JP6914505B2 - 新規ペプチド及びその応用 - Google Patents
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Description
また、特許文献2では、銅鉱石、銅精鉱等の砒素を含有する含銅物から浮遊選鉱により砒素鉱物を分離する際に、ポリエチレンアミン類等のキレート剤を抑制剤として用いる方法が提案されている。
<2> 配列番号1〜3のいずれかのアミノ酸配列からなるペプチド。
<3> <1>又は<2>に記載のペプチドをコードする核酸。
<4> <3>に記載の核酸を含むベクター。
<5> <4>に記載のベクターが導入された形質転換体。
<6> <1>又は<2>に記載のペプチドを表面に提示した微生物であって、ウイルスを含む概念である微生物。
<7> <1>又は<2>に記載のペプチドが固定された担体。
<8> <7>に記載の担体を含む精製カラム。
<9> <1>又は<2>に記載のペプチドを黄銅鉱に接触させる工程を含む黄銅鉱の選別方法。
<10> 黄銅鉱を含む鉱物粒子が分散した液に<6>に記載の微生物を添加する工程を含む<9>に記載の黄銅鉱の選別方法。
<11> 黄銅鉱を含む鉱物粒子が分散した液に<7>に記載の担体を添加する工程を含む<9>に記載の黄銅鉱の選別方法。
<12> 黄銅鉱を含む鉱物粒子が分散した液を<8>に記載の精製カラムに通過させる工程を含む<9>に記載の黄銅鉱の選別方法。
<13> <1>又は<2>に記載のペプチドを黄銅鉱に接触させて浮遊選鉱を行う<9>に記載の黄銅鉱の選別方法。
本明細書において「〜」を用いて示された数値範囲は、「〜」の前後に記載される数値をそれぞれ最小値及び最大値として含む範囲を示す。
アミノ酸配列の記載は左側がN末端側であり、アミノ酸残基は当分野で周知の一文字表記(例えば、グリシン残基であれば「G」)又は三文字表記(例えば、グリシン残基であれば「Gly」)を用いて表記する。
本開示のペプチドの一態様は、下記(a)〜(c)から選択されるいずれか1種である。
(a)配列番号1のアミノ酸配列を含むペプチド。
(b)配列番号1において1個若しくは数個のアミノ酸残基が置換、欠失、又は付加されたアミノ酸配列を含み、かつ、黄銅鉱への結合能を有するペプチド。
(c)配列番号1のアミノ酸配列と90%以上の配列同一性を有するアミノ酸配列を含み、かつ、黄銅鉱への結合能を有するペプチド。
(d)配列番号1のアミノ酸配列からなるペプチド。
(e)配列番号1において1個若しくは数個のアミノ酸残基が置換、欠失、又は付加されたアミノ酸配列からなり、かつ、黄銅鉱への結合能を有するペプチド。
(f)配列番号1のアミノ酸配列と90%以上の配列同一性を有し、かつ、黄銅鉱への結合能を有するペプチド。
LLVLRIIGWVMG(配列番号1)
LQVLRIIGWVMG(配列番号2)
HLVLRIIGWVMG(配列番号3)
本開示の核酸は、本開示のペプチドをコードするものである。本開示の核酸は、DNA、RNA、DNA/RNAキメラのいずれであってもよい。また、本開示の核酸は、一本鎖であっても二本鎖であってもよい。一本鎖の場合、本開示のペプチドをコードするセンス鎖であってもよく、センス鎖に対して相補的な配列を有するアンチセンス鎖であってもよい。二本鎖の場合、二本鎖DNA、二本鎖RNA、DNA及びRNAハイブリッドのいずれであってもよい。
本開示のベクターは、本開示の核酸を含むものである。本開示のベクターは、本開示の核酸をベクター中のプロモーターの下流に機能的に連結することにより作製することができる。
本開示の形質転換体は、本開示のベクターが導入されたものである。
ベクターが導入される宿主としては、細菌、酵母、昆虫細胞、哺乳動物細胞等がある。細菌としては、エシェリヒア属菌、バチルス属菌等が挙げられる。哺乳動物細胞としては、HeLa細胞、COS−7細胞、CHO細胞、CV−1細胞等が挙げられる。
宿主にベクターを導入する方法としては、リポフェクション法、リン酸カルシウム法、マイクロインジェクション法、プロトプラスト融合法、エレクトロポレーション法、DEAEデキストラン法、遺伝子銃法等が挙げられる。
本開示の微生物は、本開示のペプチドを表面に提示したものである。ここで、「微生物」は、ウイルスを含む概念として定義される。本開示の微生物としては、本開示のペプチドを表面に提示できるものであれば特に制限されず、例えば、バクテリオファージ(以下、単に「ファージ」ともいう。)が挙げられる。
本開示の担体は、本開示のペプチドが固定化されたものである。担体の表面に本開示のペプチドを固定化する手法としては、当分野で公知の手法を用いることができる。
本開示の精製カラムは、本開示の担体を有するものである。本開示の精製カラムは、例えば、後述する黄銅鉱の選別方法に用いることができる。
本開示の黄銅鉱の選別方法は、本開示のペプチドを黄銅鉱に接触させる工程を含むものである。上述したとおり、本開示のペプチドは黄銅鉱への結合能を有するため、本開示のペプチドを黄銅鉱に接触させることにより、黄銅鉱を選別することができる。
黄銅鉱に結合するペプチドの選択には、12個のアミノ酸残基がランダムに結合したM13バクテリオファージライブラリーを用いた。具体的には、M13バクテリオファージライブラリーを粒子径75μm以下に粉砕した黄銅鉱に接触させ、黄銅鉱に結合したファージのみを回収した。そして、回収したファージを大腸菌に感染させて増殖させた後、再び黄銅鉱に接触させ、黄銅鉱に結合したファージのみを回収した。この結合・回収操作(パニング)を4回繰り返し、黄銅鉱への結合能が高いファージを単離した。
配列番号1のアミノ酸配列のN末端側に3個のグリシン残基を付加したペプチドをFmoc固相合成法により化学合成し、N末端を蛍光色素で修飾した。以下、この合成したペプチドをC34ペプチドとも称する。
粒子径75μm以下の黄銅鉱粒子、硫砒銅鉱粒子、及び黄鉄鉱粒子を10g/Lとなるようにそれぞれ純水に懸濁し、水酸化ナトリウムを用いてpHを7.0に調整した。得られた懸濁液に、C34ファージを1×1012pfu/Lとなるように添加した。なお、C34ファージの代わりにペプチドを提示していないファージ(nullファージ)を用いたものをコントロールとした。
粒子径75μm以下の黄銅鉱粒子及び硫砒銅鉱粒子を10g/Lとなるようにそれぞれ純水に懸濁し、水酸化ナトリウムを用いてpHを7.0に調整した。得られた懸濁液に、C34ペプチドを100ng/Lとなるように添加し、5分間静置した。その後、粒子の凝集状態を可視光で顕微鏡観察し、さらに、蛍光フィルタ(励起波長:450〜490nm、観察波長:510nm)を用いて顕微鏡観察した。
粒子径75〜100μmに篩い分けした黄銅鉱粒子及び硫砒銅鉱粒子を100g/Lとなるようにそれぞれ純水に懸濁し、水酸化ナトリウムを用いてpHを7.0に調整した。得られた懸濁液に、C34ファージを1×1013pfu/Lとなるように添加した。ボルテックスミキサーを使用して1分間撹拌した後、懸濁液中の粒子が全て沈降するまで5分間静置した。なお、C34ファージを添加していないものをコントロールとした。
付着確率(%)=(気泡に粒子が付着した回数÷30)×100
Claims (13)
- 配列番号1〜3のいずれかのアミノ酸配列を含むペプチド。
- 配列番号1〜3のいずれかのアミノ酸配列からなるペプチド。
- 請求項1又は2に記載のペプチドをコードする核酸。
- 請求項3に記載の核酸を含むベクター。
- 請求項4に記載のベクターが導入された形質転換体。
- 請求項1又は2に記載のペプチドを表面に提示した微生物であって、ウイルスを含む概念である微生物。
- 請求項1又は2に記載のペプチドが固定された担体。
- 請求項7に記載の担体を含む精製カラム。
- 請求項1又は2に記載のペプチドを黄銅鉱に接触させる工程を含む黄銅鉱の選別方法。
- 黄銅鉱を含む鉱物粒子が分散した液に請求項6に記載の微生物を添加する工程を含む請求項9に記載の黄銅鉱の選別方法。
- 黄銅鉱を含む鉱物粒子が分散した液に請求項7に記載の担体を添加する工程を含む請求項9に記載の黄銅鉱の選別方法。
- 黄銅鉱を含む鉱物粒子が分散した液を請求項8に記載の精製カラムに通過させる工程を含む請求項9に記載の黄銅鉱の選別方法。
- 請求項1又は2に記載のペプチドを黄銅鉱に接触させて浮遊選鉱を行う請求項9に記載の黄銅鉱の選別方法。
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JP2017029308A JP6914505B2 (ja) | 2017-02-20 | 2017-02-20 | 新規ペプチド及びその応用 |
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