JP6976327B2 - 化学塞栓用エマルジョン組成物およびその製造方法 - Google Patents

Description

本発明は、化学塞栓術に用いることができる、抗癌剤および生分解性高分子を含む高分子ナノ粒子と水溶性造影剤および水不溶性造影剤を含むエマルジョン組成物およびこれを製造する方法に関するものである。

ＴＡＣＥ（Ｔｒａｎｓａｒｔｅｒｉａｌ ｃｈｅｍｏｅｍｂｏｌｉｚａｔｉｏｎ、動脈化学塞栓術）は癌組織に繋がる動脈に抗癌剤を注入し、塞栓物質を利用して癌組織に栄養供給を遮断して癌を治療する方法である。代表的な動脈塞栓術は肝動脈塞栓術があり、肝癌に対する局所抗癌効果を極大化し、多くの場合、姑息的治療（ｐａｌｌｉａｔｉｖｅ ｔｈｅｒａｐｙ）としての役割を担当する。

肝癌は癌腫による死亡の原因のうち、韓国で２位、全世界で３位である予後が不良な悪性腫瘍である。肝癌患者の７０％以上で根治的手術が不可能であり、根治的切除術を施行した場合にも５年以内に他の部位で再発する確率が５０％以上である。進行性肝癌で全身抗癌療法に反応する可能性は１０％以内に非常に低く、これに対する代案として非手術的な治療方法として多様な画像誘導治療法（Ｉｍａｇｅ−ｇｕｉｄｅｄ ｔｈｅｒａｐｙ）が発達している。肝癌に適用される画像誘導治療法として代表的なものは２種類があり、その一つは肝動脈を通じて肝癌に抗癌剤を局所的に注入し、肝動脈に対する塞栓術を併行する治療法である経動脈化学塞栓術（Ｔｒａｎｓａｒｔｅｒｉａｌ Ｃｈｅｍｏｅｍｂｏｌｉｚａｔｉｏｎ；ＴＡＣＥ）であり、他の一つは高周波熱治療（Ｒａｄｉｏｆｒｅｑｕｅｎｃｙ Ａｂｌａｔｉｏｎ；ＲＦＡ）である。

肝癌組織に供給される血流の９５％以上が肝動脈に伝達されるが、周辺部の健康な組織に供給される血流は７５％以上肝門脈に伝達され、２５％だけが肝動脈に伝達されるため、ＴＡＣＥは正常組織に損傷を起こさずに安全かつ有効な治療法である。

ＴＡＣＥは、普通１年に３〜４回にわたって繰り返して施術されるため、投与物質が安全であることが要求される。既存の動脈塞栓術に主に使用される薬物は、ドキソルビシン、シスプラチン、エピルビシン、ミトキサントロン、マイトマイシンＣなどである。この水溶性抗癌剤は、水不溶性造影剤に直接溶解され得ないため、パミレイのような水溶性造影剤に溶解した後、リピオドールのような水不溶性造影剤（ヨード化油）に均質に分散させた水中油型または油中水型のエマルジョン形態に調製する。このエマルジョンは一定時間以降に相分離が起こるため、患者投与直前に調製して用いる。化学塞栓を実施し、追加的にゼラチンスポンジ粒子、ポリビニルアルコール粒子などを投与して癌組織の虚血性壊死を促進し、薬物の消失を防止する。しかし、投与されたエマルジョンは投与後短時間に相分離が発生して抗癌剤が一時に吸収されるため、抗腫瘍効果が持続的でなく、全身暴露による副作用が発生することがある。ＴＡＣＥに投与された大部分の細胞毒性抗癌剤は肝で代謝されるため、肝毒性を示すことがある。このような理由で患者は塞栓後症候群（ｐｏｓｔｅｍｂｏｌｉｚａｔｉｏｎ ｓｙｎｄｒｏｍｅ）を示し、日常生活が困難で２〜３日間入院しなければならないため、医療費用が高い。

最近は、選択的に使用される化学塞栓用粒子（ｄｒｕｇ ｅｌｕｔｉｎｇ ｂｅａｄ、ＤＥＢ）は非吸収性ポリビニルアルコールなどで作って塞栓粒子に薬物をイオン交換方式で吸着させて投与する製品であり、粒子の大きさは４０〜９００μｍ範囲である。エマルジョンの液滴に比べて粒子の範囲が均質化し、再現性があり、薬物が徐々に放出されるため、薬物の全身暴露が少ないという長所がある。しかし、投与以降に薬物が完全に放出されないため、投与後２８日まで５０％未満が放出され、９０日経過以降に９０％程度放出され、比較的に徐々に癌組織に薬物が高濃度に蓄積される。それだけでなく、薬物を吸着させる時間が１〜２時間以上かかかり、非吸収性で薬物が完全に放出された以降にも粒子が体内に残留するため、正常組織の壊死を誘発することがあり、ＴＡＣＥ反復施術が困難になることがある。しかも、既存のＴＡＣＥ方法に比べて薬剤費が高くて患者の費用負担が大きい。

前述したように、既存のＴＡＣＥおよびＤＥＢに使用される薬物は水溶性抗癌剤に限定され、パクリタキセルのような水不溶性抗癌剤は使用されていない。パクリタキセルは、卵巣癌、乳癌、非小細胞肺癌などの各種癌に対して強力な抗腫瘍効果が検証された細胞毒性抗癌剤であるが、水不溶性であるため、エマルジョンの形態で投与することが不可能である。リピオドールに抗癌剤を溶解して投与する場合、リピオドールが癌組織だけでなく、正常組織まで侵入して肝以外の組織、特に肺に簡単に蓄積されて毒性が現れることがある。水溶性造影剤を含む油中水型エマルジョンに比べて粘度が低くて癌組織滞留時間が短い。市販されたパクリタキセル注射剤はブリストル・マイヤーズスクイブ社により開発されたタキソール注射液（登録商標）がある。可溶化剤としてクレモフォールＥＬを用い、投与前にマイクロエマルジョン形態で投与する。しかし、可溶化剤による過敏反応などの毒性が誘発されるため、ＴＡＣＥに適しない。

本発明の目的は、水溶性抗癌剤、水不溶性抗癌剤またはこれらの組み合わせ、および親水性（Ａ）ブロックおよび疎水性（Ｂ）ブロックを含む両親媒性ブロック共重合体を含む高分子ナノ粒子；水溶性造影剤；および、水不溶性造影剤を含む、化学塞栓用エマルジョン組成物を提供することにある。

本発明の他の目的は、前記化学塞栓用エマルジョン組成物の製造方法および前記化学塞栓用エマルジョン組成物を含む癌の予防または治療用医薬組成物を提供することにある。

そこで、本発明者らは、前記目的を達成するために、活性成分である抗癌剤と両親媒性ブロック共重合体を含む高分子ナノ粒子を製造し、水溶性造影剤に溶解した後、これを再び水不溶性造影剤に分散させて形成されたエマルジョン組成物を製造して水溶性抗癌剤だけでなく、水不溶性抗癌剤を安定的に投与することができ、薬物の放出速度を調節することができる組成物を開発した。

以下、本発明をより詳細に説明する。

本発明の一例は、活性成分として水溶性抗癌剤、水不溶性抗癌剤またはこれらの組み合わせ、および親水性（Ａ）ブロックおよび疎水性（Ｂ）ブロックを含む両親媒性ブロック共重合体を含む高分子ナノ粒子；水溶性造影剤；および、水不溶性造影剤を含む、化学塞栓用エマルジョン組成物を提供する。

前記活性成分として使用される抗癌剤は、化学塞栓術に使用可能な抗癌剤であれば制限なしに含まれ、例えば前記水溶性抗癌剤は、ドキソルビシン、イダルビシン、エピルビシン、マイトマイシンＣおよびイリノテカンからなる群より選択された１以上であってもよく、前記水不溶性抗癌剤は、パクリタキセルおよびドセタキセルからなる群より選択された１以上であってもよい。現在までは化学塞栓術に水不溶性抗癌剤、特にパクリタキセルが使用されたことがないが、本発明のエマルジョン組成物は、パクリタキセルを適用して化学塞栓用エマルジョン組成物形態で投与可能である。

前記抗癌剤の含有量は、高分子ナノ粒子１００重量％を基準に、０．０１乃至３０重量％、好ましくは１乃至２０重量％、より好ましくは５乃至１０重量％で含まれてもよい。また本発明の組成物に含まれる抗癌剤は、エマルジョン組成物全体を基準に１乃至４０ｍｇ／ｍｌ、好ましくは１乃至１０ｍｇ／ｍｌの濃度で含まれてもよい。

本発明の組成物に含まれる両親媒性高分子は、親水性（Ａ）ブロックおよび疎水性（Ｂ）ブロックを含む高分子である。前記両親媒性高分子に含まれる親水性（Ａ）ブロックは、ポリアルキレングリコール、ポリビニルアルコール、ポリビニルピロリドン、ポリアクリールアミド、およびその誘導体から構成された群より選択された１種以上であってもよい。例えば、前記親水性（Ａ）ブロックは、モノメトキシポリエチレングリコール、モノアセトキシポリエチレングリコール、ポリエチレングリコール、ポリエチレンとプロピレングリコールの共重合体、およびポリビニルピロリドンから構成された群より選択された１種以上であってもよい。また前記両親媒性高分子に含まれる疎水性（Ｂ）ブロックは、ポリエステル、ポリアンハイドライド、ポリアミノ酸、ポリオルトエステル、およびポリフォスファゼンから構成された群より選択される１種以上であってもよく、例えば、前記疎水性（Ｂ）ブロックは、ポリラクチド、ポリグリコライド、ポリカプロラクトン、ポリジオキサン−２−オン、ポリラクチドとグリコライドの共重合体、ポリラクチドとポリジオキサン−２−オンの共重合体、ポリラクチドとポリカプロラクトンの共重合体およびポリグリコライドとポリカプロラクトンの共重合体から構成された群より選択される１種以上またはこれらの塩であってもよい。

前記親水性ブロック（Ａ）または疎水性（Ｂ）ブロックの数平均分子量は、５００乃至５０，０００Ｄａ、好ましくは１，０００乃至５，０００Ｄａであるものを用いることができる。

本発明の組成物に含まれる両親媒性ブロック共重合体は、高分子ナノ粒子１００重量％を基準に１乃至３０重量％、好ましくは１乃至２０重量％であってもよい。また両親媒性ブロック共重合体に含まれている親水性（Ａ）ブロックおよび疎水性（Ｂ）ブロックの重量比は、２：８乃至８：２であってもよく、好ましくは６：４乃至４：６であってもよい。

例えば本発明の両親媒性ブロック共重合体として、ｍＰＥＧ−ポリ（Ｄ，Ｌ−ラクチド）を用いることができる。

本発明の組成物に含まれている高分子ナノ粒子は、コアに薬物を含み、両親媒性ブロック共重合体が膜をなしてミセル（ｍｉｃｅｌｌｅ）を形成したものであってもよい。高分子ナノ粒子の内部には両親媒性ブロック共重合体の疎水性基または水不溶性抗癌剤を含む場合、水不溶性抗癌剤が位置し、外部は両親媒性ブロック共重合体の親水性グループまたは水溶性抗癌剤を含む場合、水溶性抗癌剤が位置する。

前記高分子ナノ粒子の大きさは、水溶性造影剤に溶解可能な大きさであることが好ましく、例えば高分子ナノ粒子の直径は１０乃至６０ｎｍであってもよい。

本発明の組成物に含まれている高分子ナノ粒子は、カルボン酸末端基を含有するポリ乳酸誘導体を追加的に含んでもよい。前記ポリ乳酸誘導体を追加的に含む場合、両親媒性ブロック共重合体およびポリ乳酸誘導体は、５：９５乃至９５：５、好ましくは６０：４０乃至９０：１０の重量比に含まれてもよい。

前記ポリ乳酸誘導体のカルボン酸末端基は、２価または３価金属イオンで固定されてもよい。前記２価または３価金属イオンは、ポリ乳酸誘導体のカルボン酸末端基とイオン結合してより固いナノ粒子を形成することができる。前記２価または３価金属イオンは、ポリ乳酸誘導体のカルボキシ基末端基の１当量に対して０．５乃至１０当量、好ましくは０．５乃至１当量で結合されてもよい。

例えば、前記２価または３価金属イオンは、カルシウム（Ｃａ^２＋）、マグネシウム（Ｍｇ^２＋）、バリウム（Ｂａ^２＋）、クロム（Ｃｒ^３＋）、鉄（Ｆｅ^３＋）、マンガン（Ｍｎ^２＋）、ニッケル（Ｎｉ^２＋）、銅（Ｃｕ^２＋）、亜鉛（Ｚｎ^２＋）およびアルミニウム（Ａｌ^３＋）からなるグループより１以上選択されてもよいが、これに限定されない。

例えば、前記カルボン酸末端基を含有するポリ乳酸誘導体は、下記の化学式１乃至６の化合物からなる群より選択された１以上であってもよい。

前記化学式１で、Ａは−ＣＯＯ−ＣＨＺ−であり；Ｂは−ＣＯＯ−ＣＨＹ−、−ＣＯＯ−ＣＨ_２ＣＨ_２ＣＨ_２ＣＨ_２ＣＨ_２−または−ＣＯＯ−ＣＨ_２ＣＨ_２ＯＣＨ_２であり；Ｒは水素原子、アセチル、ベンゾイル、テカノイル、パルミトイル、メチル、またはエチル基であり；ＺとＹは、それぞれ水素原子、メチルまたはフェニル基であり；ＭはＮａ、Ｋ、またはＬｉであり；ｎは１乃至３０の整数であり；ｍは０乃至２０の整数である。

前記化学式２で、
Ｘはメチル基であり；
Ｙ’は水素原子またはフェニル基であり；
ｐは０乃至２５の整数であり、ｑは０乃至２５の整数であって、ただし、ｐ＋ｑは５乃至２５の整数であり；
Ｒは水素原子、アセチル、ベンゾイル、テカノイル、パルミトイル、メチルまたはエチル基であり；
ＭはＮａ、Ｋ、またはＬｉであり；
Ｚは水素原子、メチルまたはフェニル基である。

前記化学式３で、
Ｗ−Ｍ’は

または

であり；
ＰＡＤはＤ，Ｌ−ポリ乳酸、Ｄ−ポリ乳酸、ポリマンデル酸、Ｄ，Ｌ−乳酸とグリコール酸の共重合体、Ｄ，Ｌ−乳酸とマンデル酸の共重合体、Ｄ，Ｌ−乳酸とカプロラクトンの共重合体およびＤ，Ｌ−乳酸と１，４−ジオキサン−２−オンの共重合体から構成されたグループより選択されるものであり；
Ｒは水素原子、アセチル、ベンゾイル、テカノイル、パルミトイル、メチルまたはエチル基であり；Ｍは独立にＮａ、Ｋ、またはＬｉである。

前記化学式４で、
Ｓは

であり；Ｌは−ＮＲ１−または−０−であり、ここでＲ１は水素原子またはＣ_１−１０アルキルであり；ＱはＣＨ_３、ＣＨ_２ＣＨ_３、ＣＨ_２ＣＨ_２ＣＨ_３、ＣＨ_２ＣＨ_２ＣＨ_２ＣＨ_３、またはＣＨ_２Ｃ_６Ｈ_５であり；ａは０乃至４の整数であり；ｂは１乃至１０の整数であり；ＭはＮａ、Ｋ、またはＬｉであり；
ＰＡＤはＤ，Ｌ−ポリ乳酸、Ｄ−ポリ乳酸、ポリマンデル酸、Ｄ，Ｌ−乳酸とグリコール酸の共重合体、Ｄ，Ｌ−乳酸とマンデル酸の共重合体、Ｄ，Ｌ−乳酸とカプロラクトンの共重合体、およびＤ，Ｌ−乳酸と１，４−ジオキサン−２−オンの共重合体からなる群より選択されるものである。

前記化学式５で、
Ｒ’は−ＰＡＤ−Ｏ−Ｃ（Ｏ）−ＣＨ_２ＣＨ_２−Ｃ（Ｏ）−ＯＭであり、
ここでＰＡＤはＤ，Ｌ−ポリ乳酸、Ｄ−ポリ乳酸、ポリマンデル酸、Ｄ，Ｌ−乳酸とグリコール酸の共重合体、Ｄ，Ｌ−乳酸とマンデル酸の共重合体、Ｄ，Ｌ−乳酸とカプロラクトンの共重合体、Ｄ，Ｌ−乳酸と１，４−ジオキサン−２−オンの共重合体から構成されたグループより選択されるものであり、ＭはＮａ、Ｋ、またはＬｉであり；
ａは１乃至４の整数である。

前記化学式６で、
ＸおよびＸ’は独立に水素、炭素数が１〜１０であるアルキルまたは炭素数が６〜２０であるアリールであり；
ＹおよびＺは独立にＮａ、Ｋ、またはＬｉであり；
ｍおよびｎは独立に０乃至９５の整数であって、５＜ｍ＋ｎ＜１００であり；
ａおよびｂは独立に１乃至６の整数であり；
Ｒは−（ＣＨ_２）ｋ−、炭素数が２〜１０である２価アルケニル（ｄｉｖａｌｅｎｔ ａｌｋｅｎｙｌ）、炭素数が６〜２０である２価アリール（ｄｉｖａｌｅｎｔ ａｒｙｌ）またはこれらの組み合わせであり、ここでｋは０乃至１０の整数である。

本発明のエマルジョン組成物に使用される水溶性造影剤は、ヨードを含む水溶性溶液として、好ましくはイオパミドール（ｉｏｐａｍｉｄｏｌ）を、製品名でパミレイ（商品名）を用いることができる。また、前記水不溶性造影剤は、ヨード化油として、楊貴妃の果実由来のヨード化油、大豆由来のヨード化油およびエチオドール（ｅｔｈｉｏｄｏｌ）からなる群より選択された１以上であってもよく、好ましくケシの実由来のヨード化油として、製品名でリピオドール（商品名）を用いることができる。

本発明に使用される水不溶性造影剤および水溶性造影剤の粘度は、それぞれ３７℃で１０乃至４０ｍＰａである。これは抗癌剤ナノ粒子をエマルジョン化して投与する時、血管通過が容易であり、癌組織にエマルジョンが滞留する時間を十分に確保するためである。より好ましくは、水不溶性造影剤および水溶性造影剤の粘度は、それぞれ３７℃で２０乃至３０ｍＰａである。

好ましくは、前記高分子ナノ粒子が溶解されている水溶性造影剤および水不溶性造影剤の体積比が１：２乃至１：１０であってもよく、より好ましくは１：３乃至１：５であってもよい。

本発明によるエマルジョン組成物は、ナノ粒子が水溶性造影剤に溶解された溶液が水不溶性造影剤内で液滴になって油中水型エマルジョンをなした形態であってもよい。そのために、エマルジョン組成物を体内投与する場合、エマルジョンの液滴により薬物の放出を１次調節することができ、ナノ粒子により薬物放出を２次制御することができる。そのために、急速な薬物放出による全身毒性を減少させることができ、特に癌組織で薬物の放出が持続して抗腫瘍効果を高めることができる。

好ましくは、前記エマルジョン組成物の液滴の大きさは、１０乃至１００μｍであってもよく、好ましくは２０乃至４０μｍであってもよい。

前記エマルジョン組成物の粘度は、化学塞栓術に適するように調節して用いることができ、３７℃で２０乃至５０ｍＰａ、好ましくは２５乃至４５ｍＰａであってもよい。

前記エマルジョン組成物が使用される用途として化学塞栓術は、好ましくは動脈化学塞栓術（ＴＡＣＥ、Ｔｒａｎｓａｒｔｅｒｉａｌ ｃｈｅｍｏｅｍｂｏｌｉｚａｔｉｏｎ）であり、癌組織に繋がる動脈に抗癌剤を注入し、塞栓物質を利用して癌組織に栄養供給を遮断して癌を治療する方法であってもよい。

また他の例として、本発明は、前記エマルジョン組成物を含む、癌の予防または治療用医薬組成物に関するものである。前記癌は血管形成依存的なものを含み、好ましくは肝癌、卵巣癌、乳癌および非小細胞肺癌からなる群より選択された１以上であり、より好ましくは肝癌である。肝門脈の内径は５０乃至１００μｍであり、肝門脈末端の内径は１５乃至５０μｍであり、肝類洞は５乃至８μｍであり、末端毛細管後細静脈は２５μｍ以下であり、肝動脈は３５乃至４５μｍである。本発明の組成物は、特に液滴の大きさの特性のため、肝動脈のような内径の血管に対して選択性を有することができ、肝類洞のような非常に狭い血管に入ることは難しい。

本発明の医薬組成物は、エマルジョン製造後０乃至２時間、好ましくは０乃至１時間内に投与されることを特徴とし、従来の化学塞栓術に使用される組成に比べて長時間の間に高分子ナノ粒子内抗癌剤の移動が低く維持されることによって安定性に優れている。

前記医薬組成物の投与量は、患者の年齢、性別、体重、症状の重症度により医師が判断して調節することができ、例えば少なくとも３ヶ月ごとに反復施術が可能である。肝動脈のように固形癌に血液を供給する動脈を通じて例えば１回に５乃至１５ｍｌずつ投与することができる。

また他の例として、本発明は、前記エマルジョン組成物を用いて動物、好ましくは人間を除いた動物に化学塞栓術を行う方法を含む。前記エマルジョン組成物に関する事項は、エマルジョン組成物の使用方法に適用可能である。

また他の例として、本発明は、活性成分として水溶性抗癌剤、水不溶性抗癌剤またはこれらの組み合わせ、および親水性（Ａ）ブロックおよび疎水性（Ｂ）ブロックを含む両親媒性ブロック共重合体を含むナノ粒子を製造する段階；高分子ナノ粒子を水溶性造影剤に溶解する段階；および水溶性造影剤に溶解された高分子ナノ粒子溶液を水不溶性造影剤に分散させてエマルジョンを製造する段階を含む、化学塞栓用エマルジョン組成物製造方法を提供する。

前記エマルジョン組成物に関する事項はエマルジョン組成物製造方法に適用可能である。

前記ナノ粒子製造段階で、薬物および生分解性高分子を有機溶媒に溶解した後、これを乾燥してナノ粒子を製造することができる。製造されたナノ粒子は、水溶性造影剤に溶解させ、前記ナノ粒子が水溶性造影剤に溶解された溶液が液滴になるように水不溶性造影剤に分散させてエマルジョン組成物を製造することができる。

前記有機溶媒は、メタノール、エタノール、メチレンクロライドおよびアセトニトリルからなる群より選択された１以上であってもよいが、これに限定されない。

前記ナノ粒子を製造する段階は具体的に、抗癌剤および両親媒性ブロック共重合体が溶解された有機溶媒を減圧および加温して溶媒を除去して均質なマトリックスになるようにした後、注射用精製水を加えて再び溶解する。以降、ポリ乳酸ナトリウム塩またはポリマンデル酸ナトリウム塩が使用された場合には、前記２価金属を加えてイオン結合をなすようにして固い粒子になるようにした後、濾過滅菌して凍結乾燥して製造することができる。

本発明による具体的な一実施例として、前記方法により製造された溶液は２５℃で５時間以上安定しており、３７℃で２時間以上安定していることができ、溶液中の薬物の濃度は１乃至４０ｍｇ／ｍｌであり、より好ましくは１０乃至３０ｍｇ／ｍｌである。

前記エマルジョンを製造する段階で、前記溶液を水不溶性造影剤に分散させる方法は３−ウェイストップコックを利用したポンプ法、超音波を利用する方法などを用いることができるが、これに限定されない。

本発明の一例は、活性成分として水溶性抗癌剤、水不溶性抗癌剤またはこれらの組み合わせ、および親水性（Ａ）ブロックおよび疎水性（Ｂ）ブロックを含む両親媒性ブロック共重合体を含む高分子ナノ粒子；水溶性造影剤；および、水不溶性造影剤を含む、化学塞栓用エマルジョン組成物を薬剤学的有効量でこれを必要とする対象に投与する段階を含む癌予防または治療方法を提供する。

本明細書で「対象」は、任意の人間または非人間動物を含む。用語「非人間動物」は非人間脊椎動物、例えば非人間霊長類、羊、犬、および齧歯類、例えばマウス、ラットおよびギニアピッグを含むが、これに制限されない。

本明細書で「抗癌剤」は、対象から癌退行を増進させる。他の実施様態で、治療上、有効量の薬物は癌を除去する地点まで癌退行を増進させる。「癌退行を増進させる」ことは、有効量の抗癌剤を単独で投与したり他の抗癌剤と調合して投与すれば、腫瘍成長または大きさが減少したり、腫瘍が壊死したり、少なくとも一つの疾患症状の重症度が減少したり、疾患症状がない期間の頻度および持続性が増加したり、または疾患の苦痛による損傷または障害が防止されるということを意味する。

本発明の方法は、血管形成依存的な癌に適用することができ、好ましくは肝癌、卵巣癌、乳癌および非小細胞肺癌からなる群より選択された１以上、より好ましくは肝癌に適用することができる。前記エマルジョン組成物は、動脈内に（ｉｎｔｒａ−ａｒｔｅｒｉａｌｌｙ）投与されてもよく、例えば、前記癌は肝癌であり、動脈内投与は肝動脈注入法または経動脈化学塞栓法（ｔｒａｎｓａｒｔｅｒｉａｌ ｃｈｅｍｏｅｍｂｏｌｉｚａｔｉｏｎ）であってもよい。

本発明のエマルジョン組成物は、抗癌剤を油中水型のエマルジョン形態で投与することができるため、水溶性抗癌剤だけでなく、水不溶性抗癌剤を化学塞栓用で用いることができ、狭い動脈血管より大きい動脈血管に対して選択性を有することができる。

本発明によるエマルジョン組成物は、両親媒性ブロック共重合体で製造されて生体適合性に優れ、薬物が２次にかけて徐々に放出されるため、抗腫瘍効果が持続的であり、全身毒性が低い。

パクリタキセル高分子ナノ粒子溶液を保管した後の薬物の沈澱量変化を示したものである。 パクリタキセル高分子ナノ粒子エマルジョンの薬物放出試験結果を示したものである。 パクリタキセル高分子ナノ粒子エマルジョンおよびドキソルビシンエマルジョン投与後の癌組織の大きさ変化を示したものである。 パクリタキセル高分子ナノ粒子エマルジョン、ドキソルビシンエマルジョンおよびパクリタキセル溶液投与後の生存腫瘍比率（ｖｉａｂｌｅ ｔｕｍｏｒ ｐｏｒｔｉｏｎ）結果を示したものである。 パクリタキセル高分子ナノ粒子エマルジョン、ドキソルビシンエマルジョンおよびパクリタキセル溶液でＴＡＣＥ実施した後のＡＳＴ変化量を示したものである。 パクリタキセル高分子ナノ粒子エマルジョン、ドキソルビシンエマルジョンおよびパクリタキセル溶液でＴＡＣＥ実施した後のＡＬＴ変化量を示したものである。

以下、本発明を実施例により詳細に説明する。ただし、下記の実施例は、本発明を例示するものに過ぎず、本発明が下記の実施例により限定されるのではない。

＜実施例１＞高分子ナノ粒子の製造
パクリタキセル４５０ｍｇ、ｍＰＥＧ−ポリ（Ｄ，Ｌ−ラクチド）７６００ｍｇ、ポリ乳酸ナトリウム塩１６４２ｍｇを称量して丸いフラスコに入れてジクロロメタン（Ｄｉｃｈｌｏｒｏｍｅｔｈａｎｅ）少量に完全に溶解した後、回転蒸発器を利用して４０℃の温度で溶媒を完全に除去した。ここに精製水を加えて完全に溶解して滅菌濾過し、薬物濃度が２０ｍｇ／ｍｌになるようにした後、凍結乾燥して高分子ナノ粒子を製造した。

＜実施例２＞ナノ粒子および水溶性造影剤の溶液製造および溶解度の確認
水溶性造影剤としてパミレイ２５０（Ｐａｍｉｒａｙ ２５０、商品名、ＤＯＮＧＫＯＯＫ製薬社製）に前記実施例１で製造したパクリタキセル高分子ナノ粒子を溶解してパクリタキセル濃度が２０ｍｇ／ｍｌになるようにした。製造された溶液を３７℃の温度で２００ＲＰＭで攪拌しながら時間経過による薬物の沈澱量を定量して薬物の溶解度変化を確認した。試験液は５００μｌずつ分注し、０、０．５、１、２、３、４および８時間後に試験液を濾過（Ｍｉｌｌｅｘ ＨＶ、ＰＶＤＦ、０．２２μｍ）して濾過液中のナノ粒子に含まれている薬物濃度をＨＰＬＣで測定した。ＨＰＬＣ測定条件を下表１に示した。

前記パクリタキセルナノ粒子溶液の３７℃の温度保管後の薬物沈澱量変化を図１に示し、調製後３７℃の温度で２時間まで薬物の溶解度は約２０ｍｇ／ｍｌに維持されたことを確認した。

＜実施例３＞油中水型（Ｗ／Ｏ）エマルジョンの製造および安定性の評価
前記実施例２の溶液と水不溶性造影剤としてリピオドール（商品名）を体積比が１：４になるようにそれぞれ注射器に満たした後、３−ウェイストップコックを利用して５０回以上ポンピングしてエマルジョンを製造した。
前記製造されたエマルジョンの安定性を評価するために２５℃で時間により光学顕微鏡で観察して液滴の大きさ変化を観察した。その結果、製造直後１０乃至３０μｍの大きさで均質な液滴が形成されることを確認することができた。

また、前記製造されたエマルジョンで連続相として水不溶性造影剤であるリピオドール層 に移動するパクリタキセルの量を確認するために５００μｌずつ分注して２００ｒｐｍで攪拌しながら３７℃の温度で保管１時間経過後にウルトラフィルトレーション（分子量ｃｕｔ ｏｆｆ：１００ｋＤａ）してリピオドール層内薬物の量を前記表１の分析条件でＨＰＬＣ分析した。

その結果を図２に示しており、製造直後および１時間経過後のリピオドール層に移行されたパクリタキセルは全体の１０％未満であることを確認した。

＜実施例４＞肝癌動物での化学塞栓術
４．１ 動物モデルの製作
Ｓｐｒａｇｕｅ Ｄａｗｌｅｙ ｒａｔを開腹して肝左葉を暴露させた後、１ｘ１０^７個のＮ１−Ｓ１ ｒａｔ ｈｅｐａｔｏｍａ ｔｕｍｏｒ ｃｅｌｌ（ソウル大学病院）を接種して肝癌動物モデルを製作した。１２日後にＭＲＩを施行して腫瘍の形成の有無を確認し、腫瘍の大きさを測定した。

４．２ 化学塞栓術
前記実施例４．１で製造されたラットの頸動脈を剥離し、糸で縛って止血を予防した後、２４Ｇ ｍｅｄｉｃｕｔを利用して頸動脈を穿刺した。以降、微細ガイドワイヤー（ｍｉｃｒｏｇｕｉｄｅｗｉｒｅ）と微細カテーテル（ｍｉｃｒｏｃａｔｈｅｔｅｒ）を順次に挿入した。蛍光透視法（ｆｌｕｏｒｏｓｃｏｐｙ）誘導下に腹部大動脈血管照影術を施行した後、肝動脈に前記実施例３のエマルジョンを投与し、対照薬としてドキソルビシンを水性造影剤でパミレイ２５０（商品名）に２０ｍｇ／ｍｌの濃度に溶解し、これをリピオドールと１：４（パミレイ：リピオドール）の体積比に混合した液と、パクリタキセルを水不溶性造影剤としてリピオドール（商品名）に溶解したものを同一容量投与した。以降、コンピュータ断層撮影と磁気共鳴画像でリピオドールが腫瘍内部に沈着したことを確認し、モデルラットの頸動脈を通じてカテーテルを挿入した後に化学塞栓術を施行した。

４．３ 癌組織の大きさ測定
実施例４．２の塞栓術実施１週、２週および３週以降に磁気共鳴（ｍａｇｎｅｔｉｃ ｒｅｓｏｎａｎｃｅ）を利用して癌組織の大きさ変化を測定し、その結果を図３に示した。図３に示したように、パクリタキセル高分子ナノ粒子を水性造影剤および油性造影剤を利用したエマルジョンで投与する場合、ドキソルビシンエマルジョンに比べて癌組織の大きさが増加しないことを確認した。

４．４ 生存腫瘍比率の測定
実施例２で製造されたパクリタキセル高分子ナノ粒子エマルジョンおよび比較例としてドキソルビシンエマルジョンおよびパクリタキセル溶液でＴＡＣＥ実施後７日にバイオプシーを実施して正常肝潮職と癌組織を分離した。分離された組織をヘマトキシリンおよびエオシン染色して生存腫瘍比率を確認してその結果を図４に示した。

図４に示したように、パクリタキセル高分子ナノ粒子エマルジョン投与群は、水不溶性抗癌剤を用いたにも拘わらず、水溶性抗癌剤であるドキソルビシンエマルジョン対照群と生存腫瘍比率が類似し、パクリタキセル溶液を投与した対照群と比較する場合、腫瘍生存比率が低いことを確認した。

４．５ ＡＳＴおよびＡＬＴの測定
肝毒性の有無を確認するためにパクリタキセル高分子ナノ粒子エマルジョン、ドキソルビシンエマルジョンおよびパクリタキセル溶液にＴＡＣＥ実施前、実施後１日、３、７日に採血してＡＳＴおよびＡＬＴを測定した。

測定結果を図５および図６に示しており、すべての試験群でＴＡＣＥ実施１日目にＡＳＴおよびＡＬＴが大きく上昇したが、３日目にはほぼ完全に回復したことを確認した。特にパクリタキセルナノ粒子エマルジョン剤形投与時、パクリタキセルリピオドール溶液投与時に比べて投与１日目にＡＳＴおよびＡＬＴ増加が比較的に小さいことを確認した。

Claims (13)

1. 活性成分として水溶性抗癌剤、水不溶性抗癌剤またはこれらの組み合わせ、および親水性（Ａ）ブロックおよび疎水性（Ｂ）ブロックを含む両親媒性ブロック共重合体を含む高分子ナノ粒子；
   水溶性造影剤；および、
   水不溶性造影剤を含む、化学塞栓用エマルジョン組成物であって、
   前記水溶性抗癌剤は、ドキソルビシン、イダルビシン、エピルビシン、マイトマイシンＣおよびイリノテカンからなる群より選択された１以上であるか、前記水不溶性抗癌剤は、パクリタキセルおよびドセタキセルからなる群より選択された１以上のものであり、
   前記親水性（Ａ）ブロックは、ポリアルキレングリコール、ポリビニルアルコール、ポリビニルピロリドン、ポリアクリールアミド、およびその誘導体から構成された群より選択された１種以上のものであり、前記疎水性（Ｂ）ブロックは、ポリエステル、ポリアンハイドライド、ポリアミノ酸、ポリオルトエステル、およびポリフォスファゼンから構成された群より選択される１種以上のものであり、
   前記水溶性造影剤は、イオパミドール（ｉｏｐａｍｉｄｏｌ）であり、前記水不溶性造影剤は、ケシの実由来のヨード化油、大豆由来のヨード化油およびエチオドール（ｅｔｈｉｏｄｏｌ）からなる群より選択された１以上のものである、化学塞栓用エマルジョン組成物。
2. 前記水不溶性抗癌剤は、パクリタキセルである、請求項１に記載の化学塞栓用エマルジョン組成物。
3. 前記親水性（Ａ）ブロックは、モノメトキシポリエチレングリコール、モノアセトキシポリエチレングリコール、ポリエチレングリコール、ポリエチレンとプロピレングリコールの共重合体、およびポリビニルピロリドンから構成された群より選択された１種以上のものであり、
   前記疎水性（Ｂ）ブロックは、ポリラクチド、ポリグリコライド、ポリカプロラクトン、ポリジオキサン−２−オン、ポリラクチドとグリコライドの共重合体、ポリラクチドとポリジオキサン−２−オンの共重合体、ポリラクチドとポリカプロラクトンの共重合体およびポリグリコライドとポリカプロラクトンの共重合体から構成された群より選択される１種以上のものである、請求項１に記載の化学塞栓用エマルジョン組成物。
4. 前記親水性（Ａ）ブロックまたは疎水性（Ｂ）ブロックの数平均分子量が５００乃至５０，０００Ｄａであるものである、請求項１に記載の化学塞栓用エマルジョン組成物。
5. 前記親水性（Ａ）ブロックと疎水性（Ｂ）ブロックの重量比が２：８乃至８：２であるものである、請求項１に記載の化学塞栓用エマルジョン組成物。
6. 前記高分子ナノ粒子がカルボン酸末端基を含有するポリ乳酸誘導体を追加的に含むものである、請求項１に記載の化学塞栓用エマルジョン組成物。
7. 前記カルボン酸末端基を含有するポリ乳酸誘導体が化学式１乃至６の化合物からなる群より選択される１以上であるものである、請求項６に記載の化学塞栓用エマルジョン組成物：
   

   

   前記化学式１で、
   Ａは−ＣＯＯ−ＣＨＺ−であり；
   Ｂは−ＣＯＯ−ＣＨＹ−、−ＣＯＯ−ＣＨ_２ＣＨ_２ＣＨ_２ＣＨ_２ＣＨ_２−または−ＣＯＯ−ＣＨ_２ＣＨ_２ＯＣＨ_２であり；
   Ｒは水素原子、アセチル、ベンゾイル、テカノイル、パルミトイル、メチル、またはエチル基であり；
   ＺとＹは、それぞれ水素原子、メチルまたはフェニル基であり；
   ＭはＮａ、Ｋ、またはＬｉであり；ｎは１乃至３０の整数であり；ｍは０乃至２０の整数である。
   

   

   前記化学式２で、
   Ｘはメチル基であり；
   Ｙ’は水素原子またはフェニル基であり；
   ｐは０乃至２５の整数であり、ｑは０乃至２５の整数であって、ただし、ｐ＋ｑは５乃至２５の整数であり；
   Ｒは水素原子、アセチル、ベンゾイル、テカノイル、パルミトイル、メチルまたはエチル基であり；
   ＭはＮａ、Ｋ、またはＬｉであり；
   Ｚは水素原子、メチルまたはフェニル基である。
   

   

   前記化学式３で、
   Ｗ−Ｍ’は
   

   

   または
   

   

   であり；
   ＰＡＤはＤ，Ｌ−ポリ乳酸、Ｄ−ポリ乳酸、ポリマンデル酸、Ｄ，Ｌ−乳酸とグリコール酸の共重合体、Ｄ，Ｌ−乳酸とマンデル酸の共重合体、Ｄ，Ｌ−乳酸とカプロラクトンの共重合体およびＤ，Ｌ−乳酸と１，４−ジオキサン−２−オンの共重合体から構成されたグループより選択されるものであり；
   Ｒは水素原子、アセチル、ベンゾイル、テカノイル、パルミトイル、メチルまたはエチル基であり；
   Ｍは独立にＮａ、Ｋ、またはＬｉである。
   

   

   前記化学式４で、
   Ｓは
   

   

   であり；Ｌは−ＮＲ１−または−０−であり、ここでＲ１は水素原子またはＣ_１−１０アルキルであり；ＱはＣＨ_３、ＣＨ_２ＣＨ_３、ＣＨ_２ＣＨ_２ＣＨ_３、ＣＨ_２ＣＨ_２ＣＨ_２ＣＨ_３、またはＣＨ_２Ｃ_６Ｈ_５であり；ａは０乃至４の整数であり；ｂは１乃至１０の整数であり；ＭはＮａ、Ｋ、またはＬｉであり；
   ＰＡＤはＤ，Ｌ−ポリ乳酸、Ｄ−ポリ乳酸、ポリマンデル酸、Ｄ，Ｌ−乳酸とグリコール酸の共重合体、Ｄ，Ｌ−乳酸とマンデル酸の共重合体、Ｄ，Ｌ−乳酸とカプロラクトンの共重合体、およびＤ，Ｌ−乳酸と１，４−ジオキサン−２−オンの共重合体からなる群より選択されるものである。
   

   

   前記化学式５で、Ｒ’は−ＰＡＤ−Ｏ−Ｃ（Ｏ）−ＣＨ_２ＣＨ_２−Ｃ（Ｏ）−ＯＭであり、
   ここでＰＡＤはＤ，Ｌ−ポリ乳酸、Ｄ−ポリ乳酸、ポリマンデル酸、Ｄ，Ｌ−乳酸とグリコール酸の共重合体、Ｄ，Ｌ−乳酸とマンデル酸の共重合体、Ｄ，Ｌ−乳酸とカプロラクトンの共重合体、Ｄ，Ｌ−乳酸と１，４−ジオキサン−２−オンの共重合体から構成されたグループより選択されるものであり、ＭはＮａ、Ｋ、またはＬｉであり；ａは１乃至４の整数である。
   

   

   前記化学式６で、
   ＸおよびＸ’は独立に水素、炭素数が１〜１０であるアルキルまたは炭素数が６〜２０であるアリールであり；
   ＹおよびＺは独立にＮａ、Ｋ、またはＬｉであり；
   ｍおよびｎは独立に０乃至９５の整数であって、５＜ｍ＋ｎ＜１００であり；
   ａおよびｂは独立に１乃至６の整数であり；
   Ｒは−（ＣＨ_２）ｋ−、炭素数が２乃至１０である２価アルケニル（ｄｉｖａｌｅｎｔ ａｌｋｅｎｙｌ）、炭素数が６乃至２０である２価アリール（ｄｉｖａｌｅｎｔ ａｒｙｌ）またはこれらの組み合わせであり、ここでｋは０乃至１０の整数である。
8. 前記ポリ乳酸誘導体のカルボキシ末端基が２価または３価金属イオンで固定されたものである、請求項７に記載の化学塞栓用エマルジョン組成物。
9. 前記２価または３価金属イオンが、カルシウム（Ｃａ^２＋）、マグネシウム（Ｍｇ^２＋）、バリウム（Ｂａ^２＋）、クロム（Ｃｒ^３＋）、鉄（Ｆｅ^３＋）、マンガン（Ｍｎ^２＋）、ニッケル（Ｎｉ^２＋）、銅（Ｃｕ^２＋）、亜鉛（Ｚｎ^２＋）およびアルミニウム（Ａｌ^３＋）からなるグループより選択されるものである、請求項８に記載の化学塞栓用エマルジョン組成物。
10. 前記水溶性造影剤または水不溶性造影剤の粘度は、それぞれ３７℃で１０乃至４０ｍＰａであるものである、請求項１に記載の化学塞栓用エマルジョン組成物。
11. 前記全体エマルジョン組成物基準に抗癌剤の濃度が１乃至４０ｍｇ／ｍｌになるように高分子ナノ粒子が水溶性造影剤中に溶解されているものである、請求項１に記載の化学塞栓用エマルジョン組成物。
12. 前記高分子ナノ粒子が溶解されている水溶性造影剤と水不溶性造影剤の体積比が１：２乃至１：１０であるものである、請求項１１に記載の化学塞栓用エマルジョン組成物。
13. 前記エマルジョン組成物の粘度が３７℃で２０乃至５０ｍＰａであるものである、請求項１に記載の化学塞栓用エマルジョン組成物。

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