JP7055430B2 - 細胞の表現型特徴付け - Google Patents
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Description
[1]Kim et al., Miniaturized Antimicrobial Susceptibility Test by Combining Concentration Gradient Generation and Rapid Cell Culturing, Antibiotics, 2015, 4(4):455-466
[2]WO 2016/007068
[3]Baltekin et al., Fast Antibiotic Susceptibility Testing (FASTest) based on single cell growth rate measurements, bioRxiv preprint, 2016(doi.org/10.1101/071407)
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[5]Baltekin et al., Antibiotic susceptibility testing in less than 30 min using direct single-cell imaging, PNAS, 2017, 114(34):9170-9175
Claims (16)
- 細胞の表現型を決定する方法であって、
a)標的細胞が含まれる生体物質を含む生体試料を、空間的に画定され分離された細胞コンパートメント(20、120)を備えるマイクロ流体デバイス(1、100)に充填して(S1)、前記空間的に画定され分離された細胞コンパートメント(20、120)内の生体物質を捕捉すること、
b)前記空間的に画定され分離された細胞コンパートメント(20、120)内の生体物質を試験薬剤に曝す前に、前記空間的に画定され分離された細胞コンパートメント(20、120)内の生体物質を少なくとも1つの標的表現型特徴のためにモニターすること(S2)、
c)b)において前記空間的に画定され分離された細胞コンパートメント(20、120)内の生体物質の前記モニタリングに基づいて、決定された前記少なくとも1つの標的表現型特徴を示す標的細胞を含むとして前記空間的に画定され分離された細胞コンパートメント(20、120)のサブセット(20A)を識別すること(S3)、
d)前記空間的に画定され分離された細胞コンパートメント(20、120)内の生体物質を前記試験薬剤に曝すこと(S4)、
e)前記空間的に画定され分離された細胞コンパートメント(20、120)の前記識別されたサブセット(20A)内の標的細胞をモニターすること(S5)、および
f)e)において前記空間的に画定され分離された細胞コンパートメント(20、120)の前記識別されたサブセット(20A)内の標的細胞の前記モニタリングに基づいて、前記試験薬剤に対する前記標的細胞の表現型応答を決定すること(S6)の一方で前記空間的に画定され分離された細胞コンンパートメントの残りのサブセット内の生体物質のいずれの応答も無視すること
を含む、方法。 - 前記空間的に画定され分離された細胞コンパートメント(20、120)内の生体物質を培地に曝すこと(S10)をさらに含み、
生体物質をモニターすること(S2)が前記空間的に画定され分離された細胞コンパートメント(20、120)内の前記培地に曝された生体物質をモニターすること(S2)を含む、
請求項1に記載の方法。 - 生体物質を前記試験薬剤に曝すこと(S4)が前記空間的に画定され分離された細胞コンパートメント(20、120)内の生体物質を、前記試験薬剤を含む前記培地に、または前記試験薬剤を含む別の培地に曝すこと(S4)を含む、請求項2に記載の方法。
- 前記空間的に画定され分離された細胞コンパートメント(20、120)の前記サブセット(20A)を識別すること(S3)が、
b)において前記空間的に画定され分離された細胞コンパートメント(20、120)内の生体物質の前記モニタリングに基づいて決定された前記少なくとも1つの標的表現型特徴を示す標的細胞を識別すること(S20)、および
前記識別された標的細胞を含む前記空間的に画定され分離された細胞コンパートメント(20、120)のサブセット(20A)として、前記空間的に画定され分離された細胞コンパートメント(20、120)の前記サブセット(20A)を選択すること(S21)
を含む、請求項1~3のいずれかに記載の方法。 - 生体物質をモニターすること(S2)が複数の時間インスタンスで、前記空間的に画定され分離された細胞コンパートメント(20、120)内の生体物質をモニターすること(S2)を含む、請求項1~4のいずれかに記載の方法。
- 標的細胞をモニターすること(S5)が複数の時間インスタンスで、前記空間的に画定され分離された細胞コンパートメント(20、120)の前記識別されたサブセット(20A)内の標的細胞をモニターすること(S5)を含む、請求項1~5のいずれかに記載の方法。
- 生体物質をモニターすること(S2)が前記空間的に画定され分離された細胞コンパートメント(20、120)の少なくとも1つの画像を撮像すること(S2)を含む、請求項1~6のいずれかに記載の方法。
- 前記空間的に画定され分離された細胞コンパートメント(20、120)の前記サブセット(20A)を識別すること(S3)が、
前記空間的に画定され分離された細胞コンパートメント(20、120)および前記空間的に画定され分離された細胞コンパートメント(20、120)内の生体物質の検出のための前記少なくとも1つの画像を処理すること(S30)、
前記処理することに基づいて、前記空間的に画定され分離された細胞コンパートメント(20、120)内の生体物質の少なくとも1つの各表現型特徴を決定すること(S31)、
前記空間的に画定され分離された細胞コンパートメント(20、120)内の生体物質として、かつ前記少なくとも1つの標的表現型特徴に対応する少なくとも1つの各決定された表現型特徴を有する標的細胞を識別すること(S32)、ならびに
前記識別された標的細胞を含む前記空間的に画定され分離された細胞コンパートメント(20、120)のサブセット(20A)として、前記空間的に画定され分離された細胞コンパートメント(20、120)の前記サブセット(20A)を選択すること(S33)
を含む、請求項7に記載の方法。 - 前記生体試料を充填すること(S1)が前記空間的に画定され分離された細胞コンパートメント(20、120)内の生体物質を捕捉するために、前記標的細胞と非標的細胞とが含まれる生体物質を含む生体試料を前記マイクロ流体デバイス(1、100)に充填すること(S1)を含み、
前記空間的に画定され分離された細胞コンパートメント(20、120)の前記サブセット(20A)を識別すること(S3)が、
b)において前記空間的に画定され分離された細胞コンパートメント(20、120)内の生体物質の前記モニタリングに基づいて決定された前記少なくとも1つの標的表現型特徴を示す標的細胞を含むとして前記空間的に画定され分離された細胞コンパートメント(20、120)のサブセット(20A)を識別すること(S40)と、
b)において前記空間的に画定され分離された細胞コンパートメント(20、120)内の生体物質の前記モニタリングに基づいて決定された前記少なくとも1つの標的表現型特徴を示さない、非標的細胞および/または非細胞物質を含むとして、残りの空間的に画定され分離された細胞コンパートメント(20B)を識別すること(S41)と
を含み、ならびに
標的細胞をモニターすること(S5)が、
前記空間的に画定され分離された細胞コンパートメント(20、120)の少なくとも1つの画像を撮像すること(S42)と、
前記空間的に画定され分離された細胞コンパートメント(20、120)の前記識別されたサブセット(20A)および前記空間的に画定され分離された細胞コンパートメント(20、120)の前記識別されたサブセット(20A)内の標的細胞の検出のための前記少なくとも1つの画像を処理し(S43)、一方前記残りの空間的に画定され分離された細胞コンパートメント(20B)と、前記残りの空間的に画定され分離された細胞コンパートメント(20B)内の非標的細胞および/または非細胞物質とを無視することと
を含む、
請求項1~8のいずれかに記載の方法。 - 前記標的表現型特徴が増殖速度、形状、サイズ、経時的に増殖速度を規定する増殖速度曲線の形成、経時的に細胞長を規定する細胞長曲線の形成、経時的に細胞面積を規定する面積曲線の形成、色、光学密度、電気伝導度、熱産生、表面抗原組成、吸収スペクトル、およびそれらの混合からなる群から選択される、請求項1~9のいずれかに記載の方法。
- 標識プローブを前記空間的に画定され分離された細胞コンパートメント(20、120)に加えること(S50)をさらに含み、
生体物質をモニターすること(S2)が前記空間的に画定され分離された細胞コンパートメント(20、120)内の前記標識プローブをモニターすることを含み、および
前記空間的に画定され分離された細胞コンパートメント(20、120)の前記サブセット(20A)を識別すること(S3)が前記空間的に画定され分離された細胞コンパートメント(20、120)内の前記標識プローブの前記モニタリングに基づいて決定された少なくとも1つの標的表現型特徴を示す標的細胞を含むとして前記空間的に画定され分離された細胞コンパートメント(20、120)の前記サブセット(20A)を識別すること(S3)を含む、
請求項1~10のいずれかに記載の方法。 - 前記空間的に画定され分離された細胞コンパートメント(20、120)の前記サブセット(20A)を識別すること(S3)が少なくとも1つの第1の標的表現型特徴を示す標的細胞の第1の集団を含むとして前記空間的に画定され分離された細胞コンパートメント(20、120)の第1のサブセットと、前記空間的に画定され分離された細胞コンパートメント(20、120)内の生体物質の前記モニタリングに基づいて決定された少なくとも1つの第2の標的表現型特徴を示す標的細胞の第2の集団を含むとして前記空間的に画定され分離された細胞コンパートメント(20、120)の第2のサブセットとを識別することを含み、
標的細胞をモニターすること(S5)が前記空間的に画定され分離された細胞コンパートメント(20、120)の前記識別された第1のサブセット内の標的細胞の前記第1の集団と、前記空間的に画定され分離された細胞コンパートメント(20、120)の前記識別された第2のサブセット内の標的細胞の前記第2の集団とをモニターすること(S5)を含み、ならびに
前記表現型応答を決定すること(S6)が前記空間的に画定され分離された細胞コンパートメント(20、120)の前記識別された第1のサブセット内の標的細胞の前記第1の集団と、前記空間的に画定され分離された細胞コンパートメント(20、120)の前記識別された第2のサブセット内の標的細胞の前記第2の集団との前記モニタリングに基づいて、前記試験薬剤に対する、標的細胞の前記第1の集団および標的細胞の前記第2の集団の各表現型応答を決定すること(S6)を含む、
請求項1~11のいずれかに記載の方法。 - 前記試験薬剤が抗生物質であり、および
前記表現型応答を決定すること(S6)が前記空間的に画定され分離された細胞コンパートメント(20、120)の前記識別されたサブセット(20A)内の標的細胞の前記モニタリングに基づいて、前記標的細胞の前記抗生物質に対する感受性を決定すること(S6)を含む、
請求項1~12のいずれかに記載の方法。 - 前記試験薬剤が細胞増殖阻害薬であり、および
前記表現型応答を決定すること(S6)が前記空間的に画定され分離された細胞コンパートメント(20、120)の前記識別されたサブセット(20A)内の標的細胞の前記モニタリングに基づいて、前記標的細胞の前記細胞増殖阻害薬に対する感受性を決定すること(S6)を含む、
請求項1~12のいずれかに記載の方法。 - 前記マイクロ流体デバイス(1)が
細胞を収容する寸法を有する空間的に画定され分離された細胞チャネル(20)を有する基板(10)を含み、
前記空間的に画定され分離された細胞チャネル(20)の各第1の端部(22)が第1の流体ポート(31)と流体連結する第1の端部(32)および第2の流体ポート(33)と流体連結する第2の端部(34)を有する流入チャネル(30)と流体連結しており、
前記空間的に画定され分離された細胞チャネル(20)の各第2の端部(24)が第3の流体ポート(41)と流体連結している流出チャネル(40)と流体連結しており、および
前記空間的に画定され分離された細胞チャネル(20)が選択された細胞が各チャネル障害(25)を通過して、前記流出チャネル(40)に流入するのを防ぐよう設計された前記各チャネル障害(25)を含み、ならびに
前記生体試料を充填すること(S1)が前記生体試料を前記第1の流体ポート(31)に充填し(S1)、前記空間的に画定され分離された細胞チャネル(20)内の生体物質を前記チャネル障害(25)によって捕捉するために、過剰な生体試料を前記第3の流体ポート(41)、および任意選択で前記第2の流体ポート(33)から流出することを可能にすることを含む、
請求項1~14のいずれかに記載の方法。 - 生体物質を前記試験薬剤に曝すこと(S4)が前記試験薬剤を前記第2の流体ポート(33)に充填し(S4)、前記試験薬剤が前記流入チャネル(30)、前記空間的に画定され分離された細胞チャネル(20)、前記流出チャネル(40)を介して流れ、および前記第3の流体ポート(41)から、および任意選択で前記第1の流体ポート(31)から流出することを可能にすることを含む、請求項15に記載の方法。
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