JP7066812B2 - 癌を治療するための治療用組成物及び使用方法 - Google Patents
癌を治療するための治療用組成物及び使用方法 Download PDFInfo
- Publication number
- JP7066812B2 JP7066812B2 JP2020199987A JP2020199987A JP7066812B2 JP 7066812 B2 JP7066812 B2 JP 7066812B2 JP 2020199987 A JP2020199987 A JP 2020199987A JP 2020199987 A JP2020199987 A JP 2020199987A JP 7066812 B2 JP7066812 B2 JP 7066812B2
- Authority
- JP
- Japan
- Prior art keywords
- cells
- tumor
- virus
- cancer
- cell
- Prior art date
- Legal status (The legal status is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the status listed.)
- Active
Links
- 206010028980 Neoplasm Diseases 0.000 title claims description 260
- 201000011510 cancer Diseases 0.000 title claims description 78
- 238000000034 method Methods 0.000 title claims description 73
- 239000000203 mixture Substances 0.000 title description 38
- 230000001225 therapeutic effect Effects 0.000 title description 9
- 241000700605 Viruses Species 0.000 claims description 157
- 108090000623 proteins and genes Proteins 0.000 claims description 103
- 244000309459 oncolytic virus Species 0.000 claims description 97
- 241000701161 unidentified adenovirus Species 0.000 claims description 36
- 150000007523 nucleic acids Chemical class 0.000 claims description 34
- 102000004190 Enzymes Human genes 0.000 claims description 33
- 108090000790 Enzymes Proteins 0.000 claims description 33
- 230000027455 binding Effects 0.000 claims description 33
- 238000011282 treatment Methods 0.000 claims description 31
- 239000008194 pharmaceutical composition Substances 0.000 claims description 28
- 201000001441 melanoma Diseases 0.000 claims description 19
- 238000012217 deletion Methods 0.000 claims description 13
- 230000037430 deletion Effects 0.000 claims description 13
- 230000002601 intratumoral effect Effects 0.000 claims description 11
- 208000020816 lung neoplasm Diseases 0.000 claims description 11
- 206010058467 Lung neoplasm malignant Diseases 0.000 claims description 10
- 206010039491 Sarcoma Diseases 0.000 claims description 10
- 208000032839 leukemia Diseases 0.000 claims description 10
- 201000005202 lung cancer Diseases 0.000 claims description 10
- 108020004707 nucleic acids Proteins 0.000 claims description 9
- 102000039446 nucleic acids Human genes 0.000 claims description 9
- 208000007097 Urinary Bladder Neoplasms Diseases 0.000 claims description 7
- 208000006105 Uterine Cervical Neoplasms Diseases 0.000 claims description 7
- 201000010881 cervical cancer Diseases 0.000 claims description 7
- 208000026310 Breast neoplasm Diseases 0.000 claims description 6
- 206010008342 Cervix carcinoma Diseases 0.000 claims description 6
- 206010009944 Colon cancer Diseases 0.000 claims description 6
- 208000017604 Hodgkin disease Diseases 0.000 claims description 6
- 208000010747 Hodgkins lymphoma Diseases 0.000 claims description 6
- 206010060862 Prostate cancer Diseases 0.000 claims description 6
- 208000000236 Prostatic Neoplasms Diseases 0.000 claims description 6
- 208000029742 colonic neoplasm Diseases 0.000 claims description 6
- 206010005003 Bladder cancer Diseases 0.000 claims description 5
- 206010006187 Breast cancer Diseases 0.000 claims description 5
- 208000032612 Glial tumor Diseases 0.000 claims description 5
- 206010018338 Glioma Diseases 0.000 claims description 5
- 206010061902 Pancreatic neoplasm Diseases 0.000 claims description 5
- 201000002528 pancreatic cancer Diseases 0.000 claims description 5
- 230000003362 replicative effect Effects 0.000 claims description 5
- 201000005112 urinary bladder cancer Diseases 0.000 claims description 5
- 206010033128 Ovarian cancer Diseases 0.000 claims description 4
- 206010061535 Ovarian neoplasm Diseases 0.000 claims description 4
- 208000006265 Renal cell carcinoma Diseases 0.000 claims description 4
- 208000002495 Uterine Neoplasms Diseases 0.000 claims description 4
- 208000009956 adenocarcinoma Diseases 0.000 claims description 4
- 206010073071 hepatocellular carcinoma Diseases 0.000 claims description 4
- 231100000844 hepatocellular carcinoma Toxicity 0.000 claims description 4
- 230000010354 integration Effects 0.000 claims description 4
- 208000025189 neoplasm of testis Diseases 0.000 claims description 4
- 201000008968 osteosarcoma Diseases 0.000 claims description 4
- 201000003076 Angiosarcoma Diseases 0.000 claims description 3
- 208000010839 B-cell chronic lymphocytic leukemia Diseases 0.000 claims description 3
- 206010004146 Basal cell carcinoma Diseases 0.000 claims description 3
- 201000009030 Carcinoma Diseases 0.000 claims description 3
- 208000005243 Chondrosarcoma Diseases 0.000 claims description 3
- 208000006168 Ewing Sarcoma Diseases 0.000 claims description 3
- 201000008808 Fibrosarcoma Diseases 0.000 claims description 3
- 208000001258 Hemangiosarcoma Diseases 0.000 claims description 3
- 208000031422 Lymphocytic Chronic B-Cell Leukemia Diseases 0.000 claims description 3
- 206010041067 Small cell lung cancer Diseases 0.000 claims description 3
- 208000008383 Wilms tumor Diseases 0.000 claims description 3
- 201000000053 blastoma Diseases 0.000 claims description 3
- 239000002771 cell marker Substances 0.000 claims description 3
- 230000001684 chronic effect Effects 0.000 claims description 3
- 208000032852 chronic lymphocytic leukemia Diseases 0.000 claims description 3
- 238000010367 cloning Methods 0.000 claims description 3
- 201000008184 embryoma Diseases 0.000 claims description 3
- 210000003714 granulocyte Anatomy 0.000 claims description 3
- 238000007918 intramuscular administration Methods 0.000 claims description 3
- 238000001990 intravenous administration Methods 0.000 claims description 3
- 206010024627 liposarcoma Diseases 0.000 claims description 3
- 208000015486 malignant pancreatic neoplasm Diseases 0.000 claims description 3
- 201000008026 nephroblastoma Diseases 0.000 claims description 3
- 208000008443 pancreatic carcinoma Diseases 0.000 claims description 3
- 208000000587 small cell lung carcinoma Diseases 0.000 claims description 3
- 206010041823 squamous cell carcinoma Diseases 0.000 claims description 3
- 210000000130 stem cell Anatomy 0.000 claims description 3
- 206010046766 uterine cancer Diseases 0.000 claims description 3
- 206010058314 Dysplasia Diseases 0.000 claims description 2
- 230000003511 endothelial effect Effects 0.000 claims description 2
- 206010020718 hyperplasia Diseases 0.000 claims description 2
- 238000007912 intraperitoneal administration Methods 0.000 claims description 2
- 230000002207 retinal effect Effects 0.000 claims description 2
- 210000004500 stellate cell Anatomy 0.000 claims description 2
- 238000007920 subcutaneous administration Methods 0.000 claims description 2
- 101100440985 Danio rerio crad gene Proteins 0.000 claims 2
- 101100440987 Mus musculus Cracd gene Proteins 0.000 claims 2
- 101100467905 Mus musculus Rdh16 gene Proteins 0.000 claims 2
- 208000008601 Polycythemia Diseases 0.000 claims 1
- 210000004027 cell Anatomy 0.000 description 238
- 210000004881 tumor cell Anatomy 0.000 description 93
- 125000003169 alpha-Gal epitope group Chemical group [C@H]1([C@H](O)[C@@H](O)[C@@H](O)[C@H](O1)CO)O[C@@H]1[C@H]([C@@H](O[C@@H]([C@@H]1O)CO)O[C@H]1[C@@H]([C@H](C(O[C@@H]1CO)*)NC(C)=O)O)O 0.000 description 65
- FHIVAFMUCKRCQO-UHFFFAOYSA-N diazinon Chemical compound CCOP(=S)(OCC)OC1=CC(C)=NC(C(C)C)=N1 FHIVAFMUCKRCQO-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 55
- 230000014509 gene expression Effects 0.000 description 49
- 241000700584 Simplexvirus Species 0.000 description 47
- ODDPRQJTYDIWJU-UHFFFAOYSA-N 3'-beta-D-galactopyranosyl-lactose Natural products OC1C(O)C(O)C(CO)OC1OC1C(O)C(OC2C(OC(O)C(O)C2O)CO)OC(CO)C1O ODDPRQJTYDIWJU-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 44
- 241000282414 Homo sapiens Species 0.000 description 33
- 210000000612 antigen-presenting cell Anatomy 0.000 description 33
- 230000003612 virological effect Effects 0.000 description 29
- 239000005090 green fluorescent protein Substances 0.000 description 28
- 230000010076 replication Effects 0.000 description 28
- 230000003902 lesion Effects 0.000 description 27
- 230000009089 cytolysis Effects 0.000 description 26
- 230000000174 oncolytic effect Effects 0.000 description 26
- 241001135569 Human adenovirus 5 Species 0.000 description 25
- 239000000427 antigen Substances 0.000 description 24
- 102000036639 antigens Human genes 0.000 description 24
- 108091007433 antigens Proteins 0.000 description 24
- 239000013598 vector Substances 0.000 description 24
- 239000007924 injection Substances 0.000 description 23
- 238000002347 injection Methods 0.000 description 23
- 210000001519 tissue Anatomy 0.000 description 22
- 208000035269 cancer or benign tumor Diseases 0.000 description 21
- 241000699670 Mus sp. Species 0.000 description 20
- 210000000170 cell membrane Anatomy 0.000 description 20
- 102000004169 proteins and genes Human genes 0.000 description 20
- 108010004469 allophycocyanin Proteins 0.000 description 19
- 210000004379 membrane Anatomy 0.000 description 19
- 239000012528 membrane Substances 0.000 description 19
- 239000012634 fragment Substances 0.000 description 18
- 241000712079 Measles morbillivirus Species 0.000 description 17
- 241000699666 Mus <mouse, genus> Species 0.000 description 15
- 108091028043 Nucleic acid sequence Proteins 0.000 description 15
- 230000005975 antitumor immune response Effects 0.000 description 14
- 208000015181 infectious disease Diseases 0.000 description 14
- 241001529453 unidentified herpesvirus Species 0.000 description 14
- LOKCTEFSRHRXRJ-UHFFFAOYSA-I dipotassium trisodium dihydrogen phosphate hydrogen phosphate dichloride Chemical compound P(=O)(O)(O)[O-].[K+].P(=O)(O)([O-])[O-].[Na+].[Na+].[Cl-].[K+].[Cl-].[Na+] LOKCTEFSRHRXRJ-UHFFFAOYSA-I 0.000 description 13
- 239000002953 phosphate buffered saline Substances 0.000 description 13
- 238000002965 ELISA Methods 0.000 description 12
- 241000700618 Vaccinia virus Species 0.000 description 12
- 230000001939 inductive effect Effects 0.000 description 12
- 102000004856 Lectins Human genes 0.000 description 11
- 108090001090 Lectins Proteins 0.000 description 11
- 238000004458 analytical method Methods 0.000 description 11
- 230000006037 cell lysis Effects 0.000 description 11
- 208000037265 diseases, disorders, signs and symptoms Diseases 0.000 description 11
- 239000002523 lectin Substances 0.000 description 11
- 230000035772 mutation Effects 0.000 description 11
- 241000701022 Cytomegalovirus Species 0.000 description 10
- 108060003306 Galactosyltransferase Proteins 0.000 description 10
- 102000030902 Galactosyltransferase Human genes 0.000 description 10
- 238000001727 in vivo Methods 0.000 description 10
- 238000011813 knockout mouse model Methods 0.000 description 10
- 229960005486 vaccine Drugs 0.000 description 10
- 102000004144 Green Fluorescent Proteins Human genes 0.000 description 9
- 108010043121 Green Fluorescent Proteins Proteins 0.000 description 9
- 241000282412 Homo Species 0.000 description 9
- 206010027476 Metastases Diseases 0.000 description 9
- 101000718529 Saccharolobus solfataricus (strain ATCC 35092 / DSM 1617 / JCM 11322 / P2) Alpha-galactosidase Proteins 0.000 description 9
- 210000001744 T-lymphocyte Anatomy 0.000 description 9
- NNISLDGFPWIBDF-MPRBLYSKSA-N alpha-D-Gal-(1->3)-beta-D-Gal-(1->4)-D-GlcNAc Chemical compound O[C@@H]1[C@@H](NC(=O)C)C(O)O[C@H](CO)[C@H]1O[C@H]1[C@H](O)[C@@H](O[C@@H]2[C@@H]([C@@H](O)[C@@H](O)[C@@H](CO)O2)O)[C@@H](O)[C@@H](CO)O1 NNISLDGFPWIBDF-MPRBLYSKSA-N 0.000 description 9
- 230000002950 deficient Effects 0.000 description 9
- 230000028993 immune response Effects 0.000 description 9
- 239000002245 particle Substances 0.000 description 9
- 238000010361 transduction Methods 0.000 description 9
- 230000026683 transduction Effects 0.000 description 9
- 108091003079 Bovine Serum Albumin Proteins 0.000 description 8
- 102000004457 Granulocyte-Macrophage Colony-Stimulating Factor Human genes 0.000 description 8
- 108010017213 Granulocyte-Macrophage Colony-Stimulating Factor Proteins 0.000 description 8
- 210000001015 abdomen Anatomy 0.000 description 8
- 239000012091 fetal bovine serum Substances 0.000 description 8
- 238000000684 flow cytometry Methods 0.000 description 8
- 230000012010 growth Effects 0.000 description 8
- 238000004519 manufacturing process Methods 0.000 description 8
- 239000013603 viral vector Substances 0.000 description 8
- 108020004414 DNA Proteins 0.000 description 7
- 230000000295 complement effect Effects 0.000 description 7
- 239000003937 drug carrier Substances 0.000 description 7
- 230000002519 immonomodulatory effect Effects 0.000 description 7
- 210000001165 lymph node Anatomy 0.000 description 7
- 230000007246 mechanism Effects 0.000 description 7
- 239000000725 suspension Substances 0.000 description 7
- 241000700588 Human alphaherpesvirus 1 Species 0.000 description 6
- 241000124008 Mammalia Species 0.000 description 6
- 201000000582 Retinoblastoma Diseases 0.000 description 6
- 241000711975 Vesicular stomatitis virus Species 0.000 description 6
- 208000036142 Viral infection Diseases 0.000 description 6
- 230000004913 activation Effects 0.000 description 6
- 239000000470 constituent Substances 0.000 description 6
- 230000006870 function Effects 0.000 description 6
- 230000003993 interaction Effects 0.000 description 6
- 230000001717 pathogenic effect Effects 0.000 description 6
- 102000005962 receptors Human genes 0.000 description 6
- 108020003175 receptors Proteins 0.000 description 6
- 230000001105 regulatory effect Effects 0.000 description 6
- 239000000243 solution Substances 0.000 description 6
- 101000961414 Homo sapiens Membrane cofactor protein Proteins 0.000 description 5
- 101100508081 Human herpesvirus 1 (strain 17) ICP34.5 gene Proteins 0.000 description 5
- 102000009490 IgG Receptors Human genes 0.000 description 5
- 108010073807 IgG Receptors Proteins 0.000 description 5
- 101150027249 RL1 gene Proteins 0.000 description 5
- 230000015572 biosynthetic process Effects 0.000 description 5
- 210000000805 cytoplasm Anatomy 0.000 description 5
- 238000010790 dilution Methods 0.000 description 5
- 239000012895 dilution Substances 0.000 description 5
- 201000010099 disease Diseases 0.000 description 5
- 239000003814 drug Substances 0.000 description 5
- 230000013595 glycosylation Effects 0.000 description 5
- 238000006206 glycosylation reaction Methods 0.000 description 5
- 230000003053 immunization Effects 0.000 description 5
- 238000002649 immunization Methods 0.000 description 5
- 230000006698 induction Effects 0.000 description 5
- 230000001404 mediated effect Effects 0.000 description 5
- 108090000765 processed proteins & peptides Proteins 0.000 description 5
- 208000011580 syndromic disease Diseases 0.000 description 5
- 238000002560 therapeutic procedure Methods 0.000 description 5
- 230000009385 viral infection Effects 0.000 description 5
- 241000711404 Avian avulavirus 1 Species 0.000 description 4
- 206010057248 Cell death Diseases 0.000 description 4
- 241000282326 Felis catus Species 0.000 description 4
- 206010025323 Lymphomas Diseases 0.000 description 4
- 102100039373 Membrane cofactor protein Human genes 0.000 description 4
- FAPWRFPIFSIZLT-UHFFFAOYSA-M Sodium chloride Chemical compound [Na+].[Cl-] FAPWRFPIFSIZLT-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 4
- 230000000259 anti-tumor effect Effects 0.000 description 4
- 230000005809 anti-tumor immunity Effects 0.000 description 4
- 230000010056 antibody-dependent cellular cytotoxicity Effects 0.000 description 4
- AIYUHDOJVYHVIT-UHFFFAOYSA-M caesium chloride Chemical compound [Cl-].[Cs+] AIYUHDOJVYHVIT-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 4
- 235000014633 carbohydrates Nutrition 0.000 description 4
- 230000003197 catalytic effect Effects 0.000 description 4
- 230000003833 cell viability Effects 0.000 description 4
- 239000002299 complementary DNA Substances 0.000 description 4
- 230000006378 damage Effects 0.000 description 4
- 238000011161 development Methods 0.000 description 4
- 230000018109 developmental process Effects 0.000 description 4
- 239000003085 diluting agent Substances 0.000 description 4
- 238000011068 loading method Methods 0.000 description 4
- 230000003211 malignant effect Effects 0.000 description 4
- 239000000463 material Substances 0.000 description 4
- 238000005259 measurement Methods 0.000 description 4
- 108020004999 messenger RNA Proteins 0.000 description 4
- 230000002265 prevention Effects 0.000 description 4
- 230000008569 process Effects 0.000 description 4
- 230000001681 protective effect Effects 0.000 description 4
- 238000003757 reverse transcription PCR Methods 0.000 description 4
- 210000002966 serum Anatomy 0.000 description 4
- 239000013605 shuttle vector Substances 0.000 description 4
- 239000007921 spray Substances 0.000 description 4
- 230000009885 systemic effect Effects 0.000 description 4
- 230000008685 targeting Effects 0.000 description 4
- 230000004614 tumor growth Effects 0.000 description 4
- 108091032973 (ribonucleotides)n+m Proteins 0.000 description 3
- 108010068327 4-hydroxyphenylpyruvate dioxygenase Proteins 0.000 description 3
- 208000006678 Abdominal Neoplasms Diseases 0.000 description 3
- 208000003174 Brain Neoplasms Diseases 0.000 description 3
- 108091026890 Coding region Proteins 0.000 description 3
- 102000008198 Coxsackie and Adenovirus Receptor Like Membrane Protein Human genes 0.000 description 3
- 108010035601 Coxsackie and Adenovirus Receptor Like Membrane Protein Proteins 0.000 description 3
- 102000053602 DNA Human genes 0.000 description 3
- 208000001976 Endocrine Gland Neoplasms Diseases 0.000 description 3
- 206010014733 Endometrial cancer Diseases 0.000 description 3
- 206010014759 Endometrial neoplasm Diseases 0.000 description 3
- 208000001382 Experimental Melanoma Diseases 0.000 description 3
- PEDCQBHIVMGVHV-UHFFFAOYSA-N Glycerine Chemical compound OCC(O)CO PEDCQBHIVMGVHV-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- 206010061218 Inflammation Diseases 0.000 description 3
- 241001494479 Pecora Species 0.000 description 3
- 241000125945 Protoparvovirus Species 0.000 description 3
- 208000015634 Rectal Neoplasms Diseases 0.000 description 3
- 241000282898 Sus scrofa Species 0.000 description 3
- 208000024313 Testicular Neoplasms Diseases 0.000 description 3
- 108700019146 Transgenes Proteins 0.000 description 3
- 108010067390 Viral Proteins Proteins 0.000 description 3
- 230000003187 abdominal effect Effects 0.000 description 3
- 229960000074 biopharmaceutical Drugs 0.000 description 3
- 150000001720 carbohydrates Chemical class 0.000 description 3
- 238000004113 cell culture Methods 0.000 description 3
- 230000006041 cell recruitment Effects 0.000 description 3
- 230000009827 complement-dependent cellular cytotoxicity Effects 0.000 description 3
- 230000001461 cytolytic effect Effects 0.000 description 3
- 230000000120 cytopathologic effect Effects 0.000 description 3
- 208000035475 disorder Diseases 0.000 description 3
- 201000011523 endocrine gland cancer Diseases 0.000 description 3
- 239000000835 fiber Substances 0.000 description 3
- 108020001507 fusion proteins Proteins 0.000 description 3
- 102000037865 fusion proteins Human genes 0.000 description 3
- 238000001476 gene delivery Methods 0.000 description 3
- 238000001415 gene therapy Methods 0.000 description 3
- 238000000338 in vitro Methods 0.000 description 3
- 238000011065 in-situ storage Methods 0.000 description 3
- 230000001965 increasing effect Effects 0.000 description 3
- 230000004054 inflammatory process Effects 0.000 description 3
- 230000002401 inhibitory effect Effects 0.000 description 3
- 208000014018 liver neoplasm Diseases 0.000 description 3
- 230000009401 metastasis Effects 0.000 description 3
- 230000001613 neoplastic effect Effects 0.000 description 3
- 210000004882 non-tumor cell Anatomy 0.000 description 3
- 230000014207 opsonization Effects 0.000 description 3
- 230000037361 pathway Effects 0.000 description 3
- 239000013612 plasmid Substances 0.000 description 3
- 238000006467 substitution reaction Methods 0.000 description 3
- 238000003786 synthesis reaction Methods 0.000 description 3
- 238000011144 upstream manufacturing Methods 0.000 description 3
- 230000029812 viral genome replication Effects 0.000 description 3
- 206010060999 Benign neoplasm Diseases 0.000 description 2
- 206010004446 Benign prostatic hyperplasia Diseases 0.000 description 2
- 208000018084 Bone neoplasm Diseases 0.000 description 2
- 241000288950 Callithrix jacchus Species 0.000 description 2
- 241000282693 Cercopithecidae Species 0.000 description 2
- 208000016623 Choroid neoplasm Diseases 0.000 description 2
- 102100024458 Cyclin-dependent kinase inhibitor 2A Human genes 0.000 description 2
- 102000004127 Cytokines Human genes 0.000 description 2
- 108090000695 Cytokines Proteins 0.000 description 2
- 239000006144 Dulbecco’s modified Eagle's medium Substances 0.000 description 2
- 208000000461 Esophageal Neoplasms Diseases 0.000 description 2
- GHASVSINZRGABV-UHFFFAOYSA-N Fluorouracil Chemical compound FC1=CNC(=O)NC1=O GHASVSINZRGABV-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 208000000321 Gardner Syndrome Diseases 0.000 description 2
- 206010017993 Gastrointestinal neoplasms Diseases 0.000 description 2
- 102000003886 Glycoproteins Human genes 0.000 description 2
- 108090000288 Glycoproteins Proteins 0.000 description 2
- 241000219774 Griffonia Species 0.000 description 2
- 241000219726 Griffonia simplicifolia Species 0.000 description 2
- 102000003726 Hexosyltransferases Human genes 0.000 description 2
- 108090000027 Hexosyltransferases Proteins 0.000 description 2
- 241001272567 Hominoidea Species 0.000 description 2
- 101000856513 Homo sapiens Inactive N-acetyllactosaminide alpha-1,3-galactosyltransferase Proteins 0.000 description 2
- 102100025509 Inactive N-acetyllactosaminide alpha-1,3-galactosyltransferase Human genes 0.000 description 2
- 208000008839 Kidney Neoplasms Diseases 0.000 description 2
- 108010090054 Membrane Glycoproteins Proteins 0.000 description 2
- 102000012750 Membrane Glycoproteins Human genes 0.000 description 2
- 101710169105 Minor spike protein Proteins 0.000 description 2
- 101710081079 Minor spike protein H Proteins 0.000 description 2
- 208000001894 Nasopharyngeal Neoplasms Diseases 0.000 description 2
- 208000013625 Nelson syndrome Diseases 0.000 description 2
- 206010029260 Neuroblastoma Diseases 0.000 description 2
- 208000010505 Nose Neoplasms Diseases 0.000 description 2
- 201000010133 Oligodendroglioma Diseases 0.000 description 2
- 108700026244 Open Reading Frames Proteins 0.000 description 2
- 208000009095 Orbital Neoplasms Diseases 0.000 description 2
- 208000000863 Palatal Neoplasms Diseases 0.000 description 2
- 241000711504 Paramyxoviridae Species 0.000 description 2
- 208000000821 Parathyroid Neoplasms Diseases 0.000 description 2
- 206010057249 Phagocytosis Diseases 0.000 description 2
- 208000009565 Pharyngeal Neoplasms Diseases 0.000 description 2
- 235000014676 Phragmites communis Nutrition 0.000 description 2
- 241000288906 Primates Species 0.000 description 2
- 102000007066 Prostate-Specific Antigen Human genes 0.000 description 2
- 108010072866 Prostate-Specific Antigen Proteins 0.000 description 2
- 208000004403 Prostatic Hyperplasia Diseases 0.000 description 2
- 241000700159 Rattus Species 0.000 description 2
- 208000024770 Thyroid neoplasm Diseases 0.000 description 2
- HSCJRCZFDFQWRP-ABVWGUQPSA-N UDP-alpha-D-galactose Chemical compound O[C@@H]1[C@@H](O)[C@@H](O)[C@@H](CO)O[C@@H]1OP(O)(=O)OP(O)(=O)OC[C@@H]1[C@@H](O)[C@@H](O)[C@H](N2C(NC(=O)C=C2)=O)O1 HSCJRCZFDFQWRP-ABVWGUQPSA-N 0.000 description 2
- 208000023915 Ureteral Neoplasms Diseases 0.000 description 2
- HSCJRCZFDFQWRP-UHFFFAOYSA-N Uridindiphosphoglukose Natural products OC1C(O)C(O)C(CO)OC1OP(O)(=O)OP(O)(=O)OCC1C(O)C(O)C(N2C(NC(=O)C=C2)=O)O1 HSCJRCZFDFQWRP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 208000014070 Vestibular schwannoma Diseases 0.000 description 2
- 208000004064 acoustic neuroma Diseases 0.000 description 2
- 239000012190 activator Substances 0.000 description 2
- 125000003275 alpha amino acid group Chemical group 0.000 description 2
- 150000001413 amino acids Chemical class 0.000 description 2
- 230000006023 anti-tumor response Effects 0.000 description 2
- 239000002246 antineoplastic agent Substances 0.000 description 2
- 238000003556 assay Methods 0.000 description 2
- 210000003719 b-lymphocyte Anatomy 0.000 description 2
- 208000026900 bile duct neoplasm Diseases 0.000 description 2
- 102000023732 binding proteins Human genes 0.000 description 2
- 108091008324 binding proteins Proteins 0.000 description 2
- 210000004369 blood Anatomy 0.000 description 2
- 239000008280 blood Substances 0.000 description 2
- 210000004204 blood vessel Anatomy 0.000 description 2
- 239000000872 buffer Substances 0.000 description 2
- 125000000837 carbohydrate group Chemical group 0.000 description 2
- 239000000969 carrier Substances 0.000 description 2
- 230000030833 cell death Effects 0.000 description 2
- 230000032823 cell division Effects 0.000 description 2
- 230000022534 cell killing Effects 0.000 description 2
- 238000003570 cell viability assay Methods 0.000 description 2
- 230000001413 cellular effect Effects 0.000 description 2
- 230000002490 cerebral effect Effects 0.000 description 2
- 239000005482 chemotactic factor Substances 0.000 description 2
- 238000012411 cloning technique Methods 0.000 description 2
- 210000001072 colon Anatomy 0.000 description 2
- 230000024203 complement activation Effects 0.000 description 2
- 108010047295 complement receptors Proteins 0.000 description 2
- 102000006834 complement receptors Human genes 0.000 description 2
- 230000004154 complement system Effects 0.000 description 2
- 230000001086 cytosolic effect Effects 0.000 description 2
- 210000004443 dendritic cell Anatomy 0.000 description 2
- 238000010586 diagram Methods 0.000 description 2
- 230000008034 disappearance Effects 0.000 description 2
- 238000005538 encapsulation Methods 0.000 description 2
- 230000012202 endocytosis Effects 0.000 description 2
- 238000002474 experimental method Methods 0.000 description 2
- 229960002949 fluorouracil Drugs 0.000 description 2
- 238000009472 formulation Methods 0.000 description 2
- 108091006104 gene-regulatory proteins Proteins 0.000 description 2
- 102000034356 gene-regulatory proteins Human genes 0.000 description 2
- 239000000348 glycosyl donor Substances 0.000 description 2
- 239000001963 growth medium Substances 0.000 description 2
- 208000014829 head and neck neoplasm Diseases 0.000 description 2
- 230000006801 homologous recombination Effects 0.000 description 2
- 238000002744 homologous recombination Methods 0.000 description 2
- 238000003384 imaging method Methods 0.000 description 2
- 230000005934 immune activation Effects 0.000 description 2
- 210000000987 immune system Anatomy 0.000 description 2
- 230000002163 immunogen Effects 0.000 description 2
- 230000002779 inactivation Effects 0.000 description 2
- 238000011534 incubation Methods 0.000 description 2
- 230000004941 influx Effects 0.000 description 2
- 238000001802 infusion Methods 0.000 description 2
- 230000005764 inhibitory process Effects 0.000 description 2
- 238000003780 insertion Methods 0.000 description 2
- 230000037431 insertion Effects 0.000 description 2
- 238000009413 insulation Methods 0.000 description 2
- 230000003834 intracellular effect Effects 0.000 description 2
- 238000002357 laparoscopic surgery Methods 0.000 description 2
- 201000007270 liver cancer Diseases 0.000 description 2
- 210000004072 lung Anatomy 0.000 description 2
- 210000004698 lymphocyte Anatomy 0.000 description 2
- 239000006166 lysate Substances 0.000 description 2
- 210000002540 macrophage Anatomy 0.000 description 2
- 230000035800 maturation Effects 0.000 description 2
- 230000034217 membrane fusion Effects 0.000 description 2
- 206010061311 nervous system neoplasm Diseases 0.000 description 2
- 208000002154 non-small cell lung carcinoma Diseases 0.000 description 2
- 210000001331 nose Anatomy 0.000 description 2
- 239000002773 nucleotide Substances 0.000 description 2
- 239000002674 ointment Substances 0.000 description 2
- 208000027500 optic nerve neoplasm Diseases 0.000 description 2
- 208000025303 orbit neoplasm Diseases 0.000 description 2
- 239000011236 particulate material Substances 0.000 description 2
- 208000010918 peritoneal neoplasm Diseases 0.000 description 2
- 230000008782 phagocytosis Effects 0.000 description 2
- 239000000825 pharmaceutical preparation Substances 0.000 description 2
- 229940127557 pharmaceutical product Drugs 0.000 description 2
- 201000008006 pharynx cancer Diseases 0.000 description 2
- 239000013600 plasmid vector Substances 0.000 description 2
- 238000002360 preparation method Methods 0.000 description 2
- 102000004196 processed proteins & peptides Human genes 0.000 description 2
- 239000000047 product Substances 0.000 description 2
- 230000001737 promoting effect Effects 0.000 description 2
- 210000002307 prostate Anatomy 0.000 description 2
- 230000007115 recruitment Effects 0.000 description 2
- 208000003265 stomatitis Diseases 0.000 description 2
- 239000006228 supernatant Substances 0.000 description 2
- 230000004083 survival effect Effects 0.000 description 2
- 208000024891 symptom Diseases 0.000 description 2
- 238000007910 systemic administration Methods 0.000 description 2
- 201000003120 testicular cancer Diseases 0.000 description 2
- 238000012360 testing method Methods 0.000 description 2
- 108700020534 tetracycline resistance-encoding transposon repressor Proteins 0.000 description 2
- 208000013076 thyroid tumor Diseases 0.000 description 2
- 238000013518 transcription Methods 0.000 description 2
- 230000035897 transcription Effects 0.000 description 2
- 238000002054 transplantation Methods 0.000 description 2
- 208000029729 tumor suppressor gene on chromosome 11 Diseases 0.000 description 2
- 230000002476 tumorcidal effect Effects 0.000 description 2
- 229960002066 vinorelbine Drugs 0.000 description 2
- GBABOYUKABKIAF-GHYRFKGUSA-N vinorelbine Chemical compound C1N(CC=2C3=CC=CC=C3NC=22)CC(CC)=C[C@H]1C[C@]2(C(=O)OC)C1=CC([C@]23[C@H]([C@]([C@H](OC(C)=O)[C@]4(CC)C=CCN([C@H]34)CC2)(O)C(=O)OC)N2C)=C2C=C1OC GBABOYUKABKIAF-GHYRFKGUSA-N 0.000 description 2
- 238000012800 visualization Methods 0.000 description 2
- QKNYBSVHEMOAJP-UHFFFAOYSA-N 2-amino-2-(hydroxymethyl)propane-1,3-diol;hydron;chloride Chemical compound Cl.OCC(N)(CO)CO QKNYBSVHEMOAJP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 102100039358 3-hydroxyacyl-CoA dehydrogenase type-2 Human genes 0.000 description 1
- VVIAGPKUTFNRDU-UHFFFAOYSA-N 6S-folinic acid Natural products C1NC=2NC(N)=NC(=O)C=2N(C=O)C1CNC1=CC=C(C(=O)NC(CCC(O)=O)C(O)=O)C=C1 VVIAGPKUTFNRDU-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- XGWFJBFNAQHLEF-UHFFFAOYSA-N 9-anthroic acid Chemical compound C1=CC=C2C(C(=O)O)=C(C=CC=C3)C3=CC2=C1 XGWFJBFNAQHLEF-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 102000007469 Actins Human genes 0.000 description 1
- 108010085238 Actins Proteins 0.000 description 1
- 206010052747 Adenocarcinoma pancreas Diseases 0.000 description 1
- 208000003200 Adenoma Diseases 0.000 description 1
- 208000006468 Adrenal Cortex Neoplasms Diseases 0.000 description 1
- 206010061629 Anal neoplasm Diseases 0.000 description 1
- 208000007860 Anus Neoplasms Diseases 0.000 description 1
- 206010003571 Astrocytoma Diseases 0.000 description 1
- 208000023514 Barrett esophagus Diseases 0.000 description 1
- 208000023665 Barrett oesophagus Diseases 0.000 description 1
- 208000005440 Basal Cell Neoplasms Diseases 0.000 description 1
- 206010005056 Bladder neoplasm Diseases 0.000 description 1
- 208000008720 Bone Marrow Neoplasms Diseases 0.000 description 1
- 241000283725 Bos Species 0.000 description 1
- 241000283690 Bos taurus Species 0.000 description 1
- 208000006274 Brain Stem Neoplasms Diseases 0.000 description 1
- 108010029697 CD40 Ligand Proteins 0.000 description 1
- 102100032937 CD40 ligand Human genes 0.000 description 1
- 241000283707 Capra Species 0.000 description 1
- 206010007590 Cardiac neoplasms Diseases 0.000 description 1
- 102000001327 Chemokine CCL5 Human genes 0.000 description 1
- 108010055166 Chemokine CCL5 Proteins 0.000 description 1
- 102000019034 Chemokines Human genes 0.000 description 1
- 108010012236 Chemokines Proteins 0.000 description 1
- 101710091342 Chemotactic peptide Proteins 0.000 description 1
- 206010061045 Colon neoplasm Diseases 0.000 description 1
- 208000001333 Colorectal Neoplasms Diseases 0.000 description 1
- 108010078015 Complement C3b Proteins 0.000 description 1
- 208000022523 Conjunctival Neoplasms Diseases 0.000 description 1
- 102000003915 DNA Topoisomerases Human genes 0.000 description 1
- 108090000323 DNA Topoisomerases Proteins 0.000 description 1
- 230000004543 DNA replication Effects 0.000 description 1
- 206010011968 Decreased immune responsiveness Diseases 0.000 description 1
- 206010070179 Denys-Drash syndrome Diseases 0.000 description 1
- 206010061825 Duodenal neoplasm Diseases 0.000 description 1
- 101150005585 E3 gene Proteins 0.000 description 1
- 102000012199 E3 ubiquitin-protein ligase Mdm2 Human genes 0.000 description 1
- 208000009129 Ear Neoplasms Diseases 0.000 description 1
- 208000027666 Endometrial Stromal Tumors Diseases 0.000 description 1
- 208000004413 Eyelid Neoplasms Diseases 0.000 description 1
- 208000002923 Facial Neoplasms Diseases 0.000 description 1
- 208000013452 Fallopian tube neoplasm Diseases 0.000 description 1
- 208000009849 Female Genital Neoplasms Diseases 0.000 description 1
- 208000009317 Femoral Neoplasms Diseases 0.000 description 1
- 101710160621 Fusion glycoprotein F0 Proteins 0.000 description 1
- 101150066002 GFP gene Proteins 0.000 description 1
- 206010061968 Gastric neoplasm Diseases 0.000 description 1
- 206010064571 Gene mutation Diseases 0.000 description 1
- 208000000779 Gingival Neoplasms Diseases 0.000 description 1
- 206010018404 Glucagonoma Diseases 0.000 description 1
- 229930186217 Glycolipid Natural products 0.000 description 1
- 108700023372 Glycosyltransferases Proteins 0.000 description 1
- 241000702620 H-1 parvovirus Species 0.000 description 1
- 101710154606 Hemagglutinin Proteins 0.000 description 1
- 206010019695 Hepatic neoplasm Diseases 0.000 description 1
- 108010068250 Herpes Simplex Virus Protein Vmw65 Proteins 0.000 description 1
- 241000700586 Herpesviridae Species 0.000 description 1
- 101001035740 Homo sapiens 3-hydroxyacyl-CoA dehydrogenase type-2 Proteins 0.000 description 1
- 101000633780 Homo sapiens Signaling lymphocytic activation molecule Proteins 0.000 description 1
- 108010001336 Horseradish Peroxidase Proteins 0.000 description 1
- 241000193096 Human adenovirus B3 Species 0.000 description 1
- 241000598171 Human adenovirus sp. Species 0.000 description 1
- 101100195053 Human herpesvirus 1 (strain 17) RIR1 gene Proteins 0.000 description 1
- 241000725303 Human immunodeficiency virus Species 0.000 description 1
- 241000701806 Human papillomavirus Species 0.000 description 1
- 206010056305 Hypopharyngeal neoplasm Diseases 0.000 description 1
- 208000006001 Hypothalamic Neoplasms Diseases 0.000 description 1
- 206010021143 Hypoxia Diseases 0.000 description 1
- 206010022004 Influenza like illness Diseases 0.000 description 1
- 206010057412 Iris neoplasm Diseases 0.000 description 1
- 208000009164 Islet Cell Adenoma Diseases 0.000 description 1
- 208000009147 Jaw Neoplasms Diseases 0.000 description 1
- 201000004462 Leydig Cell Tumor Diseases 0.000 description 1
- 206010062038 Lip neoplasm Diseases 0.000 description 1
- 208000002404 Liver Cell Adenoma Diseases 0.000 description 1
- 208000004059 Male Breast Neoplasms Diseases 0.000 description 1
- 206010026673 Malignant Pleural Effusion Diseases 0.000 description 1
- 206010025997 Malignant neoplasm of islets of Langerhans Diseases 0.000 description 1
- 208000000438 Mandibular Neoplasms Diseases 0.000 description 1
- 208000005450 Maxillary Sinus Neoplasms Diseases 0.000 description 1
- 201000005505 Measles Diseases 0.000 description 1
- 241001465754 Metazoa Species 0.000 description 1
- 241000713869 Moloney murine leukemia virus Species 0.000 description 1
- 241000712045 Morbillivirus Species 0.000 description 1
- 208000003445 Mouth Neoplasms Diseases 0.000 description 1
- KFEUJDWYNGMDBV-LODBTCKLSA-N N-acetyllactosamine Chemical group O[C@@H]1[C@@H](NC(=O)C)[C@H](O)O[C@H](CO)[C@H]1O[C@H]1[C@H](O)[C@@H](O)[C@@H](O)[C@@H](CO)O1 KFEUJDWYNGMDBV-LODBTCKLSA-N 0.000 description 1
- 230000004988 N-glycosylation Effects 0.000 description 1
- 108091061960 Naked DNA Proteins 0.000 description 1
- 206010060768 Nasal neoplasm Diseases 0.000 description 1
- 102000048850 Neoplasm Genes Human genes 0.000 description 1
- 108700019961 Neoplasm Genes Proteins 0.000 description 1
- 206010029096 Neoplasm prostate Diseases 0.000 description 1
- 208000008846 Neurocytoma Diseases 0.000 description 1
- 206010029350 Neurotoxicity Diseases 0.000 description 1
- 208000010359 Newcastle Disease Diseases 0.000 description 1
- 206010073338 Optic glioma Diseases 0.000 description 1
- 208000004179 Oral Leukoplakia Diseases 0.000 description 1
- 241000283283 Orcinus orca Species 0.000 description 1
- 241000283868 Oryx Species 0.000 description 1
- 101710093908 Outer capsid protein VP4 Proteins 0.000 description 1
- 101710135467 Outer capsid protein sigma-1 Proteins 0.000 description 1
- 208000012868 Overgrowth Diseases 0.000 description 1
- 229930012538 Paclitaxel Natural products 0.000 description 1
- 208000015197 Pancoast syndrome Diseases 0.000 description 1
- 201000010630 Pancoast tumor Diseases 0.000 description 1
- 208000008900 Pancreatic Ductal Carcinoma Diseases 0.000 description 1
- 206010061332 Paraganglion neoplasm Diseases 0.000 description 1
- 208000004091 Parotid Neoplasms Diseases 0.000 description 1
- 206010061336 Pelvic neoplasm Diseases 0.000 description 1
- 208000002471 Penile Neoplasms Diseases 0.000 description 1
- 235000008331 Pinus X rigitaeda Nutrition 0.000 description 1
- 235000011613 Pinus brutia Nutrition 0.000 description 1
- 241000018646 Pinus brutia Species 0.000 description 1
- 208000007913 Pituitary Neoplasms Diseases 0.000 description 1
- 241000288935 Platyrrhini Species 0.000 description 1
- 241000700625 Poxviridae Species 0.000 description 1
- 101710176177 Protein A56 Proteins 0.000 description 1
- 102000016611 Proteoglycans Human genes 0.000 description 1
- 108010067787 Proteoglycans Proteins 0.000 description 1
- 208000007500 Pulmonary Sclerosing Hemangioma Diseases 0.000 description 1
- 201000008183 Pulmonary blastoma Diseases 0.000 description 1
- 241000700157 Rattus norvegicus Species 0.000 description 1
- 108020004511 Recombinant DNA Proteins 0.000 description 1
- 208000004680 Rectal Fistula Diseases 0.000 description 1
- 231100000645 Reed–Muench method Toxicity 0.000 description 1
- 206010038389 Renal cancer Diseases 0.000 description 1
- 208000016624 Retinal neoplasm Diseases 0.000 description 1
- 208000021906 Retroperitoneal neoplasm Diseases 0.000 description 1
- 241000283984 Rodentia Species 0.000 description 1
- 230000018199 S phase Effects 0.000 description 1
- 208000009125 Sigmoid Neoplasms Diseases 0.000 description 1
- 102000008115 Signaling Lymphocytic Activation Molecule Family Member 1 Human genes 0.000 description 1
- 108010074687 Signaling Lymphocytic Activation Molecule Family Member 1 Proteins 0.000 description 1
- 208000000453 Skin Neoplasms Diseases 0.000 description 1
- 206010068771 Soft tissue neoplasm Diseases 0.000 description 1
- 208000021712 Soft tissue sarcoma Diseases 0.000 description 1
- 206010041329 Somatostatinoma Diseases 0.000 description 1
- 208000000133 Spinal Neoplasms Diseases 0.000 description 1
- 208000000277 Splenic Neoplasms Diseases 0.000 description 1
- 208000005718 Stomach Neoplasms Diseases 0.000 description 1
- 208000001159 Sublingual Gland Neoplasms Diseases 0.000 description 1
- 208000025194 Sweat Gland Neoplasms Diseases 0.000 description 1
- 108091008874 T cell receptors Proteins 0.000 description 1
- 102000016266 T-Cell Antigen Receptors Human genes 0.000 description 1
- 229940123237 Taxane Drugs 0.000 description 1
- BPEGJWRSRHCHSN-UHFFFAOYSA-N Temozolomide Chemical compound O=C1N(C)N=NC2=C(C(N)=O)N=CN21 BPEGJWRSRHCHSN-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 239000004098 Tetracycline Substances 0.000 description 1
- 208000009832 Thoracic Neoplasms Diseases 0.000 description 1
- 102000006601 Thymidine Kinase Human genes 0.000 description 1
- 108020004440 Thymidine kinase Proteins 0.000 description 1
- 206010062129 Tongue neoplasm Diseases 0.000 description 1
- 208000006842 Tonsillar Neoplasms Diseases 0.000 description 1
- 206010044221 Toxic encephalopathy Diseases 0.000 description 1
- 208000024212 Tracheal Neoplasms Diseases 0.000 description 1
- GLNADSQYFUSGOU-GPTZEZBUSA-J Trypan blue Chemical compound [Na+].[Na+].[Na+].[Na+].C1=C(S([O-])(=O)=O)C=C2C=C(S([O-])(=O)=O)C(/N=N/C3=CC=C(C=C3C)C=3C=C(C(=CC=3)\N=N\C=3C(=CC4=CC(=CC(N)=C4C=3O)S([O-])(=O)=O)S([O-])(=O)=O)C)=C(O)C2=C1N GLNADSQYFUSGOU-GPTZEZBUSA-J 0.000 description 1
- 102000004243 Tubulin Human genes 0.000 description 1
- 108090000704 Tubulin Proteins 0.000 description 1
- 108091005906 Type I transmembrane proteins Proteins 0.000 description 1
- 101150085955 US11 gene Proteins 0.000 description 1
- 208000008385 Urogenital Neoplasms Diseases 0.000 description 1
- 208000002751 Uveal Neoplasms Diseases 0.000 description 1
- 241000700647 Variola virus Species 0.000 description 1
- 108700005077 Viral Genes Proteins 0.000 description 1
- 230000005856 abnormality Effects 0.000 description 1
- 238000002835 absorbance Methods 0.000 description 1
- 238000010521 absorption reaction Methods 0.000 description 1
- 230000009471 action Effects 0.000 description 1
- 230000033289 adaptive immune response Effects 0.000 description 1
- 230000004721 adaptive immunity Effects 0.000 description 1
- 238000007792 addition Methods 0.000 description 1
- 201000002454 adrenal cortex cancer Diseases 0.000 description 1
- 239000000443 aerosol Substances 0.000 description 1
- 238000012870 ammonium sulfate precipitation Methods 0.000 description 1
- 230000003321 amplification Effects 0.000 description 1
- 239000003708 ampul Substances 0.000 description 1
- 206010002156 anal fistula Diseases 0.000 description 1
- 238000010171 animal model Methods 0.000 description 1
- 230000009833 antibody interaction Effects 0.000 description 1
- 230000009831 antigen interaction Effects 0.000 description 1
- 230000030741 antigen processing and presentation Effects 0.000 description 1
- 230000000890 antigenic effect Effects 0.000 description 1
- 201000009550 anus benign neoplasm Diseases 0.000 description 1
- 238000013459 approach Methods 0.000 description 1
- 239000008135 aqueous vehicle Substances 0.000 description 1
- 206010003549 asthenia Diseases 0.000 description 1
- 230000004888 barrier function Effects 0.000 description 1
- 230000008901 benefit Effects 0.000 description 1
- 210000000941 bile Anatomy 0.000 description 1
- 239000003833 bile salt Substances 0.000 description 1
- 229940093761 bile salts Drugs 0.000 description 1
- 208000020790 biliary tract neoplasm Diseases 0.000 description 1
- 230000008827 biological function Effects 0.000 description 1
- 230000009141 biological interaction Effects 0.000 description 1
- 210000000601 blood cell Anatomy 0.000 description 1
- 239000001055 blue pigment Substances 0.000 description 1
- 210000004556 brain Anatomy 0.000 description 1
- 208000014581 breast ductal adenocarcinoma Diseases 0.000 description 1
- 201000010983 breast ductal carcinoma Diseases 0.000 description 1
- 201000005242 bronchial neoplasm Diseases 0.000 description 1
- 238000013276 bronchoscopy Methods 0.000 description 1
- 239000007975 buffered saline Substances 0.000 description 1
- 230000004709 cell invasion Effects 0.000 description 1
- 230000012292 cell migration Effects 0.000 description 1
- 230000004663 cell proliferation Effects 0.000 description 1
- 239000012094 cell viability reagent Substances 0.000 description 1
- 208000025997 central nervous system neoplasm Diseases 0.000 description 1
- 201000004559 cerebral degeneration Diseases 0.000 description 1
- 238000006243 chemical reaction Methods 0.000 description 1
- 238000002512 chemotherapy Methods 0.000 description 1
- 210000000038 chest Anatomy 0.000 description 1
- DQLATGHUWYMOKM-UHFFFAOYSA-L cisplatin Chemical compound N[Pt](N)(Cl)Cl DQLATGHUWYMOKM-UHFFFAOYSA-L 0.000 description 1
- 229960004316 cisplatin Drugs 0.000 description 1
- 238000004140 cleaning Methods 0.000 description 1
- 239000012568 clinical material Substances 0.000 description 1
- 201000011024 colonic benign neoplasm Diseases 0.000 description 1
- 230000000112 colonic effect Effects 0.000 description 1
- 238000002052 colonoscopy Methods 0.000 description 1
- 230000009918 complex formation Effects 0.000 description 1
- 150000001875 compounds Chemical class 0.000 description 1
- 208000017903 conjunctival tumor Diseases 0.000 description 1
- 238000010276 construction Methods 0.000 description 1
- 238000007796 conventional method Methods 0.000 description 1
- 239000006071 cream Substances 0.000 description 1
- 210000004748 cultured cell Anatomy 0.000 description 1
- 238000002574 cystoscopy Methods 0.000 description 1
- 230000034994 death Effects 0.000 description 1
- 230000007812 deficiency Effects 0.000 description 1
- 230000003111 delayed effect Effects 0.000 description 1
- 238000000432 density-gradient centrifugation Methods 0.000 description 1
- 230000001419 dependent effect Effects 0.000 description 1
- 238000001514 detection method Methods 0.000 description 1
- 239000002270 dispersing agent Substances 0.000 description 1
- 238000010494 dissociation reaction Methods 0.000 description 1
- 230000005593 dissociations Effects 0.000 description 1
- 239000002552 dosage form Substances 0.000 description 1
- 210000003717 douglas' pouch Anatomy 0.000 description 1
- 239000006196 drop Substances 0.000 description 1
- 229940079593 drug Drugs 0.000 description 1
- 238000001035 drying Methods 0.000 description 1
- 201000000312 duodenum cancer Diseases 0.000 description 1
- 235000013399 edible fruits Nutrition 0.000 description 1
- 230000000694 effects Effects 0.000 description 1
- 230000008030 elimination Effects 0.000 description 1
- 238000003379 elimination reaction Methods 0.000 description 1
- 239000000839 emulsion Substances 0.000 description 1
- 206010014599 encephalitis Diseases 0.000 description 1
- 230000002124 endocrine Effects 0.000 description 1
- 201000000330 endometrial stromal sarcoma Diseases 0.000 description 1
- 208000029179 endometrioid stromal sarcoma Diseases 0.000 description 1
- 208000023965 endometrium neoplasm Diseases 0.000 description 1
- 238000001839 endoscopy Methods 0.000 description 1
- 238000005516 engineering process Methods 0.000 description 1
- 239000003623 enhancer Substances 0.000 description 1
- 230000007613 environmental effect Effects 0.000 description 1
- 238000011156 evaluation Methods 0.000 description 1
- 230000000763 evoking effect Effects 0.000 description 1
- 230000002349 favourable effect Effects 0.000 description 1
- 239000012530 fluid Substances 0.000 description 1
- GNBHRKFJIUUOQI-UHFFFAOYSA-N fluorescein Chemical compound O1C(=O)C2=CC=CC=C2C21C1=CC=C(O)C=C1OC1=CC(O)=CC=C21 GNBHRKFJIUUOQI-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- MHMNJMPURVTYEJ-UHFFFAOYSA-N fluorescein-5-isothiocyanate Chemical compound O1C(=O)C2=CC(N=C=S)=CC=C2C21C1=CC=C(O)C=C1OC1=CC(O)=CC=C21 MHMNJMPURVTYEJ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- VVIAGPKUTFNRDU-ABLWVSNPSA-N folinic acid Chemical compound C1NC=2NC(N)=NC(=O)C=2N(C=O)C1CNC1=CC=C(C(=O)N[C@@H](CCC(O)=O)C(O)=O)C=C1 VVIAGPKUTFNRDU-ABLWVSNPSA-N 0.000 description 1
- 235000008191 folinic acid Nutrition 0.000 description 1
- 239000011672 folinic acid Substances 0.000 description 1
- IECPWNUMDGFDKC-MZJAQBGESA-N fusidic acid Chemical class O[C@@H]([C@@H]12)C[C@H]3\C(=C(/CCC=C(C)C)C(O)=O)[C@@H](OC(C)=O)C[C@]3(C)[C@@]2(C)CC[C@@H]2[C@]1(C)CC[C@@H](O)[C@H]2C IECPWNUMDGFDKC-MZJAQBGESA-N 0.000 description 1
- 230000004927 fusion Effects 0.000 description 1
- 229930182830 galactose Natural products 0.000 description 1
- IRSCQMHQWWYFCW-UHFFFAOYSA-N ganciclovir Chemical compound O=C1NC(N)=NC2=C1N=CN2COC(CO)CO IRSCQMHQWWYFCW-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 229960002963 ganciclovir Drugs 0.000 description 1
- 201000008361 ganglioneuroma Diseases 0.000 description 1
- 208000015419 gastrin-producing neuroendocrine tumor Diseases 0.000 description 1
- 201000000052 gastrinoma Diseases 0.000 description 1
- SDUQYLNIPVEERB-QPPQHZFASA-N gemcitabine Chemical compound O=C1N=C(N)C=CN1[C@H]1C(F)(F)[C@H](O)[C@@H](CO)O1 SDUQYLNIPVEERB-QPPQHZFASA-N 0.000 description 1
- 229960005277 gemcitabine Drugs 0.000 description 1
- 230000002068 genetic effect Effects 0.000 description 1
- 238000010353 genetic engineering Methods 0.000 description 1
- 210000004907 gland Anatomy 0.000 description 1
- 210000004565 granule cell Anatomy 0.000 description 1
- 210000003128 head Anatomy 0.000 description 1
- 230000035876 healing Effects 0.000 description 1
- 208000024348 heart neoplasm Diseases 0.000 description 1
- 238000001794 hormone therapy Methods 0.000 description 1
- 102000046537 human SLAMF1 Human genes 0.000 description 1
- 210000005260 human cell Anatomy 0.000 description 1
- 230000001146 hypoxic effect Effects 0.000 description 1
- HOMGKSMUEGBAAB-UHFFFAOYSA-N ifosfamide Chemical compound ClCCNP1(=O)OCCCN1CCCl HOMGKSMUEGBAAB-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 229960001101 ifosfamide Drugs 0.000 description 1
- 201000002312 ileal neoplasm Diseases 0.000 description 1
- 201000002316 ileum cancer Diseases 0.000 description 1
- 210000002865 immune cell Anatomy 0.000 description 1
- 230000036737 immune function Effects 0.000 description 1
- 230000003308 immunostimulating effect Effects 0.000 description 1
- 238000009169 immunotherapy Methods 0.000 description 1
- 230000001976 improved effect Effects 0.000 description 1
- 230000006872 improvement Effects 0.000 description 1
- 230000002458 infectious effect Effects 0.000 description 1
- 230000008595 infiltration Effects 0.000 description 1
- 238000001764 infiltration Methods 0.000 description 1
- 239000003112 inhibitor Substances 0.000 description 1
- 208000014674 injury Diseases 0.000 description 1
- 230000015788 innate immune response Effects 0.000 description 1
- 238000011081 inoculation Methods 0.000 description 1
- 206010022498 insulinoma Diseases 0.000 description 1
- 239000007928 intraperitoneal injection Substances 0.000 description 1
- 230000009545 invasion Effects 0.000 description 1
- 208000030776 invasive breast carcinoma Diseases 0.000 description 1
- 206010073095 invasive ductal breast carcinoma Diseases 0.000 description 1
- UWKQSNNFCGGAFS-XIFFEERXSA-N irinotecan Chemical compound C1=C2C(CC)=C3CN(C(C4=C([C@@](C(=O)OC4)(O)CC)C=4)=O)C=4C3=NC2=CC=C1OC(=O)N(CC1)CCC1N1CCCCC1 UWKQSNNFCGGAFS-XIFFEERXSA-N 0.000 description 1
- 210000004153 islets of langerhan Anatomy 0.000 description 1
- 201000010982 kidney cancer Diseases 0.000 description 1
- 210000003292 kidney cell Anatomy 0.000 description 1
- 230000002147 killing effect Effects 0.000 description 1
- 238000002372 labelling Methods 0.000 description 1
- 229960001691 leucovorin Drugs 0.000 description 1
- 230000000670 limiting effect Effects 0.000 description 1
- 239000002502 liposome Substances 0.000 description 1
- 210000004185 liver Anatomy 0.000 description 1
- 238000004020 luminiscence type Methods 0.000 description 1
- RVFGKBWWUQOIOU-NDEPHWFRSA-N lurtotecan Chemical compound O=C([C@]1(O)CC)OCC(C(N2CC3=4)=O)=C1C=C2C3=NC1=CC=2OCCOC=2C=C1C=4CN1CCN(C)CC1 RVFGKBWWUQOIOU-NDEPHWFRSA-N 0.000 description 1
- 230000000938 luteal effect Effects 0.000 description 1
- 210000004324 lymphatic system Anatomy 0.000 description 1
- 230000002101 lytic effect Effects 0.000 description 1
- 208000012166 male reproductive system neoplasm Diseases 0.000 description 1
- 208000025854 malignant tumor of adrenal cortex Diseases 0.000 description 1
- 210000004962 mammalian cell Anatomy 0.000 description 1
- 241001515942 marmosets Species 0.000 description 1
- 208000021797 maxillary neoplasm Diseases 0.000 description 1
- 101150024228 mdm2 gene Proteins 0.000 description 1
- 230000004060 metabolic process Effects 0.000 description 1
- 206010061289 metastatic neoplasm Diseases 0.000 description 1
- 238000000386 microscopy Methods 0.000 description 1
- 230000004048 modification Effects 0.000 description 1
- 238000012986 modification Methods 0.000 description 1
- 238000010369 molecular cloning Methods 0.000 description 1
- 108010068170 mouse alpha 1,3 galactosyltransferase Proteins 0.000 description 1
- 206010051747 multiple endocrine neoplasia Diseases 0.000 description 1
- 210000003205 muscle Anatomy 0.000 description 1
- 239000002105 nanoparticle Substances 0.000 description 1
- 239000007923 nasal drop Substances 0.000 description 1
- 229940100662 nasal drops Drugs 0.000 description 1
- 239000006218 nasal suppository Substances 0.000 description 1
- 208000018389 neoplasm of cerebral hemisphere Diseases 0.000 description 1
- 208000025437 neoplasm of hypopharynx Diseases 0.000 description 1
- 210000005036 nerve Anatomy 0.000 description 1
- 210000000653 nervous system Anatomy 0.000 description 1
- 201000011682 nervous system cancer Diseases 0.000 description 1
- 208000015122 neurodegenerative disease Diseases 0.000 description 1
- 208000002761 neurofibromatosis 2 Diseases 0.000 description 1
- 208000022032 neurofibromatosis type 2 Diseases 0.000 description 1
- 230000007135 neurotoxicity Effects 0.000 description 1
- 231100000228 neurotoxicity Toxicity 0.000 description 1
- 231100000252 nontoxic Toxicity 0.000 description 1
- 230000003000 nontoxic effect Effects 0.000 description 1
- 238000003199 nucleic acid amplification method Methods 0.000 description 1
- 125000003729 nucleotide group Chemical group 0.000 description 1
- 230000035764 nutrition Effects 0.000 description 1
- 235000016709 nutrition Nutrition 0.000 description 1
- 238000011275 oncology therapy Methods 0.000 description 1
- 208000008511 optic nerve glioma Diseases 0.000 description 1
- 230000003287 optical effect Effects 0.000 description 1
- 201000008557 oral mucosa leukoplakia Diseases 0.000 description 1
- 210000001672 ovary Anatomy 0.000 description 1
- 230000002018 overexpression Effects 0.000 description 1
- DWAFYCQODLXJNR-BNTLRKBRSA-L oxaliplatin Chemical compound O1C(=O)C(=O)O[Pt]11N[C@@H]2CCCC[C@H]2N1 DWAFYCQODLXJNR-BNTLRKBRSA-L 0.000 description 1
- 229960001756 oxaliplatin Drugs 0.000 description 1
- 108700025694 p53 Genes Proteins 0.000 description 1
- 229960001592 paclitaxel Drugs 0.000 description 1
- 201000002094 pancreatic adenocarcinoma Diseases 0.000 description 1
- 201000008129 pancreatic ductal adenocarcinoma Diseases 0.000 description 1
- 208000021255 pancreatic insulinoma Diseases 0.000 description 1
- 208000003154 papilloma Diseases 0.000 description 1
- 208000007312 paraganglioma Diseases 0.000 description 1
- 201000005989 paraneoplastic polyneuropathy Diseases 0.000 description 1
- 201000003913 parathyroid carcinoma Diseases 0.000 description 1
- 238000007911 parenteral administration Methods 0.000 description 1
- 208000024011 parotid gland neoplasm Diseases 0.000 description 1
- 230000036961 partial effect Effects 0.000 description 1
- 230000035515 penetration Effects 0.000 description 1
- 201000005528 peripheral nervous system neoplasm Diseases 0.000 description 1
- 229950011309 pexastimogene devacirepvec Drugs 0.000 description 1
- 230000002399 phagocytotic effect Effects 0.000 description 1
- 239000000546 pharmaceutical excipient Substances 0.000 description 1
- 108010055837 phosphocarrier protein HPr Proteins 0.000 description 1
- 230000026731 phosphorylation Effects 0.000 description 1
- 238000006366 phosphorylation reaction Methods 0.000 description 1
- 230000008884 pinocytosis Effects 0.000 description 1
- 201000002511 pituitary cancer Diseases 0.000 description 1
- 208000010916 pituitary tumor Diseases 0.000 description 1
- 208000015768 polyposis Diseases 0.000 description 1
- 239000000843 powder Substances 0.000 description 1
- 239000003755 preservative agent Substances 0.000 description 1
- 230000002335 preservative effect Effects 0.000 description 1
- 125000002924 primary amino group Chemical group [H]N([H])* 0.000 description 1
- 238000012545 processing Methods 0.000 description 1
- 229940002612 prodrug Drugs 0.000 description 1
- 239000000651 prodrug Substances 0.000 description 1
- 230000002062 proliferating effect Effects 0.000 description 1
- 230000035755 proliferation Effects 0.000 description 1
- 230000000644 propagated effect Effects 0.000 description 1
- 201000005825 prostate adenocarcinoma Diseases 0.000 description 1
- 238000000746 purification Methods 0.000 description 1
- 238000011002 quantification Methods 0.000 description 1
- 238000001959 radiotherapy Methods 0.000 description 1
- 230000009467 reduction Effects 0.000 description 1
- 230000002829 reductive effect Effects 0.000 description 1
- 238000002271 resection Methods 0.000 description 1
- 230000004044 response Effects 0.000 description 1
- 230000000717 retained effect Effects 0.000 description 1
- 230000001177 retroviral effect Effects 0.000 description 1
- 210000003079 salivary gland Anatomy 0.000 description 1
- 238000013341 scale-up Methods 0.000 description 1
- 208000011581 secondary neoplasm Diseases 0.000 description 1
- 238000013207 serial dilution Methods 0.000 description 1
- 230000001568 sexual effect Effects 0.000 description 1
- 230000011664 signaling Effects 0.000 description 1
- 239000002356 single layer Substances 0.000 description 1
- 210000003625 skull Anatomy 0.000 description 1
- 229940083538 smallpox vaccine Drugs 0.000 description 1
- 239000011780 sodium chloride Substances 0.000 description 1
- 210000004872 soft tissue Anatomy 0.000 description 1
- 239000007787 solid Substances 0.000 description 1
- 239000007790 solid phase Substances 0.000 description 1
- 239000002904 solvent Substances 0.000 description 1
- 230000009870 specific binding Effects 0.000 description 1
- 239000003381 stabilizer Substances 0.000 description 1
- 108020003113 steroid hormone receptors Proteins 0.000 description 1
- 102000005969 steroid hormone receptors Human genes 0.000 description 1
- 230000004936 stimulating effect Effects 0.000 description 1
- 230000000638 stimulation Effects 0.000 description 1
- 239000011550 stock solution Substances 0.000 description 1
- 201000011549 stomach cancer Diseases 0.000 description 1
- 238000010254 subcutaneous injection Methods 0.000 description 1
- 239000007929 subcutaneous injection Substances 0.000 description 1
- 208000023977 submandibular gland neoplasm Diseases 0.000 description 1
- 239000004094 surface-active agent Substances 0.000 description 1
- 230000002194 synthesizing effect Effects 0.000 description 1
- 229950008461 talimogene laherparepvec Drugs 0.000 description 1
- RCINICONZNJXQF-MZXODVADSA-N taxol Chemical compound O([C@@H]1[C@@]2(C[C@@H](C(C)=C(C2(C)C)[C@H](C([C@]2(C)[C@@H](O)C[C@H]3OC[C@]3([C@H]21)OC(C)=O)=O)OC(=O)C)OC(=O)[C@H](O)[C@@H](NC(=O)C=1C=CC=CC=1)C=1C=CC=CC=1)O)C(=O)C1=CC=CC=C1 RCINICONZNJXQF-MZXODVADSA-N 0.000 description 1
- 229940061353 temodar Drugs 0.000 description 1
- 210000001550 testis Anatomy 0.000 description 1
- 229960002180 tetracycline Drugs 0.000 description 1
- 229930101283 tetracycline Natural products 0.000 description 1
- 235000019364 tetracycline Nutrition 0.000 description 1
- 150000003522 tetracyclines Chemical class 0.000 description 1
- 229940021747 therapeutic vaccine Drugs 0.000 description 1
- 201000003957 thoracic cancer Diseases 0.000 description 1
- 210000000115 thoracic cavity Anatomy 0.000 description 1
- 208000013066 thyroid gland cancer Diseases 0.000 description 1
- 208000023959 tonsil neoplasm Diseases 0.000 description 1
- 238000011200 topical administration Methods 0.000 description 1
- 230000000699 topical effect Effects 0.000 description 1
- UCFGDBYHRUNTLO-QHCPKHFHSA-N topotecan Chemical compound C1=C(O)C(CN(C)C)=C2C=C(CN3C4=CC5=C(C3=O)COC(=O)[C@]5(O)CC)C4=NC2=C1 UCFGDBYHRUNTLO-QHCPKHFHSA-N 0.000 description 1
- 229960000303 topotecan Drugs 0.000 description 1
- 206010044285 tracheal cancer Diseases 0.000 description 1
- 108091006106 transcriptional activators Proteins 0.000 description 1
- 230000002103 transcriptional effect Effects 0.000 description 1
- 238000012546 transfer Methods 0.000 description 1
- 230000014616 translation Effects 0.000 description 1
- 230000032258 transport Effects 0.000 description 1
- 208000009174 transverse myelitis Diseases 0.000 description 1
- 230000008733 trauma Effects 0.000 description 1
- 238000011269 treatment regimen Methods 0.000 description 1
- 239000013638 trimer Substances 0.000 description 1
- 230000005748 tumor development Effects 0.000 description 1
- 208000018408 tumor of duodenum Diseases 0.000 description 1
- 208000017997 tumor of parathyroid gland Diseases 0.000 description 1
- 208000025421 tumor of uterus Diseases 0.000 description 1
- 241001430294 unidentified retrovirus Species 0.000 description 1
- 230000002485 urinary effect Effects 0.000 description 1
- 208000024719 uterine cervix neoplasm Diseases 0.000 description 1
- 208000013139 vaginal neoplasm Diseases 0.000 description 1
- 206010055031 vascular neoplasm Diseases 0.000 description 1
- PNVNVHUZROJLTJ-UHFFFAOYSA-N venlafaxine Chemical compound C1=CC(OC)=CC=C1C(CN(C)C)C1(O)CCCCC1 PNVNVHUZROJLTJ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 230000002861 ventricular Effects 0.000 description 1
- 210000000605 viral structure Anatomy 0.000 description 1
- 210000001835 viscera Anatomy 0.000 description 1
- 230000000007 visual effect Effects 0.000 description 1
- 238000011179 visual inspection Methods 0.000 description 1
Images
Classifications
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K35/00—Medicinal preparations containing materials or reaction products thereof with undetermined constitution
- A61K35/66—Microorganisms or materials therefrom
- A61K35/76—Viruses; Subviral particles; Bacteriophages
- A61K35/761—Adenovirus
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K35/00—Medicinal preparations containing materials or reaction products thereof with undetermined constitution
- A61K35/66—Microorganisms or materials therefrom
- A61K35/76—Viruses; Subviral particles; Bacteriophages
- A61K35/768—Oncolytic viruses not provided for in groups A61K35/761 - A61K35/766
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K38/00—Medicinal preparations containing peptides
- A61K38/16—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof
- A61K38/43—Enzymes; Proenzymes; Derivatives thereof
- A61K38/45—Transferases (2)
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K9/00—Medicinal preparations characterised by special physical form
- A61K9/0012—Galenical forms characterised by the site of application
- A61K9/0019—Injectable compositions; Intramuscular, intravenous, arterial, subcutaneous administration; Compositions to be administered through the skin in an invasive manner
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K9/00—Medicinal preparations characterised by special physical form
- A61K9/0012—Galenical forms characterised by the site of application
- A61K9/0031—Rectum, anus
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K9/00—Medicinal preparations characterised by special physical form
- A61K9/0012—Galenical forms characterised by the site of application
- A61K9/0034—Urogenital system, e.g. vagina, uterus, cervix, penis, scrotum, urethra, bladder; Personal lubricants
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K9/00—Medicinal preparations characterised by special physical form
- A61K9/0012—Galenical forms characterised by the site of application
- A61K9/0043—Nose
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K9/00—Medicinal preparations characterised by special physical form
- A61K9/0012—Galenical forms characterised by the site of application
- A61K9/0053—Mouth and digestive tract, i.e. intraoral and peroral administration
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P35/00—Antineoplastic agents
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P35/00—Antineoplastic agents
- A61P35/02—Antineoplastic agents specific for leukemia
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
- C12N7/00—Viruses; Bacteriophages; Compositions thereof; Preparation or purification thereof
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
- C12N9/00—Enzymes; Proenzymes; Compositions thereof; Processes for preparing, activating, inhibiting, separating or purifying enzymes
- C12N9/10—Transferases (2.)
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
- C12N9/00—Enzymes; Proenzymes; Compositions thereof; Processes for preparing, activating, inhibiting, separating or purifying enzymes
- C12N9/10—Transferases (2.)
- C12N9/1048—Glycosyltransferases (2.4)
- C12N9/1051—Hexosyltransferases (2.4.1)
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12Y—ENZYMES
- C12Y204/00—Glycosyltransferases (2.4)
- C12Y204/01—Hexosyltransferases (2.4.1)
- C12Y204/01057—Phosphatidylinositol alpha-mannosyltransferase (2.4.1.57)
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12Y—ENZYMES
- C12Y204/00—Glycosyltransferases (2.4)
- C12Y204/01—Hexosyltransferases (2.4.1)
- C12Y204/01087—N-Acetyllactosaminide 3-alpha-galactosyltransferase (2.4.1.87), i.e. alpha-1,3-galactosyltransferase
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
- C12N2710/00—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA dsDNA viruses
- C12N2710/00011—Details
- C12N2710/10011—Adenoviridae
- C12N2710/10311—Mastadenovirus, e.g. human or simian adenoviruses
- C12N2710/10332—Use of virus as therapeutic agent, other than vaccine, e.g. as cytolytic agent
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
- C12N2710/00—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA dsDNA viruses
- C12N2710/00011—Details
- C12N2710/10011—Adenoviridae
- C12N2710/10311—Mastadenovirus, e.g. human or simian adenoviruses
- C12N2710/10341—Use of virus, viral particle or viral elements as a vector
- C12N2710/10343—Use of virus, viral particle or viral elements as a vector viral genome or elements thereof as genetic vector
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
- C12N2710/00—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA dsDNA viruses
- C12N2710/00011—Details
- C12N2710/10011—Adenoviridae
- C12N2710/10311—Mastadenovirus, e.g. human or simian adenoviruses
- C12N2710/10371—Demonstrated in vivo effect
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
- C12N2710/00—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA dsDNA viruses
- C12N2710/00011—Details
- C12N2710/16011—Herpesviridae
- C12N2710/16611—Simplexvirus, e.g. human herpesvirus 1, 2
- C12N2710/16632—Use of virus as therapeutic agent, other than vaccine, e.g. as cytolytic agent
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
- C12N2710/00—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA dsDNA viruses
- C12N2710/00011—Details
- C12N2710/16011—Herpesviridae
- C12N2710/16611—Simplexvirus, e.g. human herpesvirus 1, 2
- C12N2710/16641—Use of virus, viral particle or viral elements as a vector
- C12N2710/16643—Use of virus, viral particle or viral elements as a vector viral genome or elements thereof as genetic vector
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
- C12N2710/00—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA dsDNA viruses
- C12N2710/00011—Details
- C12N2710/16011—Herpesviridae
- C12N2710/16611—Simplexvirus, e.g. human herpesvirus 1, 2
- C12N2710/16671—Demonstrated in vivo effect
Landscapes
- Health & Medical Sciences (AREA)
- Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
- Chemical & Material Sciences (AREA)
- General Health & Medical Sciences (AREA)
- Medicinal Chemistry (AREA)
- Organic Chemistry (AREA)
- Engineering & Computer Science (AREA)
- Bioinformatics & Cheminformatics (AREA)
- Pharmacology & Pharmacy (AREA)
- Public Health (AREA)
- Veterinary Medicine (AREA)
- Animal Behavior & Ethology (AREA)
- Zoology (AREA)
- Wood Science & Technology (AREA)
- Genetics & Genomics (AREA)
- Epidemiology (AREA)
- Virology (AREA)
- Microbiology (AREA)
- Biochemistry (AREA)
- General Engineering & Computer Science (AREA)
- Biomedical Technology (AREA)
- Biotechnology (AREA)
- Immunology (AREA)
- Mycology (AREA)
- Chemical Kinetics & Catalysis (AREA)
- Nuclear Medicine, Radiotherapy & Molecular Imaging (AREA)
- General Chemical & Material Sciences (AREA)
- Oncology (AREA)
- Molecular Biology (AREA)
- Proteomics, Peptides & Aminoacids (AREA)
- Gastroenterology & Hepatology (AREA)
- Hematology (AREA)
- Gynecology & Obstetrics (AREA)
- Nutrition Science (AREA)
- Physiology (AREA)
- Dermatology (AREA)
- Otolaryngology (AREA)
- Reproductive Health (AREA)
- Urology & Nephrology (AREA)
- Medicines Containing Material From Animals Or Micro-Organisms (AREA)
Description
本発明は、癌を治療するための組成物及び方法に関する。より具体的には、本発明は、
抗腫瘍免疫をもたらすために、腫瘍細胞を特異的に溶解し、かつ腫瘍細胞及び細胞細片を
抗原提示細胞に能動的にターゲティングさせる、癌を有する対象への投与のための操作さ
れた腫瘍溶解性ウイルスの組成物に関する。
免疫系が、腫瘍細胞を、破壊されるべき細胞として検出し損なうことから、癌患者にお
いて腫瘍が発生する可能性がある。腫瘍細胞は、大部分の癌患者において、自己腫瘍抗原
を発現する。「新生抗原」とも呼ばれるこれらの自己腫瘍抗原は、防御的な抗腫瘍免疫応
答を誘発する可能性がある。抗腫瘍免疫応答の発達を誘導するために、腫瘍細胞又は腫瘍
細胞膜は、抗原提示細胞によって内在化される必要がある。しかし、多くの癌患者におけ
る免疫系は、腫瘍の「密かな」初期発生に伴う腫瘍抗原に対して、「無知」を呈し、その
結果、腫瘍は、抗原提示細胞には事実上「不可視」である(Pardollの文献, 2000; Clin I
mmunol. 95:S44-49、及びDunnらの文献, 2002; Nat Immunol; 3: 991-8)。
的であり、免疫細胞アネルギー及び細胞死を能動的に誘導する可能性がある(Malmbergの
文献、Cancer Immunol Immunother., 53: 879-92; Lugadeらの文献; J Immunol. 2005; 1
74: 7516-23(2004); Schreiberらの文献、Science(New York、N.Y.), 331(6024), 1565-7
0(2011))。腫瘍病変の有効な治療は、2つの要素を必要とする:1.目視で又は画像化技術
によって検出するのに十分に大きい病変の破壊、及び2.腫瘍抗原に対する防御的な全身性
の抗腫瘍免疫応答の誘導。こうした免疫応答は、治療されないあらゆる病変(例えば、治
療のために接触することも手術によって除去することもできないもの)を破壊し、目視で
検出することができない又は画像化によって検出可能ではない、微小転移の免疫介在性の
検出、退縮、及び/又は破壊をもたらすこととなる。しばしば、腫瘍のサイズによって、
循環性の抗腫瘍免疫応答の有効性が、時間的に遅らせられる。腫瘍のサイズを縮小させる
ために、能動的抗腫瘍免疫を利用することに加えて、外科的切除、又は組成物の腫瘍内注
射などの他の手段が、しばしば必要である。
せるのに有用である、腫瘍溶解性ウイルスが開発されている(Liuらの文献、World J Gast
roenterol. 2013 Aug 21;19(31):5138-43)。有用なウイルスは、それがもはや病原性では
ない、すなわち非腫瘍細胞内で複製せずこれを殺さないように、ただし、腫瘍細胞には依
然として入り込みこれを殺すことができるように無力化される。ある例示的なウイルス、
単純ヘルペスウイルス(HSV)は、癌の腫瘍溶解性治療のために有用であると示唆されてい
る。培養下で又はインビボで活発に分裂する細胞において(例えば腫瘍において)、ウイル
スが複製するのを依然として可能にするが、正常組織における顕著な複製を防止する、HS
Vに対するいくつかの変異が特定されている。
ている。腫瘍溶解性HSVと、免疫調節性タンパク質、すなわち無力化されたウイルスゲノ
ムにおいてコードされる顆粒球マクロファージコロニー刺激因子(GM-CSF)をコードする遺
伝子の送達との併用は、特に、HSVに対する免疫応答を通常低下させる、ウイルス機能の
不活化後の、治療されるべき腫瘍に対する免疫刺激特性を有することが示されている。し
たがって、こうした使用では、腫瘍溶解性HSV変異体は、腫瘍の複製及び腫瘍溶解性破壊
が起こるであろう原発性又は続発性腫瘍に接種されるであろう。この手法に関する問題は
、GM-CSFが、抗原提示細胞を病変部に動員するために使用されるが、その後のこれらの細
胞による腫瘍物質の取り込みはランダムであることである。抗原提示細胞は、小さい粒子
性材料及び可溶性抗原の取り込みにかなり有効であるが、細胞又はより大きな細胞断片を
内在化するのには非効率的である。
み、それに続く腫瘍抗原のプロセシング、及び抗原提示細胞による流入領域リンパ節への
その運搬を必要とする。該リンパ節では、免疫原性の腫瘍抗原ペプチドが、それぞれ腫瘍
特異的なCD8+及びCD4+T細胞の活性化のためのクラスI又はクラスII MHC分子を伴う抗原提
示細胞によって提示される。これらのT細胞が、プロセシング及び提示された腫瘍抗原ペ
プチドによって活性化されて初めて、これらのリンパ球は、増殖し、リンパ節を離れ、体
内を循環して、関連腫瘍抗原を発現している転移性腫瘍細胞を探し、これを破壊する。し
たがって、有効な抗腫瘍免疫応答を誘発することは、腫瘍細胞の抗原提示細胞への有効か
つ能動的なターゲティングを必要とする。
応答のための腫瘍細胞、細胞細片、及び膜断片の能動的ターゲティングを通して、腫瘍サ
イズを非外科的に縮小させるための組成物及び方法である。必要とされるのはまた、腫瘍
微小環境内の、抗原提示細胞による腫瘍細胞及び細胞断片内在化の効率を上昇させるため
の様式である。
本発明の第1の態様によれば、ヘキソシルトランスフェラーゼ酵素をコードする核酸を
含む腫瘍溶解性ウイルスが提供される。
で定義する通りの腫瘍溶解性ウイルスを含む、医薬組成物が提供される。
i)少なくとも1つの癌細胞中で、本明細書で定義する通りの腫瘍溶解性ウイルスによって
送達される内因性酵素を発現させて、細胞膜糖鎖付加を改変するステップと;
ii)該腫瘍溶解性ウイルスの投与により、該少なくとも1つの癌細胞の溶解を誘導するステ
ップと
を含む前記方法が提供される。
を有する患者に、本明細書で定義する通りの治療有効量の腫瘍溶解性ウイルスを投与する
ことを含む、癌を治療する方法が提供される。
腫瘍病変に導入された腫瘍溶解性ウイルス(11の放射状突起を伴う黒丸)は、そのゲノムに
挿入されたα1,3-ガラクトシルトランスフェラーゼ遺伝子を含有する。(2)腫瘍細胞に感
染する腫瘍溶解性ウイルスは、α1,3-ガラクトシルトランスフェラーゼ遺伝子を腫瘍細胞
に導入する。この遺伝子は、感染した細胞内で転写及び翻訳され、α1,3-ガラクトシルト
ランスフェラーゼ(α1,3GT)酵素の産生がもたらされる。この酵素は、細胞表面糖タンパ
ク質、糖脂質、及びプロテオグリカン上でα-galエピトープを合成する。天然の抗Gal抗
体の、これらのα-galエピトープへの結合は、補体系を活性化し、したがって、補体切断
ペプチドの形態の走化性因子を産生し、これが、抗原提示細胞を、治療される腫瘍病変に
動員する。(3)腫瘍細胞は、腫瘍溶解性ウイルスによって、また、細胞膜上のα-galエピ
トープに結合される抗Galによって、補体依存性細胞傷害性によって及び抗体依存性細胞
性細胞傷害性(ADCC)機構によって、溶解される。抗Gal抗体(これは、α-galエピトープに
結合される)で被覆された死細胞及び断片化された細胞膜は、細胞又は細胞膜を被覆して
いる抗Gal抗体のFc部分と、APC上のFcγ受容体との間の相互作用を介して、抗原提示細胞
(APC)によって内在化される。この取り込みの結果として内在化されたTAAは、APCによっ
てプロセシングされ、次いで、このTAAペプチドは、MHC分子を伴うAPC細胞膜上に提示さ
れる。APCは、流入領域リンパ節に移動し、流入領域リンパ節では、提示されたTAAペプチ
ドが、腫瘍特異的なT細胞のT細胞受容体と結合する。この相互作用の結果として、これら
のT細胞が活性化される。活性化された腫瘍特異的なT細胞は、循環し、転移性腫瘍細胞を
検出し、これを破壊するために、増殖してリンパ節を離れる。
本発明の第1の態様によれば、ヘキソシルトランスフェラーゼ酵素をコードする核酸を
含む腫瘍溶解性ウイルスが提供される。
ティング、及び抗原提示細胞(APC)の腫瘍部位への動員と組み合わせるための組成物及び
方法に関する。α1,3-ガラクトシルトランスフェラーゼなどのヘキソシルトランスフェラ
ーゼを発現する操作された腫瘍溶解性ウイルスは、感染した細胞の糖鎖付加を、ウイルス
誘導性の溶解前に細胞膜上のα-galエピトープを発現するように改変することとなる。続
いて、腫瘍細胞が、ウイルスによって溶解されると、細胞膜断片は、α-galエピトープと
結合する天然の抗Gal抗体によってオプソニン化されて免疫複合体を形成することとなる
。抗Gal抗体は、抗Gal抗体のFc領域とAPC上のFcγ受容体(FcγR)との間の相互作用を通し
て、APCによる腫瘍細胞断片の食作用を増強することとなる。同様に、ウイルス感染後に
α-galエピトープを発現する無傷腫瘍細胞も、抗Galによってオプソニン化され、FcγRを
介してAPCによって取り込まれることとなる。FcγRを介する抗原の取り込みは、APCの活
性化及び成熟をもたらし、このAPCは腫瘍抗原をMHC分子上の提示のためにプロセシングし
、流入領域リンパ節に移動し、流入領域リンパ節で腫瘍抗原をT細胞に提示する。このプ
ロセスによって、患者自らの腫瘍抗原に対する防御的免疫応答がもたらされる。
の抗Gal抗体とのその後の複合体形成は、補体の活性化を引き起こすこととなる。補体の
活性化は、APCを腫瘍に動員する走化性ペプチドの放出;補体C3b分子を伴う無傷腫瘍細胞
及び腫瘍細胞膜断片のオプソニン化; 無傷腫瘍細胞の補体介在性の溶解をもたらす。補体
C3b分子を伴うオプソニン化された無傷腫瘍細胞及び腫瘍細胞断片は、C3bと、APC上の補
体受容体との間の相互作用を介して、APCによって結合及び内在化される。
体を伴う腫瘍細胞及び細胞断片のオプソニン化、及び補体のその後の活性化、及び免疫複
合体(これは、APCによって貪食される)の形成は、防御的な抗腫瘍免疫応答をもたらす。
したがって、ウイルス誘導性の腫瘍溶解と免疫活性化との組み合わせによって腫瘍塊を破
壊することは、非複製α1,3-ガラクトシルトランスフェラーゼ発現ウイルス、又は複製可
能な非α1,3-ガラクトシルトランスフェラーゼ発現腫瘍溶解性ウイルス単独の別個の投与
よりも改良されている。
ころ治療可能ではないと考えられているこうした種類の治療が可能である。
ゼ遺伝子をコードする異種核酸配列を送達するように改変されている腫瘍溶解性ウイルス
を使用する組成物及び方法を対象とする。前提は、該ウイルスが、腫瘍細胞に特異的に感
染し、その後、機能性のα1,3-ガラクトシルトランスフェラーゼ酵素を生成及び発現する
ことである。続いて、このα1,3-ガラクトシルトランスフェラーゼ酵素は、腫瘍細胞の表
面上にα-galエピトープを産生する及び組み込む。腫瘍細胞膜上のα-galエピトープの組
み込みは、腫瘍溶解性ウイルスによって誘導される細胞溶解前に起こり、その結果、その
後の細胞膜細片は、α-galエピトープで標識されている。いかなる特定の機構に拘泥され
ることも望まないが、天然の抗Gal抗体による、α-gal標識された腫瘍細胞断片の結合は
、(大抵の抗原/抗体相互作用がするように)補体系を活性化し、治療される腫瘍にAPCを動
員する補体切断走化性因子をもたらすと考えられる。α-galエピトープを発現する腫瘍細
胞及び腫瘍細胞膜断片は、抗Galによってオプソニン化され、腫瘍に動員されるAPCによる
食作用のために能動的にターゲティングされる。本明細書に記載する手法は、GM-CSFを発
現させる、以前の腫瘍溶解性ウイルス手法(ここでは、APCは、粒子性材料の最小限の食作
用をもつ飲作用により、その近くにある可溶性分子をランダムに内在化する)とは機構的
に異なると考えられる。本発明の手法では、腫瘍細胞断片又は無傷腫瘍細胞が、α-galエ
ピトープを発現し、続いて抗Gal抗体と結合するので、腫瘍細胞膜は、APCによって、より
効率的に貪食される。腫瘍細胞断片/無傷腫瘍細胞を被覆する抗Gal抗体のFc部分と、APC
上のFcγRとの間の相互作用は、APCを刺激して抗原を内在化、プロセシング、及びT細胞
に提示させる。さらに、補体の活性化、及び補体タンパク質C3bによる腫瘍細胞断片及び
無傷腫瘍細胞のその後のオプソニン化は、補体受容体を有するAPCが、腫瘍抗原を効率的
に内在化、プロセシング、及びT細胞に提示できるようにする。
面糖鎖付加を改変して、APCによる取り込みのために細胞膜断片及び無傷細胞をターゲテ
ィングしようとすることを試みなかったであろうから、経験にそぐわないものである。
記載されているそれほど効率的でない方法と比較して防御的な抗腫瘍免疫応答を誘導する
、APC動員及びAPCによる能動的取り込みのために腫瘍細胞膜断片を標識するための方法を
提供する。いかなる特定の機構によっても制限されるべきではないが、主張する組成物及
び方法が、その機構によって治療作用を有すると考えられる、ある可能な機構を示す模式
図を、図1及び2に提供する。
機化学、生化学、分子生物学、薬理学などの技術を用いることとなる。こうした技術は、
文献において十分に説明されている。
らかに決定付けられない限り、単数形「a」、「an」、及び「the」には、複数の指示物が
含まれることに留意しなければならない。本明細書では、また、後続する特許請求の範囲
では、いくつかの用語について言及するつもりであり、これらの用語は、そうではないと
いう意図が明らかでない限り、以下の意味を有するように定義されるものとする。
の定義が使用されるべきである。
態様では、酵素は、α1,3-ガラクトシルトランスフェラーゼ酵素である。
本明細書で有用な組成物は、腫瘍溶解性ウイルスと、ガラクトシルトランスフェラーゼ
をコードする核酸配列と、任意に、投与のために有用な医薬として許容し得る担体とを含
む。したがって、本発明のさらなる態様によれば、医薬として許容し得る担体と組み合わ
せて本明細書で定義する通りの腫瘍溶解性ウイルスを含む医薬組成物が提供される。
一実施態様では、ウイルスは、腫瘍溶解性となるように操作される。代替実施態様では
、ウイルスは、天然の状態で腫瘍溶解性である。
メインを含む。
を溶解する。
である。こうしたウイルスは、癌細胞でのみ複製し、これを殺す。これらのウイルスは、
さらに、追加的な抗腫瘍特性を有するタンパク質をコードする異種遺伝子(1又は複数)を
コードすることができる。用語「腫瘍溶解性ウイルス」は、癌細胞に感染し/入り込み、
溶解する、あらゆるウイルスを含むことが意図される。理想的な腫瘍溶解性ウイルスは、
非腫瘍性組織の破壊を最小限にしながら直接の細胞溶解によって、患者の臨床的に意義の
ある割合の癌細胞を効率的に殺す。
染しない)、又はヒトにおいて軽度の疾患しか引き起こさない(例えば、アデノウイルスは
、インフルエンザ様症状を引き起こす)ならば、(安全上の観点から)好ましい。この理由
から、承認されたワクチンにおいて成功裏に使用されており、かつ、何千又は何百万もの
人々に投与されているウイルス(例えば天然痘ワクチン)も好ましい。ウイルスが、ヒトに
おいて病原性であり、かつ重大な疾患と関連しているならば(例えば、いくつかのヘルペ
スウイルス株に関連する神経毒性)、ウイルスゲノム内に複数の欠失又は変異を入れ、こ
れを癌細胞に特異的にし、また、内因性ウイルスでの単一の遺伝子組換え事象が十分に病
原性の株を引き起こすリスクを低下させることが好ましい。標的化された腫瘍細胞侵入及
び複製の特異性が望まれる。さらに、患者に適用される場合、ウイルスは、安全かつ非病
原性であるべきである。多くの異なる種類のウイルスに由来する腫瘍溶解性ウイルスが、
Liuら(Liuらの文献、Nature Clinical Practice Oncology 4:(2) 101-117, 2007)によっ
て記載されている。これらの中では、限定はされないが、単純ヘルペスウイルス(HSV)、
ワクシニアウイルス(VV)、及びパラミクソウイルス、例えば麻疹ウイルス(MeV)、ニュー
カッスル病ウイルス(NDV)、又は水疱性口内炎ウイルス(VSV)のようなラブドウイルスなど
の、エンベロープウイルスが、最も知名度が高い。改変されていない野生型ウイルスを適
用すること以外に、遺伝子操作によって、腫瘍溶解性ウイルスの安全性及び有効性をさら
に向上させることができる。
の異種遺伝子を、注射された病変(1又は複数)内の癌細胞中で複製によってインビボで何
倍にも増幅させ、かつ癌細胞から放出できることである。これは、例えば、顆粒球マクロ
ファージ-コロニー刺激因子(GM-CSF)をコードする変異単純ヘルペスウイルス-1(HSV-1)ベ
クターの特徴を記載しているLiuら(Liuらの文献、2003)によって教示されている。まとめ
て、これらの癌療法は、「武装化された(armed)治療用ワクチン」と称されている(Bauzon
及びHermistonの文献、2014)。エンベロープタンパク質を操作することは、ウイルス感染
を腫瘍細胞に限定することができ、また、自殺遺伝子の挿入は、治療効果を増強すること
ができる(Nakamuraらの文献、Expert Opin. Bio. Ther. 4:(10): 1685-1692, 2004); Liu
らの文献、Nature Clinical Practice Oncology 4:(2) 101-117, 2007; Liuらの文献、Ge
ne Therapy, 10(4), 292-303, 2003)。
維持されている、十分に特徴付けられた実験室適応株から得ることができる。しかし、患
者におけるヒト腫瘍は、最適化された培養条件では、不死化された細胞株よりもゆっくり
と成長し、また、代謝及び細胞分裂の速度を制限する他の環境的及び発生的因子(大きい
腫瘍塊の中心に存在する可能性がある低酸素環境、不十分な栄養供給の結果など)を有す
る可能性がある。したがって、組織培養におけるその成長特性に基づくのではなく、イン
ビボ(インサイチュ)での最適成長のために、ウイルスを選択することが好ましい。例えば
、(患者から得られ、組織培養において短時間の増殖しか経ていない)臨床分離株JS1由来
のHSV-1株を使用して、癌患者の治療のための腫瘍溶解性ウイルスが産生されている(Liu
の文献、2003)。臨床分離株を選択することにおける重要な考慮事項は、臨床材料のスケ
ールアップ及び製造のために必要である最適条件を、臨床分離株がインビトロで増殖でき
るように特定できることである。インビボでの腫瘍におけるその成長を損なわずに組織培
養におけるウイルスの複製を改良する、ゲノムに対する変異が想定される。
ーを選択することに加えて、インビボで複製するその能力をさらに向上させる、ゲノムに
対する追加的な変異が想定される。例えば、臨床HSV-1株、JS1から、2つの遺伝子を欠失
させる(Liuの文献、2003)。第1の欠失、ICP34.5は、ウイルス複製を癌細胞に限定し;第2
の欠失、ICP47は、宿主のタンパク質、PKRのリン酸化をブロックするウイルスタンパク質
をコードするUS11の早期発現をもたらす。PKRは、ウイルス感染に対する自然免疫応答の
主要成分である-これは、リン酸化されると、感染した細胞におけるタンパク質翻訳を停
止させ、ウイルス複製を制限する。したがって、変異体JS1 ICP34.5-/ICP47-株のインビ
ボ複製は、野生型(非変異)株と比較して増強される。
クシニアウイルス、ヘルペスウイルス、レオウイルス、麻疹ウイルス、又はニューカッス
ル病ウイルスである。
イルス、麻疹ウイルス、ニューカッスル病ウイルス、自律性パルボウイルス、水疱性口内
炎ウイルス(VSV)、又はレオウイルスなどの、ヒト又は非ヒト起源のRNA又はDNAベースの
ウイルスである。
法における使用のために、本明細書に記載する通りに改変することができる。種々の実施
態様では、腫瘍溶解性ウイルスは、ヘルペスウイルス科、ポックスウイルス科、ラブドウ
イルス科、又はパラミクソウイルス科のウイルスに由来する、好ましくはパラミクソウイ
ルス科、モルビリウイルス属に由来する、エンベロープウイルスである。
ルス、ヘルペスウイルス、ワクシニアウイルス)を与えるのに対して、他のものは、天然
の状態で腫瘍特異的なウイルス(レオウイルス、ニューカッスル病ウイルス、自律性パル
ボウイルス、ある種の麻疹株、及び水疱性口内炎ウイルス(VSV))である。
一実施態様では、腫瘍溶解性ウイルスは、アデノウイルスである。α1,3-ガラクトシル
トランスフェラーゼ含有アデノウイルスを使用して達成された肯定的結果を示すデータを
、本明細書の実施例1~3及び8、並びに図4~9に提示する。ヒトアデノウイルスは、約30
~38kBの、非エンベロープ型の二本鎖DNAウイルスである。アデノウイルスの主要な特徴
は、重要な宿主調節タンパク質を阻害する、いくつかのウイルスタンパク質をコードする
ことである。これらの宿主調節タンパク質のいくつか(p53など)は、多くの癌では欠損し
ている。したがって、該ウイルス遺伝子の欠失は、変異体ウイルスを、調節性の宿主タン
パク質が欠損した癌における複製に対して選択的にする。
1520中)の変異は、p53機能が制限された又はp53機能を有しない腫瘍に対して選択的であ
る。p53機能は、大抵のヒト癌では、遺伝子変異、p53結合阻害剤(例えばmdm2、ヒトパピ
ローマウイルスE6)の過剰発現、及びp14ARFによって調節されるp53阻害経路の喪失を含め
た、様々な機構を通して失われる。
れらの変異体は、RB経路異常を伴う腫瘍に対する使用について(例えばウイルスdl922/947
において)評価されている。
異的なプロモーターを使用して、ウイルスE1a遺伝子産物の発現を制御することである。
例えば、これは、E1a遺伝子の上流に前立腺特異的な抗原(PSA)プロモーター/エンハンサ
ーを導入するためのゲノムの遺伝子改変によって、前立腺癌を標的にする腫瘍溶解性アデ
ノウイルスに適用されている。
onally replicating)アデノウイルス(CRAd)である。CRAdは、癌細胞内で選択的に複製し
、その溶解及び死を引き起こすことが実証されている(Fueyoらの文献、2000; Kannoらの
文献、2012; Bramanteらの文献、2015)。CRAdは、Ad5/3キメラウイルスを作り出すために
、アデノウイルス3(Ad3)のファイバーノブを発現するように遺伝子改変されているアデノ
ウイルス5(Ad5)を使用して産生されている(Kanervaらの文献、2003; Kimらの文献、2013)
。
ルスは、Ad5によって結合されるコクサッキー-アデノウイルス受容体(CAR)ではなく、Ad3
受容体であるCD46を使用して細胞と結合し、中に入ることが可能である。多くの腫瘍は、
CARの発現にばらつきがあるのに対して、すべての有核細胞は、CD46を発現するので、こ
れは、好都合である(Ulasovらの文献、2006)。ウイルスは、ウイルス前初期(immediately
early)(E1a)遺伝子の定常領域2(CR2)内に24塩基対欠失(Δ24)を導入することによって条
件付き複製型にされる(Kanervaらの文献、2003)。
定常領域2(CR2)内に24塩基対欠失(Δ24)をさらに含み、本明細書ではAd5/3-Δ24 CRAdと
して知られる。この変異は、細胞内のS期の誘導に関する網膜芽細胞腫(Rb)タンパク質と
結合することができない、ウイルスE1aタンパク質をもたらす(Fueyoらの文献、2000)。し
たがって、このウイルスは、非分裂正常細胞では複製することができないが、不活性なRb
/p16経路、すなわち、すべての癌に共有されることが示されている表現型を有する細胞で
は効率的に複製する(Sherrの文献、1996)。キメラの条件付き複製型Ad5/3-Δ24 CRAdは、
導入遺伝子でのアデノウイルス初期領域(E3)遺伝子の置換によってさらに改変することが
でき、これは、複製中に導入遺伝子を特異的に産生するAd5/3-Δ24 CRAdをもたらす(Kosk
iらの文献、2010; Kanervaらの文献、2013; Bramanteらの文献、2015)。キメラの条件付
き複製型Ad5/3-Δ24 CRAdは、α1,3-ガラクトシルトランスフェラーゼ導入遺伝子でのア
デノウイルス初期領域(E3)遺伝子の置換によってさらに改変されており、これは、複製中
にα1,3-ガラクトシルトランスフェラーゼを特異的に産生するAd5/3-Δ24 CRAdをもたら
す。したがって、一実施態様では、Ad5/3-Δ24 CRAdは、本明細書ではCRAd-αGTとして知
られるα1,3-ガラクトシルトランスフェラーゼ導入遺伝子をさらに含む。データを、本明
細書に、実施例8及び図6~9において提示し、これは、CRAd-αGTに感染したヒト肺癌及び
メラノーマ細胞が、細胞表面上にα-galエピトープを発現し、ウイルス誘導性の溶解の前
に抗Gal抗体によって結合されることを実証する。
一実施態様では、腫瘍溶解性ウイルスは、ヘルペスウイルスである。方法論を、本明細
書に、実施例4~7において提示し、これは、α-1,3ガラクトシルトランスフェラーゼ含有
ヘルペスウイルスを使用して、どのようにして肯定的結果を得ることができるのかを実証
する。ヘルペスウイルス(HSV)は、約152kbpのエンベロープ型二本鎖DNAウイルスであり、
神経及び粘膜細胞に対する天然の指向性を有する。HSVは、神経系及び他の場所における
遺伝子送達ベクターとしても、癌の腫瘍溶解性治療のための遺伝子送達ベクターとしても
有用であることが示唆されている。しかし、どちらの用途でも、ウイルスは、それがもは
や病原性ではないように、ただし、細胞には依然として入り込み所望の機能を果たすこと
ができるように、無力化されなければならない。したがって、HSVを使用した標的細胞へ
の非毒性の遺伝子送達については、大抵の場合、ウイルスからの前初期遺伝子発現が阻止
/最小限にされなければならないことが明らかになっている。治療効果を増強する遺伝子(
1又は複数)の送達も含むことができる癌の腫瘍溶解性治療については、培養下で又はイン
ビボで活発に分裂する細胞において(例えば腫瘍において)、ウイルスが複製するのを依然
として可能にするが、正常組織における顕著な複製を防止する、HSVに対するいくつかの
変異が特定されている。こうした変異には、ICP34.5、ICP6、及びチミジンキナーゼをコ
ードする遺伝子の破壊が含まれる。これらのうち、ICP34.5に対する変異、又は例えばICP
6の変異に加えてICP34.5に対する変異を伴うウイルスは、今までのところ、最も好都合な
安全プロフィールを示している。ICP34.5についてのみ欠失されたウイルスは、多くの腫
瘍細胞型においてインビトロで複製すること、また、マウスにおいて人為的に誘導した脳
腫瘍において、周囲の組織には危害を加えずに、選択的に複製することが示されている。
初期段階の臨床試験は、ヒトにおけるその安全性も示されている。こうしたウイルス及び
使用の例は、PCT公報WO 2001/053506、WO 98/004726、WO 98/051809、及びWO 99/060145
に記載されている。
性ウイルス株は、2001年1月2日に、受託番号01010209で欧州培養細胞保存機関(European
Collection of Cell Cultures)(ECACC)、CAMR, Sailsbury, Wiltshire SP4 0JG, United
Kingdomに寄託されたHSV1株JS 1である。このような腫瘍溶解性ウイルス株は、提供され
る方法における使用のためのガラクトシルトランスフェラーゼ酵素を発現させるために、
本明細書に記載する通りに改変することができる。
一実施態様では、腫瘍溶解性ウイルスはワクシニアウイルスである。ワクシニアウイル
スは、約200kBのエンベロープ型二本鎖DNAウイルスである。このウイルスは、細胞質にお
いて複製し、その感染粒子と共に、DNA複製及びその遺伝子の転写のために必要とされる
酵素をもたらす。ワクシニアウイルスは、これを優れた腫瘍溶解性ウイルスにする多くの
特質を有する。ワクシニアウイルスは、複数の外来遺伝子を収容する能力をもつ大きなゲ
ノムを有し、広い宿主範囲を有し、迅速に複製し、ウイルス変異体を作製するために容易
に組換えることができる。天然痘ワクチンとしてのワクシニアウイルスの使用を通した、
良好な安全記録が確立されている。
一実施態様では、ウイルスは、麻疹ウイルス(MeV)、又はエドモンストン(Edmonston)株
(MeVEdm)などのMeVのワクチン株である。MeVは、2種のエンベロープ糖タンパク質(融合タ
ンパク質(F)及びヘマグルチニンタンパク質(H))を利用して、標的細胞に入る。タンパク
質Fが、I型膜貫通タンパク質であるのに対し、タンパク質Hは、II型膜貫通ドメインであ
る、すなわちそのアミノ末端が、細胞質領域に直接的に曝露されている。したがって、ど
ちらのタンパク質も、膜貫通領域と細胞質領域を含む。Fタンパク質の、ある公知の機能
は、ウイルス膜と宿主細胞の細胞膜との融合を仲介することである。Hタンパク質に起因
する機能としては、標的膜上の受容体を認識すること、及び、Fタンパク質を、その膜融
合作用において補助することが挙げられる。細胞表面膜での直接的かつ非常に効率的な膜
融合が、麻疹ウイルス及びモルビリウイルスの特有の性質であり、それゆえに、エンドサ
イトーシスされるようになるとエンドサイトーシス時のpH低下時にのみ融合することとな
る、多くの他のエンベロープウイルスと区別される。どちらのタンパク質も、ウイルス表
面上で、密集したスパイク、H四量体、及びF三量体の規則的配列で組織化されている(Rus
sellらの文献、Virology 199:160-168, 1994)。
わち、補体活性化因子の調節因子であることが公知のタンパク質、CD46を使用する(Gerli
erらの文献、Trends Microbiol. 3:338-345, 1995)。CD46は、すべてのヒト有核細胞上で
発現される。しかし、麻疹ウイルスの大抵の臨床分離株は、CD46を受容体として効率的に
使用することができない。ヒトSLAM(シグナル伝達リンパ球活性化分子; CDw150としても
公知である)は、いくつかのT及びB細胞上で発現される近年発見され、エドモンストン株
を含めたMeVに対する細胞受容体として働くことも判明している、膜糖タンパク質である(
Tatsuoらの文献、Nature 406(6798):893-7, 2000)。MeV H及びFタンパク質の厳密な生体
機能及び相互作用は、大部分は不明確なままである。
スフェラーゼを含むように改変することができる、癌のための臨床開発におけるいくつか
の腫瘍溶解性ウイルスが存在する。こうした腫瘍溶解性ウイルスの例としては、Ad-mda7(
p53 社)、Ad-p53(p53 社)、CG-0070(Cold Genesys社)、DNX-2401(DNAtrix社)、DWP-418(D
aewoong Pharmaceutical社)、huIL-12を発現するHSV(アラバマ大学バーミングハム校(Uni
v. Alabama Birmingham))、G-47 Delta(東京大学医学部付属病院)、ガンシクロビル/ADV-
TK(Shenzhen Tiandakang)、GLONC-1(Genelux社)、GLONC-2(Genelux社)、GLONC-3(Genelux
社)、HF-10(宝ホールディングス株式会社)、HSV-1716(Virttu Biologics社)、JX-929(Jen
nerex Bioterapeutics社)、KH-901(Chengdu Kanghong Pharmaceuticals社)、MV-NISワク
チン(メイヨー・クリニック(Mayo Clinic))、NDV-HUJ腫瘍溶解性(ハダサー・メディカル(
Hadassah medical))、OBP-301(オンコリスバイオファーマ(Oncolys BioPharma)社)、腫瘍
溶解性AdV(エラスムス医療センター(Erasmus MC))、ONCOS-102(Oncos Therapeutics社)、
ORCA-010(Orca Therapeutics社)、パルボウイルスH-1(Oryx社)、ペキサスチモジンデバシ
レプベク(pexastimogene devacirepvec)(Jennerex Bioterapeutics社)、PV-701(Wellstat
Biologics)、タリモジーン・ラハーパレプベック(talimogene laherparepvec)(Amgen社)
、TG-1042(Ascend Biopharmaceuticals社)、VCN-01(VCN Biosciences社)、及びVirRx-007
(p53 社)が挙げられる。
がって、こうしたウイルスは、複製可能である。好ましくは、こうしたウイルスは、腫瘍
細胞において選択的に複製可能である。これは、こうしたウイルスが、腫瘍細胞では複製
するが非腫瘍細胞では複製しない、又は、こうしたウイルスが、腫瘍細胞では、非腫瘍細
胞におけるよりも効率的に複製することを意味する。ウイルスが複製することが可能な細
胞は、許容細胞である。
する試験によって実施し、また、所望される場合本明細書に言及する統計技術によって分
析することができる。
くは複製し、腫瘍細胞を殺傷し、又は組織内の細胞間に広がる能力を有することが好まし
い。好ましくは、この能力は、統計的に有意な、より優れた能力である。例えば、本発明
によるウイルスは、試験される性質に関して、改変されていない親株の、最大1.1倍、1.2
倍、1.5倍、2倍、5倍、10倍、20倍、50倍、又は100倍の能力を有することができる。
ことができる。例えば、ウイルスが腫瘍細胞に感染する能力は、所与の割合の細胞、例え
ば50%又は80%の細胞を感染させるのに必要とされるウイルスの用量を測定することによっ
て定量化することができる。腫瘍細胞において複製する能力は、実施例において実施され
るものなどの成長測定によって、例えば、6、12、24、36、48、又は72時間又はそれ以上
の期間にわたって、細胞におけるウイルス成長を測定することによって、測定することが
できる。同様に、ウイルスが腫瘍細胞を溶解する能力は、所与の用量のウイルスと共に、
6、12、24、36、48、又は72時間又はそれ以上の期間にわたってインキュベートされた培
養株における(死細胞に対する)生細胞の割合を測定することによって定量化することがで
きる。
本発明のウイルスは、異種核酸配列を保持するように改変することができる。一実施態
様では、異種核酸は、ヘキソシルトランスフェラーゼをコードする。一実施態様では、核
酸配列は、ガラクトシルトランスフェラーゼをコードする。ある特定の実施態様では、核
酸配列は、α1,3-ガラクトシルトランスフェラーゼをコードする。用語「α1,3-ガラクト
シルトランスフェラーゼ」、「α-1,3-ガラクトシルトランスフェラーゼ」、「α1,3GT」
、「α1,3GT」、「糖タンパク質α-ガラクトシルトランスフェラーゼ1」、及び「GGTA1」
とは、本明細書で使用する場合、α-galエピトープを合成する能力があるあらゆる酵素を
いう。この酵素は、ヒト、類人猿、及び旧世界ザルを除く大抵の哺乳類において産生され
る。この酵素によって産生される炭水化物構造は、ヒトにおいて免疫原性であり、大抵の
健康な人々は、「抗Gal」抗体とも称される、高い力価の天然の抗α-gal抗体を有する。
いくつかの実施態様では、用語「α1,3GT」とは、マウスα1,3GT(例えば、GenBank受託番
号NM_010283のハツカネズミ-ヌクレオチド460から1680)、及びその遺伝子産物、並びにそ
の機能性の哺乳類対応物(例えば、他の新世界ザル、原猿類、及び非霊長類哺乳類(ただし
、旧世界ザル、類人猿、及びヒトではない)をいう。いくつかの実施態様では、用語「α1
,3GT」は、共通のマーモセット遺伝子(例えば、マーモセット(Callithrix jacchus)-GenB
ank受託番号S71333)、ウシα1,3GT(例えば、ウシ(Bos taurus)-GenBank受託番号NM_17751
1)、ネコα1,3GT(例えば、ネコ(Felis catus)-GenBank受託番号NM_001009308)、ヒツジα
1,3GT(例えば、ヒツジ(Ovis aries)-GenBank受託番号NM_001009764)、ラットα1,3GT(例
えば、ラット(Rattus norvegicus)-GenBank受託番号NM_145674)、及びブタα1,3GT(例え
ば、イノシシ(Sus scrofa)-GenBank受託番号NM_213810)をいう。本発明のいくつかの実施
態様は、例えば1~5%よりも少ない残基において野生型の哺乳類α1,3GT配列と異なる、哺
乳類α1,3GTの機能性バリアントを含む。具体的には、α1,3GTバリアントとしては、限定
はされないが、天然に存在する機能性の哺乳類α1,3GTバリアント、並びに、組換え又は
他の手段(例えば、好ましくは機能性の哺乳類α1,3GT相同体からの残基に相当する、1、2
、3、4、若しくは5アミノ酸の置換、欠失、又は付加)によってもたらされる天然に存在し
ないバリアントが挙げられ、本発明の組成物及び方法における用途が見出されることが期
待される。他の実施態様では、触媒活性を保持する哺乳類α1,3GTの切断型(例えば、90ア
ミノ酸N末端ステム領域を欠くGGTA1)が用いられる。しかし、この酵素のC末端からの3ア
ミノ酸の欠失は、その完全な不活化をもたらす(Henion, T.R.、B.A. Macher、F. Anaraki
、及びU. Galiliらの文献、Glycobiology 4:193-201, 1994)。
細胞移動のために使用されている(Deriyらの文献、Glycobiology, 12(2), 135-44 2002;
Deriyらの文献、Cancer Gene Therapy, 12(6)、528-39, 2005)。α1,3-ガラクトシルトラ
ンスフェラーゼは、本明細書に記載する溶解/免疫化の組み合わせ方法のために腫瘍溶解
性ウイルスによって発現されるように操作されたことがない。
発現を可能にする制御配列に、作動可能に連結されることが好ましい。したがって、本発
明のウイルスを使用して、その発現の場となるインビボの細胞に異種核酸配列を送達する
ことができる。
を前記腫瘍溶解性ウイルスのゲノムに導入するステップを含む、本明細書で定義する通り
の腫瘍溶解性ウイルスを調製する方法が提供される。
クターを用いるHSV株の相同組換えなどの、あらゆる適切な技術によって、ウイルスゲノ
ムに挿入することができる。
配列を含む適切なプラスミドベクターに導入することができる。したがって、一実施態様
では、前記導入ステップは、クローニングを含む。異種核酸配列は、腫瘍溶解特性が引き
続き保持されるという条件で、ウイルスゲノムのあらゆる位置に挿入することができる。
異種核酸配列は、ウイルスゲノム内の複数の部位に挿入することができる。例えば、2か
ら5遺伝子を、ゲノムに挿入することができる。
、作動可能に連結されることが好ましい。用語「作動可能に連結される」とは、並置(こ
こでは、記載された構成要素が、その意図される方式で作用することを可能にする関係で
ある)をいう。コード配列に「作動可能に連結される」制御配列は、制御配列と適合性の
ある条件下でコード配列の発現が実現されるような方式で連結される。
シグナルを含む。プロモーターは、哺乳類、好ましくはヒト腫瘍細胞において機能性であ
るプロモーターから選択される。プロモーターは、真核生物遺伝子のプロモーター配列か
ら得ることができる。例えば、プロモーターは、異種遺伝子の発現が起こることとなる細
胞、好ましくは哺乳類、好ましくはヒト腫瘍細胞のゲノムから得ることができる。真核生
物プロモーターについては、プロモーターは、組織非特異的(ubiquitous)方式で(β-アク
チン、チューブリンのプロモーターなど)、或いは腫瘍特異的な方式で作用するプロモー
ターであり得る。特定の刺激に応答するプロモーター、例えばステロイドホルモン受容体
と結合するプロモーターも存在し得る。ウイルスプロモーター、例えば、モロニーマウス
白血病ウイルス末端反復配列(MMLV LTR)プロモーター又は他のレトロウイルスプロモータ
ー、ヒト若しくはマウスサイトメガロウイルス(CMV)IEプロモーター、又はヘルペスウイ
ル遺伝子のプロモーター(潜伏関連転写物の発現を駆動するものを含む)も使用することが
できる。
の通例のクローニング技術を使用して作製することができる(例えば、Sambrookらの文献
、1989、「分子クローニング--実験マニュアル(Molecular Cloning -- A laboratory man
ual)」; Cold Spring Harbor Pressを参照のこと)。
プロモーターが、腫瘍細胞の寿命内に異種核酸配列の発現のレベルを調節できるように
誘導可能であることも好都合である。「誘導可能な」は、プロモーターを使用して得られ
る発現のレベルを、調節できることを意味する。例えば、本発明のウイルスは、強力なプ
ロモーター(例えばCMV IEプロモーター)の制御下でtetリプレッサー/VP16転写活性化因子
-融合タンパク質をコードする異種核酸配列を、さらに含むことができ、かつ、この異種
核酸配列は、以前に報告されているtetリプレッサーVP 16転写活性化因子-融合タンパク
質に応答するプロモーターの制御下であり得る(Gossen及びBujardの文献、1992、Gossen
らの文献、1995)。したがって、この例では、異種核酸配列の発現は、テトラサイクリン
の有無に依存するであろう。
発明のウイルスは、2以上の異種核酸配列、例えば2から3、4、又は5つの異種核酸配列を
含むことができる。2以上の遺伝子及び随伴する制御配列が、ある特定の腫瘍溶解性ウイ
ルス株のウイルスゲノム内の単一の部位に又は複数の部位に導入される可能性がある。或
いは、それぞれが異種核酸配列の発現を駆動する、互いに離れている逆方向で向かい合う
プロモーター対(同じ又は異なるプロモーター)を使用することができる。
共発現される。好ましくは、免疫調節性タンパク質は、ウイルスの抗腫瘍活性を増強する
こととなる。より好ましくは、該タンパク質は、GM-CSF若しくは別のサイトカイン、ケモ
カイン(例えばRANTES)、又は別の免疫調節性分子、例えばB7.1、B7.2、若しくはCD40Lで
ある。最も好ましくは、免疫調節性分子は、GM-CSFである。したがって、一実施態様では
、腫瘍溶解性ウイルスは、GM-CSFをコードする核酸配列を含む。免疫調節性遺伝子は、野
生型遺伝子の任意の対立遺伝子バリアントであってもよいし、変異体遺伝子であってもよ
い。免疫調節性遺伝子は、哺乳類、好ましくは齧歯類又は霊長類、より好ましくはヒトに
由来することとなる。
本発明の腫瘍溶解性ウイルスの医薬組成物は、1以上の生理的に許容し得る担体又は賦
形剤を使用する、あらゆる従来の方式で製剤化することができる。本発明の医薬組成物は
、全身、局所、又は局在型投与を含めた様々な様式の投与のために製剤化することができ
る。技術及び製剤は、例えば、レミントンの医薬科学(Remington's Pharmaceutical Scie
nces)、Meade Publishing Co., Easton, Pa.中で参照することができる。
、腫瘍内投与、皮下投与、経口投与、直腸内投与、膣内投与、鼻腔内投与、経粘膜投与、
又は経皮投与のために製剤化することができる。
内投与、皮下投与、経口投与、直腸内投与、膣内投与、鼻腔内投与、経粘膜投与、又は経
皮投与のために製剤化することができる。
用して、又は担体への、例えばナノ粒子、リポソーム、若しくは他の小胞へのウイルスの
封入によって、実施することができる。
とが好ましい。投与される実際の量、並びに投与の速度及び時間経過は、治療される腫瘍
の性質及び重症度に依存することとなる。治療の処方、例えば投薬量に関する決定などは
、一般開業医及び他の医師の責任の範囲内であり、一般的に、治療されるべき障害、個々
の患者の状態、送達の部位、投与の方法、及び開業医に公知の他の因子を考慮に入れる。
先に言及した技術及びプロトコルの例は、レミントンの医薬科学(Remington's Pharmaceu
tical Sciences), 20th Edition, 2000, pub. Lippincott, Williams & Wilkins中で参照
することができる。
有効な投薬量は、限定はされないが、約103、約104、約105、約106、約107、約108、又は
約109プラーク形成単位(pfu)であり得る。
しい。注射の目的では、本発明の医薬組成物は、溶液中に、好ましくは、ハンクス液又は
リンゲル液などの生理的に適合性のある緩衝液中に製剤化することができる。さらに、該
医薬組成物は、固体形態で製剤化し、使用の直前に再溶解又は懸濁させることができる。
該医薬組成物の凍結乾燥形態も、適切である。
ついては、浸透されるべき障壁に適した浸透剤が、製剤内に使用される。こうした浸透剤
は、当技術分野で一般に公知であり、例えば、経粘膜投与のためには、胆汁酸塩及びフシ
ジン酸誘導体が挙げられる。さらに、浸透を容易にするために、界面活性剤を使用するこ
とができる。経粘膜投与は、点鼻薬又は座剤を使用して行うことができる。局所投与につ
いては、本発明のベクター粒子を、当技術分野で一般に公知である通りの、軟膏、膏薬(s
alve)、ゲル、又はクリーム剤に製剤化することができる。治癒を加速するために、外傷
又は炎症を処置するために、洗浄液も局所的に使用することができる。
ために製剤化することができる。注射用の製剤は、単位剤形で、例えば、任意に保存剤が
添加されるアンプル又は複数回投与用容器で提示することができる。該医薬組成物はさら
に、懸濁剤、液剤、又は乳剤(油性又は水性ビヒクル中)として製剤化することができ、ま
た、懸濁剤、安定化剤、及び/又は分散剤を含めた他の薬剤を含有することができる。
含むキットを含む。例としては、送達装置は、スクイーズ可能スプレーボトル、定量噴霧
スプレーボトル、エアロゾルスプレー装置、噴霧器、ドライパウダー送達装置、自己推進
溶媒/粉末-分注装置、シリンジ、針、タンポン、又は投薬量計量容器であり得る。キット
は、本明細書に記載する通りの説明資料をさらに含むことができる。
本発明のウイルス組成物は、ヒト又は動物の体の癌治療の方法において使用することが
できる。特に、本発明のウイルスは、追加のプロドラッグ療法又は抗腫瘍免疫応答の刺激
を伴う又は伴わずに、癌の腫瘍溶解性治療において使用することができる。本発明のウイ
ルス組成物は、哺乳類における、好ましくはヒトにおける、あらゆる固形腫瘍の治療的処
置において使用することができる。
って、次のステップを含む前記方法が提供される:
i)少なくとも1つの癌細胞中で、本明細書で定義する通りの腫瘍溶解性ウイルスによって
送達される内因性酵素を発現させて、細胞膜糖鎖付加を改変するステップと;
ii)該腫瘍溶解性ウイルスの投与により、該少なくとも1つの癌細胞の溶解を誘導するステ
ップ。
て、癌を有する個体を治療することを目的とする。ここでは、ウイルス感染は、溶解前に
ヘキソシルトランスフェラーゼの発現を引き起こす。
するのに有効な量で投与される。
入される。
挿入される。
ーゲティングさせる。
るのに十分である。
細胞に対する有効な免疫応答を誘導するのに十分である。
分である。
十分である。
スフェラーゼ遺伝子を含有する遺伝子治療ベクターの注射によって実現することができる
。一実施態様では、本発明は、α1,3-ガラクトシルトランスフェラーゼ遺伝子を含有する
複製可能な腫瘍溶解性ウイルスの腫瘍内注射を含む、多発転移を伴うメラノーマ患者を治
療する方法を企図する。一実施態様では、ウイルス組成物の腫瘍内注射は、α-galエピト
ープを発現する形質導入された腫瘍細胞をもたらし、ここでは、これらの腫瘍細胞は、腫
瘍内炎症、その後の溶解を誘導する。腫瘍内炎症は、樹状細胞、マクロファージ、及びあ
る種のB細胞などの抗原提示細胞を動員する。感染した細胞は、本明細書に記載する操作
された複製可能なウイルス組成物によって溶解させることもできるし、あるいは補体依存
性細胞傷害(CDC)又は抗体依存性細胞介在性細胞傷害(ADCC)機構を介して、形質導入され
た細胞上のα-galエピトープに結合される天然の抗Gal抗体によって破壊することもでき
る。発明の機構を理解する必要はないが、抗Galによってオプソニン化された腫瘍膜が、
腫瘍細胞膜断片又は無傷腫瘍細胞を、抗原提示細胞に能動的にターゲティングさせ、した
がって、防御的抗腫瘍免疫を促進することとなると考えられる。
る腫瘍溶解性ウイルスの腫瘍内注射を含む、結腸内と肝臓内に多発転移を有する結腸直腸
癌患者を治療する方法を企図する。一実施態様では、該注射は、ウイルスベクターを腫瘍
病変に送達する手段として結腸内視鏡検査又は腹腔鏡検査を含む。
含有する腫瘍溶解性ウイルスの腫瘍内注射を含む、肺内に多発転移を有する肺癌患者を治
療する方法を企図する。一実施態様では、該注射は、気管支鏡検査を含む。
ベクターを含有する腫瘍溶解性ウイルスを含む、膀胱癌を有する患者を治療する方法を企
図する。一実施態様では、該ベクターは、膀胱鏡検査によって投与される。
ベクターを含有する腫瘍溶解性ウイルスを含む、膵臓腺癌を有する患者を治療する方法を
企図する。一実施態様では、ベクターは、内視鏡検査又は腹腔鏡検査によって投与される
。
ベクターを含有する腫瘍溶解性ウイルスを含む、乳癌を有する患者を治療する方法を企図
する。一実施態様では、該ベクターは、腫瘍への直接的注射によって投与される。
ウイルスの投与は、α1,3ガラクトシルトランスフェラーゼ遺伝子の腫瘍内送達を利用可
能であるあらゆる固形腫瘍又はリンパ腫において実施することができる。例えば、腫瘍内
送達は、US 7,820,628に記載されている。
送達することができる任意の種類のウイルス及び非ウイルスベクターを用いて実施するこ
ともできる。例えば、これらの方法には、限定はされないが、アデノウイルスベクター、
アデノウイルスヘルパーウイルス、レトロウイルスベクター、レンチウイルスベクター、
裸のDNAベクター、ヘルペスウイルス、又は裸のRNAベクター若しくはDNAベクターが含ま
れる。
って、α1,3-ガラクトシルトランスフェラーゼ遺伝子を含有するベクターを投与し、それ
によってエピトープを腫瘍細胞膜に挿入するための方法を企図する。α1,3-ガラクトシル
トランスフェラーゼ遺伝子を含有する腫瘍溶解性ウイルスを形質導入された腫瘍細胞の場
合と同様に、抗Gal IgGは、α-galエピトープを発現している腫瘍細胞膜に結合すること
となり、また、腫瘍細胞膜を、腫瘍抗原を発現する治療されていない腫瘍病変に対する全
身性の免疫応答も誘発するための抗原提示細胞にターゲティングすることとなる。当業者
は、本発明が、腫瘍塊に導入されるいずれかの組成物(これは、抗Gal抗体の、腫瘍細胞へ
のインサイチュ結合をもたらす)による、この天然の抗体による抗原提示細胞へのターゲ
ティングによって駆動される抗腫瘍性の適応免疫の発生を企図することを認識するべきで
ある。
本発明のウイルスは、治療を必要とする患者、好ましくはヒト患者において使用するこ
とができる。治療を必要とする患者は、癌を患う個体、好ましくは固形腫瘍を有する個体
である。治療的処置の目的は、患者の状態を改善することである。一般的に、本発明のウ
イルスを使用する治療的処置は、癌の症状を軽減する。
、癌を患う又は新生物若しくは腫瘍を有する患者に投与することを含む、癌を治療する方
法が提供される。
通りの腫瘍溶解性ウイルス、又は本明細書で定義する通りの医薬組成物が提供される。
を殺し、したがって、腫瘍のサイズを低下させる、及び/又は、腫瘍からの悪性細胞の広
がりを防止する、一方でまた、抗原提示細胞(APC)を腫瘍部位に動員し、防御的な抗腫瘍
免疫応答を誘導することとなる。
わせて、医薬組成物を生成することを含む。
られる。本明細書に記載する組成物は、腫瘍部位でのウイルス感染を促進ための従来の投
与経路を使用して投与することができる。
若しくはインシュレーション(insulation)(例えば、経粘膜的に若しくは鼻腔内に、口若
しくは鼻を通して)を介して、又は経口、頬側、非経口、又は直腸内投与経路によって投
与される。
接的注射によって投与される。投与されるウイルスの量は、HSVの場合、104から1010プラ
ーク形成単位(pfu)、好ましくは105から108pfu、より好ましくは約106から108pfuの範囲
内である。一般的に、ウイルスと、医薬として許容し得る適切な担体又は希釈剤との、最
大500μ1まで、一般的には1から200μ1、好ましくは1から10μ1の医薬組成物が、注射の
ために使用されるであろう。しかし、いくつかの腫瘍溶解性治療用途については、腫瘍及
び接種部位に応じて、限定はされないが最大10mlまでの、より大きな体積も、使用するこ
とができる。
の経路及び投薬量は、指針とすることを意図するに過ぎない。投薬量は、種々のパラメー
タに従って、特に、腫瘍の位置、腫瘍のサイズ、治療されることとなる患者の年齢、体重
、及び状態、並びに投与経路に従って決定することができる。投薬量及び投薬頻度は、組
織培養における、また、適切な動物モデルにおける、ウイルスの性質を研究することによ
って初めて、臨床前に最適化することができる。
することができる。大抵のウイルスに適した担体は、リン酸緩衝生理食塩水(PBS)などの
緩衝生理食塩水溶液であろう。この医薬組成物は、理想的には、最大1mlまでの体積の適
切な用量のウイルスの投与を可能にするように製剤化されることとなるが、最大10mlまで
の体積が投与される場合も存在し得る。個々の腫瘍病変体積が、至適用量を用いて治療す
るには小さ過ぎると考えられる場合、それぞれが全至適用量の部分量で投与される、複数
の病変の治療によって、至適用量が投与されることが可能である。有効な抗腫瘍応答を誘
発するために、複数の用量が必要である可能性があることも想定される。投与の間隔は、
前臨床モデルにおいて得られる有効性データに基づいて、又は類似のウイルス株を用いて
得られる臨床経験から、決定することができる。
全身的に、又は腫瘍に供給する血管に注射によって投与することもできる。ウイルスは、
膀胱内治療として投与することができる;例えば、膀胱の癌の治療のために使用される可
能性がある。最適投与経路は、腫瘍の位置及びサイズに依存することとなる。
含む有効量の改変された腫瘍溶解性ウイルスを投与することを含む、新生物を有する個体
を治療する方法である。
ーション(insulation)(例えば、口若しくは鼻を通して)による、又は経口、頬側、非経口
、又は直腸内投与による投与のために製剤化することができる。
具体的実施態様では、本発明の方法に有用な腫瘍溶解性ウイルスは、前立腺癌、乳癌、
肺癌、肝臓癌、子宮内膜癌、膀胱癌、結腸癌、若しくは子宮頸癌;腺癌;メラノーマ;リン
パ腫;神経膠腫;又は肉腫(軟部組織及び骨肉腫など)を有する対象に投与することができる
。
御の細胞増殖を特徴とするあらゆる疾患若しくは障害、及び、特にその多剤耐性形態を含
めた癌の治療又は予防のための、本発明の操作された腫瘍溶解性ウイルスを対象とする。
癌は、多巣性の腫瘍であり得る。本発明の治療法で治療されることとなる癌及び増殖性障
害のタイプの例としては、限定はされないが、白血病(例えば、骨髄芽球性、前骨髄球性
、骨髄単球性、単球性、赤白血病、慢性骨髄性(顆粒球)白血病、及び慢性リンパ性白血病
)、リンパ腫(例えば、ホジキン病及び非ホジキン病)、線維肉腫、粘液肉腫、脂肪肉腫、
軟骨肉腫、骨肉腫、血管肉腫、内皮肉腫、ユーイング腫瘍、結腸癌、膵臓癌、乳癌、卵巣
癌、前立腺癌、扁平上皮癌、基底細胞癌、腺癌、腎細胞癌、肝細胞腫、ウィルムス腫瘍、
子宮頸癌、子宮癌、精巣腫瘍、肺癌、小細胞肺癌、膀胱癌、上皮癌、神経膠腫、星状細胞
腫、乏突起神経膠腫、メラノーマ、神経芽細胞腫、網膜芽細胞腫、異形成、及び過形成が
挙げられる。特定の実施態様では、本発明の治療用化合物は、前立腺癌(例えば、前立腺
炎、前立腺肥大症(benign prostatic hypertrophy)、前立腺肥大症(benign prostatic hy
perplasia)(BPH)、前立腺パラガングリオーマ、前立腺腺癌、前立腺上皮内腫瘍、前立腺-
直腸瘻、及び非定型の前立腺の間質病変)を有する患者に投与される。特に好ましい実施
態様では、本発明の医薬品は、癌、神経膠腫、肝癌及び/又は結腸癌の治療のために使用
される。癌の治療及び/又は予防としては、限定はされないが、癌に伴う症状を軽減する
こと、癌の進行の抑制、癌の退縮の促進、及び免疫応答の促進が挙げられる。
性又は悪性であり得る。一般に、悪性新生物を、癌という。癌は、悪性細胞が、浸潤によ
る隣接組織への直接的成長によって、又は転移による遠隔部位への移植(すなわち、血液
又はリンパ系を通した輸送)によって他の組織に浸潤する能力の点で、良性新生物と異な
る。
織又は体の他の部分に広がらない、体の外表面に位置する新生物である。内部新生物は、
内臓又は体の他の内部部分に位置する。浸潤性新生物は、正常な組織壁を打ち破り、周囲
の領域に浸潤し始めている新生物、例えば、乳管及び小葉を越えて広がっている浸潤性乳
癌である。
ストには、以下のカテゴリーが含まれる:(a)腹部新生物(腹膜新生物及び後腹膜新生物を
含む);(b)骨新生物(大腿新生物、頭蓋新生物、顎新生物、下顎新生物、上顎新生物、口蓋
新生物、鼻新生物、眼窩新生物、頭蓋底新生物、及び脊髄新生物を含む);c)乳房新生物(
男性乳房新生物、乳管癌、及び葉状腫瘍を含む);(d)消化器系新生物(胆道新生物、胆管新
生物、総胆管新生物、胆嚢新生物、胃腸新生物、食道新生物、腸新生物、盲腸新生物、虫
垂新生物、結腸直腸新生物、結腸直腸大腸腺腫症、結腸直腸ガードナー症候群、大腸新生
物、大腸大腸腺腫症、大腸ガードナー症候群、S状結腸新生物、遺伝性非ポリポーシス結
腸直腸新生物、直腸新生物、肛門新生物、十二指腸新生物、回腸新生物、空腸新生物、胃
新生物、肝臓新生物、肝細胞腺腫、肝細胞癌、膵臓新生物、膵島細胞腺腫、インスリノー
マ、膵島細胞癌、ガストリノーマ、グルカゴノーマ、ソマトスタチノーマ、VIP産生腫瘍
、膵管癌、及び腹膜新生物を含む);(e)内分泌腺新生物(副腎新生物、副腎皮質新生物、副
腎皮質腺腫、副腎皮質癌、多発性内分泌腫瘍症、多発性内分泌腫瘍症1型、多発性内分泌
腫瘍症2a型、多発性内分泌腫瘍症2b型、卵巣新生物、顆粒膜細胞腫、黄体腫、メグズ症候
群、卵巣のセルトリ・ライディッヒ細胞腫、莢膜細胞腫、膵臓新生物、腫瘍随伴内分泌症
候群、副甲状腺新生物、下垂体新生物、ネルソン症候群、精巣新生物、精巣のセルトリ・
ライディッヒ細胞腫、及び甲状腺新生物を含む)(f)眼新生物(結膜新生物、眼窩新生物、
網膜新生物、網膜芽細胞腫、ブドウ膜新生物、脈絡膜新生物、及び虹彩新生物を含む);(g
)脳、頭部、及び頸部新生物(食道新生物、顔面新生物、眼瞼新生物、口腔新生物、歯肉新
生物、口腔白板症、毛状白板症、口唇新生物、口蓋新生物、唾液腺新生物、耳下腺新生物
、舌下腺新生物、顎下腺新生物、舌新生物、耳鼻咽喉腫瘍新生物、耳新生物、咽頭新生物
、鼻新生物、副鼻腔新生物、上顎洞新生物、咽頭新生物、下咽頭新生物、鼻咽頭新生物、
鼻咽頭新生物、中咽頭新生物、扁桃腺新生物、副甲状腺新生物、甲状腺新生物、及び気管
新生物を含む);(h)血液新生物(骨髄新生物を含む);(i)神経系新生物(中枢神経系新生物、
脳新生物、脳室新生物、脈絡叢新生物、脈絡叢乳頭腫、テント下新生物、脳幹新生物、小
脳新生物、神経細胞腫、松果体腫、テント上新生物、視床下部新生物、下垂体新生物、ネ
ルソン症候群、脳神経新生物、視神経新生物、視神経膠腫、聴神経腫瘍、神経線維腫症2
、神経系腫瘍随伴症候群、ランバート・イートン筋無力症候群、辺縁系脳炎、横断性脊髄
炎、傍腫瘍性小脳変性症、傍腫瘍性末梢性ニューロパチー、末梢神経系新生物、脳神経新
生物、聴神経腫瘍、及び視神経新生物を含む);(j)骨盤新生物;(k)皮膚新生物(棘細胞腫、
脂腺新生物、汗腺新生物、及び基底細胞癌を含む);(l)軟部組織新生物(筋新生物及び血管
新生物を含む);(m)脾臓新生物;(n)胸部新生物(心臓新生物、縦隔新生物、気道新生物、気
管支新生物、肺新生物、気管支原性肺癌、非小細胞肺癌、肺野コイン状陰影、パンコース
ト症候群、肺芽腫、肺硬化性血管腫、胸膜新生物、悪性胸水、気管新生物、胸腺新生物、
及び胸腺腫を含む);(o)泌尿生殖器新生物(女性生殖器新生物、卵管新生物、子宮新生物、
子宮頸部新生物、子宮内膜新生物、類内膜癌、子宮内膜間質腫瘍、子宮内膜間質肉腫、膣
新生物、外陰新生物、男性生殖器新生物、陰茎新生物、前立腺新生物、精巣新生物、泌尿
器新生物、膀胱新生物、腎臓新生物、腎細胞癌、腎芽腫、デニス・ドラッシュ症候群、WA
GR症候群、中胚葉性腎腫、尿管新生物、及び尿道新生物を含む);並びに(p)追加的な癌(腎
癌、肺癌、メラノーマ、白血病、バレット食道、異形成前癌細胞を含む)。
学療法、ホルモン療法、免疫療法、及び抗腫瘍剤)と組み合わせて投与することができる
。抗腫瘍剤の例としては、限定はされないが、シスプラチン、イホスファミド、パクリタ
キセル、タキサン、トポイソメラーゼI(例えば、CPT-11、トポテカン、9-AC、及びGG-211
)、ゲムシタビン、ビノレルビン、オキサリプラチン、5-フルオロウラシル(5-FU)、ロイ
コボリン、ビノレルビン、テモダール、及びタキソ(taxo)が挙げられる。
腫瘍細胞上でのα-galエピトープの発現に関する予備研究の説明)
ヒト腫瘍細胞上でのα-galエピトープ(Gal-α1-3Gal-β1-4GlcNAc-R)の発現の誘導を、
Deriyらの文献、Glycobiology 2002, 12: 135-144に詳述されている通りに、α1,3GT遺伝
子を含有する複製欠損型アデノウイルスベクターを用いる形質導入によって、あらかじめ
研究した。この目的のために、マウスα1,3GT cDNAのオープンリーディングフレーム(ORF
)を、初期遺伝子E1及びE3遺伝子を欠失させた複製欠損型アデノウイルスベクターに挿入
した。これは、複製欠損型アデノウイルスベクターへのcDNAの相同組換えを可能にするα
1,3GT cDNAを含有するpAdシャトルプラスミドの使用によって実現した。このプラスミド
においては、α1,3GT遺伝子を、哺乳類細胞における非常に有効なプロモーターであるサ
イトメガロウイルス(CMV)プロモーターの下流に挿入した。CMVプロモーター下の挿入され
たマウスα1,3GT遺伝子を含有する産生されたアデノウイルスベクターを、E1補完ウイル
ス遺伝子を含有するヒト腎臓細胞株293(ATCC)において増殖させた。単離されたウイルス
クローンを、293細胞の形質導入、及びバンディラ・シンプリシフォリアIB4(BSレクチン)
結合後のフローサイトメトリーによる24時間後のα-galエピトープ発現の分析によって、
触媒的に活性な酵素を産生するα1,3GT cDNAの存在について分析した。BSレクチンは、α
-galエピトープに特異的に結合する。
完ウイルス遺伝子を含有する293細胞株においてさらに増殖させた。AdαGTの濃度を、感
染多重度(MOI)単位と決定し、また、感染の6日後に293細胞において細胞変性効果を示す
最大希釈のアデノウイルスベクターと定義した。AdαGTがヒト腫瘍細胞上でのα-galエピ
トープの合成及び発現を誘導する能力を、他の悪性又は正常なヒト細胞のようにα-galエ
ピトープを欠く、ヒト子宮頸癌HeLa細胞株を用いて研究した。
Tを起源とするα1,3GT mRNAの出現は、マウスα1,3GT遺伝子
って決定した。この分析に基づくと、α1,3GT mRNAは、形質導入の4時間後、HeLa細胞の
細胞質中に見られた。細胞質中のα1,3GT酵素の実際の出現は、この酵素の触媒活性によ
って決定した。α1,3GTは、ガラクトースを、糖供与体UDP-Galから、タンパク質アシアロ
フェツインコーティングELISAウェルのN結合型炭水化物鎖上の9つの末端N-アセチルラク
トサミン残基に転移させる。新規に合成されたα-galエピトープを、モノクローナル抗Ga
l抗体M86を用いるELISAによって特定した(Galiliらの文献、Transplantation, 65:1129-1
132, 1998)。この分析を使用することによって、α1,3GTの触媒活性を、6時間後に、形質
導入されたHeLa細胞において、最初に検出した(図3内のタイムラインを参照のこと)。α-
galエピトープの初期出現を、細胞あたりのα-galエピトープの数を測定する、ELISA阻害
分析と呼ばれる、高感度のモノクローナル抗Gal M86抗体結合分析によって検出した(Gali
liらの文献、上記)。この分析を使用することによって、HeLa細胞表面複合糖質上でのα-
galエピトープの発現を、形質導入の10時間後に、6×104/細胞のレベルで検出した。形質
導入後48時間以内に、発現されたα-galエピトープの数は、2×106エピトープ/細胞に増
加した(図3)。
たHeLa細胞のそれぞれの細胞分裂は、α1,3GTコピー数の50%減少をもたらす。したがって
、α-galエピトープの発現は、細胞の表面上で減少し、その結果、形質導入後2週以内に
、細胞上にはα-galエピトープは検出されず、かつ細胞内にはα1,3GT遺伝子は検出され
ない。
ベクターを形質導入されたB16-BL6メラノーマ細胞上のα-galエピトープの発現)
細胞へのα1,3-ガラクトシルトランスフェラーゼ遺伝子の導入を達成するために、この
遺伝子を、以前に記載した通りの複製不能アデノウイルスベクターに挿入した(Deriyらの
文献、Glycobiology 2002, 12: 135)。得られたベクターは、AdαGTと呼ばれ、ヒト腫瘍
細胞上のα-galエピトープの発現を誘導するのに非常に有効である(Deriy Lらの文献、上
記)。α-galエピトープの発現を、AdαGTを形質導入されたB16-BL6メラノーマ細胞上で決
定した。これらの細胞は、B16メラノーマのサブクローンであり、BL6細胞と称される。Ad
αGTでのBL6細胞の形質導入は、形質導入するAdαGT内のα1,3-ガラクトシルトランスフ
ェラーゼ遺伝子によってコードされるα1,3-ガラクトシルトランスフェラーゼの細胞内産
生をもたらす。α1,3-ガラクトシルトランスフェラーゼによる、このエピトープの合成後
の、細胞表面複合糖質上のα-galエピトープの新規の発現を、形質導入の48時間後に評価
した。フローサイトメトリーによって測定されるバンディラ(グリフォニア(Griffonia))
・シンプリシフォリアIB4レクチン(BSレクチン-α-galエピトープに特異的なレクチン)の
結合によって、及び、ELISAによって測定される抗Gal抗体の、形質導入された細胞への結
合によって、α-galエピトープを検出した。AdαGTを形質導入されたBL6細胞(BL6AdαGT
細胞と称される)は、α1,3-ガラクトシルトランスフェラーゼ遺伝子挿入を欠く対照「空
の」アデノウイルスを形質導入されたB16細胞(BL6Adcont細胞と称される)と比較して、フ
ローサイトメトリーによって測定される通り、BSレクチン結合後に、有意なシフトを示し
た(図4A)。さらに、BL6AdαGT細胞の~15%は、残りの集団よりもかなり高い度合いのレク
チン結合を示し、これは、これらの細胞が、α-galエピトープを、細胞あたり多数のエピ
トープで発現することを示していた。
って実証した(図4B)。BL6cont細胞又はBL6AdαGT細胞を、乾燥によって、ELISAウェルに
付着させた。続いて、抗Gal IgGを含有する血清を、2倍連続希釈でウェルに添加し、抗Ga
l IgG 結合を、ヤギ抗-マウスIgG抗体と複合体形成させた西洋ワサビペルオキシダーゼ(H
RP)の結合によって決定した。形質導入されていないBL6細胞でコーティングされたウェル
に対するIgG結合の並行する測定によって、非特異的なIgG結合値を引いた。抗Galは、1:1
28の血清希釈であっても、BL6AdαGT細胞に容易に結合したのに対し、BL6Adcont細胞でコ
ーティングされたウェルでは、いずれの血清希釈においても結合は観察されなかった(図4
B)。
ワクチンとしてのAdαGT形質導入された腫瘍細胞の有効性を、Deriyらの文献、Cancer
Gene Therapy 12: 528-539、2005)に詳述されている通りにα1,3-ガラクトシルトランス
フェラーゼノックアウトマウスにおいて研究した。B16-BL6細胞は、腫瘍モデルとして働
いた。抗Gal産生マウスに、2×106個の放射線照射されたBL6AdαGT細胞を、又はα1,3-ガ
ラクトシルトランスフェラーゼ遺伝子を欠く対照の親アデノウイルスベクターを形質導入
された2×106個の放射線照射されたBL6細胞を、ワクチン接種した。BL6Adcontと称される
後者の細胞は、α-galエピトープを発現せず、対照マウスの免疫化には役立たなかった。
1週間後に、免疫化を繰り返した。2回目の免疫化の1週間後に、マウスの皮下に、0.2×10
6又は0.5×106個の生BL6細胞を負荷した。腫瘍発生を、2か月間観察した。BL6AdαGT細胞
で免疫化し、かつ0.2×106個の形質導入されていない親BL6細胞を負荷したマウスの3分の
2が、負荷から防御されたのに対し、対照群の20%のみが、腫瘍を発生しなかった(図5A)。
マウスにより高い用量の0.5×106個の生BL6細胞を負荷した場合、BL6AdαGT細胞で免疫化
したマウスの3分の1が、腫瘍負荷からの防御を発達させたのに対し、対照ウイルスAdcont
を形質導入されたBL6細胞をワクチン接種した対照マウスはすべて、BL6細胞の負荷後25日
以内に腫瘍を発生した(図5B)。これらの結果は、α-galエピトープを発現する、AdαGT形
質導入された腫瘍細胞が、抗原提示細胞に効率的にターゲティングされる腫瘍ワクチンと
して働くことができ、したがって、α-galエピトープを欠く同じ腫瘍細胞に対する免疫応
答を誘導することができることを暗示する。
における、α-galエピトープ発現対細胞溶解の動態)
この実験の目的は、α1,3GT遺伝子を含有する腫瘍溶解性ヘルペスウイルス(HSVαGT)で
の細胞の感染後の、ヒト及びマウス腫瘍細胞上のα-galエピトープの発現についてのタイ
ムラインを、インビトロで決定することである。この分析は、感染した細胞上のα-galエ
ピトープの発現が、この腫瘍溶解性ウイルスによる細胞の細胞溶解の前に起こることを確
認するために必要とされる。α-galエピトープは、細胞膜上でいったん発現されると、腫
瘍溶解性ウイルスHSVαGTによって細胞が溶解された後でも、天然の抗Gal抗体と結合する
こととなることが想定される。抗Galと、(細胞溶解が原因の)断片化された腫瘍細胞膜と
の間に形成される免疫複合体は、免疫複合体化された抗Gal抗体のFc部分とAPC上のFcγ受
容体(FcγR)との間の相互作用の結果としての、樹状細胞及びマクロファージなどのAPCに
よる取り込みのために効率的にターゲティングされることとなる(図1及び2参照)。HSVαG
Tを調製するために、CMVプロモーター下のα1,3GT遺伝子を、先に記載した、(Deriyらの
文献、2002、上記)に記載されている複製欠損型ウイルスAdαGTから、PCRによって増幅す
る。CMVプロモーター下の遺伝子を、腫瘍溶解性HSVに挿入し、得られるHSVαGTの懸濁液
を、当業者に公知の方法に従って、HeLa細胞における増殖によって調製する。
また、ヒトHeLa子宮頸癌細胞上で決定する。マウスメラノーマ細胞を用いる研究は、この
後のマウスにおいてこれらの細胞を用いるインビボ研究の実現可能性を決定するために必
要とされる。B16メラノーマは、α-galエピトープを欠く唯一の公知のマウス腫瘍細胞株
であり、したがって、これは、この炭水化物エピトープの欠如という点でヒト腫瘍細胞を
刺激する。HeLa細胞を用いる研究は、HSVαGT感染したヒト腫瘍細胞におけるα-galエピ
トープ発現が、このウイルスによる細胞の細胞溶解前に起こるという仮定を確認するため
に必要とされる。この研究は、B16細胞について記載するが、HeLa細胞についても同一で
ある。
細胞の単層に添加する。感染した細胞を、2時間おきに剥離させ、ウイルスのα1,3GT遺伝
子の発現を、α1,3GT mRNAの出現によって決定する。このmRNAは、先にAdαGTについて記
載した通りに、マウスα1,3GT遺伝子
って検出される。感染した細胞の細胞質中のα1,3GT酵素の実際の出現は、酵素のための
受容体としてアシアロフェツインを使用し、かつUDP-Galが糖供与体として使用されるELI
SAにおいて、この酵素の触媒活性によって決定される。アシアロフェツインは、さらに、
ELISAウェルをコーティングする固相抗原として機能する。新規に合成されたα-galエピ
トープを、モノクローナル抗Gal抗体M86を用いるELISAによって特定する(Galiliの文献、
1998、上記)。α-galエピトープのその後の出現を、フローサイトメトリーによって測定
されるバンディラ(グリフォニア)・シンプリシフォリアIB4レクチン(BSレクチン-α-gal
エピトープに特異的なレクチン)の結合によって、また、ELISAウェル内の細胞を乾燥させ
ることによってELISAをコーティングするために処理された感染細胞への、抗Gal抗体の結
合によって検出する。α-galエピトープ発現を、細胞あたりのα-galエピトープの数を測
定する、ELISA阻害分析と呼ばれる、高感度のモノクローナル抗Gal M86抗体結合分析によ
って、さらに定量化する(Galiliらの文献、1998、上記)。「空の」HSV(すなわちα1,3GT
遺伝子を欠くウイルス)を、ウイルス感染についての対照として使用する。
いて、顕微鏡で観察し続ける。
腫瘍溶解性ウイルスとしての、また、様々な腫瘍関連抗原(TAA)に対する防御的抗腫瘍
免疫をもたらすための手段としての、HSVαGTの有効性を、研究に従って決定する(Galili
らの文献、J Immunol.; 178: 4676-87, 2007; Abdel-Motalらの文献、Cancer Immunol Im
munother; 58: 1545-55, 2009)。これらの研究は、抗Gal抗体を産生するα1,3-ガラクト
シルトランスフェラーゼノックアウトマウスにおいて実施する。B16細胞は、腫瘍モデル
として働く。抗Galを産生するα1,3-ガラクトシルトランスフェラーゼノックアウトマウ
スの右の側腹部に、1×106 B16細胞を皮下注射する。この注射の結果として、B16細胞は
、5~6日以内に、4~5mmの直径を有するメラノーマ腫瘍病変に発達する。0.1mlの体積の1
03~106pfu範囲の量のHSVαGTを、腫瘍に注射する。挿入されるα1,3GT遺伝子を欠く腫瘍
溶解性HSV(「空の」HSV)を、α-galエピトープの発現を誘導する能力がない対照ウイルス
として使用する。これらのマウスを、腫瘍病変の消失について、2か月間観察する。20mm
の直径に到達する腫瘍を有するマウスは、安楽死させる。腫瘍の完全消失(すなわち100%
腫瘍溶解)を示す量の2倍であるHSVαGTの量を決定し、この治療によって誘発される防御
的な抗腫瘍免疫応答を評価するさらなる研究のために使用する。α1,3GT遺伝子を欠く対
照HSVとの比較は、HSVαGTが、腫瘍溶解の誘導において対照ウイルスよりも有効であるか
有効でないかを判断する。
した病変の有効性)
抗Galを産生するα1,3-ガラクトシルトランスフェラーゼノックアウトマウスの、右の
側腹部の皮下に1×106 B16細胞を、左の側腹部の皮下に1×104、1×105、又は1×106 B16
細胞を注射する。左の側腹部において発生する腫瘍は、右側腹部病変へのHSVαGTの注射
が、これを、全身性の防御的抗腫瘍応答を誘発するワクチンに変換する場合に、腫瘍病変
に発達しない可能性がある、遠隔転移を表す。右側腹部腫瘍が、(5~6日以内に)4~5mmの
サイズ(直径)に到達した時、メラノーマ病変の100%細胞溶解を誘導する量の2倍である量
のHSVαGTを、0.1ml懸濁液で注射する。挿入されるα1,3GT遺伝子を欠く腫瘍溶解性HSVを
、α-galエピトープの発現を誘導する能力がない対照ウイルスとして使用する。左側腹部
における腫瘍の成長を、2か月間観察する。HSVαGTを注射した腫瘍の、ワクチンへの変換
は、左側腹部に1×104、1×105、又は1×106 B16細胞が注射された場合、左側腹部におけ
る遠隔転移が、検出可能な病変に成長するのを予防する。腫瘍成長の予防は、右側腹部に
おける腫瘍に、HSVαGTが注射された場合に、α1,3GT遺伝子を欠くHSVが注射されるより
も有効である(すなわち、より多い数の腫瘍細胞が、左側腹部における病変に発達するの
を予防する)と考えられる。
αGT感染した病変の有効性)
抗Galを産生するα1,3-ガラクトシルトランスフェラーゼノックアウトマウスの右の側
腹部に、1×106 B16細胞を皮下注射する。腫瘍が、(5~6日以内に)4~5mmのサイズ(直径)
に到達した時、メラノーマ病変の100%細胞溶解を誘導する量の2倍である量のHSVαGTを、
0.1ml懸濁液で注射する。挿入されるα1,3GT遺伝子を欠く腫瘍溶解性HSVを、α-galエピ
トープの発現を誘導する能力がない対照ウイルスとして使用する。右側腹部病変への腫瘍
溶解性ウイルスの注射の3週後に、左側腹部に、腫瘍負荷として、0.3×106、1×106、3×
106、又は10×106 B16細胞を注射する。右側腹部腫瘍へのHSVαGTの注射の結果としての(
腫瘍をワクチンに変換する)防御的な抗腫瘍免疫応答の誘導は、左側腹部における負荷し
た腫瘍細胞が、腫瘍病変に発達するのを予防する。腫瘍成長の予防は、右側腹部における
腫瘍に、α1,3GT遺伝子を欠くHSVよりもHSVαGTが注射された場合に、より有効である(す
なわち、より多い数の負荷した腫瘍細胞が、病変に発達するのを予防する)。
な腫瘍溶解性アデノウイルスの産生及び有効性)
本研究は、E3遺伝子がマウスα1,3-ガラクトシルトランスフェラーゼ(α1,3GT)遺伝子
と置き換えられた、Ad5/3-Δ24-αGT CRAd(CRAd-αGT)の産生を記載する。α1,3GTは、炭
水化物抗原ガラクトース-α-1,3-ガラクトシル-β-1,4-N-アセチル-グルコサミン-R(α-g
al)を合成する。このウイルスが複製する時に、ウイルスタンパク質と共にα1,3GTタンパ
ク質が産生され、続いて、このαGTタンパク質が、α-galの産生を触媒する。細胞表面α
-galは、抗Gal抗体によって複合体化され、免疫活性化、及び抗原提示細胞による免疫複
合体の取り込みが促進される。
(細胞株)
A549(ヒト肺癌)及びA375(ヒトメラノーマ)細胞株は、欧州真正培養細胞保存機関(Europ
ean Collection of Authenticated Cell Cultures)(ECCAC)から購入した。A549細胞は、F
-12K+10%ウシ胎児血清(FBS)中で維持した。A375細胞は、ダルベッコ変法イーグル培地(DM
EM)+10%ウシ胎児血清中で維持した。どちらの細胞株も、37℃かつ5% CO2でインキュベー
トした。
ウイルス産生は、Imanis Life Sciences(Rochester, Minneapolis, US)社による契約に
従って実施した。ウイルス構築は、まさに詳細に記載されている通りに(Danthinne及びWe
rthの文献、2000; Danthinneの文献、2001)、確立されている大きいアデノウイルスシャ
トルプラスミド及び組換えDNA方法を使用して実施した。CRAd-αGTを作り出すために、1.
1Kbマウスα1,3GT遺伝子(GenBank受託番号M85153)は、Integrated DNA Technologies(IDT
)社によって合成され、α1,3GT配列のCMVプロモーター5’と共に、Ad5 E3シャトルベクタ
ーにクローン化した。Ad3の配列で置き換えられたファイバーノブ配列を有する、Ad5ゲノ
ムをコードするコスミドにおいて、
ドから欠失させ、シャトルベクターからサブクローン化したCMV-αGT配列で置き換えた。
対照のCRAdを作り出すために、緑色蛍光タンパク質(GFP)コード配列が、IDT社によって合
成され、GFP配列のCMVプロモーター5’と共に、Ad5 E1シャトルベクターにクローン化し
た。E1配列を、Ad5/3コスミドから欠失させ、シャトルベクターからサブクローン化したC
MV-GFP配列で置き換えた。E3領域を欠失させた。このキメラウイルス構造を、図6に示す
。
、未精製ライセートを調製した。ウイルス増幅のために、HEK293細胞を15cmディッシュに
播種し、37℃、5% CO2で一晩インキュベートした。翌日、細胞を、ウイルス感染した細胞
からの未精製ライセートに感染させ、37℃、5% CO2で48時間インキュベートし、その時間
の後、細胞及び上清を収集した。
アンモニウム沈殿によって細胞上清から回収した(Schagenらの文献、2000)。ウイルス精
製は、塩化セシウム(CsCl)密度勾配遠心分離によって実施した。簡単に言うと、未精製の
ウイルス調製物を、SW28 Beckman遠心管に入れて2ステップCsCl勾配にかけ、20,000rpmで
2時間遠心分離した。ウイルスバンドを収集し、継続的CsCl勾配にかけ、再び遠心分離し
た。最終のウイルスバンドを収集し、直ちに、4℃で18時間、4×0.5L GTS緩衝液(2.5%グ
リセロール、25mM NaCl、20mM Tris-HCl pH8.0)に対して透析した。約1mlの透析されたウ
イルス懸濁液を収集し、0.22μm Suporメンブレン(Pall社)を通して濾過し、次いで、-70
℃で凍結させた。
ウイルス粒子(VP)の吸光係数を使用して決定した。ウイルス濃度は、CRAd-αGTについて3
.6×1012VP/ml、及びCRAd-GFPについて2.9×1012VP/mlであることが判明した。ウイルス
調製物の純度を、A260/A280及びA320/A260比率によって決定し、どちらのウイルスについ
ても、純粋なウイルスに関連する範囲内(それぞれ1.2から1.4及び0.22から0.27)であるこ
とが判明した。
セイ(TCID50)によって決定した(Reed及びMuenchの文献、1938)。簡単に言うと、HEK293細
胞を、24ウェルプレートに播種し、37℃で一晩インキュベートした。翌日、この播種され
たHEK293細胞に、10倍希釈系列のCsCl-精製されたウイルスストックを添加し、細胞を、3
7℃、5% CO2で14日間インキュベートした。ウェルを、顕微鏡下での視覚的評価によって
、細胞変性効果(CPE)の存在について点数化し、Reed-Muench方程式を使用してTCID50を算
出した(Reed及びMuenchの文献、1938)。ウイルス力価は、CRAd-αGTについて6.8×1011TC
ID50/mL、また、CRAd-GFPについて2.7×1011TCID50/mlであることが決定された。
A549及びA375細胞のサブコンフルエントな単層を、細胞解離溶液(CDS、Sigma-Aldrich
社)を使用して、組織培養フラスコから収集した。これらの細胞を、血球計数器を使用し
て計数し、トリパンブルー色素排除によって、生細胞を死細胞から区別した。これらの細
胞を、培養培地で希釈し、滅菌した96ウェル白色組織培養プレートに、90μl/ウェルで添
加して、 5×103又は1×104細胞/ウェルを与えた。
は1.2×1012VP/ml、CRAd-GFPについては9.67×1011VP/mlの作業用ストック溶液を提供し
た。これらの作業用ストックを、PBS+10% FBSで1/5連続希釈し、CRAd-αGTについては1.2
×1012~1.2×105 VP/ml、CRAd-GFPについては9.67×1011~9.9×104の漸増系列(titrati
on series)を作製した。これらの漸増系列を、アッセイプレートに1:10希釈し(90μlの播
種された細胞に対して、ウェルあたり10μlのウイルス)、プレートを、37℃/5% CO2で72
時間インキュベートした。細胞生存率を、製造業者の指示書に従ってCell Titre Glo発光
細胞生存性試薬(Promega社)を使用して決定し、プレートをEnVision 2102プレートリーダ
ー(Perkin Elmer社)で読み取った。生の発光単位(RLU)を、ウイルス粒子(対数)/mlに対し
てプロットした。
下に詳述する通りに、透明な96ウェル又は24ウェルプレートに播種し、やはり上及び下に
詳述されるCRAd-αGT及びCRAd-GFPの種々の希釈物に感染させ、光学顕微鏡下で評価した
。細胞の画像は、YenCam 10(Yenway社)及び補助ソフトウェアを用いて撮影した。
A549及びA375細胞を、先に記載した通りに組織培養フラスコから収集した。計数後、細
胞を、培養培地で希釈し、540μl/ウェルの体積(これは3×104細胞/ウェルと等しい)で、
24ウェル組織培養プレートに添加した。
ては3.6×108VP/ml、CRAd-GFPについては2.9×108の溶液を提供した。これらの溶液を、P
BS+10% FBSで、2回、1:25希釈して、CRAd-αGTについては1.44×107及び5.8×105VP/ml、
CRAd-GFPについては1.16×107及び4.6×105VP/mlのウイルス濃度を与えた。3つのウイル
ス希釈物を、播種された細胞で、さらに1:10希釈した(ウェルあたり540μlの細胞に対し
て、60μlのウイルス)。ウイルス無しの対照としての役割を果たす、等しい体積のPBS+10
% FBS単独をウェルに添加した。
メトリーによって、感染した細胞の表面上のα-gal抗原の存在を決定した。感染した及び
感染していない(ウイルス無しの対照)細胞を、CDSを使用して、24ウェルプレートから収
集し、PBS+0.5% BSAで洗浄し、PBS+0.5% BSAで希釈した40μg/mlモノクローナルM86ヒトI
gG1抗Gal抗体(Absolute Antibody社)と共に4℃で1時間インキュベートした。細胞を、再
びPBS+0.5% BSAで洗浄し、次いで、PBS+0.5% BSAで希釈した、アロフィコシアニン(APC)
を結合させた抗ヒトIgG(Biolegend社)と共に、4℃で30分間、暗所でインキュベートした
。細胞を、PBS+0.5% BSAで洗浄し、Beckman Coulter FC500フローサイトメーターで分析
した。未染色細胞を使用して、前方散乱、側方散乱、及び蛍光チャンネル1及び4について
電圧を設定した。試験試料について、GFP(チャンネル1)及びAPC(チャンネル4)シグナルを
記録した。単色対照を使用して、コンペンセーションを設定した。
(CRAd-αGTはヒト癌細胞を溶解する)
CRAd-αGT及び対照CRAd-GFPの、A549及びA375細胞に対する細胞溶解効果を、プレート
に基づく細胞生存率アッセイ(図7)を使用して定量化した。細胞がCRAd-αGT又はCRAd-GFP
に感染したウェルにおいて観察される細胞生存率の低下は、ウイルスの濃度に依存してい
た。細胞生存率を50%低下させるために必要とされるCRAd-αGTウイルス粒子の数は、対照
CRAd-GFPウイルスよりも少なかった。これは、TCID50分析によって測定されるウイルス力
価と一致している(先の材料及び方法セクションを参照のこと)。
視化し、CRAd-GFPと比較した(図8)。CRAd-αGT又はCRAd-GFPに感染し、その後72時間イン
キュベートした細胞は、両方のウイルスによって殺された。感染していない細胞は健康で
あり、溶解の兆候は見られなかった。
CRAd-αGTでの細胞の感染が、触媒的に活性なα1,3GTタンパク質の発現、及びその後の
細胞表面でのα-galの発現をもたらすかどうかを検討するために、α-gal特異的抗Gal抗
体の、CRAd-αGT感染した細胞への結合を、フローサイトメトリーを使用して決定し、抗G
al抗体の、CRAd-GFP及び感染していない細胞への結合と比較した(図9)。CRAd-αGTに感染
した細胞には、抗Galが強力に結合したが、GFP発現については陰性であった。逆に、CRAd
-GFPに感染した細胞は、抗Gal結合については陰性であったが、GFP発現については陽性で
あった。感染していない細胞は、抗Gal結合とGFP発現のどちらについても陰性であった。
CRAd-αGTでのヒト非小細胞肺癌(A549)及びメラノーマ(A375)細胞の感染は、細胞溶解
及び細胞死をもたらした。細胞溶解は、ウイルスE1a遺伝子からの24bp領域の欠失が原因
で、癌細胞に選択的であるCRAd-αGT複製の結果として起こる(Fueyoらの文献、2000)。
な結合をもたらしたのに対して、抗Galは、感染しなかった又はCRAd-GFP感染した細胞に
結合しなかった。抗Galは、α-galエピトープに特異的に結合するので、本発明者らは、
癌細胞におけるCRAd-αGTの複製が、触媒的に活性なα1,3GT酵素の発現をもたらし、続い
てこれがα-galの合成を触媒すると結論付けることができる。
亡する腫瘍細胞及び腫瘍細胞細片への結合は、腫瘍新生抗原に対する適応免疫応答を増強
することとなる。活性化しているFcγ受容体を有する抗原提示細胞(APC)は、活性化して
いるFcγ受容体を介して、抗Gal IgGと複合体化された腫瘍細胞細片及び死細胞を貪食す
る。APC上のFcγ受容体の活性化は、APC活性化、成熟、及び抗原のT細胞への増強された
提示を引き起こす(Regnaultらの文献、1999; Rafiqらの文献、2002; Platzerらの文献、2
014)。
(構成1)
ヘキソシルトランスフェラーゼ酵素をコードする核酸を含む、腫瘍溶解性ウイルス。
(構成2)
前記酵素が、ガラクトシルトランスフェラーゼ酵素である、構成1記載の腫瘍溶解性ウ
イルス。
(構成3)
前記酵素が、α1,3-ガラクトシルトランスフェラーゼ酵素である、構成1又は構成2記載
の腫瘍溶解性ウイルス。
(構成4)
腫瘍幹細胞マーカーに特異的な組換え結合ドメインを含む、構成1から3のいずれか1項
記載の腫瘍溶解性ウイルス。
(構成5)
複製制限されている、構成1から4のいずれか1項記載の腫瘍溶解性ウイルス。
(構成6)
アデノウイルス、ヘルペスウイルス、ワクシニアウイルス、麻疹ウイルス、ニューカッ
スル病ウイルス、自律性パルボウイルス、水疱性口内炎ウイルス(VSV)、又はレオウイル
スなどの、ヒト又は非ヒト起源のRNA又はDNAベースのウイルスである、構成1から5のいず
れか1項記載の腫瘍溶解性ウイルス。
(構成7)
アデノウイルスである、構成6記載の腫瘍溶解性ウイルス。
(構成8)
条件付き複製型アデノウイルス(CRAd)である、構成7記載の腫瘍溶解性ウイルス。
(構成9)
Ad5/3キメラウイルスである、構成8記載の腫瘍溶解性ウイルス。
(構成10)
前記Ad5/3キメラウイルスが、ウイルス前初期(E1a)遺伝子の定常領域2(CR2)内の24塩基
対欠失(Δ24)をさらに含む(Ad5/3-Δ24 CRAd)、構成9記載の腫瘍溶解性ウイルス。
(構成11)
α1,3-ガラクトシルトランスフェラーゼをコードする核酸配列を含む、構成1から10の
いずれか1項記載の腫瘍溶解性ウイルス。
(構成12)
Ad5/3-Δ24-αGT CRAd(CRAd-αGT)である、構成11記載の腫瘍溶解性ウイルス。
(構成13)
医薬として許容し得る担体と組み合わせて、構成1から12のいずれか1項記載の腫瘍溶解
性ウイルスを含む、医薬組成物。
(構成14)
静脈内、筋肉内、腹腔内、腫瘍内、皮下、経口、直腸内、膣内、鼻腔内、経粘膜、又は
経皮投与のために製剤化される、構成13記載の医薬組成物。
(構成15)
新生物を有する個体を治療する方法であって、
i)少なくとも1つの癌細胞中で、構成1から12のいずれか1項記載の腫瘍溶解性ウイルスに
よって送達される内因性酵素を発現させて、細胞膜糖鎖付加を改変するステップと;
ii)前記腫瘍溶解性ウイルスの投与により、前記少なくとも1つの癌細胞の溶解を誘導する
ステップと
を含む前記方法。
(構成16)
前記腫瘍溶解性ウイルスが、前記個体における少なくとも1つの癌細胞に感染するのに
有効な量で投与される、構成15記載の方法。
(構成17)
癌を有する個体又は腫瘍を有する個体を治療することを目的とする、構成15又は構成16
記載の方法。
(構成18)
治療を必要とする、癌を患う又は新生物もしくは腫瘍を有する患者に、構成1から12の
いずれか1項記載の治療有効量の腫瘍溶解性ウイルスを投与することを含む、癌を治療す
る方法。
(構成19)
癌の治療における使用のための、構成1から12のいずれか1項記載の腫瘍溶解性ウイルス
、又は構成13又は構成14記載の医薬組成物。
(構成20)
前記癌が、白血病(例えば、骨髄芽球性、前骨髄球性、骨髄単球性、単球性、赤白血病
、慢性骨髄性(顆粒球)白血病、及び慢性リンパ性白血病)、リンパ腫(例えば、ホジキン病
及び非ホジキン病)、線維肉腫、粘液肉腫、脂肪肉腫、軟骨肉腫、骨肉腫、血管肉腫、内
皮肉腫、ユーイング腫瘍、結腸癌、膵臓癌、乳癌、卵巣癌、前立腺癌、扁平上皮癌、基底
細胞癌、腺癌、腎細胞癌、肝細胞腫、ウィルムス腫瘍、子宮頸癌、子宮癌、精巣腫瘍、肺
癌、小細胞肺癌、膀胱癌、上皮癌、神経膠腫、星状細胞腫、乏突起神経膠腫、メラノーマ
、神経芽細胞腫、網膜芽細胞腫、異形成、及び過形成から選択される、構成15から18のい
ずれか1項記載の方法、又は構成19記載の腫瘍溶解性ウイルスもしくは医薬組成物。
(構成21)
ヘキソシルトランスフェラーゼ酵素をコードする核酸を、前記腫瘍溶解性ウイルスのゲ
ノムに組み込むステップを含む、構成1から12のいずれか1項記載の腫瘍溶解性ウイルスを
調製する方法。
(構成22)
前記組み込むステップが、クローニングを含む、構成21記載の方法。
Claims (8)
- α1,3-ガラクトシルトランスフェラーゼ酵素をコードする核酸を含む腫瘍溶解性ウイルスを含む、癌の治療のための医薬組成物であって、該腫瘍溶解性ウイルスが、ウイルス前初期(E1a)遺伝子の定常領域2(CR2)内の24塩基対欠失(Δ24)を含むキメラAd5/3条件付き複製型アデノウイルス(Ad5/3-Δ24 CRAd)である、前記医薬組成物。
- 前記腫瘍溶解性ウイルスが、腫瘍幹細胞マーカーに特異的な組換え結合ドメインを含む、請求項1記載の医薬組成物。
- 前記腫瘍溶解性ウイルスが複製制限されている、請求項1又は2記載の医薬組成物。
- 前記腫瘍溶解性ウイルスが、Ad5/3-Δ24-αGT CRAd(CRAd-αGT)である、請求項1から3のいずれか1項記載の医薬組成物。
- 静脈内、筋肉内、腹腔内、腫瘍内、皮下、経口、直腸内、膣内、鼻腔内、経粘膜、又は経皮投与のために製剤化される、請求項1から4のいずれか1項記載の医薬組成物。
- 前記癌が、白血病(例えば、骨髄芽球性、前骨髄球性、骨髄単球性、単球性、赤白血病、慢性骨髄性(顆粒球)白血病、及び慢性リンパ性白血病)、リンパ腫(例えば、ホジキン病及び非ホジキン病)、線維肉腫、粘液肉腫、脂肪肉腫、軟骨肉腫、骨肉腫、血管肉腫、内皮肉腫、ユーイング腫瘍、結腸癌、膵臓癌、乳癌、卵巣癌、前立腺癌、扁平上皮癌、基底細胞癌、腺癌、腎細胞癌、肝細胞腫、ウィルムス腫瘍、子宮頸癌、子宮癌、精巣腫瘍、肺癌、小細胞肺癌、膀胱癌、上皮癌、神経膠腫、星状細胞腫、乏突起神経膠腫、メラノーマ、神経芽細胞腫、網膜芽細胞腫、異形成、及び過形成から選択される、請求項1から5のいずれか1項記載の医薬組成物。
- α1,3-ガラクトシルトランスフェラーゼ酵素をコードする核酸を、前記腫瘍溶解性ウイルスのゲノムに組み込むステップを含む、請求項1から4のいずれか1項記載の腫瘍溶解性ウイルスを調製する方法。
- 前記組み込むステップが、クローニングを含む、請求項7記載の方法。
Applications Claiming Priority (2)
Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
---|---|---|---|
GB1505860.5 | 2015-04-07 | ||
GBGB1505860.5A GB201505860D0 (en) | 2015-04-07 | 2015-04-07 | Therapeutic compositions and methods of use for treating cancer |
Related Parent Applications (1)
Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
---|---|---|---|
JP2017552992A Division JP2018512150A (ja) | 2015-04-07 | 2016-04-07 | 癌を治療するための治療用組成物及び使用方法 |
Publications (2)
Publication Number | Publication Date |
---|---|
JP2021045152A JP2021045152A (ja) | 2021-03-25 |
JP7066812B2 true JP7066812B2 (ja) | 2022-05-13 |
Family
ID=53190234
Family Applications (2)
Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
---|---|---|---|
JP2017552992A Pending JP2018512150A (ja) | 2015-04-07 | 2016-04-07 | 癌を治療するための治療用組成物及び使用方法 |
JP2020199987A Active JP7066812B2 (ja) | 2015-04-07 | 2020-12-02 | 癌を治療するための治療用組成物及び使用方法 |
Family Applications Before (1)
Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
---|---|---|---|
JP2017552992A Pending JP2018512150A (ja) | 2015-04-07 | 2016-04-07 | 癌を治療するための治療用組成物及び使用方法 |
Country Status (14)
Country | Link |
---|---|
US (2) | US20180104288A1 (ja) |
EP (1) | EP3280798B1 (ja) |
JP (2) | JP2018512150A (ja) |
KR (1) | KR102544032B1 (ja) |
CN (1) | CN107787364A (ja) |
BR (1) | BR112017021700A2 (ja) |
CA (1) | CA2981925A1 (ja) |
ES (1) | ES2743952T3 (ja) |
GB (1) | GB201505860D0 (ja) |
HK (1) | HK1251009B (ja) |
IL (1) | IL254842B (ja) |
MX (1) | MX2017012867A (ja) |
RU (1) | RU2720984C2 (ja) |
WO (1) | WO2016162675A1 (ja) |
Families Citing this family (8)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
WO2014153204A1 (en) | 2013-03-14 | 2014-09-25 | Salk Institute For Biological Studies | Oncolytic adenovirus compositions |
JP7054527B2 (ja) | 2016-02-23 | 2022-04-14 | ソーク インスティテュート フォー バイオロジカル スタディーズ | アデノウイルスの複製動態を測定するための高スループットアッセイ |
KR20180112024A (ko) | 2016-02-23 | 2018-10-11 | 더 솔크 인스티튜트 포 바이올로지칼 스터디즈 | 바이러스 동역학에 미치는 영향 최소화를 위한 치료용 아데노바이러스의 외인성 유전자 발현 |
CN110062630A (zh) | 2016-12-12 | 2019-07-26 | 萨克生物研究学院 | 肿瘤靶向合成腺病毒及其用途 |
CN110856724B (zh) * | 2018-08-24 | 2022-05-27 | 杭州康万达医药科技有限公司 | 包含核酸及car修饰的免疫细胞的治疗剂及其应用 |
JPWO2020230838A1 (ja) * | 2019-05-14 | 2020-11-19 | ||
US20230295581A1 (en) * | 2020-01-10 | 2023-09-21 | The University Of Hong Kong | Recombinant viruses expressing alpha-1, 3-galactosyltransferase and uses thereof |
CN112941039A (zh) * | 2021-02-01 | 2021-06-11 | 南京大学 | 一种新型类囊泡溶瘤病毒及其在制备抗肿瘤药物上的应用 |
Citations (1)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
US20030099616A1 (en) | 2001-07-25 | 2003-05-29 | Irving John M. | Dual specificity tumor killing vectors driven by the telomerase promoter |
Family Cites Families (15)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
GB9615794D0 (en) | 1996-07-26 | 1996-09-04 | Medical Res Council | Mutant herpes simplex virus strains and uses thereof |
US5998174A (en) | 1997-05-12 | 1999-12-07 | University Of Pittsburgh Of The Commonwealth System Of Higher Education | Multigene vectors |
GB9810904D0 (en) | 1998-05-20 | 1998-07-22 | Univ London | Mutant herpes simplex viruses and uses thereof |
ATE312189T1 (de) | 2000-01-21 | 2005-12-15 | Biovex Ltd | Virusstämme für die onkolytische behandlung von krebs |
US7338932B2 (en) * | 2000-05-11 | 2008-03-04 | Glycozym Aps | Methods of modulating functions of polypeptide GalNAc-transferases and of screening test substances to find agents herefor, pharmaceutical compositions comprising such agents and the use of such agents for preparing medicaments |
WO2002042468A2 (en) | 2000-11-27 | 2002-05-30 | Geron Corporation | Glycosyltransferase vectors for treating cancer |
WO2004032865A2 (en) * | 2002-10-09 | 2004-04-22 | Central Iowa Health System | Antitumor vaccination using allogeneic tumor cells expressing alpha (1,3)-galactosyltransferase |
US20050201993A1 (en) * | 2002-10-09 | 2005-09-15 | Link Charles J.Jr. | Antitumor vaccination using allogeneic tumor cells expressing alpha (1,3)-galactosyltransferase |
NZ581958A (en) * | 2004-11-12 | 2011-01-28 | Bayer Schering Pharma Ag | Recombinant newcastle disease virus comprising a transgene encoding a prodrug-converting enzyme or protease for use in the treatment of cancer |
US7820628B2 (en) | 2005-02-22 | 2010-10-26 | University Of Massachusetts Medical School | Tumor lesion regression and conversion in situ into autologous tumor vaccines by compositions that result in anti-Gal antibody binding |
EP2085092A1 (en) * | 2008-01-29 | 2009-08-05 | Bayer Schering Pharma Aktiengesellschaft | Attenuated oncolytic paramyxoviruses encoding avian cytokines |
ES2385251B1 (es) * | 2009-05-06 | 2013-05-06 | Fundació Privada Institut D'investigació Biomèdica De Bellvitge | Adenovirus oncolíticos para el tratamiento del cáncer. |
ES2733211T3 (es) * | 2011-04-15 | 2019-11-28 | Genelux Corp | Cepas clonales de virus vaccinia atenuados y métodos de uso de las mismas |
SG11201504482VA (en) * | 2012-12-07 | 2015-07-30 | Univ North Carolina State | Beta-hexosyl-transferases and uses thereof |
CN105779397B (zh) * | 2014-12-22 | 2019-07-19 | 彭霞 | 溶瘤异源重组新城疫病毒及其制备方法与应用 |
-
2015
- 2015-04-07 GB GBGB1505860.5A patent/GB201505860D0/en not_active Ceased
-
2016
- 2016-04-07 MX MX2017012867A patent/MX2017012867A/es active IP Right Grant
- 2016-04-07 KR KR1020177027601A patent/KR102544032B1/ko active IP Right Grant
- 2016-04-07 JP JP2017552992A patent/JP2018512150A/ja active Pending
- 2016-04-07 CA CA2981925A patent/CA2981925A1/en active Pending
- 2016-04-07 US US15/564,774 patent/US20180104288A1/en not_active Abandoned
- 2016-04-07 ES ES16716896T patent/ES2743952T3/es active Active
- 2016-04-07 EP EP16716896.2A patent/EP3280798B1/en active Active
- 2016-04-07 BR BR112017021700-7A patent/BR112017021700A2/pt not_active Application Discontinuation
- 2016-04-07 CN CN201680020049.0A patent/CN107787364A/zh active Pending
- 2016-04-07 RU RU2017134519A patent/RU2720984C2/ru active
- 2016-04-07 WO PCT/GB2016/050973 patent/WO2016162675A1/en active Application Filing
-
2017
- 2017-10-02 IL IL254842A patent/IL254842B/en unknown
-
2018
- 2018-08-10 HK HK18110254.0A patent/HK1251009B/zh unknown
-
2019
- 2019-11-27 US US16/698,682 patent/US12023362B2/en active Active
-
2020
- 2020-12-02 JP JP2020199987A patent/JP7066812B2/ja active Active
Patent Citations (1)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
US20030099616A1 (en) | 2001-07-25 | 2003-05-29 | Irving John M. | Dual specificity tumor killing vectors driven by the telomerase promoter |
Non-Patent Citations (4)
Title |
---|
Cancer Gene Ther. (2005) vol.12, issue 6, p.528-539 |
Hum. Gene Ther. (2011) vol.22, no.11, p.1343-1353 |
Mol. Ther. (2003) vol.8, no.3, p.449-458 |
Mol. Ther. (2010) vol.18, no.10, p.1874-1884 |
Also Published As
Publication number | Publication date |
---|---|
CA2981925A1 (en) | 2016-10-13 |
EP3280798B1 (en) | 2019-06-19 |
RU2017134519A3 (ja) | 2019-10-10 |
KR102544032B1 (ko) | 2023-06-14 |
EP3280798A1 (en) | 2018-02-14 |
RU2720984C2 (ru) | 2020-05-15 |
RU2017134519A (ru) | 2019-04-04 |
CN107787364A (zh) | 2018-03-09 |
JP2021045152A (ja) | 2021-03-25 |
WO2016162675A1 (en) | 2016-10-13 |
JP2018512150A (ja) | 2018-05-17 |
HK1251009B (zh) | 2020-06-26 |
KR20180015113A (ko) | 2018-02-12 |
ES2743952T3 (es) | 2020-02-21 |
GB201505860D0 (en) | 2015-05-20 |
US20200155626A1 (en) | 2020-05-21 |
MX2017012867A (es) | 2018-05-11 |
IL254842A0 (en) | 2017-12-31 |
BR112017021700A2 (pt) | 2018-07-24 |
US12023362B2 (en) | 2024-07-02 |
US20180104288A1 (en) | 2018-04-19 |
IL254842B (en) | 2022-01-01 |
Similar Documents
Publication | Publication Date | Title |
---|---|---|
JP7066812B2 (ja) | 癌を治療するための治療用組成物及び使用方法 | |
US9744224B2 (en) | Methods for treating cancer by administration of nucleic acids encoding FAP and cancer antigens | |
JP2015523412A (ja) | 腫瘍細胞、GM‐CSFのトランスジェニック発現を伴う腫瘍溶解性ウイルスベクター、および免疫チェックポイントモジュレーターなどの成分の少なくとも2種または全3種の同時投与により作られる生のinvivo腫瘍特異的がんワクチンシステム | |
JP2019501205A (ja) | 腫瘍崩壊性ウイルス及びチェックポイント阻害剤の併用療法 | |
EP3256140B1 (en) | Compositions for ebola virus vaccination | |
CN112020368B (zh) | 修饰的腺病毒 | |
WO2019062250A1 (zh) | 包含分离的重组溶瘤腺病毒和nk细胞的治疗剂及应用、药盒、治疗肿瘤和/或癌症的方法 | |
JP2021510082A (ja) | 改変オルトポックスウイルスベクター | |
JP2019515019A (ja) | 偽型腫瘍溶解性ラブドウイルス及び併用療法におけるそれらの使用 | |
Luo et al. | Tumor-targeting oncolytic virus elicits potent immunotherapeutic vaccine responses to tumor antigens | |
JP4423508B2 (ja) | 癌遺伝子治療薬 | |
Santry et al. | Recombinant Newcastle disease viruses expressing immunological checkpoint inhibitors induce a pro-inflammatory state and enhance tumor-specific immune responses in two murine models of cancer | |
Guinn et al. | 8th international conference on oncolytic virus therapeutics | |
Kirchhammer | Tumor-targeted immunotherapy using an engineered adenoviral vector platform | |
Zhu et al. | Adenovirus vaccine targeting kinases induces potent antitumor immunity in solid tumors | |
Komant et al. | Oncolytic vaccinia virus as a precision cancer vaccine platform | |
Oosterhoff et al. | 594. Gene-directed enzyme therapy with carboxylesterase/CPT-11, but not thymidine kinase/GCV, enhances the efficacy of the conditionally replicating adenovirus Ad [Delta] 24 | |
Ad | 593. Recombinant Measles Viruses Encoding Suicide Genes for Oncolytic Therapy |
Legal Events
Date | Code | Title | Description |
---|---|---|---|
A521 | Request for written amendment filed |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A523 Effective date: 20201225 |
|
A621 | Written request for application examination |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A621 Effective date: 20201225 |
|
A131 | Notification of reasons for refusal |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A131 Effective date: 20211214 |
|
A521 | Request for written amendment filed |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A523 Effective date: 20220127 |
|
TRDD | Decision of grant or rejection written | ||
A01 | Written decision to grant a patent or to grant a registration (utility model) |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A01 Effective date: 20220405 |
|
A61 | First payment of annual fees (during grant procedure) |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A61 Effective date: 20220427 |
|
R150 | Certificate of patent or registration of utility model |
Ref document number: 7066812 Country of ref document: JP Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: R150 |