JP6973714B2 - ニーマン・ピック病c型の診断を補助する方法、ニーマン・ピック病c型に対する治療効果の判定を補助する方法並びにニーマン・ピック病c型治療薬のスクリーニング方法 - Google Patents
ニーマン・ピック病c型の診断を補助する方法、ニーマン・ピック病c型に対する治療効果の判定を補助する方法並びにニーマン・ピック病c型治療薬のスクリーニング方法 Download PDFInfo
- Publication number
- JP6973714B2 JP6973714B2 JP2017114596A JP2017114596A JP6973714B2 JP 6973714 B2 JP6973714 B2 JP 6973714B2 JP 2017114596 A JP2017114596 A JP 2017114596A JP 2017114596 A JP2017114596 A JP 2017114596A JP 6973714 B2 JP6973714 B2 JP 6973714B2
- Authority
- JP
- Japan
- Prior art keywords
- glcnac
- man
- hexnac
- hex
- type
- Prior art date
- Legal status (The legal status is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the status listed.)
- Active
Links
Images
Landscapes
- Investigating Or Analysing Biological Materials (AREA)
- Measuring Or Testing Involving Enzymes Or Micro-Organisms (AREA)
Description
対象由来の試料中の
グリコサミノグリカンである、
CS−2S4S、
HS−0S、
HS−NS、
HS−2S6S、
遊離オリゴ糖である、
(Man)3(GlcNAc)1、
(Man)4(GlcNAc)1、
(Man)5(GlcNAc)1、
(Man)6(GlcNAc)1、
(Man)7(GlcNAc)1、
(Man)8(GlcNAc)1、
(Man)1(GlcNAc)2、
(Man)4(GlcNAc)2、
(Man)5(GlcNAc)2、
(Man)6(GlcNAc)2、
高マンノース型Gn1型の総量、
パウチマンノース型Gn2型の総量、
高マンノース型Gn2型の総量、
複合型/ハイブリッド型の総量、
(Gal)1(Man)2(GlcNAc)3、
(NeuAc)1(Gal)1(Man)2(GlcNAc)2、
(Fuc)1(Gal)1(Man)3(GlcNAc)2、
(Gal)1(Man)3(GlcNAc)3及び
(Gal)2(Man)3(GlcNAc)4
からなる群より少なくとも1つ選択される糖鎖の発現量を生体外で測定する工程と、
ニーマン・ピック病C型に罹患していない対象由来の試料と比較して、少なくとも1つの前記グリコサミノグリカンの発現量が減少していること、または少なくとも1つの前記遊離オリゴ糖の発現量が増加していることを決定する工程と、を含む。
ニーマン・ピック病C型に罹患している対象由来の試料中の
グリコサミノグリカンである、
CS−2S4S、
HS−0S、
HS−NS、
HS−2S6S、
遊離オリゴ糖である、
(Man)3(GlcNAc)1、
(Man)4(GlcNAc)1、
(Man)5(GlcNAc)1、
(Man)6(GlcNAc)1、
(Man)7(GlcNAc)1、
(Man)8(GlcNAc)1、
(Man)1(GlcNAc)2、
(Man)4(GlcNAc)2、
(Man)5(GlcNAc)2、
(Man)6(GlcNAc)2、
高マンノース型Gn1型の総量、
パウチマンノース型Gn2型の総量、
高マンノース型Gn2型の総量、
複合型/ハイブリッド型の総量、
(Gal)1(Man)2(GlcNAc)3、
(NeuAc)1(Gal)1(Man)2(GlcNAc)2、
(Fuc)1(Gal)1(Man)3(GlcNAc)2、
(Gal)1(Man)3(GlcNAc)3及び
(Gal)2(Man)3(GlcNAc)4
からなる群より少なくとも1つ選択される糖鎖の発現量を、ニーマン・ピック病C型に対する治療後に生体外で測定する工程と、
治療前と比較して、少なくとも1つの前記グリコサミノグリカンの発現量が増加していること、もしくは少なくとも1つの前記遊離オリゴ糖の発現量が減少していること、または、ニーマン・ピック病C型に罹患していない対象由来の試料と比較して、少なくとも1つの前記グリコサミノグリカンの発現量、もしくは少なくとも1つの前記遊離オリゴ糖の発現量が同等であることを決定する工程と、を含む、
ことを特徴とする。
(a)ニーマン・ピック病C型に罹患している対象由来の試料中の
グリコサミノグリカンである、
CS−2S4S、
HS−0S、
HS−NS、
HS−2S6S、
遊離オリゴ糖である、
(Man)3(GlcNAc)1、
(Man)4(GlcNAc)1、
(Man)5(GlcNAc)1、
(Man)6(GlcNAc)1、
(Man)7(GlcNAc)1、
(Man)8(GlcNAc)1、
(Man)1(GlcNAc)2、
(Man)4(GlcNAc)2、
(Man)5(GlcNAc)2、
(Man)6(GlcNAc)2、
高マンノース型Gn1型の総量、
パウチマンノース型Gn2型の総量、
高マンノース型Gn2型の総量、
複合型/ハイブリッド型の総量、
(Gal)1(Man)2(GlcNAc)3、
(NeuAc)1(Gal)1(Man)2(GlcNAc)2、
(Fuc)1(Gal)1(Man)3(GlcNAc)2、
(Gal)1(Man)3(GlcNAc)3及び
(Gal)2(Man)3(GlcNAc)4
からなる群より少なくとも1つ選択される糖鎖の発現量を、候補薬剤存在下及び非存在下で、生体外で測定する工程と、
(b)前記候補薬剤存在下において、候補薬剤非存在下と比較して、少なくとも1つの前記グリコサミノグリカンの発現量が増加していること、または少なくとも1つの前記遊離オリゴ糖の発現量が減少していることを決定する工程と、
を含む。
グリコサミノグリカンである、
CS−2S4S、
HS−0S、
HS−NS、
HS−2S6S、
遊離オリゴ糖である、
(Hex)3(HexNAc)1、
(Hex)4(HexNAc)1、
(Hex)5(HexNAc)1、
(Hex)6(HexNAc)1、
(Hex)7(HexNAc)1、
(Hex)8(HexNAc)1、
(Hex)1(HexNAc)2、
(Hex)4(HexNAc)2、
(Hex)5(HexNAc)2、
(Hex)6(HexNAc)2、
高マンノース型Gn1型の総量、
パウチマンノース型Gn2型の総量、
高マンノース型Gn2型の総量、
複合型/ハイブリッド型の総量、
(Hex)3(HexNAc)3、
(Hex)3(HexNAc)2(NeuAc)1、
(Hex)4(HexNAc)2(Fuc)1、
(Hex)4(HexNAc)3、
(Hex)5(HexNAc)4。
(1)ゴーシェ(Gaucher)病
(2)ニーマン・ピック(Niemann−Pick)病A型、B型
(3)ニーマン・ピック病C型
(4)GM1ガングリオシドーシス
(5)GM2ガングリオシドーシス(テイ・サックス(Tay−Sachs)病、サンドホフ(Sandhoff)病、AB型)
(6)クラッベ(Krabbe)病
(7)異染性白質ジストロフィー
(8)マルチプルサルファターゼ欠損症
(9)ファーバー(Farber)病(ハーラー/シェイエ(Hurler/Scheie)症候群)
(10)ムコ多糖症I型
(11)ムコ多糖症II型(ハンター(Hunter)症候群)
(12)ムコ多糖症III型(サンフィリポ(Sanfilippo)症候群)
(13)ムコ多糖症IV型(モルキオ(Morquio)症候群)
(14)ムコ多糖症VI型(マロトー・ラミー(Maroteaux−Lamy)症候群)
(15)ムコ多糖症VII型(スライ(Sly)病)
(16)ムコ多糖症IX型(ヒアルロニダーゼ欠損症)
(17)シアリドーシス
(18)ガラクトシアリドーシス
(19)ムコリピドーシスII型、III型
(20)α−マンノシドーシス
(21)β−マンノシドーシス
(22)フコシドーシス
(23)アスパルチルグルコサミン尿症
(24)シンドラー(Schindler)病/神崎病
(25)ポンペ(Pompe)病
(26)酸性リパーゼ欠損症
(27)ダノン(Danon)病
(28)遊離シアル酸蓄積症
(29)セロイドリポフスチノーシス
(30)ファブリー(Fabry)病
(31)シスチン症
ライソゾーム病に罹患している対象由来の試料中の
グリコサミノグリカンである、
CS−2S4S、
HS−0S、
HS−NS、
HS−2S6S、
遊離オリゴ糖である、
(Hex)3(HexNAc)1、
(Hex)4(HexNAc)1、
(Hex)5(HexNAc)1、
(Hex)6(HexNAc)1、
(Hex)7(HexNAc)1、
(Hex)8(HexNAc)1、
(Hex)1(HexNAc)2、
(Hex)4(HexNAc)2、
(Hex)5(HexNAc)2、
(Hex)6(HexNAc)2、
高マンノース型Gn1型の総量、
パウチマンノース型Gn2型の総量、
高マンノース型Gn2型の総量、
複合型/ハイブリッド型の総量、
(Hex)3(HexNAc)3、
(Hex)3(HexNAc)2(NeuAc)1、
(Hex)4(HexNAc)2(Fuc)1、
(Hex)4(HexNAc)3及び
(Hex)5(HexNAc)4
からなる群より少なくとも1つ選択される糖鎖の発現量を、ライソゾーム病に対する治療後に測定する工程を含む。
(a)ライソゾーム病に罹患している対象由来の試料中の
グリコサミノグリカンである、
CS−2S4S、
HS−0S、
HS−NS、
HS−2S6S、
遊離オリゴ糖である、
(Hex)3(HexNAc)1、
(Hex)4(HexNAc)1、
(Hex)5(HexNAc)1、
(Hex)6(HexNAc)1、
(Hex)7(HexNAc)1、
(Hex)8(HexNAc)1、
(Hex)1(HexNAc)2、
(Hex)4(HexNAc)2、
(Hex)5(HexNAc)2、
(Hex)6(HexNAc)2、
高マンノース型Gn1型の総量、
パウチマンノース型Gn2型の総量、
高マンノース型Gn2型の総量、
複合型/ハイブリッド型の総量、
(Hex)3(HexNAc)3、
(Hex)3(HexNAc)2(NeuAc)1、
(Hex)4(HexNAc)2(Fuc)1、
(Hex)4(HexNAc)3及び
(Hex)5(HexNAc)4
からなる群より少なくとも1つ選択される糖鎖の発現量を、候補薬剤存在下及び非存在下で測定する工程と、
(b)前記候補薬剤存在下及び非存在下での前記糖鎖の発現量を比較する工程と、
を含む。
GSL糖鎖である、
(Hex)2、
(Hex)3(HexNAc)1、
(Hex)2(HexNAc)2、
(Hex)2(HexNAc)1(Neu5Ac)1、
(Hex)4(HexNAc)1、
(Hex)3(HexNAc)2、
(Hex)3(HexNAc)1(Neu5Ac)1、
(Hex)4(HexNAc)2、
(Hex)5(HexNAc)2、
(Hex)3(HexNAc)1(Neu5Ac)2、
N−グリカンである、
Man3F、
Man4、
Man4F、
Man5F、
Man5、
Man6、
Man7、
Man8、
Man9、
(Hex)1(HexNAc)2(Fuc)1+(Man)3(GlcNAc)2、
(Hex)2(HexNAc)2+(Man)3(GlcNAc)2、
(HexNAc)3(Fuc)1+(Man)3(GlcNAc)2、
(Hex)2(HexNAc)2(Fuc)1+(Man)3(GlcNAc)2、
(Hex)3(HexNAc)3(Fuc)1+(Man)3(GlcNAc)2、
(Hex)4(HexNAc)4(Fuc)1+(Man)3(GlcNAc)2、
(Hex)1(HexNAc)2(Fuc)1(NeuAc)1+(Man)3(GlcNAc)2、
(Hex)2(HexNAc)2(Fuc)1(NeuAc)1+(Man)3(GlcNAc)2、
(Hex)3(HexNAc)3(Fuc)1(NeuAc)1+(Man)3(GlcNAc)2、
(Hex)4(HexNAc)4(Fuc)1(NeuAc)2+(Man)3(GlcNAc)2、
高マンノース型糖鎖の総量、
ハイブリッド型糖鎖の総量、
複合型糖鎖の総量、
フコシル化とシアリル化の両者を受けた複合型糖鎖の総量、
O−グリカンである、
O−グリカンの総量、
(HexNAc)1(Neu5Ac)1、
(Hex)1(HexNAc)1(Neu5Ac)1、
グリコサミノグリカンである、
CS−2S4S、
HS−0S、
HS−NS、
HS−2S6S、
遊離オリゴ糖である、
(Hex)3(HexNAc)1、
(Hex)4(HexNAc)1、
(Hex)5(HexNAc)1、
(Hex)6(HexNAc)1、
(Hex)7(HexNAc)1、
(Hex)8(HexNAc)1、
(Hex)1(HexNAc)2、
(Hex)4(HexNAc)2、
(Hex)5(HexNAc)2、
(Hex)6(HexNAc)2、
高マンノース型Gn1型の総量、
パウチマンノース型Gn2型の総量、
高マンノース型Gn2型の総量、
複合型/ハイブリッド型の総量、
(Hex)3(HexNAc)3、
(Hex)3(HexNAc)2(NeuAc)1、
(Hex)4(HexNAc)2(Fuc)1、
(Hex)4(HexNAc)3及び
(Hex)5(HexNAc)4。
(Hex)2、
(Hex)3(HexNAc)1、
(Hex)2(HexNAc)2、
(Hex)2(HexNAc)1(Neu5Ac)1、
(Hex)4(HexNAc)1、
(Hex)3(HexNAc)2、
(Hex)3(HexNAc)1(Neu5Ac)1、
(Hex)4(HexNAc)2、
(Hex)5(HexNAc)2、
(Hex)3(HexNAc)1(Neu5Ac)2
については、被験対象由来の試料中の上記糖鎖の発現量が、ライソゾーム病に罹患していない対象由来の試料中の上記糖鎖の発現量に比して増加している場合、該被験対象はライソゾーム病に罹患していると診断することができる。
Man3F、
Man4、
Man4F、
Man5F、
Man5、
Man6、
Man7、
Man8、
Man9、
(Hex)2(HexNAc)2+(Man)3(GlcNAc)2、
(Hex)2(HexNAc)2(Fuc)1+(Man)3(GlcNAc)2、
(Hex)3(HexNAc)3(Fuc)1+(Man)3(GlcNAc)2、
(Hex)4(HexNAc)4(Fuc)1+(Man)3(GlcNAc)2、
(Hex)1(HexNAc)2(Fuc)1(NeuAc)1+(Man)3(GlcNAc)2、
(Hex)2(HexNAc)2(Fuc)1(NeuAc)1+(Man)3(GlcNAc)2、
(Hex)3(HexNAc)3(Fuc)1(NeuAc)1+(Man)3(GlcNAc)2、
(Hex)4(HexNAc)4(Fuc)1(NeuAc)2+(Man)3(GlcNAc)2、
高マンノース型糖鎖の総量、
ハイブリッド型糖鎖の総量、
複合型糖鎖の総量、
フコシル化とシアリル化の両者を受けた複合型糖鎖の総量
については、被験対象由来の試料中の上記糖鎖の発現量が、ライソゾーム病に罹患していない対象由来の試料中の上記糖鎖の発現量に比して増加している場合、該被験対象はライソゾーム病に罹患していると診断することができ、
(Hex)1(HexNAc)2(Fuc)1+(Man)3(GlcNAc)2、
(HexNAc)3(Fuc)1+(Man)3(GlcNAc)2
については、被験対象由来の試料中の上記糖鎖の発現量が、ライソゾーム病に罹患していない対象由来の試料中の上記糖鎖の発現量に比して減少している場合、該被験対象はライソゾーム病に罹患していると診断することができる。
CS−2S4S、
HS−0S、
HS−NS、
HS−2S6S
については、被験対象由来の試料中の上記糖鎖の発現量が、ライソゾーム病に罹患していない対象由来の試料中の上記糖鎖の発現量に比して減少している場合、該被験対象はライソゾーム病に罹患していると診断することができる。
(Hex)3(HexNAc)1、
(Hex)4(HexNAc)1、
(Hex)5(HexNAc)1、
(Hex)6(HexNAc)1、
(Hex)7(HexNAc)1、
(Hex)8(HexNAc)1、
(Hex)1(HexNAc)2、
(Hex)4(HexNAc)2、
(Hex)5(HexNAc)2、
(Hex)6(HexNAc)2、
高マンノース型Gn1型の総量、
パウチマンノース型Gn2型の総量、
高マンノース型Gn2型の総量、
複合型/ハイブリッド型の総量、
(Hex)3(HexNAc)3、
(Hex)3(HexNAc)2(NeuAc)1、
(Hex)4(HexNAc)2(Fuc)1、
(Hex)4(HexNAc)3及び
(Hex)5(HexNAc)4
については、被験対象由来の試料中の上記糖鎖の発現量が、ライソゾーム病に罹患していない対象由来の試料中の上記糖鎖の発現量に比して増加している場合、該被験対象はライソゾーム病に罹患していると診断することができる。
以下3種類の細胞を用意した。
・WT(−):野生型Chinese Hamster Ovary cells(CHO)細胞(以下、「野生型CHO細胞」と称する)
・NPC(−):ニーマン・ピック病C型の原因遺伝子であるNpc1をノックアウトさせたCHO細胞(以下、「Npc1 KO CHO細胞」と称する)
・NPC(+):Npc1 KO CHO細胞にニーマン・ピック病C型の治療薬である2−ヒドロキシプロピル−β−シクロデキストリン(HPBCD)(日本食品化工社)で処理した細胞
N−グリカン及びfOSの分析のために、糖タンパク質及びfOSを、Fujitani,N.;Furukawa,J.−i.;Araki,K.;Fujioka,T.;Takegawa,Y.;Piao,J.;Nishioka,T.;Tamura,T.; Nikaido,T.;Ito,M.;Nakamura,Y.;Shinohara,Y.Proc Natl Acad Sci USA.2013,110,2105−2110.に記載の方法で抽出した。2%ラウリル硫酸ナトリウムを含む100mM Tris−酢酸緩衝液(pH7.4)100μL中に約1×106細胞を懸濁し、超音波ホモジナイザー(タイテック社)を用いて均質化した。細胞タンパク質の還元的アミノ化を行い、4倍量の氷冷エタノールの存在下でタンパク質を沈殿させた。約2.5×105細胞タンパク質と等量の沈殿物を乾燥させ、100mM重炭酸アンモニウム中に溶解させ、トリプシンで消化した。2UのPNGase Fを添加することで、脱グリコシル化を行った。細胞fOSを含む上清を遠心エバポレーターを用いて脱水し、脱イオン水に溶解させた。サンプルを直接、グライコブロッティングに供した。
GSL及びGAGの抽出は、Kannan,R.;Tjiong,H.B.;Debuch,H.;Wiedemann,H.R.Unusual glycolipids in brain cortex of a visceral lipidosis(Niemann−Pick disease?).Hoppe Seylers Z.Physiol.Chem.1974,355,551−556.に記載の方法で行った。細胞ペレットにクロロホルム/メタノール(C/M)溶液(2/1、v/v)450μLを添加して脱脂質を行い、N−グリカン及び糖タンパク質で記載したように、室温で超音波処理を行った。その後、メタノール(150μL)を加えて、C/M=1/1(v/v)の溶媒組成物を作製し、サンプルを超音波処理した。その後、メタノール(300μL)を加え(C/M=1/2(v/v))、サンプルを再度、超音波処理した。得られた抽出物を10分間、20,000×gで遠心分離し、上清及びペレットを各々、GSL糖鎖及びGAGの分析に供した。GSL糖鎖の分析のために、粗製の細胞脂質を含む上清を遠心エバポレーターを用いて乾燥させた。粗製の細胞脂質を0.2%Triton X−100(シグマ−アルドリッチ社)を含む50mM酢酸ナトリウム緩衝液(pH5.5)50μLに懸濁させ、25mUのEGCaseIを添加して、GSLからインタクトなグリカンを離脱させた。GAGの分析のために、10mM CaCl2を含む50mM Tris−酢酸緩衝液(pH7.5)中のプロナーゼ100μgを添加することで、ペレットを37℃で非特異的なプロテアーゼ消化に一晩供した。GAG鎖に結合したペプチドを沈殿させるために、エタノール沈殿を糖タンパク質及びfOSの抽出で記載した方法で行った。エタノール沈殿のサンプルをヘパリナーゼ、ヘパリチナーゼ、ヒアルロニダーゼSD及びコンドロイチナーゼABCの各々5mUの混合物を用いて二糖GAGに消化した。サンプル及び酵素を5mM酢酸カルシウムを含む100mM 酢酸アンモニウム緩衝液(pH7.5)100μL中で37℃で一晩インキュベートした。消化されたサンプルを遠心分離し、上清を収集し、遠心エバポレーターを用いて乾燥させて、内部標準であるイソマルトトリオース(シグマ−アルドリッチ社)50pmolを含む脱イオン水25μL中に溶解させた。サンプルを直接、グライコブロッティングに供した。
タンパク質のペレットを、糖タンパク質及びfOSの抽出で記載された方法と同様に、約1×106細胞から調製した。エタノール沈殿させたタンパク質をO−グライコミクス分析に供した。タンパク質をアミコンウルトラ遠心式フィルターユニット(分子量カットオフ、3000Da)(ミリポア社)を用いて濃縮した。濃縮されたタンパク質を、Monowave300マイクロ波リアクターを用いたマイクロ波BEP反応に供した。BEP反応後、bis−PMPラベル化GN4を外部標準として加え、混合物を1.0M塩酸で中和した。クロロホルムを加えて、混合物を攪拌した。クロロホルム層を除き、水層のPMPラベル化グリカンを、Fujitani,N.;Furukawa,J.−i.;Araki,K.;Fujioka,T.;Takegawa,Y.;Piao,J.;Nishioka,T.;Tamura,T.;Nikaido,T.;Ito,M.;Nakamura,Y.;Shinohara,Y.Proc Natl Acad Sci USA.2013,110,2105−2110.に記載の方法で、グラファイトカーボンカラム及びイアトロビーズカラムを用いて精製した。
N−グリカン、fOS、GAG及びGSL糖鎖をグライコブロッティングに供した。グライコブロッティングは、Fujitani,N.;Furukawa,J.−i.;Araki,K.;Fujioka,T.;Takegawa,Y.;Piao,J.;Nishioka,T.;Tamura,T.;Nikaido,T.;Ito,M.;Nakamura,Y.;Shinohara,Y.Proc Natl Acad Sci USA.2013,110,2105−2110.及びFurukawa,J.;Shinohara,Y.;Kuramoto,H.;Miura,Y.;Shimaoka,H.;Kurogochi,M.;Nakano,M.;Nishimura,S.Comprehensive approach to structural and functional glycomics based on chemoselective glycoblotting and sequential tag conversion.Anal.Chem.2008,80,1094−1101.に記載の方法で行った。
精製されたN−グリカン、O−グリカン、fOS及びGSL糖鎖溶液に、2,5−ジヒドロキシ安息香酸(30%アセトニトリル中10mg/mL)を加え、Fujitani,N.;Furukawa,J.−i.;Araki,K.;Fujioka,T.;Takegawa,Y.;Piao,J.;Nishioka,T.;Tamura,T.;Nikaido,T.;Ito,M.;Nakamura,Y.;Shinohara,Y.Proc Natl Acad Sci USA.2013,110,2105−2110.に記載の方法でMALDI−TOF MS分析に供した。測定は、リフレクターを備えたUltraflex II TOF/TOFマススペクトロメーターを用いて行われ、付属のプロトコルに従ってFlexControl 3.0ソフトウェアパッケージ(ブルカーダルトニクスGmbH)により制御された。スペクトルを、加速電圧25kV、反射電圧26.3kV及びポジティブイオンモードでの16nsのpulsed ion extractionで、リフレクトロンモードにおいて得た。質量を、FlexAnalysis 3.0 ソフトウェアパッケージを用いてアノテートした。GlycoSuiteDB(http://glycosuitedb.expasy.org/glycosuite/glycodb)及びSphinGOMAP(http://www.sphingomap.org/)のオンラインデータベースをGSL糖鎖の構造決定に用いた。絶対定量を、各グリカン由来のMSシグナルの領域と10pmolの内部標準であるNeuAc2Gal2GlcNAc2+Man3GlcNAcl(A2GNl)(グライコブロッティングの前にサンプル溶液に加えられた)との間の比較分析により行った。フラグメントイオン分析に対するTOF/TOFモード測定値を得るために、プリーカーサイオンを8kVに加速し、イオンゲートにおいて選択した。プリーカーサのレーザーによる分解によって生成されたフラグメントイオンをさらに、LIFTセルにおいて19kVまで加速した。フラグメントイオン質量をイオンリフレクターによるイオン通過後に分析した。
(1.GSL糖鎖)
GSL糖鎖の解析結果を図1に示す。以下のGSL糖鎖については、WT(−)に比してNPC(−)で有意に発現が増加することが示された(図1(a)−(j))。したがって、以下のGSL糖鎖は、ニーマン・ピック病C型の疾患マーカー(診断マーカー)として有用であることが示唆された。
・(Hex)2:図1(a)
・(Hex)3(HexNAc)1:図1(b)
・(Hex)2(HexNAc)2:図1(c)
・(Hex)2(HexNAc)1(Neu5Ac)1:図1(d)
・(Hex)4(HexNAc)1:図1(e)
・(Hex)3(HexNAc)2:図1(f)
・(Hex)3(HexNAc)1(Neu5Ac)1:図1(g)
・(Hex)4(HexNAc)2:図1(h)
・(Hex)5(HexNAc)2:図1(i)
・(Hex)3(HexNAc)1(Neu5Ac)2:図1(j)
N−グリカンの解析結果を図2に示す。以下のN−グリカンについては、WT(−)に比してNPC(−)で有意に発現が増加することが示された(図2(a)−(i)、(k)、(m)−(s))。したがって、以下のN−グリカンは、ニーマン・ピック病C型の診断マーカーとして有用であることが示唆された。
・Man3F((Man)3(GlcNAc)2(Fuc)1):図2(a)
・Man4((Man)4(GlcNAc)2):図2(b)
・Man4F((Man)4(GlcNAc)2(Fuc)1):図2(c)
・Man5F((Man)5(GlcNAc)2(Fuc)1):図2(d)
・Man5((Man)5(GlcNAc)2):図2(e)
・Man6((Man)6(GlcNAc)2):図2(f)
・Man7((Man)7(GlcNAc)2):図2(g)
・Man8((Man)8(GlcNAc)2):図2(h)
・Man9((Man)9(GlcNAc)2):図2(i)
・(Hex)2(HexNAc)2+(Man)3(GlcNAc)2((Gal)2(GlcNAc)2+(Man)3(GlcNAc)2):図2(k)
・(Hex)2(HexNAc)2(Fuc)1+(Man)3(GlcNAc)2((Gal)2(GlcNAc)2(Fuc)1+(Man)3(GlcNAc)2):図2(m)
・(Hex)3(HexNAc)3(Fuc)1+(Man)3(GlcNAc)2((Gal)3(GlcNAc)3(Fuc)1+(Man)3(GlcNAc)2):図2(n)
・(Hex)4(HexNAc)4(Fuc)1+(Man)3(GlcNAc)2((Gal)4(GlcNAc)4(Fuc)1+(Man)3(GlcNAc)2):図2(o)
・(Hex)1(HexNAc)2(Fuc)1(NeuAc)1+(Man)3(GlcNAc)2((Gal)1(GlcNAc)2(Fuc)1(NeuAc)1+(Man)3(GlcNAc)2):図2(p)
・(Hex)2(HexNAc)2(Fuc)1(NeuAc)1+(Man)3(GlcNAc)2(GlcNAc)2((Gal)2(GlcNAc)2(Fuc)1(NeuAc)1+(Man)3(GlcNAc)2):図2(q)
・(Hex)3(HexNAc)3(Fuc)1(NeuAc)1+(Man)3(GlcNAc)2(GlcNAc)2((Gal)3(GlcNAc)3(Fuc)1(NeuAc)1+(Man)3(GlcNAc)2):図2(r)
・(Hex)4(HexNAc)4(Fuc)1(NeuAc)2+(Man)3(GlcNAc)2((Gal)4(GlcNAc)4(Fuc)1(NeuAc)2+(Man)3(GlcNAc)2):図2(s)
・(Hex)1(HexNAc)2(Fuc)1+(Man)3(GlcNAc)2((Gal)1(GlcNAc)2(Fuc)1+(Man)3(GlcNAc)2):図2(j)
・(HexNAc)3(Fuc)1+(Man)3(GlcNAc)2:図2(l)
・高マンノース型(HM):図3(a)
・ハイブリッド型(Hyb):図3(a)
・複合型(Com):図3(a)
・フコシル化とシアリル化の両者を受けた複合型(Com Fuc(+)Sia(+)):図3(f)
O−グリカンの解析結果を図4に示す。
グリコサミノグリカンの解析結果を図5に示す。以下については、WT(−)に比してNPC(−)で発現が減少し、HPBCD処理されたNPC(+)でNPC(−)に比して発現が増加することが示された(図5(a)、(b))。したがって、以下については、ニーマン・ピック病C型の診断マーカーとして有用であるとともに、ニーマン・ピック病C型に対する治療効果を判定するマーカーとしても有用であることが示唆された。
・CS−2S4S(2位と4位に硫酸修飾を受けたコンドロイチン硫酸構成2糖):図5(a)
・HS−0S(硫酸修飾を受けないヘパラン硫酸構成2糖):図5(b)
・HS−NS(N位に硫酸修飾を受けたヘパラン硫酸構成2糖):図5(b)
・HS−2S6S(2位と6位に硫酸修飾を受けたヘパラン硫酸構成2糖):図5(b)
fOSの解析結果を図6に示す。以下については、WT(−)に比してNPC(−)で発現が増加し、HPBCD処理されたNPC(+)でNPC(−)に比して発現が減少することが示された(図6(a)−(j))。したがって、以下については、ニーマン・ピック病C型の診断マーカーとして有用であるとともに、ニーマン・ピック病C型に対する治療効果を判定するマーカーとしても有用であることが示唆された。
・(Hex)3(HexNAc)1((Man)3(GlcNAc)1):図6(a)
・(Hex)4(HexNAc)1((Man)4(GlcNAc)1):図6(b)
・(Hex)5(HexNAc)1((Man)5(GlcNAc)1):図6(c)
・(Hex)6(HexNAc)1((Man)6(GlcNAc)1):図6(d)
・(Hex)7(HexNAc)1((Man)7(GlcNAc)1):図6(e)
・(Hex)8(HexNAc)1((Man)8(GlcNAc)1):図6(f)
・(Hex)1(HexNAc)2((Man)1(GlcNAc)2):図6(g)
・(Hex)4(HexNAc)2((Man)4(GlcNAc)2):図6(h)
・(Hex)5(HexNAc)2((Man)5(GlcNAc)2):図6(i)
・(Hex)6(HexNAc)2((Man)6(GlcNAc)2):図6(j)
・高マンノース型Gn1型の総量(HM−Gn1):図7(a)
・パウチマンノース型Gn2型の総量(PM−Gn2):図7(a)
・高マンノース型Gn2型の総量(HM−Gn2):図7(a)
・複合型/ハイブリッド型の総量(C/H):図7(a)
・(Hex)3(HexNAc)3((Gal)1(Man)2(GlcNAc)3):図7(b)
・(Hex)3(HexNAc)2(NeuAc)1((NeuAc)1(Gal)1(Man)2(GlcNAc)2):図7(c)
・(Hex)4(HexNAc)2(Fuc)1((Fuc)1(Gal)1(Man)3(GlcNAc)2):図7(d)
・(Hex)4(HexNAc)3((Gal)1(Man)3(GlcNAc)3):図7(e)
・(Hex)5(HexNAc)4((Gal)2(Man)3(GlcNAc)4):図7(f)
(付記項1)
グリコサミノグリカンである、
CS−2S4S、
HS−0S、
HS−NS、
HS−2S6S、
遊離オリゴ糖である、
(Hex)3(HexNAc)1、
(Hex)4(HexNAc)1、
(Hex)5(HexNAc)1、
(Hex)6(HexNAc)1、
(Hex)7(HexNAc)1、
(Hex)8(HexNAc)1、
(Hex)1(HexNAc)2、
(Hex)4(HexNAc)2、
(Hex)5(HexNAc)2、
(Hex)6(HexNAc)2、
高マンノース型Gn1型の総量、
パウチマンノース型Gn2型の総量、
高マンノース型Gn2型の総量、
複合型/ハイブリッド型の総量、
(Hex)3(HexNAc)3、
(Hex)3(HexNAc)2(NeuAc)1、
(Hex)4(HexNAc)2(Fuc)1、
(Hex)4(HexNAc)3及び
(Hex)5(HexNAc)4
からなる群より少なくとも1つ選択される糖鎖からなるライソゾーム病に対する治療効果を判定するためのマーカー。
ライソゾーム病は、ニーマン・ピック病C型である、
ことを特徴とする付記1に記載のマーカー。
ライソゾーム病に罹患している対象由来の試料中の
グリコサミノグリカンである、
CS−2S4S、
HS−0S、
HS−NS、
HS−2S6S、
遊離オリゴ糖である、
(Hex)3(HexNAc)1、
(Hex)4(HexNAc)1、
(Hex)5(HexNAc)1、
(Hex)6(HexNAc)1、
(Hex)7(HexNAc)1、
(Hex)8(HexNAc)1、
(Hex)1(HexNAc)2、
(Hex)4(HexNAc)2、
(Hex)5(HexNAc)2、
(Hex)6(HexNAc)2、
高マンノース型Gn1型の総量、
パウチマンノース型Gn2型の総量、
高マンノース型Gn2型の総量、
複合型/ハイブリッド型の総量、
(Hex)3(HexNAc)3、
(Hex)3(HexNAc)2(NeuAc)1、
(Hex)4(HexNAc)2(Fuc)1、
(Hex)4(HexNAc)3及び
(Hex)5(HexNAc)4
からなる群より少なくとも1つ選択される糖鎖の発現量を、ライソゾーム病に対する治療後に測定する工程を含む、
ことを特徴とするライソゾーム病に対する治療効果を判定するための方法。
ライソゾーム病は、ニーマン・ピック病C型である、
ことを特徴とする付記3に記載の方法。
(a)ライソゾーム病に罹患している対象由来の試料中の
グリコサミノグリカンである、
CS−2S4S、
HS−0S、
HS−NS、
HS−2S6S、
遊離オリゴ糖である、
(Hex)3(HexNAc)1、
(Hex)4(HexNAc)1、
(Hex)5(HexNAc)1、
(Hex)6(HexNAc)1、
(Hex)7(HexNAc)1、
(Hex)8(HexNAc)1、
(Hex)1(HexNAc)2、
(Hex)4(HexNAc)2、
(Hex)5(HexNAc)2、
(Hex)6(HexNAc)2、
高マンノース型Gn1型の総量、
パウチマンノース型Gn2型の総量、
高マンノース型Gn2型の総量、
複合型/ハイブリッド型の総量、
(Hex)3(HexNAc)3、
(Hex)3(HexNAc)2(NeuAc)1、
(Hex)4(HexNAc)2(Fuc)1、
(Hex)4(HexNAc)3及び
(Hex)5(HexNAc)4
からなる群より少なくとも1つ選択される糖鎖の発現量を、候補薬剤存在下及び非存在下で測定する工程と、
(b)前記候補薬剤存在下及び非存在下での前記糖鎖の発現量を比較する工程と、
を含むライソゾーム病治療薬のスクリーニング方法。
ライソゾーム病は、ニーマン・ピック病C型である、
ことを特徴とする付記5に記載のスクリーニング方法。
GSL糖鎖である、
(Hex)2、
(Hex)3(HexNAc)1、
(Hex)2(HexNAc)2、
(Hex)2(HexNAc)1(Neu5Ac)1、
(Hex)4(HexNAc)1、
(Hex)3(HexNAc)2、
(Hex)3(HexNAc)1(Neu5Ac)1、
(Hex)4(HexNAc)2、
(Hex)5(HexNAc)2、
(Hex)3(HexNAc)1(Neu5Ac)2、
N−グリカンである、
Man3F、
Man4、
Man4F、
Man5F、
Man5、
Man6、
Man7、
Man8、
Man9、
(Hex)1(HexNAc)2(Fuc)1+(Man)3(GlcNAc)2、
(Hex)2(HexNAc)2+(Man)3(GlcNAc)2、
(HexNAc)3(Fuc)1+(Man)3(GlcNAc)2、
(Hex)2(HexNAc)2(Fuc)1+(Man)3(GlcNAc)2、
(Hex)3(HexNAc)3(Fuc)1+(Man)3(GlcNAc)2、
(Hex)4(HexNAc)4(Fuc)1+(Man)3(GlcNAc)2、
(Hex)1(HexNAc)2(Fuc)1(NeuAc)1+(Man)3(GlcNAc)2、
(Hex)2(HexNAc)2(Fuc)1(NeuAc)1+(Man)3(GlcNAc)2、
(Hex)3(HexNAc)3(Fuc)1(NeuAc)1+(Man)3(GlcNAc)2、
(Hex)4(HexNAc)4(Fuc)1(NeuAc)2+(Man)3(GlcNAc)2、
高マンノース型、
ハイブリッド型、
複合型、
フコシル化とシアリル化の両者を受けた複合型、
O−グリカンである、
O−グリカンの総量、
(HexNAc)1(Neu5Ac)1、
(Hex)1(HexNAc)1(Neu5Ac)1、
グリコサミノグリカンである、
CS−2S4S、
HS−0S、
HS−NS、
HS−2S6S、
遊離オリゴ糖である、
(Hex)3(HexNAc)1、
(Hex)4(HexNAc)1、
(Hex)5(HexNAc)1、
(Hex)6(HexNAc)1、
(Hex)7(HexNAc)1、
(Hex)8(HexNAc)1、
(Hex)1(HexNAc)2、
(Hex)4(HexNAc)2、
(Hex)5(HexNAc)2、
(Hex)6(HexNAc)2、
高マンノース型Gn1型の総量、
パウチマンノース型Gn2型の総量、
高マンノース型Gn2型の総量、
複合型/ハイブリッド型の総量、
(Hex)3(HexNAc)3、
(Hex)3(HexNAc)2(NeuAc)1、
(Hex)4(HexNAc)2(Fuc)1、
(Hex)4(HexNAc)3及び
(Hex)5(HexNAc)4
からなる群より少なくとも1つ選択される糖鎖からなるライソゾーム病の診断マーカー。
ライソゾーム病は、ニーマン・ピック病C型である、
ことを特徴とする付記7に記載のマーカー。
Claims (3)
- 対象由来の試料中の
グリコサミノグリカンである、
CS−2S4S、
HS−0S、
HS−NS、
HS−2S6S、
遊離オリゴ糖である、
(Man)3(GlcNAc)1、
(Man)4(GlcNAc)1、
(Man)5(GlcNAc)1、
(Man)6(GlcNAc)1、
(Man)7(GlcNAc)1、
(Man)8(GlcNAc)1、
(Man)1(GlcNAc)2、
(Man)4(GlcNAc)2、
(Man)5(GlcNAc)2、
(Man)6(GlcNAc)2、
高マンノース型Gn1型の総量、
パウチマンノース型Gn2型の総量、
高マンノース型Gn2型の総量、
複合型/ハイブリッド型の総量、
(Gal)1(Man)2(GlcNAc)3、
(NeuAc)1(Gal)1(Man)2(GlcNAc)2、
(Fuc)1(Gal)1(Man)3(GlcNAc)2、
(Gal)1(Man)3(GlcNAc)3及び
(Gal)2(Man)3(GlcNAc)4
からなる群より少なくとも1つ選択される糖鎖の発現量を生体外で測定する工程と、
ニーマン・ピック病C型に罹患していない対象由来の試料と比較して、少なくとも1つの前記グリコサミノグリカンの発現量が減少していること、または少なくとも1つの前記遊離オリゴ糖の発現量が増加していることを決定する工程と、を含む、
ニーマン・ピック病C型の診断を補助する方法。 - ニーマン・ピック病C型に罹患している対象由来の試料中の
グリコサミノグリカンである、
CS−2S4S、
HS−0S、
HS−NS、
HS−2S6S、
遊離オリゴ糖である、
(Man)3(GlcNAc)1、
(Man)4(GlcNAc)1、
(Man)5(GlcNAc)1、
(Man)6(GlcNAc)1、
(Man)7(GlcNAc)1、
(Man)8(GlcNAc)1、
(Man)1(GlcNAc)2、
(Man)4(GlcNAc)2、
(Man)5(GlcNAc)2、
(Man)6(GlcNAc)2、
高マンノース型Gn1型の総量、
パウチマンノース型Gn2型の総量、
高マンノース型Gn2型の総量、
複合型/ハイブリッド型の総量、
(Gal)1(Man)2(GlcNAc)3、
(NeuAc)1(Gal)1(Man)2(GlcNAc)2、
(Fuc)1(Gal)1(Man)3(GlcNAc)2、
(Gal)1(Man)3(GlcNAc)3及び
(Gal)2(Man)3(GlcNAc)4
からなる群より少なくとも1つ選択される糖鎖の発現量を、ニーマン・ピック病C型に対する治療後に生体外で測定する工程と、
治療前と比較して、少なくとも1つの前記グリコサミノグリカンの発現量が増加していること、もしくは少なくとも1つの前記遊離オリゴ糖の発現量が減少していること、または、ニーマン・ピック病C型に罹患していない対象由来の試料と比較して、少なくとも1つの前記グリコサミノグリカンの発現量、もしくは少なくとも1つの前記遊離オリゴ糖の発現量が同等であることを決定する工程と、を含む、
ことを特徴とする、ニーマン・ピック病C型に対する治療効果の判定を補助する方法。 - (a)ニーマン・ピック病C型に罹患している対象由来の試料中の
グリコサミノグリカンである、
CS−2S4S、
HS−0S、
HS−NS、
HS−2S6S、
遊離オリゴ糖である、
(Man)3(GlcNAc)1、
(Man)4(GlcNAc)1、
(Man)5(GlcNAc)1、
(Man)6(GlcNAc)1、
(Man)7(GlcNAc)1、
(Man)8(GlcNAc)1、
(Man)1(GlcNAc)2、
(Man)4(GlcNAc)2、
(Man)5(GlcNAc)2、
(Man)6(GlcNAc)2、
高マンノース型Gn1型の総量、
パウチマンノース型Gn2型の総量、
高マンノース型Gn2型の総量、
複合型/ハイブリッド型の総量、
(Gal)1(Man)2(GlcNAc)3、
(NeuAc)1(Gal)1(Man)2(GlcNAc)2、
(Fuc)1(Gal)1(Man)3(GlcNAc)2、
(Gal)1(Man)3(GlcNAc)3及び
(Gal)2(Man)3(GlcNAc)4
からなる群より少なくとも1つ選択される糖鎖の発現量を、候補薬剤存在下及び非存在下で、生体外で測定する工程と、
(b)前記候補薬剤存在下において、候補薬剤非存在下と比較して、少なくとも1つの前記グリコサミノグリカンの発現量が増加していること、または少なくとも1つの前記遊離オリゴ糖の発現量が減少していることを決定する工程と、
を含む、
ニーマン・ピック病C型治療薬のスクリーニング方法。
Priority Applications (1)
Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
---|---|---|---|
JP2017114596A JP6973714B2 (ja) | 2017-06-09 | 2017-06-09 | ニーマン・ピック病c型の診断を補助する方法、ニーマン・ピック病c型に対する治療効果の判定を補助する方法並びにニーマン・ピック病c型治療薬のスクリーニング方法 |
Applications Claiming Priority (1)
Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
---|---|---|---|
JP2017114596A JP6973714B2 (ja) | 2017-06-09 | 2017-06-09 | ニーマン・ピック病c型の診断を補助する方法、ニーマン・ピック病c型に対する治療効果の判定を補助する方法並びにニーマン・ピック病c型治療薬のスクリーニング方法 |
Publications (2)
Publication Number | Publication Date |
---|---|
JP2018201477A JP2018201477A (ja) | 2018-12-27 |
JP6973714B2 true JP6973714B2 (ja) | 2021-12-01 |
Family
ID=64954338
Family Applications (1)
Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
---|---|---|---|
JP2017114596A Active JP6973714B2 (ja) | 2017-06-09 | 2017-06-09 | ニーマン・ピック病c型の診断を補助する方法、ニーマン・ピック病c型に対する治療効果の判定を補助する方法並びにニーマン・ピック病c型治療薬のスクリーニング方法 |
Country Status (1)
Country | Link |
---|---|
JP (1) | JP6973714B2 (ja) |
Family Cites Families (2)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
WO2013186946A1 (ja) * | 2012-06-11 | 2013-12-19 | 国立大学法人北海道大学 | 多能性幹細胞の選別方法 |
MA40954A (fr) * | 2014-11-14 | 2017-09-19 | Shire Human Genetic Therapies | Détermination de niveaux de glycosaminoglycane par spectrométrie de masse |
-
2017
- 2017-06-09 JP JP2017114596A patent/JP6973714B2/ja active Active
Also Published As
Publication number | Publication date |
---|---|
JP2018201477A (ja) | 2018-12-27 |
Similar Documents
Publication | Publication Date | Title |
---|---|---|
Jia et al. | The human lung glycome reveals novel glycan ligands for influenza A virus | |
EP2431743B1 (en) | Cancer specific glycans and use thereof | |
Raval et al. | Pompe disease results in a Golgi-based glycosylation deficit in human induced pluripotent stem cell-derived cardiomyocytes | |
Xia et al. | Altered O-glycosylation and sulfation of airway mucins associated with cystic fibrosis | |
EP1495328B1 (en) | A marker for measuring liver cirrhosis | |
JP6693954B2 (ja) | 質量分析によるグリコサミノグリカンのレベルの測定 | |
US9796999B2 (en) | Detection of oligosaccharides | |
US8183003B2 (en) | Polymer end group detection | |
Kenny et al. | Presence of terminal N-acetylgalactosamineβ1-4 N-acetylglucosamine residues on O-linked oligosaccharides from gastric MUC5AC: involvement in helicobacter pylori colonization? | |
Spaapen et al. | Clinical and biochemical presentation of siblings with COG-7 deficiency, a lethal multiple O-and N-glycosylation disorder | |
Karamessinis et al. | Marked defects in the expression and glycosylation of α2-HS glycoprotein/fetuin-A in plasma from neonates with intrauterine growth restriction: proteomics screening and potential clinical implications | |
TW200400351A (en) | Oligosaccharide biomarkers for mucopolysaccharidoses and other related disorders | |
Callewaert et al. | Increased fucosylation and reduced branching of serum glycoprotein N-glycans in all known subtypes of congenital disorder of glycosylation I | |
Xu et al. | Protein glycosylation in urine as a biomarker of diseases | |
Ramsay et al. | Profiling oligosaccharidurias by electrospray tandem mass spectrometry: quantifying reducing oligosaccharides | |
Gong et al. | Importance of glycosylation in the interaction of Tamm‐Horsfall protein with collectin‐11 and acute kidney injury | |
JP6973714B2 (ja) | ニーマン・ピック病c型の診断を補助する方法、ニーマン・ピック病c型に対する治療効果の判定を補助する方法並びにニーマン・ピック病c型治療薬のスクリーニング方法 | |
Xie et al. | Targeting protein glycosylation to regulate inflammation in the respiratory tract: novel diagnostic and therapeutic candidates for chronic respiratory diseases | |
EP3349007B1 (en) | Method for separating the fraction associated with glycosaminoglycans and uses thereof | |
JP5979452B2 (ja) | 多能性幹細胞の選別方法 | |
Zhang et al. | Serum α-l-fucosidase activities are significantly increased in patients with preeclampsia | |
SA515370129B1 (ar) | طريقة لتشخيص مرض نيمان بيك | |
Williams et al. | The restricted nature of protein glycosylation in the mammalian brain | |
Saville et al. | Endogenous non-reducing end glycosaminoglycan biomarkers for the mucopolysaccharidoses: Accurate diagnosis and elimination of false positive newborn screening results | |
WO2016021729A1 (ja) | グリオーマの診断マーカー、判別方法、診断方法、糖鎖マーカーを検出する方法及び糖鎖マーカー |
Legal Events
Date | Code | Title | Description |
---|---|---|---|
A521 | Written amendment |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A523 Effective date: 20170705 |
|
A621 | Written request for application examination |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A621 Effective date: 20200604 |
|
A977 | Report on retrieval |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A971007 Effective date: 20210114 |
|
A131 | Notification of reasons for refusal |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A131 Effective date: 20210216 |
|
A521 | Written amendment |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A523 Effective date: 20210419 |
|
A131 | Notification of reasons for refusal |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A131 Effective date: 20210706 |
|
A521 | Written amendment |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A523 Effective date: 20210903 |
|
TRDD | Decision of grant or rejection written | ||
A01 | Written decision to grant a patent or to grant a registration (utility model) |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A01 Effective date: 20211005 |
|
A61 | First payment of annual fees (during grant procedure) |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A61 Effective date: 20211022 |
|
R150 | Certificate of patent or registration of utility model |
Ref document number: 6973714 Country of ref document: JP Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: R150 |