JP7050692B2 - 無細胞胎盤調製物 - Google Patents
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Description
本出願は、2016年3月14日に出願された米国仮出願第62/307,629号の優先権を主張する。
生物学的組成物、組成物を作製する方法、および組成物を使用する方法が、本明細書に記載される。実施形態において、組成物は胎盤組織に由来する。
実施形態において、本発明は、胎盤組織の生成物および組成物に関する。本明細書で用いる場合、胎盤組織は、全体または部分的な、繁生絨毛膜組織、基底脱落膜組織、および/または相互に連結する組織を含む。いくつかの実施形態において、本明細書に記載されている組成物は、先行技術の従来の胎盤調製物と比較して有益な性質を有する。例えば、いくつかの実施形態において、本明細書に記載されている胎盤の生成物/組成物は、精製工程の間に胎盤組織に加えられるプロテアーゼ阻害剤を含む。いくつかの実施形態において、プロテアーゼ阻害剤は、胎盤生成物中に残存してもよい。
ある実施形態において、本発明は、胎盤の細胞外マトリックスおよび細胞内区画の両方からのタンパク質を保存し得る、細胞を含まない調製物に関する。一実施形態において、本発明は、栄養膜細胞に認められるタンパク質を保存し得る、細胞を含まない調製物に関する。ある実施形態において、本発明は、胎児の発育のための種々のサイトカインおよび増殖因子を合成し得る細胞性栄養膜細胞中のタンパク質を保存し得る、細胞を含まない調製物に関する。代替方法としておよび/または追加として、本発明は、細胞栄養芽層の生成物を貯蓄し得る偽細胞である合胞体栄養細胞中に認められるタンパク質を保存し得る、細胞を含まない調製物に関する。合胞体栄養細胞は、基礎をなしているフィーダー層の単核の絨毛細胞栄養芽層の細胞間融合によって、妊娠全体を通して形成および拡大し得る多核の層である。
ある実施形態において、本発明は、医薬組成物の生成に関する。いくつかの実施形態において、医薬組成物は、薬学的に許容されるその塩、溶媒和物、および生成物を含有してもよく、本発明の成分/化合物のバイオアベイラビリティを増加させる、または存続期間を延長させるために必要な希釈剤、賦形剤、担体、または他の物質を含有してもよい。
いくつかの実施形態において、本明細書に記載されている組成物は、本発明が対処するよう設計された疾患および/または状態に使用されることが知られている他の組成物との組合せ療法に使用してもよい。併用投与する化合物/組成物の投与量は、使用される併用薬物の種類、使用される特定の薬物、処置される疾患または状態などに応じて変更してもよい。さらに、いくつかの実施形態において、1種または複数種の生物学的に活性な薬剤と併用投与する場合、その際に提供される化合物/組成物は、本発明の生物学的に活性な薬剤とともに、または連続的に、のいずれかで投与してもよい。連続して投与する場合、主治医は、生物学的に活性な薬剤と組合せてタンパク質を投与する適切な順序を決定してもよい。
ある実施形態において、本発明は、粗均質化および細胞溶解を含む処理ステップを経てもよい胎盤組織に由来するものであってもよい、胎盤調製物に関する。いくつかの実施形態において、胎盤調製物を生成するため、胎盤組織を、固形物の細胞構成成分からの液体の分離、濾過、ならびに凍結乾燥および/または冷凍をさらに含む処理ステップにかけてもよい。いくつかの実施形態において、胎盤調製物は、1種または複数種のプロテアーゼ阻害剤をさらに含む。いくつかの実施形態において、胎盤調製物は、1種または複数種のプロテアーゼ阻害剤をさらに含む胎盤調製物を生成するため、以下のステップ:(a)均質化、(b)細胞溶解、(c)固形物の細胞構成成分からの液体の分離、ならびに(d)凍結乾燥および/または凍結を、この順序で経た胎盤組織に由来するものであってもよい。いくつかの実施形態では、調製物を、分離ステップ後および凍結乾燥ステップ前に濾過してもよい。
本開示は以下の実施形態を含む。
[1]
胎盤組織および1種または複数種のプロテアーゼ阻害剤を含む胎盤由来組成物。
[2]
前記1種または複数種のプロテアーゼ阻害剤が、4-(2-アミノエチル)ベンゼンスルホニルフルオリド塩酸塩(AEBSF)、ウシ肺アプロチニン、N-(trans-エポキシスクシニル)-L-ロイシン4-グアニジノブチルアミド、ロイペプチン、N-エチルマレイミド(NEM)、フェニルメチルスルホニルフルオライド(PMSF)、エチレンジアミン四酢酸(EDTA)、エチレングリコール-ビス-(2-アミノエチル(エーテル)NNN’N’-四酢酸、塩化アンモニウム、ボセプレビル、ダノプレビル、ナルラプレビル、テラプレビル、またはバニプレビルを含む、[1]に記載の胎盤由来組成物。
[3]
前記胎盤組織が絨毛を有する絨毛膜である、[1]または[2]に記載の胎盤由来組成物。
[4]
前記胎盤組織が絨毛膜である、[1]から[3]のいずれか一項に記載の胎盤由来組成物。
[5]
調製物が、プロテアーゼ阻害剤の非存在下で調製される調製物と比較して高濃度のインターロイキンを含む、[1]から[4]のいずれか一項に記載の胎盤由来組成物。
[6]
胎盤組織および1種または複数種のプロテアーゼ阻害剤を含む胎盤調製物であって、前記胎盤組織の処理が、
(1)均質化、および
(2)細胞溶解を含む、胎盤調製物。
[7]
前記胎盤組織の処理が、
(1)溶解した細胞の分離、
(2)凍結乾燥および/または凍結をさらに含む、[6]に記載の胎盤調製物。
[8]
前記胎盤組織の処理が、濾過をさらに含む、[6]または[7]に記載の胎盤調製物。
[9]
前記1種または複数種のプロテアーゼ阻害剤が、均質化の前に加えられる、[6]から[8]のいずれか一項に記載の胎盤調製物。
[10]
前記1種または複数種のプロテアーゼ阻害剤が、4-(2-アミノエチル)ベンゼンスルホニルフルオリド塩酸塩(AEBSF)、ウシ肺アプロチニン、N-(trans-エポキシスクシニル)-L-ロイシン4-グアニジノブチルアミド、ロイペプチン、N-エチルマレイミド(NEM)、フェニルメチルスルホニルフルオライド(PMSF)、エチレンジアミン四酢酸(EDTA)、エチレングリコール-ビス-(2-アミノエチル(エーテル)NNN’N’-四酢酸、塩化アンモニウム、ボセプレビル、ダノプレビル、ナルラプレビル、テラプレビル、またはバニプレビルを含む、[6]から[9]のいずれか一項に記載の胎盤調製物。
[11]
前記胎盤組織が絨毛を有する絨毛膜である、[6]から[10]のいずれか一項に記載の胎盤調製物。
[12]
前記胎盤組織が絨毛膜である、[6]から[11]のいずれか一項に記載の胎盤調製物。
[13]
希釈剤、賦形剤、または担体をさらに含む、[6]から[12]のいずれか一項に記載の胎盤調製物。
[14]
前記調製物が、プロテアーゼ阻害剤の非存在下で調製される調製物と比較して高濃度のインターロイキンを含む、[6]から[13]のいずれか一項に記載の胎盤調製物。
[15]
前記プロテアーゼ阻害剤が、前記胎盤調製物から除去されない、[6]から[14]のいずれか一項に記載の胎盤調製物。
[16]
胎盤生成物を作製する方法であって、
(1)胎盤組織にプロテアーゼ阻害剤を加えること、
(2)前記胎盤組織を均質化すること、および
(3)前記胎盤組織を溶解することを含む、方法。
[17]
(1)溶解した細胞を分離すること、および
(2)前記生成物を凍結乾燥および/または凍結することをさらに含む、[16]に記載の方法。
[18]
前記生成物を濾過することをさらに含む、[16]または[17]に記載の方法。
[19]
前記1種または複数種のプロテアーゼ阻害剤が、4-(2-アミノエチル)ベンゼンスルホニルフルオリド塩酸塩(AEBSF)、ウシ肺アプロチニン、N-(trans-エポキシスクシニル)-L-ロイシン4-グアニジノブチルアミド、ロイペプチン、N-エチルマレイミド(NEM)、フェニルメチルスルホニルフルオライド(PMSF)、エチレンジアミン四酢酸(EDTA)、エチレングリコール-ビス-(2-アミノエチル(エーテル)NNN’N’-四酢酸、塩化アンモニウム、ボセプレビル、ダノプレビル、ナルラプレビル、テラプレビル、またはバニプレビルを含む、[16]から[18]のいずれか一項に記載の方法。
[20]
関節炎、創傷治癒、瘢痕処置、組織の増殖、組織の治癒、組織マトリックスの再生/修復、移植、炎症、ならびにTGF-βおよび他の胎盤タンパク質のシグナル伝達の調節に関連する状態を含む群から選択される疾病を有する個人を処置する方法であって、[1]から[15]のいずれか一項に記載の胎盤調製物を投与することを含む、方法。
胎盤/羊膜は、胎盤提供コーディネーターによって契約病院から入手する。コーディネーター/QA部門は、AATBおよび企業基準に従って、ドナーのスクリーニングを行う。コーディネーターは、胎盤/羊膜を、0.9%通常生理食塩水(NS)に入れる。
胎盤を、0.9%NSから取り出し、およそ1.5インチ×2インチの小片に切り分ける。より小さい小片を、およそ400mLの1Xリン酸緩衝生理食塩水(PBS)の入った容器に入れる。容器を、振盪プラットフォームに置き、120rpmで12~24時間振盪する。PBS中で組織を振盪することによって、組織中から全量の血液を除去する。
粗均質化:胎盤小片を、プロテアーゼ阻害剤(PI)も1X最終濃度で含有する1XPBSと共に、実験室用ブレンダーを使用して粗く均質化した。胎盤の細胞内に存在するタンパク質、具体的には、増殖因子、ケモカイン、およびサイトカインの分解を防ぐため、プロテアーゼ阻害剤を用いてもよい。
細胞溶解は、次の工程のうちの1つによって達成される。細胞溶解によって、ケモカイン、サイトカイン、および増殖因子が細胞から流出し得る。
減圧濾過:上記のステップから得た上清を、減圧濾過システムに入れる。システムは2つのフィルターを備える。最初のフィルターは孔径1μm、続くフィルターは孔径0.45μmである。このステップは、残りすべての細胞破片を除去し、上清を清澄化するものである。濾液は保持される。
HPH(ヒト胎盤ホモジネート)調製物-PHは、以下のうちの1つの方法で保存可能である:(1)凍結乾燥し、凍結乾燥後の生物活性を確認する試験を行いつつ滅菌バイアルに入れる、(2)後の使用、例えば、注射のために液体剤形で滅菌バイアルに入れる、または(3)噴霧乾燥する。HPHは、羊膜など、他の胎盤生成物と組み合わせてもよい。一例である、浸漬羊膜では、以下の工程を用いてもよい。
創傷治癒の標準in vitroアッセイであるスクラッチアッセイを、胎盤ディスク抽出物からの1XPBSおよび1XPBS-1XPIの両サンプル3つずつに対して実施した。ヒト皮膚線維芽細胞は、10%でウシ胎児血清を有するダルベッコ変法イーグル培地(DMEM)を用いて、12ウェルプレート中で培養された。単層が得られた際に、セルスクレーパーを使用して培地の底から細胞の細い線を除去した。ウェルを、ダルベッコリン酸緩衝生理食塩水(DPBS)で3回洗浄して溶解細胞を除去した。各ウェル中において無血清DMEM中で総体積のおよそ10%となる被験物を投与した。製造業者の使用説明書に従ってArrayScan ZTIで、最初の24時間は2時間毎、その後、48時間および72時間後に1回撮影された顕微鏡写真によって、プレートを分析した。
1.Heikkinen J, Mottonen M, Pulkki K, Lassila O, Alanen A. Cytokine levels in midtrimester amniotic fluid in normal pregnancy and in the prediction of pre-eclampsia. Scand J Immunol. 2001;53(3):310-4。
2.Payne MS, Feng Z, Li S, Doherty DA, Xu B, Li J, Li L, Keelan JA, Zhou YH, Dickinson JE, Hu Y, Newnham JP. Second trimester amniotic fluid cytokine concentrations, Ureaplasma sp colonization status and sexual activity as predictors of preterm birth in Chinese and Australian women. BMC Pregnancy Childbirth. 2014;14:340。
3.Burns C, Hall ST, Smith R, Blackwell C. Cytokine levels in late pregnancy: Are female infants better protected against inflammation? Front Immunol; 6:318。
Claims (11)
- 胎盤組織の無細胞抽出物および1種または複数種のプロテアーゼ阻害剤を含み、前記胎盤組織が胎盤ディスクを含む、胎盤由来医薬組成物。
- 前記1種または複数種のプロテアーゼ阻害剤が、4-(2-アミノエチル)ベンゼンスルホニルフルオリド塩酸塩(AEBSF)、ウシ肺アプロチニン、N-(trans-エポキシスクシニル)-L-ロイシン4-グアニジノブチルアミド、ロイペプチン、N-エチルマレイミド(NEM)、フェニルメチルスルホニルフルオライド(PMSF)、エチレンジアミン四酢酸(EDTA)、エチレングリコール-ビス-(2-アミノエチル(エーテル)NNN’N’-四酢酸、塩化アンモニウム、ボセプレビル、ダノプレビル、ナルラプレビル、テラプレビル、またはバニプレビルを含む、請求項1に記載の胎盤由来医薬組成物。
- 前記胎盤組織が絨毛を有する絨毛膜をさらに含む、請求項1または2に記載の胎盤由来医薬組成物。
- 前記組成物が、プロテアーゼ阻害剤の非存在下で調製される組成物と比較して、より高濃度のインターロイキンを含む、請求項1から3のいずれか一項に記載の胎盤由来医薬組成物。
- 希釈剤、賦形剤、または担体をさらに含む、請求項1~4のいずれか一項に記載の胎盤由来医薬組成物。
- 胎盤組織の無細胞抽出物を含む胎盤由来医薬組成物を作製する方法であって、
(1)胎盤組織に1種または複数種のプロテアーゼ阻害剤を加え、ここで前記胎盤組織が胎盤ディスクを含むこと、
(2)前記胎盤組織を均質化すること、
(3)前記胎盤組織を溶解して固形細胞破片と無細胞液体とを生成すること
を含む、方法。 - (1)前記固形細胞破片から前記無細胞液体を分離すること、および
(2)前記無細胞液体を凍結乾燥および/または凍結すること
をさらに含む、請求項6に記載の方法。 - 前記無細胞液体を濾過することをさらに含む、請求項6または7に記載の方法。
- 前記1種または複数種のプロテアーゼ阻害剤が、4-(2-アミノエチル)ベンゼンスルホニルフルオリド塩酸塩(AEBSF)、ウシ肺アプロチニン、N-(trans-エポキシスクシニル)-L-ロイシン4-グアニジノブチルアミド、ロイペプチン、N-エチルマレイミド(NEM)、フェニルメチルスルホニルフルオライド(PMSF)、エチレンジアミン四酢酸(EDTA)、エチレングリコール-ビス-(2-アミノエチル(エーテル)NNN’N’-四酢酸、塩化アンモニウム、ボセプレビル、ダノプレビル、ナルラプレビル、テラプレビル、またはバニプレビルを含む、請求項6から8のいずれか一項に記載の方法。
- 前記プロテアーゼ阻害剤を除去することを含まない、請求項6から9のいずれか一項に記載の方法。
- 関節炎、創傷治癒、瘢痕処置、組織の増殖、組織の治癒、組織マトリックスの再生/修復、移植、もしくは炎症を有している、またはTGF-βの調節に関連する状態を有している個人を処置する方法における使用のための、請求項1から5のいずれか一項に記載の胎盤由来医薬組成物であって、前記方法は前記胎盤由来医薬組成物を前記個人に投与することを含む、胎盤由来医薬組成物。
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