非限定例であった。前述したように、その他の抗原、自己抗原、治療用タンパク質、上記のいずれかに記載のフラグメントもしくは特異的エピトープ、または上記のいずれかに記載のミモトープはまた、免疫寛容を誘導するために本明細書中に提供される開示に従ってうまく使用できる。
実施例３１
ｐＧａｌおよびｐＧｌｕベータコンジュゲートの生体分布
本明細書で開示されるｐＧａｌおよびｐＧｌｕコンジュゲートにより標的化される肝臓の細胞型を決定するためにこの実験を実施した。
プロトコル：マウスを、蛍光色素Ｄｙ－６４９（ＯＶＡ６４９）で蛍光標識された１００μｇのＯＶＡ、１００μｇのｐＧｌｕβ（ＯＶＡ６４９－ｐＧｌｕβ）にコンジュゲートされたＯＶＡ、または１００μｇのｐＧａｌβ（ＯＶＡ６４９－ｐＧｌｕβ）にコンジュゲートされたＯＶＡで、尾静脈注射を介して処置した。３時間後、これらのマウスを屠殺し、肝臓を収集し、単一の細胞懸濁液にプロセシングし、密度勾配遠心分離法を介して分離した。様々な肝臓の細胞型を、その後タンパク質含量についてフローサイトメトリーを介して解析した（例えば、ＯＶＡ６４９の測定）。
結果：結果は、ＯＶＡ６４９－ｐＧａｌβおよびＯＶＡ６４９－ｐＧｌｕβコンジュゲートの両方が、ＯＶＡ６４９と比較して肝臓類洞内皮細胞（ＬＳＥＣ）を標的とする点でより効率的であることを示す（図２７Ａ）。ＯＶＡ６４９で処置された動物から取得されたＬＳＥＣと比較して、ＯＶＡ６４９－ｐＧａｌβで処置された動物から取得されたＬＳＥＣは平均蛍光強度（ＭＦＩ）が２倍増加し、かつＯＶＡ６４９－ｐＧｌｕβで処置された動物から取得されたＬＳＥＣはＭＦＩが２．５倍増加した。
クッパー細胞もまた、ＯＶＡ６４９－ｐＧｌｕβコンジュゲートにより効率的に標的化された。ＯＶＡ６４９－ｐＧｌｕβで処置された動物でＯＶＡ６４９－ｐＧｌｕβを取り込んだクッパー細胞のパーセンテージは、ＯＶＡ６４９を取り込んだクッパー細胞の割合より有意に大きかった（図２７Ｂ）。従って、幾つかの実施形態では、クッパー細胞を標的化することが望ましいことがある場合、ベータ配座におけるｐＧｌｕが、使用される。すなわち、或る実施形態では、ｐＧａｌコンジュゲートもまた、任意に使用され得る。
クッパー細胞に加えて、ＣＤ１１ｃ＋細胞もまた、ＯＶＡ６４９－ｐＧｌｕβを効率的に取り込んだ。ＯＶＡ６４９－ｐＧｌｕβを取り込んだＣＤ１１ｃ＋細胞のパーセンテージは、ＯＶＡ６４９により標的化されたＣＤ１１ｃ＋の割合より有意に大きかった（図２７Ｃ）。従って、幾つかの実施形態では、ＣＤ１１Ｃ＋細胞を標的化することが望ましいことがある場合、ベータ配座におけるｐＧｌｕが使用される。すなわち、或る実施形態では、ｐＧａｌコンジュゲートもまた、任意に使用される。
興味深いことに、ＯＶＡ６４９－ｐＧｌｕβおよびＯＶＡ６４９－ｐＧａｌβコンジュゲートの両方が、ＯＶＡ６４９と比較して肝細胞を効率的に標的化した。図２７Ｄ参照。しかしながら、ＯＶＡ６４９－ｐＧａｌβを取り込んだ肝細胞のパーセンテージは、ＯＶＡ６４９－ｐＧｌｕβにより標的化された肝細胞の割合より大きかった。従って、幾つかの実施形態では、従って、肝細胞を標的化することが望ましいことがある場合、ベータ配座におけるｐＧａｌは使用される。すなわち、或る実施形態では、ｐＧｌｕコンジュゲートはまた、任意に使用され得る。
興味深いことに、星状細胞を標的化する遊離ＯＶＡおよびＯＶＡ－糖ポリマーコンジュゲートの能力の解析は、対照的な結果を示した。図２７Ｅは、ＯＶＡ－糖ポリマーコンジュゲートののいずれかよりも効率的に、ＯＶＡが星状細胞を標的化することを示す。
幾つかの実施形態では、ｐＧｌｕおよびｐＧａｌコンジュゲートの組み合わせが望ましいことがあり、２つの型の組成物は、肝臓（および肝臓における様々な細胞型）を標的化するために相乗的に相互作用する。また、幾つかの実施形態では、アルファおよびベータ配座におけるコンジュゲートの混合物はまた、使用され得る。本明細書で開示されるその他の実験と同様に、ＯＶＡの使用は、寛容が望まれる抗原非限定例である。本明細書で提供される本開示に基づいて、本明細書で開示されるその他の抗原、それらのフラグメント、およびそれらのミモトープはまた、糖標的化部分にコンジュゲートされ得、かつそれらへの寛容が誘導され得る。本明細書で開示される幾つかの実施形態によれば、この誘導された寛容は抗原への曝露に関連する望ましくない免疫応答を治療し、減少させ、予防し、またはその他改善することができる。
本開示は、その特定の実施形態を参照して記載したが、当業者により開示の真の意図および範囲から逸脱せずに、様々な変形を行うことができ、等価物を置換することができると理解されるべきである。さらに、本開示の目的、意図および範囲へ、多くの改変を特定の状況、材料、物質の組成物、プロセス、プロセス工程または工程に適応させることができる。全てのかかる改変は添付の特許請求の範囲内であることが意図される。出典明示により組み込まれるように、それぞれの個々の刊行物、特許、特許出願、インターネットサイト、または受託番号／データベース配列が具体的かつ個々に示されているのと同一の程度まで、全目的のために引用されたすべての刊行物、特許、特許出願、インターネットサイト、および受託番号／データベース配列（ポリヌクレオチドおよびポリペプチド配列の両方を含む）がそれらの全体が出典明示により組み込まれる。
上述の実施形態の特定の特徴および態様の様々な組み合わせまたはサブコンビネーションを作製してもよく、かつそれでもなお１つ以上の本発明に該当することがあると意図される。さらに、ある実施形態に関連する任意の特定の特徴、態様、方法、特質（ｐｒｏｐｅｒｔｙ）、特性（ｃｈａｒａｃｔｅｒｉｓｔｉｃ）、品質、属性、要素等の本明細書の開示は、本明細書に記載されたその他の全ての実施形態で使用され得る。従って、開示される実施形態の様々な特徴および態様は開示される発明の様々な態様を形成するために互いに組み合わせるか、または置き換えることができると理解されたい。従って、本明細書に開示される本発明の範囲は上述の特定の開示される実施形態により限定されるべきではないことが意図される。さらに、本発明は様々な改変、および代替形態を受け得るが、それらの特定の実施例は図面に示されており、かつ本明細書において詳細に記載されている。しかしながら、本発明は開示される特定の形態または方法に限定されないが、むしろ、本発明は記載の様々な実施形態および添付の請求項の意図および範囲に含まれる全ての改変、等価物、および代替物を網羅しようとするものであると理解されるべきである。本明細書で開示される任意の方法は記載の順番により行われる必要はない。本明細書で開示される方法は、実施者（ｐｒａｃｔｉｔｉｏｎｅｒ）がする特定の行為を含む；しかしながら、明示的または暗示的のいずれかにより、それらはまた、これら行為の任意の第三者の指示を含むことができる。例えば、“糖標的化免疫寛容誘導組成物を投与する”などの行為は、“糖標的化免疫寛容誘導組成物の投与することを指示する”ことを含む。さらに、本開示の特徴または態様がマーカッシュグループの観点で記載される場合、当業者は本開示はまた、それにより、任意のマーカッシュグループの個々のメンバーまたはメンバーのサブグループの観点で記載されることを認識するであろう。
本明細書で開示される範囲はまた、任意のおよびすべての重複、部分範囲（ｓｕｂ－ｒａｎｇｅ）、およびそれらの組み合わせを包含する。“まで”、“少なくとも”、“より大きい，”、“未満，”、“の間”等などの用語は、記載の数字を含む。“約”または“およそ”などの用語の前に付された数字は、記載の数字を含む。例えば、“約１０ナノメーター”は、“１０ナノメーター”を含む。

Claims (41)

  1. 対象における抗原特異的免疫寛容の誘導のための化合物であって、前記化合物が以下：
    抗原：
    共重合体を含むポリマー化リンカー：
    ここで、ポリマー化リンカーは抗原にジチオールまたはジスルファニルエチルエステルを介して結合され、
    ここで、ジチオールまたはジスルファニルエチルエステルは対象への前記化合物の投与後、細胞内で切断され、ポリマー化リンカーから前記抗原を解放するようにそれぞれ構成されている、
    および
    前記ポリマー化リンカーに結合したガラクトシル化またはグルコシル化部分、
    を含む、化合物。
  2. 抗原がミエリン塩基性タンパク質、ミエリンオリゴデンドロサイト糖タンパク質およびプロテオリピドタンパク質、および任意の前記抗原の免疫寛容誘導部分の１つ以上を含む、請求項１に記載の化合物。
  3. 抗原がミエリンオリゴデンドロサイト糖タンパク質の少なくとも１つの免疫寛容誘導部分を含む、請求項２に記載の化合物。
  4. 抗原がインスリン、プロインスリン、プレプロインスリン、グルタミン酸デカルボキシラーゼ－６５（ＧＡＤ－６５）、ＧＡＤ－６７、インスリノーマ－関連タンパク質２（ＩＡ－２）、およびインスリノーマ－関連タンパク質２β（ＩＡ－２β）、または任意の前記抗原の免疫寛容誘導部分の１つ以上を含む、請求項１に記載の化合物。
  5. 抗原が高分子量グルテニン、低分子量グルテニン、アルファ－グリアジン、ガンマ－グリアジン、オメガ－グリアジン、ホルデイン、セカリン、アベニン、および任意の前記抗原の免疫寛容誘導部分の１つ以上を含む、請求項１に記載の化合物。
  6. 対象における抗原特異的免疫寛容の誘導のための化合物であって、前記化合物が以下：
    寛容が望まれる抗原またはその免疫寛容誘導部分；
    ここで、寛容が望まれる抗原は対象に単独で提示された場合、対象における望ましくない免疫応答を誘導できる；
    共重合体またはランダム共重合体を含むポリマー化リンカー：
    ここで、共重合体またはランダム共重合体は第一のメタクリル酸ユニットおよび第二のメタクリル酸ユニットを含み、ここで第一のメタクリル酸ユニットは第一のエチルアセトアミド官能基を含み、かつ第二のメタクリル酸ユニット第は二のエチルアセトアミド官能基を含む；
    ここで、第二のエチルアセトアミド官能基は脂肪族基、アルコールまたは脂肪族アルコールにコンジュゲートされている；
    ここで、ポリマー化リンカーが寛容が望まれる抗原またはその免疫寛容誘導部分にジチオールまたはジスルファニルエチルエステルを介して結合され、
    ここで、ジチオールまたはジスルファニルエチルエステルが対象への前記化合物の投与後、細胞内で切断され、ポリマー化リンカーから寛容が望まれる抗原またはその免疫寛容誘導部分を解放するようにそれぞれ構成されている、
    および
    前記ポリマー化リンカーに結合した肝臓標的化部分；
    ここで、肝臓標的化部分が、ガラクトシル化またはグルコシル化部分を含み；
    肝臓標的化部分が第一のエチルアセトアミド官能基を通じてポリマー化リンカーに結合されている
    、を含む、化合物。
  7. ポリマー化リンカーが１－シアノ－１－メチル－プロピル基を含む、請求項６に記載の化合物。
  8. 肝臓標的化部分が、Ｎ-アセチルガラクトサミン、ガラクトサミン、ガラクトース、グルコース、グルコサミンまたはＮ－アセチルグルコサミンの１つ以上を含む、請求項６または７に記載の化合物。
  9. 肝臓標的化部分が、Ｎ-アセチルガラクトサミンを含む、請求項８に記載の化合物。
  10. 肝臓標的化部分がベータアノマーである、請求項６－９のいずれか一項に記載の化合物。
  11. 肝臓標的化部分がそのＣ１、Ｃ２またはＣ６炭素でポリマー化リンカーにコンジュゲートされている、請求項６－１０のいずれか一項に記載の化合物。
  12. 寛容が望まれる抗原が：
    移植抗原；
    食物、動物、植物または環境の抗原；
    治療薬；
    自己抗原；
    またはその免疫寛容誘導部分、
    を含む、請求項６－１１のいずれか一項に記載の化合物。
  13. 寛容が望まれる抗原が自己抗原である、請求項６－１２のいずれか一項に記載の化合物。
  14. 寛容が望まれる抗原が、多発性硬化症と関連する、請求項１３に記載の化合物。
  15. 寛容が望まれる抗原がミエリン塩基性タンパク質、ミエリンオリゴデンドロサイト糖タンパク質およびプロテオリピドタンパク質、および任意の前記抗原の免疫寛容誘導部分の１つ以上を含む、請求項１４に記載の化合物。
  16. 寛容が望まれる抗原がミエリン塩基性タンパク質の少なくとも１つの免疫寛容誘導部分を含む、請求項１４に記載の化合物。
  17. 寛容が望まれる抗原が配列番号：８または配列番号：９のアミノ酸配列を含むポリペプチドを含む、請求項１６に記載の化合物。
  18. 寛容が望まれる抗原が、ミエリンオリゴデンドロサイト糖タンパク質の少なくとも１つの免疫寛容誘導部分を含む、請求項１４に記載の化合物。
  19. 寛容が望まれる抗原が配列番号：１１または配列番号：１２のアミノ酸配列を含むポリペプチドを含む、請求項１８に記載の化合物。
  20. 寛容が望まれる抗原が、Ｉ型糖尿病と関連する、請求項１３に記載の化合物。
  21. 寛容が望まれる抗原が、インスリン、プロインスリン、プレプロインスリン、グルタミン酸デカルボキシラーゼ－６５（ＧＡＤ－６５）、ＧＡＤ－６７、インスリノーマ－関連タンパク質２（ＩＡ－２）、およびインスリノーマ－関連タンパク質２β（ＩＡ－２β）、または任意の前記抗原の免疫寛容誘導部分の１つ以上を含む、請求項２０に記載の化合物。
  22. 寛容が望まれる抗原が、配列番号：１の一部を含むポリペプチドを含む、請求項２１に記載の化合物。
  23. 寛容が望まれる抗原が、配列番号：１の一部を含むアミノ酸配列ならびにＩＡ－２およびその免疫寛容誘導フラグメントの１つ以上を含むポリペプチドを含む、請求項２２に記載の化合物。
  24. 寛容が望まれる抗原が食物抗原である、請求項６－１２のいずれか一項に記載の化合物。
  25. 寛容が望まれる抗原がセリアック病と関連する、請求項２４に記載の化合物。
  26. 寛容が望まれる抗原が、高分子量グルテニン、低分子量グルテニン、アルファ－グリアジン、ガンマ－グリアジン、オメガ－グリアジン、ホルデイン、セカリン、アベニン、および任意の前記抗原の免疫寛容誘導部分の１つ以上を含む、請求項２５に記載の化合物。
  27. 寛容が望まれる抗原が配列番号：２０または配列番号：２１のアミノ酸配列を含むポリペプチドを含む、請求項２５に記載の化合物。
  28. 抗原が治療薬を含み、ここで治療薬が、アブシキシマブ、アダリムマブ、アガルシダーゼアルファ、アガルシダーゼベータ、アルデスロイキン、アルグルコシダーゼアルファ、第ＶＩＩＩ因子、第ＩＸ因子、インフリキシマブ、Ｌ－アスパラギナーゼ、ラロニダーゼ、ナタリズマブ、オクトレオチド、フェニルアラニンアンモニアリアーゼ（ＰＡＬ）、またはラスブリカーゼ（ウリカーゼ）、および任意の前記抗原の免疫寛容誘導部分から選択される、請求項６－１２のいずれか一項に記載の化合物。
  29. 抗原が移植抗原を含み、ここで移植抗原がＭＨＣクラスＩおよびＭＨＣクラスＩＩハプロタイプタンパク質のサブユニットならびに少数血液型抗原抗原ＲｈＣＥ、Ｋｅｌｌ、Ｋｉｄｄ、ＤｕｆｆｙおよびＳｓからなる群から選択される、請求項６－１２のいずれか一項に記載の化合物。
  30. 抗原が尋常性天疱瘡、グレーブス病、視神経脊髄炎に関連する抗原、またはその免疫寛容誘導部分を含む、請求項６－１２のいずれか一項に記載の化合物。
  31. 抗原が、デスモグレイン－３、デスモグレイン－１、およびデスモグレイン－４、またはその免疫寛容誘導部分からなる群から選択される、請求項３０に記載の化合物。
  32. 第一のメタクリル酸ユニットがＷ１により示され：
    Figure 0007082045000099
     ここで：
    Ｒ９は直接結合、－Ｃ（Ｏ）－ＮＨ－ＣＨ２－ＣＨ２－、または－Ｃ（Ｏ）－ＮＨ－（ＣＨ２－ＣＨ２－Ｏ－）ｔ－ＣＨ２－ＣＨ２－である、請求項６－３１のいずれか一項に記載の化合物。
  33. 第二のメタクリル酸ユニットがＷ２により示され：
    Figure 0007082045000100
     ここで：
    Ｒ１０が脂肪族基、アルコールまたは脂肪族アルコールである、請求項６－３２のいずれかに記載の化合物。
  34. Ｒ９が－Ｃ（Ｏ）－ＮＨ－ＣＨ２－ＣＨ２－である；および
    Ｒ１０が２－ヒドロキシプロピルである、請求項３３に記載の化合物。
  35. ポリマー化リンカーが抗原にジスルファニルエチルエステルを介して結合される、請求項１－３４のいずれか一項に記載の化合物。
  36. ポリマー化リンカーが抗原にジチオールを介して結合される、請求項１－３４のいずれか一項に記載の化合物。
  37. 請求項１－３６のいずれか一項に記載の化合物を含む組成物。
  38. 望ましくない免疫応答の治療のための医薬の製造における使用のための、請求項１－３６のいずれか一項に記載の化合物または請求項３７に記載の組成物。
  39. 望ましくない免疫応答を治療することにおける使用のための、請求項１－３６のいずれか一項に記載の化合物または請求項３７に記載の組成物。
  40. 抗原に対する望ましくない免疫応答の治療における使用のための組成物であって、前記組成物が：
    抗原；
    共重合体を含むポリマー化リンカー；
    ここで、ポリマー化リンカーが抗原にジチオールまたはジスルファニルエチルエステルを介して結合され、
    ここで、ジチオールまたはジスルファニルエチルエステルは対象への前記化合物の投与後、細胞内で切断され、ポリマー化リンカーから前記抗原を解放するようにそれぞれ構成されている；および
    前記ポリマー化リンカーに結合したガラクトシル化部分、を含む組成物。
  41. 抗原に対する望ましくない免疫応答の治療における使用のための組成物であって、前記組成物が：
    抗原；
    共重合体を含むポリマー化リンカー；
    ここで、ポリマー化リンカーが抗原にジチオールまたはジスルファニルエチルエステルを介して結合され、
    ここで、ジチオールまたはジスルファニルエチルエステルは対象への前記化合物の投与後、細胞内で切断され、ポリマー化リンカーから前記抗原を解放するようにそれぞれ構成されている；および
    前記ポリマー化リンカーに結合したグルコシル化部分、を含む組成物。
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