JP7054694B2

JP7054694B2 - 誘導性カスパーゼおよび使用方法

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Publication number: JP7054694B2
Application number: JP2019518451A
Authority: JP
Inventors: エリックオスタータグ，; デボンシェドロック，
Original assignee: ポセイダセラピューティクス，インコーポレイテッド
Priority date: 2016-10-06
Filing date: 2017-10-06
Publication date: 2022-04-14
Anticipated expiration: 2037-10-06
Also published as: KR20190066616A; KR102447083B1; EP3523325A1; US11718656B2; IL265664A; US20230002469A1; IL265664B2; CN110267980A; JP2019528774A; CA3038708A1; US20190225667A1; MX2019003983A; BR112019006865A2; US11377480B2; US20230348553A1; RU2019113152A; WO2018068022A1; RU2019113152A3; AU2017339511B2; AU2017339511A1

Description

関連出願
本願は、２０１６年１０月６日に出願された米国仮出願６２／４０５，１８４号の利益を請求し、その内容は、その全体が参照によって本明細書に組み込まれる。

配列表の組み込み
提出された「ＰＯＴＨ－０１１＿００１ＷＯ＿ＳｅｑＬｉｓｔ．ｔｘｔ」という名称のテキストの内容は、その全体が参照によって本明細書に組み込まれる。

開示の分野
本開示は、分子生物学、より具体的には、誘導性カスパーゼタンパク質をコードする少なくとも１つの配列を含有する組成物、加えて、それを作製および使用する方法を対象とする。

遺伝子改変された細胞、特に、例えば養子細胞療法として被験体への投与を意図されたそれらの改変された細胞において、アポトーシスを選択的に誘導する方法についての、当技術分野における、長年にわたるが、まだ満たされていない要求がある。本開示は、この長年にわたるが、まだ満たされていない要求への解決法を提供する。

本開示は、二量体化の化学的誘導物質を結合するように最適化され得るリガンド結合領域に作動可能に連結した誘導性アポトーシス促進性ポリペプチドを提供する。そのリガンド結合領域がその誘導剤を特異的に結合したとき、アポトーシス促進性標的分子が架橋され、その結果として、活性化されて、本開示の誘導性アポトーシス促進性ポリペプチドを含有する細胞においてアポトーシスを選択的に誘導する。本開示の好ましい誘導性アポトーシス促進性ポリペプチドには、誘導性カスパーゼポリペプチドが挙げられるが、それらに限定されない。本開示の好ましい誘導性カスパーゼポリペプチドには、誘導性カスパーゼ９ポリペプチドが挙げられるが、それらに限定されない。本開示の好ましい誘導性カスパーゼ９ポリペプチドは、トランケート型カスパーゼ９ポリペプチドをコードする、トランケートされた、または改変されたアミノ酸および／または核酸配列によってコードされたトランケート型カスパーゼ９ポリペプチドを含み得る。

本開示の誘導性アポトーシス促進性ポリペプチドは、既存の誘導性ポリペプチドよりも免疫原性がはるかに低いので、本開示の誘導性アポトーシス促進性ポリペプチドは、既存の誘導性ポリペプチドよりも優れている。本開示の誘導性アポトーシス促進性ポリペプチドは組換えポリペプチドであり、それゆえに、天然に存在しないが、本開示の誘導性アポトーシス促進性ポリペプチドを産生するように組換えられている配列は、宿主ヒト免疫系が「非自己」として認識し、その結果として、本開示の誘導性アポトーシス促進性ポリペプチド、該誘導性アポトーシス促進性ポリペプチドを含む細胞、または該誘導性アポトーシス促進性ポリペプチドもしくは該誘導性アポトーシス促進性ポリペプチドを含む細胞を含む組成物を受けた被験体において免疫応答を誘導することができる非ヒト配列を含まない。リンカー配列は人工配列であるが、リンカー配列は、非ヒト配列を含まない。例えば、リンカー配列は制限部位を含まない。

本開示は、（ａ）リガンド結合領域、（ｂ）リンカー、および（ｃ）アポトーシス促進性ポリペプチドを含む誘導性アポトーシス促進性ポリペプチドであって、該誘導性アポトーシス促進性ポリペプチドが、非ヒト配列を含まない、誘導性アポトーシス促進性ポリペプチドを提供する。ある特定の実施形態では、非ヒト配列は、制限部位を含む。ある特定の実施形態では、リガンド結合領域は多量体リガンド結合領域であり得る。

本開示は、（ａ）リガンド結合領域、（ｂ）リンカー、および（ｃ）カスパーゼポリペプチドを含む誘導性カスパーゼポリペプチドであって、該誘導性アポトーシス促進性ポリペプチドが、非ヒト配列を含まない、誘導性カスパーゼポリペプチドを提供する。ある特定の実施形態では、非ヒト配列は、制限部位を含む。ある特定の実施形態では、リガンド結合領域は多量体リガンド結合領域であり得る。

本開示は、（ａ）リガンド結合領域、（ｂ）リンカー、および（ｃ）トランケート型カスパーゼ９ポリペプチドを含む誘導性カスパーゼポリペプチドであって、該誘導性アポトーシス促進性ポリペプチドが、非ヒト配列を含まない、誘導性カスパーゼポリペプチドを提供する。ある特定の実施形態では、非ヒト配列は、制限部位を含む。ある特定の実施形態では、リガンド結合領域は多量体リガンド結合領域であり得る。

誘導性カスパーゼポリペプチドのある特定の実施形態では、リガンド結合領域は、誘導剤を特異的に結合し、本開示のアポトーシス促進性ポリペプチド（例えば、カスパーゼポリペプチド）の転写を活性化し得る。例えば、リガンド結合領域は、治療剤を結合しない。本開示の誘導性ポリペプチドのリガンド結合領域により特異的に結合された誘導剤は、内因性遺伝子の転写を直接的には誘導しない。

本開示の誘導性アポトーシス促進性（例えば、カスパーゼ）ポリペプチドは、１つまたは複数の転写制御エレメントの調節下にあり得、その転写制御エレメントには、本開示の誘導性カスパーゼポリペプチドを含有するように改変された細胞においてカスパーゼポリペプチドの転写を開始する能力があるプロモーターが挙げられるが、それに限定されない。例えば、本開示の誘導性カスパーゼポリペプチドは、１つまたは複数の転写制御エレメントの調節下にあり得、その転写制御エレメントには、本開示の誘導性カスパーゼポリペプチドを含有するように改変された哺乳動物細胞においてカスパーゼポリペプチドの転写を開始する能力がある哺乳動物プロモーターが挙げられるが、それに限定されない。例えば、本開示の誘導性カスパーゼポリペプチドは、１つまたは複数の転写制御エレメントの調節下にあり得、その転写制御エレメントには、本開示の誘導性カスパーゼポリペプチドを含有するように改変された哺乳動物細胞においてカスパーゼポリペプチドの転写を開始する能力がある異種性または外因性プロモーターが挙げられるが、それに限定されない。好ましい哺乳動物細胞には、ヒト細胞が挙げられるが、それらに限定されない。

本開示は、（ａ）リガンド結合領域、（ｂ）リンカー、および（ｃ）トランケート型カスパーゼ９ポリペプチドを含む誘導性カスパーゼポリペプチドであって、該誘導性アポトーシス促進性ポリペプチドが、非ヒト配列を含まない、誘導性カスパーゼポリペプチドを提供する。ある特定の実施形態では、リガンド結合領域は多量体リガンド結合領域であり得る。

本開示の誘導性アポトーシス促進性ポリペプチド、誘導性カスパーゼポリペプチド、またはトランケート型カスパーゼ９ポリペプチドのある特定の実施形態では、リガンド結合領域は、ＦＫ５０６結合タンパク質１２（ＦＫＢＰ１２）ポリペプチドを含み得る。ある特定の実施形態では、ＦＫ５０６結合タンパク質１２（ＦＫＢＰ１２）ポリペプチドを含むリガンド結合領域のアミノ酸配列は、その配列の３６位において改変を含み得る。その改変は、３６位におけるフェニルアラニン（Ｆ）からバリン（Ｖ）への置換（Ｆ３６Ｖ）であり得る。ある特定の実施形態では、ＦＫＢＰ１２ポリペプチドは、GVQVETISPGDGRTFPKRGQTCVVHYTGMLEDGKKVDSSRDRNKPFKFMLGKQEVIRGWEEGVAQMSVGQRAKLTISPDYAYGATGHPGIIPPHATLVFDVELLKLE（配列番号３）を含むアミノ酸配列によってコードされる。ある特定の実施形態では、ＦＫＢＰ１２ポリペプチドは、GGGGTCCAGGTCGAGACTATTTCACCAGGGGATGGGCGAACATTTCCAAAAAGGGGCCAGACTTGCGTCGTGCATTACACCGGGATGCTGGAGGACGGGAAGAAAGTGGACAGCTCCAGGGATCGCAACAAGCCCTTCAAGTTCATGCTGGGAAAGCAGGAAGTGATCCGAGGATGGGAGGAAGGCGTGGCACAGATGTCAGTCGGCCAGCGGGCCAAACTGACCATTAGCCCTGACTACGCTTATGGAGCAACAGGCCACCCAGGGATCATTCCCCCTCATGCCACCCTGGTCTTCGAT GTGGAACTGCTGAAGCTGGAG（配列番号４）を含む核酸配列によってコードされる。ある特定の実施形態では、３６位においてフェニルアラニン（Ｆ）からバリン（Ｖ）への置換（Ｆ３６Ｖ）を有するＦＫ５０６結合タンパク質１２（ＦＫＢＰ１２）ポリペプチドを含み得るリガンド結合領域に特異的な誘導剤は、ＡＰ２０１８７および／またはＡＰ１９０３（Ｒｉｍｉｄｕｃｉｄ）を含み、それらはどちらも合成薬物である。

本開示の誘導性アポトーシス促進性ポリペプチド、誘導性カスパーゼポリペプチド、またはトランケート型カスパーゼ９ポリペプチドのある特定の実施形態では、リンカー領域は、ＧＧＧＧＳ（配列番号５）を含むアミノ酸配列またはＧＧＡＧＧＡＧＧＡＧＧＡＴＣＣ（配列番号６）を含む核酸配列によってコードされる。ある特定の実施形態では、リンカーをコードする核酸配列は制限部位を含まない。

本開示のトランケート型カスパーゼ９ポリペプチドのある特定の実施形態では、トランケート型カスパーゼ９ポリペプチドは、配列の８７位においてアルギニン（Ｒ）を含まないアミノ酸配列によってコードされる。代替として、または加えて、本開示の誘導性アポトーシス促進性ポリペプチド、誘導性カスパーゼポリペプチド、またはトランケート型カスパーゼ９ポリペプチドのある特定の実施形態では、トランケート型カスパーゼ９ポリペプチドは、配列の２８２位においてアラニン（Ａ）を含まないアミノ酸配列によってコードされる。本開示の誘導性アポトーシス促進性ポリペプチド、誘導性カスパーゼポリペプチド、またはトランケート型カスパーゼ９ポリペプチドのある特定の実施形態では、トランケート型カスパーゼ９ポリペプチドは、GFGDVGALESLRGNADLAYILSMEPCGHCLIINNVNFCRESGLRTRTGSNIDCEKLRRRFSSLHFMVEVKGDLTAKKMVLALLELAQQDHGALDCCVVVILSHGCQASHLQFPGAVYGTDGCPVSVEKIVNIFNGTSCPSLGGKPKLFFIQACGGEQKDHGFEVASTSPEDESPGSNPEPDATPFQEGLRTFDQLDAISSLPTPSDIFVSYSTFPGFVSWRDPKSGSWYVETLDDIFEQWAHSEDLQSLLLRVANAVSVKGIYKQMPGCFNFLRKKLFFKTS （配列番号７）を含むアミノ酸配列、またはTTTGGGGACGTGGGGGCCCTGGAGTCTCTGCGAGGAAATGCCGATCTGGCTTACATCCTGAGCATGGAACCCTGCGGCCACTGTCTGATCATTAACAATGTGAACTTCTGCAGAGAAAGCGGACTGCGAACACGGACTGGCTCCAATATTGACTGTGAGAAGCTGCGGAGAAGGTTCTCTAGTCTGCACTTTATGGTCGAAGTGAAAGGGGATCTGACCGCCAAGAAAATGGTGCTGGCCCTGCTGGAGCTGGCTCAGCAGGACCATGGAGCTCTGGATTGCTGCGTGGTCGTGATCCTGTCCCACGGGTGCCAGGCTTCTCATCTGCAGTTCCCCGGAGCAGTGTACGGAACAGACGGCTGTCCTGTCAGCGTGGAGAAGATCGTCAACATCTTCAACGGCACTTCTTGCCCTAGTCTGGGGGGAAAGCCAAAACTGTTCTTTATCCAGGCCTGTGGCGGGGAACAGAAAGATCACGGCTTCGAGGTGGCCAGCACCAGCCCTGAGGACGAATCACCAGGGAGCAACCCTGAACCAGATGCAACTCCATTCCAGGAGGGACTGAGGACCTTTGACCAGCTGGATGCTATCTCAAGCCTGCCCACTCCTAGTGACATTTTCGTGTCTTACAGTACCTTCCCAGGCTTTGTCTCATGGCGCGATCCCAAGTCAGGGAGCTGGTACGTGGAGACACTGGACGACATCTTTGAACAGTGGGCCCATTCAGAGGACCTGCAGAGCCTGCTGCTGCGAGTGGCAAACGCTGTCTCTGTGAAGGGCATCTACAAACAGATGCCCGGGTGCTTCAATTTTCTGAGAAAGAAACTGTTCTTTAAGACTTCC（配列番号８）を含む核酸配列によってコードされる。

トランケート型カスパーゼ９ポリペプチドを含む、誘導性アポトーシス促進性ポリペプチドのある特定の実施形態では、誘導性アポトーシス促進性ポリペプチドは、GVQVETISPGDGRTFPKR GQTCVVHYTGMLEDGKKVDSSRDRNKPFKFMLGKQEVIRGWEEGVAQMSVGQRAKLTISPDYAYGATGHPGIIPPHATLVFDVELLKLEGGGGSGFGDVGALESLRGNADLAYILSMEPCGHCLIINNVNFCRESGLRTRTGSNIDCEKLRRRFSSLHFMVEVKGDLTAKKMVLALLELAQQDHGALDCCVVVILSHGCQASHLQFPGAVYGTDGCPVSVEKIVNIFNGTSCPSLGGKPKLFFIQACGGEQKDHGFEVASTSPEDESPGSNPEPDATPFQEGLRTFDQLDAISSLPTPSDIFVSYSTFPGFVSWRDPKSGSWYVETLDDIFEQWAHSEDLQSLLLRVANAVSVKGIYKQMPGCFNFLRKKLFFKTS（配列番号９）を含むアミノ酸配列、またはGGGGTCCAGGTCGAGACTATTTCACCAGGGGATGGGCGAACATTTCCAAAAAGGGGCCAGACTTGCGTCGTGCATTACACCGGGATGCTGGAGGACGGGAAGAAAGTGGACAGCTCCAGGGATCGCAACAAGCCCTTCAAGTTCATGCTGGGAAAGCAGGAAGTGATCCGAGGATGGGAGGAAGGCGTGGCACAGATGTCAGTCGGCCAGCGGGCCAAACTGACCATTAGCCCTGACTACGCTTATGGAGCAACAGGCCACCCAGGGATCATTCCCCCTCATGCCACCCTGGTCTTCGATGTGGAACTGCTGAAGCTGGAGGGAGGAGGAGGATCCGGATTTGGGGACGTGGGGGCCCTGGAGTCTCTGCGAGGAAATGCCGATCTGGCTTACATCCTGAGCATGGAACCCTGCGGCCACTGTCTGATCATTAACAATGTGAACTTCTGCAGAGAAAGCGGACTGCGAACACGGACTGGCTCCAATATTGACTGTGAGAAGCTGCGGAGAAGGTTCTCTAGTCTGCACTTTATGGTCGAAGTGAAAGGGGATCTGACCGCCAAGAAAATGGTGCTGGCCCTGCTGGAGCTGGCTCAGCAGGACCATGGAGCTCTGGATTGCTGCGTGGTCGTGATCCTGTCCCACGGGTGCCAGGCTTCTCATCTGCAGTTCCCCGGAGCAGTGTACGGAACAGACGGCTGTCCTGTCAGCGTGGAGAAGATCGTCAACATCTTCAACGGCACTTCTTGCCCTAGTCTGGGGGGAAAGCCAAAACTGTTCTTTATCCAGGCCTGTGGCGGGGAACAGAAAGATCACGGCTTCGAGGTGGCCAGCACCAGCCCTGAGGACGAATCACCAGGGAGCAACCCTGAACCAGATGCAACTCCATTCCAGGAGGGACTGAGGACCTTTGACCAGCTGGATGCTATCTCAAGCCTGCCCACTCCTAGTGACATTTTCGTGTCTTACAGTACCTTCCCAGGCTTTGTCTCATGGCGCGATCCCAAGTCAGGGAGCTGGTACGTGGAGACACTGGACGACATCTTTGAACAGTGGGCCCATTCAGAGGACCTGCAGAGCCTGCTGCTGCGAGTGGCAAACGCTGTCTCTGTGAAGGGCATCTACAAACAGATGCCCGGGTGCTTCAATTTTCTGAGAAAGAAACTGTTCTTTAAGACTTCC（配列番号１０）を含む核酸配列によってコードされる。

本開示は、本開示の誘導性アポトーシス促進性ポリペプチド、誘導性カスパーゼポリペプチド、誘導性カスパーゼ９ポリペプチド、および／または誘導性トランケート型カスパーゼ９ポリペプチドを含む組成物を提供する。

本開示は、本開示の誘導性アポトーシス促進性ポリペプチド、誘導性カスパーゼポリペプチド、誘導性カスパーゼ９ポリペプチド、および／または誘導性トランケート型カスパーゼ９ポリペプチドを含むトランスポゾンを提供する。

本開示は、本開示の誘導性アポトーシス促進性ポリペプチド、誘導性カスパーゼポリペプチド、誘導性カスパーゼ９ポリペプチド、および／または誘導性トランケート型カスパーゼ９ポリペプチドを含むトランスポゾンを提供する。本開示のトランスポゾンのある特定の実施形態では、トランスポゾンは、治療用タンパク質をコードする配列をさらに含む。ある特定の実施形態では、治療用タンパク質は、天然に存在する。ある特定の実施形態では、治療用タンパク質は内因性タンパク質である。ある特定の実施形態では、治療用タンパク質は外因性タンパク質である。

本開示は、本開示の誘導性アポトーシス促進性ポリペプチド、誘導性カスパーゼポリペプチド、誘導性カスパーゼ９ポリペプチド、および／または誘導性トランケート型カスパーゼ９ポリペプチドを含むトランスポゾンを提供する。本開示のトランスポゾンのある特定の実施形態では、トランスポゾンは、治療用タンパク質をコードする配列をさらに含む。ある特定の実施形態では、治療用タンパク質は、天然に存在しない。ある特定の実施形態では、治療用タンパク質は内因性タンパク質である。ある特定の実施形態では、治療用タンパク質は外因性タンパク質である。ある特定の実施形態では、治療用タンパク質は合成タンパク質である。ある特定の実施形態では、治療用タンパク質はキメラタンパク質または組換えタンパク質である。ある特定の実施形態では、治療用タンパク質は融合タンパク質である。ある特定の実施形態では、治療用タンパク質は、ヒトタンパク質、野生型タンパク質、またはそれらの配列バリアントである。

本開示は、本開示の誘導性アポトーシス促進性ポリペプチド、誘導性カスパーゼポリペプチド、誘導性カスパーゼ９ポリペプチド、および／または誘導性トランケート型カスパーゼ９ポリペプチドを含むトランスポゾンを提供する。本開示のトランスポゾンのある特定の実施形態では、トランスポゾンは、治療用タンパク質をコードする配列をさらに含む。ある特定の実施形態では、治療用タンパク質は、細胞表面タンパク質、膜結合型タンパク質、細胞外膜結合型タンパク質、細胞内膜結合型タンパク質、細胞内タンパク質、核局在化タンパク質、核タンパク質、細胞質タンパク質、サイトゾルタンパク質、分泌タンパク質、リソソームタンパク質、エンドソームタンパク質、小胞結合タンパク質、ミトコンドリアタンパク質、小胞体タンパク質、細胞骨格タンパク質、細胞内シグナル伝達に関与するタンパク質、および／または細胞外シグナル伝達に関与するタンパク質を含む。

本開示は、本開示の誘導性アポトーシス促進性ポリペプチド、誘導性カスパーゼポリペプチド、誘導性カスパーゼ９ポリペプチド、および／または誘導性トランケート型カスパーゼ９ポリペプチドを含むトランスポゾンを提供する。本開示のトランスポゾンのある特定の実施形態では、トランスポゾンは、治療用タンパク質をコードする配列をさらに含む。ある特定の実施形態では、治療用タンパク質は、抗原受容体を含む。ある特定の実施形態では、抗原受容体は、Ｔ細胞受容体を含む。ある特定の実施形態では、抗原受容体は、Ｔ細胞受容体から単離され、またはそれに由来する受容体を含む。ある特定の実施形態では、抗原受容体は、野生型Ｔ細胞受容体と比較して、１つまたは複数の配列変形形態および／または変異を含む。ある特定の実施形態では、Ｔ細胞受容体は、組換えＴ細胞受容体である。

本開示は、本開示の誘導性アポトーシス促進性ポリペプチド、誘導性カスパーゼポリペプチド、誘導性カスパーゼ９ポリペプチド、および／または誘導性トランケート型カスパーゼ９ポリペプチドを含むトランスポゾンを提供する。本開示のトランスポゾンのある特定の実施形態では、トランスポゾンは、治療用タンパク質をコードする配列をさらに含む。ある特定の実施形態では、抗原受容体はキメラ抗原受容体（ＣＡＲ）である。ある特定の実施形態では、ＣＡＲは、１つまたは複数のセンチリン配列（Centyrin sequence）を含む。ある特定の実施形態では、ＣＡＲはＣＡＲＴｙｒｉｎである。ある特定の実施形態では、ＣＡＲは１つまたは複数のＶＨＨ配列を含む。ある特定の実施形態では、ＣＡＲはＶＣＡＲである。

ある特定の実施形態では、本開示のトランスポゾンは、少なくとも１つの自己切断性ペプチドをさらに含み得る。ある特定の実施形態では、本開示のトランスポゾンは、少なくとも１つの自己切断性ペプチドを含み得、その場合、自己切断性ペプチドが、そのトランスポゾンにおいて、本開示の誘導性アポトーシス促進性ポリペプチド、誘導性カスパーゼポリペプチド、誘導性カスパーゼ９ポリペプチド、および／または誘導性トランケート型カスパーゼ９ポリペプチドと、別の配列との間に位置する。ある特定の実施形態では、本開示のトランスポゾンは、少なくとも１つの自己切断性ペプチドを含み得、その場合、自己切断性ペプチドが、本開示の誘導性アポトーシス促進性ポリペプチド、誘導性カスパーゼポリペプチド、誘導性カスパーゼ９ポリペプチド、および／または誘導性トランケート型カスパーゼ９ポリペプチドの上流に位置し、第２の自己切断性ペプチドが、本開示の誘導性アポトーシス促進性ポリペプチド、誘導性カスパーゼポリペプチド、誘導性カスパーゼ９ポリペプチド、および／または誘導性トランケート型カスパーゼ９ポリペプチドの下流に位置する。ある特定の実施形態では、本開示のトランスポゾンは、少なくとも１つの自己切断性ペプチドを含み得、その場合、自己切断性ペプチドが、本開示の誘導性アポトーシス促進性ポリペプチド、誘導性カスパーゼポリペプチド、誘導性カスパーゼ９ポリペプチド、および／または誘導性トランケート型カスパーゼ９ポリペプチドのすぐ上流に位置し、第２の自己切断性ペプチドが、本開示の誘導性アポトーシス促進性ポリペプチド、誘導性カスパーゼポリペプチド、誘導性カスパーゼ９ポリペプチド、および／または誘導性トランケート型カスパーゼ９ポリペプチドのすぐ下流に位置する。少なくとも１つの自己切断性ペプチドは、Ｔ２Ａペプチド、ＧＳＧ－Ｔ２Ａペプチド、Ｅ２Ａペプチド、ＧＳＧ－Ｅ２Ａペプチド、Ｆ２Ａペプチド、ＧＳＧ－Ｆ２Ａペプチド、Ｐ２Ａペプチド、またはＧＳＧ－Ｐ２Ａペプチドを含み得る。ある特定の実施形態では、Ｔ２Ａペプチドは、ＥＧＲＧＳＬＬＴＣＧＤＶＥＥＮＰＧＰ（配列番号１１）を含むアミノ酸配列を含む。ある特定の実施形態では、ＧＳＧ－Ｔ２Ａペプチドは、ＧＳＧＥＧＲＧＳＬＬＴＣＧＤＶＥＥＮＰＧＰ（配列番号１２）を含むアミノ酸配列を含む。ある特定の実施形態では、Ｅ２Ａペプチドは、ＱＣＴＮＹＡＬＬＫＬＡＧＤＶＥＳＮＰＧＰ（配列番号１３）を含むアミノ酸配列を含む。ある特定の実施形態では、ＧＳＧ－Ｅ２Ａペプチドは、ＧＳＧＱＣＴＮＹＡＬＬＫＬＡＧＤＶＥＳＮＰＧＰ（配列番号１４）を含むアミノ酸配列を含む。ある特定の実施形態では、Ｆ２Ａペプチドは、ＶＫＱＴＬＮＦＤＬＬＫＬＡＧＤＶＥＳＮＰＧＰ（配列番号１５）を含むアミノ酸配列を含む。ある特定の実施形態では、ＧＳＧ－Ｆ２Ａペプチドは、ＧＳＧＶＫＱＴＬＮＦＤＬＬＫＬＡＧＤＶＥＳＮＰＧＰ（配列番号１６）を含むアミノ酸配列を含む。ある特定の実施形態では、Ｐ２Ａペプチドは、ＡＴＮＦＳＬＬＫＱＡＧＤＶＥＥＮＰＧＰ（配列番号１７）を含むアミノ酸配列を含む。ある特定の実施形態では、ＧＳＧ－Ｐ２Ａペプチドは、ＧＳＧＡＴＮＦＳＬＬＫＱＡＧＤＶＥＥＮＰＧＰ（配列番号１８）を含むアミノ酸配列を含む。

本開示は、本開示のトランスポゾンを含む組成物を提供する。トランスポゾンを含む組成物のある特定の実施形態では、組成物は、トランスポザーゼ酵素をコードする配列を含むプラスミドをさらに含み得る。トランスポザーゼ酵素をコードする配列はｍＲＮＡ配列であり得る。ある特定の実施形態では、トランスポゾンはｐｉｇｇｙＢａｃトランスポゾンである。ある特定の実施形態では、トランスポゾンは、ｐｉｇｇｙＢａｃトランスポゾンであり、トランスポザーゼはＳｕｐｅｒｐｉｇｇｙＢａｃトランスポザーゼである。

本開示のトランスポゾンは、ｐｉｇｇｙＢａｃトランスポゾンを含み得る。この方法のある特定の実施形態では、トランスポゾンは、２つのシス制御性インスレーターエレメントによって挟まれている、本開示の誘導性カスパーゼポリペプチドをコードする配列を含むプラスミドＤＮＡトランスポゾンである。ある特定の実施形態では、トランスポゾンはｐｉｇｇｙＢａｃトランスポゾンである。本開示のトランスポザーゼ酵素には、ｐｉｇｇｙＢａｃトランスポザーゼまたは適合酵素が挙げられ得る。ある特定の実施形態、特に、トランスポゾンがｐｉｇｇｙＢａｃトランスポゾンである実施形態では、トランスポザーゼは、ｐｉｇｇｙＢａｃ（商標）またはＳｕｐｅｒｐｉｇｇｙＢａｃ（商標）（ＳＰＢ）トランスポザーゼである。ある特定の実施形態、特に、トランスポザーゼがＳｕｐｅｒｐｉｇｇｙＢａｃ（商標）（ＳＰＢ）トランスポザーゼである実施形態では、トランスポザーゼ酵素をコードする配列はｍＲＮＡ配列である。

本開示の方法のある特定の実施形態では、トランスポザーゼ酵素はｐｉｇｇｙＢａｃ（商標）（ＰＢ）トランスポザーゼ酵素である。ｐｉｇｇｙＢａｃ（ＰＢ）トランスポザーゼ酵素は、以下と少なくとも７５％、８０％、８５％、９０％、９５％、９９％、またはその間の任意のパーセンテージで同一であるアミノ酸配列を含み、またはそれからなり得る：

本開示の方法のある特定の実施形態では、トランスポザーゼ酵素は、以下の配列の３０位、１６５位、２８２位、または５３８位の１つまたは複数においてアミノ酸置換を有するアミノ酸配列を含むまたはそれからなるｐｉｇｇｙＢａｃ（商標）（ＰＢ）トランスポザーゼ酵素である：

ある特定の実施形態では、トランスポザーゼ酵素は、配列番号１の配列の３０位、１６５位、２８２位、または５３８位の２つまたはそれより多くにおいてアミノ酸置換を有するアミノ酸配列を含むまたはそれからなるｐｉｇｇｙＢａｃ（商標）（ＰＢ）トランスポザーゼ酵素である。ある特定の実施形態では、トランスポザーゼ酵素は、配列番号１の配列の３０位、１６５位、２８２位、または５３８位の３つまたはそれより多くにおいてアミノ酸置換を有するアミノ酸配列を含むまたはそれからなるｐｉｇｇｙＢａｃ（商標）（ＰＢ）トランスポザーゼ酵素である。ある特定の実施形態では、トランスポザーゼ酵素は、配列番号１の配列の以下の位置、３０位、１６５位、２８２位、および５３８位のそれぞれにおいてアミノ酸置換を有するアミノ酸配列を含むまたはそれからなるｐｉｇｇｙＢａｃ（商標）（ＰＢ）トランスポザーゼ酵素である。ある特定の実施形態では、配列番号１の配列の３０位におけるアミノ酸置換は、イソロイシン（Ｉ）からバリン（Ｖ）への置換である。ある特定の実施形態では、配列番号１の配列の１６５位におけるアミノ酸置換は、グリシン（Ｇ）からセリン（Ｓ）への置換である。ある特定の実施形態では、配列番号１の配列の２８２位におけるアミノ酸置換は、メチオニン（Ｍ）からバリン（Ｖ）への置換である。ある特定の実施形態では、配列番号１の配列の５３８位におけるアミノ酸置換は、アスパラギン（Ｎ）からリシン（Ｋ）への置換である。

本開示の方法のある特定の実施形態では、トランスポザーゼ酵素はＳｕｐｅｒｐｉｇｇｙＢａｃ（商標）（ＳＰＢ）トランスポザーゼ酵素である。ある特定の実施形態では、本開示のＳｕｐｅｒｐｉｇｇｙＢａｃ（商標）（ＳＰＢ）トランスポザーゼ酵素は、配列番号１の配列のアミノ酸配列を含み、またはそれからなり得、３０位におけるアミノ酸置換がイソロイシン（Ｉ）からバリン（Ｖ）への置換であり、１６５位におけるアミノ酸置換がグリシン（Ｇ）からセリン（Ｓ）への置換であり、２８２位におけるアミノ酸置換がメチオニン（Ｍ）からバリン（Ｖ）への置換であり、５３８位におけるアミノ酸置換がアスパラギン（Ｎ）からリシン（Ｋ）への置換である。ある特定の実施形態では、ＳｕｐｅｒｐｉｇｇｙＢａｃ（商標）（ＳＰＢ）トランスポザーゼ酵素は、以下と少なくとも７５％、８０％、８５％、９０％、９５％、９９％、またはその間の任意のパーセンテージで同一であるアミノ酸配列を含み、またはそれからなり得る：

トランスポザーゼが３０位、１６５位、２８２位、および／または５３８位において上記の変異を含む実施形態を含む、本開示の方法のある特定の実施形態では、ｐｉｇｇｙＢａｃ（商標）またはＳｕｐｅｒｐｉｇｇｙＢａｃ（商標）トランスポザーゼ酵素は、配列番号１または配列番号２の配列の３位、４６位、８２位、１０３位、１１９位、１２５位、１７７位、１８０位、１８５位、１８７位、２００位、２０７位、２０９位、２２６位、２３５位、２４０位、２４１位、２４３位、２５８位、２９６位、２９８位、３１１位、３１５位、３１９位、３２７位、３２８位、３４０位、４２１位、４３６位、４５６位、４７０位、４８６位、５０３位、５５２位、５７０位、および５９１位の１つまたは複数におけるアミノ酸置換をさらに含み得る。トランスポザーゼが３０位、１６５位、２８２位、および／または５３８位において上記の変異を含む実施形態を含む、ある特定の実施形態では、ｐｉｇｇｙＢａｃ（商標）またはＳｕｐｅｒｐｉｇｇｙＢａｃ（商標）トランスポザーゼ酵素は、４６位、１１９位、１２５位、１７７位、１８０位、１８５位、１８７位、２００位、２０７位、２０９位、２２６位、２３５位、２４０位、２４１位、２４３位、２９６位、２９８位、３１１位、３１５位、３１９位、３２７位、３２８位、３４０位、４２１位、４３６位、４５６位、４７０位、４８５位、５０３位、５５２位、および５７０位の１つまたは複数におけるアミノ酸置換をさらに含み得る。ある特定の実施形態では、配列番号１または配列番号２の３位におけるアミノ酸置換は、セリン（Ｓ）からアスパラギン（Ｎ）への置換である。ある特定の実施形態では、配列番号１または配列番号２の４６位におけるアミノ酸置換は、アラニン（Ａ）からセリン（Ｓ）への置換である。ある特定の実施形態では、配列番号１または配列番号２の４６位におけるアミノ酸置換は、アラニン（Ａ）からスレオニン（Ｔ）への置換である。ある特定の実施形態では、配列番号１または配列番号２の８２位におけるアミノ酸置換は、イソロイシン（Ｉ）からトリプトファン（Ｗ）への置換である。ある特定の実施形態では、配列番号１または配列番号２の１０３位におけるアミノ酸置換は、セリン（Ｓ）からプロリン（Ｐ）への置換である。ある特定の実施形態では、配列番号１または配列番号２の１１９位におけるアミノ酸置換は、アルギニン（Ｒ）からプロリン（Ｐ）への置換である。ある特定の実施形態では、配列番号１または配列番号２の１２５位におけるアミノ酸置換は、システイン（Ｃ）からアラニン（Ａ）への置換である。ある特定の実施形態では、配列番号１または配列番号２の１２５位におけるアミノ酸置換は、システイン（Ｃ）からロイシン（Ｌ）への置換である。ある特定の実施形態では、配列番号１または配列番号２の１７７位におけるアミノ酸置換は、チロシン（Ｙ）からリシン（Ｋ）への置換である。ある特定の実施形態では、配列番号１または配列番号２の１７７位におけるアミノ酸置換は、チロシン（Ｙ）からヒスチジン（Ｈ）への置換である。ある特定の実施形態では、配列番号１または配列番号２の１８０位におけるアミノ酸置換は、フェニルアラニン（Ｆ）からロイシン（Ｌ）への置換である。ある特定の実施形態では、配列番号１または配列番号２の１８０位におけるアミノ酸置換は、フェニルアラニン（Ｆ）からイソロイシン（Ｉ）への置換である。ある特定の実施形態では、配列番号１または配列番号２の１８０位におけるアミノ酸置換は、フェニルアラニン（Ｆ）からバリン（Ｖ）への置換である。ある特定の実施形態では、配列番号１または配列番号２の１８５位におけるアミノ酸置換は、メチオニン（Ｍ）からロイシン（Ｌ）への置換である。ある特定の実施形態では、配列番号１または配列番号２の１８７位におけるアミノ酸置換は、アラニン（Ａ）からグリシン（Ｇ）への置換である。ある特定の実施形態では、配列番号１または配列番号２の２００位におけるアミノ酸置換は、フェニルアラニン（Ｆ）からトリプトファン（Ｗ）への置換である。ある特定の実施形態では、配列番号１または配列番号２の２０７位におけるアミノ酸置換は、バリン（Ｖ）からプロリン（Ｐ）への置換である。ある特定の実施形態では、配列番号１または配列番号２の２０９位におけるアミノ酸置換は、バリン（Ｖ）からフェニルアラニン（Ｆ）への置換である。ある特定の実施形態では、配列番号１または配列番号２の２２６位におけるアミノ酸置換は、メチオニン（Ｍ）からフェニルアラニン（Ｆ）への置換である。ある特定の実施形態では、配列番号１または配列番号２の２３５位におけるアミノ酸置換は、ロイシン（Ｌ）からアルギニン（Ｒ）への置換である。ある特定の実施形態では、配列番号１または配列番号１の２４０位におけるアミノ酸置換は、バリン（Ｖ）からリシン（Ｋ）への置換である。ある特定の実施形態では、配列番号１または配列番号２の２４１位におけるアミノ酸置換は、フェニルアラニン（Ｆ）からロイシン（Ｌ）への置換である。ある特定の実施形態では、配列番号１または配列番号２の２４３位におけるアミノ酸置換は、プロリン（Ｐ）からリシン（Ｋ）への置換である。ある特定の実施形態では、配列番号１または配列番号２の２５８位におけるアミノ酸置換は、アスパラギン（Ｎ）からセリン（Ｓ）への置換である。ある特定の実施形態では、配列番号１または配列番号２の２９６位におけるアミノ酸置換は、ロイシン（Ｌ）からトリプトファン（Ｗ）への置換である。ある特定の実施形態では、配列番号１または配列番号２の２９６位におけるアミノ酸置換は、ロイシン（Ｌ）からチロシン（Ｙ）への置換である。ある特定の実施形態では、配列番号１または配列番号２の２９６位におけるアミノ酸置換は、ロイシン（Ｌ）からフェニルアラニン（Ｆ）への置換である。ある特定の実施形態では、配列番号１または配列番号２の２９８位におけるアミノ酸置換は、メチオニン（Ｍ）からロイシン（Ｌ）への置換である。ある特定の実施形態では、配列番号１または配列番号２の２９８位におけるアミノ酸置換は、メチオニン（Ｍ）からアラニン（Ａ）への置換である。ある特定の実施形態では、配列番号１または配列番号２の２９８位におけるアミノ酸置換は、メチオニン（Ｍ）からバリン（Ｖ）への置換である。ある特定の実施形態では、配列番号１または配列番号２の３１１位におけるアミノ酸置換は、プロリン（Ｐ）からイソロイシン（Ｉ）への置換である。ある特定の実施形態では、配列番号１または配列番号２の３１１位におけるアミノ酸置換は、プロリン（Ｐ）からバリンへの置換である。ある特定の実施形態では、配列番号１または配列番号２の３１５位におけるアミノ酸置換は、アルギニン（Ｒ）からリシン（Ｋ）への置換である。ある特定の実施形態では、配列番号１または配列番号２の３１９位におけるアミノ酸置換は、スレオニン（Ｔ）からグリシン（Ｇ）への置換である。ある特定の実施形態では、配列番号１または配列番号２の３２７位におけるアミノ酸置換は、チロシン（Ｙ）からアルギニン（Ｒ）への置換である。ある特定の実施形態では、配列番号１または配列番号２の３２８位におけるアミノ酸置換は、チロシン（Ｙ）からバリン（Ｖ）への置換である。ある特定の実施形態では、配列番号１または配列番号２の３４０位におけるアミノ酸置換は、システイン（Ｃ）からグリシン（Ｇ）への置換である。ある特定の実施形態では、配列番号１または配列番号２の３４０位におけるアミノ酸置換は、システイン（Ｃ）からロイシン（Ｌ）への置換である。ある特定の実施形態では、配列番号１または配列番号２の４２１位におけるアミノ酸置換は、アスパラギン酸（Ｄ）からヒスチジン（Ｈ）への置換である。ある特定の実施形態では、配列番号１または配列番号２の４３６位におけるアミノ酸置換は、バリン（Ｖ）からイソロイシン（Ｉ）への置換である。ある特定の実施形態では、配列番号１または配列番号２の４５６位におけるアミノ酸置換は、メチオニン（Ｍ）からチロシン（Ｙ）への置換である。ある特定の実施形態では、配列番号１または配列番号２の４７０位におけるアミノ酸置換は、ロイシン（Ｌ）からフェニルアラニン（Ｆ）への置換である。ある特定の実施形態では、配列番号１または配列番号２の４８５位におけるアミノ酸置換は、セリン（Ｓ）からリシン（Ｋ）への置換である。ある特定の実施形態では、配列番号１または配列番号２の５０３位におけるアミノ酸置換は、メチオニン（Ｍ）からロイシン（Ｌ）への置換である。ある特定の実施形態では、配列番号１または配列番号２の５０３位におけるアミノ酸置換は、メチオニン（Ｍ）からイソロイシン（Ｉ）への置換である。ある特定の実施形態では、配列番号１または配列番号２の５５２位におけるアミノ酸置換は、バリン（Ｖ）からリシン（Ｋ）への置換である。ある特定の実施形態では、配列番号１または配列番号２の５７０位におけるアミノ酸置換は、アラニン（Ａ）からスレオニン（Ｔ）への置換である。ある特定の実施形態では、配列番号１または配列番号２の５９１位におけるアミノ酸置換は、グルタミン（Ｑ）からプロリン（Ｐ）への置換である。ある特定の実施形態では、配列番号１または配列番号２の５９１位におけるアミノ酸置換は、グルタミン（Ｑ）からアルギニン（Ｒ）への置換である。

トランスポザーゼが３０位、１６５位、２８２位、および／または５３８位において上記の変異を含む実施形態を含む、本開示の方法のある特定の実施形態では、配列番号１または配列番号２の配列の１０３位、１９４位、３７２位、３７５位、４５０位、５０９位、および５７０位の１つまたは複数におけるアミノ酸置換を、ｐｉｇｇｙＢａｃ（商標）トランスポザーゼ酵素が含み得、またはＳｕｐｅｒｐｉｇｇｙＢａｃ（商標）トランスポザーゼ酵素がさらに含み得る。トランスポザーゼが３０位、１６５位、２８２位、および／または５３８位において上記の変異を含む実施形態を含む、本開示の方法のある特定の実施形態では、配列番号１または配列番号２の配列の１０３位、１９４位、３７２位、３７５位、４５０位、５０９位、および５７０位の２つ、３つ、４つ、５つ、６つ、またはそれより多くにおけるアミノ酸置換を、ｐｉｇｇｙＢａｃ（商標）トランスポザーゼ酵素が含み得、またはＳｕｐｅｒｐｉｇｇｙＢａｃ（商標）トランスポザーゼ酵素がさらに含み得る。トランスポザーゼが３０位、１６５位、２８２位、および／または５３８位において上記の変異を含む実施形態を含む、ある特定の実施形態では、配列番号１または配列番号２の配列の１０３位、１９４位、３７２位、３７５位、４５０位、５０９位、および５７０位におけるアミノ酸置換を、ｐｉｇｇｙＢａｃ（商標）トランスポザーゼ酵素が含み得、またはＳｕｐｅｒｐｉｇｇｙＢａｃ（商標）トランスポザーゼ酵素がさらに含み得る。ある特定の実施形態では、配列番号１または配列番号２の１０３位におけるアミノ酸置換は、セリン（Ｓ）からプロリン（Ｐ）への置換である。ある特定の実施形態では、配列番号１または配列番号２の１９４位におけるアミノ酸置換は、メチオニン（Ｍ）からバリン（Ｖ）への置換である。ある特定の実施形態では、配列番号１または配列番号２の３７２位におけるアミノ酸置換は、アルギニン（Ｒ）からアラニン（Ａ）への置換である。ある特定の実施形態では、配列番号１または配列番号２の３７５位におけるアミノ酸置換は、リシン（Ｋ）からアラニン（Ａ）への置換である。ある特定の実施形態では、配列番号１または配列番号２の４５０位におけるアミノ酸置換は、アスパラギン酸（Ｄ）からアスパラギン（Ｎ）への置換である。ある特定の実施形態では、配列番号１または配列番号２の５０９位におけるアミノ酸置換は、セリン（Ｓ）からグリシン（Ｇ）への置換である。ある特定の実施形態では、配列番号１または配列番号２の５７０位におけるアミノ酸置換は、アスパラギン（Ｎ）からセリン（Ｓ）への置換である。ある特定の実施形態では、ｐｉｇｇｙＢａｃ（商標）トランスポザーゼ酵素は、配列番号１の１９４位におけるメチオニン（Ｍ）からバリン（Ｖ）への置換を含み得る。ｐｉｇｇｙＢａｃ（商標）トランスポザーゼ酵素が、配列番号１の１９４位におけるメチオニン（Ｍ）からバリン（Ｖ）への置換を含み得る実施形態を含む、ある特定の実施形態では、ｐｉｇｇｙＢａｃ（商標）トランスポザーゼ酵素は、配列番号１または配列番号２の配列の３７２位、３７５位、および４５０位におけるアミノ酸置換をさらに含み得る。ある特定の実施形態では、ｐｉｇｇｙＢａｃ（商標）トランスポザーゼ酵素は、配列番号１の１９４位におけるメチオニン（Ｍ）からバリン（Ｖ）への置換、配列番号１の３７２位におけるアルギニン（Ｒ）からアラニン（Ａ）への置換、および配列番号１の３７５位におけるリシン（Ｋ）からアラニン（Ａ）への置換を含み得る。ある特定の実施形態では、ｐｉｇｇｙＢａｃ（商標）トランスポザーゼ酵素は、配列番号１の１９４位におけるメチオニン（Ｍ）からバリン（Ｖ）への置換、配列番号１の３７２位におけるアルギニン（Ｒ）からアラニン（Ａ）への置換、配列番号１の３７５位におけるリシン（Ｋ）からアラニン（Ａ）への置換、および配列番号１の４５０位におけるアスパラギン酸（Ｄ）からアスパラギン（Ｎ）への置換を含み得る。

本開示は、本開示のトランスポゾンを含む組成物を提供する。この方法のある特定の実施形態では、トランスポゾンは、２つのシス制御性インスレーターエレメントによって挟まれている、本開示の誘導性カスパーゼポリペプチドをコードする配列を含むプラスミドＤＮＡトランスポゾンである。トランスポゾンを含む組成物のある特定の実施形態では、組成物は、トランスポザーゼ酵素をコードする配列を含むプラスミドをさらに含み得る。トランスポザーゼ酵素をコードする配列はｍＲＮＡ配列であり得る。ある特定の実施形態では、トランスポゾンは、ＳｌｅｅｐｉｎｇＢｅａｕｔｙトランスポゾンである。ある特定の実施形態では、トランスポゾンは、ＳｌｅｅｐｉｎｇＢｅａｕｔｙトランスポゾンであり、トランスポザーゼは、ＳｌｅｅｐｉｎｇＢｅａｕｔｙトランスポザーゼまたは過剰活性（hyperactive）ＳｌｅｅｐｉｎｇＢｅａｕｔｙ（ＳＢ１００Ｘ）トランスポザーゼである。

本開示のトランスポゾンはＳｌｅｅｐｉｎｇＢｅａｕｔｙトランスポゾンを含み得る。ある特定の実施形態、特に、トランスポゾンがＳｌｅｅｐｉｎｇＢｅａｕｔｙトランスポゾンである実施形態では、組成物は、トランスポザーゼ酵素をコードする配列を含むプラスミドをさらに含む。ある特定の実施形態では、トランスポザーゼ酵素をコードする配列は、ＳｌｅｅｐｉｎｇＢｅａｕｔｙトランスポザーゼまたは過剰活性ＳｌｅｅｐｉｎｇＢｅａｕｔｙ（ＳＢ１００Ｘ）トランスポザーゼをコードする配列である。ある特定の実施形態では、トランスポザーゼ酵素をコードする配列はｍＲＮＡ配列である。

本開示の方法のある特定の実施形態では、ＳｌｅｅｐｉｎｇＢｅａｕｔｙトランスポザーゼ酵素は、以下と少なくとも７５％、８０％、８５％、９０％、９５％、９９％、またはその間の任意のパーセンテージで同一であるアミノ酸配列を含む：

本開示の方法のある特定の実施形態では、過剰活性ＳｌｅｅｐｉｎｇＢｅａｕｔｙ（ＳＢ１００Ｘ）トランスポザーゼ酵素は、以下と少なくとも７５％、８０％、８５％、９０％、９５％、９９％、またはその間の任意のパーセンテージで同一であるアミノ酸配列を含む：

本開示は、本開示のトランスポゾンを含む組成物を提供する。この方法のある特定の実施形態では、トランスポゾンは、２つのシス制御性インスレーターエレメントによって挟まれている、本開示の誘導性カスパーゼポリペプチドをコードする配列を含むプラスミドＤＮＡトランスポゾンである。トランスポゾンを含む組成物のある特定の実施形態では、組成物は、トランスポザーゼ酵素をコードする配列を含むプラスミドをさらに含み得る。トランスポザーゼ酵素をコードする配列はｍＲＮＡ配列であり得る。ある特定の実施形態では、トランスポゾンはＨｅｌｒａｉｓｅｒトランスポゾンである。ある特定の実施形態では、トランスポゾンはＨｅｌｒａｉｓｅｒトランスポゾンであり、トランスポザーゼはＨｅｌｉｔｒｏｎトランスポザーゼである。

本開示のトランスポゾンは、Ｈｅｌｒａｉｓｅｒトランスポゾンを含み得る。この方法のある特定の実施形態では、トランスポゾンは、２つのシス制御性インスレーターエレメントによって挟まれている、本開示の誘導性カスパーゼポリペプチドをコードする配列を含むプラスミドＤＮＡトランスポゾンである。この方法のある特定の実施形態では、トランスポゾンはＨｅｌｒａｉｓｅｒトランスポゾンである。ある特定の実施形態、特に、トランスポゾンがＨｅｌｒａｉｓｅｒトランスポゾンである実施形態では、組成物は、トランスポザーゼ酵素をコードする配列を含むプラスミドをさらに含む。ある特定の実施形態では、トランスポザーゼ酵素をコードする配列は、Ｈｅｌｉｔｒｏｎトランスポザーゼをコードする配列を含む。ある特定の実施形態では、トランスポザーゼ酵素をコードする配列はｍＲＮＡ配列である。

ある特定の実施形態では、トランスポザーゼはＨｅｌｉｔｒｏｎトランスポザーゼである。Ｈｅｌｉｔｒｏｎトランスポザーゼは、約３０００万年から３６００万年前に活性があったコウモリのゲノム由来の古代エレメントである、Ｈｅｌｒａｉｓｅｒトランスポゾンを起動する。本開示の例示的なＨｅｌｒａｉｓｅｒトランスポゾンには、Ｈｅｌｉｂａｔ１が挙げられ、それは、以下を含む核酸配列を含む：

他のトランスポザーゼとは異なり、Ｈｅｌｉｔｒｏｎトランスポザーゼは、ＲＮａｓｅ－Ｈ様触媒ドメインを含有しないが、その代わりに複製開始ドメイン（Ｒｅｐ）およびＤＮＡヘリカーゼドメインで構成されるＲｅｐＨｅｌモチーフを含む。Ｒｅｐドメインは、ヌクレアーゼのＨＵＨスーパーファミリーのヌクレアーゼドメインである。

本開示の例示的なＨｅｌｉｔｒｏｎトランスポザーゼは、以下を含むアミノ酸配列を含む：

Ｈｅｌｉｔｒｏｎ転位では、トランスポゾンの３’末端に近接しているヘアピンは、ターミネーターとして機能する。しかし、このヘアピンは、トランスポザーゼによって無視され得（can be bypassed）、その結果として、フランキング配列の形質導入をもたらす。加えて、Ｈｅｌｒａｉｓｅｒ転位は、共有結合によって閉じた環状中間体を生成する。さらに、Ｈｅｌｉｔｒｏｎ転位は、標的部位重複を欠き得る。Ｈｅｌｒａｉｓｅｒ配列では、トランスポザーゼは、ＬＴＳおよびＲＴＳと称される左および右末端配列によって挟まれている。これらの配列は、保存された５’－ＴＣ／ＣＴＡＧ－３’モチーフで終結する。ヘアピン終結構造を形成する能力を有する１９ｂｐのパリンドローム配列は、ＲＴＳの１１ヌクレオチド上流に位置し、配列ＧＴＧＣＡＣＧＡＡＴＴＴＣＧＴＧＣＡＣＣＧＧＧＣＣＡＣＴＡＧ（配列番号２３）からなる。

本開示は、本開示のトランスポゾンを含む組成物を提供する。この方法のある特定の実施形態では、トランスポゾンは、２つのシス制御性インスレーターエレメントによって挟まれている、本開示の誘導性カスパーゼポリペプチドをコードする配列を含むプラスミドＤＮＡトランスポゾンである。トランスポゾンを含む組成物のある特定の実施形態では、組成物は、トランスポザーゼ酵素をコードする配列を含むプラスミドをさらに含み得る。トランスポザーゼ酵素をコードする配列はｍＲＮＡ配列であり得る。ある特定の実施形態では、トランスポゾンはＴｏｌ２トランスポゾンである。ある特定の実施形態では、トランスポゾンはＴｏｌ２トランスポゾンであり、トランスポザーゼはＴｏｌ２トランスポザーゼである。

本開示のトランスポゾンはＴｏｌ２トランスポゾンを含み得る。この方法のある特定の実施形態では、トランスポゾンは、２つのシス制御性インスレーターエレメントによって挟まれている、本開示の誘導性カスパーゼポリペプチドをコードする配列を含むプラスミドＤＮＡトランスポゾンである。この方法のある特定の実施形態では、トランスポゾンはＴｏｌ２トランスポゾンである。ある特定の実施形態、特に、トランスポゾンがＴｏｌ２トランスポゾンである実施形態では、組成物は、トランスポザーゼ酵素をコードする配列を含むプラスミドをさらに含む。ある特定の実施形態では、トランスポザーゼ酵素をコードする配列は、Ｔｏｌ２トランスポザーゼをコードする配列を含む。ある特定の実施形態では、トランスポザーゼ酵素をコードする配列はｍＲＮＡ配列である。

Ｔｏｌ２トランスポゾンは、メダカのゲノムから単離され得、または由来し得、ｈＡＴファミリーのトランスポゾンと類似し得る。本開示の例示的なＴｏｌ２トランスポゾンは、約４．７キロベースを含む配列によってコードされ、４個のエクソンを含有するＴｏｌ２トランスポザーゼをコードする遺伝子を含有する。本開示の例示的なＴｏｌ２トランスポザーゼは、以下を含むアミノ酸配列を含む：

逆方向反復配列、末端近くの配列、およびＴｏｌ２トランスポザーゼを含む、本開示の例示的なＴｏｌ２トランスポゾンは、以下を含む核酸配列によってコードされる：

本開示は、本開示の誘導性アポトーシス促進性ポリペプチド、誘導性カスパーゼポリペプチド、誘導性カスパーゼ９ポリペプチド、および／または誘導性トランケート型カスパーゼ９ポリペプチドを含むベクターを提供する。ある特定の実施形態では、ベクターはウイルスベクターである。

本開示のウイルスベクターが、レトロウイルス、レンチウイルス、アデノウイルス、アデノ随伴ウイルス（ＡＡＶ）、またはそれらの任意の組合せから単離され、またはそれらに由来する配列を含み得る。ある特定の実施形態では、ウイルスベクターは、レトロウイルスから単離され、またはそれに由来する配列を含む。ある特定の実施形態では、レトロウイルスはガンマレトロウイルスである。ある特定の実施形態では、レトロウイルスはレンチウイルスである。ある特定の実施形態では、本開示のウイルスベクターは組換えベクターであり得る。

本開示のウイルスベクターは、アデノ随伴ウイルスから単離され、またはそれに由来する配列を含み得る。ある特定の実施形態では、ＡＡＶは、血清型ＡＡＶ１、ＡＡＶ２、ＡＡＶ３、ＡＡＶ４、ＡＡＶ５、ＡＡＶ６、ＡＡＶ７、ＡＡＶ８、ＡＡＶ９、ＡＡＶ１０、またはＡＡＶ１１のＡＡＶを含む。ある特定の実施形態では、ＡＡＶは、ＡＡＶ１、ＡＡＶ２、ＡＡＶ３、ＡＡＶ４、ＡＡＶ５、ＡＡＶ６、ＡＡＶ７、ＡＡＶ８、ＡＡＶ９、ＡＡＶ１０、またはＡＡＶ１１の１つまたは複数由来の配列を含む。ある特定の実施形態では、ＡＡＶは、ＡＡＶ１、ＡＡＶ２、ＡＡＶ３、ＡＡＶ４、ＡＡＶ５、ＡＡＶ６、ＡＡＶ７、ＡＡＶ８、ＡＡＶ９、ＡＡＶ１０、またはＡＡＶ１１の１つまたは複数から単離され、それらに由来し、またはそれらから組換えられた配列を含む。ある特定の実施形態では、ＡＡＶは、ＡＡＶ２から単離され、それに由来し、またはそれから組換えられた配列を含む。ベクターが血液脳関門（ＢＢＢ）を横断する実施形態を含む、ある特定の実施形態では、ＡＡＶは、ＡＡＶ９から単離され、それに由来し、またはそれから組換えられた配列を含む。本開示の例示的なアデノ随伴ウイルスおよび組換えアデノ随伴ウイルスには、自己相補的ＡＡＶ（ｓｃＡＡＶ）、ならびに１つの血清型のゲノムおよび別の血清型のカプシドを含有するＡＡＶハイブリッド（例えば、ＡＡＶ２／５、ＡＡＶ－ＤＪ、およびＡＡＶ－ＤＪ８）が挙げられるが、それらに限定されない。本開示の例示的なアデノ随伴ウイルスおよび組換えアデノ随伴ウイルスには、ｒＡＡＶ－ＬＫ０３、ｒＡＡＶ－ＮＰ５９、およびｒＡＡＶ－ＮＰ８４が挙げられるが、それらに限定されない。ある特定の実施形態では、ＡＡＶは、ｒＡＡＶ－ＬＫ０３、ｒＡＡＶ－ＮＰ５９、またはｒＡＡＶ－ＮＰ８４から単離され、またはそれらに由来する配列を含む。ある特定の実施形態では、本開示のウイルスベクターは組換えベクターであり得る。

本開示は、本開示の誘導性アポトーシス促進性ポリペプチド、誘導性カスパーゼポリペプチド、誘導性カスパーゼ９ポリペプチド、および／または誘導性トランケート型カスパーゼ９ポリペプチドを含むベクターを提供する。ある特定の実施形態では、ベクターはナノ粒子ベクターである。

本開示のナノ粒子ベクターは、核酸、アミノ酸、ポリマー、ミセル、脂質、有機分子、無機分子、またはそれらの任意の組合せを含み得る。ナノ粒子は、例えば、国際特許公開番号ＷＯ２０１２／０９４６７９、国際特許公開番号ＷＯ２０１６／０２２８０５、国際特許公開番号ＷＯ／２０１１／１３３６３５、国際特許公開番号ＷＯ／２０１６／０９０１１１、国際特許公開番号ＷＯ／２０１７／００４４９８、ＷＯ／２０１７／００４５０９、国際特許出願番号ＰＣＴ／ＵＳ２０１７／０３０２７１、米国特許第６，８３５，３９４号、米国特許第７，２１７，４２７号、および米国特許第７，８６７，５１２号に開示されたポリマーで構成され得る。

本開示のナノ粒子ベクターは、少なくとも１つの自己切断性ペプチドをさらに含み得る。ある特定の実施形態では、本開示のナノ粒子ベクターは、少なくとも１つの自己切断性ペプチドを含み得、その場合、自己切断性ペプチドが、本開示の誘導性アポトーシス促進性ポリペプチド、誘導性カスパーゼポリペプチド、誘導性カスパーゼ９ポリペプチド、および／または誘導性トランケート型カスパーゼ９ポリペプチドと、そのナノ粒子に連結した別の配列との間に位置する。ある特定の実施形態では、本開示のナノ粒子ベクターは、少なくとも１つの自己切断性ペプチドを含み得、その場合、自己切断性ペプチドが、本開示の誘導性アポトーシス促進性ポリペプチド、誘導性カスパーゼポリペプチド、誘導性カスパーゼ９ポリペプチド、および／または誘導性トランケート型カスパーゼ９ポリペプチドの上流に位置し、第２の自己切断性ペプチドが、本開示の誘導性アポトーシス促進性ポリペプチド、誘導性カスパーゼポリペプチド、誘導性カスパーゼ９ポリペプチド、および／または誘導性トランケート型カスパーゼ９ポリペプチドの下流に位置する。少なくとも１つの自己切断性ペプチドは、Ｔ２Ａペプチド、ＧＳＧ－Ｔ２Ａペプチド、Ｅ２Ａペプチド、ＧＳＧ－Ｅ２Ａペプチド、Ｆ２Ａペプチド、ＧＳＧ－Ｆ２Ａペプチド、Ｐ２Ａペプチド、またはＧＳＧ－Ｐ２Ａペプチドを含み得る。ある特定の実施形態では、Ｔ２Ａペプチドは、ＥＧＲＧＳＬＬＴＣＧＤＶＥＥＮＰＧＰ（配列番号１１）を含むアミノ酸配列を含む。ある特定の実施形態では、ＧＳＧ－Ｔ２Ａペプチドは、ＧＳＧＥＧＲＧＳＬＬＴＣＧＤＶＥＥＮＰＧＰ（配列番号１２）を含むアミノ酸配列を含む。ある特定の実施形態では、Ｅ２Ａペプチドは、ＱＣＴＮＹＡＬＬＫＬＡＧＤＶＥＳＮＰＧＰ（配列番号１３）を含むアミノ酸配列を含む。ある特定の実施形態では、ＧＳＧ－Ｅ２Ａペプチドは、ＧＳＧＱＣＴＮＹＡＬＬＫＬＡＧＤＶＥＳＮＰＧＰ（配列番号１４）を含むアミノ酸配列を含む。ある特定の実施形態では、Ｆ２Ａペプチドは、ＶＫＱＴＬＮＦＤＬＬＫＬＡＧＤＶＥＳＮＰＧＰ（配列番号１５）を含むアミノ酸配列を含む。ある特定の実施形態では、ＧＳＧ－Ｆ２Ａペプチドは、ＧＳＧＶＫＱＴＬＮＦＤＬＬＫＬＡＧＤＶＥＳＮＰＧＰ（配列番号１６）を含むアミノ酸配列を含む。ある特定の実施形態では、Ｐ２Ａペプチドは、ＡＴＮＦＳＬＬＫＱＡＧＤＶＥＥＮＰＧＰ（配列番号１７）を含むアミノ酸配列を含む。ある特定の実施形態では、ＧＳＧ－Ｐ２Ａペプチドは、ＧＳＧＡＴＮＦＳＬＬＫＱＡＧＤＶＥＥＮＰＧＰ（配列番号１８）を含むアミノ酸配列を含む。

本開示は、本開示のベクターを含む組成物を提供する。

本開示は、本開示の誘導性アポトーシス促進性ポリペプチド、誘導性カスパーゼポリペプチド、誘導性カスパーゼ９ポリペプチド、および／または誘導性トランケート型カスパーゼ９ポリペプチドを含む細胞を提供する。本開示は、本開示のトランスポゾンを含む細胞を提供する。本開示は、本開示のベクターを含む細胞を提供する。ある特定の実施形態では、細胞は、誘導剤との接触後に、本開示の誘導性カスパーゼタンパク質を発現する。

ある特定の実施形態では、本開示のポリペプチド、トランスポゾン、またはベクターを含む本開示の細胞はヒト細胞であり得る。

ある特定の実施形態では、本開示のポリペプチド、トランスポゾン、またはベクターを含む本開示の細胞は免疫細胞であり得る。免疫細胞の例には、Ｔ細胞、ナチュラルキラー（ＮＫ）細胞、ナチュラルキラー（ＮＫ）様細胞、造血前駆細胞、末梢血（ＰＢ）由来Ｔ細胞、および臍帯血（ＵＣＢ）由来Ｔ細胞が挙げられるが、それらに限定されない。ある特定の実施形態では、本開示のポリペプチド、トランスポゾン、またはベクターを含む本開示の細胞はＴ細胞であり得る。ある特定の実施形態では、本開示のポリペプチド、トランスポゾン、またはベクターを含む本開示の細胞は活性化Ｔ細胞であり得る。ある特定の実施形態では、本開示のポリペプチド、トランスポゾン、またはベクターを含む本開示の細胞は、本開示のｉＣ９配列を発現する活性化Ｔ細胞であり得る。ある特定の実施形態では、本開示のポリペプチド、トランスポゾン、またはベクターを含む本開示の細胞は、人工抗原提示細胞（ＡＰＣ）であり得る。本開示の免疫細胞には、非限定的に樹状細胞、Ｂ細胞、マクロファージ、および単球の細胞系を含む、任意の市販されている細胞系または改変細胞系がさらに挙げられ得る。

ある特定の実施形態では、本開示のポリペプチド、トランスポゾン、またはベクターを含む本開示の細胞は免疫細胞であり得る。免疫細胞の例には、Ｔ細胞、ナチュラルキラー（ＮＫ）細胞、ナチュラルキラー（ＮＫ）様細胞、造血前駆細胞、末梢血（ＰＢ）由来Ｔ細胞、および臍帯血（ＵＣＢ）由来Ｔ細胞が挙げられるが、それらに限定されない。ある特定の実施形態では、本開示のポリペプチド、トランスポゾン、またはベクターを含む本開示の細胞はＴ細胞であり得る。ある特定の実施形態では、細胞は人工抗原提示細胞である。

ある特定の実施形態では、本開示のポリペプチド、トランスポゾン、またはベクターを含む本開示の細胞は幹細胞であり得る。本開示の幹細胞はヒト幹細胞であり得る。本開示の幹細胞は、胚性幹細胞または成体幹細胞であり得る。本開示の幹細胞は、全能性、多能性、または複能性であり得る。ある特定の実施形態では、本開示の幹細胞は、人工多能性幹細胞（ｉＰＳＣ）であり得る。

ある特定の実施形態では、本開示のポリペプチド、トランスポゾン、またはベクターを含む本開示の細胞は体細胞であり得る。本開示の体細胞は、身体、好ましくは、ヒト身体の任意の一部から単離され、またはそれに由来し得、そのヒト身体の任意の一部には、ヒトの心臓；骨格筋もしくは平滑筋；血管、静脈、もしくは毛細血管；脾臓；甲状腺；リンパ節もしくはリンパ管；骨もしくは骨髄；皮膚もしくは内皮；副腎；食道；咽頭；脳もしくは脊髄；末梢神経系；眼；視床下部；肝臓；嗅覚組織；前立腺；胃；大腸もしくは小腸；肺もしくは気管支；腎臓；膵臓；胸腺（thymus gland）；尿管もしくは尿道（urethrae）；膀胱；聴覚組織；膀胱；副甲状腺；唾液腺；または気管が挙げられるが、それらに限定されない。本開示の体細胞は、身体、好ましくは、ヒト身体の任意の一部へ分化し得る、前駆細胞または幹細胞から単離され、またはそれに由来し得、そのヒト身体の任意の一部には、ヒトの心臓；骨格筋もしくは平滑筋；血管、静脈、もしくは毛細血管；脾臓；甲状腺；リンパ節もしくはリンパ管；骨もしくは骨髄；皮膚もしくは内皮；副腎；食道；咽頭；脳もしくは脊髄；末梢神経系；眼；視床下部；肝臓；嗅覚組織；前立腺；胃；大腸もしくは小腸；肺もしくは気管支；腎臓；膵臓；胸腺；尿管もしくは尿道；膀胱；聴覚組織；膀胱；副甲状腺；唾液腺；または気管が挙げられるが、それらに限定されない。本開示の体細胞は、分化転換した細胞から単離され、またはそれに由来し得る。

本開示は、本開示のポリペプチド、トランスポゾン、またはベクターを含む本開示の細胞を含む組成物を提供する。

本開示は、養子細胞療法のための本開示の組成物の使用を提供する。ある特定の実施形態では、組成物の細胞は自己由来であり得る。ある特定の実施形態では、組成物の細胞は同種異系（allogeneic）であり得る。

本開示は、ｅｘｖｉｖｏ遺伝子治療のための本開示の組成物の使用を提供する。ある特定の実施形態では、組成物の細胞は、自己由来であり得る。ある特定の実施形態では、組成物の細胞は同種異系であり得る。

本開示は、ｅｘｖｉｖｏ遺伝子治療のための本開示の細胞を含む組成物の使用を提供する。本開示の細胞を含む組成物の使用のある特定の実施形態では、細胞は自己由来である。ある特定の実施形態では、細胞は同種異系（allogenic）である。

本開示は、細胞療法を改変することを必要とする被験体において細胞療法を改変する方法であって、該被験体に、治療剤および本開示の誘導性カスパーゼポリペプチドを含む細胞を含む組成物を投与するステップであって、該細胞を誘導剤と接触させることにより該細胞においてアポトーシスが選択的に誘導され得るステップを含む、方法を提供する。

本開示は、細胞療法を改変することを必要とする被験体において細胞療法を改変する方法であって、該被験体に、治療剤および本開示の組成物を含む細胞を含む組成物を投与するステップであって、該細胞を誘導剤と接触させることにより該細胞においてアポトーシスが選択的に誘導され得るステップを含む、方法を提供する。

本開示は、細胞療法を改変することを必要とする被験体において細胞療法を改変する方法であって、該被験体に、治療剤、本開示のトランスポゾン、および本開示のトランスポザーゼを含む組成物を含む細胞を含む組成物を投与するステップであって、該細胞を誘導剤と接触させることにより該細胞においてアポトーシスが選択的に誘導され得るステップを含む、方法を提供する。

本開示は、細胞療法を改変することを必要とする被験体において細胞療法を改変する方法であって、該被験体に、治療剤および本開示のベクターを含む細胞を含む組成物を投与するステップであって、該細胞を誘導剤と接触させることにより該細胞においてアポトーシスが選択的に誘導され得るステップを含む、方法を提供する。

本開示の細胞療法を改変する方法のある特定の実施形態では、組成物の細胞は自己由来であり得る。ある特定の実施形態では、組成物の細胞は同種異系であり得る。この方法のある特定の実施形態では、細胞療法は養子細胞療法である。ある特定の実施形態では、治療剤は、ｅｘｖｉｖｏ遺伝子治療により導入されている。ある特定の実施形態では、治療剤は、改変された内因性遺伝子、外因性遺伝子、またはその一部分をコードする配列である。この方法のある特定の実施形態では、細胞療法の改変は、細胞療法の終結である。この方法のある特定の実施形態では、細胞療法の改変は、細胞療法において提供される細胞の一部分の除去である。この除去は、一過性であり得、またはある期間、例えば、疾患もしくは障害の寛解の期間の間、維持され得る。ある特定の実施形態では、方法は、細胞療法の改変を阻害するために誘導剤の阻害剤を投与し、それにより、細胞療法の機能および／または有効性を回復させるステップをさらに含む。例えば、寛解後に疾患もしくは障害が再発し、または被験体の有害反応が鎮静した場合には、誘導剤の阻害剤を被験体に投与することにより細胞療法が再開され得る。

本開示の細胞療法を改変する方法は、例えば、回復の徴候、もしくは疾患重症度／進行を減少させる徴候、疾患寛解／停止の徴候、および／または有害事象の発生に応答して、治療を終結し、または弱めるために使用され得る。疾患の徴候もしくは症状が再出現するか、もしくは重症度が増加する、および／または有害事象が解消された場合には、誘導剤を阻害することにより、本開示の細胞療法が再開され得る。

ある特定の実施形態では、本開示の細胞または本開示の改変細胞を含む組成物が、注射または静脈内注入によって患者へ投与される。ある特定の実施形態では、本開示の組成物、または本開示の改変細胞を含む組成物の治療的有効用量は、投与あたり患者の体重の１ｋｇにつき２×１０^５個から５×１０^８個の間の細胞、またはそれらの任意の範囲、値、もしくは分数を含む。

ある特定の実施形態では、本開示の細胞または本開示の改変細胞を含む組成物が、注射または静脈内注入によって患者へ投与される。ある特定の実施形態では、本開示の組成物、または本開示の改変細胞を含む組成物の治療的有効用量は、投与あたり患者の体重の１ｋｇにつき０．２×１０^６個から２０×１０^６個の間の細胞を含む。ある特定の実施形態では、本開示の組成物、または本開示の改変細胞を含む組成物の治療的有効用量は、投与あたり患者の体重の１ｋｇにつき０．２×１０^６個の細胞、投与あたり患者の体重の１ｋｇにつき２×１０^６個の細胞、投与あたり患者の体重の１ｋｇにつき２０×１０^６個の細胞、または投与あたり患者の体重の１ｋｇにつきその間の任意の数の細胞を含む。

ある特定の実施形態では、本開示の細胞または本開示の改変細胞を含む組成物が、注射または静脈内注入によって患者へ投与される。ある特定の実施形態では、本開示の組成物、または本開示の改変細胞を含む組成物の治療的有効用量は、投与あたり患者の体重の１ｋｇにつき１×１０^６個の細胞または約１×１０^６個の細胞を含む。

ある特定の実施形態では、本開示の細胞または本開示の改変細胞を含む組成物が、注射または静脈内注入によって患者へ投与される。ある特定の実施形態では、本開示の組成物、または本開示の改変細胞を含む組成物の治療的有効用量は、投与あたり患者の体重の１ｋｇにつき３×１０^６個の細胞または約３×１０^６個の細胞を含む。

ある特定の実施形態では、本開示の細胞または本開示の改変細胞を含む組成物が、注射または静脈内注入によって患者へ投与される。ある特定の実施形態では、本開示の組成物、または本開示の改変細胞を含む組成物の治療的有効用量は、投与あたり患者の体重の１ｋｇにつき０．７×１０^６個から６．７×１０^６個の間の細胞を含む。ある特定の実施形態では、本開示の組成物、または本開示の改変細胞を含む組成物の治療的有効用量は、投与あたり患者の体重の１ｋｇにつき０．７×１０^６個の細胞、投与あたり患者の体重の１ｋｇにつき６．７×１０^６個の細胞、または投与あたり患者の体重の１ｋｇにつきその間の任意の数の細胞を含む。

ある特定の実施形態では、本開示の細胞または本開示の改変細胞を含む組成物が、注射または静脈内注入によって患者へ投与される。ある特定の実施形態では、本開示の組成物、または本開示の改変細胞を含む組成物の治療的有効用量は、投与あたり患者の体重の１ｋｇにつき０．７×１０^６個から１６×１０^６個の間の細胞を含む。ある特定の実施形態では、本開示の組成物、または本開示の改変細胞を含む組成物の治療的有効用量は、投与あたり患者の体重の１ｋｇにつき０．７×１０^６個の細胞、投与あたり患者の体重の１ｋｇにつき２×１０^６個の細胞、投与あたり患者の体重の１ｋｇにつき６×１０^６個の細胞、投与あたり患者の体重の１ｋｇにつき１０．７×１０^６個の細胞、投与あたり患者の体重の１ｋｇにつき１６×１０^６個の細胞、または投与あたり患者の体重の１ｋｇにつきその間の任意の数の細胞を含む。

ある特定の実施形態では、本開示の細胞または本開示の改変細胞を含む組成物が、注射または静脈内注入によって患者へ投与される。ある特定の実施形態では、本開示の組成物、または本開示の改変細胞を含む組成物の治療的有効用量は、投与あたり患者の体重の１ｋｇにつき１．２×１０^６個～７．１×１０^６個の細胞を含む。ある特定の実施形態では、本開示の組成物、または本開示の改変細胞を含む組成物の治療的有効用量は、投与あたり患者の体重の１ｋｇにつき１．２×１０^６個の細胞、投与あたり患者の体重の１ｋｇにつき７．１×１０^６個の細胞、または投与あたり患者の体重の１ｋｇにつき任意の数の細胞を含む。ある特定の実施形態では、本開示の組成物、または本開示の改変細胞を含む組成物の治療的有効用量は、投与あたり患者の体重の１ｋｇにつき２×１０^６個から３×１０^６個の間の細胞を含む。

ある特定の実施形態では、本開示の細胞または本開示の改変細胞を含む組成物が、注射または静脈内注入によって患者へ投与される。ある特定の実施形態では、本開示の組成物、または本開示の改変細胞を含む組成物の治療的有効用量は、投与あたり患者の体重の１ｋｇにつき１×１０^６個～２×１０^６個の細胞を含む。ある特定の実施形態では、本開示の組成物、または本開示の改変細胞を含む組成物の治療的有効用量は、投与あたり患者の体重の１ｋｇにつき１×１０^６個の細胞、投与あたり患者の体重の１ｋｇにつき２×１０^６個の細胞、または投与あたり患者の体重の１ｋｇにつきその間の任意の数の細胞を含む。本開示のある特定の実施形態では、本開示の改変細胞が、注射または静脈内注入によって患者へ送達される。ある特定の実施形態では、本開示の組成物、または本開示の改変細胞を含む組成物の治療的有効用量は、投与あたり患者の体重の１ｋｇにつき０．７×１０^６個～１．３×１０^６個の細胞を含む。ある特定の実施形態では、本開示の組成物、または本開示の改変細胞を含む組成物の治療的有効用量は、投与あたり患者の体重の１ｋｇにつき０．７×１０^６個の細胞、投与あたり患者の体重の１ｋｇにつき１．３×１０^６個の細胞、または投与あたり患者の体重の１ｋｇにつきその間の任意の数の細胞を含む。

ある特定の実施形態では、本開示の細胞または本開示の改変細胞を含む組成物が、注射または静脈内注入によって患者へ投与される。ある特定の実施形態では、本開示の組成物、または本開示の改変細胞を含む組成物の治療的有効用量は、単一用量または複数回用量を含む。ある特定の実施形態では、本開示の組成物、または本開示の改変細胞を含む組成物の治療的有効用量は、分割用量を含む。ある特定の実施形態では、本開示の組成物、または本開示の改変細胞を含む組成物の治療的有効用量は、初回用量および維持用量を含む。

本開示は、疾患または障害を処置することを必要とする被験体において疾患または障害を処置する方法であって、該被験体に、キネティック剤（kinetic agent）および本開示の誘導性カスパーゼポリペプチドを含む細胞を含む組成物を投与するステップであって、該細胞を誘導剤と接触させることにより該細胞においてアポトーシスが選択的に誘導され得、該キネティック剤を含む該細胞が、該被験体の標的組織内で局所的組織毒性を誘導する、ステップ、ならびに該被験体の非標的組織における毒性の誘導前に該キネティック剤を含む該細胞においてアポトーシスを選択的に誘導するステップであって、それにより、該標的組織を処置し、排除し（treating eliminating）、非標的組織を保存し、該被験体において該疾患または障害を処置するステップを含む、方法を提供する。

本明細書で使用される場合、キネティック剤は、標的組織に対する特異性、および非標的組織への既知の／意図的のか、または未知の／非意図的のかのいずれかの毒性を有し、いずれの場合でも、その毒性が非標的組織に有意には影響しないように調節または制限され得る、治療剤を記載することを意味する。キネティック剤は、組織を特異的にターゲットし、毒性を特異的かつ局所的に誘導するが、キネティック剤が非標的組織へ有意な毒性または損傷を誘導し得る前に、本開示の誘導剤が、非標的組織毒性を低減または防止するために投与され得る。任意の毒性がオフターゲット組織に影響する程度（例えば、非標的組織への損傷）は、誘導剤の投与により制限され得、非標的組織のキネティック剤への曝露の期間に対応し得る。本開示のある特定の実施形態では、治療剤を含む細胞は、目的の標的を有する腫瘍細胞（on-target on-tumor cell）と、目的の標的を有する腫瘍以外の細胞（on-target off-tumor cell）の両方に対して、同時に、かつ複数の異なる組織において、反応し得る。目的の標的を有する腫瘍以外の細胞は、治療剤を含む細胞における本開示の誘導性カスパーゼポリペプチドの活性化の間、保存され、例えば、腫瘍が排除された後、本開示の誘導性カスパーゼポリペプチドを含む細胞は排除される。ある特定の実施形態では、腫瘍以外に対するオフターゲット効果（off-tumor off-target effect）は、キネティック剤の交差反応性に起因し得る。ある特定の実施形態では、オフターゲット効果が非常に大きい場合には、キネティック剤の毒性は、被験体の疾患の処置が完了する前に誘導剤の投与により制限または排除され得る。

本開示は、疾患または障害を処置することを必要とする被験体において疾患または障害を処置する方法であって、該被験体に、キネティック剤および本開示の組成物を含む細胞を含む組成物を投与するステップであって、該細胞を誘導剤と接触させることにより該細胞においてアポトーシスが選択的に誘導され得、該キネティック剤を含む該細胞が、該被験体の標的組織内で局所的組織毒性を誘導する、ステップ、ならびに該被験体の非標的組織における有意な毒性の誘導前に該キネティック剤を含む該細胞においてアポトーシスを選択的に誘導するステップであって、それにより、該標的組織を処置し、排除し、非標的組織を保存し、該被験体において該疾患または障害を処置するステップを含む、方法を提供する。

本開示は、疾患または障害を処置することを必要とする被験体において疾患または障害を処置する方法であって、該被験体に、キネティック剤、本開示のトランスポゾン、および本開示のトランスポザーゼを含む組成物を含む細胞を含む組成物を投与するステップであって、該細胞を誘導剤と接触させることにより該細胞においてアポトーシスが選択的に誘導され得、該キネティック剤を含む該細胞が、該被験体の標的組織内で局所的組織毒性を誘導する、ステップ、ならびに該被験体の非標的組織における有意な毒性の誘導前に該キネティック剤を含む該細胞においてアポトーシスを選択的に誘導するステップであって、それにより、該標的組織を処置し、排除し、非標的組織を保存し、該被験体において該疾患または障害を処置するステップを含む、方法を提供する。

本開示は、疾患または障害を処置することを必要とする被験体において疾患または障害を処置する方法であって、該被験体に、キネティック剤および本開示のベクターを含む細胞を含む組成物を投与するステップであって、該細胞を誘導剤と接触させることにより該細胞においてアポトーシスが選択的に誘導され得、該キネティック剤を含む該細胞が、該被験体の標的組織内で局所的組織毒性を誘導する、ステップ、ならびに該被験体の非標的組織における有意な毒性の誘導前に該キネティック剤を含む該細胞においてアポトーシスを選択的に誘導するステップであって、それにより、該標的組織を処置し、排除し、非標的組織を保存し、該被験体において該疾患または障害を処置するステップを含む、方法を提供する。

用語「非標的組織における有意な毒性」は、その組織の細胞が死んでおり（例えば、壊死またはアポトーシスの結果として死んでいる）、別なふうに生存不可能になっており、または１つもしくは複数の本質的な生理学的機能を実施することを停止している毒性のレベルを記載し得る。ある特定の実施形態では、有意な毒性は、細胞または組織への永久的損傷を意味する。ある特定の実施形態では、有意な毒性は、細胞または組織の機能の一過性喪失を意味する。ある特定の実施形態では、有意な毒性は、当業者によりそのようなものとして認識可能である症状を、被験体において誘導する。ある特定の実施形態では、有意な毒性は、被験体の死亡、寿命の低下、または生活の質の低下をもたらす。

本開示の疾患または障害を処置する方法のある特定の実施形態では、疾患または障害は、増殖性障害またはがんである。ある特定の実施形態では、標的組織は腫瘍を含む。ある特定の実施形態では、腫瘍は良性である。ある特定の実施形態では、腫瘍は悪性である。ある特定の実施形態では、標的組織は、切除された腫瘍の露出した組織または周縁部を含む。ある特定の実施形態では、標的組織は、ほぼ確実な（probable）転移の部位を含む。ある特定の実施形態では、転移の部位は、リンパ節、リンパ液、末梢循環血液、局所循環血液、骨、骨髄、および脳脊髄液（ＣＳＦ）の１つまたは複数を含む。

本開示の疾患または障害を処置する方法のある特定の実施形態では、疾患または障害は、炎症性疾患または障害である。ある特定の実施形態では、標的組織は炎症の部位を含む。

本開示の疾患または障害を処置する方法のある特定の実施形態では、疾患または障害は、免疫または自己免疫の疾患または障害である。ある特定の実施形態では、標的組織は、露出したまたは感染した組織の部位を含む。ある特定の実施形態では、標的組織は、熱傷または創傷の組織を含む。

本開示の疾患または障害を処置する方法のある特定の実施形態では、疾患または障害は、感染性疾患または障害である。ある特定の実施形態では、標的組織は、感染組織を含む。

本開示の疾患または障害を処置する方法のある特定の実施形態では、疾患または障害は、遺伝的または後成的疾患または障害である。ある特定の実施形態では、標的組織は、野生型細胞と比較した場合、遺伝的または後成的改変を含む１つまたは複数の細胞を含む。

本開示の疾患または障害を処置する方法のある特定の実施形態では、疾患または障害は、代謝障害である。ある特定の実施形態では、標的組織は、代謝障害を有する１つまたは複数の細胞を含む。

本開示の疾患または障害を処置する方法のある特定の実施形態では、疾患または障害は、血管障害である。ある特定の実施形態では、標的組織は、静脈、血管、毛細血管、または循環血液の成分の１つまたは複数の細胞を含む。

本開示の疾患または障害を処置する方法のある特定の実施形態では、疾患または障害は、呼吸障害である。ある特定の実施形態では、標的組織は、鼻道、食道、または肺の１つまたは複数の細胞を含む。

本開示の疾患または障害を処置する方法のある特定の実施形態では、疾患または障害は、線維性障害である。ある特定の実施形態では、標的組織は、線維素凝塊（fibroid mass）または該線維素凝塊の近くの細胞を含む。

本開示の疾患または障害を処置する方法のある特定の実施形態では、養子細胞療法は、キネティック剤を含む細胞を含む。ある特定の実施形態では、キネティック剤を含む細胞は、自己由来である。ある特定の実施形態では、キネティック剤を含む細胞は、同種異系である。ある特定の実施形態では、キネティック剤を含む細胞は、Ｔ細胞である。ある特定の実施形態では、キネティック剤は、天然に存在しない受容体である。ある特定の実施形態では、天然に存在しない受容体は、合成受容体、改変受容体、組換え受容体、またはキメラ受容体である。ある特定の実施形態では、キメラ受容体は、キメラ抗原受容体（ＣＡＲ）である。

本開示の疾患または障害を処置する方法のある特定の実施形態では、疾患または障害は、増殖性障害またはがんである。ある特定の実施形態では、標的組織は腫瘍を含む。ある特定の実施形態では、腫瘍の処置は、本開示の誘導性カスパーゼポリペプチドを含む細胞を含む組成物を含む。ある特定の実施形態では、本開示の誘導性カスパーゼポリペプチドを含む細胞を含む組成物は、キメラ抗原受容体（ＣＡＲ）をさらに含む。ある特定の実施形態では、キメラ抗原受容体（ＣＡＲ）は、腫瘍の細胞上に発現した配列を特異的に結合し、それにより、ＣＡＲの腫瘍細胞に対する特異性を与える。ある特定の実施形態では、腫瘍細胞を特異的に結合するＣＡＲを発現する細胞はＴ細胞であり、それにより、腫瘍細胞を特異的に結合するＣＡＲ－Ｔを生成する。ある特定の実施形態では、腫瘍細胞を特異的にターゲットするＣＡＲ－Ｔ細胞を含む組成物は、その抗原配列を発現する腫瘍細胞のみを選択的に死滅させる。しかしながら、ある特定の実施形態では、腫瘍抗原は、他の正常な組織において発現している場合があり、その場合、非標的組織におけるＣＡＲ－Ｔ細胞の、標的に対するが腫瘍以外のものに対する活性（on-target off-tumor activity）をもたらす。例えば、抗原は、ＣＤ１９であり得、ＣＤ１９は、ほとんどもっぱらＢ細胞において発現している。ＣＤ１９の場合、抗ＣＤ１９ＣＡＲ－Ｔ細胞のオフターゲット活性は極微である。しかしながら、例えば、抗原がＰＳＭＡ（葉酸ヒドロラーゼ１）であり、ＰＳＭＡは、いくつかの正常な細胞型において発現している場合、抗ＰＳＭＡＣＡＲ－Ｔ細胞は、標的に対するが腫瘍以外のものに対する毒性と呼ばれる活性で、病的標的細胞に加えて、正常細胞をターゲットし得る。ある特定の実施形態では、本開示の病的標的細胞（例えば、腫瘍細胞）が抗ＰＳＭＡＣＡＲ－Ｔ細胞により根絶されると、本開示の誘導性カスパーゼポリペプチドを使用して抗ＰＳＭＡＣＡＲ－Ｔ細胞においてプログラム細胞死を誘導するために、本開示の誘導剤で被験体を処置することにより、標的に対するが腫瘍以外のものに対する効果を排除する。

養子細胞療法が、キネティック剤を含む細胞を含む方法を含む、本開示のある特定の方法において、キネティック剤は、抗がん剤を含む。ある特定の実施形態では、抗がん剤は、抗ＣＤ１９剤を含む。ある特定の実施形態では、抗がん剤は抗ＢＣＭＡ剤を含む。ある特定の実施形態では、抗がん剤は抗ＰＳＭＡ剤を含む。ある特定の実施形態では、抗がん剤は、抗Ｍｕｃ１剤を含む。ある特定の実施形態では、キネティック剤は、天然に存在しない受容体を含む。ある特定の実施形態では、天然に存在しない受容体は、合成受容体、改変受容体、組換え受容体、またはキメラ受容体を含む。ある特定の実施形態では、キメラ受容体は、キメラ抗原受容体（ＣＡＲ）である。ある特定の実施形態では、ＣＡＲは、１つまたは複数のＶＨＨ配列を含む。ある特定の実施形態では、ＣＡＲはＶＣＡＲである。ある特定の実施形態では、キネティック剤は、形成不全を誘導する。ある特定の実施形態では、形成不全は致死性ではない。ある特定の実施形態では、誘導剤は、キネティック剤を含む細胞を排除する。ある特定の実施形態では、細胞はＴ細胞である。ある特定の実施形態では、誘導剤は、形成不全の徴候または症状を排除または低減する。ある特定の実施形態では、ＣＡＲ－Ｔ治療は悪性腫瘍を排除するが、健康なＢ細胞をターゲットし続け、その結果、被験体はＩＶＩＧ注入で処置されなければならない。ある特定の実施形態では、抗ＢＣＭＡＣＡＲ－Ｔ治療は、被験体自身の変異していない形質細胞を排除し、その結果、その被験体もまた、ＩＶＩＧで処置されなければならない。ある特定の実施形態では、形成不全を引き起こすＣＡＲ－Ｔは、本開示のカスパーゼ９ポリペプチドおよび誘導剤を介して排除され得る。ある特定の実施形態では、被験体の本開示の誘導剤での処置は、形成不全の徴候または症状を軽減する。

図１は、本開示の例示的誘導性トランケート型カスパーゼ９ポリペプチドを示す概略図である。

図２は、治療剤（ＣＡＲＴｙｒｉｎ）を単独でまたは、本開示の誘導性カスパーゼポリペプチド（ｐｉｇｇｙＢａｃ（ＰＢ）トランスポザーゼによって細胞に導入されたｉＣ９構築物（「安全スイッチ」としても公知）によってコードされる）との組合せで発現するように改変された細胞中で、誘導剤（ＡＰ１９０３、Ｒｉｍｉｄｕｃｉｄとも称される）の投薬量の増加に応じて、多数の細胞が生細胞の領域（右下象限にゲートされる）からアポトーシス細胞で占められた領域（左上象限）に移動することを示す、ヌクレオフェクション後の１２日目の一連のフローサイトメトリープロットである。

図３は、治療剤（ＣＡＲＴｙｒｉｎ）を単独でまたは、本開示の誘導性カスパーゼポリペプチド（ｐｉｇｇｙＢａｃ（ＰＢ）トランスポザーゼによって細胞に導入されたｉＣ９構築物（「安全スイッチ」としても公知）によってコードされる）との組合せで発現するように改変された細胞中で、誘導剤（ＡＰ１９０３、Ｒｉｍｉｄｕｃｉｄとも称される）の投薬量の増加に応じて、多数の細胞が生細胞の領域（右下象限にゲートされる）からアポトーシス細胞で占められた領域（左上象限）に移動することを示す、ヌクレオフェクション後の１９日目の一連のフローサイトメトリープロットである。

図４は、図２（左グラフ）または図３（右グラフ）のいずれかに示す集計結果の定量を示す対のグラフである。詳細にはこれらのグラフは、１２日目（図２および左グラフ）または１９日目（図３および右グラフ）のいずれかにおける、各改変細胞型についての、ｉＣ９スイッチの誘導剤（ＡＰ１９０３、Ｒｉｍｉｄｕｃｉｄとも称される）の濃度に応じた細胞生存率パーセントへのｉＣ９安全スイッチの影響を示している。

図５は、ｉｎｖｉｖｏ研究についての研究時系列および概要を示す図である。ＮＳＧマウスはＭＭ．１Ｓ／ルシフェラーゼ^＋細胞をＩＶ注射され、８日目にステージ分類され、９日目にＴ細胞を注射され、１２日目に表示の用量でＡＰ１９０３（Ｒｉｍｉｄｕｃｉｄ）を用いて処置された。２４時間後、マウスを安楽死させ、血液、脾臓および骨髄細胞が回収され、ｈｕＣＤ４５^＋細胞の存在について染色された。

図６は、Ｒｉｍｉｄｕｃｉｄ（ＡＰ１９０３）をｉｎｖｉｖｏで使用するＰ－ＢＣＭＡ－１０１を含む細胞の高効率死滅化を実証するグラフである。図６は、ＡＰ１９０３処置後の血液、脾臓および骨髄におけるＣＡＲＴｙｒｉｎ^＋細胞の存在を示している。血液、脾臓および骨髄細胞はｈｕＣＤ４５^＋細胞の存在についてフローサイトメトリーによって分析された。相対生存率は、各試料について１，５００ビーズ事象あたり（（ｈｕＣＤ４５細胞の数／ｍｓＣＤ４５細胞の数）／（未処置群でのｈｕＣＤ４５／ｍｓＣＤ４５の平均））×１００％によって決定された。各データ点は、異なるマウスを示している。ｘ軸上には、２５の増分で０から１７５の相対ＣＡＲ－Ｔ生存率パーセントがプロットされている。ｙ軸には、各パネルについて左から右に、ＡＰ１９０３（Ｒｉｍｉｄｕｃｉｄ）処置後の血液、脾臓および骨髄。ＡＰ１９０３（Ｒｉｍｉｄｕｃｉｄ）は、パネルごとに左から右に次の順で増加している：０ｍｇ／ｋｇ、０．００５ｍｇ／ｋｇ、０．０５ｍｇ／ｋｇ、０．５ｍｇ．ｋｇ、５ｍｇ／ｋｇおよびｉＣ９遺伝子の非存在下での５ｍｇ／ｋｇ。

本開示は、誘導性アポトーシス促進性ポリペプチド、加えて、本開示の誘導性アポトーシス促進性ポリペプチドを含むトランスポゾン、ベクター、および細胞を提供する。本開示の誘導性アポトーシス促進性ポリペプチドは、治療剤と同時に、または逐次的に、細胞へ導入され得る。例えば、本開示の誘導性アポトーシス促進性ポリペプチドは、キメラ抗原受容体をコードする１つまたは複数の配列とともに同時に、または逐次的に、細胞へ導入されて、本開示の改変細胞を生じ得る。本開示の改変細胞は、細胞に基づいた治療に使用され得る。誘導性アポトーシス促進性ポリペプチドおよび必要に応じて治療剤を含む本開示の改変細胞の活性を調節するために、細胞および／または誘導性アポトーシス促進性ポリペプチドは、誘導性アポトーシス促進性ポリペプチドのリガンド結合領域と特異的に結合し、最終的に、誘導性アポトーシス促進性ポリペプチドを含む細胞においてアポトーシスの惹起を引き起こす誘導剤と接触し得る。本開示の改変細胞が細胞療法として使用される場合、誘導剤は、細胞療法を受けた被験体へ局所的に、または全身性に投与され得る。誘導剤の阻害剤は、細胞療法および誘導剤を受けた被験体へ局所的に、または全身性に投与され得る。

本明細書で使用される場合、用語「治療剤」は、細胞療法を目的とする細胞へ導入されたとき、非限定的に、隣接細胞、細胞外リガンドおよびシグナル伝達分子、その細胞の宿主の免疫系またはその成分、宿主の感染体、宿主の疾患細胞（例えば、がん細胞）、細胞内リガンドおよびシグナル伝達分子を含む、その細胞の内部または外部環境とのその細胞の活性、シグナル伝達経路、シグナル伝達結果、および／または相互作用、後成的制御、遺伝子転写、遺伝子制御、トランスクリプトーム、ＤＮＡ／ＲＮＡ翻訳、タンパク質プロセシングまたは分泌プロセス、ならびにプロテオームを改変した、有機または無機の任意の分子を指し得る。治療剤には、組換えおよび／またはキメラ細胞表面受容体、組換えおよび／またはキメラ膜貫通受容体、組換えおよび／またはキメライオンチャネル、ならびに組換えおよび／またはキメラ抗原受容体が挙げられるが、それらに限定されない。ある特定の実施形態では、治療剤は、キメラ抗原受容体（ＣＡＲ）、必要に応じて、抗原認識領域が少なくとも１つのセンチリンを含むキメラ抗原受容体である。本開示を通して使用される場合、センチリンを含むＣＡＲは、ＣＡＲＴｙｒｉｎと呼ばれる。

本開示は、リガンド結合領域、リンカー、およびアポトーシス促進性ペプチドを含む誘導性アポトーシス促進性ポリペプチドであって、その誘導性アポトーシス促進性ポリペプチドが非ヒト配列を含まない、誘導性アポトーシス促進性ポリペプチドを提供する。ある特定の実施形態では、非ヒト配列は、制限部位を含む。本開示の誘導性アポトーシス促進性ポリペプチドは、誘導剤との相互作用を通して二量体化する。第１の誘導性アポトーシス促進性ポリペプチドと第２の誘導性アポトーシス促進性ポリペプチドの二量体化は、そのカスパーゼポリペプチドの相互作用、架橋、交差活性化、または活性化を促進または活性化する。カスパーゼポリペプチドの相互作用、架橋、交差活性化、または活性化は、本開示の誘導性アポトーシス促進性ポリペプチド、または本開示の誘導性アポトーシス促進性ポリペプチドをコードする配列を含む細胞においてアポトーシスを惹起する。本開示の誘導性アポトーシス促進性ポリペプチドは、その本開示の誘導性アポトーシス促進性ポリペプチドが誘導剤と接触しない限り、アポトーシスを惹起しない。誘導剤と本開示の誘導性アポトーシス促進性ポリペプチドとの接触は、ｉｎｖｉｖｏ、ｅｘｖｉｖｏ、またはｉｎｖｉｔｒｏで起こり得る。誘導剤と本開示の誘導性アポトーシス促進性ポリペプチドとの接触は、細胞内で起こり得る。

細胞療法に関して、本開示は、本開示の誘導性アポトーシス促進性ポリペプチド、または誘導性アポトーシス促進性ポリペプチドをコードする配列を含む、養子細胞療法のための改変Ｔ細胞を提供する。

養子細胞療法のための改変Ｔ細胞は、自己由来または同種異系であり得る。本明細書で使用される場合、用語「同種異系」は、抗原性において異なるＨＬＡまたはＭＨＣ遺伝子座を指す。同じ種から移入された細胞または組織は、抗原性において異なり得る。同系マウスは、１つまたは複数の遺伝子座において異なり得（類遺伝子性）、同種異系マウスは、同じバックグラウンドを有し得る。

養子細胞療法のための改変Ｔ細胞は、活性化Ｔ細胞を含み得る。Ｔ細胞（Ｔリンパ球とも呼ばれる）は、リンパ球と呼ばれる一群の白血球に属する。リンパ球は、一般的に、細胞媒介性免疫に関与する。「Ｔ細胞」の「Ｔ」は、胸腺に由来し、または成熟が胸腺により影響される細胞を指す。Ｔ細胞は、Ｔ細胞受容体として知られた細胞表面タンパク質の存在により、Ｂ細胞およびナチュラルキラー（ＮＫ）細胞などの他のリンパ球型から区別することができる。本明細書で使用される場合、用語「活性化Ｔ細胞」は、クラスＩＩ主要組織適合性（ＭＨＣ）マーカーの関連において提示された抗原決定基の認識により、刺激されて、免疫応答（例えば、活性化Ｔ細胞のクローン増殖）を生じるＴ細胞を指す。Ｔ細胞は、抗原決定基、サイトカイン、および／またはリンホカイン、ならびに分化抗原群の細胞表面タンパク質（例えば、ＣＤ３、ＣＤ４、ＣＤ８など、およびそれらの組合せ）の存在により活性化される。分化抗原群のタンパク質を発現する細胞は、Ｔ細胞の表面上のそのタンパク質の発現が「陽性」であると言われる場合が多い（例えば、ＣＤ３またはＣＤ４発現が陽性である細胞は、ＣＤ３＋またはＣＤ４＋と呼ばれる）。ＣＤ３タンパク質およびＣＤ４タンパク質は、Ｔ細胞におけるシグナル伝達に、直接的に、および／または間接的に関与し得る細胞表面受容体または共受容体である。

養子細胞療法のための改変Ｔ細胞には、「汎Ｔ細胞」が挙げられ得る。本明細書で使用される場合、「汎Ｔ細胞」は、サブタイプ、活性化状態、成熟状態、または細胞表面マーカー発現により選別されることなく、生体試料から単離された全てのＴリンパ球を含む。

養子細胞療法のための改変Ｔ細胞は、例えば、全血、末梢血、臍帯血、リンパ液、リンパ節組織、骨髄、および脳脊髄液（ＣＳＦ）から採取および／または調製され得る。例えば細胞の場合において、「採取または調製される」とは、細胞または細胞培養物が、供給源から単離され、精製され、または部分的に精製されることを意味し、その供給源は、例えば、臍帯血、骨髄、または末梢血であり得る。その用語はまた、最初の供給源または細胞培養物が培養されており、細胞が複製されている場合、および、子孫細胞が最初の供給源からここでは誘導される場合にも適用され得る。本明細書で使用される場合、用語「末梢血」は、血液の循環プールから採取または調製され、リンパ系、脾臓、肝臓、または骨髄内に隔離されていない、血液の細胞成分（例えば、赤血球、白血球、および血小板）を指す。臍帯血は、末梢血とも、リンパ系、脾臓、肝臓、または骨髄内に隔離された血液とも異なる。交換可能に使用することができる、用語「臍帯血（ｕｍｂｉｌｉｃａｌｃｏｒｄｂｌｏｏｄ）」、「臍帯血（ｕｍｂｉｌｉｃａｌｂｌｏｏｄ）」、または「臍帯血（ｃｏｒｄｂｌｏｏｄ）」は、出産後に胎盤中、および付着した臍帯中に残存する血液を指す。臍帯血は、造血細胞を含む幹細胞を含有する場合が多い。

本開示は、リガンド結合領域、リンカー、およびアポトーシス促進性ペプチドを含む誘導性アポトーシス促進性ポリペプチドであって、その誘導性アポトーシス促進性ポリペプチドが非ヒト配列を含まない、誘導性アポトーシス促進性ポリペプチドを提供する。ある特定の実施形態では、非ヒト配列は、制限部位を含む。ある特定の実施形態では、アポトーシス促進性ペプチドはカスパーゼポリペプチドである。ある特定の実施形態では、カスパーゼポリペプチドはカスパーゼ９ポリペプチドである。ある特定の実施形態では、カスパーゼ９ポリペプチドは、トランケート型カスパーゼ９ポリペプチドである。本開示の誘導性アポトーシス促進性ポリペプチドは、天然に存在しなくてもよい。

本開示のカスパーゼポリペプチドには、カスパーゼ１、カスパーゼ２、カスパーゼ３、カスパーゼ４、カスパーゼ５、カスパーゼ６、カスパーゼ７、カスパーゼ８、カスパーゼ９、カスパーゼ１０、カスパーゼ１１、カスパーゼ１２、およびカスパーゼ１４が挙げられるが、それらに限定されない。本開示のカスパーゼポリペプチドには、カスパーゼ２、カスパーゼ３、カスパーゼ６、カスパーゼ７、カスパーゼ８、カスパーゼ９、およびカスパーゼ１０を含む、アポトーシスに関連したカスパーゼポリペプチドが挙げられるが、それらに限定されない。本開示のカスパーゼポリペプチドには、カスパーゼ２、カスパーゼ８、カスパーゼ９、およびカスパーゼ１０を含む、アポトーシスを惹起するカスパーゼポリペプチドが挙げられるが、それらに限定されない。本開示のカスパーゼポリペプチドには、カスパーゼ３、カスパーゼ６、およびカスパーゼ７を含む、アポトーシスを実行するカスパーゼポリペプチドが挙げられるが、それらに限定されない。

本開示のカスパーゼポリペプチドは、野生型アミノ酸または核酸配列と比較して、１つまたは複数の改変を有するアミノ酸または核酸配列によってコードされ得る。本開示のカスパーゼポリペプチドをコードする核酸配列は、コドン最適化され得る。本開示のカスパーゼポリペプチドのアミノ酸および／または核酸配列の１つまたは複数の改変は、野生型アミノ酸または核酸配列と比較して、本開示のカスパーゼポリペプチドの相互作用、架橋、交差活性化、または活性化を増加させ得る。代替として、または加えて、本開示のカスパーゼポリペプチドのアミノ酸および／または核酸配列の１つまたは複数の改変は、野生型アミノ酸または核酸配列と比較して、本開示のカスパーゼポリペプチドの免疫原性を減少させ得る。

本開示のカスパーゼポリペプチドは、野生型カスパーゼポリペプチドと比較してトランケートされ得る。例えば、カスパーゼポリペプチドは、本開示の誘導性カスパーゼポリペプチドを含む細胞においてアポトーシスを惹起することに加えて、局所的炎症応答を活性化する可能性を排除または最小限にするために、カスパーゼ活性化および動員ドメイン（ＣＡＲＤ）をコードする配列を排除するようにトランケートされ得る。本開示のカスパーゼポリペプチドをコードする核酸配列は、野生型カスパーゼポリペプチドと比較して、本開示のカスパーゼポリペプチドのバリアントアミノ酸配列を形成するようにスプライシングされ得る。本開示のカスパーゼポリペプチドは、組換え配列および／またはキメラ配列によってコードされ得る。本開示の組換えおよび／またはキメラカスパーゼポリペプチドは、１つまたは複数の異なるカスパーゼポリペプチド由来の配列を含み得る。代替として、または加えて、本開示の組換えおよび／またはキメラカスパーゼポリペプチドは、１つまたは複数の種由来の配列（例えば、ヒト配列および非ヒト配列）を含み得る。本開示のカスパーゼポリペプチドは天然に存在しなくてもよい。

本開示の誘導性アポトーシス促進性ポリペプチドのリガンド結合領域は、本開示の第１の誘導性アポトーシス促進性ポリペプチドの本開示の第２の誘導性アポトーシス促進性ポリペプチドとの二量体化を促進または増進する任意のポリペプチド配列を含み得、その二量体化は、アポトーシス促進性ポリペプチドの架橋、および細胞におけるアポトーシスの惹起を活性化または誘導する。

リガンド結合（「二量体化」）領域は、天然または非天然のリガンド（すなわち、誘導剤）、例えば、非天然合成リガンドを使用する誘導を可能にする、任意のポリペプチドまたはその機能的ドメインを含み得る。リガンド結合領域は、誘導性アポトーシス促進性ポリペプチドの性質およびリガンド（すなわち、誘導剤）の選択に依存して、細胞膜より内側または外側であり得る。受容体を含む、幅広い種類のリガンド結合ポリペプチドおよびその機能的ドメインが知られている。本開示のリガンド結合領域は、受容体由来の１つまたは複数の配列を含み得る。特に興味深いのは、リガンド結合領域であって、それに対するリガンド（例えば、低分子有機リガンド）が公知であり、または容易に生成され得る、リガンド結合領域である。これらのリガンド結合領域または受容体には、ＦＫＢＰおよびシクロフィリン受容体、ステロイド受容体、テトラサイクリン受容体など、ならびに、「非天然」受容体（抗体、特に、重鎖または軽鎖サブユニット、それらの変異型配列、確率論的手順、コンビナトリアル合成などにより得られたランダムアミノ酸配列から得ることができる）が挙げられ得るが、それらに限定されない。ある特定の実施形態では、リガンド結合領域は、ＦＫＢＰリガンド結合領域、シクロフィリン受容体リガンド結合領域、ステロイド受容体リガンド結合領域、シクロフィリン受容体リガンド結合領域、およびテトラサイクリン受容体リガンド結合領域からなる群から選択される。

１つまたは複数の受容体ドメインを含むリガンド結合領域は、それらの天然ドメインかまたはトランケート型活性部分かのいずれかとしての、少なくとも約５０個のアミノ酸、および約３５０個未満のアミノ酸、通常、２００個未満のアミノ酸であり得る。結合領域は、例えば、二量体化のために構成され得る、小さく（ウイルスベクターにおける効率的なトランスフェクションを可能にするように、２５ｋＤａ未満）、単量体で、非免疫原性で、合成的に入手しやすく、細胞透過性で、無毒性のリガンドであり得る。

１つまたは複数の受容体ドメインを含むリガンド結合領域は、誘導性アポトーシス促進性ポリペプチドの設計、および適切なリガンド（すなわち、誘導剤）の利用可能性に依存して、細胞内または細胞外であり得る。疎水性リガンドについて、結合領域は、膜のどちらの側でもあり得るが、親水性リガンド、特にタンパク質リガンドについて、結合領域は、結合のために利用できる形でリガンドを内部移行するための輸送系が存在しない限り、通常、細胞膜の外側である。細胞内受容体について、誘導性アポトーシス促進性ポリペプチド、または誘導性アポトーシス促進性ポリペプチドを含むトランスポゾンもしくはベクターは、受容体ドメイン配列の５’もしくは３’側にシグナルペプチドおよび膜貫通ドメインをコードし得、または受容体ドメイン配列の５’側に脂質付着シグナル配列を有し得る。受容体ドメインがシグナルペプチドと膜貫通ドメインの間にある場合、受容体ドメインは細胞外にある。

抗体および抗体サブユニット、例えば、重鎖または軽鎖、具体的には断片、より具体的には、その可変領域の全部もしくは一部、または高親和性結合を生じる重鎖と軽鎖の融合体が、本開示のリガンド結合領域として使用することができる。企図される抗体には、免疫応答をトリガーせず、一般的に末梢（すなわち、ＣＮＳ／脳領域の外側）において発現していない、細胞外ドメインなどの異所性に発現したヒト産物であるものが挙げられる。そのような例には、低親和性神経成長因子受容体（ＬＮＧＦＲ）、および胚性表面タンパク質（すなわち、がん胎児抗原）が挙げられるが、それらに限定されない。なおさらに、抗体は、生理学的に許容されるハプテン分子に対して調製することができ、その個々の抗体サブユニットを結合親和性についてスクリーニングすることができる。そのサブユニットをコードするｃＤＮＡは、リガンドに対する適切な親和性を有する結合タンパク質ドメインを獲得するように、単離され、定常領域、可変領域の部分の欠失、可変領域の変異誘発などにより改変され得る。このように、ほとんどいかなる生理学的に許容されるハプテン化合物も、リガンドとして、またはリガンドに対するエピトープを提供するために、用いることができる。抗体ユニットの代わりに、天然受容体であって、その結合領域またはドメインが公知であり、結合についての有用な、または公知のリガンドが存在する、天然受容体を用いることができる。

受容体を多量体化することについて、誘導性アポトーシス促進性ポリペプチドのリガンド結合領域／受容体ドメインに対するリガンドは、リガンドが少なくとも２つの結合部位を有し得、その結合部位のそれぞれがリガンド受容体領域と結合する能力がある（すなわち、第１の誘導性アポトーシス促進性ポリペプチドのリガンド結合領域を結合する能力がある第１の結合部位、および第２の誘導性アポトーシス促進性ポリペプチドのリガンド結合領域を結合する能力がある第２の結合部位を有するリガンドであって、該第１の誘導性アポトーシス促進性ポリペプチドのリガンド結合領域および該第２の誘導性アポトーシス促進性ポリペプチドのリガンド結合領域が、同一か異なるかのいずれかである）という意味において、多量体であり得る。したがって、本明細書で使用される場合、用語「多量体リガンド結合領域」は、多量体リガンドと結合する、本開示の誘導性アポトーシス促進性ポリペプチドのリガンド結合領域を指す。本開示の多量体リガンドには、二量体リガンドが挙げられる。本開示の二量体リガンドは、リガンド受容体ドメインと結合する能力がある２つの結合部位を有し得る。ある特定の実施形態では、本開示の多量体リガンドは、合成有機小分子の二量体またはより高い次数のオリゴマー、通常、約四量体以下であり、個々の分子は、典型的には、少なくとも約１５０Ｄａ、約５ｋＤａ未満、通常、約３ｋＤａ未満である。合成リガンドと受容体の様々なペアを用いることができる。例えば、天然受容体を含む実施形態では、二量体ＦＫ５０６がＦＫＢＰ１２受容体と共に使用することができ、二量体化シクロスポリンＡはシクロフィリン受容体と共に使用することができ、二量体化エストロゲンはエストロゲン受容体と共に、二量体化グルココルチコイドはグルココルチコイド受容体と共に、二量体化テトラサイクリンはテトラサイクリン受容体と共に、二量体化ビタミンＤはビタミンＤ受容体と共に、など使用することができる。あるいは、より高い次数のリガンド、例えば、三量体を使用することができる。非天然受容体、例えば、抗体サブユニット、改変された抗体サブユニット、可動性リンカーにより分離された、重鎖および軽鎖可変領域でタンデムに構成される一本鎖抗体、または改変型受容体、およびそれらの変異型配列などを含む実施形態について、多くの種類の化合物のいずれかを使用することができる。本開示の多量体リガンドを含むユニットの重要な特性は、各結合部位が、受容体を高親和性で結合し得ること、および好ましくは、それらが化学的に二量体化され得ることである。また、それらが、たいていの適用について、血清中に機能的レベルで溶解し、さらに、形質膜を横断して拡散することができるように、リガンドの疎水性／親水性の平衡を保つための方法が利用できる。

本開示の誘導性アポトーシス促進性ポリペプチドの活性化は、例えば、条件的に調節されるタンパク質またはポリペプチドを生じるように、誘導剤により媒介される化学誘導二量体化（ＣＩＤ）を通して、達成され得る。本開示のアポトーシス促進性ポリペプチドは、誘導性であるだけでなく、不安定な二量体化剤の分解または単量体競合的阻害剤の投与に起因して、これらのポリペプチドの誘導はまた可逆性でもある。

ある特定の実施形態では、リガンド結合領域はＦＫ５０６結合タンパク質１２（ＦＫＢＰ１２）ポリペプチドを含む。ある特定の実施形態では、リガンド結合領域は、３６位におけるフェニルアラニン（Ｆ）からバリン（Ｖ）への置換（Ｆ３６Ｖ）を有するＦＫＢＰ１２ポリペプチドを含む。リガンド結合領域が、３６位におけるフェニルアラニン（Ｆ）からバリン（Ｖ）への置換（Ｆ３６Ｖ）を有するＦＫＢＰ１２ポリペプチドを含む、ある特定の実施形態では、誘導剤は、合成薬物である、ＡＰ１９０３（Ｒｉｍｉｄｕｃｉｄ）（ＣＡＳインデックス名：２－ピペリジンカルボン酸，１－［（２Ｓ）－１－オキソ－２－（３，４，５－トリメトキシフェニル）ブチル］－，１，２－エタンジイルビス［イミノ（２－オキソ－２，１－エタンジイル）オキシ－３，１－フェニレン［（１Ｒ）－３－（３，４－ジメトキシフェニル）プロピリデン］］エステル，［２Ｓ－［１（Ｒ^＊），２Ｒ^＊［Ｓ^＊［Ｓ^＊［１（Ｒ^＊），２Ｒ^＊］］］］］－（９Ｃｌ）ＣＡＳ登録番号：１９５５１４－６３－７；分子式：Ｃ７８Ｈ９８Ｎ４Ｏ２０；分子量：１４１１．６５））を含み得る。リガンド結合領域が、３６位におけるフェニルアラニン（Ｆ）からバリン（Ｖ）への置換（Ｆ３６Ｖ）を有するＦＫＢＰ１２ポリペプチドを含む、ある特定の実施形態では、誘導剤は、ＡＰ２０１８７（ＣＡＳ登録番号：１９５５１４－８０－８および分子式：Ｃ８２Ｈ１０７Ｎ５Ｏ２０）を含み得る。ある特定の実施形態では、誘導剤は、ＡＰ２０１８７アナログ、例えば、ＡＰ１５１０などである。本明細書で使用される場合、誘導剤ＡＰ２０１８７、ＡＰ１９０３（Ｒｉｍｉｄｕｃｉｄ）、およびＡＰ１５１０は交換可能に使用され得る。

ＡＰ１９０３（Ｒｉｍｉｄｕｃｉｄ）ＡＰＩは、ＡｌｐｈｏｒａＲｅｓｅａｒｃｈＩｎｃ．により製造され、ＡＰ１９０３（Ｒｉｍｉｄｕｃｉｄ）注射用製剤は、ＦｏｒｍａｔｅｃｈＩｎｃ．により作製される。それは、非イオン性可溶化剤ＳｏｌｕｔｏｌＨＳ１５（２５０ｍｇ／ｍＬ、ＢＡＳＦ）の２５％溶液中のＡＰ１９０３（Ｒｉｍｉｄｕｃｉｄ）の５ｍｇ／ｍＬ溶液として製剤化される。室温において、この製剤は、透明の淡黄色の溶液である。冷蔵により、この製剤は、可逆的相転移を起こし、乳濁した溶液を生じる。この相転移は、室温へ再び温めることにより逆転する。充填は、３ｍＬガラスバイアル中に２．３３ｍＬ（バイアルあたり合計で注射用およそ１０ｍｇＡＰ１９０３（Ｒｉｍｉｄｕｃｉｄ））である。ＡＰ１９０３（Ｒｉｍｉｄｕｃｉｄ）を投与する必要性が決定したら、患者は、例えば、非ＤＥＨＰ、非酸化エチレンで滅菌された注入セットを使用して、ＩＶ注入により２時間にわたって、注射用の単一固定用量のＡＰ１９０３（Ｒｉｍｉｄｕｃｉｄ）（０．４ｍｇ／ｋｇ）を投与され得る。ＡＰ１９０３（Ｒｉｍｉｄｕｃｉｄ）の用量は、全ての患者について個々に計算され、体重が≧１０％、変動しない限り、再計算されない。計算された用量は、注入前に０．９％ノーマルセーライン中１００ｍＬに希釈される。ＡＰ１９０３（Ｒｉｍｉｄｕｃｉｄ）の以前の第Ｉ相試験において、２４人の健康なボランティアが、２時間にわたってＩＶ注入される０．０１ｍｇ／ｋｇ、０．０５ｍｇ／ｋｇ、０．１ｍｇ／ｋｇ、０．５ｍｇ／ｋｇ、および１．０ｍｇ／ｋｇの用量レベルでの注射用単一用量のＡＰ１９０３（Ｒｉｍｉｄｕｃｉｄ）で処置された。ＡＰ１９０３（Ｒｉｍｉｄｕｃｉｄ）血漿中レベルは、用量に正比例し、平均Ｃｍａｘ値は、０．０１～１．０ｍｇ／ｋｇの用量範囲に対しておよそ１０～１２７５ｎｇ／ｍＬであった。最初の注入時間後、血液濃度は、迅速な分布相を示し、血漿中レベルは、投与後０．５時間、２時間、および１０時間において、それぞれ、最大濃度のおよそ１８％、７％、および１％へ低下した。注射用ＡＰ１９０３（Ｒｉｍｉｄｕｃｉｄ）は、全ての用量レベルにおいて安全で、かつ耐容性が良いことが示され、有利な薬物動態学的プロファイルが実証された。Iuliucci J Dら、J Clin Pharmacol.４１巻：８７０～９頁、２００１年。

使用される注射用のＡＰ１９０３（Ｒｉｍｉｄｕｃｉｄ）の固定用量は、例えば、２時間にわたって静脈内に注入される０．４ｍｇ／ｋｇであり得る。細胞の効果的なシグナル伝達のためにｉｎｖｉｔｒｏで必要とされるＡＰ１９０３（Ｒｉｍｉｄｕｃｉｄ）の量は、１０～１００ｎＭ（１６００ＤａＭＷ）である。これは、１６～１６０μｇ／Ｌまたは約０．０１６～１．６μｇ／ｋｇ（１．６～１６０μｇ／ｋｇ）に等しい。１ｍｇ／ｋｇまでの用量は、上記のＡＰ１９０３（Ｒｉｍｉｄｕｃｉｄ）の第Ｉ相試験において耐容性が良かった。したがって、０．４ｍｇ／ｋｇは、治療用細胞と組み合わせてのこの第Ｉ相試験について、ＡＰ１９０３（Ｒｉｍｉｄｕｃｉｄ）の安全かつ有効な用量であり得る。

本開示のリガンド結合をコードするアミノ酸および／または核酸配列は、野生型アミノ酸または核酸配列と比較して１つまたは複数の改変の配列（sequence one or more modifications）を含有し得る。例えば、本開示のリガンド結合領域をコードするアミノ酸および／または核酸配列は、コドン最適化配列であり得る。１つまたは複数の改変は、野生型ポリペプチドと比較して、本開示のリガンド結合領域に対するリガンド（例えば、誘導剤）の結合親和性を増加させ得る。代替として、または加えて、１つまたは複数の改変は、野生型ポリペプチドと比較して、本開示のリガンド結合領域の免疫原性を減少させ得る。本開示のリガンド結合領域および／または本開示の誘導剤は天然に存在しなくてもよい。

本開示の誘導性アポトーシス促進性ポリペプチドは、リガンド結合領域、リンカー、およびアポトーシス促進性ペプチドを含み、その誘導性アポトーシス促進性ポリペプチドは非ヒト配列を含まない。ある特定の実施形態では、非ヒト配列は制限部位を含む。リンカーは、アポトーシス促進性ポリペプチドの相互作用または活性化が細胞においてアポトーシスを惹起するように、リガンド結合領域の二量体化により、アポトーシス促進性ポリペプチドの相互作用、架橋、交差活性化、または活性化を可能にする任意の有機または無機材料を含み得る。ある特定の実施形態では、リンカーはポリペプチドである。ある特定の実施形態では、リンカーは、Ｇ／Ｓリッチなアミノ酸配列を含むポリペプチドである（「ＧＳ」リンカー）。ある特定の実施形態では、リンカーは、アミノ酸配列ＧＧＧＧＳ（配列番号５）を含むポリペプチドである。好ましい実施形態では、リンカーは、ポリペプチドであり、そのポリペプチドをコードする核酸は、制限エンドヌクレアーゼのための制限部位を含有しない。本開示のリンカーは、天然に存在しなくてもよい。

本開示の誘導性アポトーシス促進性ポリペプチドは、細胞において、その細胞における本開示の誘導性アポトーシス促進性ポリペプチドの発現を開始および／または制御する能力がある任意のプロモーターの転写制御下で、発現し得る。本明細書で使用される場合、用語「プロモーター」は、遺伝子を転写するＲＮＡポリメラーゼのための最初の結合部位として働くプロモーターを指す。例えば、本開示の誘導性アポトーシス促進性ポリペプチドは、哺乳動物細胞において、哺乳動物細胞における本開示の誘導性アポトーシス促進性ポリペプチドの発現を開始および／または制御する能力がある任意のプロモーターの転写制御下で、発現し得、そのプロモーターには、天然プロモーター、内因性プロモーター、外因性プロモーター、および異種プロモーターが挙げられるが、それらに限定されない。好ましい哺乳動物細胞にはヒト細胞が挙げられる。したがって、本開示の誘導性アポトーシス促進性ポリペプチドは、ヒト細胞において、ヒト細胞における本開示の誘導性アポトーシス促進性ポリペプチドの発現を開始および／または制御する能力がある任意のプロモーターの転写制御下で、発現し得、そのプロモーターには、ヒトプロモーターまたはウイルスプロモーターが挙げられるが、それらに限定されない。ヒト細胞における発現のための例示的なプロモーターには、ヒトサイトメガロウイルス（ＣＭＶ）最初期遺伝子プロモーター、ＳＶ４０初期プロモーター、Ｒｏｕｓｓａｒｃｏｍａｖｉｒｕｓ長末端反復配列、β－アクチンプロモーター、ラットインスリンプロモーター、およびグリセルアルデヒド－３－リン酸デヒドロゲナーゼプロモーターが挙げられるが、それらに限定されず、それらのそれぞれは、本開示の誘導性アポトーシス促進性ポリペプチドの高レベルの発現を得るために使用され得る。本開示の誘導性アポトーシス促進性ポリペプチドの発現を達成するための、当技術分野において周知である他のウイルスまたは哺乳動物細胞または細菌ファージのプロモーターの使用が、発現レベルが細胞においてアポトーシスを惹起するのに十分であるとの条件で、同様に企図される。周知の性質をもつプロモーターを用いることにより、トランスフェクションまたは形質転換後の目的のタンパク質の発現のレベルおよびパターンを最適化することができる。

特定の生理的シグナルまたは合成シグナルに応答して制御されるプロモーターの選択は、本開示の誘導性アポトーシス促進性ポリペプチドの誘導性発現を可能にすることができる。エクジソン系（Ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎ、Ｃａｒｌｓｂａｄ、Ｃａｌｉｆ．）は１つのそのような系である。この系は、哺乳動物細胞において目的の遺伝子の制御された発現を可能にするように設計されている。それは、導入遺伝子の基底レベルの発現が実質的にないが、２００倍を超える誘導能を可能にする厳格に制御された発現機構からなる。その系は、Ｄｒｏｓｏｐｈｉｌａのヘテロ二量体エクジソン受容体に基づいており、エクジソンまたはムリステロンＡなどのアナログがその受容体と結合したとき、その受容体は、プロモーターを活性化して、下流の導入遺伝子の発現をオンにし、高レベルのｍＲＮＡ転写物が獲得される。この系において、目的の遺伝子の発現を駆動させるエクジソン応答性プロモーターは別のプラスミド上にあるが、ヘテロ二量体受容体の両方の単量体は１つのベクターから構成的に発現する。それゆえに、この型の系を目的のベクターへと操作することは、有用であり得る。有用であり得る別の誘導性系は、最初、GossenおよびBujard（GossenおよびBujard、Proc. Natl. Acad. Sci. USA、８９巻：５５４７～５５５１頁、１９９２年；Gossenら、Science、２６８巻：１７６６～１７６９頁、１９９５年）によって開発されたＴｅｔ－Ｏｆｆ（商標）またはＴｅｔ－Ｏｎ（商標）系（Ｃｌｏｎｔｅｃｈ、ＰａｌｏＡｌｔｏ、Ｃａｌｉｆ．）である。この系もまた、高レベルの遺伝子発現が、テトラサイクリンまたはドキシサイクリンなどのテトラサイクリン誘導体に応答して制御されることを可能にする。Ｔｅｔ－Ｏｎ（商標）系において、遺伝子発現は、ドキシサイクリンの存在下でオンにされるが、Ｔｅｔ－Ｏｆｆ（商標）系において、遺伝子発現はドキシサイクリンの非存在下でオンにされる。これらの系は、Ｅ．ｃｏｌｉのテトラサイクリン抵抗性オペロンに由来する２つの制御エレメント：テトラサイクリンオペレーター配列（それに、テトラサイクリンリプレッサーが結合する）およびテトラサイクリンリプレッサータンパク質に基づいている。目的の遺伝子は、プラスミドであって、テトラサイクリン応答性エレメントがその中に存在するプラスミドのプロモーターの後ろにクローニングされる。第２のプラスミドは、テトラサイクリン調節性トランス活性化因子と呼ばれる制御エレメントを含有し、その制御エレメントは、Ｔｅｔ－Ｏｆｆ（商標）系において、単純ヘルペスウイルス由来のＶＰ１６ドメインおよび野生型テトラサイクリンリプレッサーで構成される。したがって、ドキシサイクリンの非存在下で、転写は構成的にオンである。Ｔｅｔ－Ｏｎ（商標）系において、テトラサイクリンリプレッサーは、野生型ではなく、ドキシサイクリンの存在下で、転写を活性化する。遺伝子治療ベクター作製について、Ｔｅｔ－Ｏｆｆ（商標）系が使用され得、それにより、産生細胞は、テトラサイクリンまたはドキシサイクリンの存在下で成長し、潜在的に毒性の導入遺伝子の発現を阻止することができるが、そのベクターが患者へ導入されたとき、遺伝子発現は構成的にオンである。

一部の状況では、遺伝子治療ベクターにおいて導入遺伝子の発現を制御することが望ましい。例えば、様々な活性強度をもつ異なるウイルスプロモーターが、望まれる発現レベルに依存して利用される。哺乳動物細胞において、ＣＭＶ最初期プロモーターが、強い転写活性化を提供するのに使用されることが多い。ＣＭＶプロモーターは、Donnelly, J. J.ら、１９９７年、Annu. Rev. Immunol.１５巻：６１７～４８頁に概説されている。それほど強力ではない、ＣＭＶプロモーターの改変型もまた、導入遺伝子の発現レベルの低下が望まれる場合、使用されている。造血細胞における導入遺伝子の発現が望まれる場合、ＭＬＶまたはＭＭＴＶ由来のＬＴＲなどのレトロウイルスプロモーターがしばしば、使用される。所望の効果に依存して使用される他のウイルスプロモーターには、ＳＶ４０、ＲＳＶＬＴＲ、ＨＩＶ－１およびＨＩＶ－２ＬＴＲ、Ｅ１Ａ、Ｅ２Ａ、またはＭＬＰ領域由来などのアデノウイルスプロモーター、ＡＡＶＬＴＲ、ＨＳＶ－ＴＫ、ならびにトリ肉腫ウイルスが挙げられる。

他の例において、発生的に制御され、特定の分化細胞において活性があるプロモーターが選択され得る。したがって、例えば、プロモーターは、多能性幹細胞において不活性であり得るが、例えば、多能性幹細胞がより成熟した細胞へ分化する場合、そのとき、プロモーターは活性化され得る。

同様に、組織特異的プロモーターは、非標的組織への潜在的毒性または望ましくない効果を低下させるために、特定の組織または細胞において転写をもたらすように使用される。これらのプロモーターは、ＣＭＶプロモーターなどのより強いプロモーターと比較して発現の低下を生じ得るが、より制限された発現および免疫原性もまた生じ得る（Bojak, A.ら、２００２年、Vaccine、２０巻：１９７５～７９頁；Cazeaux., N.ら、２００２年、Vaccine ２０巻：３３２２～３１頁）。例えば、ＰＳＡ関連プロモーターもしくは前立腺特異的腺性カリクレイン、または筋肉クレアチンキナーゼ遺伝子などの組織特異的プロモーターが、適切な場合、使用され得る。

組織特異的または分化特異的プロモーターの例には、以下が挙げられるが、それらに限定されない：Ｂ２９（Ｂ細胞）；ＣＤ１４（単球性細胞）；ＣＤ４３（白血球および血小板）；ＣＤ４５（造血細胞）；ＣＤ６８（マクロファージ）；デスミン（筋肉）；エラスターゼ－１（膵腺房細胞）；エンドグリン（内皮細胞）；フィブロネクチン（分化中の細胞、治癒中の組織）；およびＦｌｔ－１（内皮細胞）；ＧＦＡＰ（アストロサイト）。

ある特定の適応症において、遺伝子治療ベクターの投与後の特定の時点において転写を活性化することが望ましい。これは、ホルモンまたはサイトカイン制御可能であるプロモーターなどのプロモーターを用いて行われる。使用することができるサイトカインおよび炎症性タンパク質応答性プロモーターには、ＫおよびＴキニノーゲン（Kageyamaら、（１９８７年）J. Biol. Chem.、２６２巻、２３４５～２３５１頁）、ｃ－ｆｏｓ、ＴＮＦ－アルファ、Ｃ－反応性タンパク質（Arconeら、（１９８８年）Nucl. Acids Res.、１６巻（８号）、３１９５～３２０７頁）、ハプトグロビン（Olivieroら、（１９８７年）EMBO J.、６巻、１９０５～１９１２頁）、血清アミロイドＡ２、Ｃ／ＥＢＰアルファ、ＩＬ－１、ＩＬ－６（PoliおよびCortese、（１９８９年）Proc. Nat'l Acad. Sci. USA、８６巻、８２０２～８２０６頁）、補体Ｃ３（Wilsonら、（１９９０年）Mol. Cell. Biol.、６１８１～６１９１頁）、ＩＬ－８、アルファ－１酸糖タンパク質（ProwseおよびBaumann、（１９８８年）Mol Cell Biol、８巻、４２～５１頁）、アルファ－１アンチトリプシン、リポタンパク質リパーゼ（Zechnerら、Mol. Cell. Biol.、２３９４～２４０１頁、１９８８年）、アンジオテンシノーゲン（Ronら、（１９９１年）Mol. Cell. Biol.、２８８７～２８９５頁）、フィブリノーゲン、ｃ－ｊｕｎ（ホルボールエステル、ＴＮＦ－アルファ、ＵＶ照射、レチノイン酸、および過酸化水素により誘導可能）、コラゲナーゼ（ホルボールエステルおよびレチノイン酸により誘導される）、メタロチオネイン（重金属およびグルココルチコイド誘導性）、ストロメライシン（ホルボールエステル、インターロイキン－１、およびＥＧＦにより誘導可能）、アルファ－２マクログロブリンおよびアルファ－１抗キモトリプシンが挙げられる。他のプロモーターには、例えば、ＳＶ４０、ＭＭＴＶ、ヒト免疫不全ウイルス（ＭＶ）、モロニーウイルス、ＡＬＶ、エプスタインバーウイルス、ラウス肉腫ウイルス、ヒトアクチン、ミオシン、ヘモグロビン、およびクレアチンが挙げられる。

望まれる作用に依存して、単独での、または別のプロモーターと組み合わせての上記のプロモーターのいずれかが有用であり得ることが構想される。プロモーターおよび他の制御エレメントは、それらが、所望の細胞または組織において機能的であるように選択される。加えて、このプロモーターのリストは、網羅的とも限定的であるとも解釈されるべきではない；他のプロモーターが、本明細書に開示されたプロモーターおよび方法と共に使用される。
核酸分子

本開示の誘導性ポリペプチドをコードする配列を含む本開示の核酸分子は、ｍＲＮＡ、ｈｎＲＮＡ、ｔＲＮＡもしくは任意の他の形態などのＲＮＡの形態、または、これだけに限らないがクローニングによって得られるもしくは合成的に産生されるｃＤＮＡおよびゲノムＤＮＡが挙げられるＤＮＡの形態、あるいはこれらの任意の組合せであってよい。ＤＮＡは、３本鎖、２本鎖もしくは１本鎖またはこれらの任意の組合せであってよい。ＤＮＡまたはＲＮＡの少なくとも１本の鎖の任意の部分は、センス鎖としても公知のコード鎖であってよく、またはアンチセンス鎖とも称される非コード鎖であってよい。

本開示の単離された核酸分子は、必要に応じて１つまたは複数のイントロン、例えば、これだけに限らないが、本開示の誘導性ポリペプチドをコードする少なくとも１つの配列の少なくとも１つの特定の部分と共に、オープンリーディングフレーム（ＯＲＦ）を含む核酸分子；本開示の誘導性ポリペプチドのコード配列を含む核酸分子；ならびに上に記載されるヌクレオチド配列とは実質的に異なるヌクレオチド配列を含むが遺伝コードの縮重のために、本明細書に記載のとおりおよび／または当技術分野において公知のとおり、本開示の誘導性ポリペプチドをいまだコードする核酸分子を含み得る。当然のことながら、遺伝コードは当技術分野において周知である。したがって、本開示の誘導性ポリペプチドをコードするそのような縮重核酸バリアントを生成することは当業者に日常的である。例えばAusubelら、上記を参照されたい、そのような核酸バリアントは本開示に含まれる。

本明細書に示されるとおり、本開示の誘導性ポリペプチドをコードする核酸を含む本開示の核酸分子として、これだけに限らないが、誘導性ポリペプチドまたは断片のアミノ酸配列をコードするもの、それ自体；誘導性ポリペプチド全体またはその部分のコード配列；本開示の誘導性ポリペプチド、断片または部分のコード配列ならびに、スプライシングおよびポリアデニル化シグナル（例えば、リボソーム結合およびｍＲＮＡの安定性）が挙げられる転写、ｍＲＮＡプロセシングにおいて役割を演じる転写される非翻訳配列などの非コード５’および３’配列がこれだけに限らないが挙げられる追加的、非コード配列と合わせて少なくとも１つのイントロンなどの上記の追加的コード配列を含むまたは含まない、少なくとも１つのシグナルリーダーまたは融合ペプチドのコード配列などの追加的配列；追加的機能を提供するものなどの追加的アミノ酸をコードする追加的コード配列が挙げられ得る。したがって、本開示の誘導性ポリペプチドをコードする配列は、タンパク質スキャホールド断片または部分を含む融合タンパク質スキャホールドの精製を促進するペプチドをコードする配列などのマーカー配列に融合されてよい。
核酸の構築

本開示の単離された核酸は、当技術分野において周知のとおり（ａ）組換え方法、（ｂ）合成技法、（ｃ）精製技法および／または（ｄ）これらの組合せを使用して作製されてよい。

核酸は、本開示の誘導性ポリペプチドをコードする配列に加えて配列を好都合に含む場合がある。例えば、１つまたは複数のエンドヌクレアーゼ制限部位を含むマルチクローニング部位は、本開示の誘導性ポリペプチドをコードする配列の単離を支援するために核酸に挿入されてよい。同様に翻訳可能配列は、本開示の翻訳されたポリヌクレオチドの単離を支援するために挿入されてよい。例えば、ヘキサヒスチジンマーカー配列は、本開示のカスパーゼタンパク質を精製するための好都合な手段を提供する。コード配列を除く本開示の核酸は、必要に応じて、本開示の誘導性ポリペプチドをコードする配列または本開示の誘導性ポリペプチドの、クローニングおよび／または発現のためのベクター、アダプターまたはリンカーである。

追加的配列は、クローニングおよび／もしくは発現におけるそれらの機能を最適化するために、本開示の誘導性ポリペプチドをコードするポリヌクレオチド配列の単離を支援するために、または本開示の誘導性ポリペプチドをコードするポリヌクレオチド配列の細胞への導入を改善するために、そのようなクローニングおよび／または発現配列に加えられてよい。クローニングベクター、発現ベクター、アダプターおよびリンカーの使用は、当技術分野において周知である（例えば、Ausubel、上記；またはSambrook、上記を参照されたい）。
核酸を構築するための組換え方法

ＲＮＡ、ｃＤＮＡ、ゲノムＤＮＡまたはこれらの任意の組合せなどの本開示の単離された核酸組成物は当業者に公知のいくつものクローニング法を使用して生物原料から得ることができる。一部の実施形態では、ストリンジェントな条件下で本発明のポリヌクレオチドに選択的にハイブリダイズするオリゴヌクレオチドプローブは、ｃＤＮＡまたはゲノムＤＮＡライブラリー中の所望の配列を同定するために使用される。ＲＮＡの単離、ｃＤＮＡおよびゲノムライブラリーの構築は、当業者に周知である（例えば、Ausubel、上記；またはSambrook、上記を参照されたい）。
核酸スクリーニングおよび単離方法

ｃＤＮＡまたはゲノムライブラリーは、本開示のポリヌクレオチドまたはその断片の配列に基づくプローブを使用してスクリーニングされてよい。プローブは、同じまたは異なる生物において相同遺伝子を単離するためにゲノムＤＮＡまたはｃＤＮＡ配列とハイブリダイズするように使用され得る。当業者は、ハイブリダイゼーションの種々の程度のストリンジェンシーがアッセイにおいて使用されてよく；ハイブリダイゼーションまたは洗浄媒体のいずれかがストリンジェントであってよいことを理解する。ハイブリダイゼーションのための条件がストリンジェントになるほど、二重鎖形成が生じるためにプローブと標的との間にはさらに高い程度の相補性がなければならない。ストリンジェンシーの程度は、温度、イオン強度、ｐＨおよびホルムアミドなどの部分変性溶媒（ｐａｒｔｉａｌｌｙｄｅｎａｔｕｒｉｎｇｓｏｌｖｅｎｔ）の存在の１つまたは複数によって調節され得る。例えば、ハイブリダイゼーションのストリンジェンシーは、例えば、０％から５０％の範囲内でのホルムアミドの濃度の操作を通じて、反応物溶液の極性を変更することによって好都合に変動される。検出可能な結合のために必要な相補性（配列同一性）の程度は、ハイブリダイゼーション媒体および／または洗浄媒体のストリンジェンシーに応じて変動する。相補性の程度は、最適には１００％、あるいは７０～１００％またはその中の任意の範囲もしくは値である。しかし、プローブおよびプライマー中のわずかな配列のバリエーションがハイブリダイゼーションおよび／または洗浄媒体のストリンジェンシーを低減することによって補われ得ることは理解されるべきである。

ＲＮＡまたはＤＮＡの増幅方法は、当技術分野において周知であり、本明細書に示される教示および指針に基づいて、過度の実験を伴うことなく本開示により使用することがでる。

ＤＮＡまたはＲＮＡ増幅の公知の方法として、これだけに限らないが、ポリメラーゼ連鎖反応（ＰＣＲ）および関連増幅プロセス（例えば、Mullisらへの米国特許第４，６８３，１９５号、第４，６８３，２０２号、第４，８００，１５９号、第４，９６５，１８８号；Taborらへの第４，７９５，６９９号および第４，９２１，７９４号；Innisへの第５，１４２，０３３号；Wilsonらへの第５，１２２，４６４号；Innisへの第５，０９１，３１０号；Gyllenstenらへの第５，０６６，５８４号；Gelfandらへの第４，８８９，８１８号；Silverらへの第４，９９４，３７０号；Biswasへの第４，７６６，０６７号；Ringoldへの第４，６５６，１３４号を参照されたい）ならびに標的配列へのアンチセンスＲＮＡを２本鎖ＤＮＡ合成のための鋳型として使用するＲＮＡ媒介増幅（商標ＮＡＳＢＡと共にMalekらへの米国特許第５，１３０，２３８号）が挙げられ、参考文献の内容全体は参照により本明細書に組み込まれる（例えば、Ausubel、上記；またはSambrook、上記を参照されたい）。

例えば、ポリメラーゼ連鎖反応（ＰＣＲ）技術は、本開示および関連遺伝子のポリヌクレオチドの配列をゲノムＤＮＡまたはｃＤＮＡライブラリーから直接増幅するために使用できる。ＰＣＲおよび他のｉｎｖｉｔｒｏ増幅方法は、例えば発現されるタンパク質をコードする核酸配列をクローニングするため、試料中の所望のｍＲＮＡの存在を検出するためのプローブとして使用するための核酸を作製するため、核酸配列決定のためまたは他の目的のためにも有用であり得る。ｉｎｖｉｔｒｏ増幅方法を通じて当業者を導くために十分な技法の例は、Berger、上記、Sambrook、上記およびAusubel、上記、ならびにMullisら、米国特許第４，６８３，２０２号（１９８７年）；ならびにInnisら編、PCR Protocols A Guide to Methods and Applications、Academic Press Inc.、San Diego、Calif.（１９９０年）に見出される。ゲノムＰＣＲ増幅のための商業的に入手できるキットは、当技術分野において公知である。例えば、Ａｄｖａｎｔａｇｅ－ＧＣＧｅｎｏｍｉｃＰＣＲＫｉｔ（Ｃｌｏｎｔｅｃｈ）を参照されたい。追加的に、例えばＴ４遺伝子３２タンパク質（ＢｏｅｈｒｉｎｇｅｒＭａｎｎｈｅｉｍ）は、長いＰＣＲ産生物の収量を改善するために使用できる。
核酸を構築するための合成方法

本開示の単離された核酸は、公知の方法（例えば、Ausubelら、上記を参照されたい）によって直接の化学合成によって調製されてもよい。化学合成は、相補配列とのハイブリダイゼーションによってまたは鋳型として１本鎖を使用するＤＮＡポリメラーゼを用いたポリマー化によって２本鎖ＤＮＡに変換され得る、１本鎖オリゴヌクレオチドを一般に生成する。当業者は、ＤＮＡの化学合成は、約１００、５００および１０００またはそれより多い塩基の配列に限定され得る一方で、より長い配列は短い配列のライゲーションによって得ることができることを認識する。
組換え発現カセット

本開示は、本開示の核酸を含む組換え発現カセットをさらに提供する。本開示の核酸配列、例えば本開示の誘導性ポリペプチドの部分をコードするｃＤＮＡまたはゲノム配列は、少なくとも１つの所望の宿主細胞に導入され得る組換え発現カセットを構築するために使用されてよい。組換え発現カセットは、所期の宿主細胞においてポリヌクレオチドの転写を導く転写開始制御配列に作動可能に連結した、本開示のポリヌクレオチドを典型的には含む。異種性および非異種性（すなわち、内因性）の両方のプロモーターは、本開示の核酸の発現を導くために使用されてよい。

一部の実施形態では、プロモーター、エンハンサーまたは他のエレメントとして役立つ単離された核酸は、本開示のポリヌクレオチドの発現を上方または下方制御するように、本開示のポリヌクレオチドの非異種形態の適切な位置（イントロンの上流、下流またはその中）に導入されてよい。例えば、内因性プロモーターは、ｉｎｖｉｖｏまたはｉｎｖｉｔｒｏで変異、欠失および／または置換によって変更されてよい。
ベクターおよび宿主細胞

本開示は、本開示の誘導性ポリペプチドをコードする配列を含むベクター、組換えベクターを用いて遺伝子操作されている宿主細胞、および当技術分野において周知である組換え技法による本開示の少なくとも１つの誘導性ポリペプチドの産生にも関する。例えば、それぞれ全体が参照により本明細書に組み込まれる、Sambrookら、上記；Ausubelら、上記を参照されたい。

本開示の誘導性ポリペプチドをコードする配列を含むポリヌクレオチドは、宿主における増殖のための選択可能マーカーを含有するベクターに必要に応じて繋がれてよい。一般にプラスミドベクターは、リン酸カルシウム沈殿などの沈殿で、または荷電脂質との複合物で導入される。ベクターがウイルスである場合、それは適切なパッケージング細胞系を使用してｉｎｖｉｔｒｏでパッケージされ、次に宿主細胞に形質導入されてよい。

本開示は、本開示のトランスポゾンを含む組成物を提供する。ある特定の実施形態では、組成物は、トランスポザーゼ酵素をコードする配列を含むプラスミドをさらに含んでよい。トランスポザーゼ酵素をコードする配列は、ｍＲＮＡ配列であってよい。

本開示のトランスポゾンは、エピソームで維持されるまたは組換え／改変細胞のゲノムに組み込まれる。トランスポゾンは、非ウイルス遺伝子移入の増強のためにトランスポゾンおよびトランスポザーゼを利用する二成分ｐｉｇｇｙＢａｃシステムの一部であってよい。本方法のある特定の実施形態では、トランスポゾンは、２つのシス制御インスレーターエレメントによって挟まれている、本開示の誘導性カスパーゼポリペプチドをコードする配列を含むプラスミドＤＮＡトランスポゾンである。ある特定の実施形態では、トランスポゾンは、ｐｉｇｇｙＢａｃトランスポゾンである。ある特定の実施形態、具体的にはトランスポゾンがｐｉｇｇｙＢａｃトランスポゾンである実施形態では、トランスポザーゼはｐｉｇｇｙＢａｃ（商標）またはＳｕｐｅｒｐｉｇｇｙＢａｃ（商標）（ＳＰＢ）トランスポザーゼである。

本開示のトランスポゾンは、ｐｉｇｇｙＢａｃトランスポゾンを含んでよい。本開示の方法のある特定の実施形態では、トランスポゾンは、２つのシス制御インスレーターエレメントによって挟まれている、本開示の誘導性カスパーゼポリペプチドをコードする配列を含むプラスミドＤＮＡトランスポゾンである。ある特定の実施形態では、トランスポゾンは、ｐｉｇｇｙＢａｃトランスポゾンである。ある特定の実施形態、具体的にはトランスポゾンがｐｉｇｇｙＢａｃトランスポゾンである実施形態では、トランスポザーゼは、ｐｉｇｇｙＢａｃ（商標）またはＳｕｐｅｒｐｉｇｇｙＢａｃ（商標）（ＳＰＢ）トランスポザーゼである。ある特定の実施形態、具体的にはトランスポザーゼがＳｕｐｅｒｐｉｇｇｙＢａｃ（商標）（ＳＰＢ）トランスポザーゼである実施形態では、トランスポザーゼをコードする配列はｍＲＮＡ配列である。

本開示の方法のある特定の実施形態では、トランスポザーゼ酵素はｐｉｇｇｙＢａｃ（商標）（ＰＢ）トランスポザーゼ酵素である。ｐｉｇｇｙＢａｃ（ＰＢ）トランスポザーゼ酵素は、以下と少なくとも７５％、８０％、８５％、９０％、９５％、９９％またはその間の任意のパーセンテージで同一であるアミノ酸配列を含み、またはそれからなり得る：

ある特定の実施形態では、トランスポザーゼ酵素は、配列番号１の配列の３０、１６５、２８２または５３８位の２つまたはそれより多くにおいてアミノ酸置換を有するアミノ酸配列を含むまたはそれからなるｐｉｇｇｙＢａｃ（商標）（ＰＢ）トランスポザーゼ酵素である。ある特定の実施形態では、トランスポザーゼ酵素は、配列番号１の配列の３０、１６５、２８２または５３８位の３つまたはそれより多くにおいてアミノ酸置換を有するアミノ酸配列を含むまたはそれからなるｐｉｇｇｙＢａｃ（商標）（ＰＢ）トランスポザーゼ酵素である。ある特定の実施形態では、トランスポザーゼ酵素は、配列番号１の配列の次の３０、１６５、２８２および５３８位それぞれにおいてアミノ酸置換を有するアミノ酸配列を含むまたはそれからなるｐｉｇｇｙＢａｃ（商標）（ＰＢ）トランスポザーゼ酵素である。ある特定の実施形態では、配列番号１の配列の３０位におけるアミノ酸置換は、イソロイシン（Ｉ）からバリン（Ｖ）への置換である。ある特定の実施形態では、配列番号１の配列の１６５位におけるアミノ酸置換は、グリシン（Ｇ）からセリン（Ｓ）への置換である。ある特定の実施形態では、配列番号１の配列の２８２位におけるアミノ酸置換は、メチオニン（Ｍ）からバリン（Ｖ）への置換である。ある特定の実施形態では、配列番号１の配列の５３８位におけるアミノ酸置換は、アスパラギン（Ｎ）からリシン（Ｋ）への置換である。

本開示の方法のある特定の実施形態では、トランスポザーゼ酵素は、ＳｕｐｅｒｐｉｇｇｙＢａｃ（商標）（ＳＰＢ）トランスポザーゼ酵素である。ある特定の実施形態では、本開示のＳｕｐｅｒｐｉｇｇｙＢａｃ（商標）（ＳＰＢ）トランスポザーゼ酵素は、配列番号１の配列のアミノ酸配列を含み、またはそれからなり得、３０位におけるアミノ酸置換がイソロイシン（Ｉ）からバリン（Ｖ）への置換であり、１６５位におけるアミノ酸置換がグリシン（Ｇ）からセリン（Ｓ）への置換であり、２８２位におけるアミノ酸置換がメチオニン（Ｍ）からバリン（Ｖ）への置換であり、５３８位におけるアミノ酸置換がアスパラギン（Ｎ）からリシン（Ｋ）への置換である。ある特定の実施形態では、ＳｕｐｅｒｐｉｇｇｙＢａｃ（商標）（ＳＰＢ）トランスポザーゼ酵素は、以下と少なくとも７５％、８０％、８５％、９０％、９５％、９９％またはその間の任意のパーセンテージで同一であるアミノ酸配列を含み、またはそれからなり得る：

トランスポザーゼが３０、１６５、２８２および／または５３８位において上に記載される変異を含む実施形態を含む、本開示の方法のある特定の実施形態では、ｐｉｇｇｙＢａｃ（商標）またはＳｕｐｅｒｐｉｇｇｙＢａｃ（商標）トランスポザーゼ酵素は、配列番号１または配列番号２の配列の３、４６、８２、１０３、１１９、１２５、１７７、１８０、１８５、１８７、２００、２０７、２０９、２２６、２３５、２４０、２４１、２４３、２５８、２９６、２９８、３１１、３１５、３１９、３２７、３２８、３４０、４２１、４３６、４５６、４７０、４８６、５０３、５５２、５７０および５９１位の１つまたは複数においてアミノ酸置換をさらに含む場合がある。トランスポザーゼが３０、１６５、２８２および／または５３８位において上に記載される変異を含む実施形態を含む、ある特定の実施形態では、ｐｉｇｇｙＢａｃ（商標）またはＳｕｐｅｒｐｉｇｇｙＢａｃ（商標）トランスポザーゼ酵素は、４６、１１９、１２５、１７７、１８０、１８５、１８７、２００、２０７、２０９、２２６、２３５、２４０、２４１、２４３、２９６、２９８、３１１、３１５、３１９、３２７、３２８、３４０、４２１、４３６、４５６、４７０、４８５、５０３、５５２および５７０位の１つまたは複数においてアミノ酸置換をさらに含む場合がある。ある特定の実施形態では、配列番号１または配列番号２の３位におけるアミノ酸置換は、セリン（Ｓ）からアスパラギン（Ｎ）への置換である。ある特定の実施形態では、配列番号１または配列番号２の４６位におけるアミノ酸置換は、アラニン（Ａ）からセリン（Ｓ）への置換である。ある特定の実施形態では、配列番号１または配列番号２の４６位におけるアミノ酸置換は、アラニン（Ａ）からスレオニン（Ｔ）への置換である。ある特定の実施形態では、配列番号１または配列番号２の８２位におけるアミノ酸置換は、イソロイシン（Ｉ）からトリプトファン（Ｗ）への置換である。ある特定の実施形態では、配列番号１または配列番号２の１０３位におけるアミノ酸置換は、セリン（Ｓ）からプロリン（Ｐ）への置換である。ある特定の実施形態では、配列番号１または配列番号２の１１９位におけるアミノ酸置換は、アルギニン（Ｒ）からプロリン（Ｐ）への置換である。ある特定の実施形態では、配列番号１または配列番号２の１２５位におけるアミノ酸置換は、システイン（Ｃ）からアラニン（Ａ）への置換である。ある特定の実施形態では、配列番号１または配列番号２の１２５位におけるアミノ酸置換は、システイン（Ｃ）からロイシン（Ｌ）への置換である。ある特定の実施形態では、配列番号１または配列番号２の１７７位におけるアミノ酸置換は、チロシン（Ｙ）からリシン（Ｋ）への置換である。ある特定の実施形態では、配列番号１または配列番号２の１７７位におけるアミノ酸置換は、チロシン（Ｙ）からヒスチジン（Ｈ）への置換である。ある特定の実施形態では、配列番号１または配列番号２の１８０位におけるアミノ酸置換は、フェニルアラニン（Ｆ）からロイシン（Ｌ）への置換である。ある特定の実施形態では、配列番号１または配列番号２の１８０位におけるアミノ酸置換は、フェニルアラニン（Ｆ）からイソロイシン（Ｉ）への置換である。ある特定の実施形態では、配列番号１または配列番号２の１８０位におけるアミノ酸置換は、フェニルアラニン（Ｆ）からバリン（Ｖ）への置換である。ある特定の実施形態では、配列番号１または配列番号２の１８５位におけるアミノ酸置換は、メチオニン（Ｍ）からロイシン（Ｌ）への置換である。ある特定の実施形態では、配列番号１または配列番号２の１８７位におけるアミノ酸置換は、アラニン（Ａ）からグリシン（Ｇ）への置換である。ある特定の実施形態では、配列番号１または配列番号２の２００位におけるアミノ酸置換は、フェニルアラニン（Ｆ）からトリプトファン（Ｗ）への置換である。ある特定の実施形態では、配列番号１または配列番号２の２０７位におけるアミノ酸置換は、バリン（Ｖ）からプロリン（Ｐ）への置換である。ある特定の実施形態では、配列番号１または配列番号２の２０９位におけるアミノ酸置換は、バリン（Ｖ）からフェニルアラニン（Ｆ）への置換である。ある特定の実施形態では、配列番号１または配列番号２の２２６位におけるアミノ酸置換は、メチオニン（Ｍ）からフェニルアラニン（Ｆ）への置換である。ある特定の実施形態では、配列番号１または配列番号２の２３５位におけるアミノ酸置換は、ロイシン（Ｌ）からアルギニン（Ｒ）への置換である。ある特定の実施形態では、配列番号１または配列番号１の２４０位におけるアミノ酸置換は、バリン（Ｖ）からリシン（Ｋ）への置換である。ある特定の実施形態では、配列番号１または配列番号２の２４１位におけるアミノ酸置換は、フェニルアラニン（Ｆ）からロイシン（Ｌ）への置換である。ある特定の実施形態では、配列番号１または配列番号２の２４３位におけるアミノ酸置換は、プロリン（Ｐ）からリシン（Ｋ）への置換である。ある特定の実施形態では、配列番号１または配列番号２の２５８位におけるアミノ酸置換は、アスパラギン（Ｎ）からセリン（Ｓ）への置換である。ある特定の実施形態では、配列番号１または配列番号２の２９６位におけるアミノ酸置換は、ロイシン（Ｌ）からトリプトファン（Ｗ）への置換である。ある特定の実施形態では、配列番号１または配列番号２の２９６位におけるアミノ酸置換は、ロイシン（Ｌ）からチロシン（Ｙ）への置換である。ある特定の実施形態では、配列番号１または配列番号２の２９６位におけるアミノ酸置換は、ロイシン（Ｌ）からフェニルアラニン（Ｆ）への置換である。ある特定の実施形態では、配列番号１または配列番号２の２９８位におけるアミノ酸置換は、メチオニン（Ｍ）からロイシン（Ｌ）への置換である。ある特定の実施形態では、配列番号１または配列番号２の２９８位におけるアミノ酸置換は、メチオニン（Ｍ）からアラニン（Ａ）への置換である。ある特定の実施形態では、配列番号１または配列番号２の２９８位におけるアミノ酸置換は、メチオニン（Ｍ）からバリン（Ｖ）への置換である。ある特定の実施形態では、配列番号１または配列番号２の３１１位におけるアミノ酸置換は、プロリン（Ｐ）からイソロイシン（Ｉ）への置換である。ある特定の実施形態では、配列番号１または配列番号２の３１１位におけるアミノ酸置換は、プロリン（Ｐ）からバリンへの置換である。ある特定の実施形態では、配列番号１または配列番号２の３１５位におけるアミノ酸置換は、アルギニン（Ｒ）からリシン（Ｋ）への置換である。ある特定の実施形態では、配列番号１または配列番号２の３１９位におけるアミノ酸置換は、スレオニン（Ｔ）からグリシン（Ｇ）への置換である。ある特定の実施形態では、配列番号１または配列番号２の３２７位におけるアミノ酸置換は、チロシン（Ｙ）からアルギニン（Ｒ）への置換である。ある特定の実施形態では、配列番号１または配列番号２の３２８位におけるアミノ酸置換は、チロシン（Ｙ）からバリン（Ｖ）への置換である。ある特定の実施形態では、配列番号１または配列番号２の３４０位におけるアミノ酸置換は、システイン（Ｃ）からグリシン（Ｇ）への置換である。ある特定の実施形態では、配列番号１または配列番号２の３４０位におけるアミノ酸置換は、システイン（Ｃ）からロイシン（Ｌ）への置換である。ある特定の実施形態では、配列番号１または配列番号２の４２１位におけるアミノ酸置換は、アスパラギン酸（Ｄ）からヒスチジン（Ｈ）への置換である。ある特定の実施形態では、配列番号１または配列番号２の４３６位におけるアミノ酸置換は、バリン（Ｖ）からイソロイシン（Ｉ）への置換である。ある特定の実施形態では、配列番号１または配列番号２の４５６位におけるアミノ酸置換は、メチオニン（Ｍ）からチロシン（Ｙ）への置換である。ある特定の実施形態では、配列番号１または配列番号２の４７０位におけるアミノ酸置換は、ロイシン（Ｌ）からフェニルアラニン（Ｆ）への置換である。ある特定の実施形態では、配列番号１または配列番号２の４８５位におけるアミノ酸置換は、セリン（Ｓ）からリシン（Ｋ）への置換である。ある特定の実施形態では、配列番号１または配列番号２の５０３位におけるアミノ酸置換は、メチオニン（Ｍ）からロイシン（Ｌ）への置換である。ある特定の実施形態では、配列番号１または配列番号２の５０３位におけるアミノ酸置換は、メチオニン（Ｍ）からイソロイシン（Ｉ）への置換である。ある特定の実施形態では、配列番号１または配列番号２の５５２位におけるアミノ酸置換は、バリン（Ｖ）からリシン（Ｋ）への置換である。ある特定の実施形態では、配列番号１または配列番号２の５７０位におけるアミノ酸置換は、アラニン（Ａ）からスレオニン（Ｔ）への置換である。ある特定の実施形態では、配列番号１または配列番号２の５９１位におけるアミノ酸置換は、グルタミン（Ｑ）からプロリン（Ｐ）への置換である。ある特定の実施形態では、配列番号１または配列番号２の５９１位におけるアミノ酸置換は、グルタミン（Ｑ）からアルギニン（Ｒ）への置換である。

トランスポザーゼが３０、１６５、２８２および／または５３８位において上に記載される変異を含む実施形態を含む、本開示の方法のある特定の実施形態では、配列番号１または配列番号２の配列の１０３、１９４、３７２、３７５、４５０、５０９および５７０位の１つまたは複数においてアミノ酸置換を、ｐｉｇｇｙＢａｃ（商標）トランスポザーゼ酵素は含む場合がある、またはＳｕｐｅｒｐｉｇｇｙＢａｃ（商標）トランスポザーゼ酵素はさらに含む場合がある。トランスポザーゼが３０、１６５、２８２および／または５３８位において上に記載される変異を含む実施形態を含む、本開示の方法のある特定の実施形態では、配列番号１または配列番号２の配列の１０３、１９４、３７２、３７５、４５０、５０９および５７０位の２つ、３つ、４つ、５つ、６つまたはそれより多くにおいてアミノ酸置換を、ｐｉｇｇｙＢａｃ（商標）トランスポザーゼ酵素は含む場合がある、またはＳｕｐｅｒｐｉｇｇｙＢａｃ（商標）トランスポザーゼ酵素はさらに含む場合がある。トランスポザーゼが３０、１６５、２８２および／または５３８位において上に記載される変異を含む実施形態を含む、ある特定の実施形態では、配列番号１または配列番号２の配列の１０３、１９４、３７２、３７５、４５０、５０９および５７０位においてアミノ酸置換を、ｐｉｇｇｙＢａｃ（商標）トランスポザーゼ酵素は含む場合がある、またはＳｕｐｅｒｐｉｇｇｙＢａｃ（商標）トランスポザーゼ酵素はさらに含む場合がある。ある特定の実施形態では、配列番号１または配列番号２の１０３位におけるアミノ酸置換は、セリン（Ｓ）からプロリン（Ｐ）への置換である。ある特定の実施形態では、配列番号１または配列番号２の１９４位におけるアミノ酸置換は、メチオニン（Ｍ）からバリン（Ｖ）への置換である。ある特定の実施形態では、配列番号１または配列番号２の３７２位におけるアミノ酸置換は、アルギニン（Ｒ）からアラニン（Ａ）への置換である。ある特定の実施形態では、配列番号１または配列番号２の３７５位におけるアミノ酸置換は、リシン（Ｋ）からアラニン（Ａ）への置換である。ある特定の実施形態では、配列番号１または配列番号２の４５０位におけるアミノ酸置換は、アスパラギン酸（Ｄ）からアスパラギン（Ｎ）への置換である。ある特定の実施形態では、配列番号１または配列番号２の５０９位におけるアミノ酸置換は、セリン（Ｓ）からグリシン（Ｇ）への置換である。ある特定の実施形態では、配列番号１または配列番号２の５７０位におけるアミノ酸置換は、アスパラギン（Ｎ）からセリン（Ｓ）への置換である。ある特定の実施形態では、ｐｉｇｇｙＢａｃ（商標）トランスポザーゼ酵素は、配列番号１の１９４位においてメチオニン（Ｍ）からバリン（Ｖ）への置換を含む場合がある。ｐｉｇｇｙＢａｃ（商標）トランスポザーゼ酵素が、配列番号１の１９４位においてメチオニン（Ｍ）からバリン（Ｖ）への置換を含む場合がある実施形態を含む、ある特定の実施形態では、ｐｉｇｇｙＢａｃ（商標）トランスポザーゼ酵素は、配列番号１または配列番号２の配列の３７２、３７５および４５０位においてアミノ酸置換をさらに含む場合がある。ある特定の実施形態では、ｐｉｇｇｙＢａｃ（商標）トランスポザーゼ酵素は、配列番号１の１９４位においてメチオニン（Ｍ）からバリン（Ｖ）への置換、配列番号１の３７２位においてアルギニン（Ｒ）からアラニン（Ａ）への置換、および配列番号１の３７５位においてリシン（Ｋ）からアラニン（Ａ）への置換を含む場合がある。ある特定の実施形態では、ｐｉｇｇｙＢａｃ（商標）トランスポザーゼ酵素は、配列番号１の１９４位においてメチオニン（Ｍ）からバリン（Ｖ）への置換、配列番号１の３７２位においてアルギニン（Ｒ）からアラニン（Ａ）への置換、配列番号１の３７５位においてリシン（Ｋ）からアラニン（Ａ）への置換、および配列番号１の４５０位においてアスパラギン酸（Ｄ）からアスパラギン（Ｎ）への置換を含む場合がある。

本開示の方法のある特定の実施形態では、トランスポゾンはＳｌｅｅｐｉｎｇＢｅａｕｔｙトランスポゾンである。ある特定の実施形態、具体的にはトランスポゾンがＳｌｅｅｐｉｎｇＢｅａｕｔｙトランスポゾンである実施形態では、トランスポザーゼは、ＳｌｅｅｐｉｎｇＢｅａｕｔｙトランスポザーゼまたは過剰活性ＳｌｅｅｐｉｎｇＢｅａｕｔｙトランスポザーゼ（ＳＢ１００Ｘ）である。

本開示の方法のある特定の実施形態では、ＳｌｅｅｐｉｎｇＢｅａｕｔｙトランスポザーゼ酵素は、以下と少なくとも７５％、８０％、８５％、９０％、９５％、９９％またはその間の任意のパーセンテージで同一であるアミノ酸配列を含む：

本開示の方法のある特定の実施形態では、過剰活性ＳｌｅｅｐｉｎｇＢｅａｕｔｙ（ＳＢ１００Ｘ）トランスポザーゼ酵素は、以下と少なくとも７５％、８０％、８５％、９０％、９５％、９９％またはその間の任意のパーセンテージで同一であるアミノ酸配列を含む：

本開示の方法のある特定の実施形態では、トランスポザーゼはＨｅｌｉｔｒｏｎトランスポザーゼである。Ｈｅｌｉｔｒｏｎトランスポザーゼは、約３０００万年から３６００万年前に活性があったコウモリゲノム由来の古代エレメントであるＨｅｌｒａｉｓｅｒトランスポゾンを起動する。本開示の例示的なＨｅｌｒａｉｓｅｒトランスポゾンには、Ｈｅｌｉｂａｔ１が挙げられ、それは、以下を含む核酸配列を含む：

Ｈｅｌｉｔｒｏｎ転位では、トランスポゾンの３’末端に近接しているヘアピンは、ターミネーターとして機能する。しかし、このヘアピンは、トランスポザーゼによって無視され得、その結果として、フランキング配列の形質導入をもたらす。加えて、Ｈｅｌｒａｉｓｅｒ転位は、共有結合によって閉じた環状中間体を生成する。さらに、Ｈｅｌｉｔｒｏｎ転位は、標的部位重複を欠き得る。Ｈｅｌｒａｉｓｅｒ配列では、トランスポザーゼは、ＬＴＳおよびＲＴＳと称される左および右末端配列によって挟まれている。これらの配列は、保存された５’－ＴＣ／ＣＴＡＧ－３’モチーフで終結する。ヘアピン終結構造を形成する能力を有する１９ｂｐパリンドローム配列は、ＲＴＳの１１ヌクレオチド上流に位置し、配列ＧＴＧＣＡＣＧＡＡＴＴＴＣＧＴＧＣＡＣＣＧＧＧＣＣＡＣＴＡＧ（配列番号２３）からなる。

本開示の方法のある特定の実施形態では、トランスポザーゼはＴｏｌ２トランスポザーゼである。Ｔｏｌ２トランスポゾンは、メダカのゲノムから単離され得、または由来し得、ｈＡＴファミリーのトランスポゾンと類似し得る。本開示の例示的なＴｏｌ２トランスポゾンは、約４．７キロベースを含む配列によってコードされ、４個のエクソンを含有するＴｏｌ２トランスポザーゼをコードする遺伝子を含有する。本開示の例示的Ｔｏｌ２トランスポザーゼは、以下を含むアミノ酸配列を含む：

逆方向反復、末端近くの配列およびＴｏｌ２トランスポザーゼを含む、本開示の例示的Ｔｏｌ２トランスポゾンは、以下を含む核酸配列によってコードされる:

ＤＮＡ挿入物は、適切なプロモーターに作動可能に連結されるべきである。発現構築物は、転写開始、終結のための部位および転写領域中に、翻訳のためのリボソーム結合部位をさらに含有する。構築物によって発現される成熟転写物のコード部分は、最初に翻訳開始コドンおよび、翻訳されるｍＲＮＡの末端に適切に位置する、終結コドン（例えば、ＵＡＡ、ＵＧＡまたはＵＡＧ）を好ましくは含み、哺乳動物または真核細胞発現のためにはＵＡＡおよびＵＡＧが好ましい。

発現ベクターは、好ましくは、しかし必要に応じて少なくとも１つの選択可能マーカーを含む。そのようなマーカーとして、例えば、これだけに限らないが、真核細胞培養のためのアンピシリン、ゼオシン（Ｓｈｂｌａ遺伝子）、ピューロマイシン（ｐａｃ遺伝子）、ハイグロマイシンＢ（ｈｙｇＢ遺伝子）、Ｇ４１８／ジェネティシン（ｎｅｏ遺伝子）、ミコフェノール酸またはグルタミン合成酵素（ＧＳ、米国特許第５，１２２，４６４号；第５，７７０，３５９号；第５，８２７，７３９号）、ブラストサイジン（ｂｓｄ遺伝子）耐性遺伝子、ならびにＥ．ｃｏｌｉおよび他の細菌または原核生物での培養のためのアンピシリン、ゼオシン（Ｓｈｂｌａ遺伝子）、ピューロマイシン（ｐａｃ遺伝子）、ハイグロマイシンＢ（ｈｙｇＢ遺伝子）、Ｇ４１８／ジェネティシン（ｎｅｏ遺伝子）、カナマイシン、スペクチノマイシン、ストレプトマイシン、カルベニシリン、ブレオマイシン、エリスロマイシン、ポリミキシンＢまたはテトラサイクリン耐性遺伝子が挙げられる（上記特許は参照により全体が本明細書に組み込まれる）。上に記載される宿主細胞のために適切な培養培地および条件は、当技術分野において公知である。好適なベクターは、当業者に容易に明らかである。宿主細胞へのベクター構築物の導入は、リン酸カルシウムトランスフェクション、ＤＥＡＥ－デキストラン媒介トランスフェクション、カチオン性脂質媒介トランスフェクション、電気穿孔、形質導入、感染または他の公知の方法によってなされ得る。そのような方法は、Sambrook、上記、１～４章および１６～１８章；Ausubel、上記、１、９、１３、１５、１６章など、当技術分野において記載されている。

発現ベクターは、好ましくは、しかし必要に応じて、本開示の組成物および方法によって改変された細胞の単離のための少なくとも１つの選択可能細胞表面マーカーを含む。本開示の選択可能細胞表面マーカーは、表面タンパク質、糖タンパク質または、細胞もしくは細胞のサブセットを別に規定される細胞のサブセットから識別するタンパク質の群を含む。好ましくは選択可能細胞表面マーカーは、本開示の組成物または方法によって改変された細胞を本開示の組成物または方法によって改変されていない細胞から識別する。そのような細胞表面マーカーとして、例えば、これだけに限らないが、ＣＤ１９、ＣＤ２７１、ＣＤ３４、ＣＤ２２、ＣＤ２０、ＣＤ３３、ＣＤ５２またはこれらの任意の組合せのトランケート型または全長形態などの「分化抗原群」または「分類決定因子（ｃｌａｓｓｉｆｉｃａｔｉｏｎｄｅｔｅｒｍｉｎａｎｔ）」タンパク質（しばしば「ＣＤ」と省略される）が挙げられる。細胞表面マーカーとして、さらに自殺遺伝子マーカーＲＱＲ８（Philip Bら、Blood.２０１４年８月２１日；１２４巻（８号）：１２７７～８７頁）が挙げられる。

発現ベクターは、好ましくは、しかし必要に応じて、本開示の組成物および方法によって改変された細胞の単離のための少なくとも１つの選択可能薬物耐性マーカーを含む。本開示の選択可能薬物耐性マーカーは、野生型もしくは変異体Ｎｅｏ、ＤＨＦＲ、ＴＹＭＳ、ＦＲＡＮＣＦ、ＲＡＤ５１Ｃ、ＧＣＳ、ＭＤＲ１、ＡＬＤＨ１、ＮＫＸ２．２またはこれらの任意の組合せを含み得る。

本開示の少なくとも１つの誘導性ポリペプチドは、融合タンパク質などの改変形態で発現されてよく、追加の異種性機能領域を含み得る。例えば、追加的アミノ酸、特に荷電アミノ酸の領域は、宿主細胞での、精製の際または続く取扱および保存の際の安定性および持続性を改善するためにタンパク質スキャホールドのＮ末端に付加されてよい。同様にペプチド部分は、精製を容易にするために本開示のタンパク質スキャホールドに付加されてよい。そのような領域は、誘導性ポリペプチドまたはその少なくとも１つの断片の最終調製の前に除去されてよい。そのような方法は、Sambrook、上記、１７．２９～１７．４２および１８．１～１８．７４章；Ausubel、上記、１６、１７および１８章などの多数の標準的実験マニュアルに記載されている。

当業者は、本開示のタンパク質をコードする核酸の発現のために利用可能な多数の発現システムについて知識が豊富である。代替的に、本開示の核酸は、本開示の誘導性ポリペプチドをコードする配列を含有する宿主細胞において（操作によって）オンにすることによって宿主細胞において発現され得る。そのような方法は、例えば参照により全体が本明細書に組み込まれる、米国特許第５，５８０，７３４号、第５，６４１，６７０号、第５，７３３，７４６号および第５，７３３，７６１号において記載されるとおり当技術分野において周知である。

改変細胞のための発現ベクターとして、これだけに限らないが次の、複製開始点；プロモーター（例えば、後期または初期ＳＶ４０プロモーター、ＣＭＶプロモーター（米国特許第５，１６８，０６２号；第５，３８５，８３９号）、ＨＳＶｔｋプロモーター、ｐｇｋ（ホスホグリセレートキナーゼ）プロモーター、ＥＦ－１アルファプロモーター（米国特許第５，２６６，４９１号）、少なくとも１つのヒトプロモーター；エンハンサー、ならびに／またはリボソーム結合部位、ＲＮＡスプライス部位、ポリアデニル化部位（例えば、ＳＶ４０ラージＴＡｇポリＡ付加部位）および転写終結配列などのプロセシング情報部位、などの発現調節配列の１つまたは複数が挙げられ得る。例えば、Ausubelら、上記；Sambrookら、上記を参照されたい。本発明の核酸またはタンパク質の産生のために有用な他の細胞は、公知である、および／あるいは、例えばＡｍｅｒｉｃａｎＴｙｐｅＣｕｌｔｕｒｅＣｏｌｌｅｃｔｉｏｎＣａｔａｌｏｇｕｅｏｆＣｅｌｌＬｉｎｅｓａｎｄＨｙｂｒｉｄｏｍａｓ（ｗｗｗ．ａｔｃｃ．ｏｒｇ）または他の公知のもしくは商業的供給源から入手できる。

真核宿主細胞が使用される場合、ポリアデニル化配列または転写終結配列は、ベクター中に典型的には組み込まれる。終結配列の一例は、ウシ成長ホルモン遺伝子由来のポリアデニル化配列である。転写物の正確なスプライシングのための配列も含まれてよい。スプライシング配列の一例は、ＳＶ４０由来のＶＰ１イントロンである（Spragueら、J. Virol.４５巻：７７３～７８１頁（１９８３年））。追加的に、宿主細胞での複製を調節するための遺伝子配列は、当技術分野において公知のとおりベクターに組み込まれてよい。
アミノ酸コード

本開示のタンパク質スキャホールドを構成するアミノ酸は、しばしば省略される。アミノ酸名は、当技術分野において十分に理解されるとおり、その一文字表記、その三文字表記、名称、または３つのヌクレオチドコドン（複数可）によってアミノ酸を指定することによって示されてよい（Alberts, B.ら、Molecular Biology of The Cell、第３版、Garland Publishing, Inc.、New York、１９９４年を参照されたい）。本開示の誘導性ポリペプチドは、本明細書に明記するとおり、天然変異またはヒトの操作のいずれか由来の１つまたは複数のアミノ酸置換、欠失または付加を含んでよい。機能のために不可欠である本開示の誘導性ポリペプチド中のアミノ酸は、部位特異的変異誘発またはアラニンスキャンニング変異誘発などの当技術分野において公知の方法によって同定され得る（例えば、Ausubel、上記、第８章、第１５章；CunninghamおよびWells、Science ２４４巻：１０８１～１０８５頁（１９８９年））。後者の手順は、分子中の残基ごとに単一のアラニン変異を導入する。次いで生じた変異体分子は、これだけに限らないが、少なくとも１つの中和活性などの生物活性について検査される。機能に不可欠である（すなわち、アポトーシスを誘導する）部位は結晶化、核磁気共鳴または光親和性標識などの構造分析によっても同定され得る（Smithら、J. Mol. Biol.２２４巻：８９９～９０４頁（１９９２年）およびde Vosら、Science ２５５巻：３０６～３１２頁（１９９２年））。

本開示の生物学的に活性な誘導性ポリペプチドは、細胞の天然の（非合成）、内因性または関連する公知のタンパク質または酵素の発現または誘導の場合、少なくとも２０％、３０％もしくは４０％、好ましくは少なくとも５０％、６０％もしくは７０％、最も好ましくは少なくとも８０％、９０％もしくは９５％～９９％またはそれより高く有効である効力を有して細胞においてアポトーシスを誘導できる１つまたは複数のタンパク質または酵素（例えばカスパーゼ９などのカスパーゼ）を含む。タンパク質結合および酵素活性のアッセイおよび定量測定方法は、当業者に周知である。
養子細胞療法としての改変細胞の注入

本開示は、本開示の１つまたは複数の誘導性ポリペプチドを発現する改変細胞であって、それを必要とする被験体への投与のために選択された、改変細胞を提供する。本開示の改変細胞は、室温および体温を含む任意の温度での保存のために製剤化されてよい。本開示の改変細胞は、凍結保存およびその後の解凍のために製剤化されてよい。本開示の改変細胞は、滅菌包装からの被験体への直接投与のために薬学的に許容される担体中に製剤化されてよい。

（実施例１）
ヒト汎Ｔ細胞への、ｉＣ９安全スイッチを組み込んだｐｉｇｇｙＢａｃの発現および機能
ヒト汎Ｔ細胞を４つのｐｉｇｇｙＢａｃトランスポゾンの１つを用いてＡｍａｘａ４Ｄｎｕｃｌｅｏｆｅｃｔｏｒを使用してヌクレオフェクトした。「モック」条件を受けた改変Ｔ細胞を空ｐｉｇｇｙＢａｃトランスポゾンを用いてヌクレオフェクトした。改変Ｔ細胞は、治療剤単独（ＣＡＲＴｙｒｉｎをコードする配列）を含有するｐｉｇｇｙＢａｃトランスポザーゼまたは組み込まれたｉＣ９配列および治療剤（ＣＡＲＴｙｒｉｎをコードする配列）を含有するｐｉｇｇｙＢａｃトランスポザーゼのいずれかを受けた。

図１は、リガンド結合領域、リンカーおよびトランケート型カスパーゼ９ポリペプチドを含有するｉＣ９安全スイッチの概略図を提供する。具体的にはｉＣ９ポリペプチドは、３６位にフェニルアラニン（Ｆ）からバリン（Ｖ）への置換（Ｆ３６Ｖ）を含むＦＫ５０６結合タンパク質１２（ＦＫＢＰ１２）ポリペプチドを含むリガンド結合領域を含有する。ｉＣ９ポリペプチドのＦＫＢＰ１２ポリペプチドはGVQVETISPGDGRTFPKRGQTCVVHYTGMLEDGKKVDSSRDRNKPFKFMLGKQEVIRGWEEGVAQMSVGQRAKLTISPDYAYGATGHPGIIPPHATLVFDVELLKLE（配列番号３）を含むアミノ酸配列によってコードされている。ｉＣ９ポリペプチドのＦＫＢＰ１２ポリペプチドはGGGGTCCAGGTCGAGACTATTTCACCAGGGGATGGGCGAACATTTCCAAAAAGGGGCCAGACTTGCGTCGTGCATTACACCGGGATGCTGGAGGACGGGAAGAAAGTGGACAGCTCCAGGGATCGCAACAAGCCCTTCAAGTTCATGCTGGGAAAGCAGGAAGTGATCCGAGGATGGGAGGAAGGCGTGGCACAGATGTCAGTCGGCCAGCGGGCCAAACTGACCATTAGCCCTGACTACGCTTATGGAGCAACAGGCCACCCAGGGATCATTCCCCCTCATGCCACCCTGGTCTTCGAT GTGGAACTGCTGAAGCTGGAG（配列番号４）を含む核酸配列によってコードされている。ｉＣ９ポリペプチドのリンカー領域は、ＧＧＧＧＳ（配列番号５）を含むアミノ酸およびＧＧＡＧＧＡＧＧＡＧＧＡＴＣＣ（配列番号６）を含む核酸配列によってコードされている。ｉＣ９ポリペプチドをコードするアミノ酸配列はGFGDVGALESLRGNADLAYILSMEPCGHCLIINNVNFCRES GLRTRTGSNIDCEKLRRRFSSLHFMVEVKGDLTAKKMVLALLELAQQDHGALDCCVVVILSHGCQASHLQFPGAVYGTDGCPVSVEKIVNIFNGTSCPSLGGKPKLFFIQACGGEQKDHGFEVASTSPEDESPGSNPEPDATPFQEGLRTFDQLDAISSLPTPSDIFVSYSTFPGFVSWRDPKSGSWYVETLDDIFEQWAHSEDLQSLLLRVANAVSVKGIYKQMPGCFNFLRKKLFFKTS（配列番号７）を含むアミノ酸によってコードされている。ｉＣ９ポリペプチドをコードする核酸配列はTTTGGGGACGTGGGGGCCCTGGAGTCTCTGCGAGGAAATGCCGATCTGGCTTACATCCTGAGCATGGAACCCTGCGGCCACTGTCTGATCATTAACAATGTGAACTTCTGCAGAGAAAGCGGACTGCGAACACGGACTGGCTCCAATATTGACTGTGAGAAGCTGCGGAGAAGGTTCTCTAGTCTGCACTTTATGGTCGAAGTGAAAGGGGATCTGACCGCCAAGAAAATGGTGCTGGCCCTGCTGGAGCTGGCTCAGCAGGACCATGGAGCTCTGGATTGCTGCGTGGTCGTGATCCTGTCCCACGGGTGCCAGGCTTCTCATCTGCAGTTCCCCGGAGCAGTGTACGGAACAGACGGCTGTCCTGTCAGCGTGGAGAAGATCGTCAACATCTTCAACGGCACTTCTTGCCCTAGTCTGGGGGGAAAGCCAAAACTGTTCTTTATCCAGGCCTGTGGCGGGGAACAGAAAGATCACGGCTTCGAGGTGGCCAGCACCAGCCCTGAGGACGAATCACCAGGGAGCAACCCTGAACCAGATGCAACTCCATTCCAGGAGGGACTGAGGACCTTTGACCAGCTGGATGCTATCTCAAGCCTGCCCACTCCTAGTGACATTTTCGTGTCTTACAGTACCTTCCCAGGCTTTGTCTCATGGCGCGATCCCAAGTCAGGGAGCTGGTACGTGGAGACACTGGACGACATCTTTGAACAGTGGGCCCATTCAGAGGACCTGCAGAGCCTGCTGCTGCGAGTGGCAAACGCTGTCTCTGTGAAGGGCATCTACAAACAGATGCCCGGGTGCTTCAATTTTCTGAGAAAGAAACTGTTCTTTAAGACTTCC（配列番号８）を含む核酸配列によってコードされている。

ｉＣ９安全スイッチを検査するために、４種の改変Ｔ細胞それぞれを２４時間、０、０．１ｎＭ、１ｎＭ、１０ｎＭ、１００ｎＭまたは１０００ｎＭＡＰ１９０３（ＡＰ１９０３のための誘導剤、Ｒｉｍｉｄｕｃｉｄとしても公知）と共にインキュベートした。生存率を、アポトーシスを起こしている細胞についてのマーカーとして、蛍光干渉物質である７－アミノアクチノマイシンＤ（７－ＡＡＤ）を使用してフローサイトメトリーによって評価した。

細胞生存率を１２日目に評価した（図２を参照されたい）。データは、ｉＣ９構築物を含有する細胞において誘導剤の濃度の増加に伴う、細胞集団の右下から左上象限へのシフトを実証している；しかしこの効果は、ｉＣ９構築物を欠いている細胞（ＣＡＲＴｙｒｉｎだけを受けたもの）では観察されず、細胞は誘導剤の濃度にかかわらずこれら２つの領域に均一に分布している。さらに、細胞生存率を１９日目に評価した（図３を参照されたい）。データは、図２に（ヌクレオフェクション後の１２日目）おいて示されるのと同じ傾向を明らかにしている；しかし左上象限への集団シフトは、この後者の時点（ヌクレオフェクション後の１９日目）でさらに明白である。

集計結果の定量を実施し、図４に提供するが、これは、１２日目（図２および左グラフ）または１９日目（図３および右グラフ）のいずれかにおける、各改変細胞型についての、ｉＣ９スイッチの誘導剤（ＡＰ１９０３、Ｒｉｍｉｄｕｃｉｄとしても公知）の濃度に応じた細胞生存率パーセントへのｉＣ９安全スイッチの有意な影響を示している。ｉＣ９安全スイッチの存在は、１２日目までに有意な大多数の細胞においてアポトーシスを誘導し、効果は１９日目まででさらに劇的である。

本研究の結果は、ＡＰ１９０３（Ｒｉｍｉｄｕｃｉｄ）が研究の最低濃度（０．１ｎＭ）においてさえアポトーシスを誘導することから、ｉＣ９安全スイッチが、誘導剤（例えばＡＰ１９０３、Ｒｉｍｉｄｕｃｉｄとしても公知）との接触により活性細胞を排除することに極めて有効であることを示している。さらにｉＣ９安全スイッチは、トリシストロンベクターの一部として機能的に発現され得る。
（実施例２）
ＮＧＳマウスにおいてｉｎｖｉｖｏでｉＣ９安全スイッチを使用するＰ－ＢＣＭＡ－１０１を含む細胞の高効率死滅化

ＮＳＧマウスにＭＭ．１Ｓ／ルシフェラーゼ^＋細胞をＩＶ注射し、８日目にステージ分類し、９日目にＴ細胞を注射し、ＡＰ１９０３（Ｒｉｍｉｄｕｃｉｄ）を用いて１２日目に表示の用量で処置した。２４時間後、マウスを安楽死させ、血液、脾臓および骨髄細胞を回収し、ｈｕＣＤ４５^＋細胞の存在について染色した（図５）。血液、脾臓および骨髄細胞をｈｕＣＤ４５^＋細胞の存在についてフローサイトメトリーによって分析した。相対生存率を、各試料について１，５００ビーズ事象あたり、ｈｕＣＤ４５細胞の数をｍｓＣＤ４５細胞の数で割り、未処置群でのｈｕＣＤ４５／ｍｓＣＤ４５の平均に対して正規化し、１００％を掛けることによって決定した。各データ点は異なるマウスを表している（図６）。
参照による組込

任意の相互参照または関連特許もしくは出願を含む、本明細書に引用される全ての文書は、はっきりと排除または他に限定されない限り、その全体が参照により本明細書に組み込まれる。いかなる文書の引用も、それが本明細書において開示されるまたは特許請求されるいかなる発明に関する先行技術であること、あるいは単独でまたは１つもしくは複数の他の任意の参考文献との任意の組合せでそれが任意のそのような発明を、教示、示唆または開示することの承認ではない。さらに、本文書中の用語の任意の意味または定義が、参照により組み込まれる文書中の同じ用語の任意の意味または定義と矛盾する範囲内で、本文書中のそのような用語に割り当てられる意味または定義が優先する。
他の実施形態

本開示の具体的な実施形態は例示され、記載されているが、種々の他の変更および改変は、本開示の精神および範囲から逸脱することなく行われ得る。添付の特許請求の範囲の範囲は、本開示の範囲内である全てのそのような変更および改変を含む。
本発明は、例えば、以下の項目を提供する。
(項目１)
（ａ）リガンド結合領域、
（ｂ）リンカー、および
（ｃ）トランケート型カスパーゼ９ポリペプチド
を含む誘導性カスパーゼポリペプチドであって、該誘導性カスパーゼポリペプチドが非ヒト配列を含まない、誘導性カスパーゼポリペプチド。
(項目２)
前記非ヒト配列が制限部位である、項目１に記載のポリペプチド。
(項目３)
前記リガンド結合領域がＦＫ５０６結合タンパク質１２（ＦＫＢＰ１２）ポリペプチドを含む、項目１または２に記載のポリペプチド。
(項目４)
アミノ酸配列が該配列の３６位において改変を含む、項目１～３のいずれか一項に記載のポリペプチド。
(項目５)
前記改変が、３６位におけるフェニルアラニン（Ｆ）からバリン（Ｖ）への置換（Ｆ３６Ｖ）である、項目４に記載のポリペプチド。
(項目６)
前記ＦＫＢＰ１２ポリペプチドが、GVQVETISPGDGRTFPKRGQTCVVHYTGMLEDGKKVDSSRDRNKPFKFMLGKQEVIRGWEEGVAQMSVGQRAKLTISPDYAYGATGHPGIIPPHATLVFDVELLKLE（配列番号３）を含
むアミノ酸配列によってコードされる、項目３～５のいずれか一項に記載のポリペプチド。
(項目７)
前記ＦＫＢＰ１２ポリペプチドが、GGGGTCCAGGTCGAGACTATTTCACCAGGGGATGGGCGAACATTTCCAAAAAGGGGCCAGACTTGCGTCGTGCATTACACCGGGATGCTGGAGGACGGGAAGAAAGTGGACAGCTCCAGGGATCGCAACAAGCCCTTCAAGTTCATGCTGGGAAAGCAGGAAGTGATCCGAGGATGGGAGGAAGGCGTGGCACAGATGTCAGTCGGCCAGCGGGCCAAACTGACCATTAGCCCTGACTACGCTTATGGAGCAACAGGCCACCCAGGGATCATTCCCCCTCATGCCACCCTGGTCTTCGAT GTGGAACTGCTGAAGCTGGAG（配列番号４）を含む核酸配列によってコード
される、項目６に記載のポリペプチド。
(項目８)
前記リンカー領域が、ＧＧＧＧＳ（配列番号５）を含むアミノ酸によってコードされる、項目１～７のいずれか一項に記載のポリペプチド。
(項目９)
前記リンカー領域が、ＧＧＡＧＧＡＧＧＡＧＧＡＴＣＣ（配列番号６）を含む核酸配列によってコードされる、項目８に記載のポリペプチド。
(項目１０)
前記トランケート型カスパーゼ９ポリペプチドが、アミノ酸配列であって、該配列の８７位においてアルギニン（Ｒ）を含まないアミノ酸配列によってコードされる、項目１～９のいずれか一項に記載のポリペプチド。
(項目１１)
前記トランケート型カスパーゼ９ポリペプチドが、アミノ酸配列であって、該配列の２８２位においてアラニン（Ａ）を含まないアミノ酸配列によってコードされる、項目１～１０のいずれか一項に記載のポリペプチド。
(項目１２)
前記トランケート型カスパーゼ９ポリペプチドが、GFGDVGALESLRGNADLAYILSMEPCGHCLIINNVNFCRESGLRTRTGSNIDCEKLRRRFSSLHFMVEVKGDLTAKKMVLALLELAQQDHGALDCCVVVILSHGCQASHLQFPGAVYGTDGCPVSVEKIVNIFNGTSCPSLGGKPKLFFIQACGGEQKDHGFEVASTSPEDESPGSNPEPDATPFQEGLRTFDQLDAISSLPTPSDIFVSYSTFPGFVSWRDPKSGSWYVETLDDIFEQWAHSEDLQSLLLRVANAVSVKGIYKQMPGCFNFLRKKLFFKTS（配列番号７）を含むアミノ酸によってコードされる、項目１～１１のいずれか一項に記載のポリペプチド。
(項目１３)
前記トランケート型カスパーゼ９ポリペプチドが、TTTGGGGACGTGGGGGCCCTGGAGTCTCTGCGAGGAAATGCCGATCTGGCTTACATCCTGAGCATGGAACCCTGCGGCCACTGTCTGATCATTAACAATGTGAACTTCTGCAGAGAAAGCGGACTGCGAACACGGACTGGCTCCAATATTGACTGTGAGAAGCTGCGGAGAAGGTTCTCTAGTCTGCACTTTATGGTCGAAGTGAAAGGGGATCTGACCGCCAAGAAAATGGTGCTGGCCCTGCTGGAGCTGGCTCAGCAGGACCATGGAGCTCTGGATTGCTGCGTGGTCGTGATCCTGTCCCACGGGTGCCAGGCTTCTCATCTGCAGTTCCCCGGAGCAGTGTACGGAACAGACGGCTGTCCTGTCAGCGTGGAGAAGATCGTCAACATCTTCAACGGCACTTCTTGCCCTAGTCTGGGGGGAAAGCCAAAACTGTTCTTTATCCAGGCCTGTGGCGGGGAACAGAAAGATCACGGCTTCGAGGTGGCCAGCACCAGCCCTGAGGACGAATCACCAGGGAGCAACCCTGAACCAGATGCAACTCCATTCCAGGAGGGACTGAGGACCTTTGACCAGCTGGATGCTATCTCAAGCCTGCCCACTCCTAGTGACATTTTCGTGTCTTACAGTACCTTCCCAGGCTTTGTCTCATGGCGCGATCCCAAGTCAGGGAGCTGGTACGTGGAGACACTGGACGACATCTTTGAACAGTGGGCCCATTCAGAGGACCTGCAGAGCCTGCTGCTGCGAGTGGCAAACGCTGTCTCTGTGAAGGGCATCTACAAACAGATGCCCGGGTGCTTCAATTTTCTGAGAAAGAAACTGTTCTTTAAGACTTCC（配列番号８）を含む核酸配列によってコードされる、項目１２に記載の
ポリペプチド。
(項目１４)
GVQVETISPGDGRTFPKRGQTCVVHYTGMLEDGKKVDSSRDRNKPFKFMLGKQEVIRGWEEGVAQMSVGQRAKLTISPDYAYGATGHPGIIPPHATLVFDVELLKLEGGGGSGFGDVGALESLRGNADLAYILSMEPCGHCLIINNVNFCRESGLRTRTGSNIDCEKLRRRFSSLHFMVEVKGDLTAKKMVLALLELAQQDHGALDCCVVVILSHGCQASHLQFPGAVYGTDGCPVSVEKIVNIFNGTSCPSLGGKPKLFFIQACGGEQKDHGFEVASTSPEDESPGSNPEPDATPFQEGLRTFDQLDAISSLPTPSDIFVSYSTFPGFVSWRDPKSGSWYVETLDDIFEQWAHSEDLQSLLLRVANAVSVKGIYKQMPGCFNFLRKKLFFKTS（配列番号９）を含むアミノ酸配列によってコードされる、項目１～１３のいずれか一項に記載のポリペプチド。
(項目１５)
GGGGTCCAGGTCGAGACTATTTCACCAGGGGATGGGCGAACATTTCCAAAAAGGGGCCAGACTTGCGTCGTGCATTACACCGGGATGCTGGAGGACGGGAAGAAAGTGGACAGCTCCAGGGATCGCAACAAGCCCTTCAAGTTCATGCTGGGAAAGCAGGAAGTGATCCGAGGATGGGAGGAAGGCGTGGCACAGATGTCAGTCGGCCAGCGGGCCAAACTGACCATTAGCCCTGACTACGCTTATGGAGCAACAGGCCACCCAGGGATCATTCCCCCTCATGCCACCCTGGTCTTCGATGTGGAACTGCTGAAGCTGGAGGGAGGAGGAGGATCCGGATTTGGGGACGTGGGGGCCCTGGAGTCTCTGCGAGGAAATGCCGATCTGGCTTACATCCTGAGCATGGAACCCTGCGGCCACTGTCTGATCATTAACAATGTGAACTTCTGCAGAGAAAGCGGACTGCGAACACGGACTGGCTCCAATATTGACTGTGAGAAGCTGCGGAGAAGGTTCTCTAGTCTGCACTTTATGGTCGAAGTGAAAGGGGATCTGACCGCCAAGAAAATGGTGCTGGCCCTGCTGGAGCTGGCTCAGCAGGACCATGGAGCTCTGGATTGCTGCGTGGTCGTGATCCTGTCCCACGGGTGCCAGGCTTCTCATCTGCAGTTCCCCGGAGCAGTGTACGGAACAGACGGCTGTCCTGTCAGCGTGGAGAAGATCGTCAACATCTTCAACGGCACTTCTTGCCCTAGTCTGGGGGGAAAGCCAAAACTGTTCTTTATCCAGGCCTGTGGCGGGGAACAGAAAGATCACGGCTTCGAGGTGGCCAGCACCAGCCCTGAGGACGAATCACCAGGGAGCAACCCTGAACCAGATGCAACTCCATTCCAGGAGGGACTGAGGACCTTTGACCAGCTGGATGCTATCTCAAGCCTGCCCACTCCTAGTGACATTTTCGTGTCTTACAGTACCTTCCCAGGCTTTGTCTCATGGCGCGATCCCAAGTCAGGGAGCTGGTACGTGGAGACACTGGACGACATCTTTGAACAGTGGGCCCATTCAGAGGACCTGCAGAGCCTGCTGCTGCGAGTGGCAAACGCTGTCTCTGTGAAGGGCATCTACAAACAGATGCCCGGGTGCTTCAATTTTCTGAGAAAGAAACTGTTCTTTAAGACTTCC（配列番号１０）を含む核酸配列によってコードされる、項目１４に記載のポリペプチド。
(項目１６)
前記項目のいずれか一項に記載の誘導性カスパーゼポリペプチドを含む組成物。
(項目１７)
前記項目のいずれか一項に記載の誘導性カスパーゼポリペプチドを含むトランスポゾン。
(項目１８)
治療用タンパク質をコードする配列をさらに含む、項目１７に記載のトランスポゾン。
(項目１９)
前記治療用タンパク質が天然に存在する、項目１８に記載のトランスポゾン。
(項目２０)
前記治療用タンパク質が天然に存在しない、項目１８に記載のトランスポゾン。
(項目２１)
前記治療用タンパク質が、細胞表面タンパク質、膜結合型タンパク質、細胞外膜結合型タンパク質、細胞内膜結合型タンパク質、細胞内タンパク質、核局在化タンパク質、核タンパク質、細胞質タンパク質、サイトゾルタンパク質、分泌タンパク質、リソソームタンパク質、エンドソームタンパク質、小胞結合タンパク質、ミトコンドリアタンパク質、小胞体タンパク質、細胞骨格タンパク質、細胞内シグナル伝達に関与するタンパク質、および／または細胞外シグナル伝達に関与するタンパク質を含む、項目１８～２０のいずれか一項に記載のトランスポゾン。
(項目２２)
前記治療用タンパク質が抗原受容体を含む、項目１８～２０のいずれか一項に記載のトランスポゾン。
(項目２３)
前記抗原受容体がＴ細胞受容体（ＴＣＲ）を含む、項目２２に記載のトランスポゾン。
(項目２４)
前記抗原受容体がバリアントまたは組換えＴ細胞受容体（ＴＣＲ）を含む、項目２３に記載のトランスポゾン。
(項目２５)
前記抗原受容体がキメラ抗原受容体（ＣＡＲ）である、項目２３～２５のいずれか一項に記載のトランスポゾン。
(項目２６)
前記ＣＡＲが１つまたは複数のセンチリン配列を含む、項目２６に記載のトランスポゾン。
(項目２７)
前記ＣＡＲがＣＡＲＴｙｒｉｎである、項目２６に記載のトランスポゾン。
(項目２８)
前記ＣＡＲが１つまたは複数のＶＨＨ配列を含む、項目２５に記載のトランスポゾン。
(項目２９)
前記ＣＡＲがＶＣＡＲである、項目２８に記載のトランスポゾン。
(項目３０)
少なくとも１つの自己切断性ペプチドを含む、項目１７～２９のいずれか一項に記載のトランスポゾン。
(項目３１)
前記トランスポゾンが少なくとも１つの自己切断性ペプチドを含み、自己切断性ペプチドが、該トランスポゾンにおいて前記誘導性カスパーゼポリペプチドと別の配列との間に位置する、項目３０に記載のトランスポゾン。
(項目３２)
前記トランスポゾンが少なくとも１つの自己切断性ペプチドを含み、第１の自己切断性ペプチドが前記誘導性カスパーゼポリペプチドの上流に位置し、第２の自己切断性ペプチドが該誘導性カスパーゼポリペプチドの下流に位置する、項目３０に記載のトランスポゾン。
(項目３３)
前記少なくとも１つの自己切断性ペプチドが、Ｔ２Ａペプチド、ＧＳＧ－Ｔ２Ａペプチド、Ｅ２Ａペプチド、ＧＳＧ－Ｅ２Ａペプチド、Ｆ２Ａペプチド、ＧＳＧ－Ｆ２Ａペプチド、Ｐ２Ａペプチド、またはＧＳＧ－Ｐ２Ａペプチドを含む、項目３０～３２のいずれか一項に記載のトランスポゾン。
(項目３４)
前記Ｔ２Ａペプチドが、ＥＧＲＧＳＬＬＴＣＧＤＶＥＥＮＰＧＰ（配列番号１１）を含むアミノ酸配列を含む、項目３３に記載のトランスポゾン。
(項目３５)
前記ＧＳＧ－Ｔ２Ａペプチドが、ＧＳＧＥＧＲＧＳＬＬＴＣＧＤＶＥＥＮＰＧＰ（配列番号１２）を含むアミノ酸配列を含む、項目３３に記載のトランスポゾン。
(項目３６)
前記Ｅ２Ａペプチドが、ＱＣＴＮＹＡＬＬＫＬＡＧＤＶＥＳＮＰＧＰ（配列番号１３）を含むアミノ酸配列を含む、項目３３に記載のトランスポゾン。
(項目３７)
前記ＧＳＧ－Ｅ２Ａペプチドが、ＧＳＧＱＣＴＮＹＡＬＬＫＬＡＧＤＶＥＳＮＰＧＰ（配列番号１４）を含むアミノ酸配列を含む、項目３３に記載のトランスポゾン。
(項目３８)
前記Ｆ２Ａペプチドが、ＶＫＱＴＬＮＦＤＬＬＫＬＡＧＤＶＥＳＮＰＧＰ（配列番号１５）を含むアミノ酸配列を含む、項目３３に記載のトランスポゾン。
(項目３９)
前記ＧＳＧ－Ｆ２Ａペプチドが、ＧＳＧＶＫＱＴＬＮＦＤＬＬＫＬＡＧＤＶＥＳＮＰＧＰ（配列番号１６）を含むアミノ酸配列を含む、項目３３に記載のトランスポゾン。
(項目４０)
前記Ｐ２Ａペプチドが、ＡＴＮＦＳＬＬＫＱＡＧＤＶＥＥＮＰＧＰ（配列番号１７）を含むアミノ酸配列を含む、項目３３に記載のトランスポゾン。
(項目４１)
前記ＧＳＧ－Ｐ２Ａペプチドが、ＧＳＧＡＴＮＦＳＬＬＫＱＡＧＤＶＥＥＮＰＧＰ（配列番号１８）を含むアミノ酸配列を含む、項目４４に記載のトランスポゾン。
(項目４２)
ｐｉｇｇｙＢａｃトランスポゾンである、項目１７～４１のいずれか一項に記載のトランスポゾン。
(項目４３)
項目１７～４２のいずれか一項に記載のトランスポゾンを含む組成物。
(項目４４)
前記トランスポゾンがｐｉｇｇｙＢａｃトランスポゾンであり、前記組成物が、トランスポザーゼ酵素をコードする配列を含むプラスミドをさらに含む、項目４３に記載の組成物。
(項目４５)
トランスポザーゼ酵素をコードする前記配列が、ｍＲＮＡ配列である、項目４４に記載の組成物。
(項目４６)
前記トランスポザーゼがｐｉｇｇｙＢａｃトランスポザーゼである、項目４４または４５に記載の組成物。
(項目４７)
前記ｐｉｇｇｙＢａｃトランスポザーゼが、配列番号１を含むアミノ酸配列を含む、項目４６に記載の組成物。
(項目４８)
前記ｐｉｇｇｙＢａｃトランスポザーゼが過剰活性バリアントであり、該過剰活性バリアントが配列番号１の３０位、１６５位、２８２位、および５３８位の１つまたは複数においてアミノ酸置換を含む、項目４６または４７に記載の組成物。
(項目４９)
配列番号１の３０位における前記アミノ酸置換が、イソロイシン（Ｉ）からバリン（Ｖ）への置換（Ｉ３０Ｖ）である、項目４８に記載の組成物。
(項目５０)
配列番号１の１６５位における前記アミノ酸置換が、グリシン（Ｇ）からセリン（Ｓ）への置換（Ｇ１６５Ｓ）である、項目４８に記載の組成物。
(項目５１)
配列番号１の２８２位における前記アミノ酸置換が、メチオニン（Ｍ）からバリン（Ｖ）への置換（Ｍ２８２Ｖ）である、項目４８に記載の組成物。
(項目５２)
配列番号１の５３８位における前記アミノ酸置換が、アスパラギン（Ｎ）からリシン（Ｋ）への置換（Ｎ５３８Ｋ）である、項目４８に記載の組成物。
(項目５３)
前記トランスポザーゼがＳｕｐｅｒｐｉｇｇｙＢａｃ（ＳＰＢ）トランスポザーゼである、項目４８～５２のいずれか一項に記載の組成物。
(項目５４)
前記ＳｕｐｅｒｐｉｇｇｙＢａｃ（ｓＰＢｏ）トランスポザーゼが、配列番号２を含むアミノ酸配列を含む、項目５３に記載の組成物。
(項目５５)
前記トランスポゾンがＳｌｅｅｐｉｎｇＢｅａｕｔｙトランスポゾンであり、前記組成物が、トランスポザーゼ酵素をコードする配列を含むプラスミドをさらに含む、項目４３に記載の組成物。
(項目５６)
トランスポザーゼ酵素をコードする前記配列が、ＳｌｅｅｐｉｎｇＢｅａｕｔｙトランスポザーゼまたは過剰活性ＳｌｅｅｐｉｎｇＢｅａｕｔｙトランスポザーゼ（ＳＢ１００Ｘ）をコードする配列を含む、項目５５に記載の組成物。
(項目５７)
前記トランスポゾンがＨｅｌｒａｉｓｅｒトランスポゾンであり、前記組成物が、トランスポザーゼ酵素をコードする配列を含むプラスミドをさらに含む、項目４３に記載の組成物。
(項目５８)
前記トランスポザーゼ酵素をコードする前記配列が、Ｈｅｌｉｔｒｏｎトランスポザーゼをコードする配列を含む、項目５７に記載の組成物。
(項目５９)
前記トランスポゾンがＴｏｌ２トランスポゾンであり、前記組成物が、トランスポザーゼ酵素をコードする配列を含むプラスミドをさらに含む、項目４３に記載の組成物。
(項目６０)
前記トランスポザーゼ酵素をコードする前記配列が、Ｔｏｌ２トランスポザーゼをコードする配列を含む、項目５９に記載の組成物。
(項目６１)
前記トランスポザーゼ酵素をコードする前記配列がｍＲＮＡ配列である、項目５６、５８、または６０のいずれか一項に記載の組成物。
(項目６２)
項目１～１５のいずれか一項に記載の誘導性カスパーゼポリペプチドを含むベクター。
(項目６３)
ウイルスベクターである、項目６２に記載のベクター。
(項目６４)
前記ウイルスベクターが、レトロウイルス、レンチウイルス、アデノウイルス、アデノ随伴ウイルス（ＡＡＶ）、またはそれらの任意の組合せから単離され、またはそれらに由来する配列を含む、項目６３に記載のベクター。
(項目６５)
前記ウイルスベクターが、レトロウイルスから単離され、またはそれに由来する配列を含む、項目６３または６４に記載のベクター。
(項目６６)
前記レトロウイルスがガンマレトロウイルスである、項目６５に記載のベクター。
(項目６７)
前記レトロウイルスがレンチウイルスである、項目６５に記載のベクター。
(項目６８)
前記ウイルスベクターが、アデノ随伴ウイルス（ＡＡＶ）から単離され、またはそれに由来する配列を含む、項目６３または６４に記載のベクター。
(項目６９)
前記ＡＡＶが、血清型ＡＡＶ１、ＡＡＶ２、ＡＡＶ３、ＡＡＶ４、ＡＡＶ５、ＡＡＶ６、ＡＡＶ７、ＡＡＶ８、ＡＡＶ９、ＡＡＶ１０、またはＡＡＶ１１のＡＡＶを含む、項目６８に記載のベクター。
(項目７０)
前記ＡＡＶが、ｒＡＡＶ－ＬＫ０３、ｒＡＡＶ－ＮＰ５９、またはｒＡＡＶ－ＮＰ８４から単離され、またはそれらに由来する配列を含む、項目６８に記載のベクター。
(項目７１)
前記ウイルスベクターが組換えベクターである、項目６３～７０のいずれか一項に記載のベクター。
(項目７２)
ナノ粒子ベクターである、項目６２に記載のベクター。
(項目７３)
前記ナノ粒子ベクターが、核酸、アミノ酸、ポリマー、ミセル、脂質、有機分子、無機分子、またはそれらの任意の組合せを含む、項目７２に記載のベクター。
(項目７４)
少なくとも１つの自己切断性ペプチドを含む、項目６２～７３のいずれか一項に記載のベクター。
(項目７５)
前記ベクターが少なくとも１つの自己切断性ペプチドを含み、自己切断性ペプチドが、該ベクターにおいて前記誘導性カスパーゼポリペプチドと別の配列との間に位置する、項目６２～７４のいずれか一項に記載のベクター。
(項目７６)
前記ベクターが少なくとも１つの自己切断性ペプチドを含み、第１の自己切断性ペプチドが前記誘導性カスパーゼポリペプチドの上流に位置し、第２の自己切断性ペプチドが該誘導性カスパーゼポリペプチドの下流に位置する、項目６２～７４のいずれか一項に記載のベクター。
(項目７７)
前記少なくとも１つの自己切断性ペプチドが、Ｔ２Ａペプチド、ＧＳＧ－Ｔ２Ａペプチド、Ｅ２Ａペプチド、ＧＳＧ－Ｅ２Ａペプチド、Ｆ２Ａペプチド、ＧＳＧ－Ｆ２Ａペプチド、Ｐ２Ａペプチド、またはＧＳＧ－Ｐ２Ａペプチドを含む、項目７４～７６のいずれか一項に記載のベクター。
(項目７８)
前記Ｔ２Ａペプチドが、ＥＧＲＧＳＬＬＴＣＧＤＶＥＥＮＰＧＰ（配列番号１１）を含むアミノ酸配列を含む、項目７７に記載のベクター。
(項目７９)
前記ＧＳＧ－Ｔ２Ａペプチドが、ＧＳＧＥＧＲＧＳＬＬＴＣＧＤＶＥＥＮＰＧＰ（配列番号１２）を含むアミノ酸配列を含む、項目７７に記載のベクター。
(項目８０)
前記Ｅ２Ａペプチドが、ＱＣＴＮＹＡＬＬＫＬＡＧＤＶＥＳＮＰＧＰ（配列番号１３）を含むアミノ酸配列を含む、項目７７に記載のベクター。
(項目８１)
前記ＧＳＧ－Ｅ２Ａペプチドが、ＧＳＧＱＣＴＮＹＡＬＬＫＬＡＧＤＶＥＳＮＰＧＰ（配列番号１４）を含むアミノ酸配列を含む、項目７７に記載のベクター。
(項目８２)
前記Ｆ２Ａペプチドが、ＶＫＱＴＬＮＦＤＬＬＫＬＡＧＤＶＥＳＮＰＧＰ（配列番号１５）を含むアミノ酸配列を含む、項目７７に記載のベクター。
(項目８３)
前記ＧＳＧ－Ｆ２Ａペプチドが、ＧＳＧＶＫＱＴＬＮＦＤＬＬＫＬＡＧＤＶＥＳＮＰＧＰ（配列番号１６）を含むアミノ酸配列を含む、項目７７に記載のベクター。
(項目８４)
前記Ｐ２Ａペプチドが、ＡＴＮＦＳＬＬＫＱＡＧＤＶＥＥＮＰＧＰ（配列番号１７）を含むアミノ酸配列を含む、項目７７に記載のベクター。
(項目８５)
前記ＧＳＧ－Ｐ２Ａペプチドが、ＧＳＧＡＴＮＦＳＬＬＫＱＡＧＤＶＥＥＮＰＧＰ（配列番号１８）を含むアミノ酸配列を含む、項目７７に記載のベクター。
(項目８６)
項目６２～８５のいずれか一項に記載のベクターを含む組成物。
(項目８７)
項目１～１５のいずれか一項に記載の誘導性カスパーゼポリペプチドを含む細胞。
(項目８８)
項目１７～４２のいずれか一項に記載のトランスポゾンを含む細胞。
(項目８９)
項目１６または４３～６１のいずれか一項に記載の組成物を含む細胞。
(項目９０)
項目６２～８５のいずれか一項に記載のベクターを含む細胞。
(項目９１)
前記細胞が、誘導剤との接触後、前記誘導性カスパーゼタンパク質を発現する、項目８７～９０のいずれか一項に記載の細胞。
(項目９２)
前記細胞がヒト細胞である、項目８７～９１のいずれか一項に記載の細胞。
(項目９３)
前記細胞が免疫細胞である、項目８７～９２のいずれか一項に記載の細胞。
(項目９４)
前記免疫細胞が、Ｔ細胞、ナチュラルキラー（ＮＫ）細胞、ナチュラルキラー（ＮＫ）様細胞、造血前駆細胞、末梢血（ＰＢ）由来Ｔ細胞、または臍帯血（ＵＣＢ）由来Ｔ細胞である、項目９３に記載の細胞。
(項目９５)
前記免疫細胞がＴ細胞である、項目９４に記載の細胞。
(項目９６)
前記細胞が人工抗原提示細胞である、項目８７～９１のいずれか一項に記載の細胞。
(項目９７)
前記細胞が幹細胞である、項目８７～９１のいずれか一項に記載の細胞。
(項目９８)
前記幹細胞が胚性幹細胞である、項目９７に記載の細胞。
(項目９９)
前記幹細胞が成体幹細胞である、項目９７に記載の細胞。
(項目１００)
前記幹細胞が、全能性、多能性、または複能性である、項目９７～９９のいずれか一項に記載の細胞。
(項目１０１)
前記幹細胞が人工多能性幹細胞（ｉＰＳＣ）である、項目９７または９９に記載の細胞。
(項目１０２)
前記細胞が体細胞である、項目８７～９１のいずれか一項に記載の細胞。
(項目１０３)
前記細胞が、ヒト心臓；骨格筋もしくは平滑筋；血管、静脈もしくは毛細血管；脾臓；甲状腺；リンパ節もしくはリンパ管；骨もしくは骨髄；皮膚もしくは内皮；副腎；食道；咽頭；脳もしくは脊髄；末梢神経系；眼；視床下部；肝臓；嗅覚組織；前立腺；胃；大腸もしくは小腸；肺もしくは気管支；腎臓；膵臓；胸腺；尿管もしくは尿道；膀胱；聴覚組織；膀胱；副甲状腺；唾液腺；または気管から単離され、またはそれらに由来する、項目１０２に記載の細胞。
(項目１０４)
項目８７～１０３のいずれか一項に記載の細胞を含む組成物。
(項目１０５)
養子細胞療法のための項目１０４に記載の組成物の使用。
(項目１０６)
前記細胞が自己由来である、項目１０５に記載の使用。
(項目１０７)
前記細胞が同種異系である、項目１０５に記載の使用。
(項目１０８)
ｅｘｖｉｖｏ遺伝子治療のための項目１０４に記載の組成物の使用。
(項目１０９)
前記細胞が自己由来である、項目１０８に記載の使用。
(項目１１０)
前記細胞が同種異系である、項目１０８に記載の使用。
(項目１１１)
細胞療法を改変することを必要とする被験体において細胞療法を改変する方法であって、該被験体に、治療剤および項目１～１５のいずれか一項に記載の誘導性カスパーゼポリペプチドを含む細胞を含む組成物を投与するステップであって、該細胞を誘導剤と接触させることにより該細胞においてアポトーシスが選択的に誘導され得るステップを含む、方法。
(項目１１２)
細胞療法を改変することを必要とする被験体において細胞療法を改変する方法であって、該被験体に、治療剤および項目１６、４３～６１、または８６のいずれか一項に記載の組成物を含む細胞を含む組成物を投与するステップであって、該細胞を誘導剤と接触させることにより該細胞においてアポトーシスが選択的に誘導され得るステップを含む、方法。
(項目１１３)
細胞療法を改変することを必要とする被験体において細胞療法を改変する方法であって、該被験体に、治療剤、項目１７～４２のいずれか一項に記載のトランスポゾン、および項目４３～６１のいずれか一項に記載のトランスポザーゼを含む組成物を含む細胞を含む組成物を投与するステップであって、該細胞を誘導剤と接触させることにより該細胞においてアポトーシスが選択的に誘導され得るステップを含む、方法。
(項目１１４)
細胞療法を改変することを必要とする被験体において細胞療法を改変する方法であって、該被験体に、治療剤および項目６２～８５のいずれか一項に記載のベクターを含む細胞を含む組成物を投与するステップを含む、該細胞を誘導剤と接触させることにより該細胞においてアポトーシスが選択的に誘導され得る、方法。
(項目１１５)
前記細胞が自己由来である、項目１１１～１１４のいずれか一項に記載の方法。
(項目１１６)
前記細胞が同種異系である、項目１１１～１１４のいずれか一項に記載の方法。
(項目１１７)
前記細胞療法が養子細胞療法である、項目１１１～１１６のいずれか一項に記載の方法。
(項目１１８)
前記治療剤がｅｘｖｉｖｏ遺伝子治療により導入されている、項目１１１～１１７のいずれか一項に記載の方法。
(項目１１９)
前記治療剤が、改変された内因性遺伝子、外因性遺伝子、またはそれらの一部分をコードする配列である、項目１１８に記載の方法。
(項目１２０)
前記改変することが前記細胞療法の終結である、項目１１１～１１９のいずれか一項に記載の方法。
(項目１２１)
前記改変することが、前記細胞療法に提供される前記細胞の一部分の除去である、項目１１１～１１９のいずれか一項に記載の方法。
(項目１２２)
前記細胞療法の改変を阻害するために前記誘導剤の阻害剤を投与し、それにより、該細胞療法の機能および／または有効性を回復させるステップをさらに含む、項目１１１～１２１のいずれか一項に記載の方法。
(項目１２３)
疾患または障害を処置することを必要とする被験体において疾患または障害を処置する方法であって、
該被験体に、キネティック剤および項目１～１５のいずれか一項に記載の誘導性カスパーゼポリペプチドを含む細胞を含む組成物を投与するステップであって、該細胞を誘導剤と接触させることにより該細胞においてアポトーシスが選択的に誘導され得、該キネティック剤を含む該細胞が、該被験体の標的組織内で局所的組織毒性を誘導する、ステップ、ならびに
該被験体の非標的組織における有意な毒性の誘導前に、該キネティック剤を含む該細胞においてアポトーシスを選択的に誘導するステップ
を含み、それにより、該標的組織を処置し、排除し、非標的組織を保存し、該被験体において該疾患または障害を処置する、方法。
(項目１２４)
疾患または障害を処置することを必要とする被験体において疾患または障害を処置する方法であって、
該被験体に、キネティック剤および項目１６、４３～６１、または８６のいずれか一項に記載の組成物を含む細胞を含む組成物を投与するステップであって、該細胞を誘導剤と接触させることにより該細胞においてアポトーシスが選択的に誘導され得、該キネティック剤を含む細胞が、該被験体の標的組織内で局所的組織毒性を誘導する、ステップ、ならびに
該被験体の非標的組織における有意な毒性の誘導前に該キネティック剤を含む該細胞においてアポトーシスを選択的に誘導するステップ
を含み、それにより、該標的組織を処置または排除し、非標的組織を保存し、該被験体において該疾患または障害を処置する、方法。
(項目１２５)
疾患または障害を処置することを必要とする被験体において疾患または障害を処置する方法であって、
該被験体に、キネティック剤、項目１７～４２のいずれか一項に記載のトランスポゾン、および項目４３～６１のいずれか一項に記載のトランスポザーゼを含む組成物を含む細胞を含む組成物を投与するステップであって、該細胞を誘導剤と接触させることにより該細胞においてアポトーシスが選択的に誘導され得、該キネティック剤を含む該細胞が、該被験体の標的組織内で局所的組織毒性を誘導する、ステップ、ならびに該被験体の非標的組織における有意な毒性の誘導前に、該キネティック剤を含む該細胞においてアポトーシスを選択的に誘導するステップ
を含み、それにより、該標的組織を処置し、排除し、非標的組織を保存し、該被験体において該疾患または障害を処置する、方法。
(項目１２６)
疾患または障害を処置することを必要とする被験体において疾患または障害を処置する方法であって、
該被験体に、キネティック剤および項目６２～８５のいずれか一項に記載のベクターを含む細胞を含む組成物を投与するステップであって、該細胞を誘導剤と接触させることにより該細胞においてアポトーシスが選択的に誘導され得、該キネティック剤を含む該細胞が、該被験体の標的組織内で局所的組織毒性を誘導する、ステップ、ならびに
該被験体の非標的組織における有意な毒性の誘導前に、該キネティック剤を含む該細胞においてアポトーシスを選択的に誘導するステップ
を含み、それにより、該標的組織を処置し、排除し、非標的組織を保存し、該被験体において該疾患または障害を処置する、方法。
(項目１２７)
前記疾患または障害が増殖性障害またはがんである、項目１２３～１２６のいずれか一項に記載の方法。
(項目１２８)
前記標的組織が腫瘍を含む、項目１２７に記載の方法。
(項目１２９)
前記腫瘍が良性である、項目１２８に記載の方法。
(項目１３０)
前記腫瘍が悪性である、項目１２８に記載の方法。
(項目１３１)
前記標的組織が、切除された腫瘍の露出した組織または周縁部を含む、項目１２７～１３０のいずれか一項に記載の方法。
(項目１３２)
前記標的組織がほぼ確実な転移の部位を含む、項目１２７～１３０のいずれか一項に記載の方法。
(項目１３３)
転移の前記部位が、リンパ節、リンパ液、末梢循環血液、局所循環血液、骨、骨髄、および脳脊髄液（ＣＳＦ）の１つまたは複数を含む、項目１３２に記載の方法。
(項目１３４)
前記疾患または障害が炎症性疾患または障害である、項目１２３～１２６のいずれか一項に記載の方法。
(項目１３５)
前記標的組織が炎症の部位を含む、項目１３４に記載の方法。
(項目１３６)
前記疾患または障害が、免疫または自己免疫の疾患または障害である、項目１２３～１２６のいずれか一項に記載の方法。
(項目１３７)
前記標的組織が、露出したまたは感染した組織の部位を含む、項目１３６に記載の方法。
(項目１３８)
前記標的組織が、熱傷または創傷の組織を含む、項目１３６に記載の方法。
(項目１３９)
前記疾患または障害が感染性疾患または障害である、項目１２３～１２６のいずれか一項に記載の方法。
(項目１４０)
前記標的組織が感染組織を含む、項目１３９に記載の方法。
(項目１４１)
前記疾患または障害が遺伝的または後成的疾患または障害である、項目１２３～１２６のいずれか一項に記載の方法。
(項目１４２)
前記標的組織が、野生型細胞と比較した場合、前記遺伝的または後成的改変を含む１つまたは複数の細胞を含む、項目１４１に記載の方法。
(項目１４３)
前記疾患または障害が代謝障害である、項目１２３～１２６のいずれか一項に記載の方法。
(項目１４４)
前記標的組織が、前記代謝障害を有する１つまたは複数の細胞を含む、項目１４１に記載の方法。
(項目１４５)
前記疾患または障害が血管障害である、項目１２３～１２６のいずれか一項に記載の方法。
(項目１４６)
前記標的組織が、静脈、血管、毛細血管、または循環血液の成分の１つまたは複数の細胞を含む、項目１４５に記載の方法。
(項目１４７)
前記疾患または障害が呼吸障害である、項目１２３～１２６のいずれか一項に記載の方法。
(項目１４８)
前記標的組織が、鼻道、食道、または肺の１つまたは複数の細胞を含む、項目１４７に記載の方法。
(項目１４９)
前記疾患または障害が線維性障害である、項目１２３～１２６のいずれか一項に記載の方法。
(項目１５０)
前記標的組織が、線維素凝塊または該線維素凝塊の近くの細胞を含む、項目１４９に記載の方法。
(項目１５１)
養子細胞療法が、前記キネティック剤を含む前記細胞を含む、項目１２３～１５０のいずれか一項に記載の方法。
(項目１５２)
前記キネティック剤を含む前記細胞が自己由来である、項目１２３～１５１のいずれか一項に記載の方法。
(項目１５３)
前記キネティック剤を含む前記細胞が同種異系である、項目１２３～１５１のいずれか一項に記載の方法。
(項目１５４)
前記キネティック剤を含む前記細胞がＴ細胞である、項目１２３～１５３のいずれか一項に記載の方法。
(項目１５５)
前記キネティック剤が、天然に存在しない受容体である、項目１２３～１５４のいずれか一項に記載の方法。
(項目１５６)
前記天然に存在しない受容体が、合成受容体、改変受容体、組換え受容体またはキメラ受容体である、項目１５５に記載の方法。
(項目１５７)
前記キメラ受容体がキメラ抗原受容体（ＣＡＲ）である、項目１５６に記載の方法。
(項目１５８)
前記キネティック剤が抗がん剤を含む、項目１５１～１５４のいずれか一項に記載の方法。
(項目１５９)
前記抗がん剤が抗ＣＤ１９剤を含む、項目１５８に記載の方法。
(項目１６０)
前記抗がん剤が抗ＢＣＭＡ剤を含む、項目１５８に記載の方法。
(項目１６１)
前記抗がん剤が抗ＰＳＭＡ剤を含む、項目１５８に記載の方法。
(項目１６２)
前記抗がん剤が抗Ｍｕｃ１剤を含む、項目１５８に記載の方法。
(項目１６３)
前記キネティック剤が、天然に存在しない受容体を含む、項目１５８～１６２のいずれか一項に記載の方法。
(項目１６４)
前記天然に存在しない受容体が、合成受容体、改変受容体、組換え受容体またはキメラ受容体を含む、項目１６３に記載の方法。
(項目１６５)
前記キメラ受容体がキメラ抗原受容体（ＣＡＲ）である、項目１６４に記載の方法。
(項目１６６)
前記ＣＡＲが１つまたは複数のＶＨＨ配列を含む、項目１６５に記載の方法。
(項目１６７)
前記ＣＡＲがＶＣＡＲである、項目１６６に記載の方法。
(項目１６８)
前記キネティック剤が形成不全を誘導する、項目１５８～１６７のいずれか一項に記載の方法。
(項目１６９)
前記形成不全が非致死性である、項目１６８に記載の方法。
(項目１７０)
前記誘導剤が、前記キネティック剤を含む前記細胞を排除する、項目１５８～１６９のいずれか一項に記載の方法。
(項目１７１)
前記誘導剤が、前記形成不全の徴候または症状を排除または低減する、項目１５８～１７０のいずれか一項に記載の方法。

Claims

誘導性カスパーゼポリペプチドをコードするポリヌクレオチドであって、該誘導性カスパーゼポリペプチドが、配列番号９のアミノ酸配列を含む、誘導性カスパーゼポリペプチドをコードするポリヌクレオチド。
配列番号９のアミノ酸配列を含む誘導性カスパーゼポリペプチド。
前記ポリヌクレオドが配列番号１０の核酸配列を含む、請求項１に記載のポリヌクレオチド。
請求項１または３に記載のポリヌクレオチドを含むトランスポゾン。
治療用タンパク質をコードする核酸配列をさらに含む、請求項４に記載のトランスポゾン。
前記治療用タンパク質が、抗原受容体、細胞表面タンパク質、膜結合型タンパク質、細胞外膜結合型タンパク質、細胞内膜結合型タンパク質、細胞内タンパク質、核局在化タンパク質、核タンパク質、細胞質タンパク質、サイトゾルタンパク質、分泌タンパク質、リソソームタンパク質、エンドソームタンパク質、小胞結合タンパク質、ミトコンドリアタンパク質、小胞体タンパク質、細胞骨格タンパク質、細胞内シグナル伝達に関与するタンパク質、細胞外シグナル伝達に関与するタンパク質またはそれらの任意の組合せを含む、請求項５に記載のトランスポゾン。
前記抗原受容体がＴ細胞受容体（ＴＣＲ）またはキメラ抗原受容体（ＣＡＲ）を含む、請求項６に記載のトランスポゾン。
前記ＣＡＲが１つまたは複数のセンチリン配列を含む、または前記ＣＡＲが１つまたは複数のＶＨＨ配列を含む、請求項７に記載のトランスポゾン。
ｐｉｇｇｙＢａｃトランスポゾン、ＳｌｅｅｐｉｎｇＢｅａｕｔｙトランスポゾン、Ｈｅｌｒａｉｓｅｒトランスポゾン、またはＴｏｌ２トランスポゾンである、請求項４～８のいずれか一項に記載のトランスポゾン。
前記トランスポゾンがｐｉｇｇｙＢａｃトランスポゾン、ＳｌｅｅｐｉｎｇＢｅａｕｔｙトランスポゾン、Ｈｅｌｒａｉｓｅｒトランスポゾン、またはＴｏｌ２トランスポゾンであり、前記組成物が、トランスポザーゼ酵素をコードする配列を含むプラスミドをさらに含み、前記トランスポザーゼがｐｉｇｇｙＢａｃトランスポザーゼ、ＳｕｐｅｒｐｉｇｇｙＢａｃ（ＳＰＢ）トランスポザーゼ、ＳｌｅｅｐｉｎｇＢｅａｕｔｙトランスポザーゼ、過剰活性ＳｌｅｅｐｉｎｇＢｅａｕｔｙトランスポザーゼ（ＳＢ１００Ｘ）、Ｈｅｌｉｔｒｏｎトランスポザーゼ、またはＴｏｌ２トランスポザーゼである、請求項４～９のいずれか一項に記載のトランスポゾンを含む組成物。
請求項１または３に記載のポリヌクレオチドを含むベクター。
ウイルスベクターまたはナノ粒子ベクターである、請求項１１に記載のベクター。
前記ウイルスベクターが、レトロウイルス、レンチウイルス、アデノウイルス、アデノ随伴ウイルス（ＡＡＶ）、またはそれらの任意の組合せから単離され、またはそれらに由来する配列を含む、請求項１２に記載のベクター。
請求項１または３に記載のポリヌクレオチドを含む細胞。
請求項４～９のいずれか一項に記載のトランスポゾンを含む細胞。
請求項２に記載のポリペプチドを含む細胞。
請求項１１～１２のいずれか一項に記載のベクターを含む細胞。
前記細胞がヒト細胞、免疫細胞、人工抗原提示細胞、幹細胞またはそれらの任意の組合せである、請求項１４～１７のいずれか一項に記載の細胞。
前記細胞が、ヒト心臓；骨格筋もしくは平滑筋；血管、静脈もしくは毛細血管；脾臓；甲状腺；リンパ節もしくはリンパ管；骨もしくは骨髄；皮膚もしくは内皮；副腎；食道；咽頭；脳もしくは脊髄；末梢神経系；眼；視床下部；肝臓；嗅覚組織；前立腺；胃；大腸もしくは小腸；肺もしくは気管支；腎臓；膵臓；胸腺；尿管もしくは尿道；膀胱；聴覚組織；膀胱；副甲状腺；唾液腺；または気管から単離され、またはそれらに由来する体細胞である、請求項１４～１８のいずれか一項に記載の細胞。
請求項１４～１９のいずれか一項に記載の細胞を含む組成物。
養子細胞療法における使用のため、またはｅｘｖｉｖｏ遺伝子治療における使用のための請求項２０に記載の組成物。
前記細胞が自己由来である、請求項２１に記載の組成物。
前記細胞が同種異系である、請求項２１に記載の組成物。
細胞療法を改変することを必要とする被験体において細胞療法を改変する方法における使用のためであって、該被験体に、前記組成物を投与するステップであって、前記細胞を誘導剤と接触させることにより該細胞においてアポトーシスが選択的に誘導され得るステップを含む方法である、請求項２０に記載の組成物。
前記改変することが前記細胞療法の終結または前記細胞療法に提供される前記細胞の一部分の除去である、請求項２４に記載の組成物。
前記方法が前記細胞療法の改変を阻害するために前記誘導剤の阻害剤を投与し、それにより、該細胞療法の機能および／または有効性を回復させるステップをさらに含む、請求項２４または２５に記載の組成物。
疾患または障害を処置することを必要とする被験体において疾患または障害を処置する方法における使用のための請求項２０に記載の組成物であって、該方法が、
該被験体に、該組成物を投与するステップであって、前記細胞がキネティック剤をさらに含み、該細胞を誘導剤と接触させることにより該細胞においてアポトーシスが選択的に誘導され得、該キネティック剤を含む該細胞が、該被験体の標的組織内で局所的組織毒性を誘導する、ステップ、ならびに
該被験体の非標的組織における有意な毒性の誘導前に、該キネティック剤を含む該細胞においてアポトーシスを選択的に誘導するステップ
を含み、それにより、該標的組織を処置し、排除し、非標的組織を保存し、該被験体において該疾患または障害を処置する、組成物。
前記疾患または障害が増殖性障害、がん、炎症性疾患もしくは障害、免疫もしくは自己免疫の疾患もしくは障害、感染性疾患もしくは障害、遺伝的もしくは後成的疾患もしくは障害、代謝障害、血管障害、呼吸障害、または線維性障害である、請求項２７に記載の組成物。