JP6815120B2 - エレクトロポレーション装置及びエレクトロポレーション方法 - Google Patents
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Description
多数の被検細胞及び導入物質で組成され、液組成の異なる細胞懸濁液を含む検査対象の細胞懸濁液が収納されている複数のウェルと、
前記ウェルに対応して設けられる複数の電極部であって、前記電極部の各々が前記細胞懸濁液に浸漬されるように支持されている複数電極を含む複数の電極部と、
測定用交流電圧を含む測定用電圧及び前記ウェル内の前記被検細胞にエレクトロポレーションを生じさせるインパルス電圧を発生する電源部であって、前記被検細胞に細胞死を誘発しないように、前記測定用交流電圧を前記インパルス電圧に比べて低い低電圧に設定する電源部と、
測定モードにおいて、前記電源部から前記電極部の前記電極に前記測定用交流電圧を印加して前記電極間の細胞懸濁液の抵抗を測定し、この測定結果に基づいて、前記複数のウェル内における電荷量の密度を一定とする、前記ウェル毎の前記インパルス電圧のインパルス印加時間を算出する算出部と、
エレクトロポレーションモードにおいて、前記インパルス電圧を前記算出したインパルス印加時間の間、前記各電極部の前記電極に印加するインパルス電圧印加部と、
を具備するエレクトロポレーション装置が提供される。
Q=CV(1−e-t/τ)
τ=R・C
で表される。ここで、R及びCは、それぞれウェル62内の電極32、33間の抵抗及びキャパシタ、τは、時定数、Vは、測定モードで電極32、33間に印加する電圧、また、tは、電圧印加の経過時間である。ここで、抵抗Rは、主に電極32、33間の細胞懸濁液の抵抗に相当し、キャパシタCは、電極32、33の表面の細胞懸濁液との間の界面に生じる電気2重層の静電容量に相当している。
τ=R・C
このように、時定数τが判明することから、測定部92において、ステップS33で測定された抵抗Rを利用してキャパシタCも計算により求めることができる(S35)。ウェル62毎に、求められた抵抗R、キャパシタC、時定数τ、測定時の第1電圧及び第2電圧は、印加条件設定部96に表形式で格納される。印加条件算出部94は、抵抗R、キャパシタC、時定数τ等のパラメータから直流インパルス電圧の印加時間t、換言すれば、スイッチ74の閉成時間tをウェル62毎に算出する。上述した電荷量Qの式から明らかなように、直流インパルス電圧の印加時間tが算出されることによって電極32,33間に与えられる電荷量Qがすべてのウェル62について一定化される。印加条件算出部94で印加時間t及び電荷量Qも、印加条件設定部96に表形式で格納される。より具体的には、印加条件設定部96に格納される表には、ウェル番号W1〜Wn毎に測定抵抗R1〜Rn、測定キャパシタC1〜Cn、測定時定数τ1〜τn、直流インパルス電圧の印加時間t1〜tn、演算された電荷量Q1〜Qn及び測定時の第1、第2電圧V1、V2が記載される。
80…システム制御部、82…撮像部、86…表示部、90…電源部、92…測定部、94…印加条件算出部、96…印加条件記憶部、97…スイッチ開閉制御部
Claims (12)
- 多数の被検細胞及び導入物質で組成され、液組成の異なる細胞懸濁液を含む検査対象の細胞懸濁液が収納されている複数のウェルと、
前記ウェルに対応して設けられる複数の電極部であって、前記電極部の各々が前記細胞懸濁液に浸漬されるように支持されている複数電極を含む複数の電極部と、
測定用交流電圧を含む測定用電圧及び前記ウェル内の前記被検細胞にエレクトロポレーションを生じさせるインパルス電圧を発生する電源部であって、前記被検細胞に細胞死を誘発しないように、前記測定用交流電圧を前記インパルス電圧に比べて低い低電圧に設定する電源部と、
測定モードにおいて、前記電源部から前記電極部の前記電極に前記測定用交流電圧を印加して前記電極間の細胞懸濁液の抵抗を測定し、この測定結果に基づいて、前記複数のウェルにおける電荷量の密度を一定とする、前記ウェル毎の前記インパルス電圧のインパルス印加時間を算出する算出部と、
エレクトロポレーションモードにおいて、前記インパルス電圧を前記算出したインパルス印加時間の間、前記各電極部の前記電極に印加するインパルス電圧印加部と、
を具備するエレクトロポレーション装置。 - 前記電源部は、前記測定用交流電圧を前記インパルス電圧の10〜20%の低い低電圧に設定する請求項1のエレクトロポレーション装置。
- 前記電源部は、前記測定用電圧としてインパルス電圧に比べて低い低電圧に設定した測定用直流電圧を発生し、前記測定モード時に、この測定用直流電圧を前記直流インパルス印加時間に比べて長い測定時間の間印加し、
前記算出部は、前記測定用直流電圧の印加に基づいて前記電極間の時定数を測定し、この時定数及び前記抵抗の測定結果から前記前記電極間のキャパシタを算出し、この測定結果及び算出結果に基づいて供給すべき前記ウェル毎の前記インパルス電圧のインパルス印加時間を算出するする請求項1のエレクトロポレーション装置。 - 前記ウェル毎の前記細胞懸濁液に関する前記測定結果及び前記算出結果を格納する記憶部を更に具備する請求項1又は請求項3のエレクトロポレーション装置。
- 前記インパルス電圧印加部は、前記電源部及び電極間に接続され、前記電極部に対応するスイッチ及び前記前記供給すべき電荷量に応じて前記スイッチを開閉して前記インパルス印加電圧のインパルス印加時間を制御する制御部を含む請求項1のエレクトロポレーション装置。
- 前記インパルス電圧印加部は、前記電源部及び電極間に接続され、前記電極部に対応するスイッチ及びこのスイッチを開閉制御するとともに前記供給すべき電荷量に応じて前記インパルス印加電圧の電圧値を設定する制御部を含む請求項1のエレクトロポレーション装置。
- 複数のウェルの夫々に多数の被検細胞及び導入物質で組成され、液組成の異なる細胞懸濁液を含む細胞懸濁液を収納し、
前記ウェルに対応して設けられる複数の電極部であって、前記電極部の各々に支持される複数の電極を前記細胞懸濁液に浸漬し、
測定モードにおいて、前記被検細胞に細胞死を誘発しないように、前記測定用交流電圧を前記インパルス電圧に比べて低い低電圧に設定される測定用交流電圧を前記電極部の前記電極に印加して前記電極間の細胞懸濁液の抵抗を測定し、この測定結果に基づいて、前記複数のウェル内における電荷量の密度を複数のウェル間で一定とする、前記ウェル毎の前記インパルス電圧のインパルス印加時間を算出し、
エレクトロポレーションモードにおいて、前記ウェル内の前記被検細胞にエレクトロポレーションを生じさせる前記インパルス電圧を前記算出したインパルス印加時間の間、前記各電極部の前記電極に印加する、
ことを具備するエレクトロポレーション方法。 - 前記測定用交流電圧は、前記インパルス電圧の10〜20%の低い低電圧に設定される請求項7のエレクトロポレーション方法。
- 前記測定用電圧としてインパルス電圧に比べて低い低電圧に設定した測定用直流電圧を発生し、 前記測定モード時に、前記直流インパルス印加時間に比べて長い測定時間の間、この測定用直流電圧を印加し、
この測定用直流電圧の印加に基づいて前記電極間の時定数を測定し、この時定数及び前記抵抗の測定結果から前記前記電極間のキャパシタを算出し、この測定結果及び算出結果に基づいて供給すべき前記ウェル毎の前記インパルス電圧のインパルス印加時間を算出する請求項7のエレクトロポレーション方法。 - 前記ウェル毎の前記細胞懸濁液に関する前記測定結果及び前記算出結果を記憶する請求項7又は請求項9のエレクトロポレーション方法。
- 前記供給すべき電荷量に応じて、前記電極部に対応して前記電極に接続されるスイッチを開閉制御してインパルス印加電圧の印加時間を制御する請求項6のエレクトロポレーション方法。
- 前記電極部に対応して前記電極に接続されるスイッチを開閉制御するとともに前記供給すべき電荷量に応じて設定されたインパルス印加電圧を印加する請求項6のエレクトロポレーション方法。
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