JP6850730B2

JP6850730B2 - 緑内障予防治療剤

Info

Publication number: JP6850730B2
Application number: JP2017550412A
Authority: JP
Inventors: 泰成宗正; 高木　均; 均高木; 敬介井上
Original assignee: Kowa Co Ltd; St Marianna University School of Medicine
Current assignee: Kowa Co Ltd; St Marianna University School of Medicine
Priority date: 2015-11-12
Filing date: 2016-11-11
Publication date: 2021-03-31
Anticipated expiration: 2036-11-11
Also published as: WO2017082393A1; JPWO2017082393A1

Description

本発明は、緑内障、特に正常眼圧緑内障の予防又は治療のための薬剤に関する。

緑内障は、視神経軸索障害に引き続く網膜神経節細胞の変性による視野欠損を特徴とし、現在日本では中途失明原因の第一位となっている。緑内障の病因として高眼圧があげられるが、高眼圧を伴わない緑内障、すなわち正常眼圧緑内障の患者数は、日本において全緑内障患者の約７割に上り、今後超高齢化社会を迎える本邦にとって社会問題になりつつある。

現在の緑内障の主たる治療は、眼圧下降作用を有する抗緑内障点眼薬もしくは観血的手術による眼圧下降に依存している。高眼圧緑内障もしくはベースライン眼圧が高値を示す正常眼圧緑内障は、眼圧下降により治療効果を得ることが充分可能と考えられるが、ベースライン眼圧が低い正常眼圧緑内障では、眼圧下降が得られても視野障害が進行することが頻繁にみられる。正常眼圧緑内障においては、篩状板の脆弱性、酸化ストレス、ミトコンドリア障害、グリア細胞活性に伴うＴＮＦの関与、免疫細胞の関与などが指摘されており、これら眼圧以外の原因によるところが多いと考えられている。現在臨床で行われている治療は眼圧下降のみであり、実際臨床で高頻度にみられる正常眼圧緑内障の治療を考えると、その治療効果は限定的であるものと推測される。

いくつかの抗緑内障点眼薬には基礎研究レベルでわずかな神経保護効果の報告があるが、その薬理主作用はいずれも眼圧を低下させるものであり、真に神経保護効果があるかは不明である。故に緑内障における臨床では真に有効な神経保護薬の開発が急務であり、神経保護治療こそが今後多くの途中失明者を救うことができると考えられる。

ＰＰＡＲαアゴニストは優れた脂質代謝改善作用をもち、高脂血症治療剤として汎用されている（非特許文献１）。眼疾患への効果としては、糖尿病性網膜症あるいは黄斑変性症治療に有用とする報告（非特許文献２、３）がある。

一方、ＰＰＡＲαアゴニストの緑内障に対する作用については、唯一、１９６７年にフィブラート剤の一つであるクロフィブラートが、少数例の緑内障患者の高眼圧を低下させたと報告（非特許文献４）されている以外になく、当該文献中でも、正常眼圧に対しては特に効果が見られなかったとされている。本文献中には閉塞隅角緑内障における血中遊離脂肪酸や血液粘度上昇の関与が示唆されているが、これまでに高脂血症治療にともなう緑内障の視野障害の改善は報告されていない。

また、特許文献１には、緑内障の診断及び処置における血清アミロイドＡ遺伝子の使用が開示され、血清アミロイドＡタンパク質とそのレセプターとの相互作用を阻害する因子の一つとしてＰＰＡＲαアゴニストがあげられている。しかしながら、緑内障に対する具体的な治療効果は何ら示されていない。

一方、特許文献２には、次式（１）：

（式中、Ｒ¹及びＲ²は同一又は異なって水素原子、メチル基又はエチル基を示し；Ｒ^3a、Ｒ^3b、Ｒ^4a及びＲ^4bは同一又は異なって水素原子、ハロゲン原子、ニトロ基、水酸基、Ｃ_1-4アルキル基、トリフルオロメチル基、Ｃ_1-4アルコキシ基、Ｃ_1-4アルキルカルボニルオキシ基、ジ−Ｃ_1-4アルキルアミノ基、Ｃ_1-4アルキルスルフォニルオキシ基、Ｃ_1-4アルキルスルフォニル基、Ｃ_1-4アルキルスルフィニル基、又はＣ_1-4アルキルチオ基を示すか、Ｒ^3aとＲ^3bあるいはＲ^4aとＲ^4bが結合してアルキレンジオキシ基を示し；Ｘは酸素原子、硫黄原子又はＮ−Ｒ⁵（Ｒ⁵は水素原子、Ｃ_1-4アルキル基、Ｃ_1-4アルキルスルフォニル基、Ｃ_1-4アルキルオキシカルボニル基を示す）を示し；Ｙは酸素原子、Ｓ（Ｏ）_l基（ｌは０〜２の数を示す）、カルボニル基、カルボニルアミノ基、アミノカルボニル基、スルフォニルアミノ基、アミノスルフォニル基、又はＮＨ基を示し；ＺはＣＨ又はＮを示し；ｎは１〜６の数を示し；ｍは２〜６の数を示す）で表される化合物、これらの塩又はこれらの溶媒和物が、選択的なＰＰＡＲα活性化作用を有しており、ヒトを含む哺乳類における体重増加や肥満を伴わない、高脂血症、動脈硬化症、糖尿病、糖尿病合併症（糖尿病性腎症等）、炎症、心疾患等の予防及び／又は治療薬として有用であることが開示されている。しかしながら、これらの化合物が緑内障に対してどのような作用をするかについては記載も示唆もない。

斯様に、緑内障の予防又は治療剤として実用可能なＰＰＡＲαアゴニストは、これまでに知られていない。

国際特許公開第２００５／０６０５４２号国際特許公開第２００５／０２３７７７号

Atherosclerosis, 210, 35-40 (2010) Lancet, 370, 1687-1697 (2007) N Engl J Med, 363, 233-244 (2010) Lancet, 290, 892 (1967)

緑内障、特に正常眼圧緑内障又は眼圧降下療法に不応性の緑内障を治療しうる医薬が必要とされている。本発明は、緑内障、特に正常眼圧緑内障の予防又は治療のための新たな薬剤を提供することに関する。

本発明者らは、緑内障、特に正常眼圧緑内障の予防、治療に有用な化合物を見出すべく、正常眼圧緑内障モデルとしてＮＭＤＡ（Ｎ−ｍｅｔｈｙｌ−Ｄ−ａｓｐａｒｔａｔｅ）誘発網膜障害モデルラットを用いて鋭意研究を重ねた結果、全く意外にも、ＰＰＡＲαアゴニストとして知られている、次式（Ａ）：

で示される、（Ｒ）−２−［［３−［Ｎ−（ベンズオキサゾール−２−イル）−Ｎ−３−（４−メトキシフェノキシ）プロピル］アミノメチル］フェノキシ］酪酸（前記特許文献２で実施例８５として開示されている化合物）及びフェノフィブラートが、網膜神経節細胞死を抑制することを見出し、本発明を完成させた。

すなわち、本発明は以下の発明に係るものである。
［１］（Ｒ）−２−［［３−［Ｎ−（ベンズオキサゾール−２−イル）−Ｎ−３−（４−メトキシフェノキシ）プロピル］アミノメチル］フェノキシ］酪酸若しくはその塩又はそれらの溶媒和物、及びフェノフィブラートから選ばれるＰＰＡＲαアゴニストを有効成分とする緑内障の予防及び／又は治療剤。
［２］緑内障が、正常眼圧緑内障である上記［１］に記載の予防及び／又は治療剤。
［３］予防及び／又は治療を必要としている患者に、（Ｒ）−２−［［３−［Ｎ−（ベンズオキサゾール−２−イル）−Ｎ−３−（４−メトキシフェノキシ）プロピル］アミノメチル］フェノキシ］酪酸若しくはその塩又はそれらの溶媒和物、及びフェノフィブラートから選ばれるＰＰＡＲαアゴニストの有効用量を投与することを特徴とする緑内障の予防及び／又は治療方法。
［４］緑内障が、正常眼圧緑内障である上記［３］に記載の予防及び／又は治療方法。
［５］緑内障の予防及び／又は治療薬として使用するための、（Ｒ）−２−［［３−［Ｎ−（ベンズオキサゾール−２−イル）−Ｎ−３−（４−メトキシフェノキシ）プロピル］アミノメチル］フェノキシ］酪酸若しくはその塩又はそれらの溶媒和物、及びフェノフィブラートから選ばれるＰＰＡＲαアゴニスト。
［６］緑内障が、正常眼圧緑内障である上記［５］に記載の（Ｒ）−２−［［３−［Ｎ−（ベンズオキサゾール−２−イル）−Ｎ−３−（４−メトキシフェノキシ）プロピル］アミノメチル］フェノキシ］酪酸若しくはその塩又はそれらの溶媒和物、及びフェノフィブラートから選ばれるＰＰＡＲαアゴニスト。
［７］緑内障の予防及び／又は治療用製剤を製造するための、（Ｒ）−２−［［３−［Ｎ−（ベンズオキサゾール−２−イル）−Ｎ−３−（４−メトキシフェノキシ）プロピル］アミノメチル］フェノキシ］酪酸若しくはその塩又はそれらの溶媒和物、及びフェノフィブラートから選ばれるＰＰＡＲαアゴニストの使用。
［８］緑内障が、正常眼圧緑内障である上記［７］に記載の使用。
［９］（Ｒ）−２−［［３−［Ｎ−（ベンズオキサゾール−２−イル）−Ｎ−３−（４−メトキシフェノキシ）プロピル］アミノメチル］フェノキシ］酪酸若しくはその塩又はそれらの溶媒和物、及びフェノフィブラートから選ばれるＰＰＡＲαアゴニストを有効成分とする網膜神経節細胞死抑制剤。
［１０］予防及び／又は治療を必要としている患者に、（Ｒ）−２−［［３−［Ｎ−（ベンズオキサゾール−２−イル）−Ｎ−３−（４−メトキシフェノキシ）プロピル］アミノメチル］フェノキシ］酪酸若しくはその塩又はそれらの溶媒和物、及びフェノフィブラートから選ばれるＰＰＡＲαアゴニストの有効用量を投与することを特徴とする網膜神経節細胞死抑制方法。
［１１］網膜神経節細胞死抑制剤として使用するための、（Ｒ）−２−［［３−［Ｎ−（ベンズオキサゾール−２−イル）−Ｎ−３−（４−メトキシフェノキシ）プロピル］アミノメチル］フェノキシ］酪酸若しくはその塩又はそれらの溶媒和物、及びフェノフィブラートから選ばれるＰＰＡＲαアゴニスト。
［１２］網膜神経節細胞死抑制用製剤を製造するための、（Ｒ）−２−［［３−［Ｎ−（ベンズオキサゾール−２−イル）−Ｎ−３−（４−メトキシフェノキシ）プロピル］アミノメチル］フェノキシ］酪酸若しくはその塩又はそれらの溶媒和物、及びフェノフィブラートから選ばれるＰＰＡＲαアゴニストの使用。

本発明によれば、緑内障、特に正常眼圧緑内障の予防又は治療のための薬剤を提供することができる。

ＮＭＤＡ誘発網膜障害モデルに本発明の化合物Ａ（５０ｍｇ／ｋｇ）を経口投与（ＮＭＤＡ硝子体投与前日投与後７日後まで連日投与）した時の網膜神経節細胞及びアマクリン細胞をクレシルバイオレット染色し定量化した結果である。縦軸は生理食塩水硝子体内投与群（コントロール群）に対する薬物投与群の神経細胞数の割合を示す。数値は平均値±標準誤差で表し、＊はｐ値が０．０５未満であることを示す。ＮＭＤＡ誘発網膜障害モデルにフェノフィブラート（１００ｍｇ／ｋｇ）を内服経口投与した時の網膜神経節細胞及びアマクリン細胞をクレシルバイオレット染色し定量化した結果である。縦軸は生理食塩水硝子体内投与群（コントロール群）に対する薬物投与群の神経細胞数の割合を示す。数値は平均値±標準誤差で表し、＊はｐ値が０．０５未満であることを示す。ＮＭＤＡ誘発網膜障害モデルに本発明の化合物Ａ（１又は１０μＭ）を硝子体内投与した時の網膜神経節細胞及びアマクリン細胞をクレシルバイオレット染色し定量化した結果である。縦軸は生理食塩水硝子体内投与群（コントロール群）に対する薬物投与群の神経細胞数の割合を示す。数値は平均値±標準誤差で表し、＊はｐ値が０．０５未満であることを示す。ＮＭＤＡ誘発網膜障害モデルにフェノフィブリン酸（１又は１０μＭ）を硝子体内投与した時の網膜神経節細胞及びアマクリン細胞をクレシルバイオレット染色し定量化した結果である。縦軸は生理食塩水硝子体内投与群（コントロール群）に対する薬物投与群の神経細胞数の割合を示す。数値は平均値±標準誤差で表し、＊はｐ値が０．０５未満であることを示す。ＮＭＤＡ誘発網膜障害モデルに本発明のクロフィブラート（１０μＭ）を硝子体内投与した時の網膜神経節細胞及びアマクリン細胞をクレシルバイオレット染色し定量化した結果である。縦軸は生理食塩水硝子体内投与群（コントロール群）に対する薬物投与群の神経細胞数の割合を示す。数値は平均値±標準誤差で表し、＊はｐ値が０．０５未満であることを示す。

本発明において、ＰＰＡＲαアゴニストは、（Ｒ）−２−［［３−［Ｎ−（ベンズオキサゾール−２−イル）−Ｎ−３−（４−メトキシフェノキシ）プロピル］アミノメチル］フェノキシ］酪酸若しくはその塩又はそれらの溶媒和物、及びフェノフィブラートから選択される。

（Ｒ）−２−［［３−［Ｎ−（ベンズオキサゾール−２−イル）−Ｎ−３−（４−メトキシフェノキシ）プロピル］アミノメチル］フェノキシ］酪酸（以下、化合物Ａと表記することがある。）は、例えば、前記特許文献２等に記載の方法に従って製造することができる。また、Tetrahedron, 64(35), 8155-8158 (2008)等の文献に記載の方法に準じて製造することもできる。更に常法に従って、製剤化することもできる。

化合物Ａの塩としては、薬学的に許容できるものであれば特に制限はないが、例えば、ナトリウム塩、カリウム塩等のアルカリ金属塩；カルシウム塩、マグネシウム塩等のアルカリ土類金属塩；アンモニウム塩、トリアルキルアミン塩等の有機塩基塩；塩酸塩、硫酸塩等の鉱酸塩；酢酸塩等の有機酸塩等が挙げられる。

化合物Ａ又はその塩は、医薬品として許容される溶媒和物の形態であってもよく、当該溶媒和物としては、水和物、アルコール和物（例えば、エタノール和物）等が挙げられる。
上記化合物Ａの塩又は溶媒和物は、常法により製造することができる。

フェノフィブラートは、化学名：２−［４−（４−クロロベンゾイル）フェノキシ］−２−メチルプロピオン酸（１−メチルエチル）であり、高脂血症治療剤として汎用されている薬剤である。フェノフィブラートは、公知の方法によって合成することができ、また、市販品を使用することもできる。

後述する実施例において示されるように、本発明のＰＰＡＲαアゴニストは、経口投与あるいは硝子体内投与によりＮＭＤＡ硝子体内投与により誘発される網膜神経細胞死を抑制することから、緑内障、特に正常眼圧緑内障の予防又は治療剤、又は網膜神経節細胞死抑制剤として有用である。

本発明のＰＰＡＲαアゴニストは眼圧に非依存的に緑内障を治療しうるが、このことは本発明と眼圧下降療法の併用を除外することを意図するわけではない。本発明と併用することが出来る眼圧下降療法には、緑内障又は高眼圧症の処置用薬物の投与、レーザー又は外科手術などが含まれるが、これらに限定されない。

本発明のＰＰＡＲαアゴニストを、緑内障、特に正常眼圧緑内障の予防又は治療のために用いる場合、その投与量は、患者の体重、年齢、性別、症状、投与形態及び投与回数等によって異なるが、通常は成人に対して、化合物Ａ若しくはその塩又はそれらの溶媒和物、又はフェノフィブラートとして、１日０．０１〜１００００ｍｇ、好ましくは０．０５〜３０００ｍｇ、より好ましくは０．１〜１０００ｍｇの範囲が挙げられる。

以下、実施例により本発明をより具体的に説明するが、本発明はこれら実施例により何ら限定されるものではない。

＜試験化合物＞
１）（Ｒ）−２−［［３−［Ｎ−（ベンズオキサゾール−２−イル）−Ｎ−３−（４−メトキシフェノキシ）プロピル］アミノメチル］フェノキシ］酪酸（化合物Ａ）：前記特許文献２の実施例８５に記載の方法に準じて製造した。
２）フェノフィブラート：「フェノフィブラート」（Sigma-Aldrich社）を使用した。

実施例１ＮＭＤＡ誘発網膜障害モデルラットに対する薬物経口投与による効果
＜試験方法＞
神経節細胞障害抑制効果を、ラットＮＭＤＡ投与緑内障モデルを用い検討した。Ｗｉｓｔａｒラットを使用し、ペントバルビタール麻酔下にて、ＶｅｈｉｃｌｅあるいはＮＭＤＡ（２０ｎｍｏｌ）を、３０ゲージ針を用いて毛様体扁平部より硝子体内に注射した。生理食塩液あるいはＮＭＤＡ硝子体注射前日及び注射後一週間、化合物Ａ５０ｍｇ／ｋｇ（ｎ＝６）あるいは対照として生理食塩液（ｎ＝４）を胃ゾンデにて一日一回経口投与した。硝子体注射７日後に、ペントバルビタール過剰麻酔により安楽死後、両眼球を摘出し、網膜伸展標本を作製した。クレシルバイオレットにより、網膜神経節細胞及びアマクリン細胞を染色し、顕微鏡下で撮影して、ＮＩＨｉｍａｇｅＪｓｏｆｔｗａｒｅにて網膜全体に対する神経細胞領域を算出した。得られた数値は生理食塩水投与群（対照）に対する割合を換算した。統計解析はＭａｎｎ−ＷｈｉｔｎｅｙＵｔｅｓｔ検定にて行った。また、化合物Ａに代わり、フェノフィブラート１００ｍｇ／ｋｇを同様に投与し、フェノフィブラートによるＮＭＤＡ誘発障害ラットモデルに対する効果を検討した。

＜結果＞
ＮＭＤＡ誘発障害に対する化合物Ａの神経保護効果の結果を図１に、フェノフィブラート（図中「Ｆｅｎｏ」と表記）の結果を図２に示した。ＮＭＤＡ硝子体内投与により、網膜神経節細胞及びアマクリン細胞領域は有意に減少し、化合物Ａあるいはフェノフィブラート経口投与により、この減少が有意に抑制された。なお、Ｖｅｈｉｃｌｅ硝子体内投与の条件では化合物Ａあるいはフェノフィブラート経口投与による神経細胞数に変化はなかった。このため、ＮＭＤＡにより誘発する網膜神経細胞死に対して、化合物Ａ及びフェノフィブラートは神経保護作用を示し、網膜神経細胞の脱落、変性を呈する緑内障において有効性が示唆された。

実施例２ＮＭＤＡ誘発網膜障害モデルラットに対する薬物硝子体内投与による効果
＜試験方法＞
神経節細胞障害抑制効果を、ラットＮＭＤＡ硝子体投与緑内障モデルを用い検討した。Ｗｉｓｔａｒラットを使用し、ペントバルビタール麻酔下にて、ＶｅｈｉｃｌｅあるいはＮＭＤＡ（２０ｎｍｏｌ）を含む、化合物Ａ１又は１０μM（ｎ＝４又は６）あるいは対照として生理食塩液（ｎ＝４）５μＬを、３０ゲージ針を用いて毛様体扁平部より硝子体内に注射した。硝子体注射７日後に、ペントバルビタール過麻酔により安楽死後、両眼球を摘出し、フラットマウント標本を作製した。クレシルバイオレットにより、網膜神経節細胞及びアマクリン細胞をニッスル染色し、顕微鏡下で撮影して、ＮＩＨｉｍａｇｅＪｓｏｆｔｗａｒｅにて網膜全体に対する神経細胞領域を算出した。得られた数値は生理食塩水投与群（対照）に対する割合を換算した。統計解析はＭａｎｎ−ＷｈｉｔｎｅｙＵｔｅｓｔ検定にて行った。また、化合物Ａに代わり、フェノフィブラートの活性代謝物であるフェノフィブリン酸１又は１０μM（ｎ＝４又は６）を同様に硝子体内投与し、フェノフィブリン酸によるＮＭＤＡ誘発障害ラットモデルに対する効果を検討した。さらに、化合物Ａに代わり、クロフィブラート１又は１０μM（ｎ＝４又は６）を同様に硝子体内投与し、クロフィブラートによるＮＭＤＡ誘発障害ラットモデルに対する効果を検討した。

＜結果＞
フラットマウントによる化合物Ａの結果を図３に、フェノフィブリン酸の結果を図４に、クロフィブラートの結果を図５に示した。経口投与と同様に、化合物Ａは硝子体内投与においても神経細胞の減少を有意に抑制した。フェノフィブラートは血中で速やかに代謝され活性代謝物フェノフィブリン酸が産生する。このため、フェノフィブリン酸を用いて硝子体内投与時の効果を検討したが、フェノフィブリン酸も神経細胞の減少を有意に抑制した。一方、眼圧下降作用の報告のあるクロフィブラートは、硝子体内投与においても神経保護作用を示さなかった。このため、ＮＭＤＡにより誘発する網膜神経細胞死に対して、クロフィブラートと異なり、化合物Ａ及びフェノフィブラートは保護作用を示し、網膜神経細胞の脱落、変性を示す緑内障において有効性が示唆された。

以上、図１〜図５の結果から、ＮＭＤＡ誘発網膜障害モデルにおける神経細胞死が化合物Ａ及びフェノフィブラートのＰＰＡＲαアゴニストの経口投与により顕著に抑制されることが示された。また、化合物Ａ及びフェノフィブラートの活性代謝物フェノフィブリン酸は硝子体内投与においても網膜細胞死を抑制し、ＰＰＡＲα活性化作用が関与することが示唆された。一方、クロフィブラートは硝子体内投与においても網膜細胞死を抑制せず、クロフィブラートの臨床報告から予見し得ない効果がＰＰＡＲαアゴニストにあることを新たに見出した。

本発明の（Ｒ）−２−［［３−［Ｎ−（ベンズオキサゾール−２−イル）−Ｎ−３−（４−メトキシフェノキシ）プロピル］アミノメチル］フェノキシ］酪酸若しくはその塩又はそれらの溶媒和物、及びフェノフィブラートは、経口剤として投与可能なＰＰＡＲαアゴニストであり、緑内障、特に正常眼圧緑内障の予防又は治療のための医薬として有用である。

Claims

（Ｒ）−２−［［３−［Ｎ−（ベンズオキサゾール−２−イル）−Ｎ−３−（４−メキシフェノキシ）プロピル］アミノメチル］フェノキシ］酪酸若しくはその塩又はそれの溶媒和物からなるＰＰＡＲαアゴニストを有効成分とする緑内障の予防及び／又は治療剤。
緑内障が、正常眼圧緑内障である請求項１に記載の予防及び／又は治療剤。
（Ｒ）−２−［［３−［Ｎ−（ベンズオキサゾール−２−イル）−Ｎ−３−（４−メキシフェノキシ）プロピル］アミノメチル］フェノキシ］酪酸若しくはその塩又はそれの溶媒和物からなるＰＰＡＲαアゴニストを有効成分とする網膜神経節細胞死抑制剤。