JP7068474B2 - ビクテグラビルの代謝物 - Google Patents

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関連出願の相互参照
本特許出願は、２０１８年１月１９日に出願された米国仮特許出願第６２／６１９，４７８号の優先権の恩典を主張する。この出願の内容は、参照により、本明細書に組み込まれる。

本発明は、その組成物および塩を含む、ＨＩＶの予防および／または処置において有用である抗ウイルス薬、ビクテグラビルの代謝物ならびにビクテグラビルの投与に関連する分析方法を提供する。

ＨＩＶ／ＡＩＤＳの世界的流行は何百万人もの人々の命を奪い、数百万人以上が現在感染している。抗レトロウイルス治療により、ＨＩＶ感染は、管理可能な慢性疾患となったが、ＨＩＶの治療法はいまだ存在しない。患者は、生涯にわたって治療を受け続けなければならず、薬物耐性が問題となっている。さらに、患者が高齢になるにつれて、他の疾患および症状に対して同時に行われる処置がより一般的になり、ＨＩＶ抗ウイルス処置に伴う薬物・薬物相互作用の可能性を増加させている。したがって、新たな抗ウイルス薬および併用療法の継続的な開発が、ＨＩＶ治療薬の分野での優先事項である。

インテグラーゼ鎖転移阻害剤（ＩＮＳＴＩ）は、必須のＨＩＶタンパク質インテグラーゼがウイルスＤＮＡゲノムを宿主細胞のクロマチン中に挿入するのを阻害することによって作用する抗レトロウイルス薬のクラスである。ＩＮＳＴＩの一例は、エムトリシタビン（ＦＴＣ）およびテノホビルアラフェナミド（ＴＡＦ）と組み合わせてヒト臨床試験で現在試験されているビクテグラビル（ＢＩＣ）である。ビクテグラビルは、以下に示されている分子構造を有しており、国際公開第２０１４／１００２１２号に記載されている。

ビクテグラビル（化合物Ｉ）
広く蔓延しているＨＩＶ感染ならびに薬物耐性および薬物・薬物相互作用を克服する上での課題に照らして、新規かつ改善された抗ウイルス剤に対する継続的な要望が存在する。ビクテグラビルの代謝物ならびに本明細書に記載されているその組成物および使用方法は、この要望を満たすことを目的とする。

国際公開第２０１４／１００２１２号

本発明は、実質的に単離されている、

から選択される化合物：
または薬学的に許容され得るその塩を提供する。

本発明は、本発明の化合物または薬学的に許容され得るその塩と、少なくとも１つの薬学的に許容され得る担体とを含む組成物をさらに提供する。

本発明は、本発明の化合物または薬学的に許容され得るその塩を含む調製物をさらに提供する。

本発明は、治療的有効量の本発明の化合物または薬学的に許容され得るその塩をヒトに投与することによって、ヒトにおけるＨＩＶ感染を予防または処置する方法をさらに提供する。

本発明は、患者へのビクテグラビルの投与を検出または確認する方法であって、前記患者から得られた生物学的試料中の本発明の化合物またはその塩を同定することを含む、方法をさらに提供する。

本発明は、患者中のビクテグラビルの代謝の速度を測定する方法であって、ビクテグラビルの投与後の１またはそれを超える時点において、前記患者中の本発明の化合物またはその塩の量を測定することを含む、方法をさらに提供する。

本発明は、ＨＩＶ感染の処置におけるビクテグラビルへの患者の予防的または治療的応答を決定する方法であって、ビクテグラビルの投与後の１またはそれを超える時点において、前記患者中の本発明の化合物またはその塩の量を測定することを含む、方法をさらに提供する。

本発明は、ビクテグラビルでの処置を必要とする患者に対するビクテグラビルの用量を最適化する方法であって、ビクテグラビルの投与後の１またはそれを超える時点において、前記患者中の本発明の化合物またはその塩の量を測定することを含む、方法をさらに提供する。

図１は、健康な成人男性被験者への［^１４Ｃ］ビクテグラビルの単回１００μＣｉ／１００ｍｇ経口投薬後におけるヒト血漿、尿および便中のビクテグラビルの代謝物および生体内変換経路の提案された構造を示す。

図２は、標準溶液Ｍ１５の分析から得られたＭ１５の抽出イオンクロマトグラムを示す。

図３は、男性被験者への［^１４Ｃ］ビクテグラビル（１００ｍｇ、１００μＣｉ）の単回経口投薬後に得られた８時間プールされた血漿試料の分析から得られた代謝物Ｍ１５のラジオクロマトグラムおよび抽出イオンクロマトグラムを示す。

図４は、男性被験者への［^１４Ｃ］ビクテグラビル（１００ｍｇ、１００μＣｉ）の単回経口投薬後に得られた８時間プールされた血漿試料との、Ｍ１５の標準溶液の個別注入および同時注入から得られた抽出イオンクロマトグラムを示す。

図５Ａは、Ｍ１５の標準溶液の分析から得られたＭ１５のＭＳプリカーサーおよびＭＳ／ＭＳプロダクトイオン質量スペクトル（ｍ／ｚ６２６）を示している。

図５Ｂは、Ｍ１５の提案される構造および提案される断片化パターンを示している。

図６は、男性被験者への［^１４Ｃ］ビクテグラビル（１００ｍｇ、１００μＣｉ）の単回経口投薬後に得られた８時間プールされた血漿試料の分析から得られた代謝物Ｍ１５のＭＳプリカーサーおよびＭＳ／ＭＳプロダクトイオン質量スペクトル（ｍ／ｚ６２６）を示している。

図７は、Ｍ２０の標準溶液の分析から得られた抽出イオンクロマトグラムを示している。

図８は、男性被験者への［^１４Ｃ］ビクテグラビル（１００ｍｇ、１００μＣｉ）の単回経口用量の投与後に得られた８時間プールされた血漿試料の分析から得られた抽出イオンクロマトグラムおよびラジオクロマトグラムを示している。

図９は、男性被験者への［^１４Ｃ］ビクテグラビル（１００ｍｇ、１００μＣｉ）の単回経口用量の投与後に得られた８時間プールされた血漿試料との、Ｍ２０の標準溶液の個別注入および同時注入から得られた抽出イオンクロマトグラムを示している。

図１０Ａは、Ｍ２０の標準溶液の分析から得られたＭ２０のプロダクトイオン（ｍ／ｚ５４６）質量スペクトルを示している。

図１０Ｂは、Ｍ２０の提案される構造および提案される断片化パターンを示している。

図１１は、男性被験者への［^１４Ｃ］ビクテグラビル（１００ｍｇ、１００μＣｉ）の単回経口用量の投与後に得られた８時間プールされた血漿試料の分析から得られたＭ２０のプロダクトイオン（ｍ／ｚ５４６）質量スペクトルを示している。

図１２は、インビトロで同定されたＢＩＣ代謝物Ｍ４６５ａ、Ｍ４６５ｂ、Ｍ４６５ｃ、Ｍ３０５、Ｍ６２５、Ｍ６４１およびＭ６１１の提案される構造を示している。

本発明は、ビクテグラビルの代謝物およびその使用を対象とする。いくつかの実施形態において、代謝物は、（１）グルクロン酸抱合、（２）脱水素、（３）ヒドロキシル化、（４）フッ化物の喪失を伴うヒドロキシル化、（５）ヒドロキシ－ビクテグラビルの硫酸抱合もしくはグルクロン酸抱合、（６）デスフルオロ－ヒドロキシ－ビクテグラビルの硫酸抱合もしくはグルクロン酸抱合もしくはシステイン抱合又は（７）これらの組み合わせを経たビクテグラビルである。いくつかの実施形態において、代謝物は、Ｍ１５、Ｍ５８、Ｍ５１、Ｍ５２、Ｍ２１、Ｍ２３、Ｍ５４、Ｍ５５、Ｍ２２、Ｍ５３、Ｍ２０、Ｍ３５、Ｍ１２、Ｍ５９、Ｍ４５、Ｍ５６、Ｍ１６、Ｍ５７、Ｍ９およびＭ３７から選択される（図１参照）。いくつかの実施形態において、代謝物は、Ｍ４６５ａ、Ｍ４６５ｂ、Ｍ４６５ｃ、Ｍ３０５、Ｍ６２５、Ｍ６４１およびＭ６１１から選択される（図１２参照）。

いくつかの実施形態において、代謝物は、Ｍ１５、Ｍ２０およびＭ２３：

から選択される化合物である。

いくつかの実施形態において、代謝物は、Ｍ１５およびＭ２０から選択される化合物である。いくつかの実施形態において、代謝物はＭ１５である。いくつかの実施形態において、代謝物はＭ２０である。いくつかの実施形態において、代謝物はＭ２３である。

本発明は、薬学的に許容され得る塩など、本発明の代謝物の塩をさらに含む。塩は、既存の酸または塩基部分をその塩形態へ転化することによって親化合物が修飾されている開示された化合物の誘導体を一般的に表す。薬学的に許容され得る塩は、合理的な便益／リスク比に相応して過剰な毒性、刺激、アレルギー性応答またはその他の問題もしくは併発症なしに、健全な医学的判断の範疇内で、ヒトおよび動物の組織と接触させて使用するのに適している塩である。薬学的に許容され得る塩の例には、アミンなどの塩基性残基の鉱酸または有機酸塩；カルボン酸などの酸性残基のアルカリ塩または有機塩が含まれるが、これらに限定されない。本発明の薬学的に許容され得る塩には、例えば、無毒な無機酸または有機酸から形成される親化合物の慣用の無毒な塩が含まれる。本発明の薬学的に許容され得る塩は、慣用の化学的方法によって、塩基性または酸性部分を含有する親化合物から合成することができる。一般的には、このような塩は、これらの化合物の遊離の酸または塩基形態を、化学量論的量の適切な塩基または酸と反応させることによって調製することができる。適切な塩のリストは、Ｒｅｍｉｎｇｔｏｎ’ｓ Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ Ｓｃｉｅｎｃｅｓ，１７^ｔｈ ｅｄ．，Ｍａｃｋ Ｐｕｂｌｉｓｈｉｎｇ Ｃｏｍｐａｎｙ，Ｅａｓｔｏｎ，Ｐａ．，１９８５，ｐ．１４１８およびＪｏｕｒｎａｌ ｏｆ Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ Ｓｃｉｅｎｃｅ，６６，２（１９７７）中に見出され、これらのそれぞれの全体が、参照により、本明細書に組み込まれる。一つの特定の実施形態において、薬学的に許容され得る塩はナトリウム塩である。

いくつかの実施形態において、代謝物化合物またはその塩は、実質的に単離されている。「実質的に単離された」によって、代謝物化合物またはその塩が、その中で形成または検出される環境から少なくとも部分的にまたは実質的に分離されていることを意味する。部分的な分離には、例えば、本発明の化合物が濃縮された組成物が含まれ得る。実質的な分離には、少なくとも約５０重量％、少なくとも約６０重量％、少なくとも約７０重量％、少なくとも約８０重量％、少なくとも約９０重量％、少なくとも約９５重量％、少なくとも約９７重量％または少なくとも約９９重量％の代謝物またはその塩を含有する組成物が含まれ得る。いくつかの実施形態において、Ｍ１５、Ｍ２０およびＭ２３は実質的に単離されている。

本発明の代謝物またはその塩は、代謝物以外の少なくとも１つの化合物を含む組成物中に存在することができる。いくつかの実施形態において、組成物は、１を超える本発明の代謝物を含む。いくつかの実施形態において、組成物は、１またはそれを超える本発明の代謝物またはその塩とビクテグラビルまたはその塩とを含む。組成物は、本発明の代謝物またはその塩および１またはそれを超える溶媒、基質、担体などを含有する混合物であり得る。いくつかの実施形態において、組成物は、約２５重量％より多い量で、本発明の代謝物またはその塩を含む。いくつかの実施形態において、組成物は、約５０重量％より多い量で、本発明の代謝物またはその塩を含む。いくつかの実施形態において、組成物は、約７５重量％より多い量で、本発明の代謝物またはその塩を含む。いくつかの実施形態において、組成物は、約８０重量％より多い量で、本発明の代謝物またはその塩を含む。いくつかの実施形態において、組成物は、約８５重量％より多い量で、本発明の代謝物またはその塩を含む。いくつかの実施形態において、組成物は、約９０重量％より多い量で、本発明の代謝物またはその塩を含む。いくつかの実施形態において、組成物は、約９５重量％より多い量で、本発明の代謝物またはその塩を含む。

本発明の代謝物またはその塩の調製物は、化学合成によって、または生物学的試料からの代謝物の単離によって調製することができる。調製物は、約５０％を超える、約６０％を超える、約７０％を超える、約８０％を超える、約９０％を超えるまたは約９５％を超える純度の純度を有することができる。純度は、クロマトグラフィー法またはＮＭＲ、ＭＳ、ＬＣ－ＭＳなどのような分光学的方法によるなど、慣用の手段のいずれによっても測定することができる。

本発明の代謝物は、不斉である（例えば、１またはそれを超える立体中心を有する）。別段の記載がなければ、鏡像異性体およびジアステレオマーなどの全ての立体異性体が意図される。光学活性な出発物質から光学活性な形態をどのように調製するかについての方法は、ラセミ混合物の分割によるまたは立体選択的合成によるなど、本分野において公知である。

本発明の代謝物は、代謝物中に存在する原子の全ての同位体も含む。同位体は、同じ原子数であるが、異なる質量数を有する原子を含む。例えば、水素の同位体には、三重水素および重水素が含まれる。いくつかの実施形態において、代謝物は少なくとも１つの重水素を含む。

本明細書において使用される「化合物」または「代謝物」という用語は、図示されている構造の全ての立体異性体、幾何異性体、互変異性体および同位体を含むものとする。

本明細書において使用される「代謝物」という用語は、（１）グルクロン酸抱合、（２）脱水素、（３）ヒドロキシル化、（４）フッ化物の喪失を伴うヒドロキシル化、（５）ヒドロキシ－ビクテグラビルの硫酸抱合またはグルクロン酸抱合および（６）デスフルオロ－ヒドロキシ－ビクテグラビルの硫酸抱合またはグルクロン酸抱合またはシステイン抱合から選択される１またはそれを超える変換過程を経た誘導体を含む、ビクテグラビルのあらゆる全ての代謝誘導体を含むものとする。いくつかの実施形態において、本発明の代謝物は、１またはそれを超える代謝的変換を既に受けたビクテグラビルの誘導体の代謝的変換を含む、１を超える変換過程を受けている。

投与すると、ビクテグラビルは代謝的に変換して、本発明の代謝物を与えるので、化合物ビクテグラビルは、本発明の代謝物のプロドラッグ（例えば、代謝物Ｍ１５、Ｍ２０、Ｍ２３などのプロドラッグ）と考えることもできる。したがって、ビクテグラビルは、例えば、ヒトにおけるＨＩＶ感染を予防または処置するために、本発明の代謝物をヒトに与える手段としてヒトに投与することができる。

本発明は、本発明の代謝物または薬学的に許容され得るその塩と、少なくとも１つの薬学的に許容され得る担体とを含む薬学的組成物をさらに含む。本明細書において使用される「薬学的に許容され得る担体」は、ヒトまたは家畜における使用に対して許容されるとして米国食品医薬品局によって承認されている、任意の佐剤、担体、賦形剤、流動促進剤、甘味剤、希釈剤、防腐剤、色素／着色剤、着香剤、界面活性剤、湿潤剤、分散剤、懸濁剤、安定化剤、等張剤、溶媒または乳化剤を表すものとする。
方法

さらに、本発明は、治療的有効量の本発明の代謝物または薬学的に許容され得るその塩をヒトに投与することによって、ヒトにおけるＨＩＶ感染（例えば、ＨＩＶ－１および／またはＨＩＶ－２）を予防または処置する方法に関する。前記ヒトは、感染を有し得、または感染を有するリスクがあり得る。

本明細書において使用される「処置」または「処置する」という用語は、ＨＩＶ感染の症候を緩和もしくは除去するための、および／または患者中のウイルス量を低下させるための、本発明による代謝物、その組成物またはその調製物の投与を意味することが意図される。

「予防」または「予防する」という用語は、ウイルスへのヒトの曝露後であるが、疾患の症候の出現前および／または血液中のウイルスの検出前に、本発明による代謝物、その組成物またはその調製物を投与することを表す。本用語は、疾患の症候の出現の予防および／またはウイルスが血液中で検出可能なレベルに到達することを予防することも表す。本用語は、曝露前の予防および曝露後の予防の両方を含む。本用語は、出産前の母親へのおよび生後１日以内の子供への投与による、母親から乳児へのＨＩＶの周産期伝播の予防も表す。

「有効量」または「治療的有効量」という用語は、投与を必要としている患者に投与されたときに、化合物が有用である疾患状態、症状または障害に対して処置を達成するのに十分である、本発明による代謝物の量を表す。このような量は、組織系または研究者もしくは臨床医によって求められている患者の生物学的または医学的応答を惹起するのに十分であろう。治療的有効量を構成する本発明による代謝物の量は、化合物およびその生物学的活性、投与のために使用される組成物、投与の時、投与の経路、化合物の排出の速度、処置の期間、処置されている疾患状態または障害の種類およびその重度、本発明の化合物と組み合わせてまたは同時に使用される薬物ならびに患者の年齢、体重、全般的な健康、性別および食事などの要因に応じて変動するであろう。このような治療的有効量は、自分の知識、本分野の水準および本開示を考慮して、当業者によって定型的に決定することができる。

本発明の代謝物またはそれらの薬学的に許容され得る塩の投与は、類似の有用性を果たすための薬剤の受容された投与様式のいずれを介しても実施することができる。本発明の薬学的組成物は、本発明の代謝物または薬学的に許容され得るその塩を、適切な薬学的に許容され得る担体と組み合わせることによって調製することが可能であり、特定の実施形態においては、錠剤、カプセル、粉末、顆粒、軟膏、溶液、坐剤、注射、吸入剤、ゲル、細粒およびエアロゾルなどの、固体、半固体、液体または気体状形態の調製物へ製剤化される。このような薬学的組成物を投与する例示的な経路には、経口、局所、経皮、吸入、非経口、舌下、頬側、直腸、膣および鼻腔内が含まれるが、これらに限定されない。特定の実施形態において、本発明の薬学的組成物は錠剤である。別の実施形態において、本発明の薬学的組成物は、注射（筋肉内（ＩＭ）または腹腔内（ＩＰ））である。本発明の薬学的組成物は、患者への組成物の投与に際して、組成物中に含有される活性成分が生物学的に利用可能であるようにするために製剤化される。被験体または患者に投与される組成物は、１またはそれを超える投薬単位の形態を取り、例えば、錠剤は単一の投薬単位であり得、エアロゾル形態での本発明の化合物の容器は複数の投薬単位を保有し得る。このような剤形を調製する実際の方法は公知であり、または当業者に自明であろう。例えば、Ｒｅｍｉｎｇｔｏｎ：Ｔｈｅ Ｓｃｉｅｎｃｅ ａｎｄ Ｐｒａｃｔｉｃｅ ｏｆ Ｐｈａｒｍａｃｙ，２０ｔｈ Ｅｄｉｔｉｏｎ（Ｐｈｉｌａｄｅｌｐｈｉａ Ｃｏｌｌｅｇｅ ｏｆ Ｐｈａｒｍａｃｙ ａｎｄ Ｓｃｉｅｎｃｅ，２０００）を参照。いずれにしろ、投与されるべき組成物は、本明細書に記載されている教示にしたがって関心対象の疾患または症状を処置するために、本発明の化合物または薬学的に許容され得るその塩の治療的有効量を含有するであろう。

さらに、本発明は、患者へのビクテグラビルの投与を検出または確認する方法であって、前記患者から得られた生物学的試料中の本発明の代謝物またはその塩を同定することを含む、方法に関する。いくつかの実施形態において、生物学的試料は、血漿、尿または便に由来する。

さらに、本発明は、患者中のビクテグラビルの代謝の速度を測定する方法であって、ビクテグラビルの投与後の１またはそれを超える時点において、前記患者中の代謝物またはその塩の量を測定することを含む、方法に関する。

さらに、本発明は、ＨＩＶ感染の処置におけるビクテグラビルへの患者の予防的または治療的応答を決定する方法であって、ビクテグラビルの投与後の１またはそれを超える時点において、前記患者中の本発明の代謝物またはその塩の量を測定することを含む、方法に関する。

さらに、本発明は、ビクテグラビルでの処置を必要とする患者に対するビクテグラビルの用量を最適化する方法であって、ビクテグラビルの投与後の１またはそれを超える時点において、前記患者中の本発明の代謝物またはその塩の量を測定することを含む、方法に関する。代謝物の量は、患者がビクテグラビルを代謝する速度の指標となり得る。他の患者よりビクテグラビルをより急速にまたはより効果的に代謝する患者は、より多量の代謝物を形成し得、ビクテグラビルをより遅く代謝する患者と比べて、より高用量のビクテグラビルまたは追加の投薬を必要とする可能性があり得る。他の患者よりビクテグラビルをより遅くまたはより非効果的に代謝する患者は、より少量の代謝物を形成し得、ビクテグラビルをより急速に代謝する患者と比べて、より低用量のビクテグラビルまたはより少ない投薬を必要とする可能性があり得る。したがって、ビクテグラビルの用量を最適化する方法は、代謝物の測定された量が平均より高いかまたは低いかを決定すること、およびビクテグラビルの投与量をこれに基づいて調整することをさらに含み得る。

患者中の代謝物またはその塩の量を測定することは、患者から生物学的試料を取得すること、および試料中の代謝物またはその塩の量を測定することによって実施することができる。いくつかの実施形態において、試料は血液である。他の実施形態において、試料は血漿である。他の実施形態において、試料は尿である。他の実施形態において、試料は便である。

「患者」という用語は、ＨＩＶ感染などのウイルス感染に対する治療的または予防的処置を必要としている、ヒトまたは実験動物および家庭用愛玩動物（例えば、ネコ、イヌ、ブタ、ウシ、ヒツジ、ヤギ、ウマ、ウサギ）および非ヒト霊長類、哺乳類の野生動物などの非家畜動物などのその他の哺乳動物を表すものとする。
併用療法

（例えば、ヒト患者における）ＨＩＶ感染を予防または処置するために、本発明の化合物、塩および組成物と組み合わせて、１またはそれを超えるさらなる薬剤を使用することができる。いくつかの実施形態において、本発明の組成物は、１またはそれを超えるさらなる治療剤をさらに含む。いくつかの実施形態において、本発明の組成物は、１～３種のさらなる治療剤（例えば、１～３種の抗ＨＩＶ剤）をさらに含む。いくつかの実施形態において、１またはそれを超える１つのさらなる治療剤は抗ＨＩＶ剤である。

上記実施形態において、さらなる治療剤は抗ＨＩＶ剤であり得る。例えば、いくつかの実施形態において、さらなる治療剤は、ＨＩＶプロテアーゼ阻害剤、逆転写酵素のＨＩＶ非ヌクレオシド阻害剤、逆転写酵素のＨＩＶヌクレオシド阻害剤、逆転写酵素のＨＩＶヌクレオチド阻害剤、ＨＩＶインテグラーゼ阻害剤、ＨＩＶ非触媒部位（またはアロステリック）インテグラーゼ阻害剤、侵入阻害剤（例えば、ＣＣＲ５阻害剤、ｇｐ４１阻害剤（すなわち、融合阻害剤）およびＣＤ４付着阻害剤）、ＣＸＣＲ４阻害剤、ｇｐ１２０阻害剤、Ｇ６ＰＤおよびＮＡＤＨ－オキシダーゼ阻害剤、ＨＩＶキャプシドを標的とする化合物（「キャプシド阻害剤」；例えば、国際公開第２０１３／００６７３８号（Ｇｉｌｅａｄ Ｓｃｉｅｎｃｅｓ）、米国特許出願公開第２０１３／０１６５４８９号（Ｕｎｉｖｅｒｓｉｔｙ ｏｆ Ｐｅｎｎｓｙｌｖａｎｉａ）および国際公開第２０１３／００６７９２号（Ｐｈａｒｍａ Ｒｅｓｏｕｒｃｅｓ）に開示されているものなどのキャプシド重合阻害剤またはキャプシド破壊化合物、薬物動態増強剤（ｐｈａｒｍａｃｏｋｉｎｅｔｉｃ ｅｎｈａｎｃｅｒ）およびＨＩＶを処置するためのその他の薬物ならびにこれらの組み合わせからなる群より選択される。いくつかの実施形態において、抗ＨＩＶ剤は、ＨＩＶプロテアーゼ阻害剤、逆転写酵素のＨＩＶ非ヌクレオシド阻害剤、逆転写酵素のＨＩＶヌクレオシド阻害剤、逆転写酵素のＨＩＶヌクレオチド阻害剤、薬物動態増強剤またはこれらの組み合わせである。いくつかの実施形態において、抗ＨＩＶ剤は、逆転写酵素のＨＩＶヌクレオシド阻害剤、逆のＨＩＶヌクレオチド阻害剤またはこれらの組み合わせである。

さらなる実施形態において、さらなる治療剤は、以下の１またはそれより多くから選択される：
（１）アンプレナビル、アタザナビル、ホスアンプレナビル、インジナビル、ロピナビル、リトナビル、ネルフィナビル、サキナビル、チプラナビル、ブレカナビル、ダルナビル、ＴＭＣ－１２６、ＴＭＣ－１１４、モぜナビル（ＤＭＰ－４５０）、ＪＥ－２１４７（ＡＧ１７７６）、Ｌ－７５６４２３、ＲＯ０３３４６４９、ＫＮＩ－２７２、ＤＰＣ－６８１、ＤＰＣ－６８４、ＧＷ６４０３８５Ｘ、ＤＧ１７、ＰＰＬ－１００、ＤＧ３５およびＡＧ１８５９からなる群より選択されるＨＩＶプロテアーゼ阻害剤；
（２）カプラビリン、エミビリン、デラビリジン（ｄｅｌａｖｉｒｉｄｉｎｅ）、エファビレンツ、ネビラピン、（＋）カラノリドＡ、エトラビリン、ＧＷ５６３４、ＤＰＣ－０８３、ＤＰＣ－９６１、ＤＰＣ－９６３、ＭＩＶ－１５０、ＴＭＣ－１２０、リルピビレン（ｒｉｌｐｉｖｉｒｅｎｅ）、ＢＩＬＲ３５５ＢＳ、ＶＲＸ８４０７７３、レルシビリン（ＵＫ－４５３０６１）、ＲＤＥＡ８０６、ＫＭ０２３およびＭＫ－１４３９からなる群より選択される逆転写酵素のＨＩＶ非ヌクレオシドまたは非ヌクレオチド阻害剤；
（３）ジドブジン、エムトリシタビン、ジダノシン、スタブジン、ザルシタビン、ラミブジン、アバカビル、アムドキソビル、エルブシタビン、アロブジン、ＭＩＶ－２１０、±－ＦＴＣ、Ｄ－ｄ４ＦＣ、エムトリシタビン、ホスファジド、フォジブジン・チドキシル（ｆｏｚｉｖｕｄｉｎｅ ｔｉｄｏｘｉｌ）、アプリシチビン（ａｐｒｉｃｉｔｉｂｉｎｅ）（ＡＶＸ７５４）、ＫＰ－１４６１、ＧＳ－９１３１（Ｇｉｌｅａｄ Ｓｃｉｅｎｃｅｓ）およびフォサルブジン・チドキシル（ｆｏｓａｌｖｕｄｉｎｅ ｔｉｄｏｘｉｌ）（旧ＨＤＰ９９．０００３）からなる群より選択される逆転写酵素のＨＩＶヌクレオシド阻害剤；
（４）テノホビル、テノホビルジソプロキシルフマレート、テノホビルアラフェナミド（Ｇｉｌｅａｄ Ｓｃｉｅｎｃｅｓ）、ＧＳ－７３４０（Ｇｉｌｅａｄ Ｓｃｉｅｎｃｅｓ）、ＧＳ－９１４８（Ｇｉｌｅａｄ Ｓｃｉｅｎｃｅｓ）、アデホビル、アデホビルジピボキシル、ＣＭＸ－００１（Ｃｈｉｍｅｒｉｘ）またはＣＭＸ－１５７（Ｃｈｉｍｅｒｉｘ）からなる群より選択される逆転写酵素のＨＩＶヌクレオチド阻害剤；
（５）ラルテグラビル、エルビテグラビル、ドルテグラビル、カボテグラビル、クルクミン、クルクミンの誘導体、チコリ酸、チコリ酸の誘導体、３，５－ジカフェオイルキナ酸、３，５－ジカフェオイルキナ酸の誘導体、アウリントリカルボン酸、アウリントリカルボン酸の誘導体、コーヒー酸フェネチルエステル、コーヒー酸フェネチルエステルの誘導体、チロホスチン、チロホスチンの誘導体、ケルセチン、ケルセチンの誘導体、Ｓ－１３６０、ＡＲ－１７７、Ｌ－８７０８１２、およびＬ－８７０８１０、ＢＭＳ－５３８１５８、ＧＳＫ３６４７３５Ｃ、ＢＭＳ－７０７０３５、ＭＫ－２０４８、ＢＡ０１１およびＧＳＫ－７４４からなる群より選択されるＨＩＶインテグラーゼ阻害剤；
（６）ＢＩ－２２４４３６、ＣＸ０５１６、ＣＸ０５０４５、ＣＸ１４４４２、国際公開第２００９／０６２２８５号（Ｂｏｅｈｒｉｎｇｅｒ Ｉｎｇｅｌｈｅｉｍ）、国際公開第２０１０／１３００３４号（Ｂｏｅｈｒｉｎｇｅｒ Ｉｎｇｅｌｈｅｉｍ）、国際公開第２０１３／１５９０６４号（Ｇｉｌｅａｄ Ｓｃｉｅｎｃｅｓ）、国際公開第２０１２／１４５７２８号（Ｇｉｌｅａｄ Ｓｃｉｅｎｃｅｓ）、国際公開第２０１２／００３４９７号（Ｇｉｌｅａｄ Ｓｃｉｅｎｃｅｓ）、国際公開第２０１２／００３４９８号（Ｇｉｌｅａｄ Ｓｃｉｅｎｃｅｓ）に開示されている化合物を含むがこれらに限定されない（これらの各々は、参照により、その全体が本明細書に組み込まれる。）、ＨＩＶ非触媒部位またはアロステリックインテグラーゼ阻害剤（ＮＣＩＮＩ）
（７）エンフビルチド、シフビルチド、アルブビルチド、ＦＢ００６ＭおよびＴＲＩ－１１４４からなる群より選択されるｇｐ４１阻害剤；
（８）ＣＸＣＲ４阻害剤ＡＭＤ－０７０；
（９）侵入阻害剤ＳＰ０１Ａ；
（１０）ｇｐ１２０阻害剤ＢＭＳ－４８８０４３；
（１１）Ｇ６ＰＤおよびＮＡＤＨ－オキシダーゼ阻害剤イムニチン（ｉｍｍｕｎｉｔｉｎ）
（１２）アプラビロック、ビクリビロック、マラビロク、セニクリビロク、ＰＲＯ－１４０、ＩＮＣＢ１５０５０、ＰＦ－２３２７９８（Ｐｆｉｚｅｒ）およびＣＣＲ５ｍＡｂ００４からなる群より選択されるＣＣＲ５阻害剤；
（１３）イバリズマブ（ＴＭＢ－３５５）およびＢＭＳ－０６８（ＢＭＳ－６６３０６８）からなる群より選択されるＣＤ４付着阻害剤；
（１４）リトナビル、コビシスタットおよびＳＰＩ－４５２からなる群より選択される薬物動態増強剤；および

（１５）ＢＡＳ－１００、ＳＰＩ－４５２、ＲＥＰ９、ＳＰ－０１Ａ、ＴＮＸ－３５５、ＤＥＳ６、ＯＤＮ－９３、ＯＤＮ－１１２、ＶＧＶ－１、ＰＡ－４５７（ベビリマト（ｂｅｖｉｒｉｍａｔ））、ＨＲＧ２１４、ＶＧＸ－４１０、ＫＤ－２４７、ＡＭＺ００２６、ＣＹＴ９９００７Ａ－２２１ＨＩＶ、ＤＥＢＩＯ－０２５、ＢＡＹ５０－４７９８、ＭＤＸ０１０（イピリムマブ）、ＰＢＳ１１９、ＡＬＧ８８９およびＰＡ－１０５００４０（ＰＡ－０４０）からなる群より選択されるＨＩＶを処置するためのその他の薬物、
ならびにこれらの組み合わせ。

ある実施形態において、本明細書に開示されている代謝物または薬学的に許容され得るその塩は、２、３、４またはそれを超えるさらなる治療剤と組み合わされる。２、３、４またはそれを超えるさらなる治療剤は、治療剤の同じクラスから選択される異なる治療剤であり得、または治療剤の異なるクラスから選択され得る。特定の実施形態において、本明細書に開示されている代謝物または薬学的に許容され得るその塩は、逆転写酵素のＨＩＶヌクレオチドまたはヌクレオシド阻害剤および逆転写酵素のＨＩＶ非ヌクレオシド阻害剤と組み合わされる。別の特定の実施形態において、本明細書に開示されている代謝物または薬学的に許容され得るその塩は、逆転写酵素のＨＩＶヌクレオチドまたはヌクレオシド阻害剤およびＨＩＶプロテアーゼ阻害化合物と組み合わされる。さらなる実施形態において、本明細書に開示されている代謝物または薬学的に許容され得るその塩は、逆転写酵素のＨＩＶヌクレオチドまたはヌクレオシド阻害剤、逆転写酵素のＨＩＶ非ヌクレオシド阻害剤およびＨＩＶプロテアーゼ阻害化合物と組み合わされる。さらなる実施形態において、本明細書に開示されている代謝物または薬学的に許容され得るその塩は、逆転写酵素のＨＩＶヌクレオチドまたはヌクレオシド阻害剤、逆転写酵素のＨＩＶ非ヌクレオシド阻害剤および薬物動態増強剤と組み合わされる。

ある実施形態において、本明細書に開示されている代謝物が上記されている１またはそれを超えるさらなる治療剤と組み合わされる場合、組成物の成分は、同時または順次治療計画として投与される。順次投与される場合、組み合わせは２またはそれを超える投与で投与され得る。

ある実施形態において、本明細書に開示されている代謝物は、患者への同時投与のために単位剤形で、例えば、経口投与用の固体剤形として（例えば、固定用量配合錠）、１またはそれを超えるさらなる治療剤と組み合わされる。

ある実施形態において、本明細書に開示されている代謝物は、１またはそれを超えるさらなる治療剤とともに投与される。本明細書に開示されている代謝物または薬学的に許容され得るその塩の、１またはそれを超えるさらなる治療剤との同時投与は、治療的有効量の、代謝物および１またはそれを超えるさらなる治療剤がともに患者の体内に存在するように、本明細書に開示されている化合物および１またはそれを超えるさらなる治療剤の同時または順次投与を一般的に表す。

同時投与には、１またはそれを超えるさらなる治療剤の単位用量の投与前または投与後における本明細書に開示されている代謝物の単位用量の投与、例えば、１またはそれを超えるさらなる治療剤の投与の数秒、数分または数時間以内の本明細書に開示されている代謝物の投与が含まれる。例えば、いくつかの実施形態において、本明細書に開示されている代謝物の単位服用量がまず投与され、数秒または数分以内に、１またはそれを超えるさらなる治療剤の単位服用量の投与が後続する。または、別の実施形態において、１またはそれを超えるさらなる治療剤の単位服用量がまず投与され、数秒または数分以内に、本明細書に開示されている代謝物の単位服用量の投与が後続する。いくつかの実施形態において、本明細書に開示されている代謝物の単位服用量がまず投与され、数時間（例えば、１～１２時間）の期間後に、１またはそれを超えるさらなる治療剤の単位服用量の投与が後続する。別の実施形態において、１またはそれを超えるさらなる治療剤の単位服用量がまず投与され、数時間（例えば、１～１２時間）の期間後に、本明細書に開示されている代謝物の単位服用量の投与が後続する。
薬学的製剤および剤形

本明細書に開示されている薬学的組成物は、薬学分野において周知の方法によって調製することができる。例えば、ある実施形態において、注射によって投与されることが意図される薬学的組成物は、溶液を形成するために、本発明の代謝物を、無菌の蒸留水と組み合わせることによって調製することができる。いくつかの実施形態において、均一な溶液または懸濁液の形成を促進するために、界面活性剤が添加される。界面活性剤は、本発明の化合物と非共有的に相互作用して、水性送達系中での化合物の溶解または均質な懸濁を促進する化合物である。

本発明の代謝物またはそれらの薬学的に許容され得る塩は、治療的有効量で投与することができ、治療的有効量は、使用される具体的な化合物の活性；化合物の代謝的安定性および作用の長さ；患者の年齢、体重、全般的な健康、性別および食事；投与の様式および時間；排泄の速度；薬物の組み合わせ；具体的な障害または症状の重度；ならびに治療を受けている被験体を含む様々な要因に応じて変動するであろう。

具体的な実施例によって、本発明をさらに詳しく記載する。以下の実施例は、例示の目的で提示されており、決して本発明を限定することを意図していない。当業者は、本質的に同一の結果を与えるように変更または改変することができる様々な重要でないパラメータを容易に認識するであろう。

［実施例１］健康な被験者中でのビクテグラビルの薬物動態、代謝および排泄を評価するための第１相研究の結果
研究設計
本研究の目的は、以下のとおりであった：（１）放射線標識された炭素－１４（［^１４Ｃ］ビクテグラビルの単回経口用量の投与後におけるビクテグラビルのマスバランスを決定すること、（２）可能な場合、ビクテグラビルおよびその代謝物の薬物動態（ＰＫ）を評価すること、（３）放射線標識された［^１４Ｃ］ビクテグラビルの単回経口用量の投与後におけるヒトでのビクテグラビルの代謝物プロファイルを決定すること、ならびに（４）ビクテグラビルの安全性および耐容性を評価すること。

これは、健康な被験者中での放射線標識された［^１４Ｃ］ビクテグラビルの単回、経口用量の投与後におけるビクテグラビルのＰＫ、代謝および排泄を評価するための第１相、非盲検、単一施設、マスバランス研究であった。合計８人の患者が参加した。第一回投薬予定前の２８日以内に行われたスクリーニング評価において治験責任医師によって決定されたところ、被験者は、健康な男性非喫煙者で、年齢１８歳以上４５歳以下、肥満度指数（ＢＭＩ）１９ｋｇ／ｍ２以上３０ｋｇ／ｍ２以下であり、１２誘導心電図（ＥＣＧ）正常、腎機能正常、顕著な病歴なし、全般的健康状態良好であった。

処置は、単回経口投薬後に、６～２１日の試料収集期間が続き、正確な収集の期間は放射線標識された薬物の回収に基づいた。
用量は、約４０ｍＬのエタノール溶液（４：６［ｖ／ｖ］水：エタノール、ＨＣｌでｐＨ調整）として経口投与された１００ｍｇのビクテグラビル（９９ｍｇの非放射線標識ビクテグラビル［ナトリウム塩形態として］プラス約１００μＣｉ［１ｍｇ］の放射線標識された［^１４Ｃ］ビクテグラビル）であった。投与後に、約５０ｍＬのクランベリージュースによる各すすぎで、投薬容器を２回すすぎ、被験者に投与した。全体の研究薬溶液およびクランベリージュースリンス（合計約１４０ｍＬ）は、１０分の枠内に服用した。

尿、便および両試料中に回収された総［^１４Ｃ］放射線量の百分率および累積百分率に対する個別データおよび要約統計をサンプリング時間ごとに提供した。尿、便および両試料中の回収された総［^１４Ｃ］放射線量の個別、平均（標準偏差［ＳＤ］）および中央値（第一分位数［Ｑ１］、第三分位数［Ｑ３］）累積的百分率対時間プロファイルを、時間線形および片対数目盛りで記した。

サンプリング時間ごとの血漿、全血、尿および便試料の個別の被験者濃度データおよび要約統計を、総［^１４Ｃ］放射能に対して示した。総［^１４Ｃ］放射能濃度の全血対血漿比を各被験者に対して決定し、記述統計とともに表型式で表した。さらに、サンプリング時間ごとの血漿および尿試料の個別の被験者濃度データおよび要約統計を、ビクテグラビルに対して示した。
血漿、尿および便中での［^１４Ｃ］ビクテグラビル代謝物プロファイリング

高速液体クロマトグラフィー（ＨＰＬＣ）－ＭＳ／ＴｏｐＣｏｕｎｔ法による代謝物プロファイリングの結果では、合計２０のビクテグラビルの代謝物が同定された。これらの代謝物は、直接のグルクロン酸抱合（Ｍ１５およびＭ５８）、脱水素（Ｍ５１およびＭ５２）、ヒドロキシル化（Ｍ２１、Ｍ２３、Ｍ５４およびＭ５５）、フッ化物の喪失を伴うヒドロキシル化（Ｍ２２およびＭ５３）、ヒドロキシ－ビクテグラビルの硫酸抱合またはグルクロン酸抱合（Ｍ２０、Ｍ３５、Ｍ１２、Ｍ５９およびＭ４５）、デスフルオロ－ヒドロキシ－ビクテグラビルの硫酸抱合またはグルクロン酸抱合またはシステイン抱合（Ｍ５６、Ｍ１６、Ｍ５７、Ｍ９およびＭ３７）を含む、いくつかの生体内変換経路を通じて生成された（図１）。

血漿：血漿中での代謝物プロファイリングおよび定量は、各被験者について、投与後０時間～１４４時間プールされた試料を用いて行った。ヒト血漿中に、ビクテグラビルおよび１３の代謝物が同定された。［^１４Ｃ］ビクテグラビルが主要な循環放射性成分であり、Ｍ２０（ヒドロキシ－ビクテグラビル－サルフェート）およびＭ１５（ビクテグラビル－グルクロニド）が血漿中の主要な代謝物であって、それぞれ、総放射能の血漿ＡＵＣ０～７２時間（濃度時間曲線下面積）の６７．９％、２０．１％および８．６％を占めた。総放射能のＡＵＣ０～７２時間比率と比べた、微量な代謝物Ｍ２１（ヒドロキシ－ビクテグラビル）、Ｍ５２（脱水素生成物）およびＭ２３／Ｍ５１（ヒドロキシ－ビクテグラビル／脱水素生成物）ＡＵＣ０～７２時間比率は、それぞれ、２．０％、０．６％および０．２％であった。投薬後１４４時間までに、代謝物の全てがＢＬＱ（定量限界未満）であり、長寿命の代謝物が存在しないことを示している。

尿：尿中での代謝物プロファイリングおよび定量は、各被験者について、投与後０時間～９６時間の期間内にプールされた試料を用いて行った。ヒト尿中には、ビクテグラビルおよび２０の代謝物が同定された。Ｍ１５（Ｍ５８とともに同時溶出される、いずれもビクテグラビル－グルクロニド）が尿中での主要な放射性成分であり、投与された用量の２１．４％を占めた。微量または微少レベルの代謝物（図１参照）は、用量の２．２％未満であった。回収された変化していないビクテグラビルは尿中では低く（用量の３．６％）、ビクテグラビルのＬＣ／ＭＳ／ＭＳ結果と合致していた。

便：便中での代謝物プロファイリングおよび定量は、各被験者についてプールされた便試料を用いて行った。変化していない親、Ｍ９（デスフルオロ－ヒドロキシ－ビクテグラビル－システイン抱合体）、Ｍ２１／Ｍ２２（ヒドロキシ－ビクテグラビル／デスフルオロ－ヒドロキシ－ビクテグラビル同時溶出された）およびＭ２３（ヒドロキシ－ビクテグラビル）は、平均で、それぞれ、投与された用量の３０．６％、１３．０％、８．１％および３．６％を占めた（投薬後０～１４４時間以内に、８人の被験者から平均した定量）。

代謝物の同定：ＬＣ－ＭＳ／ＴｏｐＣｏｕｎｔ法によって、代謝物を同定した。まず、ＬＴＱイオントラップ質量分析計およびＬＴＱ Ｏｒｂｉｔｒａｐ高分解能質量分析計上で、標準ビクテグラビルおよび［^１４Ｃ］ビクテグラビル参照標準のプロダクトイオン質量スペクトルを獲得した。次いで、これらの主要な断片化パターンを提案し、対応する断片イオンの元素組成を確認した。第二に、ＬＣ－Ｒａｄｉｏ－クロマトグラム上で観察された代謝物の保持時間を、フルスキャンポジティブイオン化モードで動作するＬＣ－ＭＳクロマトグラム上での対応する保持時間と比較し、代謝物の分子イオンを決定した。次いで、代謝物候補の分子イオンに対して、プロダクトイオン質量スペクトルを獲得した。提案された分子イオンおよびそのプロダクトイオンの化学式を確認するために、ＬＴＱ Ｏｒｂｉｔｒａｐ高分解能質量分析計上で正確な質量スペクトルも獲得した。可能性が高い断片化経路および推定される代謝物構造を提案した（図１）。

代謝物Ｍ１５およびＭ５８は、ＬＣ－ＭＳクロマトグラム上において、約２５．７４および２５．４４分で溶出し、ｍ／ｚ６２６に分子イオンを有していた。これらのイオンの正確な質量測定は、０．０２～０．２ｐｐｍの質量誤差で、Ｃ_２７Ｈ_２７Ｆ_３Ｎ_３Ｏ_１１ ^＋の化学式を与え、親分子イオンへのＣ_６Ｈ_８Ｏ_６部分の付加が示唆された。これらの分子イオンのＣＩＤは類似の断片化をもたらし、分子イオンからの－１７６Ｄａのニュートラルロスに対応するｍ／ｚ４５０に主要イオンを示した。ｍ／ｚ４５０のイオンのＭＳ３は、ビクテグラビルの参照標準に合致したスペクトルを示し、Ｍ１５およびＭ５８がビクテグラビルのグルクロニドであることを示唆した。

代謝物Ｍ５４、Ｍ２１およびＭ２３は、ＬＣ－ＭＳクロマトグラム上で、それぞれ約３１．４０分、３３．１８分および３３．９７分で溶出し、全てｍ／ｚ４６６に分子イオンを有していた。これらのイオンの正確な質量測定は、０．２～０．４ｐｐｍの質量誤差で、Ｃ_２１Ｈ_１９Ｆ_３Ｎ_３Ｏ_６ ^＋の化学式を与え、親分子イオンへのＯ原子（＋１６Ｄａ）の付加が示唆された。Ｍ２３の分子イオンのＣＩＤは、ｍ／ｚ４４８、４２３、３０７および２８９に主要イオンをもたらした。Ｍ２１およびＭ５４の分子イオンのＣＩＤは、ｍ／ｚ４４８、４２３、３２３、３０５および２８９に主要イオンをもたらした。これらのプロダクトイオンの正確な質量測定によって、それらの化学式が確認された。ＭＳスペクトルは、Ｍ２３、Ｍ２１およびＭ５４がビクテグラビルのモノヒドロキシル化代謝物であることを示唆した。

代謝物Ｍ２０は、ＬＣ－ＭＳクロマトグラム上において、２９．９２分で溶出し、ｍ／ｚ５４６に分子イオンを有していた。このイオンの正確な質量測定は、０．３ｐｐｍの質量誤差で、Ｃ_２１Ｈ_１９Ｆ_３Ｎ_３Ｏ_９Ｓ^＋の化学式を与え、親分子イオンへのＳＯ_４部分の付加が示唆された。この分子イオンのＣＩＤは、親分子イオンからのＳＯ_３部分のニュートラルロス（－８０Ｄａ）に対応する、ｍ／ｚ４６６に主要イオンをもたらした。ＭＳ３スペクトルは、ｍ／ｚ４４８、４２３、３０７および２８９に断片イオンをもたらした。Ｍ２０の質量スペクトルは、Ｍ２０がビクテグラビルのヒドロキシル化された生成物の硫酸抱合体であることを示唆した。

代謝物の定量：プールされた血漿、尿および便試料のＬＣ－ラジオクロマトグラムを取得した。［^１４Ｃ］－ビクテグラビルおよびその代謝物の定量は、ラジオクロマトグラム上の対応するピークおよび対応する試料中に回収された放射能濃度／放射線量の積算に基づいた。排泄物中のビクテグラビルおよびその代謝物の濃度は、投与された用量のパーセントとして報告した。血漿試料中に測定された濃度は、ｎｇビクテグラビル相当／ｍＬとして報告した。

放射能回収率：便ホモジネートおよび血漿からの平均抽出回収率は、それぞれ９５．５％および１００．４％であった。乾燥された便および血漿抽出残留物からの平均再構成回収率は、それぞれ９９．９％および１００．３％であった。尿遠心過程からの回収率は１００．８％であった。尿濃縮過程からの回収率は１００．６％であった。ＨＰＬＣカラムからの放射能回収率は９９．３％であった。
プールされた便中のＭ２１およびＭ２２代謝物の分離および定量

これら２つの代謝物は代謝物プロファイリング過程の間に同時溶出したので、プールされた便試料中のＭ２１（ヒドロキシ－ビクテグラビル）およびＭ２２（デスフルオロ－ヒドロキシ－ビクテグラビル）を分離するために、液体クロマトグラフィーを使用した。Ｍ２２は単一のピークとして溶出し、放射能が定量されたが、Ｍ２１はＭ２３と同時溶出した。Ｍ２１のパーセントは、Ｍ２１／Ｍ２２混合物からＭ２２を差し引くことによって計算した。

Ｍ２１およびＭ２２は、各被験者ごとにプールされた便試料中で、投薬後１４４時間を通じて、平均して、それぞれ、投与量の４．８％および３．３％を占めた。収集間隔ごとにプールされた便試料中において、Ｍ２１およびＭ２２は、投薬後１４４時間を通じて、それぞれ、投与量の２．９％および４．１％を占めた。これらの分析は、ヒドロキシ－ビクテグラビル（Ｍ２１）およびデスフルオロ－ヒドロキシ－ビクテグラビル（Ｍ２２）のレベルが類似しており、投与量のおよそ３％～４％の範囲であることを示した。
結果の要約

薬物動態の結果：このマスバランス研究は、ビクテグラビルの回収が尿と比較して主に便に由来することを実証した。代謝は、ヒトにおいて、ビクテグラビルに対する主要な排出経路である。高速液体クロマトグラフィー（ＨＰＬＣ）－ＭＳ／ＴｏｐＣｏｕｎｔ法によって、合計２０のビクテグラビルの代謝物が同定された。直接のグルクロン酸抱合、ヒドロキシル化、脱フッ素、脱水素および酸化された代謝物の第ＩＩ相抱合が、ビクテグラビルに対する主要な代謝経路であった。

ヒト血漿中では、［^１４Ｃ］ビクテグラビルが主要な循環放射性成分であり、Ｍ２０（ヒドロキシ－ビクテグラビルのサルフェート）およびＭ１５（ビクテグラビルのグルクロニド）が血漿中の主要な代謝物であって、それぞれ、総放射能の血漿ＡＵＣ０～７２時間のおよそ６７．９％、２０．１％および８．６％を占めた。ヒト尿では、Ｍ１５（Ｍ５８とともに同時溶出、いずれもビクテグラビルの直接のグルクロニド）が主要な代謝物であった（投与量の２１．４％）。時間間隔によっておよび各被験者に対してプールされた便試料中の放射能は、主に、ビクテグラビル（投与量の３１％～３４％）、デスフルオロ－ヒドロキシ－ビクテグラビルのシステイン抱合体（投与量の１０％～１３％）、デスフルオロ－ヒドロキシ－ビクテグラビルとともに同時溶出されたヒドロキシ－ビクテグラビル（同時溶出されたピークに対して投与量の７％～８％）および微量の酸化産物によって占められた。Ｍ２１（ヒドロキシル－ビクテグラビル）およびＭ２２（デスフルオロ－ヒドロキシ－ビクテグラビル）のレベルは同様であり、それぞれ、平均して、ヒトから得た便中のＭ２１／Ｍ２２混合物中で投与量のおよそ３％～４％の範囲であった。
［実施例２］Ｍ１５、Ｍ２０およびＭ２３の合成および性質決定

Ｍ１５の調製

酢酸中の３３％ＨＢｒとの、１のアノマー性臭素化によって、７０％の結晶化された収率で臭化物２が得られた。６０℃での、アセトニトリル中のＡｇ_２ＣＯ_３の存在下における臭化物２でのフェノール３の処理によって、逆相クロマトグラフィー後に７５％収率で、化合物４が生成された。メタノール／水中のトリエチルアミンでの４の脱保護は、グルクロン酸５（Ｍ１５）へのきれいな転化を与えた。反応中に存在する３の量が増加し始めたので、９０％転化で反応を停止した。クロマトグラフィー溶媒中に０．１％ＴＦＡを加えた逆相クロマトグラフィーによって、混合物を精製した。凍結乾燥後に、遊離の酸が単離されたが、多量の３を含有していた。中性または酸性条件のいずれかで、遊離の酸５は不安定であることが発見された。Ｍ１５のトリエチルアミン塩（５）は安定であるように見受けられた。前記と同じ方法を用いて、別のバッチを精製したが、凍結乾燥前に、ＴＦＡをトリエチルアミンで中和した。化合物は、これらの条件に対して安定であったが、大量のトリフルオロ酢酸トリエチルアンモニウムを含有していた。全ての塩が除去されたわけではなかった。溶媒中にＴＦＡを加えずに、逆相クロマトグラフィーによってこの物質を精製した。凍結乾燥後に、Ｍ１５のトリエチルアミン塩（５）が高純度および２４％の総収率で単離された。

Ｍ２０の調製

工程１

約２分にわたって、テトラヒドロフラン（２．５ｍＬ）中のクロリド硫酸２，２，２－トリクロロエチル（２１８ｍｇ、０．８８ｍｍｏｌ）の溶液を添加しながら、テトラヒドロフラン（１０ｍＬ）中の、化合物６（３３３ｍｇ、０．７０ｍｍｏｌ）、４－（ジメチルアミノ）ピリジン（８５ｍｇ、０．７０ｍｍｏｌ）およびトリエチルアミン（０．２ｍＬ、１．４４ｍｍｏｌ）の溶液を室温で撹拌した。３．５時間後、さらなるトリエチルアミン（０．１ｍＬ、０．７２ｍｍｏｌ）およびクロリド硫酸２，２，２－トリクロロエチル（１００ｍｇ、０．４０ｍｍｏｌ）を添加した。添加から１．５時間後に、酢酸エチル（５０ｍＬ）で反応混合物を希釈し、水（×１）、１０％クエン酸（×１）、水（×１）および塩水（×１）で洗浄した。水性画分を酢酸エチル（×１）で抽出した後、有機画分を合わせ、乾燥し（ＭｇＳＯ_４）、濃縮した。ジクロロメタン中の０～１０％メタノールを溶出するＣｏｍｂｉＦｌａｓｈ（登録商標）（４０ｇカラム）によって残留物を精製して、４５８ｍｇ（９５％）の化合物７を得た。^１ＨＮＭＲ（４００ＭＨｚ，クロロホルム－ｄ）δ１０．４０（ｔ，Ｊ＝５．８Ｈｚ，１Ｈ），８．３３（ｓ，１Ｈ），６．８６（ｔｄ，Ｊ＝９．４，２．２Ｈｚ，１Ｈ），５．３７－５．３０（ｍ，２Ｈ），４．９５（ｓ，２Ｈ），４．６７（ｄ，Ｊ＝５．９Ｈｚ，２Ｈ），４．６３（ｓ，１Ｈ），４．１９（ｄｄ，Ｊ＝１２．７，３．９Ｈｚ，１Ｈ），４．０２（ｓ，３Ｈ），３．９８（ｄｄ，Ｊ＝１２．７，９．２Ｈｚ，１Ｈ），２．１３－１．９５（ｍ，４Ｈ），１．８３（ｑｄ，Ｊ＝８．７，７．６，３．５Ｈｚ，１Ｈ），１．５７（ｄｄｄ，Ｊ＝１２．３，４．１，２．９Ｈｚ，１Ｈ）。^１９ＦＮＭＲ（３７６ＭＨｚ，クロロホルム－ｄ）δ－１１０．３２（ｄｔ，Ｊ＝９．７，５．３Ｈｚ），－１２２．７６（ｄｄ，Ｊ＝９．９，５．６Ｈｚ），－１２５．４０（ｄ，Ｊ＝４．７Ｈｚ）。ＬＣＭＳ－ＥＳＩ^＋（ｍ／ｚ）：Ｃ_２４Ｈ_２２Ｃｌ_３Ｆ_３Ｎ_３Ｏ_９Ｓに対して計算された［Ｍ＋Ｈ］^＋：６９０．０１；実測：６９０．２７。
工程２

臭化マグネシウム（１８０ｍｇ、０．９８ｍｍｏｌ）を添加しながら、アセトニトリル（３ｍＬ）中の化合物７（２５５ｍｇ、０．３７ｍｍｏｌ）の溶液を室温で撹拌した。得られた懸濁液を５０℃の槽で撹拌した。３０分後に、不溶性物質が溶解するまで、数滴の０．１ＮＨＣｌを添加しながら、反応混合物を０℃で撹拌した。得られた溶液を水（３０ｍＬ）で希釈した後、ジクロロメタン（２５ｍＬ×３）で生成物を抽出した。合わせた抽出物を乾燥し（Ｎａ_２ＳＯ_４）、濃縮した。ジクロロメタン中の０～１５％メタノールを溶出するＣｏｍｂｉＦｌａｓｈ（登録商標）（４０ｇカラム）によって残留物を精製して、１７８ｍｇ（７１％）の化合物８を得た。^１ＨＮＭＲ（４００ＭＨｚ，ＤＭＳＯ－ｄ_６）δ１２．４６（ｓ，１Ｈ），１０．４４（ｔ，Ｊ＝５．９Ｈｚ，１Ｈ），８．４２（ｓ，１Ｈ），７．６３（ｔｄ，Ｊ＝１０．５，９．９，２．０Ｈｚ，１Ｈ），５．４３（ｄｄ，Ｊ＝９．５，４．０Ｈｚ，１Ｈ），５．３６（ｓ，２Ｈ），５．０９（ｓ，１Ｈ），４．７２－４．４８（ｍ，４Ｈ），４．０１（ｄｄ，Ｊ＝１２．７，９．５Ｈｚ，１Ｈ），１．９３（ｓ，４Ｈ），１．８３（ｄ，Ｊ＝１２．１Ｈｚ，１Ｈ），１．６２－１．５０（ｍ，１Ｈ）。^１９ＦＮＭＲ（３７６ＭＨｚ，ＤＭＳＯ－ｄ_６）δ－１１０．８３（ｄｄ，Ｊ＝９．８，５．２Ｈｚ），－１２４．０８（ｄｄ，Ｊ＝１０．９，５．５Ｈｚ），－１２６．４４。ＬＣＭＳ－ＥＳＩ^＋（ｍ／ｚ）：Ｃ_２３Ｈ_２０Ｃｌ_３Ｆ_３Ｎ_３Ｏ_９Ｓに対して計算された［Ｍ＋Ｈ］^＋：６７５．９９；実測：６７６．２６
工程３

重炭酸アンモニウム（７２１ｍｇ、９．１２ｍｍｏｌ）および亜鉛粉末（２１７ｍｇ、３．３２ｍｍｏｌ）を添加しながら、メタノール（２．５ｍＬ）中の化合物８（５０ｍｇ、０．０７４ｍｍｏｌ）の溶液を室温で撹拌した。得られた懸濁液を室温で１８時間撹拌した。室温で反応混合物を濃縮し、残留物を真空中で３０分間乾燥させた。約２分間の超音波処理によって、残留固体を０．０１Ｎ重炭酸アンモニウム（５０ｍＬ）で粉砕し、セライトを通してろ過する前に、得られた泥状物を室温で３０分間放置した。さらなる０．０１Ｎ重炭酸アンモニウム（１０ｍＬ）でフラスコおよびセライトパッドを洗浄した後、約２００ｍＬの、約５０％水性アセトニトリル中の０．０１Ｍ重炭酸アンモニウムで、続いて１００％水中の０．０１Ｍ重炭酸アンモニウムで予め平衡化された逆相ＣｏｍｂｉＦｌａｓｈ（登録商標）カラム（１５．５ｇ）上に合わせたろ液および洗浄液を搭載した。溶媒Ａ中の０～４５％溶媒Ｂ（溶媒Ａ：１００％水中の０．０１Ｍ重炭酸アンモニウム；溶媒Ｂ：８０％アセトニトリル水中の０．０１Ｍ重炭酸アンモニウム）を溶出するＣｏｍｂｉＦｌａｓｈ（登録商標）を用いてカラムを溶出し、生成物含有画分を合わせ、凍結乾燥して、アンモニウム塩として３１ｍｇ（７５％）の化合物９（Ｍ２０）を得た。ＬＣＭＳ－ＥＳＩ^－（ｍ／ｚ）：Ｃ_２１Ｈ_２２Ｃｌ_３Ｆ_３Ｎ_３Ｏ_９Ｓに対して計算された［Ｍ－Ｈ］^－：６９０．０１；実測：６９０．２７。

Ｍ２３の調製

工程１

エタノール（６０ｍＬ）中の、２，４，６－トリフルオロ－３－メトキシベンズアルデヒド（１０、２９９０ｍｇ、１５．７ｍｍｍｏｌ）、ヒドロキシルアミン塩酸塩（１３５２ｍｇ、１９．５ｍｍｏｌ）および酢酸ナトリウム（１５９８ｍｇ、１９．５ｍｍｏｌ）の懸濁液を、室温で２．５時間、激しく撹拌した。懸濁液を水（６０ｍＬ）で希釈し、氷槽で１時間撹拌した。得られた固体をろ過し、冷たい５０％水性エタノールで洗浄し、真空中で一晩乾燥して、２９４２ｍｇ（９１％）の化合物１１を得た。^１ＨＮＭＲ（４００ＭＨｚ，ＤＭＳＯ－ｄ_６）δ１１．８６（ｓ，１Ｈ），８．０８（ｓ，１Ｈ），７．３８（ｔｄ，Ｊ＝１１．０，２．２Ｈｚ，１Ｈ），３．９０（ｓ，３Ｈ）。^１９ＦＮＭＲ（３７６ＭＨｚ，ＤＭＳＯ－ｄ_６）δ－１１７．２５（ｄｄ，Ｊ＝１０．９，３．５Ｈｚ），－１２５．３４（ｄｄｄ，Ｊ＝１１．９，８．６，３．６Ｈｚ），－１２８．３５（ｄｄ，Ｊ＝８．５，２．２Ｈｚ）。ＬＣＭＳ－ＥＳＩ^＋（ｍ／ｚ）：Ｃ_８Ｈ_７Ｆ_３ＮＯ_２に対して計算された［Ｍ＋Ｈ］^＋：２０６．０４；実測：２０６．００。
工程２

３０分にわたって、亜鉛粉末（１５００ｍｇ、７．６５ｍｍｏｌ）を滴加しながら、酢酸（６ｍＬ）中の化合物１１（６０１ｍｇ、０．９８ｍｍｏｌ）の溶液を６５℃で撹拌した。添加後、混合物を６５℃で撹拌した。１．５時間後に、反応混合物をろ過し、ろ液を乾燥状態まで濃縮した。残留物を水中に溶解し、ジエチルエーテル（×１）で洗浄した。２滴の酢酸を加えた水で有機画分を抽出した後、２つの水性画分を合わせ、中性になるまで飽和水性ＮａＨＣＯ_３で希釈し、酢酸エチル（約２５ｍＬ×５）で抽出した。抽出液を合わせ、乾燥し（ＭｇＳＯ_４）、濃縮して、４４０ｍｇ（７９％）の対応する未精製アミン１２を得た。ＬＣＭＳ－ＥＳＩ^＋（ｍ／ｚ）：Ｃ_８Ｈ_９Ｆ_３ＮＯに対して計算された［Ｍ＋Ｈ］^＋：１９２．０６；実測：１９１．８６。
工程３

ジクロロメタン（７ｍＬ、７ｍｍｏｌ）中の１Ｍ三臭化ホウ素を添加しながら、ジクロロメタン（１．５ｍＬ）中の上記アミン１２（４４０ｍｇ、２．３０ｍｍｏｌ）の溶液を室温で撹拌した。２時間後に、ジクロロメタン（１ｍＬ、１ｍｍｏｌ）中のさらなる１Ｍ三臭化ホウ素をこの溶液に添加した。添加から２時間後に、氷槽で反応混合物を冷却し、メタノール（１５ｍＬ）をゆっくり添加した。溶液を濃縮し、残留した油を、濃縮前にメタノール（約１５ｍＬ）で溶解し、これを４回繰り返した。得られた残留物をメタノール中に溶解し、トリエチルアミン（１．５ｍＬ、１０．７６ｍｍｏｌ）、続いて、二炭酸ジ－ｔｅｒｔ－ブチル（５９３ｍｇ、２．７２ｍｍｏｌ）を添加する前に、氷槽中で撹拌した。得られた混合物を０℃で２時間、次いで、室温で一晩撹拌した。得られた溶液を濃縮した後、酢酸エチル（約３０ｍＬ）および水（約３０ｍＬ）中に残留物を溶解し、１０％クエン酸で酸性にした。２つの画分を分割し、酢酸エチル（×１）で水性画分を抽出した。有機画分を塩水（×１）で洗浄した後、有機画分を合わせ、乾燥し（ＭｇＳＯ_４）、濃縮した。ヘキサン中の０～１００％ＥＡを溶出するＣｏｍｂｉＦｌａｓｈ（登録商標）（４０ｇカラム）によって残留物を精製して、５３０ｍｇ（８３％）の化合物１３を得た。^１ＨＮＭＲ（４００ＭＨｚ，クロロホルム－ｄ）δ６．７０（ｄｄｄ，Ｊ＝１０．３，９．４，２．３Ｈｚ，１Ｈ），５．６２（ｂｒ，１Ｈ），４．８９（ｓ，１Ｈ），４．３７（ｄ，Ｊ＝５．８Ｈｚ，２Ｈ），１．４４（ｓ，９Ｈ）。^１９ＦＮＭＲ（３７６ＭＨｚ，クロロホルム－ｄ）δ－１２５．１７～－１２６．４２（ｍ，１Ｆ），－１３２．９２～－１３４．２８（ｍ，１Ｆ），－１３７．３９（ｍ，１Ｆ）。ＬＣＭＳ－ＥＳＩ^＋（ｍ／ｚ）：Ｃ_８Ｈ_７Ｆ_３ＮＯ_３に対して計算された［Ｍ－Ｃ_４Ｈ_８＋Ｈ］^＋：２２２．０４；実測：２２１．９５。
工程４

ジオキサン（４．８ｍＬ、１９．２ｍｍｏｌ）中の４ＭＨＣｌを添加しながら、ジクロロメタン（４．８ｍＬ）中の化合物１３（５３０ｍｇ、１．９１ｍｍｏｌ）の溶液を０℃で撹拌した。添加後、混合物を室温で撹拌した。１．７５時間後に、反応混合物を濃縮し、真空中で一晩乾燥する前に、残存した白色固体をトルエン（約２０ｍＬ×２）と同時蒸発させて、３９９ｍｇ（９８％）の未精製アミン塩酸塩を得た。

Ｎ，Ｎ－ジイソプロピルエチルアミン（１．６５ｍＬ、９．４７ｍｍｏｌ）を添加しながら、ジクロロメタン（１２ｍＬ）中の、酸１４（６００ｍｇ、１．８７ｍｍｏｌ）、上記アミンＨＣｌ塩（３９９ｍｇ、１．８７ｍｍｏｌ）および２－（７－アザ－１Ｈ－ベンゾトリアゾール－１－イル）－１，１，３，３－テトラメチルウロニウムヘキサフルオロホスフェート）（ＨＡＴＵ、７４８ｍｇ、１．９７ｍｍｏｌ）の懸濁液を室温で撹拌した。１５分後に、さらなるＨＡＴＵ（７１２ｍｇ、１．８７ｍｍｏｌ）、Ｎ，Ｎ－ジイソプロピルエチルアミン（１．６５ｍＬ、９．４７ｍｍｏｌ）およびＤＭＦ（３ｍ）を混合物に添加した。添加から１５分後に、ジクロロメタンの大部分を除去するために溶液を濃縮し、残留物をメタノール（２５ｍＬ）で希釈した。室温で１時間、得られた溶液を撹拌した後、メタノールの大部分を除去するために濃縮し、水性塩化アンモニウム（×２）、水性ＮａＨＣＯ_３（×２）および塩水（×１）で洗浄する前に、酢酸エチル（約７０ｍＬ）で希釈した。水性画分を酢酸エチル（約７５ｍＬ×１）で抽出した後、有機画分を合わせ、乾燥し（ＭｇＳＯ_４）、濃縮した。ジクロロメタン中の０～１１％メタノールを溶出するＣｏｍｂｉＦｌａｓｈ（登録商標）（８０ｇカラム）によって残留物を精製して、６４７ｍｇ（７２％）の化合物６を得た。^１ＨＮＭＲ（４００ＭＨｚ，クロロホルム－ｄ）δ１０．３２（ｔ，Ｊ＝５．８Ｈｚ，１Ｈ），８．３３（ｓ，１Ｈ），７．２５（ｓ，１Ｈ），６．６５（ｄｄｄ，Ｊ＝１０．７，９．４，２．２Ｈｚ，１Ｈ），５．３６（ｄｄ，Ｊ＝９．６，３．７Ｈｚ，２Ｈ），４．６８－４．５３（ｍ，３Ｈ），４．２５（ｄｄ，Ｊ＝１２．８，３．８Ｈｚ，１Ｈ），４．０２（ｄｄ，Ｊ＝１３．０，９．９Ｈｚ，１Ｈ），３．９９（ｓ，３Ｈ），２．１４－１．９３（ｍ，４Ｈ），１．９１－１．７８（ｍ，１Ｈ），１．６１－１．５２（ｍ，１Ｈ）。^１９ＦＮＭＲ（３７６ＭＨｚ，クロロホルム－ｄ）δ－１２５．８５（ｄ，Ｊ＝９．２Ｈｚ），－１３２．７８（ｔ，Ｊ＝１０．６Ｈｚ），－１３６．０３（ｄ，Ｊ＝１０．７Ｈｚ）。ＬＣＭＳ－ＥＳＩ^＋（ｍ／ｚ）：Ｃ_２２Ｈ_２１Ｆ_３Ｎ_３Ｏ_６に対して計算された［Ｍ＋Ｈ］^＋：４８０．１４；実測：４８０．２７。
工程５

アセトニトリル（約１０ｍＬ）中の化合物６（３００ｍｇ、０．６３ｍｍｏｌ）の溶液に、室温で臭化マグネシウム（２９９ｍｇ、１．６３ｍｍｏｌ）を添加し、得られた混合物を５０℃の槽で２０分間撹拌した。反応混合物を濃縮し、水（１００ｍＬ）およびジクロロメタン（１００ｍＬ）で残留物を粉砕した。氷槽中に入れながら懸濁液を撹拌し、混合物を強酸性（ｐＨ、約２）にするために１ＮＨＣｌを添加した。不溶性生成物をろ過した後、２つの画分を分割し、ジクロロメタン（約１００ｍＬ×２）で水性画分を抽出した。合わせた有機画分を乾燥し（ＭｇＳＯ_４）、濃縮し、ジクロロメタン中の０～２０％メタノールを溶出するＣｏｍｂｉＦｌａｓｈ（登録商標）（２４ｇカラム）によって精製した。得られた生成物を、以前に得られた固体生成物と合わせ、メタノール中に溶解し、細片を除去するためにろ過し、濃縮して非晶質固体を得た。非晶質固体をアセトニトリル（約１０ｍＬ）中で結晶化し、形成された結晶をろ過し、冷アセトニトリルで洗浄し、真空中で乾燥させて２０９ｍｇ（７２％）の化合物１５（Ｍ２３）を得た。^１ＨＮＭＲ（４００ＭＨｚ，ＤＭＳＯ－ｄ_６）δ１２．４４（ｓ，１Ｈ），１０．３３（ｔ，Ｊ＝５．７Ｈｚ，１Ｈ），１０．１１（ｓ，１Ｈ），８．４４（ｓ，１Ｈ），７．２７－７．０１（ｍ，１Ｈ），５．４４（ｄｄ，Ｊ＝９．６，４．１Ｈｚ，１Ｈ），５．０９（ｄ，Ｊ＝３．８Ｈｚ，１Ｈ），４．６７（ｄｄ，Ｊ＝１２．９，４．１Ｈｚ，１Ｈ），４．６０（ｓ，１Ｈ），４．５９－４．４３（ｍ，２Ｈ），４．０２（ｄｄ，Ｊ＝１２．７，９．６Ｈｚ，１Ｈ），１．９３（ｄ，Ｊ＝５．１Ｈｚ，４Ｈ），１．８４（ｄ，Ｊ＝１２．１Ｈｚ，１Ｈ），１．５７（ｄｔ，Ｊ＝１２．２，３．５Ｈｚ，１Ｈ）。^１９ＦＮＭＲ（３７６ＭＨｚ，ＤＭＳＯ－ｄ_６）δ－１２７．１３，－１３１．５２（ｔ，Ｊ＝１１．２Ｈｚ），－１３４．５９（ｄ，Ｊ＝１１．４Ｈｚ）。ＬＣＭＳ－ＥＳＩ^＋（ｍ／ｚ）：Ｃ_２１Ｈ_１９Ｆ_３Ｎ_３Ｏ_６に対して計算された［Ｍ＋Ｈ］^＋：４６６．１２；実測：４６６．２６。
［実施例３］Ｍ１５の化学構造の確認
一般的方法

実験装置の通常の精度上の制約のために、全ての時間、遠心速度、温度および容量は近似である。別段の注記がなければ、遠心は、以下の表に要約されているとおりに行った。

血漿

本実施例で使用された血漿試料は、分析前および分析後に、およそ－７０℃で保存した。投薬の８時間後に、重量で０．４ｇの各試料を含む、男性被験者から取得した血漿試料をプールした。液体シンチレーション計数（ＬＳＣ）によって、プールされた試料中の放射能を決定した。

およそ１ｇのプールされた血漿試料を、３ｍＬの、アセトニトリル（ＡＣＮ）中の０．２％（ｖ／ｖ）ギ酸（ＦＡ）と合わせ、超音波処理し、渦撹拌して混合し、遠心し、上清を除去した。抽出を繰り返し、各上清を合わせた。抽出回収率を決定するために、ＬＳＣによって２つ組みの分割試料を分析すると、抽出回収率は９６．６％であった。

窒素下で、合わせた上清を乾燥するまで蒸発させ、３５０μＬの逆浸透水：アセトニトリル（ＡＣＮ）中の０．２％（ｖ／ｖ）ギ酸（ＦＡ）：メタノール：（４：１：２、ｖ：ｖ：ｖ）中に再構成した。試料を超音波処理し、渦撹拌で混合し、遠心し、再構成回収率を決定するために、ＬＳＣによって２つ組みの分割試料を分析すると、再構成回収率は１０４％であった。固体シンチラントを含有する９６ウェルプレート中に、１０秒間隔で溶出画分を収集しながら、再構成された試料をＬＣ－ＭＳによって分析した。ＴｏｐＣｏｕｎｔ分析を用いて各ウェル中の放射能を測定し、放射能計数に基づいて、放射化学プロファイルを作製した。
Ｍ１５標準との血漿試料の同時クロマトグラフィ－

４０μＬのプールされた８時間血漿試料を４０μＬのＭ１５の標準溶液（５００ｎｇ／ｍＬ）と合わせることによって、さらなる血漿試料を調製した。以下の機器および条件を用いるＬＣ－ＭＳによって、試料を分析した：

代謝物の同定

ヒト血漿の試料をＬＣ－ＭＳを使用することによって分析し、代謝物Ｍ１５が標準と同じ成分であることを確認した。血漿試料の分析から得られたＭ１５の構造、親質量および特徴的なプロダクトイオンが表２に記されている。代表的な正確な質量データの要約が表３に記されている。

標準的な溶液中のＭ１５に対する抽出イオンクロマトグラムが図２に記されている。プールされた血漿試料中のＭ１５に対するラジオクロマトグラムおよび抽出イオンクロマトグラムが、図３に記されている。標準、プールされた血漿試料および同時注射試料を比較する抽出イオンクロマトグラムが、図４に記されている。Ｍ１５および標準Ｍ１５が同一の成分であることを確認するために、Ｍ１５標準溶液およびヒト血漿試料を別々に分析し、同時注射した。個別に分析した場合、Ｍ１５の保持時間は、Ｍ１５標準溶液およびヒト血漿試料において、それぞれ、２６．２４分および２６．２８分であった（図１および図２）。Ｍ１５標準溶液および血漿試料を同時注射すると、図４に示されているように、２６．２８分の保持時間を有する単一のピークが観察された。

Ｍ１５の標準溶液の分析から得られたＭ１５の代表的なＭＳプリカーサーおよびＭＳ／ＭＳプロダクトイオン質量スペクトルが図５に示されている。ＭＳプリカーサーイオン質量スペクトルは、ｍ／ｚ６２６にプロトン化された分子イオンを示す。ＭＳ／ＭＳプロダクトイオン質量スペクトルは、ｍ／ｚ４５０、２８９、２６１および１４５に断片イオンを示す。研究試料の分析から得られた代謝物Ｍ１５の代表的なＭＳプリカーサーおよびＭＳ／ＭＳプロダクトイオン質量スペクトルが図６に示されており、ＭＳ／ＭＳプロダクトイオン質量スペクトルは、標準のものと実質的に同じである。代謝物Ｍ１５の元素組成は、正確な質量分析を用いて確認され、表３に示されている。

［実施例４］Ｍ２０の化学構造の確認
実験装置の通常の精度上の制約のために、全ての時間、遠心速度、温度および容量は近似である。別段の注記がなければ、遠心は、およそ２８００×ｇの速度で、１０分間、室温で行った。
溶液

試料調製手順のために以下の溶液を使用した。

血漿

投薬の８時間後に、２００μＬの各試料を含む、男性被験者から取得した血漿試料をプールした。液体シンチレーション計数（ＬＳＣ）によって、プールされた各試料中の放射能を決定した。

プールされた血漿試料を、３ｍＬの、アセトニトリル（ＡＣＮ）中の０．２％（ｖ／ｖ）ギ酸（ＦＡ）と合わせ、超音波処理し、渦撹拌して混合し、遠心し、上清を除去した。抽出を繰り返し、各上清を合わせた。抽出回収率を決定するために、ＬＳＣによって２つ組みの分割試料を分析すると、抽出回収率は９８．６％であった。窒素下で、合わせた上清を乾燥するまで蒸発させ、３５０μＬの逆浸透水：メタノール：ＡＣＮ中の０．２％（ｖ／ｖ）ＦＡ（４：２：１、ｖ：ｖ：ｖ）中に再構成した。試料を超音波処理し、渦撹拌で混合し、遠心し、再構成回収率を決定するために、ＬＳＣによって２つ組みの分割試料を分析すると、再構成回収率は１００％であった。固体シンチラントを含有する９６ウェルプレート中に、１０秒間隔で溶出画分を収集しながら、再構成された試料をＬＣ－ＭＳによって分析した。ＴｏｐＣｏｕｎｔ分析を用いて各ウェル中の放射能を測定し、放射能計数に基づいて、放射化学プロファイルを作製した。
Ｍ２０標準との血漿試料の同時クロマトグラフィ－

１００μＬの再構成された８時間プールされた血漿試料を５０μＬのＭ２０の標準溶液と合わせることによって、さらなる試料を調製した。得られた試料は、およそ１：１比のビクテグラビル：Ｍ２０を含有した。以下の機器および条件を用いるＬＣ－ＭＳによって、試料を分析した。

代謝物の同定

標準としてのおよび血漿試料中のＭ２０の構造、親質量および特徴的なプロダクトイオンが表５に記されている。代表的な正確な質量データの要約が表６に記されている。

標準的な溶液中のＭ２０に対する抽出イオンクロマトグラムが図７に記されている。プールされた血漿試料中のＭ２０に対する抽出イオンクロマトグラムおよびラジオクロマトグラムが、図８に記されている。標準、プールされた血漿試料および同時注射試料を比較する抽出イオンクロマトグラムが、図９に記されている。標準溶液のＭ２０およびＭ２０が同一の成分であることを確認するために、Ｍ２０標準溶液およびヒト血漿試料を別々に分析し、同時注射した。個別に分析した場合、Ｍ２の保持時間は、Ｍ２０標準溶液およびヒト血漿試料において、それぞれ、３６．９６分および３７．９４分であった（図９）。Ｍ２０標準溶液および血漿試料を同時注射すると、３７．２９分の保持時間を有する単一のピークが観察された。

Ｍ２０のプロトン化された分子イオンは、ｍ／ｚ５４６に観察された（データは示さず）。Ｍ２０の標準溶液の分析から得られたＭ２０の代表的なプロダクトイオン質量スペクトルが図１０に示されている。質量スペクトルは、ｍ／ｚ４６６（ＳＯ_３の喪失）、３０７（ｍ／ｚ２８９プラス水）、２８９および１６１にプロダクトイオンを示した。ヒト血漿試料から得られたＭ２０の代表的なプロダクトイオン質量スペクトルが図１１に示されており、標準のものと実質的に同一である。Ｍ２０の元素組成は、正確な質量分析を用いて確認され、表６に示されている。

［実施例５］ＢＩＣ、Ｍ１５、Ｍ２０およびＭ２３のヒトＭＲＰ２阻害可能性のインビトロでの評価
アッセイ方法
ビクテグラビルおよびその代謝物（Ｍ１５、Ｍ２０およびＭ２３）による肝臓排出輸送体多剤耐性タンパク質２（ＭＲＰ２；ＡＢＣＣ２）の阻害を以下のアッセイで調べた。輸送体阻害アッセイに対する細胞および実験条件は、以下の表７に要約されている。ＢＩＣは、例えば、国際公開第２０１４／１００２１２号に記載されている手法にしたがって合成することができる。Ｍ１５、Ｍ２０およびＭ２３は、本明細書に記載されている手法にしたがって調製した。全ての他の材料は、ＳＯＬＶＯ Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙによって購入され、実験は、その認証されたＩＳＯ９００１：２００８システムのＳＯＬＶＯ標準操作手順書（ＳＯＰｓ）にしたがって実施した。ロットおよび製品情報は、ＳＯＬＶＯ Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙによって記録された。

（Ｅ_２１７βＧ）エストラジオール－１７β－グルクロニド
膜小胞中での輸送の阻害

ＡＴＰの不存在下または存在下で、膜小胞調製物（全タンパク質：５０μｇ／ウェル）およびモデル基質とともに試験化合物および陽性対照をインキュベートした。反応混合物を１５分間、３７℃で予めインキュベートした。別個に予めインキュベートされた２５μＬの１２ｍＭ ＭｇＡＴＰまたはＡＭＰアッセイ緩衝液（バックグラウンド対照用）の添加によって反応を開始した。２００μＬの氷冷した洗浄緩衝液の添加および９６ウェルプレートに載せたガラスファイバーフィルター（フィルタープレート）を介した即座のろ過によって、５分後に反応を停止させた。フィルターを洗浄し、乾燥させ、ろ過された小胞内部の基質の量を液体シンチレーションによって決定した。陽性対照阻害剤を平行して試験した。輸送体発現を欠く対照膜を陰性対照として使用した。全てのアッセイは、２つ組みで行った。

割合的輸送活性は、以下の式から算出した。
活性％＝（Ａ－Ｂ）／（Ｃ－Ｄ）×１００
式中、ＡはＴＡおよびＡＴＰの存在下での基質の転位した量であり、Ｂは、ＴＡの存在下での基質の転位した量であり、Ｃは、溶媒およびＡＴＰの存在下での基質の転位した量であり、Ｄは、溶媒の存在下での基質の転位した量である。
輸送体アッセイでのＩＣ_５０決定

ＩＣ_５０は、最大の輸送体特異的輸送を５０％阻害するために必要とされる被験物質濃度として定義される。ＩＣ_５０値は、ＧｒａｐｈＰａｄ Ｐｒｉｓｍ ５（ＧｒａｐｈＰａｄ Ｓｏｆｔｗａｒｅ Ｉｎｃ．，Ｓａｎ Ｄｉｅｇｏ，ＣＡ）を使用して、可変ヒル係数を有するＳ字形曲線への、％阻害対濃度の非線形適合を用いて算出した。％阻害が、試験された最高の濃度で５０％未満であった場合には、ＩＣ_５０は決定しなかった。＜２０％の相対阻害結果および試験された最高濃度まで濃度依存的輸送観察なしに対しては、阻害観察されず（ＮＩＯ）を報告する。

阻害データは、表８に要約されている。２００μＭでの陽性対照ベンズブロマロンは、各アッセイにおいて≧９９％阻害を示した。ＢＩＣは、最大１００μＭまでの濃度で、ＭＲＰ２媒介性Ｅ_２１７βＧの阻害を示した。Ｍ１５およびＭ２０は、それぞれ、２５６μＭおよび４５μＭの算出されたＩＣ_５０値で、Ｅ２１７βＧのＭＲＰ２媒介性輸送の用量依存性阻害を示した。Ｍ２０に関しては、調査された最高濃度３００μＭで、アッセイ緩衝液中に沈殿が観察された。Ｍ２３は、１００μＭの最高試験濃度で、ＭＲＰ２媒介性輸送の４３％阻害を示した。

［実施例６］ＢＩＣ、Ｍ１５、Ｍ２０およびＭ２３のヒトＯＡＴＰ阻害可能性のインビトロでの評価
アッセイ方法
ヒト取り込み輸送体有機陰イオン輸送ポリペプチド１Ｂ１、１Ｂ３および２Ｂ１（ＯＡＴＰ１Ｂ１、ＯＡＴＰ１Ｂ３、ＯＡＴＰ２Ｂ１；ＳＬＣ）のＢＩＣおよびその代謝物（Ｍ１５、Ｍ２０およびＭ２３）による阻害を以下のアッセイで調べた。

輸送体阻害アッセイに対する細胞および実験条件は、以下の表９に要約されている。ＢＩＣは、例えば、国際公開第２０１４／１００２１２号に記載されている手法にしたがって合成することができる。Ｍ１５、Ｍ２０およびＭ２３は、本明細書に記載されている手法にしたがって調製した。

（ＨＥＫ２９３ＦＴ）ＳＶ４０巨大Ｔ抗原で形質転換された急速に成長しているヒト胎児由来腎臓細胞
（Ｅ_２１７βＧ）エストラジオール－１７β－グルクロニド
（Ｅ３Ｓ）エストロン－３－サルフェート
（ＭＤＣＫＩＩ）メイディン・ダービー・イヌ腎臓サブクローンＩＩ
プローブ基質としてＦｌｕｏ－３を使用するＯＡＴＰ１Ｂ１およびＯＡＴＰ１Ｂ３阻害アッセイ

野生型またはヒトＯＡＴＰ１Ｂ１もしくはＯＡＴＰ１Ｂ３をコードする遺伝子を形質移入されたチャイニーズハムスター卵巣（ＣＨＯ）細胞を、１，０００ｍｇ／Ｌ、Ｄ－グルコース、Ｌ－グルタミン、２５ｍＭＨＥＰＥＳ緩衝液および１１０ｍｇ／Ｌピルビン酸ナトリウム、１％Ｐｅｎ／Ｓｔｒｅｐ、１０％ウシ胎児血清、０．０５ｍｇ／ｍＬＬ－プロリンおよび０．５ｍｇ／ｍＬのジェネテシンＧ－４１８を含有するダルベッコ変法イーグル培地（ＤＭＥＭ）中に維持した。３７℃、９０％湿度および５％ＣＯ_２に設定された恒温槽中に細胞を維持した。透明な底を有するＢｉｏＣｏａｔポリ－Ｄ－リジン被覆された９６ウェル黒色細胞培養プレート中に、１×１０^５細胞／ウェルの密度で、ＯＡＴＰ１Ｂ１またはＯＡＴＰ１Ｂ３を過剰発現するＣＨＯ細胞を播種した。タンパク質発現レベルを増加させるために、ＯＡＴＰ１Ｂ１およびＯＡＴＰ１Ｂ３細胞に酪酸ナトリウム（１０ｍＭ）を添加し、集密状態になるまで細胞を一晩増殖させた。アッセイ緩衝液は、１４２ｍＭＮａＣｌ、５ｍＭＫＣｌ、１ｍＭＫＨ_２ＰＯ_４、１．２ｍＭＭｇＳＯ_４、１．５ｍＭＣａＣｌ_２、５ｍＭグルコースおよび１２．５ｍＭＨＥＰＥＳ（ｐＨ７．４）を含有した。培地の除去後および試験化合物を添加する前に、３７℃のアッセイ緩衝液で細胞を２回洗浄した後、アッセイ緩衝液とともに０．５時間の事前インキュベーションを行った。化合物スパイキング溶液を作製するために、２５０倍の最終試験濃度で、試験化合物をＤＭＳＯ中に系列希釈した。次いで、２μＭＦｌｕｏ－３を含有するアッセイ緩衝液中に化合物を添加し、細胞とともに１時間インキュベーションを行った。Ｆｌｕｏ－３および試験化合物を含有するアッセイ緩衝液の除去後、２００μＬの氷冷したアッセイ緩衝液で細胞を３回洗浄し、次いで、１ｍＭＣａＣｌ_２溶液中に０．０５％ＳＤＳを含有する溶解緩衝液中において、室温で１５分間溶解した。４８５ｎｍの励起および５３０ｎｍの発光でＦｌｕｏ－３蛍光に対して、基質蓄積を測定した。
プローブ基質として^３Ｈ－Ｅ_２１７βＧを使用するＯＡＴＰ１Ｂ１およびＯＡＴＰ１Ｂ３阻害アッセイ

ＨＥＫ２９３ＦＴ偽細胞およびＯＡＴＰ形質移入細胞（それぞれ１×１０^５細胞）を、アッセイ前に２４時間播種した。様々な濃度の試験化合物または陽性対照リファンピシンの存在下で、ＨＫ緩衝液中の１μＭ^３Ｈ－Ｅ_２１７βＧとともに、予めすすがれた細胞（ｅｌｌｓ）を３分間インキュベートした。実験後、クレブス・ヘンゼライト緩衝液で細胞をすすぎ、０．１ＭＮａＯＨで溶解した。液体シンチレーション読み取り装置によって、細胞内部の基質の量を決定した。
ＯＡＴＰ２Ｂ１阻害アッセイ

ＭＤＣＫＩＩ偽細胞およびＯＡＴＰ２Ｂ１形質移入細胞（それぞれ１×１０^５細胞）を、アッセイ前に２４時間播種した。様々な濃度の試験化合物または陽性対照フルバスタチンの存在下で、ＨＫ緩衝液中の０．２μＭ^３Ｈ－Ｅ３Ｓとともに、予めすすがれた細胞を２分間インキュベートした。実験後、クレブス・ヘンゼライト緩衝液で細胞をすすぎ、０．１ＭＮａＯＨで溶解した。液体シンチレーション読み取り装置によって、細胞内部の基質の量を決定した。

ＯＡＴＰ阻害アッセイに対するデータ解析
以下の式にしたがって、パーセント阻害を計算した：
％阻害＝［１－｛［ＯＡＴＰ］ｉ－［ＷＴ］ｎｉ｝／｛［ＯＡＴＰ］ｎｉ－［ＷＴ］ｎｉ｝］＊１００
式中：
［ＯＡＴＰ］ｉは、ＯＡＴＰ１Ｂ１、ＯＡＴＰ１Ｂ３またはＯＡＴＰ２Ｂ１細胞のいずれかに対する、試験化合物の存在下での基質蓄積を表し、
［ＯＡＴＰ］ｎｉは、それぞれ、ＯＡＴＰ１Ｂ１、ＯＡＴＰ１Ｂ３またはＯＡＴＰ２Ｂ１細胞のいずれかに対する、試験化合物の不存在下での基質蓄積を表し、
［ＷＴ］ｎｉは、それぞれ、野生型細胞または偽細胞に対する、試験化合物の不存在下での基質蓄積を表す。
輸送体アッセイでのＩＣ_５０決定

ＩＣ_５０は、実施例５に記載されている手法にしたがって決定した。各輸送体に対する陽性対照阻害剤は、各アッセイにおいて＞８０％阻害を示した。アッセイが行われたＢＩＣ、Ｍ１５、Ｍ２０およびＭ２３の最高濃度は、それぞれ、１００、１００、３００および１００μＭであった。＜２０％阻害を有する化合物または用量依存性阻害が観察されなかった化合物については、ＩＣ_５０は決定されなかった。結果は、ＮＩＯ（相互作用観察されず（ｎｏ ｉｎｔｅｒａｃｔｉｏｎ ｏｂｓｅｒｖｅｄ））として報告されている。

ＢＩＣは、１００μＭの最高試験濃度で、ＯＡＴＰ１Ｂ１媒介性エストラジオール－１７β－グルクロニド（Ｅ_２１７βＧ）輸送の阻害を示さなかった。ＢＩＣは、最高の試験濃度１００μＭで、ＯＡＴＰ２Ｂ１細胞によるエストロン－３－サルフェート取り込みの１７％を阻害した。ＢＩＣに対するデータは、表１０に要約されている。

Ｍ１５は、１００μＭの最高試験濃度で、Ｆｌｕｏ－３輸送のＯＡＴＰ１Ｂ１媒介性輸送の３９％阻害を示し、Ｆｌｕｏ－３輸送のＯＡＴＰ１Ｂ３媒介性輸送の阻害を示さなかった。Ｍ１５に対するデータは、表１１に要約されている。

Ｍ２０は、１００μＭの最高試験濃度で、エストラジオール－１７β－グルクロニド（Ｅ_２１７βＧ）輸送のＯＡＴＰ１Ｂ１媒介性輸送の１２％阻害およびエストラジオール－１７β－グルクロニド（Ｅ_２１７βＧ）輸送のＯＡＴＰ１Ｂ３媒介性輸送の４９％阻害を示した。Ｍ２０は、９０．１μＭのＩＣ_５０値でＯＡＴＰ１Ｂ１媒介性Ｆｌｕｏ－３輸送を阻害し、１００μＭでＯＡＴＰ１Ｂ３媒介性Ｆｌｕｏ－３輸送の１８％を阻害した。Ｍ２０は、最高の試験濃度１００μＭで、ＯＡＴＰ２Ｂ１細胞によるエストロン－３－サルフェート取り込みの２６％を阻害した。Ｍ２０に対するデータは、表１２に要約されている。

＊アッセイ緩衝液中に、３００μＭの試験濃度で、試験化合物の沈殿が観察された。３００μＭでのデータは、ＩＣ_５０値の決定のために使用しなかった。

Ｍ２３は、９９．９μＭのＩＣ_５０値でＯＡＴＰ１Ｂ１媒介性Ｆｌｕｏ－３輸送を阻害し、１００μＭの最高試験濃度でＦｌｕｏ－３輸送のＯＡＴＰ１Ｂ３媒介性輸送の２０％を阻害した。Ｍ２３に対するデータは、表１３に要約されている。

総じて、ＢＩＣは、最大１００μＭまでの濃度で、ＯＡＴＰ１Ｂ１、ＯＡＴＰ１Ｂ３およびＯＡＴＰ２Ｂ１媒介性輸送に対して用量依存性阻害を示さなかった。Ｍ１５、Ｍ２０およびＭ２３は、それぞれ、＞１００、９０．１および９９．９μＭのＩＣ_５０でＯＡＴＰ１Ｂ１媒介性Ｆｌｕｏ－３輸送を阻害した。Ｍ１５、Ｍ２０およびＭ２３は、最大１００μＭまでの濃度で、ＯＡＴＰ１Ｂ３媒介性Ｆｌｕｏ－３輸送に最小限の阻害を示すか、または阻害を示さなかった。Ｍ２０は、ＯＡＴＰ１Ｂ１媒介性Ｅ_２１７βＧ輸送の用量依存性阻害を示さなかったが、＞１００μＭのＩＣ_５０で、ＯＡＴ１Ｂ３媒介性Ｅ_２１７βＧ輸送およびＯＡＴＰ２Ｂ１媒介性エストロン－３－サルフェート輸送の両方を阻害した。最高試験濃度で２０％以下の阻害については、ＩＣ_５０値は報告しなかった。
［実施例７］ヒト肝臓ミクロソームビリルビングルクロン酸抱合に対するビクテグラビルおよびその代謝物の阻害可能性のインビトロでの評価

本実施例では、ビリルビングルクロン酸抱合によるアッセイによって、ビクテグラビルおよびその代謝物、Ｍ１５、Ｍ２０およびＭ２３がヒト肝臓ミクロソームＵＧＴ１Ａ１の触媒活性を低下させる可能性を判定した。このアッセイでは、ビクテグラビルおよびその代謝物の存在下および不存在下でビリルビン基質からの酵素特異的代謝物形成の速度を定量し、それらのＩＣ５０値を決定した。本研究は、ビクテグラビルおよび／またはその代謝物が他の薬物とのおよび内在性化合物との薬物動態的相互作用を経る可能性が存在するかどうかを評価するのに有用である。このアッセイでは、ＩＣ５０値を決定する意図で、ビリルビンの抱合に関与する主要なヒトグルクロン酸抱合酵素であるウリジン二リン酸グルクロン酸転移酵素１Ａ１（ＵＧＴ１Ａ１）の活性に対するビクテグラビルおよびその代謝物の阻害効果をインビトロで評価した。
材料

ＢＩＣは、例えば、国際公開第２０１４／１００２１２号に記載されている手法にしたがって合成することができる。Ｍ１５、Ｍ２０およびＭ２３は、本明細書に記載されている手法にしたがって調製した。アッセイにおいて使用した他の試薬は、アタザナビル（Ｔｏｒｏｎｔｏ Ｒｅｓｅａｒｃｈ Ｃｈｅｍｉｃａｌｓ、Ｎｏｒｔｈ Ｙｏｒｋ ＯＮ）を除いて、Ｓｉｇｍａ－Ａｌｄｒｉｃｈ（Ｓｔ．Ｌｏｕｉｓ、ＭＯ）またはＢＤ Ｂｉｏｓｃｉｅｎｃｅｓ（Ｗｏｂｕｒｎ、ＭＡ）から購入した。ヒト肝臓ミクロソーム画分は、ＢＤ Ｂｉｏｓｃｉｅｎｃｅｓ（Ｗｏｂｕｒｎ、ＭＡ）によって提供された。ビリルビン基質は、アッセイを開始する直前に新鮮な状態で調製した。
酵素阻害アッセイ

ビリルビンは、ＵＧＴ１Ａ１によって代謝され、２つのアシルモノグルクロニドおよびアシルジグルクロニドを生成する。標的プロピオネート（Ｃ８またはＣ１２）のいずれが最初に代謝されるかについての明瞭な選好性は存在しない。アタザナビルは、この活性の強力な選択的阻害剤であることが実証されており、したがって、適切な陽性対照である。このアッセイに対する条件は、ミクロソームタンパク質濃度およびインキュベーション時間に関して線形であると決定された。アッセイ条件下において、ビリルビンモノグルクロニド形成に対するＫ_Ｍは０．９８μＭであることが決定され、ここで使用された０．８μＭの基質濃度はＫ_Ｍ以下であった。ミクロソームＵＧＴ１Ａ１活性は、２つ組みで決定した。最終反応混合物は、０．２ｍｇ／ｍＬ肝臓ミクロソームタンパク質、１００μｇアラメチシン／ｍｇミクロソームタンパク質、５ｍＭＵＤＰ－グルクロン酸、５ｍＭ塩化マグネシウム、５ｍＭＤ－サッカリン酸１，４－ラクトン（ＳＡＣＬＡＣ）、０．８μＭビリルビンおよび０．１Ｍリン酸カリウム緩衝液ｐＨ７．４から構成された。希釈されたミクロソーム画分を、アラメチシン、塩化マグネシウムおよびＳＡＣＬＡＣとともに、氷上で１５分間インキュベートした。次いで、基質および阻害剤を添加し、混合物を０．５分間、３７℃に加温した。リン酸カリウム緩衝液中のＵＤＰグルクロン酸の添加によって、反応を開始した。振盪しながら、光に曝露せずに、２分間、３７℃でインキュベーションを継続した。２００ｎＭ２－（Ｎ－（２－エチルフェニル）メチルスルホンアミド）－Ｎ－（２－（ピリジン－２－イルチオ）エチル）アセトアミドを内部標準として含有する、メタノール中の２００ｍＭアスコルビン酸の一容量の添加によって、反応を停止させた。３６００ｒｐｍで５分間、４℃で試料を遠心し、ビリルビンからのモノグルクロニド形成をモニターするために、上清の分割試料をＬＣ－ＭＳ／ＭＳにかけた。
液体クロマトグラフィー－質量分析（ＬＣ－ＭＳ）

Ｓｈｉｍａｄｚｕ ＵＦＬＣ ＸＲ ＵＰＬＣシステムを分析のために使用した。使用したカラムは、６０℃に維持されたＴｈｅｒｍｏ－Ｈｙｐｅｒｓｉｌ Ｇｏｌｄ１．９μｍ Ｃ１８カラム（３０×２．１ｍｍ）であった。移動相は、０．７ｍＬ／分で拍出されるＡ：０．１％（ｖ／ｖ）ギ酸を含有する水、およびＢ：０．１％（ｖ／ｖ）ギ酸を含有するアセトニトリルであった。溶出は、２分にわたる一連の線形グラジエントによって達成された。質量分析計は、ポジティブイオンモードで作動するエレクトロスプレーインターフェースを備えたＡｐｐｌｉｅｄ Ｂｉｏｓｃｉｅｎｃｅｓ ＳＣＩＥＸ ＱＴＲＡＰ ５５００トリプル四重極質量分析計であった。定量は、代謝物／内部標準ピーク面積比（ＰＡＲ）によった。自動回収装置中に格納された抽出された試料は、ビリルビングルクロニド信号の不安定性を示した。低下は、約０．１％／分であった。
データ解析
ＬＣ－ＭＳ／ＭＳ分析

ビリルビングルクロニド標準は市販されていないので、ビリルビンモノグルクロニドおよびジグルクロニドピークはそれらのＭＳ特性によって同定した。モノグルクロニドおよびジグルクロニドに対して、それぞれ、ｍ／ｚ７６１．２／４７５．１および９３７．２／４７５．１のＭＳ／ＭＳ遷移（［Ｍ＋Ｈ］＋）。２つのモノグルクロニドに対するＰＡＲ値は定量のために合算した。阻害剤の存在下でのＰＡＲ値を、ビヒクル対照（ビクテグラビル、Ｍ１５、Ｍ２０、Ｍ２３または陽性対照阻害剤なし）のＰＡＲ値と比較し、活性は残存する対照活性の百分率として表した。
ＩＣ_５０決定

代謝物の形成の速度から反応速度を計算し、ビヒクル対照（１００％活性）で見られた反応速度と比較した。ＧｒａｐｈＰａｄ Ｐｒｉｓｍ７．０３を用いた非線形回帰およびＳ字形３パラメータ阻害モデルによって、ＩＣ_５０値を計算した。試験化合物による弱い阻害のため、意味のあるＩＣ_５０値を生成するために、モデルの下方プラトー値（ＵＧＴ１Ａ１が完全に阻害された場合の残存活性）を拘束する必要があった。試験期間の間、アタザナビルの阻害能力は４回決定され、各濃度は、各決定において２つ組みで試験した。全ての実行から得られたデータをプールし、下方プラトー値を決定するためにグローバルフィットを行った。最良適合値は、１０．９６％残存活性（標準誤差２．９４％）であった。下方プラトーをこの値に拘束した非線形回帰によって、ビクテグラビルおよびその代謝物のＩＣ_５０値を計算した。アタザナビルに関しては、この陽性対照阻害剤に対する要約幾何平均および乗法標準偏差を生成するために、４つの２つ組みの実行から得たＩＣ_５０値を合算した。
結果

ヒト肝臓ミクロソームビリルビンモノグルクロン酸抱合の活性に対するビクテグラビル、Ｍ１５、Ｍ２０およびＭ２３の阻害的効果を評価した。阻害的効力の要約および陽性対照阻害剤アタザナビルに対する要約が、表１４に記されている。陽性対照阻害剤アタザナビルは、予想通り、ＵＧＴ１Ａ１活性を低下させ、アッセイに対する満足のできるインキュベーション条件を確認した（表１）。４つの実行に対して得られたアタザナビルに対する幾何平均ＩＣ_５０値は１．２μＭであった。３００μＭまでのビクテグラビルおよびそのグルクロニド代謝物（Ｍ１５）の濃度は、ＵＧＴ１Ａ１活性に対してほとんどまたは全く阻害的効果を有していなかった（阻害＜２％）。これらの２つの試験化合物の高い濃度では、酵素活性の穏やかな刺激が存在し、２００μＭビクテグラビルで７６％、２００μＭのＭ１５では２１％の最大増加に達した。ビクテグラビル代謝物Ｍ２０およびＭ２３は、それぞれ、１５３および２５６μＭのＩＣ_５０値を有するヒト肝臓ビリルビングルクロン酸抱合の弱い阻害剤であった。

ＮＩＯ 阻害観察されず（濃度範囲０～３００μＭにわたって、＜２％阻害）
ａ．２つ組みの実行における４つの測定に対する幾何平均および乗法標準偏差
ｂ．フィッティングは収束しなかった。試験された最大濃度は３００μＭであった。
ｃ．８つの２つ組みのデータ点を用いた最良適合値

３００μＭまでの濃度では、ヒト肝臓ミクロソームビリルビングルクロン酸抱合（ＵＧＴ１Ａ１によって触媒される活性）に対するビクテグラビルまたはＭ１５の阻害効果はほとんどまたは全く存在しなかった。Ｍ２０およびＭ２３は、それぞれ、１５３μＭおよび２５６μＭの算出されたＩＣ_５０値を有する弱い阻害剤であった。
［実施例８］異なる種から得た凍結保存された肝細胞中で検出されたＢＩＣの代謝物

代謝物を同定し、その存在量を決定し、非臨床的な種をヒトと比較するために、凍結保存された肝細胞を、放射線標識されたＢＩＣとともに４時間インキュベートした。凍結保存された肝細胞中での［^１４Ｃ］ＢＩＣ（２０μＭ）とのインキュベーション後における親薬物および同定された代謝物の百分率が表１５に要約されており、代謝物の提案された特定性が図１２に示されている。代謝経路には、ヒドロキシル化（３つの変異形）、Ｎ－脱アルキル化および直接のグルクロン酸抱合が含まれた。全てのヒト代謝物が、非臨床種にも観察された。肝臓代謝酵素の全種類が提示されている肝細胞系を使用すると、ＢＩＣの代謝はサルおよびイヌでは大規模であったが、ラットおよびヒトではこれより低いように見受けられた。

［実施例９］異なる種でのインビボＢＩＣ代謝

マウス、ラット、サルおよびヒトへの［^１４Ｃ］ＢＩＣの単回経口投与後に、ビクテグラビル代謝を決定した。［^１４Ｃ］ＢＩＣのインビボ経口投与後に得られたプールされた血漿、尿、胆汁および便の試料の特性が明らかにされ、同定された代謝物の包括的なリストが、トランスジェニックマウス、Ｗｉｓｔａｒ－Ｈａｎラット、サルおよび健康なヒト被験体において与えられている。総合した結果は、ＢＩＣが肝臓代謝後に便および尿中への排泄によって主に除去されることを実証する。代謝経路には、ヒドロキシル化、酸化的脱フッ素、直接のグルクロン酸抱合および酸化後の第ＩＩ相抱合が含まれた。サルでは、ＢＩＣは、ラットおよびヒトと比べてより大きな程度で、酸化的経路を通じて代謝された。［^１４Ｃ］ＢＩＣの経口投与後における血漿プロファイルの結果が、以下の表１６に示されている。

ＮＤ＝検出されず
^ａ ＡＵＣプール血漿＝トランスジェニックマウスでは、０時から投薬後４８時間まで、ラットでは０時から投薬後１６８時間まで、サルでは０時から投薬後７２時間まで、ヒト被験者では０時から投薬後７２時間までの、血漿^１４Ｃ濃度－時間曲線下面積。
^ｂ その他＝他の代謝物の合計；マウスでは、各成分＜１％、ラット、サルおよびヒトでは、＜１．５％。
^ｃ Ｍ５１とともに同時溶出。

刊行物、特許および特許文書を含む全ての参考文献は、個別に参照により組み込まれているのと同様に、参照により本明細書に組み込まれる。本開示は、様々な実施形態および技術を参照している。しかしながら、本開示の精神および範囲の中に留まりながら、多くの変形および改変が為され得ることを理解すべきである。
本発明は、例えば、以下の項目を提供する。
(項目１)
実質的に単離されている、Ｍ１５、Ｍ２０およびＭ２３：

から選択される化合物または薬学的に許容され得るその塩。
(項目２)
Ｍ１５、Ｍ２０およびＭ２３：

から選択される化合物または薬学的に許容され得るその塩を含む組成物であって、前記化合物または薬学的に許容され得るその塩が、約２５重量％より多い量で前記組成物中に存在する、組成物。
(項目３)
前記化合物または薬学的に許容され得るその塩が、約５０重量％より多い量で前記組成物中に存在する、項目２に記載の組成物。
(項目４)
前記化合物または薬学的に許容され得るその塩が、約７５重量％より多い量で前記組成物中に存在する、項目２に記載の組成物。
(項目５)
約９５％より大きい純度を有する、Ｍ１５、Ｍ２０およびＭ２３：

から選択される化合物または薬学的に許容され得るその塩の調製物。
(項目６)
Ｍ１５、Ｍ２０およびＭ２３：

から選択される化合物または薬学的に許容され得るその塩と、少なくとも１つの薬学的に許容され得る担体とを含む薬学的組成物。
(項目７)
１～３種のさらなる治療剤をさらに含む、項目６に記載の薬学的組成物。
(項目８)
前記１～３種のさらなる治療剤が抗ＨＩＶ剤である、項目７に記載の薬学的組成物。
(項目９)
前記１～３種のさらなる治療剤のそれぞれが、ＨＩＶプロテアーゼ阻害剤、逆転写酵素のＨＩＶ非ヌクレオシド阻害剤、逆転写酵素のＨＩＶヌクレオシド阻害剤、逆転写酵素のＨＩＶヌクレオチド阻害剤およびこれらの組み合わせからなる群より選択される、項目８に記載の薬学的組成物。
(項目１０)
ヒトにおけるＨＩＶ感染を予防または処置する方法であって、治療的有効量の、Ｍ１５、Ｍ２０およびＭ２３：

から選択される化合物または薬学的に許容され得るその塩を前記ヒトに投与することを含む、方法。
(項目１１)
治療的有効量の１～３種のさらなる治療剤を前記ヒトに投与することをさらに含む、項目１０に記載の方法。
(項目１２)
前記１～３種のさらなる治療剤が抗ＨＩＶ剤である、項目１１に記載の方法。
(項目１３)
前記１～３種のさらなる治療剤が、ＨＩＶプロテアーゼ阻害剤、逆転写酵素のＨＩＶ非ヌクレオシド阻害剤、逆転写酵素のＨＩＶヌクレオシド阻害剤、逆転写酵素のＨＩＶヌクレオチド阻害剤およびＨＩＶを処置するためのその他の薬物ならびにこれらの組み合わせからなる群より選択される、項目１２に記載の方法。
(項目１４)
患者へのビクテグラビルの投与を検出または確認する方法であって、前記患者から得られた生物学的試料中の、Ｍ１５、Ｍ２０およびＭ２３：

から選択される化合物またはその塩を同定することを含む、方法。
(項目１５)
前記生物学的試料が、血漿、尿または便に由来する、項目１４に記載の方法。
(項目１６)
患者中のビクテグラビルの代謝の速度を測定する方法であって、ビクテグラビルの投与後の１またはそれを超える時点において、前記患者中の、Ｍ１５、Ｍ２０およびＭ２３：

から選択される化合物またはその塩の量を測定することを含む、方法。
(項目１７)
前記化合物の量が血液試料から測定される、項目１６に記載の方法。
(項目１８)
前記化合物の量が血漿から測定される、項目１６に記載の方法。
(項目１９)
前記化合物の量が尿試料から測定される、項目１６に記載の方法。
(項目２０)
前記化合物の量が便試料から測定される、項目１６に記載の方法。
(項目２１)
ＨＩＶ感染の処置におけるビクテグラビルへの患者の予防的または治療的応答を決定する方法であって、ビクテグラビルの投与後の１またはそれを超える時点において、前記患者中の、Ｍ１５、Ｍ２０およびＭ２３：

から選択される化合物またはその塩の量を測定することを含む、方法。
(項目２２)
ビクテグラビルでの処置を必要とする患者に対するビクテグラビルの用量を最適化する方法であって、ビクテグラビルの投与後の１またはそれを超える時点において、前記患者中の、Ｍ１５、Ｍ２０およびＭ２３：

から選択される化合物またはその塩の量を測定することを含む、方法。

Claims (24)

1. 単離されている、Ｍ１５、Ｍ２０およびＭ２３：
   

   

   から選択される化合物または薬学的に許容され得るその塩。
2. Ｍ１５、Ｍ２０およびＭ２３：
   

   

   から選択される化合物または薬学的に許容され得るその塩を含む組成物であって、前記化合物または薬学的に許容され得るその塩が、２５重量％より多い量で前記組成物中に存在する、組成物。
3. 前記化合物または薬学的に許容され得るその塩が、５０重量％より多い量で前記組成物中に存在する、請求項２に記載の組成物。
4. 前記化合物または薬学的に許容され得るその塩が、７５重量％より多い量で前記組成物中に存在する、請求項２に記載の組成物。
5. Ｍ１５、Ｍ２０およびＭ２３：
   

   

   から選択される化合物または薬学的に許容され得るその塩を含む組成物であって、
   前記化合物の９５％より大きい純度を有する、
   組成物。
6. Ｍ１５、Ｍ２０およびＭ２３：
   

   

   

   から選択される化合物または薬学的に許容され得るその塩と、少なくとも１つの薬学的に許容され得る担体とを含む薬学的組成物。
7. １～３種のさらなる治療剤をさらに含む、請求項６に記載の薬学的組成物。
8. 前記１～３種のさらなる治療剤が抗ＨＩＶ剤である、請求項７に記載の薬学的組成物。
9. 前記１～３種のさらなる治療剤のそれぞれが、ＨＩＶプロテアーゼ阻害剤、逆転写酵素のＨＩＶ非ヌクレオシド阻害剤、逆転写酵素のＨＩＶヌクレオシド阻害剤、逆転写酵素のＨＩＶヌクレオチド阻害剤およびこれらの組み合わせからなる群より選択される、請求項８に記載の薬学的組成物。
10. ヒトにおけるＨＩＶ感染を予防または処置するための組成物であって、Ｍ１５、Ｍ２０およびＭ２３：
    

    

    から選択される化合物または薬学的に許容され得るその塩を含む、組成物。
11. 前記組成物が１～３種のさらなる治療剤と組み合わせて投与される、請求項１０に記載の組成物。
12. 前記１～３種のさらなる治療剤が抗ＨＩＶ剤である、請求項１１に記載の組成物。
13. 前記１～３種のさらなる治療剤が、ＨＩＶプロテアーゼ阻害剤、逆転写酵素のＨＩＶ非ヌクレオシド阻害剤、逆転写酵素のＨＩＶヌクレオシド阻害剤、逆転写酵素のＨＩＶヌクレオチド阻害剤およびＨＩＶを処置するためのその他の薬物ならびにこれらの組み合わせからなる群より選択される、請求項１２に記載の組成物。
14. Ｍ１５、Ｍ２０およびＭ２３：
    

    

    から選択される化合物またはその塩を、患者へのビクテグラビルの投与を検出または確認するための指標とする方法であって、前記患者から得られた生物学的試料中の、Ｍ１５、Ｍ２０およびＭ２３から選択される前記化合物またはその塩を同定することを含む、方法。
15. 前記生物学的試料が、血漿、尿または便に由来する、請求項１４に記載の方法。
16. Ｍ１５、Ｍ２０およびＭ２３：
    

    

    から選択される化合物またはその塩の量を、患者中のビクテグラビルの代謝の速度を測定するための指標とする方法であって、ビクテグラビルの投与後の１またはそれを超える時点において、前記患者中の、Ｍ１５、Ｍ２０およびＭ２３から選択される前記化合物またはその塩の量を測定することを含む、方法。
17. 前記化合物の量が血液試料から測定される、請求項１６に記載の方法。
18. 前記化合物の量が血漿から測定される、請求項１６に記載の方法。
19. 前記化合物の量が尿試料から測定される、請求項１６に記載の方法。
20. 前記化合物の量が便試料から測定される、請求項１６に記載の方法。
21. ＨＩＶ感染の処置におけるビクテグラビルへの患者の予防的または治療的応答を決定するための指標を得る方法であって、ビクテグラビルの投与後の１またはそれを超える時点において、前記患者中の、Ｍ１５、Ｍ２０およびＭ２３：
    

    

    から選択される化合物またはその塩の量を測定することを含む、方法。
22. ビクテグラビルでの処置を必要とする患者に対するビクテグラビルの用量を最適化するための指標を得る方法であって、ビクテグラビルの投与後の１またはそれを超える時点において、前記患者中の、Ｍ１５、Ｍ２０およびＭ２３：
    

    

    から選択される化合物またはその塩の量を測定することを含む、方法。
23. ＨＩＶ感染の処置におけるビクテグラビルへの患者の予防的または治療的応答を決定するための方法において使用するための、ビクテグラビルを含む組成物であって、
    ここで、前記方法は、ビクテグラビルの投与後の１またはそれを超える時点において、前記患者中の、Ｍ１５、Ｍ２０およびＭ２３：
    

    

    
    から選択される化合物またはその塩の量を測定することを含む、
    組成物。
24. ビクテグラビルでの処置を必要とする患者に対するビクテグラビルの用量を最適化する方法に使用するための、ビクテグラビルを含む組成物であって、
    ここで、前記方法が、ビクテグラビルの投与後の１またはそれを超える時点において、前記患者中の、Ｍ１５、Ｍ２０およびＭ２３：
    

    

    
    から選択される化合物またはその塩の量を測定することを含む、
    組成物。

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