JP6895975B2

JP6895975B2 - 組換えｔ細胞受容体を含む組成物及びライブラリー並びに組換えｔ細胞受容体を使用する方法

Info

Publication number: JP6895975B2
Application number: JP2018535173A
Authority: JP
Inventors: アデカンルオドゥンシ; 武正辻; 順子松崎
Original assignee: Health Research Inc
Current assignee: Health Research Inc
Priority date: 2016-01-06
Filing date: 2017-01-06
Publication date: 2021-06-30
Anticipated expiration: 2037-01-06
Also published as: EP3399985A4; ES2909150T3; CN108778291B; EP3399985A2; WO2017120428A3; RU2018124506A; WO2017120428A2; RU2752528C2; EP3399985B1; RU2018124506A3; US20190275081A1; DK3399985T3; SA518391973B1; US11020431B2; AU2017205637A1; CN108778291A; JP2019506154A; AU2017205637B2; CA3010416A1

Description

関連出願の相互参照
本出願は、２０１６年１月６日出願の米国特許仮出願第６２／２７５，６００号に対して優先権を主張するものであり、その開示は、参照によって本明細書に組み込まれる。

本開示は、概して、免疫療法に関し、より詳しくは、Ｔ細胞に直接腫瘍認識能力（direct tumor recognition capability）を付与することができる組換えＴ細胞受容体に関する。

腫瘍抗原特異的Ｔ細胞は、腫瘍抗原ペプチド／ＨＬＡ複合体に特異的である特有のＴ細胞受容体（ＴＣＲ）のα鎖及びβ鎖の複合体を用いてがん細胞を認識し、殺傷する。極めて多様であるＴＣＲのα／β配列は、ペプチド特異性、ＨＬＡ拘束性（HLA restriction）、及び認識の強度を単独で決定する。腫瘍抗原特異的ＴＣＲを有する、多クローン的に増殖した末梢性Ｔ細胞の遺伝子工学は、がん患者の自己（由来）遺伝子操作されたＴ細胞（autologous gene-engineered T cells）を使用する養子Ｔ細胞療法に使用可能な多数の腫瘍抗原特異的Ｔ細胞を生成する。現在のところ、臨床治験では僅かな治療的ＴＣＲ遺伝子しか試験されていないため、この有力な治療戦略を患者に適用する際の適用性は、がん細胞における抗原発現によって限定されるだけでなく、患者のＨＬＡ型によっても限定されるため、著しく制限される。従って、組換えＴＣＲを含む養子免疫療法に使用するための改善された組成物及び方法の必要性が、未だ満たされていない。本開示は、この必要性を満たす。

本開示は、一態様において、ＴＣＲのα鎖及び／又はβ鎖をコードする組換えポリヌクレオチドを含む改変ヒトＴ細胞（modified human T cell）を提供し、ここで、前記ＴＣＲは、後に詳述するＡＬ、ＫＱ、ＰＰ、１９３０５ＣＤ８、ＢＢ、ＫＢ、ＳＴ、ＪＤ、１９３０５ＤＰ、ＰＢ−Ｐ、ＰＢ−Ｔ又はＰＢ１３．２と称される複数のＴＣＲのうちの一つである。別の態様において、本開示は、がんであると診断されたか、がんを有することが疑われるか、がんの発生又は再発のリスクがある個体の発症予防及び／又は治療のための方法を含み、ここで、前記がんは、ＮＹ−ＥＳＯ−１抗原及び／又はそれと高度に相同であるＬＡＧＥ−１抗原を発現するがん細胞を含み、前記方法は、本開示の組換えＴＣＲを発現する改変ヒトＴ細胞を前記個体に投与することを含む。

別の態様において、本開示は、ＴＣＲをコードする発現ベクターを含み、ここで、前記ＴＣＲは、後に詳述する１９３０５ＤＰＡＬ、ＫＱ、ＰＰ、１９３０５ＣＤ８、ＢＢ、ＫＢ、ＳＴ、ＪＤ、ＰＢ−Ｐ、ＰＢ−Ｔ又はＰＢ１３．２の配列を有するα鎖及び／又はβ鎖を含む。

別の態様において、本開示は、複数の発現ベクターを含むライブラリーを提供し、ここで、前記発現ベクターは、後に詳述するＴＣＲ１９３０５ＤＰ、ＡＬ、ＫＱ、ＰＰ、１９３０５ＣＤ８、ＢＢ、ＫＢ、ＳＴ、ＪＤ、ＰＢ−Ｐ、ＰＢ−Ｔ又はＰＢ１３．２として示されるＴＣＲα鎖及びβ鎖の群から選択される少なくとも１つのα鎖及び／又はβ鎖又はそれらの組み合わせをコードする。一つの例において、前記ライブラリーは、後に詳述するＪＭ、５Ｂ８、ＳＢ９５ＴＣＲのα鎖、β鎖又はそれらの組み合わせをコードする少なくとも１つの発現ベクターを更に含み得る。

別の態様において、本開示は、ＮＹ−ＥＳＯ−１／ＬＡＧＥ−１ポジティブがんを有する診断されたか、又は、該がんを有することが疑われる個体のＨＬＡ型に少なくとも部分的に基づいて本開示のライブラリーから発現ベクターを選択すること、及び、前記選択された前記発現ベクターを、前記診断された個体の免疫細胞への前記発現ベクターの導入に使用するためにパーティー（party；「当事者」ともいう。）に配布（distributing）することを含む方法を提供する。

別の態様において、本開示は、本開示の発現ベクターライブラリーから発現ベクターを選択すること、及び、ＮＹ−ＥＳＯ−１／ＬＡＧＥ−１ポジティブがんを有すると診断された個体から得られた免疫細胞に前記発現ベクターを導入することを含む方法を提供し、ここで、前記発現ベクターによってコードされるＴＣＲのＨＬＡ型は、前記個体のＨＬＡ型に適合し、前記方法は、前記発現ベクターを含む前記免疫細胞を、それを必要とする個体に導入することを任意で含む。

別の態様において、本開示は、個体がＮＹ−ＥＳＯ−１／ＬＡＧＥ−１ポジティブがんを有するか否かを判定するために前記個体からの試料（前記個体に由来する試料）を試験すること、及び、前記個体がＮＹ−ＥＳＯ−１／ＬＡＧＥ−１ポジティブがんを有するという判定に続いて前記個体のＨＬＡ型に少なくとも部分的に基づいて本開示のライブラリーから発現ベクターを選択すること、及び、前記個体の免疫細胞に発現ベクターを導入することを含み、前記方法は、前記発現ベクターを含む前記免疫細胞を前記個体に導入することを任意で更に含む。

別の態様において、本開示は、免疫療法における使用のために本開示のライブラリーからＴＣＲを選択及び／又は回収（retrieving）するための、コンピューターを用いた方法（computer-based methods）を提供する。幾つかの実施形態において、本開示は、複数のＴＣＲのヌクレオチド及び／又はアミノ酸配列、又は、複数のＴＣＲの他の複数の印（indicia）を含むデータベースを含む。特定の幾つかの実施形態において、本開示は、本開示のライブラリーのＴＣＲを試料のＨＬＡ型と適合させるようにプログラムされたプロセッサーを含むシステムを含む。

図１Ａ〜図１Ｄは、本開示のベクターについて、図示による説明を提供する。図１Ａ。Ｔ細胞への形質導入のためにマウス幹細胞ウイルス（ＭＳＣＶ）由来ベクターが広く使用されており、これは、ＭＳＣＶ末端反復配列（long terminal repeats；ＬＴＲ）による強力なプロモーター活性、及び造血細胞における導入遺伝子発現のｉｎｖｉｖｏ安定性がもたらされるからである。プラスミド中の３’−ＬＴＲは発現において重要であり、これは、Ｔ細胞などの宿主細胞への組み込みに際して３’−ＬＴＲが５’−ＬＴＲにコピーされ、導入遺伝子の転写を担うからである。一方、５’−ＬＴＲはウイルス産生の転写を担う。古典的ＭＳＣＶ由来ベクター（ｐＭＩＧ−ＩＩ及びｐＭＩＧ−ｗ）の模式図を図１Ａに示す。両ベクターは、ＭＳＣＶ由来ＬＴＲを５’及び３’部位に有し、また、パッケージングシグナル（Ψ）、多重クローニング部位（multiple cloning sites；ＭＣＳ）を有する。導入遺伝子がＭＣＳにクローニングされ、配列内リボソーム進入部位（internal ribosomal entry site；ＩＲＥＳ）、及び形質導入された細胞を効率的に検出するための緑色蛍光タンパク質遺伝子（green fluorescent protein gene；ＧＦＰ）がこれに続く。ｐＭＩＧ−ｗベクターは、導入遺伝子の発現を増強するウッドチャック肝炎ウイルス転写後調節エレメント（woodchuck hepatitis virus post-transcriptional regulatory element；ＷＲＥ）を更に有する。最近のレトロウイルスベクターには、市販のレトロウイルスベクターであるｐＤＯＮ−５（Clontech）に見られるような更なる改変（modifications；「修飾」ともいう。）が導入されている。マウス白血病ウイルス（murine leukemia virus；ＭＬＶ）由来ベクターであるｐＤＯＮ−５は、ウイルスパッケージング細胞株（virus packaging cell lines）における強力なＣＭＶプロモーター活性による増強されたウイルス産生のために、５’−ＬＴＲをＣＭＶ／ＭＬＶハイブリッドＬＴＲで置換する。また、ヒト伸長因子１α遺伝子由来の部分イントロン（partial intron）を導入してスプライスアクセプター部位（ＳＡ）を提供し、これは内在的なスプライスドナー部位（ＳＤ）と共にスプライシングを誘導し発現を増強する。Ｔ細胞において高レベルの導入遺伝子（ＴＣＲ）発現を誘導する高力価レトロウイルスを産生するレトロウイルスベクターを作製するために、５’−ＬＴＲからｐＤＯＮ−５プラスミドのスプライスアクセプター部位を含むイントロンまでＤＮＡ断片を増幅した。フォワードプライマーは、５’−ＬＴＲの前にＳｇｒＡＩ制限酵素認識部位が付加されるように設計され、リバースプライマーは、イントロンの後にＮｏｔＩ及びＳａｌＩ部位が付加されるように設計された。ＰＣＲ増幅断片をＳｇｒＡＩ及びＳａｌＩで処理し、ｐＭＩＧ−ＩＩ及びｐＭＩＧ−ｗプラスミドに挿入して、５’−ＬＴＲからＧＦＰまでを置換した。図示のプラスミドは、クローニングのためにＮｏｔＩ及びＳａｌＩ認識部位のみを有する。特定の６−ｍｅｒ（塩基長）ヌクレオチド配列を認識するＳａｌＩの使用は好ましいことではなく、それは、この配列が遺伝子中に高い頻度で存在し、切断をもたらす虞があるからである。殆どのＴＣＲ導入遺伝子において出現しないと考えられる更なる制限酵素認識部位を提供するために、ＮｏｔＩ制限部位を有するフォワードプライマー、及びＰａｃＩ−ＳａｌＩ部位を有するリバースプライマーを用いて１．８ｋｂのＤＮＡ断片（スタッファー（Stuffer））を増幅した。増幅された断片をＮｏｔＩ及びＳａｌＩ制限酵素で処理し、新しいプラスミドに挿入した。ＴＣＲ発現カセットを、ＮｏｔＩ制限部位を有するフォワードプライマー、及びＰａｃＩ制限酵素部位を有するリバースプライマーで増幅した。増幅された発現カセットをＮｏｔＩ及びＰａｃＩ制限酵素で処理し、新しいプラスミドに挿入した。多クローン性活性化Ｔ細胞上における１９３０５ＤＰ−ＴＣＲの発現。末梢血単核球（peripheral blood mononuclear cells；ＰＢＭＣ）に由来する多クローン性活性化Ｔ細胞について、β鎖の可変部がＶβ８サブタイプである１９３０５ＤＰ−ＴＣＲをコードするレトロウイルスベクターを用いて形質導入を２回行った。発現は、抗ＣＤ４及び抗ＣＤ８抗体と共に、抗ＴＣＲＶβ８抗体を用いた染色により測定した。１９３０５ＤＰ−ＴＣＲ形質導入Ｔ細胞によるがん細胞認識。１９３０５ＤＰ−ＴＣＲ形質導入Ｔ細胞を、ＮＹ−ＥＳＯ−１^＋ＳＫ−ＭＥＬ−３７及びＮＹ−ＥＳＯ−１⁻ＳＫ−ＭＥＬ−２９メラノーマ細胞株と共に、Golgi Stopの存在下で、６時間、共培養し、細胞内ＩＦＮ−γ染色を細胞表面ＣＤ８染色と併用して、ＩＦＮ−γ産生を測定した。図４Ａ。ＴＣＲ発現のために使用されるレトロウイルスベクター。ＬＴＲ：末端反復配列、Ψ：パッケージシグナル、ＭＣＳ：多重クローニング部位、ＩＲＥＳ：配列内リボソーム進入部位、ｅＧＦＰ：高感度緑色蛍光タンパク質（enhanced green fluorescent protein）。図４Ｂ。ＴＣＲ発現カセット。（Ｉ）ＴＣＲβ鎖及びα鎖をコードするｃＤＮＡ配列は、GSG（Gly-Ser-Gly）リンカー及びＰ２Ａリボソームスキッピング配列によって連結されている。（ＩＩ）ＴＣＲβ鎖及びα鎖をコードするｃＤＮＡ配列は、フューリンプロテアーゼ認識部位（RAKR（Arg-Ala-Lys-Arg）（SEQ ID NO:59））、SGSG（Ser-Gly-Ser-Gly）（SEQ ID NO:60）リンカー、Ｖ５エピトープ、及びＰ２Ａリボソームスキッピング配列によって連結されている。ＨＬＡ−Ａ^＊０２拘束性Ｔ細胞クローン上におけるＣＤ４及びＣＤ８分子の細胞表面発現。１９３０５ＤＰ−ＴＣＲＣＤ４／ＣＤ８ダブルポジティブＴ細胞クローン、及びＡＬＣＤ８シングルポジティブＴ細胞クローンを、抗ＣＤ４及び抗ＣＤ８モノクローナル抗体によって染色し、フローサイトメトリーによって分析した。がん標的の認識における遮断抗体（blocking antibodies）の影響。１９３０５ＤＰ−ＴＣＲＣＤ４／ＣＤ８ダブルポジティブＴ細胞クローン及びＪＤＣＤ８シングルポジティブＴ細胞クローンを、ＨＬＡ−Ａ^＊０２＋ＮＹ−ＥＳＯ−１＋メラノーマ細胞株ＭＺ−ＭＥＬ−９と共に、図示された抗体の存在下又は非存在下で、共培養した。抗ＨＬＡクラスＩ抗体（ａＡＢＣ）は、１９３０５ＤＰ及びＪＤの両方による認識を阻害した。これに対して、２つの抗ＣＤ８抗体は、ＪＤによる認識を有意に阻害したが、１９３０５ＤＰによる認識は阻害されず、がん標的のＣＤ８非依存性認識（CD8-independent recognition）を示した。^＊は有意（ｐ＜０．０５）の阻害を示している。ＮＹ−ＥＳＯ−１ペプチド認識におけるアラニン置換の影響。ＮＹ−ＥＳＯ−１（１５７−１７０）ペプチド（ＤＰ４ペプチド SLLMWITQCFLPVF（SEQ ID NO:61）中のアミノ酸残基の各々を、アラニン残基で置換した。ＨＬＡ−Ａ^＊０２ネガティブ及びＮＹ−ＥＳＯ−１ポジティブがん細胞を、アラニン置換（１−１４）又は天然ＤＰ４ペプチド（ＤＰ４）で、パルスするか又は非パルス（−）とした。１９３０５ＤＰＣＤ４／ＣＤ８ダブルポジティブＴ細胞クローン、ＡＬＣＤ８シングルポジティブＴ細胞クローン及びＪＤＣＤ８シングルポジティブＴ細胞クローンによる認識を、上澄みにおけるＩＦＮ−γ測定により観察した。部位２、３、４、５、６及び７（LLMWIT（SEQ ID NO: 62））のアミノ酸のアラニン置換は、１９３０５ＤＰによる認識を有意に低下させたことから、これらの残基はＴ細胞認識にとって重要であることが示された。ｉｎｓｉｌｉｃｏ分析によって、ＮＹ−ＥＳＯ−１及びＬＡＧＥ−１を除いて、LLMWIT配列を有する既知のタンパク質が存在しないことが示された。１９３０５ＤＰ−ＴＣＲ形質導入Ｔ細胞のｉｎｖｉｖｏ抗腫瘍活性。ＮＯＤ／Ｓｃｉｄ／ＩＬ−２Ｒｇ鎖欠損（ＮＳＧ）マウスに、１×１０^６個のＨＬＡ−Ａ２^＋ＮＹ−ＥＳＯ−１^＋Ａ３７５細胞株を皮下注射した。末梢血単核球（ＰＢＭＣ）を多クローン的に活性化し、レトロウイルスベクターによって１９３０５ＤＰ−ＴＣＲ、ＡＬ−ＴＣＲ又は不適切（irrelevant；「無関係」ともいう。）ＴＣＲで形質導入した。１１日目に、２．５×１０^５個のＴＣＲ形質導入Ｔ細胞を静脈注射した。デジタルキャリパー（digital caliper）によるＴ細胞注入後、２日おきに腫瘍体積を測定した。１９３０５−ＴＣＲ形質導入Ｔ細胞は、腫瘍成長を有意に阻害（図８Ａ）し、また、生存を有意に延長（図８Ｂ）した。１９３０５ＤＰ−ＴＣＲ形質導入Ｔ細胞で治療した６匹のマウスのうち５匹は４０日目に腫瘍がなく、ＡＬ−ＴＣＲ形質導入Ｔ細胞を注射した６匹のマウスのうち４匹がこの時点で腫瘍を有していた。１９３０５ＤＰ−ＴＣＲを形質導入したＣＤ８＋及びＣＤ４＋Ｔ細胞のｉｎｖｉｔｒｏＣＴＬ活性。ＣＤ４^＋又はＣＤ８^＋Ｔ細胞を、ビオチン結合型抗ＣＤ４又は抗ＣＤ８抗体、続いて抗ビオチンDynabeadsを用いて、ＰＢＭＣから枯渇（depleted）させた。ＣＤ４枯渇及びＣＤ８枯渇ＰＢＭＣを多クローン的に活性化し、レトロウイルスベクターによって１９３０５ＤＰ−ＴＣＲ、ＡＬ−ＴＣＲ又は不適切ＴＣＲで形質導入した。（図９Ａ）ｉｎｖｉｖｏ試験の前に、ＴＣＲで形質導入された複数のＣＤ８^＋（ＣＤ４枯渇細胞）細胞及びＣＤ４^＋（ＣＤ８枯渇細胞）細胞の純度を、フローサイトメトリーによって決定した。（図９Ｂ）図示されたＴＣＲで形質導入されたＣＤ８^＋又はＣＤ４^＋Ｔ細胞のＨＬＡ−Ａ２^＋ＮＹ−ＥＳＯ−１^＋Ｍｅｌ６２４．３８細胞株に対する細胞傷害活性を、４時間のインキュベーション後のCalcein-AMアッセイによって試験した。（図９Ｃ）図示されたＴＣＲで形質導入されたＣＤ４^＋又はＣＤ８^＋Ｔ細胞と共培養した後のがん細胞のアポトーシス細胞死（apoptotic cell death）。ＨＬＡ−Ａ２^＋ＮＹ−ＥＳＯ−１^＋Ａ３７５細胞株（２．５×１０^５）を５×１０^５個のＴ細胞と共に２０時間、共培養した。アポトーシス細胞死は、アネキシンＶ及びＰＩ染色によって決定した。１９３０５ＤＰ−ＴＣＲ形質導入ＣＤ４^＋Ｔ細胞は、短期間の細胞傷害アッセイによりＣＤ８^＋Ｔ細胞と比較して細胞傷害活性が弱いものであった（図９Ｂ）が、アポトーシス細胞死を誘導した（図９Ｃ）。ＡＬ−ＴＣＲ形質導入ＣＤ４^＋Ｔ細胞と共培養した場合、がん細胞死は観察されなかった。１９３０５ＤＰ−ＴＣＲで形質導入されたＣＤ８＋及びＣＤ４＋Ｔ細胞の抗腫瘍活性。ＣＤ４^＋又はＣＤ８^＋Ｔ細胞を、ビオチン結合型抗ＣＤ４又は抗ＣＤ８抗体、続いて抗ビオチンDynabeadsを用いて、ＰＢＭＣから枯渇させた。ＣＤ４枯渇及びＣＤ８枯渇ＰＢＭＣを、多クローン的に活性化し、レトロウイルスベクターにより１９３０５ＤＰ−ＴＣＲ、ＡＬ−ＴＣＲ又は不適切なＴＣＲで形質導入した。ＮＯＤ／Ｓｃｉｄ／ＩＬ−２Ｒｇ鎖欠損（ＮＳＧ）マウスに、１×１０^６個のＨＬＡ−Ａ２^＋ＮＹ−ＥＳＯ−１^＋Ａ３７５細胞株を皮下注射した。１１日目に、０．６×１０^５個のＴＣＲ形質導入ＣＤ８^＋Ｔ細胞（全ＰＢＭＣの２５％）及び１．９×１０^５個のＴＣＲ形質導入ＣＤ４^＋Ｔ細胞（全ＰＢＭＣの７５％）を静脈注射した。デジタルキャリパーによるＴ細胞注入後、２日おきに腫瘍体積を測定した。１９３０５ＤＰ−ＴＣＲ及びＡＬ−ＴＣＲ形質導入ＣＤ８^＋Ｔ細胞の両方が腫瘍成長をコントロール（抑制）し（左）、１９３０５ＤＰ−ＴＣＲ形質導入ＣＤ４^＋Ｔ細胞のみが腫瘍縮小を示した（右）。

本明細書において使用される全ての技術用語及び科学用語は、本明細書において別途定義されない限り、本開示の分野に係る当業者によって一般的に理解される意味と同じ意味を有する。

本明細書の全体にわたって、与えられる全ての数値範囲は、その上限値と下限値との間に含まれる更に狭い数値範囲の全てを、記載されたものと同様に含むものとする。

本明細書に記載される各ポリヌクレオチドは、その相補的配列（its complementary sequence）及びその逆相補的配列（its reverse complementary sequence）を、ＤＮＡ配列の各ＴがＵで置換された該ＤＮＡ配列のＲＮＡ等価物（RNA equivalents）と同様に、含む。本明細書に記載されるアミノ酸配列をコードする全てのポリヌクレオチド配列は、本開示の範囲内に含まれる。

本開示は、様々ながんの発症予防及び／又は治療のための組成物及び方法を提供する。主に、前記がんは、周知のＮＹ−ＥＳＯ−１／ＬＡＧＥ−１抗原を発現するがんである。

本開示は、本明細書に記載に記載される複数の組換えＴＣＲ、それらをコードするポリヌクレオチド、ポリヌクレオチドを含む発現ベクター、ポリヌクレオチドが導入された細胞を含み、該細胞は、格別限定されないが、ＣＤ４^＋Ｔ細胞、ＣＤ８^＋Ｔ細胞、ナチュラルキラーＴ細胞、γδＴ細胞、及び、造血幹細胞等のような前駆細胞を含む。本開示において使用される「組換えＴＣＲ（recombinant TCR）」は、前記細胞に導入されたポリヌクレオチドから発現されるＴＣＲを意味し、前記ポリヌクレオチドの最初の導入前において、前記ＴＣＲが前記細胞内の染色体配列又は他のポリヌクレオチドによってコードされていなかったことを意味する。

幾つかの実施形態において、ポリヌクレオチドが導入される細胞は、リンパ球前駆細胞、未成熟胸腺細胞（ダブルネガティブＣＤ４−ＣＤ８−）細胞、又はダブルポジティブ胸腺細胞（ＣＤ４＋ＣＤ８＋）である。幾つかの実施形態において、前駆細胞は、ＣＤ３４、ＣＤ１１７（ｃ−ｋｉｔ）およびＣＤ９０（Ｔｈｙ−１）等のマーカーを含む。本開示は、複数の前記ＴＣＲを作製する方法、複数の前記ＴＣＲを発現するように細胞を改変する方法、改変された細胞、及び改変された細胞を抗がんアプローチのために使用する方法を含む。また、本開示は、複数の別個のＴＣＲのライブラリーも含む。

特定の幾つかの実施形態において、本開示は、がんを有すると診断されたか、がんを有することが疑われるか、がんの発生又は再発のリスクがある個体の発症予防及び／又は治療のための方法を含み、ここで、前記がんは、ＮＹ−ＥＳＯ−１／ＬＡＧＥ−１抗原を発現するがん細胞を含む。このアプローチは、１つの局面において、本開示のＴＣＲをコードする組換えポリヌクレオチドを含む改変ヒト細胞を個体に投与することを含む。改変Ｔ細胞等のような改変ヒト細胞は、対応する未改変Ｔ細胞と比較して、がんと戦う能力が増強される。その結果、本開示の方法を実施（practicing；「施術」ともいう。）する幾つかの実施形態においてもたらされる治療効果は、これらに限定されるものではないが、がん細胞及び／又は腫瘍の成長速度を遅くすること、腫瘍体積の減少及び／又は腫瘍体積増加速度の増加の減少、がん細胞の殺傷、本明細書に説明されるようながんと診断された個体の寿命の延長（延命）、及びがん治療の当業者には明らかであろう他のパラメーターを含むことができる。

本開示の実施形態の実施の効果は、任意の適切な基準、例えばポジティブ又はネガティブな対照（control）と比較することができる。幾つかの実施形態において、効果は、例えば、効果が既知であるＴＣＲ、又は、問題となっている特定の抗原に特異的でないＴＣＲ、又は、ＨＬＡ型及び／又はＴリンパ球型に関して不適合であるＴＣＲを発現する対照細胞から得られた基準値、若しくは、本開示の恩恵を受けた当業者には明らかであろう他の適切な基準値と比較することができる。幾つかの実施形態において、適切な基準は、既知の値又は値の範囲を含む。幾つかの実施形態において、前記基準は、曲線下面積（an area under a curve）等のような統計値、又は、グラフ上の別の面積又はプロットを含み、且つ／又は、前記基準は、反復測定（repeated measurements）から得られる。

本開示の様々な非限定的な幾つかの実施形態は、ＨＬＡ−Ｉ及びＨＬＡ−ＩＩ拘束性ＴＣＲを用いて、実証される。

ＨＬＡ−Ｉ拘束性ＴＣＲ（HLA-I restricted TCRs）

ある一つの局面において、本開示は、ＨＬＡクラスＩのコンテクストで提示されるＮＹ−ＥＳＯ−１抗原に特異的な新規ＴＣＲを含む。ＨＬＡ−Ｉ拘束性ＴＣＲのα鎖及びβ鎖、並びにそれらをコードするポリヌクレオチド配列の具体例としては、後に詳述する「１９３０５ＤＰ」、「ＡＬ」、「ＫＱ」、「ＰＰ」、「１９３０５ＣＤ８」、「ＢＢ」、「ＫＢ」、「ＳＴ」及び「ＪＤ」が挙げられる。これらのＴＣＲは、ＨＬＡ−Ａ^＊０２；Ｂ^＊２７；Ｂ^＊３５；Ｃｗ^＊０３；及びＣｗ^＊１５を含む複数の異なるＨＬＡクラスＩ型によって提示される複数のＮＹ−ＥＳＯ−１／ＬＡＧＥ−１由来ペプチドに特異的である。

ＨＬＡ−ＩＩ拘束性ＴＣＲ（HLA-II restricted TCRs）

他の一つの局面において、本開示は、ＨＬＡクラスＩＩのコンテクストで提示されるＮＹ−ＥＳＯ−１抗原に特異的な新規ＴＣＲを含む。ＨＬＡ−ＩＩ拘束性ＴＣＲのα鎖及びβ鎖、並びにそれらをコードするポリヌクレオチド配列の具体例としては、後に詳述する「ＰＢ−Ｐ」、「ＰＢ−Ｔ」及び「ＰＢ１３．２」が挙げられる。これらのＴＣＲは、ＨＬＡ−ＤＲＢ１^＊０４及びＤＲＢ１^＊０７を含む複数の異なるＨＬＡクラスＩＩ型によって提示される複数のＮＹ−ＥＳＯ−１／ＬＡＧＥ−１由来ペプチドに特異的である。幾つかの特定の実施形態において、これらのＴＣＲは、該ＴＣＲを発現するＴ細胞に、ＮＹ−ＥＳＯ−１／ＬＡＧＥ−１抗原を発現する腫瘍及び／又はがん細胞を直接認識（direct recognition）する能力を付与する。

特定の幾つかの局面において、個体に投与される本開示の組換えＴＣＲを含む細胞は、同種（allogeneic；「同種異系」ともいう。）、同系（syngeneic）又は自己（由来）（autologous）細胞である。従って、一実施形態では、細胞は第１の個体から得られ、改変され、それを必要とする第２の個体に投与される。別の実施形態では、細胞は、改変前に個体から除去され、組換えＴＣＲを発現するように改変され、同じ個体に戻すように投与される。特定の幾つかの実施形態において、本開示に従って改変される細胞は、特定の免疫細胞型を含むか又は特定の免疫細胞型からなり、該特定の免疫細胞型が富化（enriched）されている免疫細胞集団を含む。特定の幾つかの局面において、細胞は、ＣＤ４＋Ｔ細胞であるか、又はＣＤ８＋Ｔ細胞である。一つの局面において、本開示の１つ以上の発現ベクターが導入される細胞は、例えばＣＤ４＋及びＣＤ８＋Ｔ細胞のような免疫細胞の混合物を含み、且つ／又は、末梢血単核球（ＰＢＭＣ）を含み得る。一つのアプローチにおいて、単独または共に１９３０５ＤＰＴＣＲをコードする１つ以上の発現ベクターを、免疫細胞の混合物に導入する。特定の幾つかの実施形態において、Ｔ細胞は、ＮＹ−ＥＳＯ−１／ＬＡＧＥ−１抗原を発現するがん細胞を直接認識することができる。幾つかの実施形態において、直接認識は、がん細胞により発現されるＮＹ−ＥＳＯ−１／ＬＡＧＥ−１抗原へのＴＣＲのＨＬＡクラスＩＩ拘束性結合（HLA class II-restricted binding）を含む。

１９３０５ＤＰＴＣＲに関して、本開示は、その発現及び機能に係る明白な特性を実証する。例えば、図５〜７は、親１９３０５ＤＰクローン（parental 19305DP clone）の特性を示す。特に、図５は、ＣＤ４／ＣＤ８ダブルポジティブ特性の実証を示す。図６は、ＣＤ８非依存的認識（CD8-independent recognition）の実証を示し、これはＴＣＲによる高親和認識（high affinity recognition）を示唆する。図７は、他のヒト抗原に対する交差反応性（cross-reactivity）をサポートしない厳密なＮＹ−ＥＳＯ−１／ＬＡＧＥ−１配列特異性の実証を示す。図８〜１０は、１９３０５ＤＰ−ＴＣＲによって形質導入されたヒトＴ細胞の抗腫瘍効果について、同じＨＬＡ−Ａ^＊０２：０１−拘束性及びＮＹ−ＥＳＯ−１特異性を有するが、ＣＤ８シングルポジティブＴ細胞クローンに由来するＡＬ−ＴＣＲとの比較で、実証する結果を示す。図８は、１９３０５ＤＰ又はＡＬＴＣＲ発現レトロウイルスベクターによって形質導入されたＣＤ４＋及びＣＤ８＋Ｔ細胞の両方を含むヒト末梢血単核球によるＮＹ−ＥＳＯ−１及びＨＬＡ−Ａ^＊０２：０１発現ヒトメラノーマのｉｎｖｉｖｏ成長阻害の実証を示し、１９３０５ＤＰ−ＴＣＲ形質導入ＰＢＭＣｓによる優位な抗腫瘍効果を実証する。図９は、１９３０５ＤＰ及びＡＬＴＣＲ発現ＣＤ４＋及びＣＤ８＋Ｔ細胞のｉｎｖｉｔｒｏ腫瘍殺傷能力の実証を示し、それらが１９３０５ＤＰ−ＴＣＲによって形質導入された場合は、ＣＤ４＋及びＣＤ８＋Ｔ細胞の両方が効率的にＮＹ−ＥＳＯ−１＋ＨＬＡ−Ａ^＊０２：０１＋がん標的を殺傷し、それらがＡＬ−ＴＣＲによって形質導入された場合は、ＣＤ８＋Ｔ細胞のみが前記標的を殺傷したことを実証する。図１０は、１９３０５ＤＰ及びＡＬＴＣＲ発現ＣＤ４＋及びＣＤ８＋Ｔ細胞のｉｎｖｉｖｏ腫瘍成長阻害のデータ実証を示し、それらが１９３０５ＤＰ−ＴＣＲによって形質導入された場合は、ＣＤ４＋及びＣＤ８＋Ｔ細胞の両方が、ＮＹ−ＥＳＯ−１＋ＨＬＡ−Ａ^＊０２：０１＋がん標的を攻撃し、それらがＡＬ−ＴＣＲによって形質導入された場合は、ＣＤ８＋Ｔ細胞のみが腫瘍成長阻害を示すことを実証する。従って、幾つかの実施形態において、本開示は、組換えＴＣＲ、及び１９３０５ＤＰＴＣＲを発現するように改変された細胞のような改変細胞を使用して、ＣＤ４＋Ｔ細胞、又は、ＣＤ８＋Ｔ細胞、又は、所謂ダブルポジティブ（ＤＰ）Ｔ細胞を形質導入する能力に関連する。ＤＰＴ細胞に関しては、それらが発生段階において胸腺に存在することが当該分野で公知である。ＣＤ４＋／ＣＤ８＋ダブルポジティブＴ細胞は胸腺正選択（thymic positive selection）として知られるプロセスによってＣＤ４系列又はＣＤ８系列へと分化され、ＣＤ４及びＣＤ８への分化経路は一般的に相互排他的な運命であると考えられている。それにもかかわらず、成熟ＣＤ４＋／ＣＤ８＋ＤＰＴ細胞が、血液および末梢リンパ組織に現れ、低頻度ではあるが、がんを含む特定の疾患において観察されている。任意の特定の理論によって制約されることを意図するものではないが、本開示は、ＤＰＴ細胞から得られるＴＣＲを最初に記述するものであると考えられ、また、本開示の実施例及び図面に実証されるように、養子免疫学的アプローチにおけるその有用性を実証するために、そのようなＴＣＲを組換え生産することを提供する。幾つかの実施形態において、本発明は、複数のＴＣＲを発現する細胞の混合物、又は、本明細書に記載される複数のＴＣＲを発現する細胞を提供し、これらは別個のがん抗原に特異的であり、その結果、複数のＴＣＲに関して多価（polyvalent）であると考えられる細胞集団が提供される。

本発明により提供されるＴＣＲは、幾つかの例において、アミノ酸配列SLLMWITQCFLPVF（SEQ ID NO:63）からなる抗原であるＮＹ−ＥＳＯ−１；１５７−１７０を認識する能力を有するか、又は、アミノ酸配列PFATPMEAELAR（SEQ ID NO:64）からなる抗原であるＮＹ−ＥＳＯ−１；９５−１０６を認識する能力を有する。

幾つかの実施形態において、本発明によって提供される細胞は、ＮＹ−ＥＳＯ−１／ＬＡＧＥ−１＋がん細胞を直接認識可能である本開示のＴＣＲを発現する改変された（engineered；「操作された」ともいう。）ＣＤ８＋Ｔ細胞、及び、ＨＬＡクラスＩＩ分子と会合（in association with）して抗原と相互作用するＴＣＲによってこれらＮＹ−ＥＳＯ−１／ＬＡＧＥ−１抗原を認識する能力を有するＣＤ４^＋Ｔ細胞であり、ここで、ＨＬＡクラスＩＩ分子は腫瘍細胞によって示される（displayed；「ディスプレイされる」ともいう。）。

本発明は、本明細書に開示される本発明の１つ以上のＴＣＲポリペプチドをコードする各々の及び全てのポリヌクレオチド配列を含み、これらは、ＤＮＡ及びＲＮＡ配列を含み、また、これらの配列を含むか及び／又はこれらの配列からなる、摘出され（isolated；「単離され」あるいは「分離され」ともいう。）及び／又は組換えられたポリヌクレオチドを含む。本発明は、組換えポリヌクレオチドを含む細胞も含む。細胞は、摘出された細胞、培養によって成長（grown）及び／又は増殖（expanded）及び／又は維持（maintained；「保存」あるいは「保たれた」ともいう。）された細胞であり得、また、原核細胞又は真核細胞であり得る。原核細胞及び真核細胞の培養物は、例えば、本発明のＴＣＲ発現ベクターを増殖（propagate；「伝播」ともいう。）又は増幅（amplify）するために使用することができる。幾つかの実施形態において、細胞は、例えば、偽ウイルス粒子（pseudoviral particles）のような組換えウイルス粒子（recombinant viral particles）への発現コンストラクトのＲＮＡコピーの転写及びパッケージングのための幾つかの又は全てのタンパク質を提供するパッケージングプラスミド（packaging plasmids）を含み得る。幾つかの実施形態において、発現ベクターは、細胞内に一過的（transiently）又は安定的（stably）に導入される。幾つかの実施形態において、発現ベクターは、それらの産生に使用される細胞の染色体に組み込まれる。幾つかの実施形態において、ウイルス粒子などの発現ベクターによって細胞に導入された、複数のＴＣＲをコードする複数のポリヌクレオチドは、細胞の１つ以上の染色体に組み込まれる。そのような細胞は、増殖のために使用することができ、あるいは、それらは治療アプローチ及び／又は予防アプローチのために使用される細胞であり得る。真核細胞には、本発明のＴＣＲ発現コンストラクトが導入されたＣＤ４^＋Ｔ細胞、ＣＤ８^＋Ｔ細胞、ナチュラルキラーＴ細胞、γδＴ細胞及びそれらの前駆細胞が含まれる。ＣＤ４^＋Ｔ細胞のソース（由来）は格別限定されないが、本開示に従って新規ＴＣＲを発現するように改変されたＣＤ４^＋Ｔ細胞、ＣＤ８＋Ｔ細胞又はそれらの組み合わせの最終的なレシピエント（recipient；「投与対象者」ともいう。）に該当するか又は該当しないヒト被験者（human subject）を含む任意のソースに由来し得る。

本開示の幾つかの実施形態で使用するための発現ベクターは、任意の適切な発現ベクターであり得る。幾つかの実施形態において、発現ベクターは、レンチウイルスベクターのようなアデノウイルス、ヘルペスウイルス又はレトロウイルスに由来する改変されたウイルスポリヌクレオチド（modified viral polynucleotide）を含む。発現ベクターは、組換えウイルスに限定されず、ＤＮＡプラスミド、及びｉｎｖｉｔｒｏで転写されたｍＲＮＡなどのような、非ウイルスベクター（non-viral vectors）を含む。

上述したポリヌクレオチド／発現ベクターによってコードされるポリペプチドに関して、特定の局面において、本発明は、複数の機能的ＴＣＲ（functional TCRs）及びそれらをコードする複数の発現ベクターを提供し、ここで、前記機能的ＴＣＲはＴＣＲα鎖及びＴＣＲβ鎖を含み、これら２つの鎖は、互いに物理的に会合して（例えば複合体として）存在し、互いに非共有結合的に連結（non-covalently joined）されているか、又は、これら２つの鎖は、別個のポリペプチドであるが、ペプチド結合ではないジスルフィド又は他の共有結合的な連結鎖（covalently linkage）によって、互いに共有結合的に連結（covalently joined）されている。他の好適な連結鎖（linkages）は、例えば、置換型（置換基を有する）又は非置換型（置換基を有しない）のポリアルキレングリコール、及び、エチレングリコールとプロピレングリコールとの組み合わせを含み得、ここで前記組み合わせは例えば共重合体の形態をとる。他の幾つかの実施形態において、ＴＣＲα鎖及びＴＣＲβ鎖を構成する２つのペプチドの両方は、融合タンパク質（fusion protein）のような単一のポリペプチド（single polypeptide）に含まれ得る。特定の幾つかの実施形態において、融合タンパク質は、同一のオープンリーディングフレーム（ＯＲＦ；「翻訳領域」ともいう。）からか、又は、別個の複数のＯＲＦからか、又は、非連続的翻訳（non-continuous translation）をもたらすシグナルを含むＯＲＦから翻訳されたＴＣＲα鎖アミノ酸配列及びＴＣＲβ鎖アミノ酸配列を含み得る。一つの実施形態において、ＯＲＦは、ＴＣＲα鎖とＴＣＲβ鎖との間に位置するＰ２Ａ介在翻訳スキッピング部位（P2A-mediated translation skipping site）を含む。Ｐ２Ａ含有タンパク質を形成するためのコンストラクト（「２Ａペプチド連結多シストロン性ベクター（2A Peptide-Linked multicistronic vectors）」とも称される。）は、本技術分野において公知である。（例えば、Gene Transfer: Delivery and Expression of DNA and RNA, A Laboratory Manual, (2007), Friedman et al., International Standard Book Number (ISBN) 978-087969765-5参照。）簡潔にいうと、２Ａペプチド配列は、これをコード領域間に含ませた場合に、２Ａペプチド配列中に生じる新規な切断イベントを経て、単一のベクター内で別個のタンパク質産物の化学量論的産生を可能にする。２Ａペプチド配列は、一般に、１８〜２２アミノ酸を含む短い配列であり、別個のアミノ末端配列を含むことができる。このように、一つの実施形態において、本発明の融合タンパク質は、Ｐ２Ａアミノ産配列を含む。幾つかの実施形態において、本発明の融合タンパク質は、ＴＣＲα鎖とＴＣＲβ鎖との間に、リンカー配列を含み得る。幾つかの実施形態において、リンカー配列は、GSG（Gly-Ser-Gly）リンカー又はSGSG（Ser-Gly-Ser-Gly）（SEQ ID NO:59）リンカーを含み得る。特定の幾つかの実施形態において、ＴＣＲα鎖とＴＣＲβ鎖とは、RAKR（Arg-Ala-Lys-Arg）（SEQ ID NO:60）部位のようなフューリンプロテアーゼ認識部位を含むアミノ酸配列によって、互いに接続される。

一つの実施形態において、ＴＣＲをコードする発現コンストラクトは、追加の（更なる）ポリヌクレオチドもコードすることができる。追加のポリヌクレオチドは、蛍光又は発光タンパク質等のような検出可能なマーカーをコードすることなどによってＴＣＲ発現細胞の同定を可能にするようなものであり得る。追加のポリヌクレオチドは、チミジンキナーゼ遺伝子のような、ＴＣＲ発現細胞の選択的除去を可能にするエレメントをコードするようなものであり得る。幾つかの実施形態において、追加のポリヌクレオチドは、内在的にコードされるＴＣＲの発現阻害を促進するようなものであり得る。ある実施形態において、ＴＣＲをコードする発現コンストラクトは、１つ以上の内在性ＴＣＲのＲＮＡｉ（ＲＮＡ干渉）を介した発現量減少（RNAi-mediated down-regulation）を促進することができるポリヌクレオチドもコードする。例えば、Okamoto S, et al. (2009) Cancer Research, 69:9003-9011、及び、Okamoto S, et al. (2012). Molecular Therapy-Nucleic Acids, 1, e63を参照。ある実施形態において、ＴＣＲを発現する発現コンストラクトは、内在的にコードされたＴＣＲを標的とするｓｈＲＮＡ又はｓｉＲＮＡをコードすることができる。他の実施形態において、内在性ＴＣＲの発現量減少に使用するためのポリヌクレオチドをコードする、第２の、別個の発現コンストラクトを使用することができる。

幾つかのアプローチにおいて、β鎖がα鎖に対して相対的にＮ末端側に配向されるように、別個の複数のＴＣＲ鎖が、一つの発現コンストラクトから発現され得、このようにして、本発明のＴＣＲは、かかる鎖配向、又は他の配向も含み得る。他の幾つかの実施形態において、ＴＣＲα鎖及びβ鎖タンパク質は、同一の細胞に導入された別個の複数の発現ベクターから発現され得る。幾つかの実施形態においては、発現ベクターの代替として、複数のＴＣＲをコードするｍＲＮＡを用いることができる。

改変されたＣＤ４^＋Ｔ細胞、ＣＤ８＋Ｔ細胞及びそれらの組み合わせの使用に関して、本方法は、一般に、ＣＤ４^＋Ｔ細胞を含む組成物の有効量（典型的には静脈内又は腹腔内注射によって１０^１０細胞）を、それを必要とする個体に投与することを含む。それを必要とする個体は、種々の実施形態において、ＮＹ−ＥＳＯ−１／ＬＡＧＥ−１を発現する悪性細胞によって特徴付けられるがんを有するか、該がんを有することが疑われるか、又は該がんを発症するリスクがある個体である。本技術分野において公知であるように、ＮＹ−ＥＳＯ−１／ＬＡＧＥ−１は、種々のがん細胞及び腫瘍型によって発現される。このようながんには、例えば、膀胱、脳、乳房、卵巣、非小細胞肺がん、骨髄腫、前立腺、肉腫及びメラノーマ（黒色腫）のがんが含まれるが、これらに限定されるものではない。特定の幾つかの実施形態は、脂肪肉腫及び肝内胆管がんを含むが、これらに限定されない。前記個体は、これらのようながんの何れかの初期（early-stage；早期ともいう）又は進行形（advanced forms）のがんを有し得、あるいは、これらのようながんの何れかの寛解期（in remission）であり得る。一つの実施形態において、本発明の組成物が投与される前記個体は、ＮＹ−ＥＳＯ−１を発現する何れかのがん型を再発するリスクがある。特定の幾つかの実施形態において、前記個体は、ＮＹ−ＥＳＯ−１：１５７−１７０及び／又はＮＹ−ＥＳＯ−１：９５−１０６によって規定されるアミノ酸配列を含むタンパク質を発現する細胞を含む腫瘍を、有するか、有することが疑われるか、又は、発生又は再発するリスクがある。幾つかの実施形態において、本開示は、１５〜２４の範囲のアミノ酸残基の長さ（amino acid residues long）であるＮＹ−ＥＳＯ−１のペプチド断片に特異的な組換えＴＣＲを含み、ここで、このようなペプチドは、ＨＬＡ−ＩＩとの複合体として提示される。幾つかの実施形態において、本開示は、ＨＬＡ−Ｉ又はＨＬＡ−ＩＩと複合体を形成しているペプチドに特異的な組換えＴＣＲを含み、ここで、前記ペプチドは、ＮＹ−ＥＳＯ−１：１５７−１７０及び／又はＮＹ−ＥＳＯ−１：９５−１０６のアミノ酸配列を含むか、該アミノ酸配列からなる。

以下に示されるヌクレオチド及びアミノ酸配列は、本発明を実証するために使用されるヌクレオチド及びアミノ酸配列を代表する。上述したように、本発明は、本明細書に記載されるＴＣＲコンストラクトのアミノ酸配列をコードする何れか及び全てのポリヌクレオチド配列を含む。更に、ＴＣＲの機能に悪影響を及ぼさない限り、ＴＣＲ中のアミノ酸配列の変化（variations）も許容される。種々の実施形態において、本明細書中に示される配列と比較して１つ以上のアミノ酸変化を含むＴＣＲは、本発明の組換えＴＣＲを発現する細胞が直接的且つ特異的にＮＹ−ＥＳＯ−１／ＬＡＧＥ−１を発現する腫瘍細胞を認識できる限り、保存的アミノ酸置換（conservative amino acid substitutions）又は他の置換（substitutions）又は付加（additions）又は欠失（deletions）を含み得、ここで、上記認識は、ＮＹ−ＥＳＯ−１／ＬＡＧＥ−１の発現、及び、それを腫瘍細胞によるＨＬＡクラスＩＩ拘束様式（HLA class II restricted manner）で処理してなるペプチドの提示に依存する。幾つかの実施形態において、本発明のＴＣＲは、抗原提示細胞の関与なしで腫瘍細胞上の腫瘍抗原の直接認識を促進する任意のアミノ酸配列を含む。幾つかの実施形態において、本開示によって提供されるＴＣＲのアミノ酸配列は、本開示の一部である配列表に提供されるアミノ酸配列と、少なくとも９５％、９６％、９７％、９８％又は９９％類似（similar）している。種々の実施形態において、本発明の任意のＴＣＲは、本明細書で定義されるその同族エピトープ（cognate epitope）のＫ_ｏｆｆ値を有することができ、これは、同じエピトープについて自然発生するＴＣＲによって示される同族エピトープのＫ_ｏｆｆと実質的に同じである。幾つかの実施形態において、ＴＣＲアミノ酸配列は、それらの定常部に変化を含み得る。これに関して、一般に、ＴＣＲの定常部は抗原認識に実質的に寄与しないことが当該分野で知られている。例えば、ＴＣＲのヒト定常部の一部分を、該ＴＣＲの機能を保持したまま、マウスの配列で置換することが可能である。（例えば、Goff SL et al. (2010) Cancer Immunology, Immunotherapy, 59: 1551-1560参照。）従って、本明細書に開示されるＴＣＲ配列に対して種々の改変が許容され、種々の改変は、特定の鎖対合（chain pairing）を改善するか、又は、ＣＤ３複合体のＴ細胞シグナルタンパク質との会合強化を促進するか、又は、内在性ＴＣＲと導入されたＴＣＲとの間での二量体の形成を阻害する変化を含むことができるが、これらに限定されない。幾つかの実施形態において、アミノ酸変化は、ＣＤＲ３領域などのようなＣＤＲ領域に存在し得、例えば、ＣＤＲ３配列中の１つ、２つ、３つ又はそれ以上のアミノ酸の置換を含み得るが、この例に限定されるものではない。幾つかの実施形態において、アミノ酸変化は、ＴＣＲの機能に影響を及ぼさない。成熟ＴＣＲタンパク質の前に、新規に合成されたＴＣＲタンパク質を分泌経路に導くシグナルペプチド又はリーダーペプチドと呼ばれるアミノ酸配列がある。シグナルペプチドは、細胞の表面に表出する前に、成熟ＴＣＲタンパク質から除去される。従って、シグナルペプチドを他の天然の又は人工の配列によって置換しても、成熟ＴＣＲの機能に変化は生じない。そのため、本明細書に示されるシグナルペプチド配列に対する種々の改変が許容され、この改変は格別限定されず、例えば、シグナルペプチド中の一部又は全部のアミノ酸を欠失又は変化させること、又は、全ての又は一部のアミノ酸を他のアミノ酸及び又はポリペプチド配列で置換することを含み、その例は、本開示の恩恵を受けた当業者には明らかである。特定の幾つかの局面において、本開示は、ＴＣＲα鎖、β鎖又はそれらの組み合わせから、１つ以上のＴＣＲ超可変領域又は相補性決定領域（ＣＤＲ）をコードする発現ベクター及び他のポリヌクレオチドを含む。特定の幾つかの実施形態において、１つのＣＤＲのみがコードされるか、２つのＣＤＲのみがコードされるか、３つのＣＤＲのみがコードされるか、又は、ＴＣＲα鎖及びβ鎖に由来する特定の複数のＣＤＲのみの組み合わせがコードされ、本明細書に記載のＴＣＲα鎖及びβ鎖に由来するＴＣＲＣＤＲセグメント及びそれらをコードするポリヌクレオチドの全てのそのような組合せが、本開示に包含される。当業者は、本明細書に示されるＴＣＲアミノ酸配列の各々のＴＣＲＣＤＲセグメントを認識することができる。

ライブラリー

本開示は、複数のＴＣＲをコードする複数の発現ベクター、即ち別個の複数のＴＣＲをコードする別個の複数の発現ベクターを含むライブラリーを含み、ここで、前記ライブラリーの少なくとも１つのメンバーは、本開示の新規α鎖及び／又は新規β鎖をコードする。従って、前記ライブラリーの少なくとも１つのメンバーは、ＡＬ、ＫＱ、ＰＰ、１９３０５ＣＤ８、ＢＢ、ＫＢ、ＳＴ、ＪＤ及び１９３０５ＤＰと称される複数のＨＬＡ−Ｉ拘束性ＴＣＲのうちの少なくとも１つの前記α鎖及び／又はβ鎖をコードする複数の発現ベクターから選択することができ、前記ライブラリーの少なくともメンバーは、本明細書にＰＢ−Ｐ、ＰＢ−Ｔ、ＰＢ１３．２として記載される複数の新規ＨＬＡ−ＩＩ拘束性ＴＣＲのうちの少なくとも１つのα鎖及び／又はβ鎖をコードする複数の発現ベクターから選択することができる。これら複数のＨＬＡ−Ｉ及びＨＬＡ−ＩＩ拘束性ＴＣＲをコードする別個の複数の発現ベクターの組み合わせは、本開示に含まれる。

これに限定されるものではないが、一つの例において、本開示のライブラリーは、ＣＤ４＋及びＣＤ８＋Ｔ細胞の両方において機能的であるＨＬＡ−Ａ^＊０２拘束性ＴＣＲである１９３０５ＤＰとして本明細書に示されるＴＣＲをコードする発現ベクターを含む。このＴＣＲは、ＣＤ４＋ＣＤ８＋ダブルポジティブであるユニークな腫瘍抗原特異的Ｔ細胞から初めて得られたものであり、本明細書はこのようなＴＣＲを最初に記載するものであると考えられる。ＡＬ、ＫＱ、ＰＰ、１９３０５ＣＤ８、ＢＢ、ＫＢＳＴ及びＪＤＴＣＲ遺伝子は、ＣＤ８＋シングルポジティブＴ細胞から初めて得られたものであり、ＰＢ−Ｐ、ＰＢ−Ｔ及びＰＢ１３．２は、ＣＤ４＋シングルポジティブＴ細胞に由来する。

また、幾つかの局面において、本明細書に記載される少なくとも１つの新規ＴＣＲ／発現ベクター、本開示により提供されるライブラリーは、ＨＬＡＤＰＢ１^＊０４拘束性「ＪＭ」、「５Ｂ８」及びＤＲＢ１^＊０１拘束性「ＳＢ９５」として以下に記載される複数のＴＣＲから選択される複数のＨＬＡクラスＩＩ拘束性ＴＣＲをコードする複数の発現ベクターを更に含むことができる。これらのコンストラクトは、ＷＯ／２０１４／１６００３０として公開されたＰＣＴ／ＵＳ１４／２５６７３に記載されており、そこに記載されたＴＣＲ、ＴＣＲをコードする発現ベクター、ＴＣＲ及び発現ベクターを作製及び使用する方法に係る説明は、参照により本明細書に組み込まれる。前記ＪＭ、５Ｂ８及びＳＢ９５ＴＣＲは、ＮＹ−ＥＳＯ−１ポジティブの個体から得られたものであり、これらのＴＣＲは、ＣＤ４＋Ｔ細胞を含むＴ細胞上に、以下に更に説明されるＮＹ−ＥＳＯ−１＋がん細胞を直接認識する能力を付与する。これは、ＰＢ−Ｐ、ＰＢ−Ｔ及びＰＢ１３．２を含むが、これらに限定されない。このように、これらのＴＣＲは、ＮＹ−ＥＳＯ−１／ＬＡＧＥ−１抗原を発現するがん細胞を直接認識する能力をＴ細胞に与え、ここで、前記がん細胞の直接認識は、前記がん細胞により発現された前記ＮＹ−ＥＳＯ−１／ＬＡＧＥ−１抗原に対する前記ＴＣＲのヒト白血球抗原ＨＬＡクラスＩＩ拘束性結合を含む。

種々の実施形態において、本開示の発現ベクターライブラリーは、複数のＴＣＲの多様性（diversity of TCRs）をコードする。幾つかの局面において、複数の前記発現ベクターは、如何なるファージ又はファージミドＤＮＡも含まないか、及び／又は、如何なるファージ又はファージミドタンパク質を含むＴＣＲポリペプチドも含まない。幾つかの実施形態において、複数のＴＣＲは如何なるファージ又はファージミドタンパク質も含まず、従って、該複数のＴＣＲはＴＣＲファージディスプレイライブラリー等の構成要素ではない。

幾つかの例において、本開示のＴＣＲ発現ベクターライブラリーにおける複数の発現ベクターは、複数のＴＣＲを発現する複数の細胞が別個のＨＬＡクラスＩ型、ＨＬＡクラスＩＩ型及び／又はそれらの組み合わせを有する多様な患者において機能するように、複数のＴＣＲをコードする。

幾つかの実施形態において、本開示の発現ベクターライブラリーによってコードされる複数のＨＬＡクラスＩ拘束性ＴＣＲは、ＨＬＡ−Ａ、−Ｂ、−Ｃ及びそれらの組み合わせによって包含（encompassed）される対立遺伝子（allele）から選択されるＨＬＡクラスＩ型の患者において機能することができる。幾つかの実施形態において、このライブラリーは、本出願の出願時又は特許時における米国コーカサス人種人口（U.S Caucasian population）の少なくとも50％において、がん療法における使用に適しているほど十分に多様である。幾つかの局面において、本開示のライブラリーは、がん療法における使用に適しており、このことは、特定の理論に拘束されることを意図するものではないが、本出願の出願時又は特許時において、ＨＬＡクラスＩ（Ａ^＊０２／Ｂ^＊３５／Ｃ^＊０４）拘束性ＴＣＲが米国コーカサス人種人口のＨＬＡ型の６７％を含み、ＨＬＡクラスＩＩ（ＤＲ^＊０１／ＤＲ^＊０４／ＤＲ^＊０７／ＤＰ^＊０４）拘束性ＴＣＲが米国コーカサス人種人口のＨＬＡ型の８７％を含むことに基づく。幾つかの実施形態において、本開示のＴＣＲライブラリーは、本出願の出願時又は特許時において米国コーカサス人種人口において最も頻繁に発生する１０種のＨＬＡ型に特異的な複数のＴＣＲを含み、これにより、人口（human population；「ヒト個体群」ともいう。）の少なくとも９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％又はそれ以上のがん療法における使用に適切であり得る。幾つかの実施形態において、本開示は、表１に示されるＨＬＡ型によって拘束される複数のＴＣＲに特異的な複数のＮＹ−ＥＳＯ−１に拘束されるＴＣＲライブラリーを提供する。幾つかの実施形態において、前記ライブラリーは、表１中において下線が付与された複数のＨＬＡ型の１つ又は組み合わせによって拘束される複数のＴＣＲを含む。幾つかの局面において、本開示は、別個の複数のＴＣＲをコードする２〜３，０００の別個の複数の発現ベクターのライブラリーを含む。

幾つかの実施形態において、本開示のＴＣＲ発現ベクターライブラリーにおける複数の発現ベクターは、複数のＴＣＲを発現する複数の細胞がＨＬＡ−ＤＰ、−ＤＭ、−ＤＯＡ、−ＤＯＢ、−ＤＱ、−ＤＲ及びそれらの組み合わせによって包含される対立遺伝子から選択されるＨＬＡクラスＩＩ型を有する多様な患者において機能するように、複数のＴＣＲの範囲（range；「領域」ともいう。）をコードする。

幾つかの実施形態において、本開示の発現ベクターライブラリーは、少なくとも２つの別個のＴＣＲをコードする少なくとも２つの発現ベクターを含み、前記少なくとも２つの別個のＴＣＲのうち少なくとも１つは、１９３０５ＤＰ、ＡＬ、ＫＱ、ＰＰ、１９３０５ＣＤ８、ＢＢ、ＫＢ、ＳＴ、ＪＤ、ＰＢ−Ｐ、ＰＢ−Ｔ及びＰＢ１３．２から選択される。ある実施形態において、本開示の発現ベクターライブラリーは、１９３０５ＤＰのα鎖、β鎖、又はα鎖及びβ鎖の両方をコードする発現ベクターを含む。

幾つかの実施形態において、本開示は、別個の複数の発現ベクターを含む。一例において、各々の発現ベクターは、単離ＤＮＡ製剤（isolated DNA preparation）として含有することができ、又は、例えば細胞培養物（cell culture）中に維持することができる。このような複数の組成物は、ガラス又はプラスチック製のバイアル、エッペンドルフチューブ等のような密閉された容器中に別々に保存することができ、また、低下された温度、例えば０℃以下の温度に保つことができる。各々の容器、又は容器が保管される部位は、該容器中の１又は複数の発現ベクターの複数の印を含むことができる。かかる複数の印は、格別限定されないが、ヒト又は機械によって認識可能（perceptible；「知覚可能」、「検出（読み取り）可能」ともいう。）なもの、例えば印刷ラベル、バーコード、ＱＲコード（登録商標）等を含むことができ、あるいは、内容物の確認や発現ベクターの配置のために役立つ他の複数の印を含むことができ、これらは、本開示の方法における使用のためにＴＣＲを回収するために用いることができる。幾つかの局面において、本開示は、複数の別個のＴＣＲを含む複数の別個の容器を含み、ここで、各々の容器はインデックス付け（indexed）され、ここで、複数の前記容器の複数の前記印はデータベースに保存（maintained）される。前記データベースは、デジタル化することができ、また、ソフトウェアと統合されるように適合させることができる。幾つかの局面において、本開示は、本開示のライブラリーからＴＣＲを選択するためのコンピューターを用いた方法を提供し、前記方法は、入力された個体又はサンプル又は他のＨＬＡ情報のＨＬＡ型を、該ＨＬＡ型に適合性を有する前記ライブラリー中のＴＣＲに適合させるプロセッサーを用いる。幾つかの実施形態において、本開示は、信号（signals）、搬送波（carrier waves）又は一時的信号（transitory signals）を含むコンピューターを用いたアプローチを排除することができる。

一つの局面において、本開示は、複数のＴＣＲのライブラリーと、前記複数のＴＣＲのヌクレオチド及び／又は配列及び／又はＨＬＡ型の複数の印を含むデータベースとを含むシステムを含み、前記データベースはプロセッサーと接続（in communication with：「通信可能」ともいう。）され、ここで、前記プロセッサーは、サンプルのＨＬＡ型に適合するように、前記ライブラリー中の適切なＴＣＲを選択及び／又は指定（designate）するようにプログラムされる。前記システムは、適切なＴＣＲを含む容器の回収のための装置（apparatus；「器具」ともいう。）を更に含み得、該装置は、格別限定されないが、例えば、前記適切なＴＣＲの前記印へと方向付けられるロボット化された装置を含み得、前記ライブラリーから指示された前記ＴＣＲを選択及び又は回収することができる。他の局面において、本開示は、本開示のＴＣＲライブラリーに関する情報が記録されたデータベースを含む記録媒体（computer readable medium）を提供する。ある実施形態において、本開示は、本開示のＴＣＲライブラリーからＴＣＲを選択するためのコンピューターのための複数の命令（instructions）のセットを含む記録媒体を含み、ここで、前記ＴＣＲは、サンプルのＨＬＡ型に適合する。

一つの局面において、本開示は、ＮＹ−ＥＳＯ−１／ＬＡＧＥ−１ポジティブがんを有すると診断された個体のＨＬＡ型の表示（indication）を受け取ること、前記ＨＬＡ型に基づいて本開示のライブラリーから発現ベクターを選択すること、及び、前記発現ベクターを、前記診断された個体の免疫細胞への前記発現ベクターの導入に使用するためにパーティーに配布すること含む。前記発現ベクターの前記配布は、任意の適したアプローチを用いて前記発現ベクターを輸送することを含み得る。

一つの局面において、本開示は、本開示のライブラリーから発現ベクターを選択すること、及び、ＮＹ−ＥＳＯ−１／ＬＡＧＥ−１ポジティブがんを有すると診断された個体から得られた免疫細胞に前記発現ベクターを導入すること含み、ここで、前記発現ベクターによってコードされるＴＣＲのＨＬＡ型は、前記個体のＨＬＡ型に適合する。幾つかの実施形態において、本開示は、前記免疫細胞を、それを必要とする個体に導入することを更に含み、前記個体は、ＮＹ−ＥＳＯ−１／ＬＡＧＥ−１ポジティブがんを有すると診断された個体であるか、又は、前記診断された個体と同じＨＬＡ型を有する個体であり得る。

一つの局面において、本開示は、個体がＮＹ−ＥＳＯ−１／ＬＡＧＥ−１ポジティブがんを有するか否かを判定（determine）するために前記個体に由来するサンプルについて試験すること、前記個体がＮＹ−ＥＳＯ−１／ＬＡＧＥ−１ポジティブがんを有するという判定に続いて、前記個体のＨＬＡ型に基づいて本開示のライブラリーから発現ベクターを選択すること、及び、前記発現ベクターを前記個体の免疫細胞に導入することを含む。

以下の実施例は、説明のためのものであり、本発明を限定するものではない。

（実施例１）
具体的且つ例示的な実施形態において、本発明のＴＣＲをコードするポリヌクレオチド配列、及びポリヌクレオチドによってコードされるＴＣＲα鎖及びＴＣＲβ鎖のアミノ酸配列は以下の通りである。ＴＣＲのクローニング及び使用を示す代表的且つ非限定的な例を図１〜４に示す。

ＨＬＡ−Ａ^＊０２拘束性ＮＹ−ＥＳＯ−１_{１５７−１６５}特異的Ｔ細胞クローン「ＡＬ」

１．ヌクレオチド配列

ＴＣＲα鎖

ATGATGAAATCCTTGAGAGTTTTACTAGTGATCCTGTGGCTTCAGTTGAGCTGGGTTTGGAGCCAACAGAAGGAGGTGGAGCAGAATTCTGGACCCCTCAGTGTTCCAGAGGGAGCCATTGCCTCTCTCAACTGCACTTACAGTGACCGAGGTTCCCAGTCCTTCTTCTGGTACAGACAATATTCTGGGAAAAGCCCTGAGTTGATAATGTCCATATACTCCAATGGTGACAAAGAAGATGGAAGGTTTACAGCACAGCTCAATAAAGCCAGCCAGTATGTTTCTCTGCTCATCAGAGACTCCCAGCCCAGTGATTCAGCCACCTACCTCTGTGCCGTGGGGGGACTTACCTCTAGCAACACAGGCAAACTAATCTTTGGGCAAGGGACAACTTTACAAGTAAAACCAGATATCCAGAACCCTGACCCTGCCGTGTACCAGCTGAGAGACTCTAAATCCAGTGACAAGTCTGTCTGCCTATTCACCGATTTTGATTCTCAAACAAATGTGTCACAAAGTAAGGATTCTGATGTGTATATCACAGACAAAACTGTGCTAGACATGAGGTCTATGGACTTCAAGAGCAACAGTGCTGTGGCCTGGAGCAACAAATCTGACTTTGCATGTGCAAACGCCTTCAACAACAGCATTATTCCAGAAGACACCTTCTTCCCCAGCCCAGAAAGTTCCTGTGATGTCAAGCTGGTCGAGAAAAGCTTTGAAACAGATACGAACCTAAACTTTCAAAACCTGTCAGTGATTGGGTTCCGAATCCTCCTCCTGAAAGTGGCCGGGTTTAATCTGCTCATGACGCTGCGGCTGTGGTCCAGCTGA (SEQ ID NO:65)

ＴＣＲβ鎖

ATGGGAATCAGGCTCCTCTGTCGTGTGGCCTTTTGTTTCCTGGCTGTAGGCCTCGTAGATGTGAAAGTAACCCAGAGCTCGAGATATCTAGTCAAAAGGACGGGAGAGAAAGTTTTTCTGGAATGTGTCCAGGATATGGACCATGAAAATATGTTCTGGTATCGACAAGACCCAGGTCTGGGGCTACGGCTGATCTATTTCTCATATGATGTTAAAATGAAAGAAAAAGGAGATATTCCTGAGGGGTACAGTGTCTCTAGAGAGAAGAAGGAGCGCTTCTCCCTGATTCTGGAGTCCGCCAGCACCAACCAGACATCTATGTACCTCTGTGCCAGCAGTAACCAGATCTATGGCTACACCTTCGGTTCGGGGACCAGGTTAACCGTTGTAGAGGACCTGAACAAGGTGTTCCCACCCGAGGTCGCTGTGTTTGAGCCATCAGAAGCAGAGATCTCCCACACCCAAAAGGCCACACTGGTGTGCCTGGCCACAGGCTTCTTCCCTGACCACGTGGAGCTGAGCTGGTGGGTGAATGGGAAGGAGGTGCACAGTGGGGTCAGCACGGACCCGCAGCCCCTCAAGGAGCAGCCCGCCCTCAATGACTCCAGATACTGCCTGAGCAGCCGCCTGAGGGTCTCGGCCACCTTCTGGCAGAACCCCCGCAACCACTTCCGCTGTCAAGTCCAGTTCTACGGGCTCTCGGAGAATGACGAGTGGACCCAGGATAGGGCCAAACCCGTCACCCAGATCGTCAGCGCCGAGGCCTGGGGTAGAGCAGACTGTGGCTTTACCTCGGTGTCCTACCAGCAAGGGGTCCTGTCTGCCACCATCCTCTATGAGATCCTGCTAGGGAAGGCCACCCTGTATGCTGTGCTGGTCAGCGCCCTTGTGTTGATGGCCATGGTCAAGAGAAAGGATTTCTGA (SEQ ID NO:66)

２．ＡＬ（メチオニンをコードする開始コドンから終止をコードする終止コドン（*）まで）のアミノ酸配列

ＴＣＲα鎖

MMKSLRVLLVILWLQLSWVWSQQKEVEQNSGPLSVPEGAIASLNCTYSDRGSQSFFWYRQYSGKSPELIMSIYSNGDKEDGRFTAQLNKASQYVSLLIRDSQPSDSATYLCAVGGLTSSNTGKLIFGQGTTLQVKPDIQNPDPAVYQLRDSKSSDKSVCLFTDFDSQTNVSQSKDSDVYITDKTVLDMRSMDFKSNSAVAWSNKSDFACANAFNNSIIPEDTFFPSPESSCDVKLVEKSFETDTNLNFQNLSVIGFRILLLKVAGFNLLMTLRLWSS^* (SEQ ID NO:5)

ＴＣＲβ鎖

MGIRLLCRVAFCFLAVGLVDVKVTQSSRYLVKRTGEKVFLECVQDMDHENMFWYRQDPGLGLRLIYFSYDVKMKEKGDIPEGYSVSREKKERFSLILESASTNQTSMYLCASSNQIYGYTFGSGTRLTVVEDLNKVFPPEVAVFEPSEAEISHTQKATLVCLATGFFPDHVELSWWVNGKEVHSGVSTDPQPLKEQPALNDSRYCLSSRLRVSATFWQNPRNHFRCQVQFYGLSENDEWTQDRAKPVTQIVSAEAWGRADCGFTSVSYQQGVLSATILYEILLGKATLYAVLVSALVLMAMVKRKDF^* (SEQ ID NO:6)

ＨＬＡ−Ｂ^＊３５拘束性ＮＹ−ＥＳＯ−１_{９４−１０２}特異的Ｔ細胞クローン「ＫＱ」

１．ヌクレオチド配列

ＴＣＲα鎖

ATGATGGCAGGCATTCGAGCTTTATTTATGTACTTGTGGCTGCAGCTGGACTGGGTGAGCAGAGGAGAGAGTGTGGGGCTGCATCTTCCTACCCTGAGTGTCCAGGAGGGTGACAACTCTATTATCAACTGTGCTTATTCAAACAGCGCCTCAGACTACTTCATTTGGTACAAGCAAGAATCTGGAAAAGGTCCTCAATTCATTATAGACATTCGTTCAAATATGGACAAAAGGCAAGGCCAAAGAGTCACCGTTTTATTGAATAAGACAGTGAAACATCTCTCTCTGCAAATTGCAGCTACTCAACCTGGAGACTCAGCTGTCTACTTTTGTGCAGAGAATACCGCCCCACATAATGCAGGCAACATGCTCACCTTTGGAGGGGGAACAAGGTTAATGGTCAAACCCCATATCCAGAACCCTGACCCTGCCGTGTACCAGCTGAGAGACTCTAAATCCAGTGACAAGTCTGTCTGCCTATTCACCGATTTTGATTCTCAAACAAATGTGTCACAAAGTAAGGATTCTGATGTGTATATCACAGACAAAACTGTGCTAGACATGAGGTCTATGGACTTCAAGAGCAACAGTGCTGTGGCCTGGAGCAACAAATCTGACTTTGCATGTGCAAACGCCTTCAACAACAGCATTATTCCAGAAGACACCTTCTTCCCCAGCCCAGAAAGTTCCTGTGATGTCAAGCTGGTCGAGAAAAGCTTTGAAACAGATACGAACCTAAACTTTCAAAACCTGTCAGTGATTGGGTTCCGAATCCTCCTCCTGAAAGTGGCCGGGTTTAATCTGCTCATGACGCTGCGGCTGTGGTCCAGCTGA (SEQ ID NO:7)

ＴＣＲβ鎖

ATGGGCCCTGGGCTCCTCTGCTGGGTGCTGCTTTGTCTCCTGGGAGCAGGCCCAGTGGACGCTGGAGTCACCCAAAGTCCCACACACCTGATCAAAACGAGAGGACAGCAAGTGACTCTGAGATGCTCTCCTATCTCTGGGCACAAGAGTGTGTCCTGGTACCAACAGGTCCTGGGTCAGGGGCCCCAGTTTATCTTTCAGTATTATGAGAAAGAAGAGAGAGGAAGAGGAAACTTCCCTGATCGATTCTCAGCTCGCCAGTTCCCTAACTATAGCTCTGAGCTGAATGTGAACGCCTTGTTGCTGGGGGACTCGGCCCTGTATCTCTGTGCCAGCAGCTACGACAGGGGGATAAACTATGGCTACACCTTCGGTTCGGGGACCAGGTTAACCGTTGTAGAGGACCTGAACAAGGTGTTCCCACCCGAGGTCGCTGTGTTTGAGCCATCAGAAGCAGAGATCTCCCACACCCAAAAGGCCACACTGGTGTGCCTGGCCACAGGCTTCTTCCCTGACCACGTGGAGCTGAGCTGGTGGGTGAATGGGAAGGAGGTGCACAGTGGGGTCAGCACGGACCCGCAGCCCCTCAAGGAGCAGCCCGCCCTCAATGACTCCAGATACTGCCTGAGCAGCCGCCTGAGGGTCTCGGCCACCTTCTGGCAGAACCCCCGCAACCACTTCCGCTGTCAAGTCCAGTTCTACGGGCTCTCGGAGAATGACGAGTGGACCCAGGATAGGGCCAAACCCGTCACCCAGATCGTCAGCGCCGAGGCCTGGGGTAGAGCAGACTGTGGCTTTACCTCGGTGTCCTACCAGCAAGGGGTCCTGTCTGCCACCATCCTCTATGAGATCCTGCTAGGGAAGGCCACCCTGTATGCTGTGCTGGTCAGCGCCCTTGTGTTGATGGCCATGGTCAAGAGAAAGGATTTCTGA (SEQ ID NO:8)

２．ＫＱのアミノ酸配列（メチオニンをコードする開始コドンから終止をコードする終止コドン（^*）まで）

ＴＣＲα鎖

MMAGIRALFMYLWLQLDWVSRGESVGLHLPTLSVQEGDNSIINCAYSNSASDYFIWYKQESGKGPQFIIDIRSNMDKRQGQRVTVLLNKTVKHLSLQIAATQPGDSAVYFCAENTAPHNAGNMLTFGGGTRLMVKPHIQNPDPAVYQLRDSKSSDKSVCLFTDFDSQTNVSQSKDSDVYITDKTVLDMRSMDFKSNSAVAWSNKSDFACANAFNNSIIPEDTFFPSPESSCDVKLVEKSFETDTNLNFQNLSVIGFRILLLKVAGFNLLMTLRLWSS^* (SEQ ID NO:9)

ＴＣＲβ鎖

MGPGLLCWVLLCLLGAGPVDAGVTQSPTHLIKTRGQQVTLRCSPISGHKSVSWYQQVLGQGPQFIFQYYEKEERGRGNFPDRFSARQFPNYSSELNVNALLLGDSALYLCASSYDRGINYGYTFGSGTRLTVVEDLNKVFPPEVAVFEPSEAEISHTQKATLVCLATGFFPDHVELSWWVNGKEVHSGVSTDPQPLKEQPALNDSRYCLSSRLRVSATFWQNPRNHFRCQVQFYGLSENDEWTQDRAKPVTQIVSAEAWGRADCGFTSVSYQQGVLSATILYEILLGKATLYAVLVSALVLMAMVKRKDF^* (SEQ ID NO:10)

ＨＬＡ−Ｂ^＊３５拘束性ＮＹ−ＥＳＯ−１_{９４−１０４}特異的Ｔ細胞クローン「ＰＰ」

１．ヌクレオチド配列

ＴＣＲα鎖

ATGGCCTCTGCACCCATCTCGATGCTTGCGATGCTCTTCACATTGAGTGGGCTGAGAGCTCAGTCAGTGGCTCAGCCGGAAGATCAGGTCAACGTTGCTGAAGGGAATCCTCTGACTGTGAAATGCACCTATTCAGTCTCTGGAAACCCTTATCTTTTTTGGTATGTTCAATACCCCAACCGAGGCCTCCAGTTCCTTCTGAAATACATCACAGGGGATAACCTGGTTAAAGGCAGCTATGGCTTTGAAGCTGAATTTAACAAGAGCCAAACCTCCTTCCACCTGAAGAAACCATCTGCCCTTGTGAGCGACTCCGCTTTGTACTTCTGTGCTGTGAGAGATGTTGTGGAGGGGAAATTGCAGTTTGGAGCAGGGACCCAGGTTGTGGTCACCCCAGATATCCAGAACCCTGACCCTGCCGTGTACCAGCTGAGAGACTCTAAATCCAGTGACAAGTCTGTCTGCCTATTCACCGATTTTGATTCTCAAACAAATGTGTCACAAAGTAAGGATTCTGATGTGTATATCACAGACAAAACTGTGCTAGACATGAGGTCTATGGACTTCAAGAGCAACAGTGCTGTGGCCTGGAGCAACAAATCTGACTTTGCATGTGCAAACGCCTTCAACAACAGCATTATTCCAGAAGACACCTTCTTCCCCAGCCCAGAAAGTTCCTGTGATGTCAAGCTGGTCGAGAAAAGCTTTGAAACAGATACGAACCTAAACTTTCAAAACCTGTCAGTGATTGGGTTCCGAATCCTCCTCCTGAAAGTGGCCGGGTTTAATCTGCTCATGACGCTGCGGCTGTGGTCCAGCTGA (SEQ ID NO:11)

ＴＣＲβ鎖

ATGGGCACCAGCCTCCTCTGCTGGATGGCCCTGTGTCTCCTGGGGGCAGATCACGCAGATACTGGAGTCTCCCAGGACCCCAGACACAAGATCACAAAGAGGGGACAGAATGTAACTTTCAGGTGTGATCCAATTTCTGAACACAACCGCCTTTATTGGTACCGACAGACCCTGGGGCAGGGCCCAGAGTTTCTGACTTACTTCCAGAATGAAGCTCAACTAGAAAAATCAAGGCTGCTCAGTGATCGGTTCTCTGCAGAGAGGCCTAAGGGATCTTTCTCCACCTTGGAGATCCAGCGCACAGAGCAGGGGGACTCGGCCATGTATCTCTGTGCCAGCAGCACCACAAGCTCCTACGAGCAGTACTTCGGGCCGGGCACCAGGCTCACGGTCACAGAGGACCTGAAAAACGTGTTCCCACCCGAGGTCGCTGTGTTTGAGCCATCAGAAGCAGAGATCTCCCACACCCAAAAGGCCACACTGGTGTGCCTGGCCACAGGCTTCTACCCCGACCACGTGGAGCTGAGCTGGTGGGTGAATGGGAAGGAGGTGCACAGTGGGGTCAGCACAGACCCGCAGCCCCTCAAGGAGCAGCCCGCCCTCAATGACTCCAGATACTGCCTGAGCAGCCGCCTGAGGGTCTCGGCCACCTTCTGGCAGAACCCCCGCAACCACTTCCGCTGTCAAGTCCAGTTCTACGGGCTCTCGGAGAATGACGAGTGGACCCAGGATAGGGCCAAACCTGTCACCCAGATCGTCAGCGCCGAGGCCTGGGGTAGAGCAGACTGTGGCTTCACCTCCGAGTCTTACCAGCAAGGGGTCCTGTCTGCCACCATCCTCTATGAGATCTTGCTAGGGAAGGCCACCTTGTATGCCGTGCTGGTCAGTGCCCTCGTGCTGATGGCCATGGTCAAGAGAAAGGATTCCAGAGGCTAG (SEQ ID NO:12)

２．ＰＰのアミノ酸配列（メチオニンをコードする開始コドンから終止をコードする終止コドン（^*）まで）

ＴＣＲα鎖

MASAPISMLAMLFTLSGLRAQSVAQPEDQVNVAEGNPLTVKCTYSVSGNPYLFWYVQYPNRGLQFLLKYITGDNLVKGSYGFEAEFNKSQTSFHLKKPSALVSDSALYFCAVRDVVEGKLQFGAGTQVVVTPDIQNPDPAVYQLRDSKSSDKSVCLFTDFDSQTNVSQSKDSDVYITDKTVLDMRSMDFKSNSAVAWSNKSDFACANAFNNSIIPEDTFFPSPESSCDVKLVEKSFETDTNLNFQNLSVIGFRILLLKVAGFNLLMTLRLWSS^* (SEQ ID NO:13)

ＴＣＲβ鎖

MGTSLLCWMALCLLGADHADTGVSQDPRHKITKRGQNVTFRCDPISEHNRLYWYRQTLGQGPEFLTYFQNEAQLEKSRLLSDRFSAERPKGSFSTLEIQRTEQGDSAMYLCASSTTSSYEQYFGPGTRLTVTEDLKNVFPPEVAVFEPSEAEISHTQKATLVCLATGFYPDHVELSWWVNGKEVHSGVSTDPQPLKEQPALNDSRYCLSSRLRVSATFWQNPRNHFRCQVQFYGLSENDEWTQDRAKPVTQIVSAEAWGRADCGFTSESYQQGVLSATILYEILLGKATLYAVLVSALVLMAMVKRKDSRG^* (SEQ ID NO:14)

ＨＬＡ−Ｂ^＊２７拘束性ＮＹ−ＥＳＯ−１_{５１−７０}特異的Ｔ細胞クローン「１９３０５ＣＤ８」

１．ヌクレオチド配列

ＴＣＲα鎖

ATGGAAACTCTCCTGGGAGTGTCTTTGGTGATTCTATGGCTTCAACTGGCTAGGGTGAACAGTCAACAGGGAGAAGAGGATCCTCAGGCCTTGAGCATCCAGGAGGGTGAAAATGCCACCATGAACTGCAGTTACAAAACTAGTATAAACAATTTACAGTGGTATAGACAAAATTCAGGTAGAGGCCTTGTCCACCTAATTTTAATACGTTCAAATGAAAGAGAGAAACACAGTGGAAGATTAAGAGTCACGCTTGACACTTCCAAGAAAAGCAGTTCCTTGTTGATCACGGCTTCCCGGGCAGCAGACACTGCTTCTTACTTCTGTGCTACGGACGCCGTCGTGGGTGCTGACGGACTCACCTTTGGCAAAGGGACTCATCTAATCATCCAGCCCTATATCCAGAACCCTGACCCTGCCGTGTACCAGCTGAGAGACTCTAAATCCAGTGACAAGTCTGTCTGCCTATTCACCGATTTTGATTCTCAAACAAATGTGTCACAAAGTAAGGATTCTGATGTGTATATCACAGACAAAACTGTGCTAGACATGAGGTCTATGGACTTCAAGAGCAACAGTGCTGTGGCCTGGAGCAACAAATCTGACTTTGCATGTGCAAACGCCTTCAACAACAGCATTATTCCAGAAGACACCTTCTTCCCCAGCCCAGAAAGTTCCTGTGATGTCAAGCTGGTCGAGAAAAGCTTTGAAACAGATACGAACCTAAACTTTCAAAACCTGTCAGTGATTGGGTTCCGAATCCTCCTCCTGAAAGTGGCCGGGTTTAATCTGCTCATGACGCTGCGGCTGTGGTCCAGCTGA (SEQ ID NO:43)

ＴＣＲβ鎖

ATGCTGCTGCTTCTGCTGCTTCTGGGGCCAGGCTCCGGGCTTGGTGCTGTCGTCTCTCAACATCCGAGCTGGGTTATCTGTAAGAGTGGAACCTCTGTGAAGATCGAGTGCCGTTCCCTGGACTTTCAGGCCACAACTATGTTTTGGTATCGTCAGTTCCCGAAACAGAGTCTCATGCTGATGGCAACTTCCAATGAGGGCTCCAAGGCCACATACGAGCAAGGCGTCGAGAAGGACAAGTTTCTCATCAACCATGCAAGCCTGACCTTGTCCACTCTGACAGTGACCAGTGCCCATCCTGAAGACAGCAGCTTCTACATCTGCAGTGCTAGAGACCGGGACATAGGACCCTTAGATACGCAGTATTTTGGCCCAGGCACCCGGCTGACAGTGCTCGAGGACCTGAAAAACGTGTTCCCACCCGAGGTCGCTGTGTTTGAGCCATCAGAAGCAGAGATCTCCCACACCCAAAAGGCCACACTGGTGTGCCTGGCCACAGGCTTCTACCCCGACCACGTGGAGCTGAGCTGGTGGGTGAATGGGAAGGAGGTGCACAGTGGGGTCAGCACAGACCCGCAGCCCCTCAAGGAGCAGCCCGCCCTCAATGACTCCAGATACTGCCTGAGCAGCCGCCTGAGGGTCTCGGCCACCTTCTGGCAGAACCCCCGCAACCACTTCCGCTGTCAAGTCCAGTTCTACGGGCTCTCGGAGAATGACGAGTGGACCCAGGATAGGGCCAAACCTGTCACCCAGATCGTCAGCGCCGAGGCCTGGGGTAGAGCAGACTGTGGCTTCACCTCCGAGTCTTACCAGCAAGGGGTCCTGTCTGCCACCATCCTCTATGAGATCTTGCTAGGGAAGGCCACCTTGTATGCCGTGCTGGTCAGTGCCCTCGTGCTGATGGCCATGGTCAAGAGAAAGGATTCCAGAGGCTAG (SEQ ID NO:44)

２．１９３０５ＣＤ８のアミノ酸配列（メチオニンをコードする開始コドンから終止をコードする終止コドン（^*）まで）

ＴＣＲα鎖

METLLGVSLVILWLQLARVNSQQGEEDPQALSIQEGENATMNCSYKTSINNLQWYRQNSGRGLVHLILIRSNEREKHSGRLRVTLDTSKKSSSLLITASRAADTASYFCATDAVVGADGLTFGKGTHLIIQPYIQNPDPAVYQLRDSKSSDKSVCLFTDFDSQTNVSQSKDSDVYITDKTVLDMRSMDFKSNSAVAWSNKSDFACANAFNNSIIPEDTFFPSPESSCDVKLVEKSFETDTNLNFQNLSVIGFRILLLKVAGFNLLMTLRLWSS^* (SEQ ID NO:45)

ＴＣＲβ鎖

MLLLLLLLGPGSGLGAVVSQHPSWVICKSGTSVKIECRSLDFQATTMFWYRQFPKQSLMLMATSNEGSKATYEQGVEKDKFLINHASLTLSTLTVTSAHPEDSSFYICSARDRDIGPLDTQYFGPGTRLTVLEDLKNVFPPEVAVFEPSEAEISHTQKATLVCLATGFYPDHVELSWWVNGKEVHSGVSTDPQPLKEQPALNDSRYCLSSRLRVSATFWQNPRNHFRCQVQFYGLSENDEWTQDRAKPVTQIVSAEAWGRADCGFTSESYQQGVLSATILYEILLGKATLYAVLVSALVLMAMVKRKDSRG^* (SEQ ID NO:46)

ＨＬＡ−Ｃｗ^＊１５拘束性ＮＹ−ＥＳＯ−１_{１２７−１３５}特異的Ｔ細胞クローン「ＢＢ」

１．ヌクレオチド配列

ＴＣＲα鎖

＞ＢＢＡ−２

ATGATGGCAGGCATTCGAGCTTTATTTATGTACTTGTGGCTGCAGCTGGACTGGGTGAGCAGAGGAGAGAGTGTGGGGCTGCATCTTCCTACCCTGAGTGTCCAGGAGGGTGACAACTCTATTATCAACTGTGCTTATTCAAACAGCGCCTCAGACTACTTCATTTGGTACAAGCAAGAATCTGGAAAAGGTCCTCAATTCATTATAGACATTCGTTCAAATATGGACAAAAGGCAAGGCCAAAGAGTCACCGTTTTATTGAATAAGACAGTGAAACATCTCTCTCTGCAAATTGCAGCTACTCAACCTGGAGACTCAGCTGTCTACTTTTGTGCAGAGGCGGGAGGAAGCCAAGGAAATCTCATCTTTGGAAAAGGCACTAAACTCTCTGTTAAACCAAATATCCAGAACCCTGACCCTGCCGTGTACCAGCTGAGAGACTCTAAATCCAGTGACAAGTCTGTCTGCCTATTCACCGATTTTGATTCTCAAACAAATGTGTCACAAAGTAAGGATTCTGATGTGTATATCACAGACAAAACTGTGCTAGACATGAGGTCTATGGACTTCAAGAGCAACAGTGCTGTGGCCTGGAGCAACAAATCTGACTTTGCATGTGCAAACGCCTTCAACAACAGCATTATTCCAGAAGACACCTTCTTCCCCAGCCCAGAAAGTTCCTGTGATGTCAAGCTGGTCGAGAAAAGCTTTGAAACAGATACGAACCTAAACTTTCAAAACCTGTCAGTGATTGGGTTCCGAATCCTCCTCCTGAAAGTGGCCGGGTTTAATCTGCTCATGACGCTGCGGCTGTGGTCCAGCTGA (SEQ ID NO:15)

ＴＣＲβ鎖

ATGGGCCCCGGGCTCCTCTGCTGGGCACTGCTTTGTCTCCTGGGAGCAGGCTTAGTGGACGCTGGAGTCACCCAAAGTCCCACACACCTGATCAAAACGAGAGGACAGCAAGTGACTCTGAGATGCTCTCCTAAGTCTGGGCATGACACTGTGTCCTGGTACCAACAGGCCCTGGGTCAGGGGCCCCAGTTTATCTTTCAGTATTATGAGGAGGAAGAGAGACAGAGAGGCAACTTCCCTGATCGATTCTCAGGTCACCAGTTCCCTAACTATAGCTCTGAGCTGAATGTGAACGCCTTGTTGCTGGGGGACTCGGCCCTCTATCTCTGTGCCAGCAGCTTTTGGGGTCGTTCTCACCCTTCAAACTATGGCTACACCTTCGGTTCGGGGACCAGGTTAACCGTTGTAGAGGACCTGAACAAGGTGTTCCCACCCGAGGTCGCTGTGTTTGAGCCATCAGAAGCAGAGATCTCCCACACCCAAAAGGCCACACTGGTGTGCCTGGCCACAGGCTTCTTCCCTGACCACGTGGAGCTGAGCTGGTGGGTGAATGGGAAGGAGGTGCACAGTGGGGTCAGCACGGACCCGCAGCCCCTCAAGGAGCAGCCCGCCCTCAATGACTCCAGATACTGCCTGAGCAGCCGCCTGAGGGTCTCGGCCACCTTCTGGCAGAACCCCCGCAACCACTTCCGCTGTCAAGTCCAGTTCTACGGGCTCTCGGAGAATGACGAGTGGACCCAGGATAGGGCCAAACCCGTCACCCAGATCGTCAGCGCCGAGGCCTGGGGTAGAGCAGACTGTGGCTTTACCTCGGTGTCCTACCAGCAAGGGGTCCTGTCTGCCACCATCCTCTATGAGATCCTGCTAGGGAAGGCCACCCTGTATGCTGTGCTGGTCAGCGCCCTTGTGTTGATGGCCATGGTCAAGAGAAAGGATTTCTGA (SEQ ID NO:16)

２．ＢＢのアミノ酸配列（メチオニンをコードする開始コドンから終止をコードする終止コドン（^*）まで）

ＴＣＲα鎖

MMAGIRALFMYLWLQLDWVSRGESVGLHLPTLSVQEGDNSIINCAYSNSASDYFIWYKQESGKGPQFIIDIRSNMDKRQGQRVTVLLNKTVKHLSLQIAATQPGDSAVYFCAEAGGSQGNLIFGKGTKLSVKPNIQNPDPAVYQLRDSKSSDKSVCLFTDFDSQTNVSQSKDSDVYITDKTVLDMRSMDFKSNSAVAWSNKSDFACANAFNNSIIPEDTFFPSPESSCDVKLVEKSFETDTNLNFQNLSVIGFRILLLKVAGFNLLMTLRLWSS^* (SEQ ID NO:17)

ＴＣＲβ鎖

MGPGLLCWALLCLLGAGLVDAGVTQSPTHLIKTRGQQVTLRCSPKSGHDTVSWYQQALGQGPQFIFQYYEEEERQRGNFPDRFSGHQFPNYSSELNVNALLLGDSALYLCASSFWGRSHPSNYGYTFGSGTRLTVVEDLNKVFPPEVAVFEPSEAEISHTQKATLVCLATGFFPDHVELSWWVNGKEVHSGVSTDPQPLKEQPALNDSRYCLSSRLRVSATFWQNPRNHFRCQVQFYGLSENDEWTQDRAKPVTQIVSAEAWGRADCGFTSVSYQQGVLSATILYEILLGKATLYAVLVSALVLMAMVKRKDF^* (SEQ ID NO:18)

ＨＬＡ−Ｃｗ^＊０３拘束性ＮＹ−ＥＳＯ−１_{９２−１００}特異的Ｔ細胞クローン「ＫＢ」

１．ヌクレオチド配列

ＴＣＲα鎖

ATGAACATGCTGACTGCCAGCCTGTTGAGGGCAGTCATAGCCTCCATCTGTGTTGTATCCAGCATGGCTCAGAAGGTAACTCAAGCGCAGACTGAAATTTCTGTGGTGGAGAAGGAGGATGTGACCTTGGACTGTGTGTATGAAACCCGTGATACTACTTATTACTTATTCTGGTACAAGCAACCACCAAGTGGAGAATTGGTTTTCCTTATTCGTCGGAACTCTTTTGATGAGCAAAATGAAATAAGTGGTCGGTATTCTTGGAACTTCCAGAAATCCACCAGTTCCTTCAACTTCACCATCACAGCCTCACAAGTCGTGGACTCAGCAGTATACTTCTGTGCTCTGAGTGAGGCAAGCGGGAGAGATGACAAGATCATCTTTGGAAAAGGGACACGACTTCATATTCTCCCCAATATCCAGAACCCTGACCCTGCCGTGTACCAGCTGAGAGACTCTAAATCCAGTGACAAGTCTGTCTGCCTATTCACCGATTTTGATTCTCAAACAAATGTGTCACAAAGTAAGGATTCTGATGTGTATATCACAGACAAAACTGTGCTAGACATGAGGTCTATGGACTTCAAGAGCAACAGTGCTGTGGCCTGGAGCAACAAATCTGACTTTGCATGTGCAAACGCCTTCAACAACAGCATTATTCCAGAAGACACCTTCTTCCCCAGCCCAGAAAGTTCCTGTGATGTCAAGCTGGTCGAGAAAAGCTTTGAAACAGATACGAACCTAAACTTTCAAAACCTGTCAGTGATTGGGTTCCGAATCCTCCTCCTGAAAGTGGCCGGGTTTAATCTGCTCATGACGCTGCGGCTGTGGTCCAGCTGA (SEQ ID NO:19)

ＴＣＲβ鎖

ATGCTGCTGCTTCTGCTGCTTCTGGGGCCAGGCTCCGGGCTTGGTGCTGTCGTCTCTCAACATCCGAGCTGGGTTATCTGTAAGAGTGGAACCTCTGTGAAGATCGAGTGCCGTTCCCTGGACTTTCAGGCCACAACTATGTTTTGGTATCGTCAGTTCCCGAAACAGAGTCTCATGCTGATGGCAACTTCCAATGAGGGCTCCAAGGCCACATACGAGCAAGGCGTCGAGAAGGACAAGTTTCTCATCAACCATGCAAGCCTGACCTTGTCCACTCTGACAGTGACCAGTGCCCATCCTGAAGACAGCAGCTTCTACATCTGCAGTGCTAGAGTCGACTTTGACCGTGACGAGCAGTTCTTCGGGCCAGGGACACGGCTCACCGTGCTAGAGGACCTGAAAAACGTGTTCCCACCCGAGGTCGCTGTGTTTGAGCCATCAGAAGCAGAGATCTCCCACACCCAAAAGGCCACACTGGTGTGCCTGGCCACAGGCTTCTACCCCGACCACGTGGAGCTGAGCTGGTGGGTGAATGGGAAGGAGGTGCACAGTGGGGTCAGCACAGACCCGCAGCCCCTCAAGGAGCAGCCCGCCCTCAATGACTCCAGATACTGCCTGAGCAGCCGCCTGAGGGTCTCGGCCACCTTCTGGCAGAACCCCCGCAACCACTTCCGCTGTCAAGTCCAGTTCTACGGGCTCTCGGAGAATGACGAGTGGACCCAGGATAGGGCCAAACCTGTCACCCAGATCGTCAGCGCCGAGGCCTGGGGTAGAGCAGACTGTGGCTTCACCTCCGAGTCTTACCAGCAAGGGGTCCTGTCTGCCACCATCCTCTATGAGATCTTGCTAGGGAAGGCCACCTTGTATGCCGTGCTGGTCAGTGCCCTCGTGCTGATGGCCATGGTCAAGAGAAAGGATTCCAGAGGCTAG (SEQ ID NO:20)

２．ＫＢのアミノ酸配列（メチオニンをコードする開始コドンから終止をコードする終止コドン（^*）まで）

ＴＣＲα鎖

MNMLTASLLRAVIASICVVSSMAQKVTQAQTEISVVEKEDVTLDCVYETRDTTYYLFWYKQPPSGELVFLIRRNSFDEQNEISGRYSWNFQKSTSSFNFTITASQVVDSAVYFCALSEASGRDDKIIFGKGTRLHILPNIQNPDPAVYQLRDSKSSDKSVCLFTDFDSQTNVSQSKDSDVYITDKTVLDMRSMDFKSNSAVAWSNKSDFACANAFNNSIIPEDTFFPSPESSCDVKLVEKSFETDTNLNFQNLSVIGFRILLLKVAGFNLLMTLRLWSS^* (SEQ ID NO:21)

ＴＣＲβ鎖

MLLLLLLLGPGSGLGAVVSQHPSWVICKSGTSVKIECRSLDFQATTMFWYRQFPKQSLMLMATSNEGSKATYEQGVEKDKFLINHASLTLSTLTVTSAHPEDSSFYICSARVDFDRDEQFFGPGTRLTVLEDLKNVFPPEVAVFEPSEAEISHTQKATLVCLATGFYPDHVELSWWVNGKEVHSGVSTDPQPLKEQPALNDSRYCLSSRLRVSATFWQNPRNHFRCQVQFYGLSENDEWTQDRAKPVTQIVSAEAWGRADCGFTSESYQQGVLSATILYEILLGKATLYAVLVSALVLMAMVKRKDSRG^* (SEQ ID NO:22)

ＨＬＡ−Ｃｗ^＊０３拘束性ＮＹ−ＥＳＯ−１_{９６−１０４}特異的Ｔ細胞クローン「ＳＴ」

１．ヌクレオチド配列

ＴＣＲα鎖

ATGGAAACTCTCCTGGGAGTGTCTTTGGTGATTCTATGGCTTCAACTGGCTAGGGTGAACAGTCAACAGGGAGAAGAGGATCCTCAGGCCTTGAGCATCCAGGAGGGTGAAAATGCCACCATGAACTGCAGTTACAAAACTAGTATAAACAATTTACAGTGGTATAGACAAAATTCAGGTAGAGGCCTTGTCCACCTAATTTTAATACGTTCAAATGAAAGAGAGAAACACAGTGGAAGATTAAGAGTCACGCTTGACACTTCCAAGAAAAGCAGTTCCTTGTTGATCACGGCTTCCCGGGCAGCAGACACTGCTTCTTACTTCTGTGCTACGGACGCAGAGTATAACAATGCCAGACTCATGTTTGGAGATGGAACTCAGCTGGTGGTGAAGCCCAATATCCAGAACCCTGACCCTGCCGTGTACCAGTTGAGAGACTCTAAATCCAGTGACAAGTCTGTCTGCCTATTCACCGATTTTGATTCTCAAACAAATGTGTCACAAAGTAAGGATTCTGATGTGTATATCACAGACAAAACTGTGCTAGACATGAGGTCTATGGACTTCAAGAGCAACAGTGCTGTGGCCTGGAGCAACAAATCTGACTTTGCATGTGCAAACGCCTTCAACAACAGCATTATTCCAGAAGACACCTTCTTCCCCAGCCCAGAAAGTTCCTGTGATGTCAAGCTGGTCGAGAAAAGCTTTGAAACAGATACGAACCTAAACTTTCAAAACCTGTCAGTGATTGGGTTCCGAATCCTCCTCCTGAAAGTGGCCGGGTTTAATCTGCTCATGACGCTGCGGCTGTGGTCCAGCTGA (SEQ ID NO:23)

ＴＣＲβ鎖

ATGGGCACCAGCCTCCTCTGCTGGATGGCCCTGTGTCTCCTGGGGGCAGATCACGCAGATACTGGAGTCTCCCAGGACCCCAGACACAAGATCACAAAGAGGGGACAGAATGTAACTTTCAGGTGTGATCCAATTTCTGAACACAACCGCCTTTATTGGTACCGACAGACCCTGGGGCAGGGCCCAGAGTTTCTGACTTACTTCCAGAATGAAGCTCAACTAGAAAAATCAAGGCTGCTCAGTGATCGGTTCTCTGCAGAGAGGCCTAAGGGATCTTTCTCCACCTTGGAGATCCAGCGCACAGAGCAGGGGGACTCGGCCATGTATCTCTGTGCCAGCAGCATGGTAGCTGGGGCCAACGTCCTGACTTTCGGGGCCGGCAGCAGGCTGACCGTGCTGGAGGACCTGAAAAACGTGTTCCCACCCGAGGTCGCTGTGTTTGAGCCATCAGAAGCAGAGATCTCCCACACCCAAAAGGCCACACTGGTGTGCCTGGCCACAGGCTTCTACCCCGACCACGTGGAGCTGAGCTGGTGGGTGAATGGGAAGGAGGTGCACAGTGGGGTCAGCACAGACCCGCAGCCCCTCAAGGAGCAGCCCGCCCTCAATGACTCCAGATACTGCCTGAGCAGCCGCCTGAGGGTCTCGGCCACCTTCTGGCAGAACCCCCGCAACCACTTCCGCTGTCAAGTCCAGTTCTACGGGCTCTCGGAGAATGACGAGTGGACCCAGGATAGGGCCAAACCTGTCACCCAGATCGTCAGCGCCGAGGCCTGGGGTAGAGCAGACTGTGGCTTCACCTCCGAGTCTTACCAGCAAGGGGTCCTGTCTGCCACCATCCTCTATGAGATCTTGCTAGGGAAGGCCACCTTGTATGCCGTGCTGGTCAGTGCCCTCGTGCTGATGGCCATGGTCAAGAGAAAGGATTCCAGAGGCTAG (SEQ ID NO:24)

２．ＳＴのアミノ酸配列（メチオニンをコードする開始コドンから終止をコードする終止コドン（^*）まで）

ＴＣＲα鎖

METLLGVSLVILWLQLARVNSQQGEEDPQALSIQEGENATMNCSYKTSINNLQWYRQNSGRGLVHLILIRSNEREKHSGRLRVTLDTSKKSSSLLITASRAADTASYFCATDAEYNNARLMFGDGTQLVVKPNIQNPDPAVYQLRDSKSSDKSVCLFTDFDSQTNVSQSKDSDVYITDKTVLDMRSMDFKSNSAVAWSNKSDFACANAFNNSIIPEDTFFPSPESSCDVKLVEKSFETDTNLNFQNLSVIGFRILLLKVAGFNLLMTLRLWSS^* (SEQ ID NO:25)

ＴＣＲβ鎖

MGTSLLCWMALCLLGADHADTGVSQDPRHKITKRGQNVTFRCDPISEHNRLYWYRQTLGQGPEFLTYFQNEAQLEKSRLLSDRFSAERPKGSFSTLEIQRTEQGDSAMYLCASSMVAGANVLTFGAGSRLTVLEDLKNVFPPEVAVFEPSEAEISHTQKATLVCLATGFYPDHVELSWWVNGKEVHSGVSTDPQPLKEQPALNDSRYCLSSRLRVSATFWQNPRNHFRCQVQFYGLSENDEWTQDRAKPVTQIVSAEAWGRADCGFTSESYQQGVLSATILYEILLGKATLYAVLVSALVLMAMVKRKDSRG^* (SEQ ID NO:26)

ＨＬＡ−Ａ^＊０２拘束性ＮＹ−ＥＳＯ−１_{１５７−１６５}特異的Ｔ細胞クローン「１９３０５ＤＰ」

１．ヌクレオチド配列

ＴＣＲα鎖

ATGGAAACTCTCCTGGGAGTGTCTTTGGTGATTCTATGGCTTCAACTGGCTAGGGTGAACAGTCAACAGGGAGAAGAGGATCCTCAGGCCTTGAGCATCCAGGAGGGTGAAAATGCCACCATGAACTGCAGTTACAAAACTAGTATAAACAATTTACAGTGGTATAGACAAAATTCAGGTAGAGGCCTTGTCCACCTAATTTTAATACGTTCAAATGAAAGAGAGAAACACAGTGGAAGATTAAGAGTCACGCTTGACACTTCCAAGAAAAGCAGTTCCTTGTTGATCACGGCTTCCCGGGCAGCAGACACTGCTTCTTACTTCTGTGCTACGGACGGGGGGGGCACCCTCACCTTTGGGAAGGGGACTATGCTTCTAGTCTCTCCAGATATCCAGAACCCTGACCCTGCCGTGTACCAGCTGAGAGACTCTAAATCCAGTGACAAGTCTGTCTGCCTATTCACCGATTTTGATTCTCAAACAAATGTGTCACAAAGTAAGGATTCTGATGTGTATATCACAGACAAAACTGTGCTAGACATGAGGTCTATGGACTTCAAGAGCAACAGTGCTGTGGCCTGGAGCAACAAATCTGACTTTGCATGTGCAAACGCCTTCAACAACAGCATTATTCCAGAAGACACCTTCTTCCCCAGCCCAGAAAGTTCCTGTGATGTCAAGCTGGTCGAGAAAAGCTTTGAAACAGATACGAACCTAAACTTTCAAAACCTGTCAGTGATTGGGTTCCGAATCCTCCTCCTGAAAGTGGCCGGGTTTAATCTGCTCATGACGCTGCGGCTGTGGTCCAGCTGA (SEQ ID NO:3)

ＴＣＲβ鎖

ATGGACTCCTGGACCCTCTGCTGTGTGTCCCTTTGCATCCTGGTAGCAAAGCACACAGATGCTGGAGTTATCCAGTCACCCCGGCACGAGGTGACAGAGATGGGACAAGAAGTGACTCTGAGATGTAAACCAATTTCAGGACACGACTACCTTTTCTGGTACAGACAGACCATGATGCGGGGACTGGAGTTGCTCATTTACTTTAACAACAACGTTCCGATAGATGATTCAGGGATGCCCGAGGATCGATTCTCAGCTAAGATGCCTAATGCATCATTCTCCACTCTGAAGATCCAGCCCTCAGAACCCAGGGACTCAGCTGTGTACTTCTGTGCCAGCAAGTGGGGCGGCACTGAAGCTTTCTTTGGACAAGGCACCAGACTCACAGTTGTAGAGGACCTGAACAAGGTGTTCCCACCCGAGGTCGCTGTGTTTGAGCCATCAGAAGCAGAGATCTCCCACACCCAAAAGGCCACACTGGTGTGCCTGGCCACAGGCTTCTTCCCTGACCACGTGGAGCTGAGCTGGTGGGTGAATGGGAAGGAGGTGCACAGTGGGGTCAGCACGGACCCGCAGCCCCTCAAGGAGCAGCCCGCCCTCAATGACTCCAGATACTGCCTGAGCAGCCGCCTGAGGGTCTCGGCCACCTTCTGGCAGAACCCCCGCAACCACTTCCGCTGTCAAGTCCAGTTCTACGGGCTCTCGGAGAATGACGAGTGGACCCAGGATAGGGCCAAACCCGTCACCCAGATCGTCAGCGCCGAGGCCTGGGGTAGAGCAGACTGTGGCTTTACCTCGGTGTCCTACCAGCAAGGGGTCCTGTCTGCCACCATCCTCTATGAGATCCTGCTAGGGAAGGCCACCCTGTATGCTGTGCTGGTCAGCGCCCTTGTGTTGATGGCCATGGTCAAGAGAAAGGATTTCTGA (SEQ ID NO:4)

２．１９３０５ＤＰのアミノ酸配列（メチオニンをコードする開始コドンから終止をコードする終止コドン（^*）まで）

ＴＣＲα鎖

METLLGVSLVILWLQLARVNSQQGEEDPQALSIQEGENATMNCSYKTSINNLQWYRQNSGRGLVHLILIRSNEREKHSGRLRVTLDTSKKSSSLLITASRAADTASYFCATDGGGTLTFGKGTMLLVSPDIQNPDPAVYQLRDSKSSDKSVCLFTDFDSQTNVSQSKDSDVYITDKTVLDMRSMDFKSNSAVAWSNKSDFACANAFNNSIIPEDTFFPSPESSCDVKLVEKSFETDTNLNFQNLSVIGFRILLLKVAGFNLLMTLRLWSS^* (SEQ ID NO:1)

ＴＣＲβ鎖

MDSWTLCCVSLCILVAKHTDAGVIQSPRHEVTEMGQEVTLRCKPISGHDYLFWYRQTMMRGLELLIYFNNNVPIDDSGMPEDRFSAKMPNASFSTLKIQPSEPRDSAVYFCASKWGGTEAFFGQGTRLTVVEDLNKVFPPEVAVFEPSEAEISHTQKATLVCLATGFFPDHVELSWWVNGKEVHSGVSTDPQPLKEQPALNDSRYCLSSRLRVSATFWQNPRNHFRCQVQFYGLSENDEWTQDRAKPVTQIVSAEAWGRADCGFTSVSYQQGVLSATILYEILLGKATLYAVLVSALVLMAMVKRKDF^* (SEQ ID NO:2)

ＨＬＡ−Ａ^＊０２拘束性ＮＹ−ＥＳＯ−１_{１５７−１６５}特異的Ｔ細胞クローン「ＪＤ」

１．ヌクレオチド配列

ＴＣＲα鎖

ATGATGAAATCCTTGAGAGTTTTACTAGTGATCCTGTGGCTTCAGTTGAGCTGGGTTTGGAGCCAACAGAAGGAGGTGGAGCAGAATTCTGGACCCCTCAGTGTTCCAGAGGGAGCCATTGCCTCTCTCAACTGCACTTACAGTGACCGAGGTTCCCAGTCCTTCTTCTGGTACAGACAATATTCTGGGAAAAGCCCTGAGTTGATAATGTTCATATACTCCAATGGTGACAAAGAAGATGGAAGGTTTACAGCACAGCTCAATAAAGCCAGCCAGTATGTTTCTCTGCTCATCAGAGACTCCCAGCCCAGTGATTCAGCCACCTACCTCTGTGCCGTGGGTGCTACAAACAAGCTCATCTTTGGAACTGGCACTCTGCTTGCTGTCCAGCCAAATATCCAGAACCCTGACCCTGCCGTGTACCAGCTGAGAGACTCTAAATCCAGTGACAAGTCTGTCTGCCTATTCACCGATTTTGATTCTCAAACAAATGTGTCACAAAGTAAGGATTCTGATGTGTATATCACAGACAAAACTGTGCTAGACATGAGGTCTATGGACTTCAAGAGCAACAGTGCTGTGGCCTGGAGCAACAAATCTGACTTTGCATGTGCAAACGCCTTCAACAACAGCATTATTCCAGAAGACACCTTCTTCCCCAGCCCAGAAAGTTCCTGTGATGTCAAGCTGGTCGAGAAAAGCTTTGAAACAGATACGAACCTAAACTTTCAAAACCTGTCAGTGATTGGGTTCCGAATCCTCCTCCTGAAAGTGGCCGGGTTTAATCTGCTCATGACGCTGCGGCTGTGGTCCAGCTGA (SEQ ID NO:27)

ＴＣＲβ鎖

ATGGTTTCCAGGCTTCTCAGTTTAGTGTCCCTTTGTCTCCTGGGAGCAAAGCACATAGAAGCTGGAGTTACTCAGTTCCCCAGCCACAGCGTAATAGAGAAGGGCCAGACTGTGACTCTGAGATGTGACCCAATTTCTGGACATGATAATCTTTATTGGTATCGACGTGTTATGGGAAAAGAAATAAAATTTCTGTTACATTTTGTGAAAGAGTCTAAACAGGATGAGTCCGGTATGCCCAACAATCGATTCTTAGCTGAAAGGACTGGAGGGACGTATTCTACTCTGAAGGTGCAGCCTGCAGAACTGGAGGATTCTGGAGTTTATTTCTGTGCCAGCAGCCAAGCGTACGGCACTGAAGCTTTCTTTGGACAAGGCACCAGACTCACAGTTGTAGAGGACCTGAACAAGGTGTTCCCACCCGAGGTCGCTGTGTTTGAGCCATCAGAAGCAGAGATCTCCCACACCCAAAAGGCCACACTGGTGTGCCTGGCCACAGGCTTCTTCCCTGACCACGTGGAGCTGAGCTGGTGGGTGAATGGGAAGGAGGTGCACAGTGGGGTCAGCACGGACCCGCAGCCCCTCAAGGAGCAGCCCGCCCTCAATGACTCCAGATACTGCCTGAGCAGCCGCCTGAGGGTCTCGGCCACCTTCTGGCAGAACCCCCGCAACCACTTCCGCTGTCAAGTCCAGTTCTACGGGCTCTCGGAGAATGACGAGTGGACCCAGGATAGGGCCAAACCCGTCACCCAGATCGTCAGCGCCGAGGCCTGGGGTAGAGCAGACTGTGGCTTTACCTCGGTGTCCTACCAGCAAGGGGTCCTGTCTGCCACCATCCTCTATGAGATCCTGCTAGGGAAGGCCACCCTGTATGCTGTGCTGGTCAGCGCCCTTGTGTTGATGGCCATGGTCAAGAGAAAGGATTTCTGA (SEQ ID NO:28)

２．ＪＤのアミノ酸配列（メチオニンをコードする開始コドンから終止をコードする終止コドン（^*）まで）

ＴＣＲα鎖

MMKSLRVLLVILWLQLSWVWSQQKEVEQNSGPLSVPEGAIASLNCTYSDRGSQSFFWYRQYSGKSPELIMFIYSNGDKEDGRFTAQLNKASQYVSLLIRDSQPSDSATYLCAVGATNKLIFGTGTLLAVQPNIQNPDPAVYQLRDSKSSDKSVCLFTDFDSQTNVSQSKDSDVYITDKTVLDMRSMDFKSNSAVAWSNKSDFACANAFNNSIIPEDTFFPSPESSCDVKLVEKSFETDTNLNFQNLSVIGFRILLLKVAGFNLLMTLRLWSS^* (SEQ ID NO:29)

ＴＣＲβ鎖

MVSRLLSLVSLCLLGAKHIEAGVTQFPSHSVIEKGQTVTLRCDPISGHDNLYWYRRVMGKEIKFLLHFVKESKQDESGMPNNRFLAERTGGTYSTLKVQPAELEDSGVYFCASSQAYGTEAFFGQGTRLTVVEDLNKVFPPEVAVFEPSEAEISHTQKATLVCLATGFFPDHVELSWWVNGKEVHSGVSTDPQPLKEQPALNDSRYCLSSRLRVSATFWQNPRNHFRCQVQFYGLSENDEWTQDRAKPVTQIVSAEAWGRADCGFTSVSYQQGVLSATILYEILLGKATLYAVLVSALVLMAMVKRKDF^* (SEQ ID NO:30)

ＨＬＡ−ＤＲＢ１^＊０７拘束性ＮＹ−ＥＳＯ−１（１３９−１６０）特異的Ｔ細胞クローン「ＰＢ−Ｐ」

１．ヌクレオチド配列

ＴＣＲα鎖

ATGGCCATGCTCCTGGGGGCATCAGTGCTGATTCTGTGGCTTCAGCCAGACTGGGTAAACAGTCAACAGAAGAATGATGACCAGCAAGTTAAGCAAAATTCACCATCCCTGAGCGTCCAGGAAGGAAGAATTTCTATTCTGAACTGTGACTATACTAACAGCATGTTTGATTATTTCCTATGGTACAAAAAATACCCTGCTGAAGGTCCTACATTCCTGATATCTATAAGTTCCATTAAGGATAAAAATGAAGATGGAAGATTCACTGTCTTCTTAAACAAAAGTGCCAAGCACCTCTCTCTGCACATTGTGCCCTCCCAGCCTGGAGACTCTGCAGTGTACTTCTGTGCAGCAAGCCCCTCTGGCAACACAGGCAAACTAATCTTTGGGCAAGGGACAACTTTACAAGTAAAACCAGATATCCAGAAGCCTGACCCTGCCGTGTACCAGCTGAGAGACTCTAAATCCAGTGACAAGTCTGTCTGCCTATTCACCGATTTTGATTCTCAAACAAATGTGTCACAAAGTAAGGATTCTGATGTGTATATCACAGACAAAACTGTGCTAGACATGAGGTCTATGGACTTCAAGAGCAACAGTGCTGTGGCCTGGAGCAACAAATCTGACTTTGCATGTGCAAACGCCTTCAACAACAGCATTATTCCAGAAGACACCTTCTTCCCCAGCCCAGAAAGTTCCTGTGATGTCAAGCTGGTCGAGAAAAGCTTTGAAACAGATACGAACCTAAACTTTCAAAACCTGTCAGTGATTGGGTTCCGAATCCTCCTCCTGAAAGTGGCCGGGTTTAATCTGCTCATGACGCTGCGGCTGTGGTCCAGCTGA (SEQ ID NO:31)

ＴＣＲβ鎖

ATGGGCTCCAGGCTGCTCTGTTGGGTGCTGCTTTGTCTCCTGGGAGCAGGCCCAGTAAAGGCTGGAGTCACTCAAACTCCAAGATATCTGATCAAAACGAGAGGACAGCAAGTGACACTGAGCTGCTCCCCTATCTCTGGGCATAGGAGTGTATCCTGGTACCAACAGACCCCAGGACAGGGCCTTCAGTTCCTCTTTGAATACTTCAGTGAGACACAGAGAAACAAAGGAAACTTCCCTGGTCGATTCTCAGGGCGCCAGTTCTCTAACTCTCGCTCTGAGATGAATGTGAGCACCTTGGAGCTGGGGGACTCGGCCCTTTATCTTTGCGCCAGCAGCCCAGACAGGGCCATGAACACTGAAGCTTTCTTTGGACAAGGCACCAGACTCACAGTTGTAGAGGACCTGAACAAGGTGTTCCCACCCGAGGTCGCTGTGTTTGAGCCATCAGAAGCAGAGATCTCCCACACCCAAAAGGCCACACTGGTGTGCCTGGCCACAGGCTTCTTCCCTGACCACGTGGAGCTGAGCTGGTGGGTGAATGGGAAGGAGGTGCACAGTGGGGTCAGCACGGACCCGCAGCCCCTCAAGGAGCAGCCCGCCCTCAATGACTCCAGATACTGCCTGAGCAGCCGCCTGAGGGTCTCGGCCACCTTCTGGCAGAACCCCCGCAACCACTTCCGCTGTCAAGTCCAGTTCTACGGGCTCTCGGAGAATGACGAGTGGACCCAGGATAGGGCCAAACCCGTCACCCAGATCGTCAGCGCCGAGGCCTGGGGTAGAGCAGACTGTGGCTTTACCTCGGTGTCCTACCAGCAAGGGGTCCTGTCTGCCACCATCCTCTATGAGATCCTGCTAGGGAAGGCCACCCTGTATGCTGTGCTGGTCAGCGCCCTTGTGTTGATGGCCATGGTCAAGAGAAAGGATTTCTGA (SEQ ID NO:32)

２．ＰＢ−Ｐのアミノ酸配列（メチオニンをコードする開始コドンから終止をコードする終止コドン（^*）まで）

ＴＣＲα鎖

MAMLLGASVLILWLQPDWVNSQQKNDDQQVKQNSPSLSVQEGRISILNCDYTNSMFDYFLWYKKYPAEGPTFLISISSIKDKNEDGRFTVFLNKSAKHLSLHIVPSQPGDSAVYFCAASPSGNTGKLIFGQGTTLQVKPDIQKPDPAVYQLRDSKSSDKSVCLFTDFDSQTNVSQSKDSDVYITDKTVLDMRSMDFKSNSAVAWSNKSDFACANAFNNSIIPEDTFFPSPESSCDVKLVEKSFETDTNLNFQNLSVIGFRILLLKVAGFNLLMTLRLWSS^* (SEQ ID NO:33)

ＴＣＲβ鎖

MGSRLLCWVLLCLLGAGPVKAGVTQTPRYLIKTRGQQVTLSCSPISGHRSVSWYQQTPGQGLQFLFEYFSETQRNKGNFPGRFSGRQFSNSRSEMNVSTLELGDSALYLCASSPDRAMNTEAFFGQGTRLTVVEDLNKVFPPEVAVFEPSEAEISHTQKATLVCLATGFFPDHVELSWWVNGKEVHSGVSTDPQPLKEQPALNDSRYCLSSRLRVSATFWQNPRNHFRCQVQFYGLSENDEWTQDRAKPVTQIVSAEAWGRADCGFTSVSYQQGVLSATILYEILLGKATLYAVLVSALVLMAMVKRKDF^* (SEQ ID NO:34)

ＨＬＡ−ＤＲＢ１^＊０４拘束性ＮＹ−ＥＳＯ−１（１１１−１４３）特異的Ｔ細胞クローン「ＰＢ−Ｔ」

１．ヌクレオチド配列

ＴＣＲα鎖

ATGGCCTCTGCACCCATCTCGATGCTTGCGATGCTCTTCACATTGAGTGGGCTGAGAGCTCAGTCAGTGGCTCAGCCGGAAGATCAGGTCAACGTTGCTGAAGGGAATCCTCTGACTGTGAAATGCACCTATTCAGTCTCTGGAAACCCTTATCTTTTTTGGTATGTTCAATACCCCAACCGAGGCCTCCAGTTCCTTCTGAAATACATCACAGGGGATAACCTGGTTAAAGGCAGCTATGGCTTTGAAGCTGAATTTAACAAGAGCCAAACCTCCTTCCACCTGAAGAAACCATCTGCCCTTGTGAGCGACTCCGCTTTGTACTTCTGTGCTGTGAGAGACAGGGAGAGAGATGACAAGATCATCTTTGGAAAAGGGACACGACTTCATATTCTCCCCAATATCCAGAAGCCTGACCCTGCCGTGTACCAGCTGAGAGACTCTAAATCCAGTGACAAGTCTGTCTGCCTATTCACCGATTTTGATTCTCAAACAAATGTGTCACAAAGTAAGGATTCTGATGTGTATATCACAGACAAAACTGTGCTAGACATGAGGTCTATGGACTTCAAGAGCAACAGTGCTGTGGCCTGGAGCAACAAATCTGACTTTGCATGTGCAAACGCCTTCAACAACAGCATTATTCCAGAAGACACCTTCTTCCCCAGCCCAGAAAGTTCCTGTGATGTCAAGCTGGTCGAGAAAAGCTTTGAAACAGATACGAACCTAAACTTTCAAAACCTGTCAGTGATTGGGTTCCGAATCCTCCTCCTGAAAGTGGCCGGGTTTAATCTGCTCATGACGCTGCGGCTGTGGTCCAGCTGA (SEQ ID NO:35)

ＴＣＲβ鎖

ATGGATACCTGGCTCGTATGCTGGGCAATTTTTAGTCTCTTGAAAGCAGGACTCACAGAACCTGAAGTCACCCAGACTCCCAGCCATCAGGTCACACAGATGGGACAGGAAGTGATCTTGCGCTGTGTCCCCATCTCTAATCACTTATACTTCTATTGGTACAGACAAATCTTGGGGCAGAAAGTCGAGTTTCTGGTTTCCTTTTATAATAATGAAATCTCAGAGAAGTCTGAAATATTCGATGATCAATTCTCAGTTGAAAGGCCTGATGGATCAAATTTCACTCTGAAGATCCGGTCCACAAAGCTGGAGGACTCAGCCATGTACTTCTGTGCCAGCAGAGCGGAGATCACAGATACGCAGTATTTTGGCCCAGGCACCCGGCTGACAGTGCTCGAGGACCTGAAAAACGTGTTCCCACCCGAGGTCGCTGTGTTTGAGCCATCAGAAGCAGAGATCTCCCACACCCAAAAGGCCACACTGGTGTGCCTGGCCACAGGCTTCTACCCCGACCACGTGGAGCTGAGCTGGTGGGTGAATGGGAAGGAGGTGCACAGTGGGGTCAGCACAGACCCGCAGCCCCTCAAGGAGCAGCCCGCCCTCAATGACTCCAGATACTGCCTGAGCAGCCGCCTGAGGGTCTCGGCCACCTTCTGGCAGAACCCCCGCAACCACTTCCGCTGTCAAGTCCAGTTCTACGGGCTCTCGGAGAATGACGAGTGGACCCAGGATAGGGCCAAACCTGTCACCCAGATCGTCAGCGCCGAGGCCTGGGGTAGAGCAGACTGTGGCTTCACCTCCGAGTCTTACCAGCAAGGGGTCCTGTCTGCCACCATCCTCTATGAGATCTTGCTAGGGAAGGCCACCTTGTATGCCGTGCTGGTCAGTGCCCTCGTGCTGATGGCCATGGTCAAGAGAAAGGATTCCAGAGGCTAG (SEQ ID NO:36)

２．ＰＢ−Ｔのアミノ酸配列（メチオニンをコードする開始コドンから終止をコードする終止コドン（^*）まで）

ＴＣＲα鎖

MASAPISMLAMLFTLSGLRAQSVAQPEDQVNVAEGNPLTVKCTYSVSGNPYLFWYVQYPNRGLQFLLKYITGDNLVKGSYGFEAEFNKSQTSFHLKKPSALVSDSALYFCAVRDRERDDKIIFGKGTRLHILPNIQKPDPAVYQLRDSKSSDKSVCLFTDFDSQTNVSQSKDSDVYITDKTVLDMRSMDFKSNSAVAWSNKSDFACANAFNNSIIPEDTFFPSPESSCDVKLVEKSFETDTNLNFQNLSVIGFRILLLKVAGFNLLMTLRLWSS^* (SEQ ID NO:37)

ＴＣＲβ鎖

MDTWLVCWAIFSLLKAGLTEPEVTQTPSHQVTQMGQEVILRCVPISNHLYFYWYRQILGQKVEFLVSFYNNEISEKSEIFDDQFSVERPDGSNFTLKIRSTKLEDSAMYFCASRAEITDTQYFGPGTRLTVLEDLKNVFPPEVAVFEPSEAEISHTQKATLVCLATGFYPDHVELSWWVNGKEVHSGVSTDPQPLKEQPALNDSRYCLSSRLRVSATFWQNPRNHFRCQVQFYGLSENDEWTQDRAKPVTQIVSAEAWGRADCGFTSESYQQGVLSATILYEILLGKATLYAVLVSALVLMAMVKRKDSRG^* (SEQ ID NO:38)

ＨＬＡ−ＤＲＢ１^＊０７拘束性ＮＹ−ＥＳＯ−１（１３９−１６０）特異的Ｔ細胞クローン「ＰＢ１３．２」

１．ヌクレオチド配列

ＴＣＲα鎖

ATGGCCATGCTCCTGGGGGCATCAGTGCTGATTCTGTGGCTTCAGCCAGACTGGGTAAACAGTCAACAGAAGAATGATGACCAGCAAGTTAAGCAAAATTCACCATCCCTGAGCGTCCAGGAAGGAAGAATTTCTATTCTGAACTGTGACTATACTAACAGCATGTTTGATTATTTCCTATGGTACAAAAAATACCCTGCTGAAGGTCCTACATTCCTGATATCTATAAGTTCCATTAAGGATAAAAATGAAGATGGAAGATTCACTGTCTTCTTAAACAAAAGTGCCAAGCACCTCTCTCTGCACATTGTGCCCTCCCAGCCTGGAGACTCTGCAGTGTACTTCTGTGCAGCAAGCGCGATAGGAGGTGCTGACGGACTCACCTTTGGCAAAGGGACTCATCTAATCATCCAGCCCTATATCCAGAACCCTGACCCTGCCGTGTACCAGCTGAGAGACTCTAAATCCAGTGACAAGTCTGTCTGCCTATTCACCGATTTTGATTCTCAAACAAATGTGTCACAAAGTAAGGATTCTGATGTGTATATCACAGACAAAACTGTGCTAGACATGAGGTCTATGGACTTCAAGAGCAACAGTGCTGTGGCCTGGAGCAACAAATCTGACTTTGCATGTGCAAACGCCTTCAACAACAGCATTATTCCAGAAGACACCTTCTTCCCCAGCCCAGAAAGTTCCTGTGATGTCAAGCTGGTCGAGAAAAGCTTTGAAACAGATACGAACCTAAACTTTCAAAACCTGTCAGTGATTGGGTTCCGAATCCTCCTCCTGAAAGTGGCCGGGTTTAATCTGCTCATGACGCTGCGGCTGTGGTCCAGCTGA (SEQ ID NO:39)

ＴＣＲβ鎖

ATGAGCCTCGGGCTCCTGTGCTGTGGGGCCTTTTCTCTCCTGTGGGCAGGTCCAGTGAATGCTGGTGTCACTCAGACCCCAAAATTCCGGGTCCTGAAGACAGGACAGAGCATGACACTGCTGTGTGCCCAGGATATGAACCATGAATACATGTACTGGTATCGACAAGACCCAGGCATGGGGCTGAGGCTGATTCATTACTCAGTTGGTGAGGGTACAACTGCCAAAGGAGAGGTCCCTGATGGCTACAATGTCTCCAGATTAAAAAAACAGAATTTCCTGCTGGGGTTGGAGTCGGCTGCTCCCTCCCAAACATCTGTGTACTTCTGTGCCAGCAGTATTCGGGGAAAAAGGTACAATGAGCAGTTCTTCGGGCCAGGGACACGGCTCACCGTGCTAGAGGACCTGAAAAACGTGTTCCCACCCGAGGTCGCTGTGTTTGAGCCATCAGAAGCAGAGATCTCCCACACCCAAAAGGCCACACTGGTGTGCCTGGCCACAGGCTTCTACCCCGACCACGTGGAGCTGAGCTGGTGGGTGAATGGGAAGGAGGTGCACAGTGGGGTCAGCACAGACCCGCAGCCCCTCAAGGAGCAGCCCGCCCTCAATGACTCCAGATACTGCCTGAGCAGCCGCCTGAGGGTCTCGGCCACCTTCTGGCAGAACCCCCGCAACCACTTCCGCTGTCAAGTCCAGTTCTACGGGCTCTCGGAGAATGACGAGTGGACCCAGGATAGGGCCAAACCTGTCACCCAGATCGTCAGCGCCGAGGCCTGGGGTAGAGCAGACTGTGGCTTCACCTCCGAGTCTTACCAGCAAGGGGTCCTGTCTGCCACCATCCTCTATGAGATCTTGCTAGGGAAGGCCACCTTGTATGCCGTGCTGGTCAGTGCCCTCGTGCTGATGGCCATGGTCAAGAGAAAGGATTCCAGAGGCTAG (SEQ ID NO:40)

２．ＰＢ１３．２のアミノ酸配列（メチオニンをコードする開始コドンから終止をコードする終止コドン（^*）まで）

ＴＣＲα鎖

MAMLLGASVLILWLQPDWVNSQQKNDDQQVKQNSPSLSVQEGRISILNCDYTNSMFDYFLWYKKYPAEGPTFLISISSIKDKNEDGRFTVFLNKSAKHLSLHIVPSQPGDSAVYFCAASAIGGADGLTFGKGTHLIIQPYIQNPDPAVYQLRDSKSSDKSVCLFTDFDSQTNVSQSKDSDVYITDKTVLDMRSMDFKSNSAVAWSNKSDFACANAFNNSIIPEDTFFPSPESSCDVKLVEKSFETDTNLNFQNLSVIGFRILLLKVAGFNLLMTLRLWSS^* (SEQ ID NO:41)

ＴＣＲβ鎖

MSLGLLCCGAFSLLWAGPVNAGVTQTPKFRVLKTGQSMTLLCAQDMNHEYMYWYRQDPGMGLRLIHYSVGEGTTAKGEVPDGYNVSRLKKQNFLLGLESAAPSQTSVYFCASSIRGKRYNEQFFGPGTRLTVLEDLKNVFPPEVAVFEPSEAEISHTQKATLVCLATGFYPDHVELSWWVNGKEVHSGVSTDPQPLKEQPALNDSRYCLSSRLRVSATFWQNPRNHFRCQVQFYGLSENDEWTQDRAKPVTQIVSAEAWGRADCGFTSESYQQGVLSATILYEILLGKATLYAVLVSALVLMAMVKRKDSRG^* (SEQ ID NO:42)

本実施例の上述した配列に関して、本実施例は、NY-ESO-1特異的TCR発現レトロウイルスベクター（図１）の作成の非限定的な実証を提供する。これらの図は、以下のことを示している。

図１Ａ。Ｔ細胞への形質導入のためにマウス幹細胞ウイルス（ＭＳＣＶ）由来ベクターが広く使用されており、これは、ＭＳＣＶ末端反復配列（ＬＴＲ）による強力なプロモーター活性、及び造血細胞における導入遺伝子発現のｉｎｖｉｖｏ安定性がもたらされるからである。プラスミド中の３’−ＬＴＲは発現において重要であり、これは、Ｔ細胞などの宿主細胞への組み込みに際して３’−ＬＴＲが５’−ＬＴＲにコピーされ、導入遺伝子の転写を担うからである。一方、５’−ＬＴＲはウイルス産生の転写を担う。古典的ＭＳＣＶ由来ベクター（ｐＭＩＧ−ＩＩ及びｐＭＩＧ−ｗ）の模式図を図１に示す。両ベクターは、ＭＳＣＶ由来ＬＴＲを５’及び３’部位に有し、また、パッケージングシグナル（Ψ）、多重クローニング部位（ＭＣＳ）を有する。導入遺伝子がＭＣＳにクローニングされ、配列内リボソーム進入部位（ＩＲＥＳ）、及び形質導入された細胞を効率的に検出するための緑色蛍光タンパク質遺伝子（ＧＦＰ）がこれに続く。ｐＭＩＧ−ｗベクターは、導入遺伝子の発現を増強する、ウッドチャック肝炎ウイルス転写後調節エレメント（ＷＲＥ）を更に有する。最近のレトロウイルスベクターには、市販のレトロウイルスベクターであるｐＤＯＮ−５（Clontech）に見られるような更なる改変が導入されている。マウス白血病ウイルス（ＭＬＶ）由来ベクターであるｐＤＯＮ−５は、ウイルスパッケージング細胞株における強力なＣＭＶプロモーター活性による増強されたウイルス産生のために、５’−ＬＴＲをＣＭＶ／ＭＬＶハイブリッドＬＴＲで置換する。また、ヒト伸長因子１α遺伝子由来の部分イントロンを導入してスプライスアクセプター部位（ＳＡ）を提供し、これは内在的なスプライスドナー部位（ＳＤ）と共にスプライシングを誘導し発現を増強する。

図１Ｂ。Ｔ細胞において高レベルの導入遺伝子（ＴＣＲ）発現を誘導する高力価レトロウイルスを産生するレトロウイルスベクターを作製するために、５’−ＬＴＲからｐＤＯＮ−５プラスミドのスプライスアクセプター部位を含むイントロンまでＤＮＡ断片を増幅した。フォワードプライマーは、５’−ＬＴＲの前にＳｇｒＡＩ制限酵素認識部位が付加されるように設計され、リバースプライマーは、イントロンの後にＮｏｔＩ及びＳａｌＩ部位が付加されるように設計された。ＰＣＲ増幅断片をＳｇｒＡＩ及びＳａｌＩで処理し、ｐＭＩＧ−ＩＩ及びｐＭＩＧ−ｗプラスミドに挿入して、５’−ＬＴＲからＧＦＰまでを置換した。

図１Ｃ。図１Ｃに示すプラスミドは、クローニングのためにＮｏｔＩ及びＳａｌＩ認識部位のみを有する。特定の６−ｍｅｒ（塩基長）ヌクレオチド配列を認識するＳａｌＩの使用は好ましいことではなく、それは、この配列が遺伝子中に高い頻度で存在し、切断をもたらす虞があるからである。殆どのＴＣＲ導入遺伝子において出現しないと考えられる更なる制限酵素認識部位を提供するために、ＮｏｔＩ制限部位を有するフォワードプライマー、及びＰａｃＩ−ＳａｌＩ部位を有するリバースプライマーを用いて１．８ｋｂのＤＮＡ断片（スタッファー）を増幅した。増幅された断片をＮｏｔＩ及びＳａｌＩ制限酵素で処理し、新しいプラスミドに挿入した。

図１Ｄ。図示されるＴＣＲ発現カセットを、ＮｏｔＩ制限部位を有するフォワードプライマー、及びＰａｃＩ制限酵素部位を有するリバースプライマーで増幅した。増幅された発現カセットをＮｏｔＩ及びＰａｃＩ制限酵素で処理し、新しいプラスミドに挿入した。

多クローン性活性化Ｔ細胞への１９３０５ＤＰ−ＴＣＲ遺伝子の形質導入（図２）。健常者に由来するＴ細胞を、低用量のＩＬ−２、ＩＬ−７及びＩＬ−１２の存在下でフィトヘマグルチニン（ＰＨＡ；Remelより入手）を用いて２日間予備活性化（preactivated）した。レトロウイルス粒子を、Retronectin（Clontechより入手）により予めコーティングされた非組織培養プレート（non-tissue culture plate）上にコーティングし、ウシ血清アルブミン（ＢＳＡ；Sigmaより入手）でブロックした。活性化Ｔ細胞をレトロウイルスでコーティングされたプレート上で培養することによりレトロウイルスに感染させた。２４時間後にウイルス感染を繰り返した。感染の総数は２回である。感染した細胞は、ＩＬ−２及びＩＬ−７の存在下で増殖した。ＩＬ−１２は、ＰＨＡによるＴ細胞の活性化から５日間含まれた。感染後、ＴＣＲＶβサブタイプ特異的抗体で染色することにより、９５％を超えるＴＣＲ遺伝子形質導入Ｔ細胞が形質導入ＴＣＲを発現した。

１９３０５ＤＰ−ＴＣＲ形質導入Ｔ細胞の抗腫瘍機能（図３及び８〜１０）。ＴＣＲ遺伝子形質導入Ｔ細胞を、ＨＬＡ−Ａ^＊０２＋ＮＹ−ＥＳＯ−１＋メラノーマ細胞株ＳＫ−ＭＥＬ−３７、又はＨＬＡ−Ａ^＊０２＋ＮＹ−ＥＳＯ−１−メラノーマ細胞株ＳＫ−ＭＥＬ−２９と共に、ＧｏｌｇｉＳｔｏｐ（BD Biosciences）の存在下で６時間共培養した。細胞を、蛍光色素結合型抗ＣＤ４及び抗ＣＤ８抗体で染色し、BD Cytofix / Cytoperm Kit（BD Biosciences）を用いて固定し、透過処理した。細胞内ＩＦＮ−γを、蛍光色素結合型抗ＩＦＮ−γ抗体によって染色した。ＴＣＲ遺伝子形質導入ＣＤ４＋及びＣＤ８＋Ｔ細胞の両方とも、ＳＫ−ＭＥＬ−２９と共培養した場合ではなく、ＮＹ−ＥＳＯ−１＋ＳＫ−ＭＥＬ−３７と共培養した場合にのみ、ＩＮＦ−γを産生した。形質導入されていない（untransduced）ＣＤ４＋及びＣＤ８＋Ｔ細胞は、ＳＫ−ＭＥＬ−３７又はＳＫ−ＭＥＬ−２９に対してＩＦＮ−γを産生しなかった（図３）。図８では、免疫不全ＮＯＤ／ＳＣＩＤ／ＩＬ−２Ｒγ鎖欠損（ＮＳＧ）マウスに１００万個（1 million）のＳＫ−ＭＥＬ−３７を接種した。腫瘍成長が９日目に確認された後、１０００万個（10 million）の１９３０５ＤＰ−ＴＣＲ遺伝子形質導入Ｔ細胞を注射（injected；「注入」ともいう。）した。対照（control）の腫瘍保有マウスには、不適切なＴＣＲ形質導入Ｔ細胞を注射した。１９３０５ＤＰ−ＴＣＲ形質導入Ｔ細胞で治療したマウスは、腫瘍成長に有意な遅延が見られ、最終的に殆どのマウスが腫瘍異種移植片（tumor xenograft）を拒絶した。不適切なＴＣＲ形質導入Ｔ細胞を投与した対照のマウスにおいては、腫瘍が持続的に成長した。

実施例２
本実施例は、本開示のライブラリーにおける実施例１記載のＴＣＲ配列の何れか１つに含めることができる追加のＴＣＲ配列の説明を提供する。これらのＴＣＲは、ＣＤ４＋Ｔ細胞に、ＮＹ−ＥＳＯ−１／ＬＡＧＥ−１ポジティブがん細胞を直接認識する能力を付与する。

「ＪＭ」ＨＬＡ−ＤＰＢ１^＊０４０１／０４０２拘束性ＮＹ−ＥＳＯ−１_{１５７−１７０}特異的腫瘍認識ＣＤ４^＋Ｔ細胞クローン

（ａ）ＴＣＲα鎖及びβ鎖のｃＤＮＡヌクレオチド配列

ＴＣＲα鎖

ＴＣＲβ鎖

（ｂ）ＪＭのＴＣＲα鎖及びβ鎖のアミノ酸配列（ＴＣＲ可変部（variable regions；「可変領域」ともいう。）は斜体で示し、ＣＤＲ３領域は太字で示す。）

ＴＣＲα鎖

ＴＣＲβ鎖

「５Ｂ８」ＨＬＡ−ＤＰＢ１^＊０４０１／０４０２拘束性ＮＹ−ＥＳＯ−１_{１５７−１７０}特異的腫瘍認識ＣＤ４^＋Ｔ細胞クローン

（ａ）ＴＣＲα鎖及びβ鎖のｃＤＮＡヌクレオチド配列

ＴＣＲα鎖

ＴＣＲβ鎖

（ｂ）５Ｂ８のＴＣＲα鎖及びβ鎖のアミノ酸配列（ＴＣＲ可変部は斜体で示し、ＣＤＲ３領域は太字で示す。）

ＴＣＲα鎖

ＴＣＲβ鎖

「ＳＢ９５」ＨＬＡ−ＤＲＢ１^＊０１０１拘束性ＮＹ−ＥＳＯ−１_{９５−１０６}特異的腫瘍認識ＣＤ４^＋Ｔ細胞クローン

（ａ）ＴＣＲα鎖及びβ鎖のｃＤＮＡヌクレオチド配列

ＴＣＲα

ＴＣＲβ

（ｂ）ＳＢ９５のＴＣＲα鎖及びβ鎖のアミノ酸配列（ＴＣＲ可変部は斜体で示し、ＣＤＲ３領域は太字で示す。）

ＴＣＲα鎖

ＴＣＲβ鎖

図４は、本実施例のＴＣＲを発現するために使用できる発現ベクターの非限定的な例を提供する。図４において、（Ａ）は、ＴＣＲを発現するために使用できるレトロウイルスベクターを説明している。ＬＴＲ：末端反復配列、Ψ：パッケージングシグナル、ＭＣＳ：多重クローニング部位、ＩＲＥＳ：配列内リボソーム進入部位、ｅＧＦＰ：高感度緑色蛍光タンパク質。（Ｂ）は、ＴＣＲ発現カセットを説明している。（Ｉ）ＴＣＲβ鎖及びα鎖をコードするｃＤＮＡ配列は、GSG (Gly-Ser-Gly)リンカー、及びＰ２Ａリボソームスキッピング配列（P2A ribosomal skipping sequence）によって連結されている。（ＩＩ）ＴＣＲβ鎖及びα鎖をコードするｃＤＮＡ配列は、フューリンプロテアーゼ認識部位（RAKR（Arg-Ala-Lys-Arg））、SGSG（Ser-Gly-Ser-Gly）リンカー、Ｖ５エピトープ、及びＰ２Ａリボソームスキッピング配列によって連結されている。

ＰＣＴ／ＵＳ１４／２５６７３に記載されるように、本実施例のＴＣＲは、がん細胞の直接認識を促進し、それらのアポトーシスを誘導することができる。また、本実施例のＴＣＲを発現するＣＤ４＋Ｔ細胞は、抗原提示細胞の非存在下での癌細胞の直接認識を介して腫瘍抗原特異的ＣＤ８^＋Ｔ細胞の細胞傷害活性を効率的に増強することが見出された。更に、本実施例の組換えＴＣＲを発現するＣＤ４＋Ｔ細胞と共に刺激（co-stimulated）されたＣＤ８^＋Ｔ細胞は、活発に増殖し、セントラルメモリーＴ細胞マーカーを増加させ、また、これらのＴＣＲを発現するＣＤ４＋Ｔ細胞は、免疫不全マウスにおいてヒトがん細胞の成長を阻害する顕著なｉｎｖｉｖｏ抗腫瘍活性を示し、更に、これらのＣＤ４＋Ｔ細胞は、腫瘍抗原特異的ＣＤ８^＋Ｔ細胞と共に、ｉｎｖｉｖｏ腫瘍成長を共同的に阻害した。

米国における異なる民族からなる個体群（different ethnic populations）のＨＬＡ対立遺伝子頻度（HLA allele frequencies）（ヨーロッパ系アメリカ人において最も頻繁に発生する１０種を表１に示す）。ＨＬＡ−Ａ、Ｂ、Ｃ、ＤＲ及びＤＱに係るデータは、The National Marrow Donor Program（登録商標）（ＮＭＤＰ）／Be The Match（登録商標）ウェブサイト：bioinformatics.bethematchclinical.org/より取得し、修正したものである。ＨＬＡ−ＤＰに係るデータは、The Allele Frequency Net Database：www.allelefrequencies.net/contact.aspより取得した。

ある実施形態において、本開示のライブラリーは、下記表１における下線付き／太字のＨＬＡ型によって拘束される複数のＮＹ−ＥＳＯ−１特異的ＴＣＲを含む。

本開示は、主に具体的な実施形態を参照して説明しているが、当業者であれば、本明細書に開示された本開示の精神及び範囲から逸脱することなく、構成及び詳細について様々な変更を行うことができる。

Claims

１９３０５ＤＰであるＴ細胞受容体（ＴＣＲ）のα鎖及びβ鎖をコードする組換えポリヌクレオチドであって、
前記α鎖は、SEQ ID NO:1の配列を含み、及びβ鎖は、SEQ ID NO:2の配列を含む、
組換えポリヌクレオチド。
前記組換えポリヌクレオチドが発現ベクター内に存在する、請求項１記載の組換えポリヌクレオチド。
前記発現ベクターが細胞内に存在する、請求項２記載の組換えポリヌクレオチド。
前記発現ベクターが、ＣＤ４＋Ｔ細胞又はＣＤ８＋Ｔ細胞である細胞内に存在する、請求項３記載の組換えポリヌクレオチド。