JP7016945B2 - ディスインテグリン変異体及びその使用法 - Google Patents
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Description
(a)配列番号1、4、7、8又は9のアミノ酸配列を有するリンカーと、
(b)配列番号11~20、24又は25のアミノ酸配列を有するRGDループと、
(c)配列番号3、6、21、22又は23のアミノ酸配列を有するC末端と、
を具備する。
(a)配列番号1のリンカーと、
(b)配列番号10~20のいずれかのRGDループと、
(c)配列番号3、21、22又は23のいずれかのC末端と、
を具備する。
(a)配列番号7の前記リンカーと、
(b)配列番号13又は18の前記RGDループと、
(c)配列番号3、21又は22のいずれかの前記C末端と、
を具備する。
(a)配列番号9の前記リンカーと、
(b)配列番号14又は20の前記RGDループと、
(c)配列番号3、21又は22のいずれかの前記C末端と、
を具備する。
便宜上、本開示の背景において採用される所定の用語をここにまとめる。ここで特に断りがない限り、ここで使用する技術的及び科学的用語の全ては、本発明が属する技術の当業者によって一般に理解されるものと同じ意味を有する。
2.1 ディスインテグリン変異体
本開示は、TMV-7又はRhoに由来するディスインテグリン変異体が生理学的な止血に影響を与えることなく血小板凝集を抑制又は阻害し得るという予想外の発見に少なくともある程度基づく。したがって、本ディスインテグリン変異体は、血小板凝集によってもたらされる疾患、障害及び/又は状態を治療するための医薬品の開発に対する有望な候補である。
本開示の他の態様は、上記のいずれかのディスインテグリン変異体の有効量及び薬学的に許容可能な担体からなる薬学的組成物に関する。
本発明はまた、血小板凝集によってもたらされる疾患、障害及び/若しくは状態を有する又は患う被検体を治療する方法を提供することを目的とする。方法は、血小板凝集によってもたらされる疾患、障害及び/又は状態に関連する症状を軽減又は改善するように、有効量の本ディスインテグリン変異体を含有する上述の薬学的組成物を、それを必要とする被検体に投与するステップを備える。
ディスインテグリン及びその変異体の発現及び精製
P.パストリス(P.pastoris)におけるディスインテグリン(すなわち、トリムクリン(TMV-7)及びロドストミン)及びその変異体の発現が、前述したプロトコルに従って達成された(Guo他、Proteins.2001 43(4)、499-508;Shiu他、Plos One.2012 7(1):e28833)。
細胞接着アッセイが、Rho、TMV及びそれらの変異体の阻害活性を測定するのに使用され、前述のプロトコルに従って行われた。96ウェルのマイクロタイタープレート(Costar、Corning)を、200μg/mLのフィブリノゲン又は50μg/mLのフィブロネクチンを含有する100μLのPBS緩衝液でコーティングし、一晩4℃でインキュベートした。非特異的タンパク質結合部位を、200μLの熱変性された1%のウシ血清アルブミン(BSA)(Calbiochem)を有する各ウェルを室温で1.5時間にわたってインキュベートすることによってブロックした。熱変性されたBSAを廃棄し、各ウェルを200μLのPBSで2回洗浄した。
調査前に2週間にわたっていずれの医薬品も服用していない健常な志願者から採血した。インフォームドコンセントは各全ての参加者から得られ、調査は国立台湾大学付属病院の施設内審査委員会によって承認された。ヒトPSの調製を、前述の手順に従って実行した(Huang他、Experimental haemtology.2008 36(12)、1704-1713)。
「安全性指標」は、AP2の存在下で血小板活性化を誘発する際のディスインテグリンの濃度、αIIbβ3に対して作られた阻害剤mAb、及びコラーゲン誘発による血小板凝集についてのIC50の間の比率として定義される。
体重20~30gの雄ICRマウスを全ての調査において使用した。動物は、管理された温度(20±1℃)及び湿度(55%±5%)の下で食料及び水に随時アクセスできるようにした。動物実験プロトコルは、国立台湾大学医学部の実験動物委員会(Laboratory Animal Use Committee)によって承認された。
雄ICRマウスを腹腔内注入によってペントバルビタールナトリウム(50mg/kg)で麻酔した後、右総頸動脈上を直接メスによって切開し、2mmの切片の頸動脈を露出させた。小型ドップラーフロープローブを動脈の周囲に載置して血流をモニタリングした。マウスにRR(0.125又は0.25mg/kg)を静脈内投与した。5分後、FeCl3損傷を、塩化第二鉄溶液(7.5%)で飽和させたろ紙によって誘発した。3分の曝露後、ろ紙を除去し、血栓閉塞症が形成されるまで又は80分間にわたって頸動脈の血流を連続的にモニタリングした。
雄ICRマウスに、マウスの側尾静脈を介して薬剤を静脈内注入した。注入5分後に、末端尾から2mmの断片の鋭利な切断を行った。切断された尾を、37℃の等張生理食塩水で満たされた管に即座に挿入した。出血時間を最大10分間記録し、終了時点を出血の停止とした。
結果を平均±SEMとして表現した。統計的解析を一元配置分散分析(ANOVA)及びニューマン-コイルス多重比較検定によって行った。0.05未満のP値(P<0.05)を顕著な差異としてみなした。
この実施例では、トリムクリン及びロドストミン並びにそのそれぞれ突然変異体を、「材料及び方法」の章で説明した手順に従ってクローニング及び単離した。各突然変異体は、天然タンパク質(すなわち、トリムクリン(TMV-7)又はロドストミン)のリンカー領域、RGD領域又はC末端において少なくとも1つの突然変異したアミノ酸残基を含有していた。各変異体の突然変異した配列を表1及び2にまとめる。
太字は、天然トリムクリンの対応するアミノ酸残基から突然変異した又は異なるアミノ酸残基を示す。
αIIbβ3によってもたらされる血小板凝集(Platelet aggregation)を抑制する際のそれらの能力について、実施例1のディスインテグリン(Disintegrin)及びその変異体をテストした。簡単に説明すると、健常なドナーから静脈血試料を採取し、そこから血小板が豊富な血漿を調製した。そして、血小板が豊富な血漿を、プラグ形成をトリガした刺激物(例えば、コラーゲン(Collagen)又はAP2)とともにインキュベートし、その後に実施例1のディスインテグリン及び/又はその変異体とともにインキュベートした。結果を表3にまとめる。
実施例1から同定されるトリムクリンT/KRRR突然変異体の抗血小板機能を、実験動物の微小血管におけるコラーゲン誘発による凝集反応、尾出血時間(Tail bleeding time)及び血栓の形成を計測することによって調査した。結果を図1に示す。
この実施例では、それらのリガンドに対するインテグリンαIIbβ3、αvβ3及びα5β1を抑制する際のRho、TMV-7及びそれらの突然変異体のそれぞれの能力を測定した。結果を表4にまとめる。
Claims (4)
- ディスインテグリン変異体であって、
(a)配列番号1から選択されたアミノ酸配列を有するリンカーと、
(b)配列番号14から選択されたアミノ酸配列を有するRGDループと、
(c)配列番号21から選択されたアミノ酸配列を有するC末端と、
を具備し、
前記ディスインテグリンが、トリムクリンである、
ディスインテグリン変異体。 - 前記ディスインテグリン変異体のN末端に結合されたエチレングリコール(EG)ユニットの2~20個の繰り返し体を有するポリエチレングリコール(PEG)鎖をさらに具備する請求項1に記載のディスインテグリン変異体。
- 血小板凝集によってもたらされる疾患を処置するための医薬品の製造のためのディスインテグリン変異体の使用法であって、前記ディスインテグリン変異体が、
(a)配列番号1から選択されたアミノ酸配列を有するリンカーと、
(b)配列番号14から選択されたアミノ酸配列を有するRGDループと、
(c)配列番号21から選択されたアミノ酸配列を有するC末端と、
を具備し、
前記ディスインテグリンが、トリムクリンである、
使用法。 - 前記ディスインテグリン変異体のN末端に結合されたエチレングリコール(EG)ユニットの2~20個の繰り返し体を有するポリエチレングリコール(PEG)鎖をさらに具備する請求項3に記載の使用法。
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Citations (1)
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