JP6944373B2 - Mcjアゴニストおよびそれらに関する使用 - Google Patents
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Description
本出願は、米国特許法第119条(e)の下で、2015年2月18日に出願された米国仮出願第62/117,530号の利益を主張し、その内容は、その全体が参照により本明細書に組み込まれる。
政府の権利
本発明は、国立衛生研究所により授与された助成金番号AI094027およびCA127099の下で、政府支援を受けて行った。政府は、本発明のある特定の権利を有する。
発明の分野
本発明は、一つには、化学療法剤に対するがん細胞の感受性を増加させて、化学療法剤に対するがん細胞の耐性を低減させて、がん細胞死を増加させる方法および化合物に関する。
配列の簡単な説明
配列番号1は、40個のアミノ酸のN末端MCJポリペプチドである:
MAARGVIAPVGESLRYAEYLQPSAKRPDADVDQQRLVRSL。
配列番号3は、9個のアミノ酸のMCJポリペプチドである:VIAPVGESL。
配列番号5は、25位にアセチル化リジンを有する配列番号1の40個のアミノ酸ポリペプチドである:MAARGVIAPVGESLRYAEYLQPSAK*RPDADVDQQRLVRSL。(注釈 K*は、アセチル化アミノ酸残基である)
配列番号6は、配列番号2として記載されるアミノ酸配列、TATアミノ酸配列およびミトコンドリア送達アミノ酸配列を有するMCJアゴニスト化合物であり、それは、本明細書中でTAT−N−MCJ−MTSポリペプチドとも称される:
YGKKRRQRRGMAARGVIAPVGESLRYAEYLGTRTWVPKGLKSP。
配列番号10は、「G」スペーサーアミノ酸が最初のアミノ酸位置において付加されたミトコンドリア送達ポリペプチドのアミノ酸配列である:GTRTWVPKGLKSP。
MAARGVIAPVGESLRYAEYLQPSAKRPDADVDQQGLVRSLIAVGLGVAALAFAGRYAFRIWKPLEQVITETAKKISTPSFSSYYKGGFEQKMSRREAGLILGVSPSAGKAKIRTAHRRVMILNHPDKGGSPYVAAKINEAKDLLETTTKH。
ggtcaggaaagctcaggcaagcccaccctcaggcattacagctagactccgagcttactgggcagtcatctgattcgaccaacatcagttcgcagggcttaagcccagtcccttacggcggctggggagggaccaggcccaagtatataaagctccctgagggtccgcgttggctttgcgcctgtgagtgtgattcaagaacgtcccagtgcccttggctcctttcggagtgtgaccccgtgcttgcacgggacacgttacccagctcgggtgagaagggtatcttccgggaacctcgcctttaatagcacaacgagcgcagagtccactggatctgcgagaagaaaccgcgctaactagtttgtccctacggccgcctcgtagtcactgccgcggcgccttgagtctccgggccgccttgccatggctgcccgtggtgtcatcgctccagttggcgagagtttgcgctacgctgagtacttgcagccctcggccaaacggccagacgccgacgtcgaccagcagggactggtaagaagtttgatagctgtaggactgggtgttgcagctcttgcatttgcaggtcgctacgcatttcggatctggaaacctctagaacaagttatcacagaaactgcaaagaagatttcaactcctagcttttcatcctactataaaggaggatttgaacagaaaatgagtaggcgagaagctggtcttattttaggtgtaagcccatctgctggcaaggctaagattagaacagctcataggagagtcatgattttgaatcacccagataaaggtggatctccttacgtagcagccaaaataaatgaagcaaaagacttgctagaaacaaccaccaaacattgatgcttaaggaccacactgaaggaaaaaaaaagaggggacttcgaaaaaaaaaaaagccctgcaaaatattctaaaacatggtcttcttaattttctatatggattgaccacagtcttatcttccaccattaagctgtataacaataaaatgttaatagtcttgctttttattatcttttaaagatctccttaaattct。
MATGGGVTSRESLRYAEYLPPSAQRSDADIDHTAGRRLIAVGLGVAAVAFAGRYAFQIWKPLEQVITATARKISSPSFSSYYKGGFEQKMSKREASLILGVSPSAGKAKIRTAHKRIMILNHPDKGGSPYVASKINEAKDLLEASSKAN。
MAARGVIAPV GESLRYAEYL QPSAKRPDAD VDQQRLVRSL IAVGLGVAAL AFAGRYAFRI WKPLEQVITE TAKKISTPSF SSYYKGGFEQ KMSRREAGLI LGVSPSAGKA KIRTAHRRVM ILNHPDKGGS PYVAAKINEA KDLLETTTKH。
agtctccgggccgccttgccatggctgcccgtggtgtcatcgctccagttggcgagagtttgcgctacgctgagtacttgcagccctcggccaaacggccagacgccgacgtcgaccagcagagactggtaagaagtttgatagctgtaggcctgggtgttgcagctcttgcatttgcaggtcgctacgcatttcggatctggaaacctctagaacaagttatcacagaaactgcaaagaagatttcaactcctagcttttcatcctactataaaggaggatttgaacagaaaatgagtaggcgagaagctggtcttattttaggtgtaagcccatctgctggcaaggctaagattagaacagctcataggagagtcatgattttgaatcacccagataaaggtggatctccttacgtagcagccaaaataaatgaagcaaaagacttgctagaaacaaccaccaaacattgatgcttaaggaccacactgaaggaaaaaaaaagaggggacttcaaaaaaaaaaaaaaagccctgcaaaatattctaaaacatggtcttcttaattttctatatggattgaccacagtcttatcttccaccattaagctgtataacaataaaatgttaatagtcttgctttttattatcttttaaagatctccttaaattctataactgatcttttttcttattttgtttgtgacattcatacatttttaagatttttgttatgttctgaattcccccctacacacacacacacacacacacacacacacgtgcaaaaaatatgatcaagaatgcaattgggatttgtgagcaatgagtagacctcttattgtttatatttgtaccctcattgtcaatttttttttagggaatttgggactctgcctatataaggtgttttaaatgtcttgagaacaagcactggctgatacctcttggagatatgatctgaaatgtaatggaatttattaaatggtgtttagtaaagtaggggttaaggacttgttaaagaaccccactatctctgagaccctatagccaaagcatgaggacttggagagctactaaaatgattcaggtttacaaaatgagccctgtgaggaaaggttgagagaagtctgaggagtttgtatttaattatagtcttccagtactgtatattcattcattactcattctacaaatatttattgaccccttttgatgtgcaaggcactatcgtgcgtcccctgagagttgcaagtatgaagcagtcatggatcatgaaccaaaggaacttatatgtagaggaaggataaatcacaaatagtgaatactgttagatacagatgatatattttaaaagttcaaaggaagaaaagaatgtgttaaacactgcatgagaggaggaataagtggcatagagctaggctttagaaaagaaaaatattccgataccatatgattggtgaggtaagtgttattctgagatgagaattagcagaaatagatatatcaatcggagtgattagagtgcagggtttctggaaagcaaggtttggacagagtggtcatcaaaggccagccctgtgacttacactgcattaaattaatttcttagaacatagtccctgatcattatcactttactattccaaaggtgagagaacagattcagatagagtgccagcattgtttcccagtattcctttacaaatcttgggttcattccaggtaaactgaactactgcattgtttctatcttaaaatactttttagatatcctagatgcatctttcaacttctaacattctgtagtttaggagttctcaaccttggcattattgacatgttaggccaaataattttttttgtgggaggtctcttgtgcgttttagatgattagcaataatccctgacctgttatctactaaagactagtcgtttctcatcagttgtgacaacaaaaatggttccagatattgccaaatgccctttagaggacagtaatcgcccccagttgagaaccatttcagtaaaactttaattactattttttcttttggtttataaaataatgatcctgaattaaattgatggaaccttgaagtcgataaaatatatttcttgctttaaagtccccatacgtgtcctactaattttctcatgctttagtgttttcacttttctcctgttatccttgtacctaagaatgccatcccaatccccagatgtccacctgcccaaagtctaggcatagctgaaggccaagctaaaatgtatccctctttttctggtacatgcagcaaaagtaatatgaattatcagctttctgagagcaggcattgtatctgtcttgtttggtgttacattggcacccaataaatatttgttgagcgaaaaaaaaaaaaaaa。
配列番号17は、38個のアミノ酸のMCJポリペプチドである:MAARGVIAPVGESLRYAEYLQPSAKRPDADVDQQRLVR。
配列番号19 MAARGVIAPVGESLRYAEYLQPSAKRPDA。
配列番号20 MAARGVIAPVGESLRYAEYLQPSA。
配列番号21 MAARGVIAPVGESLRYAE。
配列番号22 RGVIAPVGESLRYAEYLC。
配列番号23 AARGVIAPVGESLRYAEYL。
配列番号24 MAARGVIAPVGESLRYAEYLQPSAKRPDADV。
配列番号25 MAARGVIAPVGESLRYAEYLQPSAKRPDADVDQQGLVRS。
配列番号26 MAARGVIAPVGESLRYAEYLQPSAKRPDADVDQQGL。
配列番号27 MAARGVIAPVGESLRYAEYLQPSAKRPDADVD。
配列番号28 MAARGVIAPVGESLRYAEYLQPSAK。
配列番号29 MAARGVIAPVGESLRYAEYLQPSAKRPDAD。
配列番号30 MAARGVIAPVGESLRYAEYLQP。
配列番号31 MAARGVIAPVGESLRYAEYLQPSAKR。
配列番号32 GVIAPVGESLRYAEYL。
配列番号33 ARGVIAPVGESLRYAEYL。
配列番号34 VIAPVGESLRYAEYL。
配列番号35 MAARGVIAPVGES。
配列番号37は、ミトコンドリア送達ポリペプチドのアミノ酸配列である:TRTWVPKGLKSP。
配列番号39は、シクロヘキシルアラニン含有配列である:FXRFXKFXRFXK。
本発明は、幾つかの態様では、細胞、組織および/または対象においてMCJ分子のレベルを増加させる方法に関する。本発明のある特定の態様では、細胞におけるMCJ分子のレベルを増加させることは、細胞におけるMCJ活性を増加させ得る。本発明の幾つかの実施形態では、MCJポリペプチドのレベルは、MCJポリペプチドの発現を増加することによって増加され得る。したがって、本発明の幾つかの実施形態は、細胞、組織または対象におけるMCJポリペプチドコードポリヌクレオチドのレベルを増加させることを含んでもよく、それは、細胞、組織または対象におけるMCJポリペプチドのレベルおよび活性の1つまたは複数の増加をもたらし得る。本発明のある特定の実施形態では、方法は、細胞、組織または対象においてがんを治療するために、細胞、組織または対象にMCJポリペプチドを送達することによって、細胞、組織または対象におけるMCJポリペプチドのレベルを増加させることを含む。
がん細胞におけるMCJ分子のレベルを増加させる本発明の外因性MCJアゴニスト化合物を、がんの治療を必要とする対象に有効量で投与してもよい。対象に、MCJポリペプチドレベルおよび/または活性を増加させる外因性MCJアゴニスト化合物を投与することにより、対象においてがんを低減し得る。がんを治療するのに有用な外因性MCJアゴニスト化合物は、本発明の幾つかの実施形態では、MCJポリペプチドをコードするポリヌクレオチドであってもよい。したがって、本発明の方法は、外因性MCJポリペプチドまたは外因性MCJポリペプチドコード核酸を、対象に投与することを含み得る。
本発明のMCJアゴニスト化合物は、単独で、または1つまたは複数のさらなる化合物と組み合わせて投与されてもよい。幾つかの実施形態では、本発明のMCJアゴニスト化合物は、1つまたは複数のさらなる治療剤または治療と相乗的な様式で作用してもよく、1つまたは複数の治療剤または活性の有効性を増加させてもよい。したがって、例えば、化学療法剤と併せたがん細胞へのMCJアゴニスト化合物の投与は、化学療法剤のがん細胞死滅有効性を増強させてもよい。したがって、MCJアゴニスト化合物は、がんを治療するのに投与される1つまたは複数の化学療法剤または治療の有効性を増加させてもよい。化学療法剤の非限定的な例は、タキサン、アントラサイクリン、白金ベースの薬物、代謝拮抗物質、塩基類似体、ヌクレオシド類縁体、ヌクレオチド類似体、葉酸代謝拮抗薬、メトトレキサート、アルカロイド、ビンクリスチン、ビンブラスチン、イリノテカン、エトポシド、ベルケイド、チロシンキナーゼ阻害剤、セリン/スレオニンキナーゼ阻害剤、ブレオマイシン、シクロホスファミド、シトキサン、エベロリムス、およびメトホルミンである。本発明の治療方法はまた、本発明のMCJアゴニスト化合物と接触されているがん細胞の結果として、他の当該技術分野で公知の化学療法剤へのがん細胞の感受性の増加をもたらし得る。
本発明のMCJアゴニスト化合物は、がんを治療するための有効量で、細胞または対象に投与される。「がんを治療するための有効量」は、所望の生物学的効果を実現するのに必要であるか、または十分な量である。例えば、本発明のMCJアゴニスト化合物の有効量は、(i)がんの進行を遅くするか、または中断させること、(ii)複数のがん細胞を死滅させること、および(iii)がんの1つまたは複数の症状を逆転させることの1つまたは複数を行うのに必要な量であり得る。本発明の幾つかの態様によれば、有効量は、組み合わせるか、または同時投与されるか、または単独で投与される場合に、がんの防止または治療のいずれかでがんにおける所望の治療応答をもたらす、単独でのまたは別の医薬もしくは治療と組み合わせた本発明のMCJアゴニスト化合物のその量である。本発明の幾つかの態様では、所望の生物学的効果は、複数のがん細胞の死;化学療法剤に対する1つまたは複数のがん細胞の感受性の増加;がんに起因する症状の改善および/または絶対的排除;例えば対象ががんを有さないこと、またはがんの存在、レベルもしくは腫瘍サイズおよび重篤性のうちの1つまたは複数が低減されることを示す診断試験から明らかであるようながんの完全な抑止のうちの1つまたは複数であり得る。
MCJアゴニスト化合物に関する様々な投与経路が利用可能である。選択される特定の送達様式は、治療されている特定の状態および治療有効性に必要とされる投与量に依存する。本発明の方法は、一般的に言うと、臨床上許容されない有害作用を引き起こすことなく有効なレベルの治療をもたらす任意の様式を意味する医学的に許容される任意の投与様式を使用して実行され得る。本発明の幾つかの実施形態では、本発明のMCJアゴニスト化合物は、経口、経腸、粘膜、経皮および/または非経口経路を介して投与され得る。「非経口」という用語は、皮下、静脈内、筋内、腹腔内および胸骨内の注射または注入技法を含む。他の経路として、経鼻(例えば、胃−鼻チューブを介して)、真皮、膣内、直腸および舌下が挙げられるが、これらに限定されない。本発明の送達経路は、髄腔内、脳室内または頭蓋内を含んでもよい。本発明の幾つかの実施形態では、本発明のMCJアゴニスト化合物は、徐放性マトリックス内に配置させて、対象におけるマトリックスの配置によって投与されてもよい。本発明の幾つかの態様では、MCJアゴニスト化合物は、特定の細胞または細胞小器官(その非限定的な例は、ミトコンドリアである)を目標とする送達剤でコーティングしたナノ粒子を使用して、細胞および/または対象に投与されてもよい。
本発明のある特定の態様は、がんの治療におけるMCJアゴニスト化合物の有効性を評価する方法を含む。かかる方法は、MCJ化合物と接触させたがん試験細胞に対する効果を、MCJアゴニスト化合物と接触させない実質的に類似したがん対照細胞の状態と比較することを含んでもよい。対照細胞と比較した接触させた試験細胞の化学療法感受性の増加、細胞死の可能性増加および化学療法耐性の減少などの(しかしこれらに限定されない)望ましい効果の1つまたは複数の変化は、がんの治療に関するMCJアゴニスト化合物の有効性を示す。本発明の幾つかの実施形態では、アッセイ方法は、生物学的試料を対象から得ることと、MCJアゴニスト化合物と接触させることと、任意に細胞を化学療法剤と接触させることと、細胞の応答(例えば、化学療法感受性の増加、細胞死の可能性の増加、化学療法耐性の減少等)を評価することとを含んでもよい。試験細胞の応答を、対照がん細胞と比較してもよい。本明細書中で使用する場合、生物学的試料は、in vitroでの生物学的試料であってもよく、またはin vivoで検出される(例えば、得られる)試料であってもよい。本明細書中で使用する場合、生物学的試料は、細胞試料、組織試料、血液試料、体液試料、細胞成分試料等であり得る。生物学的試料は、細胞、組織または細胞小器官を含んでもよく、皮膚細胞、胸部組織細胞、筋細胞、循環細胞、結合組織細胞、幹細胞、骨細胞、外分泌細胞、内分泌細胞、器官細胞、間充織細胞、結合組織細胞、上皮細胞、内皮細胞、神経細胞、膠細胞、腺細胞、間質細胞、腎細胞、甲状腺細胞、幹細胞、造血細胞、リンパ球細胞、骨髄細胞、赤血球細胞、心筋細胞、肝細胞、星状細胞、乏突起膠細胞、卵母細胞、または脂肪細胞などの細胞型を含んでもよいが、これらに限定されない。本発明の幾つかの実施形態では、生物学的試料は、1つまたは複数のがん細胞を含んでもよい。
本発明の化合物および医薬組成物ならびに使用説明書を含むキットもまた、本発明の範囲内である。本発明のキットは、MCJアゴニスト化合物の1つまたは複数を含んでもよく、それを使用して、がんを治療し得る。1つまたは複数のMCJアゴニスト化合物を含有するキットは、本発明の治療方法のために調製することができる。本発明のキットの構成成分は、水性媒質中、または凍結乾燥形態のいずれかでパッケージングされ得る。本発明のキットは、試験管、バイアル、フラスコ、ボトル、フラスコ、シリンジ等などの1つまたは複数の容器手段または一連の容器手段を、その中に閉じ込めた状態で受け入れるよう区分されている担体を含んでもよい。第1の容器手段または一連の容器手段は、1つまたは複数のMCJアゴニスト化合物、1つまたは複数のMCJポリペプチド、1つまたは複数のMCJポリペプチドコードポリヌクレオチド、1つまたは複数のターゲティング剤等などの1つまたは複数の構成成分を含有してもよい。
細胞培養物。MCF7およびMCF7/ADR細胞は、Ken Cowan博士(国立がん研究所、ベセスダ、MD)から厚意により提供された。MCF7/siMCJ細胞は、Hatle,K.M.他、Mol Cell Biol 27、2952〜2966頁(2007年)に記載されるように、MCJ(siMCJ)に関するshRNAを発現するプラスミドによる安定なトランスフェクションによって生成させた。細胞は全て、5%FBSを含有するRPMI−1640(Life technologies,Inc.、ゲイザースバーグ、MD)中で、37℃(C)、5%CO2で維持した。
マウス。MCJノックアウトマウスは、これまでにHatle,K.他、Mol Cell Biol 33、2302〜2314頁、(2013年)に記載されている。MCJ KOマウスは、過去に記載されたMMTV−PyMTマウス[Guy,C.T.他、Mol Cell Biol 12、954〜961頁(1992年)]と交雑させて、MCJ KO MMTVマウスを産ませた。野生型MMTVマウスおよびMCJ KO MMTVマウスは、実験に使用した。マウスは全て、バーモント大学の動物ケア施設で滅菌状態下に収容した。手順は、バーモント大学動物実験委員会(Institutional Animal Care and Use Committee)によって承認された。
ドキソルビシン蓄積のための共焦顕微鏡法。MCF7/siMCJ細胞を、処理の前日にBD Biocoatカバーガラス(BD Biosciences、ベッドフォード、MA)に播種した。20時間目に、オリゴマイシン(5μΜ)または培地を細胞に添加した。3時間後、ドキソルビシン(3μΜ)を添加して、細胞をさらに4時間、インキュベートした。細胞をPBSで洗浄して、3.7%パラホルムアルデヒド中に固定させた。ドキソルビシンは、共焦顕微鏡で視覚化することができる固有の蛍光を有する。核染色に関して、DAPI(Molecular Probes、ユージーン、オレゴン)を使用した。細胞は、共焦顕微鏡法(Zeiss LSM 510 META Confocal Laser Scanning Imaging System、Carl Ziess Microimaging Inc.、ソーンウッド、NY)によって視覚化させた。MCF7/siMCJおよびsiMCJ/MCF7という用語は、本明細書中では交換可能に使用される。
明視野顕微鏡法。生細胞を、倒立明視野顕微鏡(Leica Microsystems)で画像化した。400倍の倍率を使用した。
細胞計数。細胞を、トリプシン処理して、洗浄して、培地中に再懸濁した。生存細胞は、死滅細胞(青として視覚化される)を除外するためにトリパンブルー色素を使用して計数することによって測定した。
in vitroでのドキソルビシンおよびペプチド処理。ドキソルビシン(Sigma−Aldrich)は、最終濃度3μΜで使用した。実施例に記載する3つの異なるペプチド(配列番号2、18または6)は、10mMのストック濃度でPBS中に再懸濁させた。ペプチドは、各実施例に関して示されるような種々の濃度で(1、10または50μΜ)使用した。処理の前日に(処理の18〜20時間前に)、細胞を平板培養した。ペプチドのみを有する処理に関して、ペプチドを、示した濃度でプレートに添加して、2または3日後に(各実施例に関して示すように)、細胞をトリプシン処理して、再懸濁させて、計数した。ドキソルビシンおよびペプチドによる処理に関して、細胞を、相当するペプチドで前処理した4時間後に、ドキソルビシンを添加した。
in vivoでのドキソルビシンおよびペプチド処理。MTVマウスおよびMCJ KO MMTVマウスを使用して、ドキソルビシンおよびMCJペプチドに対する応答をアッセイした。処理は、これらのマウスが発症する乳房腫瘍が300mm3に到達したら、およそ2.5〜3ヵ月齢で開始した。ドキソルビシンは、2mg/Kgの用量で、PBS中で腹腔内(intreperitoneal)投与した(マウス1匹当たり100μl)。TAT−N−MCJ−mtsペプチド(配列番号6)は、10mg/Kgの用量で、PBS中での皮下注入によりドキソルビシン時に投与した(マウス1匹当たり100μl)。ドキソルビシンおよびペプチドの投与は、示した期間、1日おきに実行した。垂直な腫瘍直径は、副尺ノギスを使用して測定し、腫瘍体積は、楕円体に関する式(幅×高さ×長さ)/2を使用して推定した。
複合体I活性。複合体I活性の分析は、複合体I(MitoScience)の精製に関するプロトコールに従って生成されるミトコンドリア抽出物を使用して実行した。活性は、MitoScienceからのComplex I Enzyme Activity Microplateアッセイキットおよび製造業者によって推奨されるプロトコールを使用してアッセイした。Hatle,K.他、Mol Cell Biol 33、2302〜2314頁、(2013年)に記載されるように、MCF7/siMCJ細胞からのミトコンドリア抽出物(5μg)をアッセイに使用した。N−MCJペプチド(例えば、配列番号28として記載されるポリペプチド)を、最終濃度0(ペプチドなし)、50または100μΜで抽出物に添加した。
MCJは、ミトコンドリア呼吸鎖およびミトコンドリア由来のATP生産の内因性の負の調節因子として同定されている。がん細胞は主に、ミトコンドリア由来のATPを使用する代わりに、ATPを生成する経路として解糖系を使用して、迅速に成長する。結果として、ミトコンドリアの阻害ががんの成長を増加させると考えられていたため、ミトコンドリアは、がん治療のための主要な標的とは考えられていなかった。
MCF7/ADR細胞は、培地単独中で、または培地+それぞれ培地中50μMの濃度での3つの異なるMCJベースのポリペプチド中で3日間インキュベートした(標準的な手順を使用して)。セット1の細胞は、培地中でインキュベートして、対照セットとして働いた。セット2の細胞は、ターゲティング剤ポリペプチドを有さずに、50μM濃度のMCJポリペプチドを含む培地中でインキュベートした。ターゲティング剤ポリペプチドを有さないN−MCJポリペプチドのアミノ酸配列は、MAARGVIAPVGESLRYAEYL(配列番号2)であった。セット3の細胞は、50μM濃度のTAT−N−MCJポリペプチドを含む培地中でインキュベートした。TAT−N−MCJポリペプチドのアミノ酸配列は、YGKKRRQRRGMAARGVIAPVGESLRYAEYL(配列番号18)であった。セット4の細胞は、50μM濃度のTAT−N−MCJ−MTSポリペプチドを含む培地中でインキュベートし、それは、アミノ酸配列:YGKKRRQRRGMAARGVIAPVGESLRYAEYLGTRTWVPKGLKSP(配列番号6)を有していた。結果は、図1に示し、それは、3日のインキュベーション後、各条件下での細胞数のグラフを示す。TAT−N−MCJ−MTSポリペプチドとともにインキュベートした細胞セット(セット4)において、著しく多い細胞死が生じた。
MCF7細胞およびMCF7/ADR細胞は、培地単独中で、または種々の濃度の、YGKKRRQRRGMAARGVIAPVGESLRYAEYLGTRTWVPKGLKSP(配列番号6)として記載されるアミノ酸配列を有するTAT−N−MCS−MTSポリペプチドを含む培地中で2日間インキュベートした(標準的な手順を使用して)。図2は、細胞を、培地単独中で、または1μM濃度のTAT−N−MCJ−MTSポリペプチドを含む培地中でインキュベートした場合よりも、MCF7(図2A)またはMCF7/ADR(図2B)細胞を、10μMまたは50μM濃度のTAT−N−MCJ−MTSポリペプチドを含む培地中でインキュベートした場合に、細胞数の著しく多い低減を示した実験の結果を示す。図3は、(1)培地単独、(2)50μM濃度の配列番号2として記載されるN−MCJポリペプチドを含む培地(3)50μM濃度の配列番号18として記載されるTAT−N−MCJポリペプチドを含む培地および(4)50μM濃度の配列番号6として記載されるTAT−N−MCJ−MTSポリペプチドを含む培地中で2日間インキュベートしたMCF7/ADR細胞の顕微鏡写真の画像を示す。図3は、各培養に関して2つの独立した画像(上の行および下の行)を示す。結果により、N−MCJまたはTAT−N−MCJペプチドの存在は、細胞の増殖に影響を及ぼさず(培地のみに対して差が見られない)、TAT−N−MCJ−MTSペプチドを使用した場合には、培養プレートに結合したままである細胞がほとんどないことが示される。
腫瘍の多剤耐性は、がんの治療における主要な問題である。化学療法薬に対するがん細胞の化学療法耐性を克服するための新規戦略をここで同定および試験する。化学療法耐性の主要なメカニズムは、腫瘍細胞における薬物の蓄積を防止するABC薬物排出輸送体の腫瘍細胞における存在である。ABC輸送体は、ATPに高度に依存している。がん細胞は主として、ATPを生成するための経路として解糖系を使用して、迅速に成長するが、ここではミトコンドリア由来のATPが、ミトコンドリアの動的な局面に起因して、特定の局在的なプロセスにおける要因と同定されている。がん細胞のミトコンドリアは、ABC薬物排出輸送体の活性を高めることができるATPの局所レベルの増加を提供するので、ミトコンドリアは、がんの化学療法耐性に寄与することがここで同定されており、その非限定的な例は、乳がんである。MCJは、ミトコンドリア呼吸鎖およびミトコンドリア由来のATP生産の内因性の負の調節因子であるとここで同定される。MCJのN末端領域は、特有の配列である。
がん細胞においてミトコンドリア呼吸を低減させることにより、化学療法剤に対する細胞の感受性が回復されるかどうかを決定するために実験を行った。実験の結果により、ミトコンドリア呼吸の阻害は、MCJで欠乏している細胞における薬物蓄積が回復することが実証された。MCF7/siMCJ細胞を、5μMの濃度で4時間、ドキソルビシン単独またはドキソルビシンおよびオリゴマイシン(複合体V/ATP合成酵素の阻害剤)で処理した。細胞におけるドキソルビシン固有の蛍光を共焦点顕微鏡法によって表示した。DAPI色素を核マーカーとして使用した。共焦点顕微鏡法分析により、ドキソルビシンおよびオリゴマイシンで処理したMCF7/siMCJ細胞においてのみ、ドキソルビシン蓄積(核中で)が示された。図4は、細胞の核を検出するためのDAPI染色単独(青色)(左の列)、ドキソルビシンの細胞内蓄積を検出するためのドキソルビシン蛍光単独(赤色)(第2の列)、ドキソルビシンおよびDAPIの共存(紫色、青色と赤色の組合せ)を示すDAPIおよびドキソルビシン蛍光の両方のマージ(第3の列)を示す顕微鏡写真の画像を示す。
MCJは、呼吸鎖の複合体Iと相互作用して、複合体Iの内因性阻害剤である。この阻害効果を媒介するMCJの領域は知られていない。内因性N−MCJペプチド自体がこの効果を再生することができるかどうかを決定するために実験を行った。MCJポリペプチドを、siMCJ/MCF7細胞(MCJが欠如した)から生成したミトコンドリア抽出物へ添加することにより、それらの抽出物において呼吸鎖の複合体Iのin vitroでの活性が阻害され、阻害の度合いは用量依存的であることが、実験により実証された。図5は、様々な濃度でのN−MCJポリペプチドが複合体I活性を阻害することができるかどうかを決定するための実験の結果のグラフを示す。ミトコンドリア抽出物は、siMCJ/MCF7細胞から作製され、複合体I活性アッセイ中に、様々な濃度のアミノ酸配列:MAARGVIAPVGESLRYAEYLQPSAK(配列番号28)を有するMCJポリペプチドの存在下でインキュベートした。ミトコンドリア由来の抽出物中の複合体I活性の阻害パーセントを決定した。図5におけるグラフに示すように、複合体I阻害のパーセントは、増加濃度のMCJポリペプチドとともにインキュベートすると増加した。複合体Iの阻害は、ミトコンドリアによる、より少ないATP生産をもたらし、化学療法剤に対するがん細胞の感受性を増加させる。
実験の結果を図6に示し、それは、内因性MCJが欠如したMCF7/ADR細胞において、3μM濃度の化学療法剤ドキソルビシン、および50μM濃度のTAT−MCJ−MTSポリペプチド(配列番号6)を含有する培地中での細胞のインキュベーションが、(1)3μM濃度の化学療法剤単独、(2)3μM濃度の化学療法剤+50μM濃度のTAT−MCJポリペプチド、例えば配列番号18、および(3)3μM濃度の化学療法剤+50μM濃度のN−MCJポリペプチド、例えば配列番号2で処理した類似の細胞よりも、著しく高レベルのがん細胞死をもたらしたことを示す。また、結果により、MCF7細胞において、3μM濃度のドキソルビシンを含有する培地による処理は、培地単独で処理したMCF7細胞と比較して、有意なレベルの細胞死をもたらすことが実証された。
実験の結果を図7に示し、それは、内因性MCJが欠如したMCF7/ADR細胞において、3μM濃度の化学療法剤ドキソルビシン、および2μM濃度のTAT−MCJ−MTSポリペプチド(配列番号6)を含有する培地中での細胞のインキュベーションが、(1)培地のみ、(2)3μM濃度の化学療法剤単独で処理した類似の細胞よりも、著しく高レベルのがん細胞死をもたらしたことを示す。結果により、MCF7/ADR細胞を、ドキソルビシンを伴わない、2μM濃度のTAT−N−MCJ−MTSポリペプチド(配列番号6)を含有する培地と接触させることは、(1)培地のみまたは(2)3μM濃度の化学療法剤単独における類似の細胞よりも、有意な細胞死をもたらすが、ポリペプチド単独による細胞死のレベルは、MCJポリペプチド(配列番号6)および化学療法剤を用いた処理よりも低いことが示された。
MCJの損失が、化学療法耐性の原因であり得るかどうかに対処するために、乳房腫瘍マウスモデルを使用して実験を行った。過去に生成されたMCJノックアウトマウス[Hatle,K.M.他、(2013年)Mol Cell Biol 33:2302〜2314頁]は、腫瘍を迅速に発症するMMTV−PyMTトランスジェニックマウス[Guy,C.T.他、(1992年)Mol Cell Biol 12:954〜961頁]と交雑させた。腫瘍成長速度は、WTとMCJ KOマウスとの間で同等であった。続いて、両方の群のマウスを、ドキソルビシン(がん治療に関する標準的な化学療法薬)で処理して、腫瘍サイズを12日間追跡した。MMTV−Pyマウスにおける腫瘍のサイズは低減したが、MCJ KO MMTV−Pyマウスにおける乳房腫瘍は、成長し続けたか、または収縮しなかった(図8)。したがって、腫瘍におけるMCJの損失が、乏しい化学療法応答に寄与することを実証し、また化学療法耐性を克服する方法におけるMCJ機能の増加を支持した。
がんおよび化学療法応答におけるMCJの役割
乳がんにおける遺伝子発現を検査するための3つのデータベース(TCGAを含む)からの複合データを有するカプラン−マイヤープロッターウェブサイトを使用して、乳がんが、低レベルのMCJを発現する患者は、腫瘍が、高レベルのMCJを発現する患者に対して、有意に低減された生存を示すことを同定した(図11A)。生存の差は、化学療法を受けた患者に比較を限定すると、より一層顕著であり、低MCJを有する乳腺腫瘍を有する化学療法で処理した患者は、高MCJを有する患者よりも、生存が短かった(図11B)。対比して、患者が内分泌療法を受けた場合は、低MCJ腫瘍患者と高MCJ腫瘍患者との間に差は見られなかった(図11C)。乳がん患者の中でも、ER、PRおよびHerR受容体が欠如しているため「トリプルネガティブ」(TN)と規定される群は、最も悪い予後を示す。TN患者は、内分泌またはハーセプチンで治療することができず、唯一の選択肢として化学療法を残す。これらの患者は、はじめは化学療法に良好に応答するが、腫瘍は、非常に速く再発して、多くの場合転移性となり、利用可能な治療が効かなくなる。結果は、TN群における低MCJ腫瘍を有する、より高頻度の患者が存在することを示した。さらに、化学療法で処理したTN群における生存分析(それらの大部分)により、腫瘍における低MCJ発現は、乏しい生存を予測することが示された(図11D)。まとめると、これらの研究の結果は、原発性乳がんにおける低MCJ発現は、乳がん患者の乏しい化学療法応答を相関することを示す。したがって、多発がんに関する腫瘍におけるMCJ発現の損失は、乏しい転帰および化学療法に対する乏しい応答に関するバイオマーカーとして使用され得る。
MCJは、ミトコンドリアの内因性の負の調節因子である
MCJのsiRNA媒介性ノックダウンを有する(MCF7/SiMCJ細胞)ヒト乳がん細胞株MSF7細胞は、複合体I活性を増加させた。ミトコンドリア呼吸に関して広く認められている代用物であるミトコンドリア酸素消費速度(OCR)を測定するSeahorseX24分析器およびMitoStressアッセイ(Seahorse Bioscience、ノースビレリカ、MA)(製造業者のプロトコールに従って本明細書中の実施例で使用される)を使用して、ミトコンドリア呼吸に対するMCJの影響を検査するために実験を行った。ヒト乳がんMCF7細胞(化学療法に対して感受性であり、MCJを発現する)およびMCF7/siMCJ細胞(化学療法耐性であり、MCJが欠如した)におけるミトコンドリア呼吸の分析は、MCF7細胞におけるOCRに対して、MCF7/siMCJ細胞においてより高い基礎OCRを示した(図12A)。さらに、最大呼吸容量(ミトコンドリアアンカップラーFCCPの添加後に決定される)もまた、MCF7/siMCJ細胞において大幅に高かった(図12A)。さらに、MMTV−Pyマウス[Guy,C.T.他、(1992年)Mol Cell Biol 12:954〜961頁]およびMCJ KO MMTV−Pyマウス由来の原発性乳房腫瘍細胞におけるOCRのSeahorseMitoStress分析により、ヒトMCF7/siMCJ細胞と同様に、基礎OCRおよび最大呼吸容量が、MCJ KO腫瘍細胞よりも高いことが明らかとなった(図12B)。これらの結果により、MCJの損失は、ヒトおよびマウスがん細胞においてミトコンドリア呼吸の増強をもたらすことが実証される。
MCJ機能を回復させて、ミトコンドリア代謝を損なうMCJアゴニストペプチド
MCJ機能を回復させることが、がんにおける化学療法耐性を克服するのに使用され得ることを実証する研究を行った。MCJ機能を回復させて、ミトコンドリア代謝を低減させて、がん化学療法耐性を克服する、最低毒性で正常な組織への送達可能なMCJアゴニストを開発した。
MCJアゴニストペプチドによる処理は、乳がん細胞の化学療法耐性を克服することができる
本明細書中で他に記載されるように、MCF7/ADR細胞は、とりわけドキソルビシン、パクリタキセル、ビンクリスチンを含む広範囲の化学療法薬に対して耐性である。特に、親MCF7細胞と対照を成して、それらは、MCJ発現を全体的に欠如し(図15A)、それらは、増殖に関してはミトコンドリアにより依存している、[Alakhova,E.Y.他、(2010年)J.Control Release 142:89〜100頁を参照]。ドキソルビシンは、MCF7/ADR細胞の増殖に対して影響しなかった(図15B)が、TAT−N−MCJ−mtsおよびMITO−N−MCJペプチドはともに、それら自体で、これらの耐性細胞の増殖を制限するのに劇的な効果を有した(図15B)。実験結果により、MITO−N−MCJペプチドの有効性は、TAT−N−MCJペプチドの有効性より大きい(2〜3倍)ことが示された。「mts」が欠如した対照TAT−N−MCJペプチドは、効果がなかった。MCF7/ADR細胞に対する効果とは対照的に、これらの細胞がドキソルビシンに対して感受性であった(図15C)としても、2つのMCJアゴニストはいずれも、MCF7細胞に対して影響がなかった(図15C)。これらの結果により、2つのMCJアゴニストが、それら自体で多剤耐性乳がん細胞の激増を阻止することができることが示され、また標準的間化学療法よりも大きな有効性が示された。さらに、これらのMCJアゴニストが、MCJ発現をすでに維持するMCF7細胞に影響を及ぼさなかったので、結果により、MCF7/ADR細胞に対する効果は、全般的な毒性の結果ではなく、これらの細胞におけるMCJ活性の回復により媒介される特定の効果であることが示された。MCF7/ADR細胞は、薬剤耐性に関する機構として低MCJ発現を有するように進化させた。
AMLに対するMCJアゴニストの治療効果
急性骨髄性白血病(AML)は、最も一般的な成人の急性白血病であり、小児白血病の20%を示す。細胞傷害性化学療法によるAMLの最前線の治療は、高い寛解率を達成するが、患者の75〜80%が、初期療法後に応答しないか、または再発して、ほとんどの患者が、それらの疾患で死亡する[Stone,R.M.他、(2004年)Hematology Am soc Hematol Edu Program、98〜117頁を参照]。応答は、AMLを有する小児にとって良好であるが、治癒率は、受け入れにくいほど低いままであり(60%未満)、現行の療法は、実質的に即座でかつ長期の副作用を伴って、患者に対して多大な負担を課す。AMLにおける治療としてMCJアゴニストを投与してMCJを回復させるという治療可能性を評価するために実験を行った。Molm13およびMv411 AML細胞は、MCJ発現を全体的に欠如することを見出した。Molm13 AML細胞を、2つのMCJアゴニストであるFlt3阻害剤AC220またはAC220と、本発明者らのMCJアゴニストとの組合せのいずれかで処理した。処理の3日後、生存率を決定した。MITO−N−MCJアゴニストは、Molm13細胞に対して大規模な効果を有し、実質的な細胞死に至る(例えば、図17Aを参照)。TAT−N−MCJ−mtsはまた、単独で、より中程度の効果を有した(図17A)。AC220は、Molm13細胞死を誘導するのに(それらのFlt3突然変異に起因して)有効であったが、依然として生存しているAC220に不応性のわずかな細胞が存在し(図17Aおよび図17B)、この不応性分集団は、AML患者における疾患の再発の原因となり得ると考えられる[Alverez−Calderon,M.A.他、(2015年)Clin Cancer Res 21:1360〜1372頁を参照]。実験結果により、AC220と、MCJアゴニストとの組合せが、特にMITO−N−MCJに関して、この耐性群を効果的に排除することが示された(図17B)。類似の結果が、第2のFlt3突然変異AMLであるMv411を用いて得られた(データは示していない)。
本発明の幾つかの実施形態を、本明細書中で記載および説明してきたが、当業者は、機能を実行して、ならびに/あるいは結果および/または本明細書中に記載する利点の1つまたは複数を得るための様々な他の手段および/または構造を容易に思い描き、かかる変形および/または変更はそれぞれ、本発明の範囲内であると考えられる。より一般的には、当業者は、本明細書中に記載するパラメーター、寸法、材料および形状は全て、例示的であると容易に理解し、実際のパラメーター、寸法、材料および/または形状は、本発明の教示が使用される(単数/複数)特定用途(単数または複数)に依存する。当業者は、本明細書中に記載する本発明の特定の実施形態に対する多くの等価体を認識するか、または単なる日常的な実験を使用して確認することが可能である。したがって、上述の実施形態は、単に例として提示されること、また併記の特許請求の範囲およびその等価体の範囲内で、本発明は、具体的に記載および特許請求される場合とは別のやり方で実施され得ることが理解されよう。本発明は、本明細書中に記載する個々の特徴、システム、物品、材料および/または方法のそれぞれに関する。さらに、2つまたはそれ以上のかかる特徴、システム、物品、材料および/または方法の任意の組合せは、かかる特徴、システム、物品、材料および/または方法が、相互に矛盾しない場合に、本発明の範囲内に含まれる。
発明の態様
[態様1]がん細胞の化学療法感受性を増加させる方法であって、がん細胞を、1つまたは複数の化学療法剤に対するがん細胞の感受性を増加させるのに有効な量で、1つまたは複数の外因性MCJアゴニスト化合物と接触させるステップを含む方法。
[態様2]外因性MCJアゴニスト化合物が、MCJ分子を含む、態様1に記載の方法。
[態様3]MCJ分子が、MCJポリペプチドまたはMCJポリペプチドをコードするポリヌクレオチドである、態様2に記載の方法。
[態様4]がん細胞を接触させるステップが、がん細胞をMCJアゴニスト化合物と接触させる様式で、医薬組成物中の外因性MCJアゴニスト化合物を投与するステップを含む、態様1〜3のいずれかに記載の方法。
[態様5]医薬組成物が、薬学的に許容される担体をさらに含む、態様4に記載の方法。
[態様6]外因性MCJアゴニスト化合物が、1つまたは複数のターゲティング剤を含む、態様1〜5のいずれかに記載の方法。
[態様7]1つまたは複数のターゲティング剤が、細胞浸透性ペプチド、細胞内在化剤、HIV由来のTAT配列、小分子、ポリヌクレオチド、リポソーム、合成ポリペプチド、PEG化リポソーム、アクアソーム、生分解性ポリマー、ナノ粒子、オリゴヌクレオチド、またはポリペプチドを含む、態様6に記載の方法。
[態様8]細胞内在化剤が、TATポリペプチド配列を含み、任意にYGKKRRQRRG(配列番号9)として記載されるTATポリペプチド配列またはその変異体を含む、態様7に記載の方法。
[態様9]外因性MCJアゴニスト化合物が、1つまたは複数のミトコンドリアターゲティング剤を含む、態様1〜8のいずれかに記載の方法。
[態様10]1つまたは複数のミトコンドリアターゲティング剤が、ミトコンドリアターゲティングペプチド、ミトコンドリアへ輸送されるナノ粒子、またはミトコンドリアのためのリポソームベースの送達システムを含む、態様9に記載の方法。
[態様11]1つまたは複数のミトコンドリアターゲティング剤が、ポリペプチドであり、任意に、該ポリペプチドが、GTRTWVPKGLKSP(配列番号10)として記載されるアミノ酸配列またはその変異体を含む、態様9に記載の方法。
[態様12]ミトコンドリアターゲティングペプチドが、FXRFXKFXRFXK(配列番号37)として記載されるアミノ酸配列またはその変異体を含む、態様9に記載の方法。
[態様13]MCJポリペプチドが、MAARGVIAPVGESLRYAEYLQPSAKRPDADVDQQRLVRSL(配列番号1)、MAARGVIAPVGESLRYAEYL(配列番号2)、VIAPVGESL(配列番号3)、またはVGESLRYAEY(配列番号4)、MAARGVIAPVGESLRYAEYLQPSAK*RPDADVDQQRLVRSL(配列番号5)として記載される配列またはその変異体を含む、態様3〜12のいずれかに記載の方法。
[態様14]配列番号1、2、3、4または5の変異体が、それぞれ、配列番号1、2、3、4または5のアミノ酸配列に対して少なくとも75%、80%、85%、90%、95%、97%、98%、99%または100%の配列同一性を有する、態様13に記載の方法。
[態様15]MCJポリペプチドの変異体が、配列番号1、2、3、4または5として記載されるMCJポリペプチドアミノ酸配列の断片を含む、態様13または14に記載の方法。
[態様16]MCJポリペプチド変異体が、MCJポリペプチドのアミノ酸配列の断片を含み、該断片が、それと整列するMCJポリペプチドのアミノ酸配列の領域に対して少なくとも75%、80%、85%、90%、95%、97%、98%、99%または100%の配列同一性を有する、態様13〜15のいずれかに記載の方法。
[態様17]外因性MCJアゴニスト化合物が、YGKKRRQRRGMAARGVIAPVGESLRYAEYLGTRTWVPKGLKSP(配列番号6)、YGKKRRQRRGVIAPVGESLGTRTWVPKGLKSP(配列番号7)、YGKKRRQRRGVGESLRYAEYGTRTWVPKGLKSP(配列番号8)として記載されるアミノ酸配列またはその変異体を有するポリペプチドを含む、態様1〜16のいずれかに記載の方法。
[態様18]がん細胞が、脊椎動物がん細胞であり、任意に哺乳動物がん細胞である、態様1〜17のいずれかに記載の方法。
[態様19]がん細胞が、皮膚細胞、胸部組織細胞、筋細胞、循環細胞、結合組織細胞、骨細胞、外分泌細胞、内分泌細胞、器官細胞、間充織細胞、結合組織細胞、上皮細胞、内皮細胞、神経細胞、膠細胞、腺細胞、間質細胞、腎細胞、甲状腺細胞、幹細胞、造血細胞、リンパ球細胞、骨髄細胞、赤血球細胞、心筋細胞、肝細胞、星状細胞、乏突起膠細胞、または脂肪細胞である、態様1〜18のいずれかに記載の方法。
[態様20]がん細胞のがんが、癌腫、肉腫、白血病、リンパ腫、骨髄腫、神経膠腫、乳がん、卵巣がん、上皮がん、子宮がん、膣がん、前立腺がん、精巣がん、陰茎がん、結腸がん、直腸がん、子宮頸がん、咽喉がん、口腔がん、膵がん、腎臓がん、肝がん、肺がん、黒色腫、基底細胞癌、扁平上皮癌、頭頸部がん、胃がん、骨がん、結合組織がん、膀胱がん、眼がん、鼻腔がん、脂肪がん、甲状腺がん、非ホジキンリンパ腫、小腸がん、ウィルムス腫瘍、胃腸がん、CNSがん、PNSがん、食道がん、カポジ肉腫、胆嚢がん、中皮腫、ホジキンリンパ腫、多発性骨髄腫、骨肉腫、神経芽細胞腫、横紋筋肉腫、副鼻腔がん、網膜芽腫、および唾液がんである、態様1〜19のいずれかに記載の方法。
[態様21]がん細胞が、対象に存在する、態様1〜20のいずれかに記載の方法。
[態様22]がん細胞を、1つまたは複数の化学療法剤と接触させるステップをさらに含む、態様1〜21のいずれかに記載の方法。
[態様23]化学療法剤が、タキサン、アントラサイクリン、細胞傷害性薬物、白金ベースの薬物、代謝拮抗物質、塩基類似体、ヌクレオシド類縁体、ヌクレオチド類似体、葉酸代謝拮抗薬、メトトレキサート、アルカロイド、ビンクリスチン、ビンブラスチン、イリノテカン、エトポシド、ベルケイド、チロシンキナーゼ阻害剤、セリン/スレオニンキナーゼ阻害剤、ブレオマイシン、シクロホスファミド、シトキサン、エベロリムス、またはメトホルミンである、態様22に記載の方法。
[態様24]外因性MCJアゴニスト化合物が、がん細胞においてミトコンドリアATP生産を低減させる、態様1〜23のいずれかに記載の方法。
[態様25]外因性MCJアゴニスト化合物が、がん細胞においてABC輸送体のレベルを減少させる、態様1〜24のいずれかに記載の方法。
[態様26]がん細胞が、内因性MCJ分子を含まない、態様1〜25のいずれかに記載の方法。
[態様27]がん細胞が、内因性MCJ分子を含む、態様1〜25のいずれかに記載の方法。
[態様28]がん細胞が、複数のがん細胞のうちの1つである、態様1〜27のいずれかに記載の方法。
[態様29]複数のがん細胞が、内因性MCJ分子を含む1つまたは複数のがん細胞を含む、態様28に記載の方法。
[態様30]複数のがん細胞が、内因性MCJ分子を含まない1つまたは複数のがん細胞を含む、態様28に記載の方法。
[態様31]複数のがん細胞が、内因性MCJ分子を含まない1つまたは複数のがん細胞および内因性MCJ分子を含む1つまたは複数のがん細胞を含む、態様28に記載の方法。
[態様32]MCJポリペプチドが、1つまたは複数のアセチル化アミノ酸残基を含む、態様3〜31のいずれかに記載の方法。
[態様33]アセチル化アミノ酸残基が、リジン(K)残基であり、任意に、MCJポリペプチドのアミノ酸配列を配列番号1として記載されるアミノ酸配列と整列させた場合に、配列番号1として記載される配列におけるK25位に相当する、態様32の方法。
[態様34]1つまたは複数の細胞においてがんを治療する方法であって、
1つまたは複数のがん細胞を、有効量の少なくとも1つの外因性MCJアゴニスト化合物と接触させて、1つまたは複数のがん細胞においてがんを治療するステップ
を含む、前記方法。
[態様35]外因性MCJアゴニスト化合物が、MCJ分子を含む、態様34に記載の方法。
[態様36]MCJ分子が、MCJポリペプチドまたはMCJポリペプチドをコードするポリヌクレオチドである、態様35に記載の方法。
[態様37]1つまたは複数のがん細胞を接触させるステップが、1つまたは複数のがん細胞を外因性MCJアゴニスト化合物と接触させる様式で、医薬組成物中の外因性MCJアゴニスト化合物を投与するステップを含む、態様34〜36のいずれかに記載の方法。
[態様38]医薬組成物が、薬学的に許容される担体をさらに含む、態様37に記載の方法。
[態様39]外因性MCJアゴニスト化合物が、1つまたは複数のターゲティング剤を含む、態様34〜38のいずれかに記載の方法。
[態様40]1つまたは複数のターゲティング剤が、細胞浸透性ペプチド、合成ポリペプチド、細胞内在化剤、HIV由来のTAT配列、小分子、ポリヌクレオチド、リポソーム、PEG化リポソーム、アクアソーム、生分解性ポリマー、ナノ粒子、オリゴヌクレオチド、またはポリペプチドを含む、態様39に記載の方法。
[態様41]細胞内在化剤が、TATポリペプチド配列を含み、任意にYGKKRRQRRG(配列番号9)として記載されるTATポリペプチド配列またはその変異体を含む、態様40に記載の方法。
[態様42]外因性MCJアゴニスト化合物が、1つまたは複数のミトコンドリアターゲティング剤を含む、態様34〜41のいずれかに記載の方法。
[態様43]1つまたは複数のミトコンドリアターゲティング剤が、ミトコンドリアターゲティングペプチド、ミトコンドリアへ輸送されるナノ粒子、またはミトコンドリアのためのリポソームベースの送達システムを含む、態様42に記載の方法。
[態様44]1つまたは複数のミトコンドリアターゲティング剤が、ポリペプチドであり、任意に、該ポリペプチドが、GTRTWVPKGLKSP(配列番号10)として記載されるアミノ酸配列またはその変異体を含む、態様42に記載の方法。
[態様45]ミトコンドリアターゲティングペプチドが、FXRFXKFXRFXK(配列番号37)として記載されるアミノ酸配列またはその変異体を含む、態様42に記載の方法。
[態様46]MCJポリペプチドが、MAARGVIAPVGESLRYAEYLQPSAKRPDADVDQQRLVRSL(配列番号1)、MAARGVIAPVGESLRYAEYL(配列番号2)、VIAPVGESL(配列番号3)、またはVGESLRYAEY(配列番号4)、MAARGVIAPVGESLRYAEYLQPSAK*RPDADVDQQRLVRSL(配列番号5)として記載される配列またはその変異体を含む、態様36〜45のいずれかに記載の方法。
[態様47]配列番号1、2、3、4または5の変異体が、それぞれ、配列番号1、2、3、4または5のアミノ酸配列に対して少なくとも75%、80%、85%、90%、95%、97%、98%、99%または100%の配列同一性を有する、態様46に記載の方法。
[態様48]MCJポリペプチドの変異体が、配列番号1、2、3、4または5として記載されるMCJポリペプチドアミノ酸配列の断片を含む、態様46または47に記載の方法。
[態様49]MCJポリペプチド変異体が、MCJポリペプチドのアミノ酸配列の断片を含み、該断片が、それと整列するMCJポリペプチドのアミノ酸配列の領域に対して少なくとも75%、80%、85%、90%、95%、97%、98%、99%または100%の配列同一性を有する、態様46〜48のいずれかに記載の方法。
[態様50]外因性MCJアゴニスト化合物が、YGKKRRQRRGMAARGVIAPVGESLRYAEYLGTRTWVPKGLKSP(配列番号6)、YGKKRRQRRGVIAPVGESLGTRTWVPKGLKSP(配列番号7)、YGKKRRQRRGVGESLRYAEYGTRTWVPKGLKSP(配列番号8)として記載されるアミノ酸配列またはその変異体を有するポリペプチドを含む、態様34〜49のいずれかに記載の方法。
[態様51]1つまたは複数のがん細胞が、脊椎動物がん細胞であり、任意に哺乳動物がん細胞である、態様34〜51のいずれかに記載の方法。
[態様52]1つまたは複数のがん細胞が、皮膚細胞、胸部組織細胞、筋細胞、循環細胞、結合組織細胞、骨細胞、外分泌細胞、内分泌細胞、器官細胞、間充織細胞、結合組織細胞、上皮細胞、内皮細胞、神経細胞、膠細胞、腺細胞、間質細胞、腎細胞、甲状腺細胞、幹細胞、造血細胞、リンパ球細胞、骨髄細胞、赤血球細胞、心筋細胞、肝細胞、星状細胞、乏突起膠細胞、または脂肪細胞である、態様34〜51のいずれかに記載の方法。
[態様53]1つまたは複数のがん細胞のがんが、癌腫、肉腫、白血病、リンパ腫、骨髄腫、神経膠腫、乳がん、卵巣がん、上皮がん、子宮がん、膣がん、前立腺がん、精巣がん、陰茎がん、結腸がん、直腸がん、子宮頸がん、咽喉がん、口腔がん、膵がん、腎臓がん、肝がん、肺がん、黒色腫、基底細胞癌、扁平上皮癌、頭頸部がん、胃がん、骨がん、結合組織がん、膀胱がん、眼がん、鼻腔がん、脂肪がん、甲状腺がん、非ホジキンリンパ腫、小腸がん、ウィルムス腫瘍、胃腸がん、CNSがん、PNSがん、食道がん、カポジ肉腫、胆嚢がん、中皮腫、ホジキンリンパ腫、多発性骨髄腫、骨肉腫、神経芽細胞腫、横紋筋肉腫、副鼻腔がん、網膜芽腫、および唾液がんである、態様34〜52のいずれかに記載の方法。
[態様54]1つまたは複数のがん細胞が、内因性MCJ分子を含まない、態様34〜53のいずれかに記載の方法。
[態様55]1つまたは複数のがん細胞が、内因性MCJ分子を含む、態様34〜53のいずれかに記載の方法。
[態様56]1つまたは複数のがん細胞が、対象に存在する、態様34〜55のいずれかに記載の方法。
[態様57]外因性MCJアゴニスト化合物が、1つまたは複数のがん細胞においてミトコンドリアATP生産を低減させる、態様34〜56のいずれかに記載の方法。
[態様58]外因性MCJアゴニスト化合物が、1つまたは複数のがん細胞においてABC輸送体のレベルを減少させる、態様34〜57のいずれかに記載の方法。
[態様59]1つまたは複数のがん細胞を、有効量の1つまたは複数の化学療法剤と接触させるステップをさらに含む、態様34〜58のいずれかに記載の方法。
[態様60]1つまたは複数の化学療法剤が、タキサン、アントラサイクリン、細胞傷害性薬物、白金ベースの薬物、代謝拮抗物質、塩基類似体、ヌクレオシド類縁体、ヌクレオチド類似体、葉酸代謝拮抗薬、メトトレキサート、アルカロイド、ビンクリスチン、ビンブラスチン、イリノテカン、エトポシド、ベルケイド、チロシンキナーゼ阻害剤、セリン/スレオニンキナーゼ阻害剤、ブレオマイシン、シクロホスファミド、シトキサン、エベロリムス、またはメトホルミンである、態様59に記載の方法。
[態様61]1つまたは複数のがん細胞が、複数のがん細胞のうちの1つまたは複数である、態様34〜60のいずれかに記載の方法。
[態様62]複数のがん細胞が、内因性MCJ分子を含まない1つまたは複数のがん細胞を含む、態様61に記載の方法。
[態様63]複数のがん細胞が、内因性MCJ分子を含む1つまたは複数のがん細胞を含む、態様61に記載の方法。
[態様64]複数のがん細胞が、内因性MCJ分子を含まない1つまたは複数のがん細胞、および内因性MCJ分子を含む1つまたは複数のがん細胞を含む、態様61に記載の方法。
[態様65]MCJポリペプチドが、1つまたは複数のアセチル化アミノ酸残基を含む、態様36〜64のいずれかに記載の方法。
[態様66]アセチル化アミノ酸残基が、リジン(K)残基であり、任意に、MCJポリペプチドのアミノ酸を配列番号1として記載されるアミノ酸配列と整列させた場合に、配列番号1として記載される配列におけるK25位に相当する、態様65の方法。
[態様67]治療中のがんにおける化学療法剤の有効性に対する外因性MCJアゴニスト化合物の効果を評価する方法であって、
(a)試験がん細胞を、化学療法剤と接触させるステップと;
(b)試験がん細胞を、外因性MCJアゴニスト化合物とさらに接触させるステップと;
(c)さらに接触させた試験がん細胞においてがんを治療する際の化学療法剤の有効性を決定するステップと;
(d)試験がん細胞に対する化学療法剤の決定された有効性を、外因性MCJアゴニスト化合物と接触させない対照がん細胞においてがんを治療する際の化学療法剤の有効性と比較するステップと
を含み、対照がん細胞においてがんを治療する際の化学療法剤の有効性と比較した、試験がん細胞においてがんを治療する際の化学療法剤の異なる有効性は、がんを治療する際の化学療法剤の有効性に対する外因性MCJアゴニスト化合物の効果を示す、前記方法。
[態様68]外因性MCJアゴニスト化合物が、MCJ分子を含む、態様67に記載の方法。
[態様69]MCJ分子が、MCJポリペプチドまたはMCJポリペプチドをコードするポリヌクレオチドである、態様68に記載の方法。
[態様70]外因性MCJアゴニスト化合物が、1つまたは複数のターゲティング剤を含む、態様67〜69のいずれかに記載の方法。
[態様71]1つまたは複数のターゲティング剤が、細胞浸透性ペプチド、合成ポリペプチド、細胞内在化剤、HIV由来のTAT配列、小分子、ポリヌクレオチド、リポソーム、PEG化リポソーム、アクアソーム、生分解性ポリマー、ナノ粒子、オリゴヌクレオチド、またはポリペプチドを含む、態様70に記載の方法。
[態様72]細胞内在化剤が、TATポリペプチド配列を含み、任意にYGKKRRQRRG(配列番号9)として記載されるTATポリペプチド配列またはその変異体を含む、態様71に記載の方法。
[態様73]外因性MCJアゴニスト化合物が、1つまたは複数のミトコンドリアターゲティング剤を含む、態様67〜72のいずれかに記載の方法。
[態様74]1つまたは複数のミトコンドリアターゲティング剤が、ミトコンドリアターゲティングペプチド、ミトコンドリアへ輸送されるナノ粒子、またはミトコンドリアのためのリポソームベースの送達システムを含む、態様73に記載の方法。
[態様75]1つまたは複数のミトコンドリアターゲティング剤が、ポリペプチドであり、任意に、該ポリペプチドが、GTRTWVPKGLKSP(配列番号10)として記載されるアミノ酸配列またはその変異体を含む、態様73に記載の方法。
[態様76]ミトコンドリアターゲティングペプチドが、FXRFXKFXRFXK(配列番号37)として記載されるアミノ酸配列またはその変異体を含む、態様73に記載の方法。
[態様77]外因性MCJアゴニスト化合物が、接触させた細胞においてミトコンドリアATP生産を低減させる、態様67〜76のいずれかに記載の方法。
[態様78]外因性MCJアゴニスト化合物が、接触させた細胞においてABC輸送体のレベルを減少させる、態様77に記載の方法。
[態様79]MCJポリペプチドが、MAARGVIAPVGESLRYAEYLQPSAKRPDADVDQQRLVRSL(配列番号1)、MAARGVIAPVGESLRYAEYL(配列番号2)、VIAPVGESL(配列番号3)、またはVGESLRYAEY(配列番号4)、MAARGVIAPVGESLRYAEYLQPSAK*RPDADVDQQRLVRSL(配列番号5)として記載される配列またはその変異体を含む、態様69〜78のいずれかに記載の方法。
[態様80]配列番号1、2、3、4または5の変異体が、それぞれ、配列番号1、2、3、4または5のアミノ酸配列に対して少なくとも75%、80%、85%、90%、95%、97%、98%、99%または100%の配列同一性を有する、態様79に記載の方法。
[態様81]MCJポリペプチドの変異体が、配列番号1、2、3、4または5として記載されるMCJポリペプチドアミノ酸配列の断片を含む、態様79または80に記載の方法。
[態様82]MCJポリペプチド変異体が、MCJポリペプチドのアミノ酸配列の断片を含み、該断片が、それと整列するMCJポリペプチドのアミノ酸配列の領域に対して少なくとも75%、80%、85%、90%、95%、97%、98%、99%または100%の配列同一性を有する、態様79〜81のいずれかに記載の方法。
[態様83]外因性MCJアゴニスト化合物が、YGKKRRQRRGMAARGVIAPVGESLRYAEYLGTRTWVPKGLKSP(配列番号6)、YGKKRRQRRGVIAPVGESLGTRTWVPKGLKSP(配列番号7)、YGKKRRQRRGVGESLRYAEYGTRTWVPKGLKSP(配列番号8)として記載されるアミノ酸配列またはその変異体を有するポリペプチドを含む、態様67〜82のいずれかに記載の方法。
[態様84]がん細胞が、脊椎動物がん細胞であり、任意に哺乳動物がん細胞である、態様67〜83のいずれかに記載の方法。
[態様85]がん細胞が、皮膚細胞、胸部組織細胞、筋細胞、循環細胞、結合組織細胞、骨細胞、外分泌細胞、内分泌細胞、器官細胞、間充織細胞、結合組織細胞、上皮細胞、内皮細胞、神経細胞、膠細胞、腺細胞、間質細胞、腎細胞、甲状腺細胞、幹細胞、造血細胞、リンパ球細胞、骨髄細胞、赤血球細胞、心筋細胞、肝細胞、星状細胞、乏突起膠細胞、または脂肪細胞である、態様67〜84のいずれかに記載の方法。
[態様86]がん細胞のがんが、癌腫、肉腫、白血病、リンパ腫、骨髄腫、神経膠腫、乳がん、卵巣がん、上皮がん、子宮がん、膣がん、前立腺がん、精巣がん、陰茎がん、結腸がん、直腸がん、子宮頸がん、咽喉がん、口腔がん、膵がん、腎臓がん、肝がん、肺がん、黒色腫、基底細胞癌、扁平上皮癌、頭頸部がん、胃がん、骨がん、結合組織がん、膀胱がん、眼がん、鼻腔がん、脂肪がん、甲状腺がん、非ホジキンリンパ腫、小腸がん、ウィルムス腫瘍、胃腸がん、CNSがん、PNSがん、食道がん、カポジ肉腫、胆嚢がん、中皮腫、ホジキンリンパ腫、多発性骨髄腫、骨肉腫、神経芽細胞腫、横紋筋肉腫、副鼻腔がん、網膜芽腫、および唾液がんである、態様67〜85のいずれかに記載の方法。
[態様87]外因性MCJアゴニスト化合物が、接触させた試験がん細胞においてミトコンドリアATP生産を低減させる、態様67〜86のいずれかに記載の方法。
[態様88]外因性MCJアゴニスト化合物が、接触させた試験がん細胞においてABC輸送体のレベルを減少させる、態様67〜87のいずれかに記載の方法。
[態様89]化学療法剤が、タキサン、アントラサイクリン、細胞毒、白金ベースの薬物、代謝拮抗物質、塩基類似体、ヌクレオシド類縁体、ヌクレオチド類似体、葉酸代謝拮抗薬、メトトレキサート、アルカロイド、ビンクリスチン、ビンブラスチン、イリノテカン、エトポシド、ベルケイド、チロシンキナーゼ阻害剤、セリン/スレオニンキナーゼ阻害剤、ブレオマイシン、シクロホスファミド、シトキサン、エベロリムス、またはメトホルミンである、態様67〜88のいずれかに記載の方法。
[態様90]試験がん細胞が、内因性MCJ分子を含まない、態様67〜89のいずれかに記載の方法。
[態様91]試験がん細胞が、内因性MCJ分子を含む、態様67〜89のいずれかに記載の方法。
[態様92]試験がん細胞が内因性MCJ分子を含まない場合には、対照細胞が内因性MCJ分子を含まず、試験がん細胞が内因性MCJ分子を含む場合には、対照細胞が内因性MCJ分子を含む、態様90または91に記載の方法。
[態様93]MCJポリペプチドが、1つまたは複数のアセチル化アミノ酸残基を含む、態様69〜92のいずれかに記載の方法。
[態様94]アセチル化アミノ酸残基が、リジン(K)残基であり、任意に、MCJポリペプチドのアミノ酸配列を配列番号1として記載されるアミノ酸配列と整列させた場合に、配列番号1として記載される配列におけるK25位に相当する、態様93の方法。
[態様95]MCJ分子、ターゲティング剤、および任意に細胞内在化剤を含むMCJアゴニスト化合物を含む組成物。
[態様96]MCJ分子が、MCJポリペプチドである、態様95に記載の組成物。
[態様97]外因性MCJアゴニスト化合物が、1つまたは複数のターゲティング剤を含む、態様95または96に記載の組成物。
[態様98]1つまたは複数のターゲティング剤が、細胞浸透性ペプチド、ミトコンドリアターゲティング剤、合成ポリペプチド、細胞内在化剤、HIV由来のTAT配列、小分子、ポリヌクレオチド、リポソーム、PEG化リポソーム、アクアソーム、生分解性ポリマー、ナノ粒子、オリゴヌクレオチド、またはポリペプチドを含む、態様97に記載の組成物。
[態様99]細胞内在化剤が、TATポリペプチド配列を含み、任意にYGKKRRQRRG(配列番号9)として記載されるTATポリペプチド配列またはその変異体を含む、態様95に記載の組成物。
[態様100]外因性MCJアゴニスト化合物が、1つまたは複数のミトコンドリアターゲティング剤を含む、態様95〜99のいずれかに記載の組成物。
[態様101]1つまたは複数のミトコンドリアターゲティング剤が、ミトコンドリアターゲティングペプチド、ミトコンドリアへ輸送されるナノ粒子、またはミトコンドリアのためのリポソームベースの送達システムを含む、態様100に記載の組成物。
[態様102]1つまたは複数のミトコンドリアターゲティング剤が、ポリペプチドであり、任意に、該ポリペプチドが、GTRTWVPKGLKSP(配列番号10)として記載されるアミノ酸配列またはその変異体を含む、態様100に記載の組成物。
[態様103]ミトコンドリアターゲティング剤が、FXRFXKFXRFXK(配列番号37)として記載されるアミノ酸配列またはその変異体を含む、態様100に記載の組成物。
[態様104]MCJポリペプチドが、MAARGVIAPVGESLRYAEYLQPSAKRPDADVDQQRLVRSL(配列番号1)、MAARGVIAPVGESLRYAEYL(配列番号2)、VIAPVGESL(配列番号3)、またはVGESLRYAEY(配列番号4)、MAARGVIAPVGESLRYAEYLQPSAK*RPDADVDQQRLVRSL(配列番号5)として記載される配列またはその変異体を含む、態様96〜103のいずれかに記載の組成物。
[態様105]配列番号1、2、3、4または5の変異体が、それぞれ、配列番号1、2、3、4または5のアミノ酸配列に対して少なくとも75%、80%、85%、90%、95%、97%、98%、99%または100%の配列同一性を有する、態様104に記載の組成物。
[態様106]MCJポリペプチドの変異体が、配列番号1、2、3、4または5として記載されるMCJポリペプチドアミノ酸配列の断片を含む、態様104または105に記載の組成物。
[態様107]MCJポリペプチド変異体が、MCJポリペプチドのアミノ酸配列の断片を含み、該断片が、それと整列するMCJポリペプチドのアミノ酸配列の領域に対して少なくとも75%、80%、85%、90%、95%、97%、98%、99%または100%の配列同一性を有する、態様104〜106のいずれかに記載の組成物。
[態様108]MCJポリペプチドが、1つまたは複数のアセチル化アミノ酸残基を含む、態様96〜107のいずれかに記載の組成物。
[態様109]アセチル化アミノ酸残基が、リジン(K)残基であり、任意に、MCJポリペプチドのアミノ酸配列を配列番号1として記載されるアミノ酸配列と整列させた場合に、配列番号1として記載される配列におけるK25位に相当する、態様108に記載の組成物。
[態様110]態様95〜109のいずれかに記載の組成物および薬学的に許容される担体を含む医薬組成物。
[態様111]がん細胞を死滅させる方法であって、がん細胞を、がん細胞を死滅させるのに有効な量で態様95〜109のいずれかに記載の組成物と接触させるステップを含む、前記方法。
[態様112]がん細胞が、内因性MCJ分子を含まない、態様111に記載の方法。
[態様113]がん細胞が、内因性MCJ分子を含む、態様111に記載の方法。
[態様114]がん細胞が、対象に存在する、態様111〜113のいずれかに記載の方法。
[態様115]対象が、哺乳動物であり、任意にヒトである、態様114に記載の方法。
Claims (63)
- 外因性MCJアゴニスト化合物を含む、がん細胞の化学療法感受性を増加させる方法における使用のための組成物であって、該外因性MCJアゴニスト化合物は、配列番号2のアミノ酸配列または配列番号2に対して少なくとも90%同一性を有するその変異体を含むMCJポリペプチドであって、そのN末端にF X RF X KF X RF X K(配列番号39)として記載されるアミノ酸配列または配列番号39に対して少なくとも85%同一性を有するその変異体を含むミトコンドリアターゲティングペプチドが結合しているMCJポリペプチドを含み、該方法は、がん細胞を、1つまたは複数の化学療法剤に対するがん細胞の感受性を増加させるのに有効な量で、該組成物と接触させるステップを含む、前記組成物。
- 薬学的に許容される担体を含む医薬組成物である、請求項1に記載の組成物。
- 外因性MCJアゴニスト化合物が、1つまたは複数の追加のターゲティング剤を含む、請求項1または2に記載の組成物。
- 1つまたは複数の追加のターゲティング剤が、細胞浸透性ペプチド、細胞内在化剤、HIV由来のTAT配列、小分子、ポリヌクレオチド、リポソーム、合成ポリペプチド、PEG化リポソーム、アクアソーム、生分解性ポリマー、ナノ粒子、オリゴヌクレオチド、またはポリペプチドを含む、請求項3に記載の組成物。
- 細胞内在化剤が、TATポリペプチド配列を含む、請求項4に記載の組成物。
- TATポリペプチド配列が、アミノ酸配列YGKKRRQRRG(配列番号9)または配列番号9に対して少なくとも85%同一性を有するその変異体である、請求項5に記載の組成物。
- がん細胞が、脊椎動物がん細胞である、請求項1〜6のいずれか一項に記載の組成物。
- 脊椎動物がん細胞が、哺乳動物がん細胞である、請求項7に記載の組成物。
- がん細胞が、皮膚細胞、胸部組織細胞、筋細胞、循環細胞、結合組織細胞、骨細胞、外分泌細胞、内分泌細胞、器官細胞、間充織細胞、結合組織細胞、上皮細胞、内皮細胞、神経細胞、膠細胞、腺細胞、間質細胞、腎細胞、甲状腺細胞、幹細胞、造血細胞、リンパ球細胞、骨髄細胞、赤血球細胞、心筋細胞、肝細胞、星状細胞、乏突起膠細胞、または脂肪細胞である、請求項1〜8のいずれか一項に記載の組成物。
- がん細胞のがんが、癌腫、肉腫、白血病、リンパ腫、骨髄腫、神経膠腫、乳がん、卵巣がん、上皮がん、子宮がん、膣がん、前立腺がん、精巣がん、陰茎がん、結腸がん、直腸がん、子宮頸がん、咽喉がん、口腔がん、膵がん、腎臓がん、肝がん、肺がん、黒色腫、基底細胞癌、扁平上皮癌、頭頸部がん、胃がん、骨がん、結合組織がん、膀胱がん、眼がん、鼻腔がん、脂肪がん、甲状腺がん、非ホジキンリンパ腫、小腸がん、ウィルムス腫瘍、胃腸がん、CNSがん、PNSがん、食道がん、カポジ肉腫、胆嚢がん、中皮腫、ホジキンリンパ腫、多発性骨髄腫、骨肉腫、神経芽細胞腫、横紋筋肉腫、副鼻腔がん、網膜芽腫、および唾液がんである、請求項1〜9のいずれか一項に記載の組成物。
- がん細胞が、対象に存在する、請求項1〜10のいずれか一項に記載の組成物。
- 該方法が、がん細胞を、1つまたは複数の化学療法剤と接触させるステップをさらに含む、請求項1〜11のいずれか一項に記載の組成物。
- 化学療法剤が、タキサン、アントラサイクリン、細胞傷害性薬物、白金ベースの薬物、代謝拮抗物質、塩基類似体、ヌクレオシド類縁体、ヌクレオチド類似体、葉酸代謝拮抗薬、メトトレキサート、アルカロイド、ビンクリスチン、ビンブラスチン、イリノテカン、エトポシド、ベルケイド、チロシンキナーゼ阻害剤、セリン/スレオニンキナーゼ阻害剤、ブレオマイシン、シクロホスファミド、シトキサン、エベロリムス、またはメトホルミンである、請求項12に記載の組成物。
- 外因性MCJアゴニスト化合物が、がん細胞においてミトコンドリアATP生産を低減させる、請求項1〜13のいずれか一項に記載の組成物。
- 外因性MCJアゴニスト化合物が、がん細胞においてABC輸送体のレベルを減少させる、請求項1〜14のいずれか一項に記載の組成物。
- がん細胞が、内因性MCJ分子を含まない、請求項1〜15のいずれか一項に記載の組成物。
- がん細胞が、内因性MCJ分子を含む、請求項1〜15のいずれか一項に記載の組成物。
- がん細胞が、複数のがん細胞のうちの1つである、請求項1〜17のいずれか一項に記載の組成物。
- 複数のがん細胞が、内因性MCJ分子を含む1つまたは複数のがん細胞を含む、請求項18に記載の組成物。
- 複数のがん細胞が、内因性MCJ分子を含まない1つまたは複数のがん細胞を含む、請求項18に記載の組成物。
- 複数のがん細胞が、内因性MCJ分子を含まない1つまたは複数のがん細胞および内因性MCJ分子を含む1つまたは複数のがん細胞を含む、請求項18に記載の組成物。
- 外因性MCJアゴニスト化合物を含む、1つまたは複数の細胞においてがんを治療する方法における使用のための組成物であって、該外因性MCJアゴニスト化合物は、配列番号2のアミノ酸配列または配列番号2に対して少なくとも90%同一性を有するその変異体を含むMCJポリペプチドであって、そのN末端にF X RF X KF X RF X K(配列番号39)として記載されるアミノ酸配列または配列番号39に対して少なくとも85%同一性を有するその変異体を含むミトコンドリアターゲティングペプチドが結合しているMCJポリペプチドを含み、該方法は、
1つまたは複数のがん細胞を、有効量の該組成物と接触させて、1つまたは複数のがん細胞においてがんを治療するステップ
を含む、前記組成物。 - 薬学的に許容される担体を含む医薬組成物である、請求項22に記載の組成物。
- 外因性MCJアゴニスト化合物が、1つまたは複数の追加のターゲティング剤を含む、請求項22または23に記載の組成物。
- 1つまたは複数の追加のターゲティング剤が、細胞浸透性ペプチド、合成ポリペプチド、細胞内在化剤、HIV由来のTAT配列、小分子、ポリヌクレオチド、リポソーム、PEG化リポソーム、アクアソーム、生分解性ポリマー、ナノ粒子、オリゴヌクレオチド、またはポリペプチドを含む、請求項24に記載の組成物。
- 細胞内在化剤が、TATポリペプチド配列を含む、請求項25に記載の組成物。
- TATポリペプチド配列が、アミノ酸配列YGKKRRQRRG(配列番号9)または配列番号9に対して少なくとも85%同一性を有するその変異体である、請求項26に記載の組成物。
- 1つまたは複数のがん細胞が、脊椎動物がん細胞である、請求項22〜27のいずれか一項に記載の組成物。
- 脊椎動物がん細胞が、哺乳動物がん細胞である、請求項28に記載の組成物。
- 1つまたは複数のがん細胞が、皮膚細胞、胸部組織細胞、筋細胞、循環細胞、結合組織細胞、骨細胞、外分泌細胞、内分泌細胞、器官細胞、間充織細胞、結合組織細胞、上皮細胞、内皮細胞、神経細胞、膠細胞、腺細胞、間質細胞、腎細胞、甲状腺細胞、幹細胞、造血細胞、リンパ球細胞、骨髄細胞、赤血球細胞、心筋細胞、肝細胞、星状細胞、乏突起膠細胞、または脂肪細胞である、請求項22〜29のいずれか一項に記載の組成物。
- 1つまたは複数のがん細胞のがんが、癌腫、肉腫、白血病、リンパ腫、骨髄腫、神経膠腫、乳がん、卵巣がん、上皮がん、子宮がん、膣がん、前立腺がん、精巣がん、陰茎がん、結腸がん、直腸がん、子宮頸がん、咽喉がん、口腔がん、膵がん、腎臓がん、肝がん、肺がん、黒色腫、基底細胞癌、扁平上皮癌、頭頸部がん、胃がん、骨がん、結合組織がん、膀胱がん、眼がん、鼻腔がん、脂肪がん、甲状腺がん、非ホジキンリンパ腫、小腸がん、ウィルムス腫瘍、胃腸がん、CNSがん、PNSがん、食道がん、カポジ肉腫、胆嚢がん、中皮腫、ホジキンリンパ腫、多発性骨髄腫、骨肉腫、神経芽細胞腫、横紋筋肉腫、副鼻腔がん、網膜芽腫、および唾液がんである、請求項22〜30のいずれか一項に記載の組成物。
- 1つまたは複数のがん細胞が、内因性MCJ分子を含まない、請求項22〜31のいずれか一項に記載の組成物。
- 1つまたは複数のがん細胞が、内因性MCJ分子を含む、請求項22〜31のいずれか一項に記載の組成物。
- 1つまたは複数のがん細胞が、対象に存在する、請求項22〜33のいずれか一項に記載の組成物。
- 外因性MCJアゴニスト化合物が、1つまたは複数のがん細胞においてミトコンドリアATP生産を低減させる、請求項22〜34のいずれか一項に記載の組成物。
- 外因性MCJアゴニスト化合物が、1つまたは複数のがん細胞においてABC輸送体のレベルを減少させる、請求項22〜35のいずれか一項に記載の組成物。
- 該方法が、1つまたは複数のがん細胞を、有効量の1つまたは複数の化学療法剤と接触させるステップをさらに含む、請求項22〜36のいずれか一項に記載の組成物。
- 1つまたは複数の化学療法剤が、タキサン、アントラサイクリン、細胞傷害性薬物、白金ベースの薬物、代謝拮抗物質、塩基類似体、ヌクレオシド類縁体、ヌクレオチド類似体、葉酸代謝拮抗薬、メトトレキサート、アルカロイド、ビンクリスチン、ビンブラスチン、イリノテカン、エトポシド、ベルケイド、チロシンキナーゼ阻害剤、セリン/スレオニンキナーゼ阻害剤、ブレオマイシン、シクロホスファミド、シトキサン、エベロリムス、またはメトホルミンである、請求項37に記載の組成物。
- 1つまたは複数のがん細胞が、複数のがん細胞のうちの1つまたは複数である、請求項22〜38のいずれか一項に記載の組成物。
- 複数のがん細胞が、内因性MCJ分子を含まない1つまたは複数のがん細胞を含む、請求項39に記載の組成物。
- 複数のがん細胞が、内因性MCJ分子を含む1つまたは複数のがん細胞を含む、請求項39に記載の組成物。
- 複数のがん細胞が、内因性MCJ分子を含まない1つまたは複数のがん細胞、および内因性MCJ分子を含む1つまたは複数のがん細胞を含む、請求項39に記載の組成物。
- 治療中のがんにおける化学療法剤の有効性に対する外因性MCJアゴニスト化合物の効果を評価する方法であって、
(a)試験がん細胞を、化学療法剤と接触させるステップと;
(b)試験がん細胞を、外因性MCJアゴニスト化合物とさらに接触させるステップであって、該外因性MCJアゴニスト化合物が、配列番号2のアミノ酸配列または配列番号2に対して少なくとも90%同一性を有するその変異体を含むMCJポリペプチドであって、そのN末端にFXRFXKFXRFXK(配列番号39)として記載されるアミノ酸配列または配列番号39に対して少なくとも85%同一性を有するその変異体を含むミトコンドリアターゲティングペプチドが結合しているMCJポリペプチドを含む、前記ステップと;
(c)さらに接触させた試験がん細胞においてがんを治療する際の化学療法剤の有効性を決定するステップと;
(d)試験がん細胞に対する化学療法剤の決定された有効性を、外因性MCJアゴニスト化合物と接触させない対照がん細胞においてがんを治療する際の化学療法剤の有効性と比較するステップと
を含み、対照がん細胞においてがんを治療する際の化学療法剤の有効性と比較した、試験がん細胞においてがんを治療する際の化学療法剤の異なる有効性は、がんを治療する際の化学療法剤の有効性に対する外因性MCJアゴニスト化合物の効果を示す、前記方法。 - 外因性MCJアゴニスト化合物が、1つまたは複数の追加のターゲティング剤を含む、請求項43に記載の方法。
- 1つまたは複数の追加のターゲティング剤が、細胞浸透性ペプチド、合成ポリペプチド、細胞内在化剤、HIV由来のTAT配列、小分子、ポリヌクレオチド、リポソーム、PEG化リポソーム、アクアソーム、生分解性ポリマー、ナノ粒子、オリゴヌクレオチド、またはポリペプチドを含む、請求項44に記載の方法。
- 細胞内在化剤が、TATポリペプチド配列を含む、請求項45に記載の方法。
- TATポリペプチド配列が、アミノ酸配列YGKKRRQRRG(配列番号9)または配列番号9に対して少なくとも85%同一性を有するその変異体である、請求項46に記載の方法。
- 外因性MCJアゴニスト化合物が、接触させた細胞においてミトコンドリアATP生産を低減させる、請求項43〜47のいずれか一項に記載の方法。
- 外因性MCJアゴニスト化合物が、接触させた細胞においてABC輸送体のレベルを減少させる、請求項48に記載の方法。
- がん細胞が、脊椎動物がん細胞である、請求項43〜49のいずれか一項に記載の方法。
- 脊椎動物がん細胞が、哺乳動物がん細胞である、請求項50に記載の方法。
- がん細胞が、皮膚細胞、胸部組織細胞、筋細胞、循環細胞、結合組織細胞、骨細胞、外分泌細胞、内分泌細胞、器官細胞、間充織細胞、結合組織細胞、上皮細胞、内皮細胞、神経細胞、膠細胞、腺細胞、間質細胞、腎細胞、甲状腺細胞、幹細胞、造血細胞、リンパ球細胞、骨髄細胞、赤血球細胞、心筋細胞、肝細胞、星状細胞、乏突起膠細胞、または脂肪細胞である、請求項43〜51のいずれか一項に記載の方法。
- がん細胞のがんが、癌腫、肉腫、白血病、リンパ腫、骨髄腫、神経膠腫、乳がん、卵巣がん、上皮がん、子宮がん、膣がん、前立腺がん、精巣がん、陰茎がん、結腸がん、直腸がん、子宮頸がん、咽喉がん、口腔がん、膵がん、腎臓がん、肝がん、肺がん、黒色腫、基底細胞癌、扁平上皮癌、頭頸部がん、胃がん、骨がん、結合組織がん、膀胱がん、眼がん、鼻腔がん、脂肪がん、甲状腺がん、非ホジキンリンパ腫、小腸がん、ウィルムス腫瘍、胃腸がん、CNSがん、PNSがん、食道がん、カポジ肉腫、胆嚢がん、中皮腫、ホジキンリンパ腫、多発性骨髄腫、骨肉腫、神経芽細胞腫、横紋筋肉腫、副鼻腔がん、網膜芽腫、および唾液がんである、請求項43〜52のいずれか一項に記載の方法。
- 外因性MCJアゴニスト化合物が、接触させた試験がん細胞においてミトコンドリアATP生産を低減させる、請求項43〜53のいずれか一項に記載の方法。
- 外因性MCJアゴニスト化合物が、接触させた試験がん細胞においてABC輸送体のレベルを減少させる、請求項43〜54のいずれか一項に記載の方法。
- 化学療法剤が、タキサン、アントラサイクリン、細胞毒、白金ベースの薬物、代謝拮抗物質、塩基類似体、ヌクレオシド類縁体、ヌクレオチド類似体、葉酸代謝拮抗薬、メトトレキサート、アルカロイド、ビンクリスチン、ビンブラスチン、イリノテカン、エトポシド、ベルケイド、チロシンキナーゼ阻害剤、セリン/スレオニンキナーゼ阻害剤、ブレオマイシン、シクロホスファミド、シトキサン、エベロリムス、またはメトホルミンである、請求項43〜55のいずれか一項に記載の方法。
- 試験がん細胞が、内因性MCJ分子を含まない、請求項43〜56のいずれか一項に記載の方法。
- 試験がん細胞が、内因性MCJ分子を含む、請求項43〜56のいずれか一項に記載の方法。
- 試験がん細胞が内因性MCJ分子を含まない場合には、対照細胞が内因性MCJ分子を含まず、試験がん細胞が内因性MCJ分子を含む場合には、対照細胞が内因性MCJ分子を含む、請求項57または58に記載の方法。
- MCJペプチド分子を含む外因性MCJアゴニスト化合物を含む組成物であって、該MCJペプチド分子は、配列番号2のアミノ酸配列または配列番号2に対して少なくとも90%同一性を有するその変異体を含み、そのN末端にFXRFXKFXRFXK(配列番号39)として記載されるアミノ酸配列または配列番号39に対して少なくとも85%同一性を有するその変異体を含むミトコンドリアターゲティングペプチドが結合している、前記組成物。
- 外因性MCJアゴニスト化合物が、1つまたは複数の追加のターゲティング剤を含み、1つまたは複数の追加のターゲティング剤が、細胞浸透性ペプチド、ミトコンドリアターゲティング剤、合成ポリペプチド、細胞内在化剤、HIV由来のTAT配列、小分子、ポリヌクレオチド、リポソーム、PEG化リポソーム、アクアソーム、生分解性ポリマー、ナノ粒子、オリゴヌクレオチド、またはポリペプチドを含む、請求項60に記載の組成物。
- 細胞内在化剤が、TATポリペプチド配列を含む、請求項60に記載の組成物。
- TATポリペプチド配列が、アミノ酸配列YGKKRRQRRG(配列番号9)または配列番号9に対して少なくとも85%同一性を有するその変異体である、請求項62に記載の組成物。
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