JP6788370B2 - A connector for a cell separation device, a cell separation filter with the connector, and a method for producing a cell concentrate using the cell separation filter. - Google Patents
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Description
本発明は、細胞分離機器用コネクタ、コネクタを配した細胞分離フィルター、及び細胞分離フィルターを利用した細胞濃縮液の製造方法に関する。 The present invention relates to a connector for a cell separation device, a cell separation filter having the connector, and a method for producing a cell concentrate using the cell separation filter.
近年、血液学や科学テクノロジーの急速な進歩に伴い、全血・骨髄・臍帯血・組織抽出物をはじめとする体液から必要な血液分画のみを分離して患者に投与することで治療効果を高め、さらに、治療に必要のない分画は投与しないことで副作用を抑制する、という治療スタイルが広く普及している。 In recent years, with the rapid progress of hematology and scientific technology, the therapeutic effect is achieved by separating only the necessary blood fraction from body fluids such as whole blood, bone marrow, umbilical cord blood, and tissue extracts and administering it to patients. In addition, a treatment style that suppresses side effects by not administering fractions that are not necessary for treatment is widespread.
例えば、血液輸血もその1つである。赤血球製剤は、出血及び赤血球が不足する場合、又は赤血球の機能低下により酸素が欠乏している場合に使用される血液製剤である。赤血球製剤には、異常な免疫反応や移植片対宿主病(GVHD)等の副作用を誘導する白血球は不要であり、フィルターで白血球を除去する必要がある。場合によっては白血球に加えて血小板も除去することもある。 For example, blood transfusion is one of them. Erythrocyte preparations are blood products used when bleeding and erythrocyte deficiency, or when erythrocyte dysfunction causes oxygen deficiency. Erythrocyte preparations do not require leukocytes that induce side effects such as an abnormal immune response or graft-versus-host disease (GVHD), and need to be filtered to remove leukocytes. In some cases, platelets may be removed in addition to white blood cells.
一方、血小板製剤は、血液凝固因子の欠乏による出血ないし出血傾向にある患者に使用される血液製剤である。血小板製剤の製造のためには、遠心分離により、血小板以外の不要な細胞や成分は除去され、必要とされる血小板成分のみが採取されている。 On the other hand, platelet products are blood products used for patients who have bleeding or bleeding tendency due to deficiency of blood coagulation factors. For the production of platelet preparations, unnecessary cells and components other than platelets are removed by centrifugation, and only the required platelet components are collected.
加えて近年、白血病や固形癌治療に向けた造血幹細胞移植が盛んに行われるようになり、治療に必要な、造血幹細胞を含む白血球群を分離し投与する方法がとられている。この造血幹細胞のソースとして、ドナーの負担が少ない、増殖能力が優れている、等の利点から、骨髄や末梢血に加えて臍帯血も注目を浴びている。また近年、月経血中にも幹細胞が豊富に存在することが示唆され、これまで廃棄されていた月経血も貴重な幹細胞ソースとして利用される可能性がある。 In addition, in recent years, hematopoietic stem cell transplantation for the treatment of leukemia and solid cancer has become popular, and a method of separating and administering a leukocyte group containing hematopoietic stem cells, which is necessary for treatment, has been adopted. As a source of these hematopoietic stem cells, umbilical cord blood is attracting attention in addition to bone marrow and peripheral blood because of its advantages such as less burden on donors and excellent proliferative ability. In recent years, it has been suggested that stem cells are also abundant in menstrual blood, and menstrual blood that has been discarded so far may be used as a valuable stem cell source.
骨髄や末梢血に関して、不要な細胞を除き白血球を分離・純化して投与することが望まれている一方で、臍帯血についても血縁者のためのバンキングが盛んになり、使用時まで凍結保存する必要性から、凍結保存による赤血球溶血を防ぐことを目的に白血球は分離・純化されている。 For bone marrow and peripheral blood, it is desired to separate and purify leukocytes except for unnecessary cells for administration, while for cord blood, banking for relatives has become popular, and cryopreservation is performed until use. Due to necessity, leukocytes are separated and purified for the purpose of preventing erythrocyte hemolysis due to cryopreservation.
これらのような細胞濃縮液の製造に使用される細胞分離フィルターは、第一通液口(例えば流入口)及び第二通液口(例えば流出口)が設けられた容器と、前記第一通液口及び前記第二通液口間に充填されたろ材(例えば不織布)を備えている(例えば、特許文献1参照)。
前記容器内の細胞含有液のフロー方式として、供給液の流れの方向が前記ろ材による濾過方向と直交するクロスフロー方式(例えば、特許文献1の第1図及び第2図参照)と、供給液の流れの方向が前記ろ材による濾過方向と同じであるデッドエンドフロー方式(例えば、特許文献1の第3図及び第4図参照)とがある。
The cell separation filter used for producing a cell concentrate such as these includes a container provided with a first inlet (for example, an inlet) and a second inlet (for example, an outlet), and the first inlet. A filter medium (for example, a non-woven fabric) filled between the liquid port and the second liquid passing port is provided (see, for example, Patent Document 1).
As the flow method of the cell-containing liquid in the container, a cross flow method in which the flow direction of the supply liquid is orthogonal to the filtration direction by the filter medium (see, for example, FIGS. 1 and 2 of Patent Document 1) and the supply liquid There is a dead-end flow method (see, for example, FIGS. 3 and 4 of Patent Document 1) in which the flow direction of the filter medium is the same as the filtration direction by the filter medium.
ここで、クロスフロー方式は、供給液の流れの方向が濾過方向と直交するので、ろ材表面への粒子の堆積や目詰まりをし難く、ろ材の全面を使って大量サンプルの濃縮に適しているが回収率が低くなる。
また、デッドエンドフロー方式は、供給液の流れの方向が前記ろ材による濾過方向と同じであるので、ろ材表面への粒子の堆積や目詰まりをし易く、大量サンプルの濃縮には不適であるが、ろ材に負荷する回収圧を高めることができる為、回収率が高くなる。
Here, the cross-flow method is suitable for concentrating a large amount of sample using the entire surface of the filter medium because the flow direction of the supply liquid is orthogonal to the filtration direction, so that particles are less likely to be deposited or clogged on the surface of the filter medium. However, the recovery rate is low.
Further, the dead end flow method is not suitable for concentrating a large amount of sample because the flow direction of the supply liquid is the same as the filtration direction by the filter medium, so that particles are likely to be deposited or clogged on the surface of the filter medium. Since the recovery pressure applied to the filter medium can be increased, the recovery rate becomes high.
以上のとおり、クロスフロー方式及びデッドエンドフロー方式には一長一短があり、従来の細胞分離フィルターにおけるフロー方式は、クロスフロー方式及びデッドエンドフロー方式のどちらかである。
よって、使用状態における細胞分離フィルターにおいて、そのフロー方式はクロスフロー方式及びデッドエンドフロー方式のどちらかに固定されるので、細胞濃縮液の製造における各工程に適したフロー方式を選択できない。
As described above, the cross-flow method and the dead-end flow method have advantages and disadvantages, and the flow method in the conventional cell separation filter is either the cross-flow method or the dead-end flow method.
Therefore, in the cell separation filter in the used state, the flow method is fixed to either the cross flow method or the dead end flow method, so that the flow method suitable for each step in the production of the cell concentrate cannot be selected.
そこで本願の発明者らは、細胞濃縮液の製造における細胞分離フィルターの使用実態に基づく上記課題を解決するために鋭意研究を重ねたところ、細胞分離フィルターの容器における通液口の配置を可変にすることにより、クロスフロー方式及びデッドエンドフロー方式を切り換えるという着想を得た。そして、複数の通液口部を備え、所望のフロー方式に応じて通液口部の切り替えを容易にすることができる細胞分離フィルターを完成させることに成功した。しかしながら、細胞分離フィルターや血液、輸液などを収容する容器などの細胞分離機器の通液口部に配管を接続する場合、細胞分離フィルターや容器に配管を回転させながら接続していたため、配管にキンクが発生するというさらなる問題があった。 Therefore, the inventors of the present application have conducted extensive research to solve the above-mentioned problems based on the actual conditions of use of the cell separation filter in the production of the cell concentrate, and as a result, the arrangement of the liquid passage port in the container of the cell separation filter can be changed. By doing so, I got the idea of switching between the cross flow method and the dead end flow method. Then, they have succeeded in completing a cell separation filter having a plurality of liquid passage ports and capable of facilitating switching of the liquid passage ports according to a desired flow method. However, when connecting the pipe to the liquid passage port of the cell separation device such as the cell separation filter or the container for storing blood, infusion, etc., the pipe was connected to the cell separation filter or the container while rotating, so the pipe was kinked. There was a further problem of occurrence.
そこで、本発明が前述の状況に鑑み、解決しようとするところは、位置が固定された状態の細胞分離フィルターや容器などの細胞分離機器の通液口部に対しても、配管をキンクさせずに簡単に接続することができるコネクタを提供する点にある。
また、本発明の別の目的は、前記コネクタを装着された細胞分離フィルター、及びこれを利用した細胞濃縮液の製造方法を提供する点にある。
Therefore, in view of the above-mentioned situation, the present invention tries to solve the problem without kinking the piping even for the liquid passage portion of the cell separation device such as the cell separation filter or the container in the fixed position. The point is to provide a connector that can be easily connected to.
Another object of the present invention is to provide a cell separation filter equipped with the connector and a method for producing a cell concentrate using the same.
すなわち、本発明の要旨は以下の通りである。
〔1〕細胞分離機器の外面に配されており、配置を移動することが可能な通液口部に着脱可能に構成されたコネクタであって、
前記通液口部と接続する通液口接続部を有する基部と、
配管が接続される配管接続部および前記配管接続部に対して回転自在な回転部を有する配管接続体と、を有することを特徴とするコネクタ。
〔2〕前記基部と、前記配管接続体の一方端側が嵌合しており、前記配管接続体の他方端側に配管接続部が設けられる前記〔1〕に記載のコネクタ。
〔3〕前記基部の通液口接続部に、通液口部と嵌合する嵌合機構が設けられる前記〔1〕又は〔2〕に記載のコネクタ。
〔4〕前記基部の通液口接続部の外周面に、前記通液口部の内周面に設けられたねじ溝と螺合するねじ山が設けられる前記〔3〕に記載のコネクタ。
〔5〕前記基部と前記配管接続体との間に、これらの間から液体が漏れ出ることを防止する漏れ防止機構をさらに設けた前記〔1〕〜〔4〕のいずれかに記載のコネクタ。
〔6〕前記漏れ防止機構が逆止弁である前記〔5〕に記載のコネクタ。
〔7〕前記細胞分離機器が細胞分離フィルターまたは容器である前記〔1〕〜〔6〕のいずれかに記載のコネクタ。
〔8〕前記〔1〕〜〔6〕のいずれかに記載のコネクタが、通液口に装着された細胞分離フィルター。
〔9〕第一通液口及び第二通液口が配置された容器と、前記第一通液口及び前記第二通液口の間に充填されたろ材を備えた細胞分離フィルターであって、
前記容器が切り換え機構を備え、前記切り換え機構が、前記第一通液口及び/又は前記第二通液口の配置を移動させることが可能に構成されている、前記〔8〕に記載の細胞分離フィルター。
〔10〕前記切り換え機構が前記容器の第一面及び/又は前記第一面の対面方向に位置する第二面に備えられる前記〔9〕に記載の細胞分離フィルター。
〔11〕前記切り換え機構は、前記第一通液口及び/又は前記第二通液口の配置を、前記容器の第一面及び/又は前記第一面の対面方向に位置する第二面の中心部から最端部の間で移動させることが可能に構成されている前記〔9〕又は〔10〕に記載の細胞分離フィルター。
〔12〕前記切り替え機構が、回転移動式、スライド移動式及び着脱移動式からなる群より少なくとも1つ選ばれる前記〔9〕〜〔11〕のいずれかに記載の細胞分離フィルター。
〔13〕前記ろ材が不織布である前記〔9〕〜〔12〕のいずれかに記載の細胞分離フィルター。
〔14〕前記ろ材が多孔質セルロース粒子である前記〔9〕〜〔12〕のいずれかに記載の細胞分離フィルター。
〔15〕前記ろ材が、前記多孔質セルロース粒子に、logP(Pはオクタノール―水系での分配係数)値が2.50以上の化合物を固定化してなる前記〔14〕に記載の細胞分離フィルター。
〔16〕前記ろ材が、前記多孔質セルロース粒子に、トリプトファン誘導体、及びポリアニオン性化合物を固定化してなる前記〔14〕に記載の細胞分離フィルター。
〔17〕前記〔9〕〜〔16〕のいずれかに記載の細胞分離フィルターの前記第一通液口又は前記第二通液口から細胞含有液を導入し、ろ材と接触させる接触工程、及び前記細胞分離フィルターの前記第一通液口又は前記第二通液口から細胞濃縮液を回収する回収工程、を有する細胞濃縮液の製造方法。
〔18〕前記接触工程において、前記切り換え機構によりクロスフロー方式にし、前記細胞含有液を導入して前記ろ材と接触させる前記〔17〕に記載の製造方法。
〔19〕前記回収工程において、前記切り換え機構によりデッドエンドフロー方式にし、前記細胞分離フィルターの前記第一通液口又は前記第二通液口から細胞濃縮液を回収する前記〔17〕又は〔18〕に記載の製造方法。
That is, the gist of the present invention is as follows.
[1] A connector that is arranged on the outer surface of a cell separation device and is detachably configured at a liquid passage port where the arrangement can be moved .
A base having a liquid passage connecting portion to be connected to the liquid passing port, and
A connector characterized by having a pipe connection portion to which a pipe is connected and a pipe connection body having a rotating portion that is rotatable with respect to the pipe connection portion.
[2] The connector according to the above [1], wherein the base portion and one end side of the pipe connection body are fitted, and the pipe connection portion is provided on the other end side of the pipe connection body.
[3] The connector according to the above [1] or [2], wherein a fitting mechanism for fitting with the liquid passage portion is provided at the liquid passage port connection portion of the base portion.
[4] The connector according to the above [3], wherein a screw thread screwed with a screw groove provided on an inner peripheral surface of the liquid passage port portion is provided on an outer peripheral surface of the liquid passage port connection portion of the base portion.
[5] The connector according to any one of the above [1] to [4], further provided with a leak prevention mechanism for preventing liquid from leaking between the base and the pipe connecting body.
[6] The connector according to the above [5], wherein the leak prevention mechanism is a check valve.
[7] The connector according to any one of [1] to [6] above, wherein the cell separation device is a cell separation filter or a container.
[8] A cell separation filter in which the connector according to any one of [1] to [6] is attached to a liquid passage port.
[9] A cell separation filter provided with a container in which a first liquid passage port and a second liquid passage port are arranged, and a filter medium filled between the first liquid passage port and the second liquid passage port. ,
The cell according to the above [8], wherein the container is provided with a switching mechanism, and the switching mechanism is configured to be able to move the arrangement of the first liquid passage port and / or the second liquid passage port. Separation filter.
[10] The cell separation filter according to the above [ 9 ], wherein the switching mechanism is provided on the first surface of the container and / or the second surface located in the facing direction of the first surface.
[11] The switching mechanism arranges the first liquid passage port and / or the second liquid passage port on the first surface and / or the second surface of the container located in the facing direction of the first surface. The cell separation filter according to the above [9] or [10], which is configured to be movable from the central portion to the outermost portion.
[12] The cell separation filter according to any one of [9] to [11], wherein the switching mechanism is selected from at least one group consisting of a rotary movement type, a slide movement type, and a detachable movement type.
[13] The cell separation filter according to any one of [9] to [12] above, wherein the filter medium is a non-woven fabric.
[14] The cell separation filter according to any one of [9] to [12] above, wherein the filter medium is porous cellulose particles.
[15] The cell separation filter according to the above [14], wherein the filter medium is formed by immobilizing a compound having a logP (P is an octanol-partition coefficient in an aqueous system) of 2.50 or more on the porous cellulose particles.
[16] The cell separation filter according to the above [14], wherein the filter medium is formed by immobilizing a tryptophan derivative and a polyanionic compound on the porous cellulose particles.
[17] A contact step of introducing a cell-containing liquid from the first passage port or the second passage port of the cell separation filter according to any one of the above [9] to [16] and bringing the cell-containing liquid into contact with the filter medium, and A method for producing a cell concentrate, which comprises a recovery step of recovering the cell concentrate from the first passage port or the second passage port of the cell separation filter.
[18] The production method according to the above [17], wherein in the contact step, a cross-flow method is adopted by the switching mechanism, and the cell-containing liquid is introduced and brought into contact with the filter medium.
[19] In the recovery step, the dead end flow method is adopted by the switching mechanism, and the cell concentrate is recovered from the first liquid passage port or the second liquid passage port of the cell separation filter [17] or [18]. ] The manufacturing method described in.
本発明に係るコネクタによれば、固定されている細胞分離フィルターや血液、輸液などを収容する容器などの細胞分離機器の通液口部、特に複数の通液口部を備えた細胞分離フィルターのフロー方式を切り替える場合に、所望の位置の通液口部に、配管を簡単にかつキンクを発生させずに接続することができる。
また、前記コネクタを備えた本発明に係る細胞分離フィルターによれば、切り換え機構により通液口の配置を移動させることができるので、細胞濃縮液の製造における各工程に適したフロー方式を選択できる。
また、発明に係る細胞濃縮液の製造方法は、細胞分離フィルターの切り換え機構により、クロスフロー方式で細胞含有液を細胞分離フィルターへ導入することで、細胞分離フィルター内のろ材への粒子の堆積や目詰まりによる流動抵抗の上昇を抑制することができる。次に、細胞分離フィルターの切り換え機構により、デッドエンドフロー方式で細胞回収液を細胞分離フィルターへ導入することで、細胞分離フィルター内のろ材にかかる圧力を高めることができ、ろ材に捕捉された細胞を効率よく回収することができる。
According to the connector according to the present invention, a cell separation filter having a fixed cell separation filter or a cell separation device such as a container for storing blood, infusion, etc., particularly a cell separation filter having a plurality of liquid passage ports. When switching the flow method, the pipe can be easily connected to the liquid passage portion at a desired position without generating a kink.
Further, according to the cell separation filter according to the present invention provided with the connector, the arrangement of the liquid passage port can be moved by the switching mechanism, so that a flow method suitable for each step in the production of the cell concentrate can be selected. ..
Further, in the method for producing a cell concentrate according to the invention, particles are deposited on the filter medium in the cell separation filter by introducing the cell-containing solution into the cell separation filter by a cross-flow method by a cell separation filter switching mechanism. It is possible to suppress an increase in flow resistance due to clogging. Next, by introducing the cell recovery solution into the cell separation filter by the dead end flow method by the switching mechanism of the cell separation filter, the pressure applied to the filter medium in the cell separation filter can be increased, and the cells captured by the filter medium can be increased. Can be efficiently recovered.
以下、本発明について図面を用いて詳細に説明する。 Hereinafter, the present invention will be described in detail with reference to the drawings.
<コネクタ>
図1(a)、図3(a)に示すように、本発明に係るコネクタ40、40aは、細胞分離機器SEの外面に配されている通液口部LOに着脱可能に構成され、前記通液口部LOと接続する通液口接続部41を有する基部42と、
配管43が接続される配管接続部44および前記配管接続部44に対して回転自在な回転部45を有する配管接続体46と、を有することを特徴とする。
<Connector>
As shown in FIGS. 1 (a) and 3 (a), the
It is characterized by having a
本発明において細胞分離機器とは、細胞を分離するために使用される機器をいい、特に限定されないが、例えば、細胞分離フィルター、容器、分岐栓、接続管など、細胞分離システムに使用される細胞分離機器であればよい。
例えば、フロー方式を切り替え可能となるように、複数の通液口部を備えた細胞分離フィルターや、血液または輸液を収容できる容器なども細胞分離機器に含まれる。また、図6に示すように、バッグや細胞分離フィルターなど各部間の配管の接続部に、図1(a)に示すコネクタ40を用いてもよいし、図3(a)に示すコネクタ40aを用いてもよい。
In the present invention, the cell separation device refers to a device used for separating cells, and is not particularly limited, but is a cell used in a cell separation system such as a cell separation filter, a container, a branch plug, and a connecting tube. It may be a separation device.
For example, the cell separation device also includes a cell separation filter having a plurality of liquid passage ports and a container capable of accommodating blood or infusion so that the flow method can be switched. Further, as shown in FIG. 6, the
本発明において着脱可能とは、例えば、細胞分離フィルターや容器などの細胞分離機器SEに配管43の着脱を切り替えできるように、細胞分離機器SEの外面に配されている通液口部LOに、コネクタ40、40aを取り付けたり、取り外したりできることをいう。本発明に係るコネクタ40、40aは、前記の構成を備えることにより、細胞分離機器SEへの通液用配管43の接続を可能にする。特に、図4(a)、図4(b)、図5(a)、図5(b)に示すように、デッドエンドフロー方式、クロスフロー方式などのフロー形式に応じて使用する通液口部LOの位置を切り替えることができる細胞分離フィルターSFにおいては、本発明に係るコネクタ40、40aを使用することで、配管43にキンクを発生させることなく、スムーズにフロー方式の切り替えを行うことができるため、フロー方式の切り替えにかかる時間を短縮でき、細胞の回収率を向上させることができる。
In the present invention, the term “detachable” means, for example, the liquid passage port LO arranged on the outer surface of the cell separation device SE so that the attachment / detachment of the
本発明に係るコネクタ40、40aは、前記基部42と、前記配管接続体46の一方端側とが嵌合しており、かつ、前記配管接続体46の他方端側に配管接続部44が設けられる。
In the
前記基部42の通液口接続部41は、細胞分離機器SEの前記通液口部LOに接続可能で、かつ着脱可能な構成を有していればよい。
前記通液口接続部41の形状としては、筒形状が挙げられる。
また、前記着脱可能な構成として、前記通液口部LOとの接続を簡単にかつしっかりと行う観点から、前記通液口接続部41は前記通液口部LOと嵌合できる嵌合機構を備えることが好ましい。
前記嵌合機構は、前記通液口接続部41が前記通液口LOに嵌合できる形状を有する。
The liquid passage
Examples of the shape of the liquid passing
Further, as the detachable configuration, from the viewpoint of easily and firmly connecting to the liquid passing port portion LO, the liquid passing
The fitting mechanism has a shape in which the liquid passing
例えば、図1(a)に示すように、前記通液口部LOが細胞分離機器SEの外面に設けられた穴である場合(例えば、図14、図15、図16の着脱穴17A、17B、18A、18B、19A、19B)、前記嵌合機構としては、前記穴の内周面にねじ溝47を設け、そのねじ溝47と螺合するねじ山48を前記通液口接続部41の外周面に設ける構成が挙げられる。このような構成とすることで、通液口接続部41と前記通液口部LOとをしっかりと固定することができる。
また、図示しないが、前記穴の周囲に磁石を設け、その穴の周囲と接触する通液口接続部41の表面に穴とは異なる極の磁石や鉄などの強磁性体を設けてもよい。このように磁石を利用することで、前記通液口接続部41と前記通液口部LOとの接続を簡単に、かつ確実に行うことができる。さらに、異方性のある磁石や鉄などの強磁性体を設けることにより、例えば、細胞分離フィルターにおいて細胞回収時に圧力を掛けたとき、前記通液口部LOの端面から垂直方向には、発生する磁力により外れることが無いが、前記通液口接続部41を回転させるときは、異方性の特性により容易にはずすことができる。
また、図示しないが、前記通液口接続部41の端部にビン針を形成し、前記通液口部LOに切込みを設けたゴム栓を備えていていもよい。この場合、前記通液口LOのゴム栓の切込みに前記ビン針を挿入したときのみ通液可能となるような構成が挙げられる。
For example, as shown in FIG. 1A, when the liquid passage port LO is a hole provided on the outer surface of the cell separation device SE (for example, the attachment /
Further, although not shown, a magnet may be provided around the hole, and a magnet of a pole different from the hole or a ferromagnetic material such as iron may be provided on the surface of the liquid
Further, although not shown, a rubber stopper may be provided in which a bottle needle is formed at the end of the liquid passage
また、図3(a)に示すように、前記通液口部LOが細胞分離機器SEの外面側に突き出た円筒49である場合(例えば、図7、図8、図9、図10、図11、図12、図13の第一通液口11、第二通液口12)、前記嵌合機構としては、前記円筒49の内周面に、前記通液口接続部41端部の外周面が嵌合する態様が挙げられる。
この場合、前記円筒49および前記通液口接続部41が嵌合して接触する面は互いに平滑であればよい。また、前記接触面には図示しないが、ねじ山およびそのねじ山と螺合するねじ溝を設けることで、通液口接続部41と前記円筒49とをよりしっかりと固定することができる。
また、前記円筒49と、前記通液口接続部41との接触面には磁石を設け、その円筒49の接触面および通液口接続部41側の接触面に円筒49側とは異なる極の磁石や鉄などの強磁性体を設ける構成が挙げられる。このように磁石を利用することで、前記通液口接続部41と前記円筒49との接続をより確実に行うことができる。さらに、異方性のある磁石や鉄などの強磁性体を設けることにより、例えば、細胞分離フィルターにおいて細胞回収時に圧力を掛けたとき、前記通液口部LOの端面から垂直方向には、発生する磁力により外れることが無いが、前記通液口接続部41を回転させるときは、異方性の特性により容易にはずすことができる。
また、図示しないが、前記通液口接続部41の端部にビン針を形成し、前記通液口部LOに切込みを設けたゴム栓を備えていてもよい。この場合、前記通液口LOのゴム栓の切込みに前記ビン針を挿入したときのみ通液可能となるような構成が挙げられる。
Further, as shown in FIG. 3A, when the liquid passage port LO is a
In this case, the surfaces on which the
Further, a magnet is provided on the contact surface between the
Further, although not shown, a rubber stopper may be provided in which a bottle needle is formed at the end of the liquid passage
図1(a)、図3(a)に示すように、前記配管接続体46は、細胞分離機器SEへ通液するための配管43が接続される配管接続部44および前記配管接続部44に対して回転自在な回転部45を有する。
As shown in FIGS. 1A and 3A, the
前記配管接続部44は、配管43の内面または外面に通液可能な状態で固定できる形状を有していればよい。
The
前記配管接続部44は、前記回転部45に回転自在に保持される。
前記回転部45の形状としては、手で回転させやすい観点から、筒形状であればよい。また、回転部45の軸方向断面形状としては、円形、四角形、多角形などが挙げられるが、特に限定はない。
The
The shape of the rotating
前記配管接続部44が、前記回転部45に回転自在に保持される態様としては、例えば、図1(a)に示すように、前記配管接続部44の外周面に凹部50を設け、この凹部50に合う凸部51を前記回転部45の内面に設けることが挙げられる。また、図3(a)に示すように、前記配管接続部44の外周面に凸部51aを設け、この凸部51aに合う凹部50aを前記回転部45の内面に設けてもよい。
As a mode in which the
前記回転部45は、前記細胞分離機器SEに固定するために使用される。前記固定の態様としては、細胞分離機器SEの外面に配されている通液口部LOの形態に応じて、適当な態様を選択することができる。例えば、図1(a)に示すように、通液口部LOが穴であれば、穴形状の通液口部LOに予め固定された基部42に、前記回転部45が固定される態様が挙げられる。また、図3(a)に示すように、通液口部LOが円筒49であれば、前記円筒49に前記回転部45が固定される態様が挙げられる。
いずれの場合も、前記回転部45をその中心線を軸として回転させることで、配管接続部44に接続・固定された前記配管43を回転させることなく、前記基部42または円筒49を介して、配管43を細胞分離機器SEに接続することができる。
The rotating
In either case, by rotating the rotating
また、本発明に係るコネクタ40、40aを構成する前記配管接続部44と回転部45との間には、液体が漏れ出ることを防止するために、シール53を設けてもよい。特に、シール53としてシリコーン製のゴムパッキンやOリングを好適に用いることが出来る。
Further, a
また、本発明に係るコネクタ40、40aでは、前記基部42と前記配管接続部44との間のいずれかの位置に、これらの間から液体が漏れ出ることを防止する液漏れ防止機構をさらに設けてもよい。具体的には、図1(a)、図3(a)に示すコネクタ40、40aでは、前記基部42の内腔の適当な位置に設けられても良い。また、前記配管接続部44の内腔の適当な位置に液漏れ防止機構が設けられても良い。さらに、前記基部42の内腔の適当な位置および前記配管接続部44の内腔の適当な位置の両方に液漏れ防止機構が併用されても良い。
かかる液漏れ防止機構としては、ボール式、ディスク式、スイング式などの逆止弁が挙げられる。
Further, in the
Examples of such a liquid leakage prevention mechanism include check valves such as a ball type, a disc type, and a swing type.
また、図4(a)、図4(b)、図5(a)、図5(b)に示すように、通液口LOを複数有する細胞分離フィルターでは、本発明に係るコネクタ40、40aを取り付けない通液口LOには、閉止用着脱体としてキャップ52を装着することができる。前記キャップ52は、細胞分離機器SEの外面に配されている通液口部LOの形態に応じて、適当な方法を選択することができる。例えば、図1(a)に示すように、通液口部LOが穴であれば、穴形状の通液口部LOに固定された基部42に、前記キャップ52は固定される。また、図3(a)に示すように、通液口部LOが円筒49であれば、前記円筒49に前記キャップ52が固定される。
また、図示しないが、前記コネクタ40、40aにおいて配管接続部44の通液部分である内腔を塞いだ形状のキャップであってもよい。
Further, as shown in FIGS. 4 (a), 4 (b), 5 (a), and 5 (b), in the cell separation filter having a plurality of liquid passage ports LO, the
Further, although not shown, the cap may have a shape that closes the cavity that is the liquid passage portion of the
前記コネクタ40、40aの各部は、任意の構造材料を使用して作成することができる。当該各部の構造材料としては特に限定されないが、非反応性ポリマー、生物親和性金属、合金、ガラス等が挙げられる。
Each part of the
非反応性ポリマーとしては、アクリロニトリルブタジエンスチレンターポリマー等のアクリロニトリルポリマー;ポリテトラフルオロエチレン、ポリクロロトリフルオロエチレン、テトラフルオロエチレンとヘキサフルオロプロピレンのコポリマー、ポリ塩化ビニル等のハロゲン化ポリマー;ポリアミド、ポリイミド、ポリスルホン、ポリカーボネート、ポリエチレン、ポリプロピレン、ポリビニルクロリドアクリルコポリマー、ポリカーボネートアクリロニトリルブタジエンスチレン、ポリスチレン、ポリメチルペンテン等が挙げられる。 Non-reactive polymers include acrylonitrile polymers such as acrylonitrile butadiene styrene terpolymer; polytetrafluoroethylene, polychlorotrifluoroethylene, copolymers of tetrafluoroethylene and hexafluoropropylene, halogenated polymers such as polyvinyl chloride; polyamides and polyimides. , Polysulfone, polycarbonate, polyethylene, polypropylene, polyvinyl chloride acrylic copolymer, polycarbonate acrylonitrile butadiene styrene, polystyrene, polymethylpentene and the like.
生物親和性金属及び合金としては、ステンレス鋼、チタン、白金、タンタル、金、及びそれらの合金、並びに金メッキ合金鉄、白金メッキ合金鉄、コバルトクロミウム合金、窒化チタン被膜ステンレス鋼等が挙げられる。 Examples of biocompatible metals and alloys include stainless steel, titanium, platinum, tantalum, gold, and alloys thereof, as well as gold-plated ferroalloys, platinum-plated ferroalloys, cobalt chromium alloys, and titanium nitride-coated stainless steels.
滅菌耐性を有する点から、当該コネクタの構造材料として、ポリプロピレン、ポリ塩化ビニル、ポリエチレン、ポリイミド、ポリカーボネート、ポリスルホン、ポリメチルペンテン等が好ましい。 From the viewpoint of sterilization resistance, polypropylene, polyvinyl chloride, polyethylene, polyimide, polycarbonate, polysulfone, polymethylpentene and the like are preferable as the structural material of the connector.
前記コネクタ40、40aは、常法に基づいて、各部を組み合わせることで作製することができる。例えば、図1(a)に示すコネクタ40であれば、図2に示すように、前記回転部45を、配管接続部44の上部44aと下部44bとで挟みながら、前記上部44aおよび下部44bの接触面を接着剤などで固着し、次いで、前記配管接続部44の上部44aの端部に、配管43を接続する。一方、細胞分離機器SEの外面に設けた通液口LOには、基部42の通液口接続部41を差し込み、回転止めする。そして、前記配管接続部44bの端部を前記基部42の内腔に挿入しながら、回転部45を手で回転させることによって、前記回転部45の端面を前記基部42の外面に押し当てるようにして固定することができる。
The
<細胞分離フィルター>
本発明に係る細胞分離フィルターSFは、図4(a)、図4(b)、図5(a)、図5(b)に示すように、前記コネクタ40、40aが、通液口LOに装着された細胞分離フィルターSFである。
なお、図4(a)、図4(b)は、図1(a)に示すコネクタ40および図1(b)に示すキャップ52が装着された細胞分離フィルターSFを示し、図5(a)、図5(b)は、図3(a)に示すコネクタ40aおよび図3(b)に示すキャップ52が装着された細胞分離フィルターSFを示す。
<Cell separation filter>
In the cell separation filter SF according to the present invention, as shown in FIGS. 4 (a), 4 (b), 5 (a), and 5 (b), the
4 (a) and 4 (b) show the cell separation filter SF to which the
また、細胞分離フィルターSFとしては、一般的な細胞分離フィルターでよいが、特に、フロー方式を切り替えることができる細胞分離フィルターであっても、前記コネクタ40、40aを好適に接続することができる。
以下、フロー方式を切り替えることができる細胞分離フィルターについて、図面を用いて説明する。
なお、図面において、細胞分離フィルターの容器の第一面を上、第二面を下にした状態で側面に向かって見た図を正面図とする。
また、図7〜図16に示す細胞分離フィルターの容器1の構成例は、いずれも発明の概念を説明するための概略図であり、それらにおける切り換え機構の動作性やシール性等については、要求仕様等に応じて適宜の配慮を行った設計をすれば良い。
Further, the cell separation filter SF may be a general cell separation filter, but in particular, even if the cell separation filter can switch the flow method, the
Hereinafter, a cell separation filter capable of switching the flow method will be described with reference to the drawings.
In the drawing, a front view is a view of the cell separation filter container with the first surface facing up and the second surface facing down.
Further, the configuration examples of the cell
本発明に係る細胞分離フィルターは、第一通液口及び第二通液口が配置された容器と、前記第一通液口及び前記第二通液口の間に充填されたろ材を備えるとともに、前記第一通液口及び/又は前記第二通液口の配置を移動させる切り換え機構を備える。 The cell separation filter according to the present invention includes a container in which the first liquid passage port and the second liquid passage port are arranged, and a filter medium filled between the first liquid passage port and the second liquid passage port. , The first liquid passage port and / or the switching mechanism for moving the arrangement of the second liquid passage port is provided.
細胞分離フィルターに用いられる容器は、任意の構造材料を使用して作成することができる。当該容器の構造材料としては特に限定されないが、非反応性ポリマー、生物親和性金属、合金、ガラス等が挙げられる。 The container used for the cell separation filter can be made using any structural material. The structural material of the container is not particularly limited, and examples thereof include non-reactive polymers, biocompatible metals, alloys, and glass.
非反応性ポリマーとしては、アクリロニトリルブタジエンスチレンターポリマー等のアクリロニトリルポリマー;ポリテトラフルオロエチレン、ポリクロロトリフルオロエチレン、テトラフルオロエチレンとヘキサフルオロプロピレンのコポリマー、ポリ塩化ビニル等のハロゲン化ポリマー;ポリアミド、ポリイミド、ポリスルホン、ポリカーボネート、ポリエチレン、ポリプロピレン、ポリビニルクロリドアクリルコポリマー、ポリカーボネートアクリロニトリルブタジエンスチレン、ポリスチレン、ポリメチルペンテン等が挙げられる。 Non-reactive polymers include acrylonitrile polymers such as acrylonitrile butadiene styrene terpolymer; polytetrafluoroethylene, polychlorotrifluoroethylene, copolymers of tetrafluoroethylene and hexafluoropropylene, halogenated polymers such as polyvinyl chloride; polyamides and polyimides. , Polysulfone, polycarbonate, polyethylene, polypropylene, polyvinyl chloride acrylic copolymer, polycarbonate acrylonitrile butadiene styrene, polystyrene, polymethylpentene and the like.
生物親和性金属及び合金としては、ステンレス鋼、チタン、白金、タンタル、金、及びそれらの合金、並びに金メッキ合金鉄、白金メッキ合金鉄、コバルトクロミウム合金、窒化チタン被膜ステンレス鋼等が挙げられる。 Examples of biocompatible metals and alloys include stainless steel, titanium, platinum, tantalum, gold, and alloys thereof, as well as gold-plated ferroalloys, platinum-plated ferroalloys, cobalt chromium alloys, and titanium nitride-coated stainless steels.
滅菌耐性を有する点から、当該容器の構造材料として、ポリプロピレン、ポリ塩化ビニル、ポリエチレン、ポリイミド、ポリカーボネート、ポリスルホン、ポリメチルペンテン等が好ましい。 From the viewpoint of sterilization resistance, polypropylene, polyvinyl chloride, polyethylene, polyimide, polycarbonate, polysulfone, polymethylpentene and the like are preferable as the structural material of the container.
本発明において、細胞分離フィルターに用いられるろ材は、不織布や多孔質担体が挙げられる。 In the present invention, examples of the filter medium used for the cell separation filter include a non-woven fabric and a porous carrier.
本発明において不織布の材質は特に制限されないが、滅菌耐性や細胞への安全性の観点からは、ポリエチレンテレフタレート、ポリブチレンテレフタレート、ポリエチレン、高密度ポリエチレン、低密度ポリエチレン、ポリビニルアルコール、塩化ビニリデン、レーヨン、ビニロン、ポリプロピレン、アクリル(ポリメチルメタクリレート、ポリヒドロキシエチルメタクリレート、ポリアクリルニトリル、ポリアクリル酸、ポリアクリレート)、ナイロン、ポリイミド、アラミド(芳香族ポリアミド)、ポリアミド、キュプラ、カーボン、フェノール、ポリエステル、パルプ、麻、ポリウレタン、ポリスチレン、ポリカーボネート等の合成高分子、アガロース、セルロース、セルロースアセテート、キトサン、キチン等の天然高分子、ガラス等の無機材料や金属等が挙げられる。好ましくは、細胞捕捉能が高いポリエチレンテレフタレート、ポリブチレンテレフタレート、ポリプロピレン、アクリル、ナイロン、ポリウレタンである。さらに好ましくは、有核細胞捕捉能が高いポリエチレンテレフタレート、ポリブチレンテレフタラート、ナイロンである。2種以上の材質を組み合わせて繊維とする場合の繊維の形態としては、1本の繊維が異成分同士の材質よりなる繊維でもよく、異成分同士が剥離分割した分割繊維でもよい。また異成分同士の材質よりなる繊維をそれぞれ複合化した形態でもよい。ここでいう複合化とは、特に制限は無く、2種以上の繊維が混在した状態より構成される形態、あるいは単独の材質よりなる形態をそれぞれ張り合わせたもの等が挙げられる。さらに、蛋白質、ペプチド、アミノ酸、糖類等のように、特定の細胞に親和性のある分子を固定してもよい。 In the present invention, the material of the non-woven fabric is not particularly limited, but from the viewpoint of sterilization resistance and cell safety, polyethylene terephthalate, polybutylene terephthalate, polyethylene, high-density polyethylene, low-density polyethylene, polyvinyl alcohol, vinylidene chloride, rayon, etc. Viniron, polypropylene, acrylic (polymethylmethacrylate, polyhydroxyethylmethacrylate, polyacrylic nitrile, polyacrylic acid, polyacrylate), nylon, polyimide, aramid (aromatic polyamide), polyamide, cupra, carbon, phenol, polyester, pulp, Examples thereof include synthetic polymers such as hemp, polyurethane, polystyrene and polycarbonate, natural polymers such as agarose, cellulose, cellulose acetate, chitosan and chitin, inorganic materials such as glass and metals. Preferably, polyethylene terephthalate, polybutylene terephthalate, polypropylene, acrylic, nylon, or polyurethane having high cell capture ability. More preferably, polyethylene terephthalate, polybutylene terephthalate, and nylon having high nucleated cell capture ability. When two or more kinds of materials are combined into a fiber, the form of the fiber may be a fiber in which one fiber is made of a material of different components, or a split fiber in which different components are peeled and divided. Further, the fiber may be a composite of fibers made of different materials. The compounding referred to here is not particularly limited, and examples thereof include a form composed of a mixture of two or more types of fibers, a form composed of a single material, and the like. Furthermore, molecules having an affinity for a specific cell, such as proteins, peptides, amino acids, sugars, etc., may be immobilized.
また、不織布に親水化処理を施してもよく、親水化処理により有核細胞以外の細胞の非特異的な捕捉が抑制され、体液や生体組織の処理液が偏りなく細胞分離フィルター中を通過するので、性能の向上、必要細胞の回収率の向上等を付与することができる。親水化処理としては、水溶性多価アルコール、又は水酸基やカチオン基、アニオン基を有するポリマー、あるいはその共重合体(例えば、ヒドロキシエチルメタクリレート、ジメチルアミノエチルメタクリレート、あるいはその共重合体等)を吸着させる方法;水溶性高分子(ポリエチレングリコール、ポリビニルピロリドン、ポリビニルアルコール等)を吸着させる方法;疎水性膜に親水性高分子を固定化する方法;細胞分離フィルターに電子照射する方法;含水状態で細胞分離フィルターに放射線を照射することで親水性高分子を架橋不溶化する方法;疎水性膜の表面をスルホン化する方法;親水性高分子と、疎水性ポリマードープとの混合物から膜をつくる方法;アルカリ水溶液処理(NaOH、KOH等)により膜表面に親水基を付与する方法;疎水性多孔質膜をアルコールに浸漬した後、水溶性ポリマー水溶液で処理、乾燥後、熱処理や放射線等で不溶化処理する方法;界面活性作用を有する物質を吸着させる方法等が挙げられる。親水性高分子としては、ポリビニルピロリドン、ポリビニルアルコール、ポリエチレングリコール、エチレン−ビニルアルコール共重合体、水溶性多価アルコール等が挙げられる。 In addition, the non-woven fabric may be hydrophilized, and the hydrophilic treatment suppresses non-specific capture of cells other than nucleated cells, and the treatment fluid of body fluid or biological tissue passes through the cell separation filter without bias. Therefore, it is possible to improve the performance, the recovery rate of necessary cells, and the like. As the hydrophilization treatment, a water-soluble polyhydric alcohol, a polymer having a hydroxyl group, a cation group, or an anion group, or a polymer thereof (for example, hydroxyethyl methacrylate, dimethylaminoethyl methacrylate, or a copolymer thereof) is adsorbed. Method of adsorbing water-soluble polymer (polyethylene glycol, polyvinylpyrrolidone, polyvinyl alcohol, etc.); Method of immobilizing hydrophilic polymer on hydrophobic film; Method of irradiating cell separation filter with electrons; Cell in water-containing state A method of cross-linking and insolubilizing a hydrophilic polymer by irradiating a separation filter with radiation; a method of sulfonated the surface of a hydrophobic film; a method of forming a film from a mixture of a hydrophilic polymer and a hydrophobic polymer dope; an alkali Method of imparting hydrophilic groups to the surface of the film by aqueous solution treatment (NaOH, KOH, etc.); Method of immersing the hydrophobic porous film in alcohol, treating with a water-soluble polymer aqueous solution, drying, and then insolubilizing by heat treatment or radiation. ; Examples include a method of adsorbing a substance having a surface-active action. Examples of the hydrophilic polymer include polyvinylpyrrolidone, polyvinyl alcohol, polyethylene glycol, ethylene-vinyl alcohol copolymer, water-soluble polyhydric alcohol and the like.
不織布に固定するタンパク質としては、特定の細胞に親和性のあるタンパク質であれば特に限定されないが、具体的にはフィブロネクチン、ラミニン、ビトロネクチン、コラーゲン等が挙げられる。また、不織布に固定する糖類としては、細胞に親和性のある糖類であれば特に限定されないが、セルロース、キチン、キトサン等の多糖類やマンノース、グルコース、ガラクトース、フコース等のオリゴ糖等が挙げられる。 The protein to be fixed to the non-woven fabric is not particularly limited as long as it is a protein having an affinity for a specific cell, and specific examples thereof include fibronectin, laminin, vitronectin, and collagen. The saccharide to be fixed to the non-woven fabric is not particularly limited as long as it is a saccharide having an affinity for cells, and examples thereof include polysaccharides such as cellulose, chitin and chitosan, and oligosaccharides such as mannose, glucose, galactose and fucose. ..
本発明における多孔質担体としては、セルロース、アセチルセルロース、デクストリン等の多糖類、及びポリスチレン、スチレン−ジビニルベンゼン共重合体、ポリアクリルアミド、ポリアクリル酸、ポリメタクリル酸、ポリアクリル酸エステル、ポリメタクリル酸エステル、ポリビニルアルコール等の、合成ポリマーからなる有機担体が含まれる。これらは、ヒドロキシエチルメタクリレートのようなヒドロキシル基含有のポリマー材料や、ポリエチレンオキサイド鎖含有モノマーや、他の重合化モノマーの共重合体のような、グラフト共重合体からなるコーティング層を有していても構わない。活性基が担体表面に容易に導入されることから、これらの中ではセルロースやポリビニルアルコールのような合成ポリマーが実用的には好ましい。特に多孔質セルロース粒子が最も好ましい。 The porous carrier in the present invention includes polysaccharides such as cellulose, acetyl cellulose and dextrin, polystyrene, styrene-divinylbenzene copolymer, polyacrylamide, polyacrylic acid, polymethacrylic acid, polyacrylic acid ester, and polymethacrylic acid. Includes organic carriers made of synthetic polymers such as esters and polyvinyl alcohol. They have a coating layer made of a graft copolymer, such as a hydroxyl group-containing polymer material such as hydroxyethyl methacrylate, a polyethylene oxide chain-containing monomer, or a copolymer of another polymerized monomer. It doesn't matter. Of these, synthetic polymers such as cellulose and polyvinyl alcohol are practically preferred because the active groups are easily introduced onto the surface of the carrier. In particular, porous cellulose particles are most preferable.
多孔質担体(特に多孔質セルロース粒子)には、logP(Pはオクタノール−水系での分配係数)値が2.50以上の化合物を固定化してなるものであることが好ましい。
logP値が2.50以上の化合物としては、トリプトファン誘導体、ポリアニオン性化合物等が挙げられ、トリプトファン誘導体及びポリアニオン性化合物が多孔質担体に固定されていることが好ましい。
It is preferable that the porous carrier (particularly the porous cellulose particles) is formed by immobilizing a compound having a logP (P is an octanol-partition coefficient in an aqueous system) of 2.50 or more.
Examples of the compound having a logP value of 2.50 or more include a tryptophan derivative and a polyanionic compound, and it is preferable that the tryptophan derivative and the polyanionic compound are immobilized on the porous carrier.
logP値とは、化合物の疎水性のパラメータであり、代表的なオクタノール−水系での分配係数Pは以下のように求められる。まず、化合物をオクタノール(又は水)に溶解し、これに等量の水(又はオクタノール)を加え、グリッフィン・フラスク・シェイカー(Griffin flask shaker)(グリッフィン・アンド・ジョージ・リミテッド(Griffin & George Ltd.)製)で30分間振盪する。そののち2000rpmで1〜2時間遠心分離し、オクタノール層及び水層中の化合物の各濃度を分光学的又はGLCなどの種々の方法で測定する。これらの値を次式に代入することにより、Pが求められる。 The logP value is a parameter of the hydrophobicity of the compound, and the partition coefficient P in a typical octanol-aqueous system can be obtained as follows. First, the compound is dissolved in octanol (or water), and an equal amount of water (or octanol) is added thereto, and Griffin flask shaker (Griffin & George Ltd.) (Griffin & George Ltd.). ), Shake for 30 minutes. After that, centrifugation is performed at 2000 rpm for 1 to 2 hours, and the concentrations of the compounds in the octanol layer and the aqueous layer are measured spectroscopically or by various methods such as GLC. By substituting these values into the following equation, P can be obtained.
P=Coct/Cw(Coct:オクタノール層中の化合物濃度、Cw:水層中の化合物濃度) P = Coct / Cw (Coct: compound concentration in octanol layer, Cw: compound concentration in aqueous layer)
これまでに多くの研究者らにより種々の化合物のlogP値が実測されているが、それらの実測値はシー・ハンシュ(C.Hansch)らによって整理されている(「パーティション・コーフィシエンツ・アンド・ゼア・ユージズ;ケミカル・レビューズ(PARTITION COEFFICIENTS AND THEIR USES;Chemical Reviews)、71巻、525頁、1971年」参照)。 Many researchers have measured the logP values of various compounds so far, but these measured values have been organized by C. Hansch et al. ("Partition Cofisients and There"). -Eugees; Chemical Reviews (PARTITION COEFFICIENTS AND THEIR USES; Chemical Reviews, Vol. 71, p. 525, 1971).
また実測値の知られていない化合物についてはアール・エフ・レッカー(R.F.Rekker)がその著書「ザ・ハイドロフォビック・フラグメンタル・コンスタント(THE HYDROPHOBIC FRAGMENTAL CONSTANT)」,エルセビア・サイエンティフィック・パブリッシング・カンパニー・アムステルダム(Elsevier Sci.Pub.Com.,Amsterdam)(1977)中に示している疎水性フラグメント定数fを用いて計算した値(Σf)が参考となる。疎水性フラグメント定数は数多くのlogP実測値をもとに、統計学的処理を行い決定された種々のフラグメントの疎水性を示す値であり、化合物を構成するおのおののフラグメントのf値の和はlogP値とほぼ一致すると報告されている。本発明においては、logP値とはΣfをも包含するものである。 For compounds for which the measured values are unknown, RF Rekker wrote his book "THE HYDROPHOBIC FRAGMENTAL CONSTANT", Elsevier Scientific. -The value (Σf) calculated using the hydrophobic fragment constant f shown in Publishing Company Amsterdam (Elsevier Sci. Pub.Com., Amsterdam) (1977) can be used as a reference. The hydrophobic fragment constant is a value indicating the hydrophobicity of various fragments determined by statistical processing based on a large number of logP measured values, and the sum of the f-numbers of each fragment constituting the compound is logP. It is reported that it almost matches the value. In the present invention, the logP value also includes Σf.
(実施の形態1)
図7(a)の斜視図に示すように、本発明の実施の形態1に係る細胞分離フィルターは、円形状の第一面1A、第一面の対面方向に位置する(第一面と平行な)円形状の第二面1B、及び第一面1A及び第二面1Bの最端部間を繋ぐ円筒面である側面1Cを有する。
また、図7(c)及び(d)の縦断面斜視図に示す容器1内の収容空間Sには、前記ろ材が収容される。なお、図面を見やすくするために前記ろ材の図示を省略している。
(Embodiment 1)
As shown in the perspective view of FIG. 7A, the cell separation filter according to the first embodiment of the present invention is located on the circular
Further, the filter medium is accommodated in the accommodation space S in the
図7(b)の部分縦断面分解斜視図、並びに図7(c)及び(d)の縦断面斜視図に示すように、容器1の第一面1Aには、その中心から偏心した位置に円形のガイド穴4Aが形成され、第一面1Aに対向する第二面1Bには、その中心からガイド穴4Aの偏心方向と逆方向へ偏心した位置に円形のガイド穴4Bが形成される。
そして、第一面1Aに形成された円形のガイド穴4Aに対し、円盤状の回転体2に形成された円形のガイド溝2Aが係合するので、回転体2は容器1の本体に対して回転可能に支持される。
また、同様に、第二面1Bに形成された円形のガイド穴4Bに対し、円盤状の回転体3に形成された円形のガイド溝3Aが係合するので、回転体3は容器1の本体に対して回転可能に支持される。
さらに、回転体2の外周寄り位置に第一通液口11が取り付けられるとともに、回転体3の外周寄り位置に第二通液口12が取り付けられているので、容器1の本体に対して回転体2,3を回転させた位置に応じて第一通液口11及び第二通液口12の位置が移動する。なお、図7(a)、(b)、(c)及び(d)に示す細胞分離フィルターSFでは、前記の円筒状の第一通液口11及び第二通液口12にはいずれも図3(a)に示すコネクタ40aが装着されているが、前記第一通液口11及び第二通液口12を穴形状の通液口にしてもよく、この場合には図1(a)に示すコネクタ40が装着される。
As shown in the partial vertical cross-sectional exploded perspective view of FIG. 7 (b) and the vertical cross-sectional perspective view of FIGS. 7 (c) and 7 (d), the
Then, since the
Similarly, since the
Further, since the first
このように回転体2,3を回転可能に支持して通液口11,12を移動させる機構が、回転移動式の切り換え機構A1,B1を構成する。
このような切り換え機構A1,B1を備えた細胞分離フィルターは、図7(c)で示すように、通液口11,12を、それぞれ第一面1A、第二面1Bの中心部に移動させることでデッドエンドフロー方式を実現できる。さらに、図7(d)で示すように通液口11,12をそれぞれ第一面1A、第二面1Bの最端部に移動させることでクロスフロー方式を実現できる。従って、切り替え機構A1、B1により容易にフロー方式を切り換えることができる。
The mechanism for rotatably supporting the
As shown in FIG. 7C, the cell separation filter provided with such switching mechanisms A1 and B1 moves the
(実施の形態2)
図8(a)の斜視図、図8(b)の分解斜視図、並びに図8(c)及び(d)の縦断面斜視図における本発明の実施の形態2に係る細胞分離フィルターにおいて、実施の形態1と同一の符号は同一又は相当部分を示しているので、共通する部分の説明は省略する。
(Embodiment 2)
It is carried out in the cell separation filter according to the second embodiment of the present invention in the perspective view of FIG. 8A, the exploded perspective view of FIG. 8B, and the vertical sectional perspective view of FIGS. 8C and 8D. Since the same reference numerals as those in
図8(b)の分解斜視図、並びに図8(c)及び(d)の縦断面斜視図に示すように、容器1の第一面1Aには、その中心位置に管路6Aが、中心から径方向へ離間した最端部近傍位置に管路7Aが形成され、管路6A及び7A間の中点に支持孔5Aが形成される。また、第一面1Aに対向する第二面1Bには、その中心位置に管路6Bが、管路7Aの中心から径方向への離間方向と逆方向である、中心から径方向へ離間した最端部近傍位置に管路7Bが形成され、管路6B及び7B間の中点に支持孔5Bが形成される。
ここで、管路6Aは第一面1Aから、第一面1Aに対し垂直下方に収容空間Sまで導通している。管路6Bは第二面1Bから、第二面1Bに対し垂直上方に収容空間Sまで導通している。
ここで、管路7Aは、第一面1Aから第一面1Aに対し垂直下方に伸びた後に、第一面1Aに対し水平に径方向内方へ伸びるように屈曲しており、収容空間Sまで導通している。管路7Bは、第二面1Bから第二面1Bに対し垂直上方に伸びた後に第二面1Bに対し水平に径方向内方へ延びるように屈曲しており、収容空間Sまで導通している。
As shown in the exploded perspective view of FIG. 8B and the vertical sectional perspective views of FIGS. 8C and 8D, the
Here, the
Here, the
そして、第一面1Aに形成された支持孔5Aに対し、円盤状の回転体2中央の支軸2Bが嵌合するので、回転体2は容器1の本体に対して回転可能に支持される。
また、同様に、第二面1Bに形成された支持孔5Bに対し、円盤状の回転体3中央の支軸3Bが嵌合するので、回転体3は容器1の本体に対して回転可能に支持される。
よって、実施の形態2における第一通液口11、第二通液口12を移動させる機構は、実施の形態1と同様の回転移動式の切り換え機構A1,B1である。
Then, since the
Similarly, since the
Therefore, the mechanism for moving the first
このような切り換え機構A1,B1を備えた細胞分離フィルターは、図8(c)で示すように、第一面1Aの中心位置の管路6Aに第一通液口11が連通するとともに、第二面1Bの中心位置の管路6Bに第二通液口12が連通することで、デッドエンドフロー方式を実現する。さらに、図8(d)で示すように、第一面1Aの最端部近傍位置の管路7Aに第一通液口11が連通するとともに、第二面1Bの最端部近傍位置の管路7Bに第二通液口12が連通することで、クロスフロー方式を実現できる。従って、切り替え機構A1、B1により容易にフロー方式を切り換えることができる。
なお、図8(a)の斜視図、図8(b)の分解斜視図、並びに図8(c)及び(d)の縦断面斜視図に示す細胞分離フィルターSFでは、前記の円筒状の第一通液口11及び第二通液口12にはいずれも図3(a)に示すコネクタ40aが装着されているが、前記第一通液口11及び第二通液口12を穴形状の通液口にしてもよく、この場合には図1(a)に示すコネクタ40が装着される。
In the cell separation filter provided with such switching mechanisms A1 and B1, as shown in FIG. 8C, the first
In the cell separation filter SF shown in the perspective view of FIG. 8 (a), the exploded perspective view of FIG. 8 (b), and the vertical sectional perspective views of FIGS. 8 (c) and 8 (d), the cylindrical first The
(実施の形態3)
図9(a)の斜視図、図9(b)の分解斜視図、及び図9(c)の部分縦断面分解斜視図、並びに図10(a)及び(b)の縦断面正面図における本発明の実施の形態3に係る細胞分離フィルターにおいて、実施の形態1と同一の符号は同一又は相当部分を示しているので、共通する部分の説明は省略する。
(Embodiment 3)
The book in the perspective view of FIG. 9A, the exploded perspective view of FIG. 9B, the partial vertical sectional sectional perspective view of FIG. 9C, and the vertical sectional front view of FIGS. 10A and 10B. In the cell separation filter according to the third embodiment of the present invention, since the same reference numerals as those of the first embodiment indicate the same or corresponding parts, the description of the common parts will be omitted.
図9(b)の分解斜視図、並びに図10(a)及び(b)の斜視図に示すように、容器1の第一面1Aには、その中央部から径方向へ伸びて最端部近傍までわたる矩形状の収容開口1Dが形成され、第一面1Aに対向する第二面1Bには、その中央部から、収容開口1Dが伸びる径方向と逆方向の径方向へ伸びて最端部近傍までわたる矩形状の収容開口1Eが形成される。
そして、第一面1Aに形成された収容開口1Dには、長手方向の前後位置に通孔8A,8Bを形成したスライドガイド体8が収容される。
同様に、第二面1Bに形成された収容開口1Eには、長手方向の前後位置に通孔9A,9Bを形成したスライドガイド体9が収容される。
さらに、閉止用スライド体13A、第一通液口11を備えた通液用スライド体10A、閉止用スライド体13Bは、スライドガイド体8により、スライド可能に支持される。また、閉止用スライド体14A、第二通液口12を備えた通液用スライド体10B、閉止用スライド体14Bは、スライドガイド体9により、スライド可能に支持される。
As shown in the exploded perspective view of FIG. 9B and the perspective views of FIGS. 10A and 10B, the
The
Similarly, the
Further, the
よって、第一通液口11を備えた通液用スライド体10Aをスライドガイド体8に沿ってスライドさせることにより第一通液口11を移動させることができるとともに、第二通液口12を備えた通液用スライド体10Bをスライドガイド体9に沿ってスライドさせることにより第二通液口12を移動させることができる。
Therefore, the first
このように通液用スライド体10A,10Bをスライド可能に支持して第一通液口11,第二通液口12を移動させる機構が、スライド移動式の切り換え機構A2,B2を構成する。
なお、図10(a)で示すように、通孔8Bを閉止用スライド体13Bで塞ぎながら、通液用スライド体10Aを移動させて第一通液口11を通孔8Aに連通し、通孔9Bを閉止用スライド体14Bで塞ぎながら、スライド体10Bを移動させて第二通液口12を通孔9Aに連通することで、デッドエンドフロー方式を実現する。さらに、図10(b)で示すように、通孔8Aは閉止用スライド体13Aで塞ぎながら、スライド体10Aを移動させて第一通液口11を通孔8Bに連通し、通孔9Aは閉止用スライド体14Aで塞ぎながら、スライド体10Bを移動させて第二通液口12を通孔9Bに連通することで、クロスフロー方式を実現する。従って、スライド移動式の切り替え機構A2,B2により容易にフロー方式を切り換えることができる。
なお、図9(a)の斜視図、図9(b)の分解斜視図、並びに図9(c)の部分縦断面分解斜視図、並びに図10(a)及び(b)の縦断面正面図における細胞分離フィルターSFでは、前記の円筒状の第一通液口11及び第二通液口12には、上述したコネクタ40、40aを設けてもよい。
The mechanism for slidably supporting the
As shown in FIG. 10A, while closing the through
The perspective view of FIG. 9A, the exploded perspective view of FIG. 9B, the partial vertical sectional sectional perspective view of FIG. 9C, and the vertical sectional front view of FIGS. 10A and 10B. In the cell separation filter SF in the above, the above-mentioned
(実施の形態4)
図11(a)及び(b)の縦断面正面図における本発明の実施の形態4に係る細胞分離フィルターにおいて、実施の形態3と同一の符号は同一又は相当部分を示しているので、共通する部分の説明は省略する。
(Embodiment 4)
In the cell separation filter according to the fourth embodiment of the present invention in the vertical sectional front view of FIGS. 11A and 11B, the same reference numerals as those of the third embodiment indicate the same or corresponding parts, and thus are common. The description of the part is omitted.
図11(a)及び(b)の縦断面正面図に示すように、スライドガイド体8の通孔8A,8Bは、それぞれ管路6A,管路7Aと連通し、スライドガイド体9の通孔9A,9Bは、それぞれ管路6B,管路7Bと連通する。
実施の形態4における第一通液口11、第二通液口12を移動させる機構は、実施の形態3と同様のスライド移動式の切り換え機構A2,B2であり、図11(a)のような供給液の流れの方向が前記ろ材による濾過方向と同じであるデッドエンドフロー方式、図11(b)のような供給液の流れの方向が前記ろ材による濾過方向と直交するクロスフロー方式に容易に切り換えることができる。
なお、図11(a)及び図11(b)の縦断面正面図における細胞分離フィルターSFでは、前記の円筒状の第一通液口11及び第二通液口12には、上述したコネクタ40、40aを設けてもよい。
As shown in the vertical cross-sectional front view of FIGS. 11A and 11B, the through
The mechanism for moving the first
In the cell separation filter SF in the vertical sectional front view of FIGS. 11 (a) and 11 (b), the above-mentioned
(実施の形態5)
図12(a)の斜視図、図12(b)の部分縦断面分解斜視図、並びに図12(c)及び(d)の縦断面斜視図、並びに図13(a)及び(b)の縦断面正面図における本発明の実施の形態5に係る細胞分離フィルターにおいて、実施の形態3と同一の符号は同一又は相当部分を示しているので、共通する部分の説明は省略する。
(Embodiment 5)
A perspective view of FIG. 12 (a), a partial vertical cross-sectional exploded perspective view of FIG. 12 (b), a vertical sectional perspective of FIGS. 12 (c) and 12 (d), and a vertical section of FIGS. 13 (a) and 13 (b). In the cell separation filter according to the fifth embodiment of the present invention in the front view, the same reference numerals as those of the third embodiment indicate the same or corresponding parts, and thus the description of the common parts will be omitted.
本実施の形態における第一通液口11を備えた通液用スライド体10Aは、実施の形態4で示されている通孔8A,8Bを塞ぐ閉止用スライド体も兼ねるように、実施の形態3で示されている通液用スライド体10Aよりも長い矩形状をしており、ガイド溝1Fに係合した状態で径方向へスライド可能に支持され、第一面1Aの中央部から径方向へ伸びる長穴1Hを通って外方へ、第一通液口11が突出する。
また、同様に、本実施の形態における第二通液口12を備えた通液用スライド体10Bは、実施の形態4で示されている通孔9A,9Bを塞ぐ閉止用スライド体も兼ねるように、実施の形態3で示されている通液用スライド体10Bよりも長い矩形状をしており、ガイド溝1Gに係合した状態で径方向へスライド可能に支持され、第二面1Bの中央部から長穴1Hが伸びる径方向と逆方向の径方向へ伸びる長穴1Iを通って外方へ、第二通液口12が突出する。
The liquid
Similarly, the liquid
実施の形態5における第一通液口11、第二通液口12を移動させる機構は、実施の形態3及び4と同様のスライド移動式の切り換え機構A2,B2であるが、実施の形態5では、第一通液口11が長穴1H内を移動できる範囲内で第一通液口11の配置を連続的に変えることができるとともに、第二通液口12が長穴1I内を移動できる範囲内で第二通液口12の配置を連続的に変えることができる。
なお、図12(a)の斜視図、図12(b)の分解斜視図、並びに図12(c)及び(d)の部分縦断面分解斜視図、並びに図13(a)及び(b)の縦断面正面図における細胞分離フィルターSFでは、前記の円筒状の第一通液口11及び第二通液口12には、上述したコネクタ40、40aを設けてもよい。
The mechanism for moving the first
A perspective view of FIG. 12 (a), an exploded perspective view of FIG. 12 (b), a partial longitudinal sectional exploded perspective view of FIGS. 12 (c) and 12 (d), and FIGS. 13 (a) and 13 (b). In the cell separation filter SF in the front view of the vertical cross section, the above-mentioned
(実施の形態6)
図14(a)の斜視図、図14(b)の分解斜視図、並びに図14(c)及び(d)の縦断面斜視図における本発明の実施の形態6に係る細胞分離フィルターにおいて、実施の形態1と同一の符号は同一又は相当部分を示しているので、共通する部分の説明は省略する。
(Embodiment 6)
The cell separation filter according to the sixth embodiment of the present invention in the perspective view of FIG. 14 (a), the exploded perspective view of FIG. 14 (b), and the vertical sectional perspective view of FIGS. 14 (c) and 14 (d). Since the same reference numerals as those in
図14(b)の分解斜視図、並びに図14(c)及び(d)の縦断面斜視図に示すように、容器1の第一面1Aには、その中心位置に着脱穴17Aが、中心から径方向へ離間した最端部近傍位置に着脱穴18Aが形成され、容器1の第二面1Bには、その中心位置に着脱穴17Bが、着脱穴18Aの中心から径方向への離間方向と逆方向である、中心から径方向へ離間した最端部近傍位置に着脱穴18Bが形成される。
前記着脱穴17A、17B、18A、18Bは、通液口となる。
そして、第一面1Aに形成された着脱穴17A及び18Aは、通液用着脱体15Aであるコネクタ40および閉止用着脱体16Aであるキャップ52の一方がそれぞれ取り付けられ、第二面1Bに形成された着脱穴17B及び18Bには、通液用着脱体15Bであるコネクタ40および閉止用着脱体16Bであるキャップ52の一方がそれぞれ取り付けられる。
As shown in the exploded perspective view of FIG. 14 (b) and the vertical sectional perspective views of FIGS. 14 (c) and 14 (d), the attachment /
The attachment / detachment holes 17A, 17B, 18A, 18B serve as liquid passage ports.
The attachment /
このように、着脱穴17A,18A、並びにコネクタ40(15A)及びキャップ52(16A)からなる、着脱穴17A,18Aに対してコネクタ40及びキャップ52を付け替える機構が、着脱移動式の切り換え機構A3を構成する。
また、着脱穴17B,18B、並びにコネクタ40(15B)及びキャップ52(16B)からなる、着脱穴17B,18Bに対してコネクタ40及びキャップ52を付け替える機構が、着脱移動式の切り換え機構B3を構成する。
このような切り換え機構A3,B3によれば、図14(c)で示すように、着脱穴17A、着脱穴17Bに、それぞれコネクタ40を接続することでデッドエンドフロー方式を実現することができる。さらに、図14(d)で示すように着脱穴18A、着脱穴18Bに、それぞれコネクタ40を接続することでクロスフロー方式を実現できる。従って、着脱移動式の切り換え機構により容易にフロー方式を切り換えることができる。なお、コネクタ40を接続していない着脱穴には、キャップ52を接続する。
図14(a)、(b)、(c)及び(d)に示す細胞分離フィルターSFでは、前記の穴状の第一通液口11及び第二通液口12にはいずれも図1(a)に示すコネクタ40が装着されているが、前記第一通液口11及び第二通液口12を円筒状の通液口にしてもよく、この場合には図3(a)に示すコネクタ40aが装着される。
As described above, the mechanism for replacing the
Further, a mechanism for replacing the
According to such switching mechanisms A3 and B3, as shown in FIG. 14C, the dead end flow method can be realized by connecting the
In the cell separation filter SF shown in FIGS. 14 (a), (b), (c) and (d), the hole-shaped first
(実施の形態7)
図15(a)の斜視図、図15(b)の分解斜視図、並びに図15(c)及び(d)の縦断面斜視図における本発明の実施の形態7に係る細胞分離フィルターにおいて、実施の形態6と同一の符号は同一又は相当部分を示しているので、共通する部分の説明は省略する。なお、管路6A,6B,7A,7Bは、実施の形態2の図8、及び実施の形態4の図11と同様である。
(Embodiment 7)
The cell separation filter according to the seventh embodiment of the present invention in the perspective view of FIG. 15 (a), the exploded perspective view of FIG. 15 (b), and the vertical sectional perspective views of FIGS. 15 (c) and 15 (d). Since the same reference numerals as those of Form 6 indicate the same or corresponding parts, the description of the common parts will be omitted. The
実施の形態7におけるフロー方式の切り替え機構は、実施の形態6と同様の着脱移動式の切り換え機構A3,B3である。
このような切り換え機構A3,B3によれば、図15(c)で示すように、着脱穴17A、着脱穴17Bに、それぞれコネクタ40を接続することでデッドエンドフロー方式を実現することができる。さらに、図15(d)で示すように着脱穴18A、着脱穴18Bに、それぞれコネクタ40を接続することでクロスフロー方式を実現できる。従って、着脱移動式の切り換え機構により容易にフロー方式を切り換えることができる。なお、コネクタ40を接続していない着脱穴には、キャップ52を接続する。
ここで、図15(c)の状態では、第一面1Aの中心位置の管路6Aに第一通液口11が連通するとともに、第二面1Bの中心位置の管路6Bに第二通液口12が連通する。
また、図15(d)の状態では、第一面1Aの最端部近傍位置の管路7Aに第一通液口11が連通するとともに、第二面1Bの最端部近傍位置の管路7Bに第二通液口12が連通する。
図15(a)、(b)、(c)及び(d)に示す細胞分離フィルターSFでは、前記の穴状の第一通液口11及び第二通液口12にはいずれも図1(a)に示すコネクタ40が装着されているが、前記第一通液口11及び第二通液口12を円筒状の通液口にしてもよく、この場合には図3(a)に示すコネクタ40aが装着される。
The flow-type switching mechanism in the seventh embodiment is the same detachable and movable switching mechanism A3 and B3 as in the sixth embodiment.
According to such switching mechanisms A3 and B3, as shown in FIG. 15C, the dead end flow method can be realized by connecting the
Here, in the state of FIG. 15C, the first
Further, in the state of FIG. 15 (d), the first
In the cell separation filter SF shown in FIGS. 15 (a), 15 (b), (c) and (d), the hole-shaped first
(実施の形態8)
図16(a)の斜視図、図16(b)の分解斜視図、並びに図16(c)及び(d)の縦断面斜視図における本発明の実施の形態8に係る細胞分離フィルターにおいて、実施の形態6と同一の符号は同一又は相当部分を示しているので、共通する部分の説明は省略する。
本実施の形態は、実施の形態6における第一面1Aに形成された着脱穴18A、及び第二面に形成された着脱穴18Bを無くし、側面1Cの上部に着脱穴19Aを形成するとともに、第一面1A及び第二面1B中央の着脱穴17A,17Bの中心を通って第一面1A及び第二面1Bから等距離の点を基準にして、側面1Cにおける着脱穴19Aと点対称位置である、側面1Cの下部に着脱穴19Bを形成したものである。第一面1Aに形成された着脱穴17A及び側面1Cの上部の着脱穴19Aには、コネクタ40及びキャップ52の一方がそれぞれ取り付けられ、第二面1Bに形成された着脱穴17B及び18Bには、コネクタ40及びキャップ52の一方がそれぞれ取り付けられる。
(Embodiment 8)
The cell separation filter according to the eighth embodiment of the present invention in the perspective view of FIG. 16 (a), the exploded perspective view of FIG. 16 (b), and the vertical sectional perspective view of FIGS. 16 (c) and 16 (d). Since the same reference numerals as those of Form 6 indicate the same or corresponding parts, the description of the common parts will be omitted.
In the present embodiment, the attachment /
本実施の形態において、着脱穴17A,19Aに対してコネクタ40及びキャップ52を付け替える機構が、着脱移動式の切り換え機構A3を構成する。
また、着脱穴17B,19B、並びにコネクタ40及びキャップ52からなる、着脱穴17B,19Bに対してコネクタ40及びキャップ52を付け替える機構が、着脱移動式の切り換え機構B3を構成する。
このような切り換え機構A3,B3によれば、図16(c)で示すように、着脱穴17A、着脱穴17Bに、それぞれコネクタ40を接続することでデッドエンドフロー方式を実現することができる。さらに、図16(d)で示すように着脱穴19A、着脱穴19Bに、それぞれコネクタ40を接続することでクロスフロー方式を実現できる。従って、着脱移動式の切り換え機構により容易にフロー方式を切り換えることができる。
図16(a)、(b)、(c)及び(d)に示す細胞分離フィルターSFでは、前記の穴状の第一通液口11及び第二通液口12にはいずれも図1(a)に示すコネクタ40が装着されているが、前記第一通液口11及び第二通液口12を円筒状の通液口にしてもよく、この場合には図3(a)に示すコネクタ40aが装着される。
In the present embodiment, the mechanism for replacing the
Further, a mechanism for replacing the
According to such switching mechanisms A3 and B3, as shown in FIG. 16C, the dead end flow method can be realized by connecting the
In the cell separation filter SF shown in FIGS. 16 (a), 16 (b), (c) and (d), the hole-shaped first
<細胞濃縮液の製造方法>
本発明の細胞濃縮液の製造方法は、前記細胞分離フィルターの第一通液口11又は第二通液口12から細胞含有液を導入し、ろ材と接触させる接触工程、及び細胞分離フィルターSFの第一通液口11又は第二通液口12から細胞濃縮液を回収する回収工程、を有する。
<Manufacturing method of cell concentrate>
The method for producing a cell concentrate of the present invention includes a contact step of introducing a cell-containing solution from the
本発明における細胞含有液とは、末梢血、骨髄、臍帯血、月経血、組織抽出物等の有核細胞を含有する体液、あるいはこれらの体液を生理食塩液、カルシウムイオンやマグネシウムイオン等の2価カチオンを含むリンゲル液、細胞培養に使用するRPMI、MEM、IMEM、DMEM等の培地、PBS等のリン酸緩衝液で希釈したもの、あるいは体液から細胞を粗分離したものであっても構わない。また動物種も、哺乳動物であれば特に限定されず、例えばヒト、ウシ、マウス、ラット、ブタ、サル、イヌ、ネコ等が挙げられる。細胞含有液が抗凝固剤を含有する場合も、抗凝固剤の種類は限定されず、例えばヘパリン、低分子ヘパリン、フサン(メチル酸ナフォモスタット)、EDTA、ACD(acid-citrate-dextrose)液、CPD(citrate-phosphate-dextrose)液等のクエン酸抗凝固が挙げられる。使用する目的に影響がなければ、保存条件も限定されない。 The cell-containing fluid in the present invention is a body fluid containing nucleated cells such as peripheral blood, bone marrow, umbilical cord blood, menstrual blood, and tissue extract, or these body fluids are 2 such as physiological saline, calcium ion, and magnesium ion. It may be a Ringer solution containing a valent cation, a medium diluted with a medium such as RPMI, MEM, IMEM, DMEM used for cell culture, a phosphate buffer solution such as PBS, or a crudely separated cell from a body fluid. The animal species is not particularly limited as long as it is a mammal, and examples thereof include humans, cows, mice, rats, pigs, monkeys, dogs, and cats. When the cell-containing solution contains an anticoagulant, the type of anticoagulant is not limited, and for example, heparin, low molecular weight heparin, fusan (nafomostat methylate), EDTA, ACD (acid-citrate-dextrose) solution, etc. Examples thereof include citric acid anticoagulant such as CPD (citrate-phospate-dextrose) solution. The storage conditions are not limited as long as the purpose of use is not affected.
本発明における有核細胞とは、核を含有する細胞であれば特に限定されず、例えば、単核球、白血球、顆粒球、好中球、好酸球、好塩基球、赤芽球、骨髄芽球、前骨髄球、骨髄球、後骨髄球、リンパ球、単球、マクロファージ、Tリンパ球、Bリンパ球、NK細胞、NK/T細胞、樹状細胞、多核巨細胞、上皮細胞、内皮細胞、間葉系細胞、間葉系幹細胞、造血幹細胞、ES細胞、iPS細胞及び幹細胞等が挙げられる。
本発明における細胞濃縮液とは、有核細胞を含有する液体であって、前記細胞含有液と比較して液体中における有核細胞数が多い、又は細胞密度が高い液体をいう。なお、本発明における幹細胞とは、体液中から分離され、多分化能及び自己複製能を有する細胞をいう。
The nucleated cell in the present invention is not particularly limited as long as it is a cell containing a nucleus, and for example, monocytes, leukocytes, granulocytes, neutrophils, eosinophils, basal spheres, erythroblasts, and bone marrow Sprouts, anterior bone marrow cells, bone marrow cells, posterior bone marrow cells, lymphocytes, monocytes, macrophages, T lymphocytes, B lymphocytes, NK cells, NK / T cells, dendritic cells, polynuclear giant cells, epithelial cells, endothelium Examples thereof include cells, mesenchymal cells, mesenchymal stem cells, hematopoietic stem cells, ES cells, iPS cells and stem cells.
The cell concentrate in the present invention refers to a liquid containing nucleated cells, which has a larger number of nucleated cells or a higher cell density in the liquid than the cell-containing liquid. The stem cell in the present invention refers to a cell isolated from body fluid and having pluripotency and self-renewal ability.
本発明における間葉系幹細胞は、分化誘導因子の添加により骨芽細胞、軟骨細胞、血管内皮細胞、心筋細胞、あるいは、脂肪、歯周組織構成細胞であるセメント芽細胞、歯周靱帯繊維芽細胞等へ分化する細胞である。また、造血幹細胞は、白血球、リンパ球、好中球、好酸球、好塩基球、顆粒球、単球、マクロファージ、赤血球、血小板、巨核球、樹状細胞等の血球系細胞を分化する細胞である。 The mesenchymal stem cells in the present invention include osteoblasts, chondrocytes, vascular endothelial cells, myocardial cells, cementoblasts which are fat and periodontal tissue constituent cells, and periodontal ligament fibroblasts by adding a differentiation-inducing factor. It is a cell that differentiates into. Hematopoietic stem cells are cells that differentiate hematopoietic cells such as leukocytes, lymphocytes, neutrophils, eosinophils, basophils, granulocytes, monocytes, macrophages, erythrocytes, platelets, megakaryocytes, and dendritic cells. Is.
本発明における細胞分離フィルターから細胞濃縮液を回収する工程は、フィルターを通過して得られる有核細胞を多く含有する液体を回収する工程であり、細胞分離フィルターの性質に応じて、細胞濃縮液を回収できればよい。 The step of recovering the cell concentrate from the cell separation filter in the present invention is a step of recovering a liquid containing a large amount of nucleated cells obtained through the filter, and the cell concentrate depends on the properties of the cell separation filter. It is only necessary to be able to collect.
フィルター内に充填されたろ材が、除去目的とする細胞や夾雑物と親和性を持つ場合は、フィルターの流入口から細胞含有液を導入し、ろ材と細胞含有液を接触させる接触工程の後、流出口から細胞濃縮液を回収することができる。フィルターの流出口から細胞濃縮液を回収する際に、回収液をフィルターの流入口から導入して細胞濃縮液を流出口から回収することが好ましい。除去目的の細胞としては、例えば顆粒球、単球、血小板、Bリンパ球、特定のサブクラスを有するリンパ球等が挙げられる。具体的には、顆粒球をフィルターに捕捉して除去し、単核球含有分画を回収する方法が挙げられる。 If the filter medium filled in the filter has an affinity for cells and impurities to be removed, the cell-containing solution is introduced from the inflow port of the filter, and after the contact step of bringing the filter medium into contact with the cell-containing solution, after the contact step. The cell concentrate can be recovered from the outlet. When recovering the cell concentrate from the outlet of the filter, it is preferable to introduce the recovered solution from the inlet of the filter and collect the cell concentrate from the outlet. Examples of cells to be removed include granulocytes, monocytes, platelets, B lymphocytes, lymphocytes having a specific subclass, and the like. Specific examples thereof include a method in which granulocytes are captured by a filter and removed to recover a mononuclear cell-containing fraction.
フィルター内に充填されたろ材が、回収目的とする有核細胞と親和性を持つ場合は、フィルターの流入口から細胞含有液を導入して、除去目的とする細胞や夾雑物を流出口より流出させた後、流入口から細胞濃縮液を回収することができる。フィルターの流入口から細胞濃縮液を回収する際に、回収液をフィルターの流出口から導入し細胞濃縮液を流入口から回収することが好ましい。除去目的の細胞としては、例えば赤血球、Tリンパ球、特定のサブクラスを有するリンパ球等が挙げられる。具体的には、不要な細胞を通過させ、フィルターに捕捉された幹細胞を回収する方法が挙げられる。 If the filter medium filled in the filter has an affinity for nucleated cells for recovery, introduce the cell-containing solution from the inlet of the filter and let out the cells and impurities for removal from the outlet. After that, the cell concentrate can be recovered from the inflow port. When collecting the cell concentrate from the inlet of the filter, it is preferable to introduce the recovered solution from the outlet of the filter and collect the cell concentrate from the inlet. Examples of cells for removal include erythrocytes, T lymphocytes, lymphocytes having a specific subclass, and the like. Specific examples thereof include a method of passing unnecessary cells and collecting stem cells captured by a filter.
また、回収液をフィルターの流出口から導入して細胞濃縮液を回収する場合には、回収の前に、洗浄液をフィルターの流入口から導入することで、より効率的に、除去目的とする細胞や夾雑物を流出口より流出させることができる。洗浄液は除去目的とする細胞や夾雑物のみを洗い流すことができれば特に限定されず、例えば生理食塩水、リンゲル液、細胞培養に用いる培地、リン酸緩衝液等の一般的な緩衝液、あるいはこれら溶液に血清やタンパク質を添加した溶液が挙げられる。 In addition, when the recovered solution is introduced from the outlet of the filter to recover the cell concentrate, the cells to be removed are more efficiently introduced by introducing the washing solution from the inlet of the filter before the recovery. And impurities can be discharged from the outlet. The washing solution is not particularly limited as long as it can wash away only the cells and impurities to be removed, and may be, for example, physiological saline, Ringer's solution, medium used for cell culture, general buffer such as phosphate buffer, or these solutions. Examples include solutions containing serum or protein.
回収液は、フィルター内に捕捉された有核細胞、あるいはフィルター内に残留する単核球を回収する目的で好適に使用される。回収液は特に限定されず、例えば生理食塩水の他、マグネシクムイオンやカルシウムイオン等の2価カチオン、糖類、血清、蛋白質を含む液体、緩衝液、培地、血漿やそれらを含む液体等が挙げられる。フィルターに捕捉された有核細胞の回収率を上げるために、回収液の粘張度を上げても良い。粘張度を上げるために回収液に添加する物質は特に限定されず、例えばアルブミン、フィブリノーゲン、グロブリン、デキストラン、ヒドロキシエチルスターチ、ヒドロキシルセルロース、コラーゲン、ヒアルロン酸、ゼラチン等が挙げられる。 The recovery solution is preferably used for the purpose of recovering nucleated cells trapped in the filter or mononuclear cells remaining in the filter. The recovered liquid is not particularly limited, and examples thereof include physiological saline, divalent cations such as magnesium ion and calcium ion, saccharides, serum, liquid containing protein, buffer solution, medium, plasma and liquid containing them. Be done. In order to increase the recovery rate of nucleated cells captured by the filter, the tonicity of the recovery solution may be increased. The substance added to the recovery liquid in order to increase the viscousity is not particularly limited, and examples thereof include albumin, fibrinogen, globulin, dextran, hydroxyethyl starch, hydroxyl cellulose, collagen, hyaluronic acid, gelatin and the like.
細胞含有液及び回収液を通液する速度及びその方法は特に制限されず、例えば重力を利用して通液する方法、ローラークレンメやシリンジポンプを用いて流速を一定にしながら通液する方法、高い圧力をかけて一気に通液する方法等が挙げられる。フィルター内に捕捉された有核細胞を回収する目的には、有核細胞回収効率の点から、回収液を高い圧力をかけて一気に通液する方法が好ましい。シリンジを用いて手動もしくは、ポンプを用いて90mL/min以上での流速で通液する方法が、より多くの有核細胞を回収することができる点で好ましい。 The speed and method of passing the cell-containing liquid and the recovered liquid are not particularly limited, and for example, a method of passing liquid using gravity, a method of passing liquid while keeping the flow velocity constant using a roller clamp or a syringe pump, and a high method. Examples include a method of applying pressure to pass the liquid at once. For the purpose of recovering the nucleated cells captured in the filter, a method of passing the recovered solution at once by applying a high pressure is preferable from the viewpoint of the nucleated cell recovery efficiency. A method of manually passing the liquid using a syringe or using a pump at a flow rate of 90 mL / min or more is preferable in that more nucleated cells can be collected.
本発明の細胞分離フィルターを用いて閉鎖的に細胞を分離する回路の例を図6に示す。
図6に記載の回路は、細胞含有液を収容する容器20は通液口を備え、通液可能な配管28を通して三方活栓25に接続されている。同様に、プライミング用の液体を収容する容器21も通液口を備え、通液可能な配管29を通して三方活栓25と接続している。三方活栓25と三方活栓26は通液可能な配管30で接続されている。細胞濃縮液を収容する容器22は通液口を備え、通液可能な配管31を通して三方活栓26と接続している。本発明の細胞分離フィルターについては、流入口が三方活栓27と、流出口が三方活栓26と接続している。細胞回収液を収納する容器23は通液口を備え、通液可能な配管32を通して三方活栓27と接続している。同様に、細胞分離フィルターSFを通過したプライミング用の液体および細胞含有液を収容する容器24は通液口を備え、通液可能な配管33を通して、三方活栓27と接続している。
FIG. 6 shows an example of a circuit for closedly separating cells using the cell separation filter of the present invention.
In the circuit shown in FIG. 6, the
図6に記載の回路を用いた具体的な細胞濃縮液の製造手順は次の通りである。
まず初めに、細胞分離フィルター内のエアーを除去する目的、細胞捕捉効率を向上する目的、及び血液流路を確保する目的でプライミングを行う為に、容器21に収納されているプライミング用の液体を、細胞分離フィルターを通過させて、容器24へと流す。この時、三方活栓25は配管29と配管30を導通し、配管28への流れを遮断している。三方活栓26は配管30と細胞分離フィルターを導通し、配管31への流れを遮断している。さらに三方活栓27は、細胞分離フィルターと配管33を導通し、配管32への流れを遮断している。
The specific procedure for producing a cell concentrate using the circuit shown in FIG. 6 is as follows.
First of all, in order to perform priming for the purpose of removing air in the cell separation filter, improving the cell capture efficiency, and securing the blood flow path, the priming liquid stored in the
次に、細胞含有液を細胞分離フィルター内のろ材に接触させるために、容器20に収容されている細胞含有液を、細胞分離フィルターに通過させて、容器24へと流す。この時、三方活栓25は配管28と配管30を導通し、配管29への流れを遮断している。三方活栓26は配管30と細胞分離フィルターを導通し、配管31への流れを遮断している。さらに三方活栓27は、細胞分離フィルターと配管33を導通し、配管32への流れを遮断している。
Next, in order to bring the cell-containing liquid into contact with the filter medium in the cell separation filter, the cell-containing liquid contained in the
最後に、細胞濃縮液を回収するために、容器23に収容されている細胞回収液を細胞分離フィルターに通過させて、容器22へと流す。この時、三方活栓27は細胞分離フィルターと配管32を導通し、配管33への流れを遮断している。さらに三方活栓26は、細胞分離フィルターと配管31を導通し、配管30への流れを遮断している。
回路は、液の流れを制御するために、三方活栓、ローラークレンメ、クランプ等を備えていることが好ましい。
Finally, in order to collect the cell concentrate, the cell recovery solution contained in the
The circuit preferably includes a three-way stopcock, roller clamp, clamp, etc. to control the flow of liquid.
細胞分離フィルターに細胞含有液を導入しろ材と接触させる接触工程を、細胞分離フィルターの切り換え機構によりクロスフロー方式にした状態で行うことにより、細胞含有液の流れが、ろ材表面への粒子の堆積や目詰まりによる流動抵抗の上昇を緩やかにし、ろ材の全面を使って大量の細胞含有液を濾過できる。
また、前記接触工程の後に行う細胞濃縮液を回収する回収工程を、細胞分離フィルターの切り換え機構によりデッドエンドフロー方式にした状態で行うことにより、回収液の流れの方向がろ材による濾過方向と同じであるため細胞回収率を向上できる。
By performing the contact step of introducing the cell-containing liquid into the cell separation filter and bringing it into contact with the filter medium in a cross-flow system by the switching mechanism of the cell separation filter, the flow of the cell-containing liquid causes the deposition of particles on the surface of the filter medium. The increase in flow resistance due to clogging can be moderated, and a large amount of cell-containing liquid can be filtered using the entire surface of the filter medium.
Further, by performing the recovery step of recovering the cell concentrate after the contact step in a state of using the dead end flow method by the switching mechanism of the cell separation filter, the flow direction of the recovery liquid is the same as the filtration direction by the filter medium. Therefore, the cell recovery rate can be improved.
A1,B1 回転移動式の切り換え機構
A2,B2 スライド移動式の切り換え機構
A3,B3 着脱移動式の切り換え機構
S 収容空間
SF 細胞分離フィルター
1 容器
1A 第一面
1B 第二面
1C 側面
1D,1E 収容開口
1F,1G ガイド溝
1H,1I 長穴
2,3 回転体
2A,3A ガイド溝
2B,3B 支軸
4A,4B ガイド穴
5A,5B 支持孔
6A,6B,7A,7B 管路
8,9 スライドガイド体
8A,8B,9A,9B 通孔
10A,10B 通液用スライド体
11 第一通液口
12 第二通液口
13A,13B,14A,14B 閉止用スライド体
15A,15B 通液用着脱体
16A,16B 閉止用着脱体
17A,17B,18A,18B,19A,19B 着脱穴
20 細胞含有液を収容する容器
21 プライミング用の液体を収容する容器
22 細胞濃縮液を収容する容器
23 細胞回収液を収容する容器
24 細胞分離フィルターを通過したプライミング用の液体および細胞含有液を収容する容器
25,26,27 三方活栓
28 20と25に接続している通液可能な配管
29 21と25に接続している通液可能な配管
30 25と26に接続している通液可能な配管
31 23と27に接続している通液可能な配管
32 24と27に接続している通液可能な配管
40,40a コネクタ
41 通液口接続部
42 基部
43 配管
44 配管接続部
44a 上部
44b 下部
45 回転部
46 配管接続体
47 ねじ溝
48 ねじ山
49 円筒
50,50a 凹部
51,51a 凸部
52 キャップ
53 シール
SE 細胞分離機器
LO 通液口部
A1, B1 Rotational movement type switching mechanism A2, B2 Slide movement type switching mechanism A3, B3 Detachable movement type switching mechanism S Storage space SF
Claims (18)
前記通液口部と接続する通液口接続部を有する基部と、
配管が接続される配管接続部および前記配管接続部に対して回転自在な回転部を有する配管接続体と、を有することを特徴とするコネクタ。 It is a connector that is arranged on the outer surface of the cell separation device and is detachably configured at the liquid passage port where the arrangement can be moved.
A base having a liquid passage connecting portion to be connected to the liquid passing port, and
A connector characterized by having a pipe connection portion to which a pipe is connected and a pipe connection body having a rotating portion that is rotatable with respect to the pipe connection portion.
前記容器が切り換え機構を備え、前記切り換え機構が、前記第一通液口及び/又は前記第二通液口の配置を移動させることが可能に構成されている、請求項8に記載の細胞分離フィルター。 A cell separation filter provided with a container in which a first liquid passage port and a second liquid passage port are arranged, and a filter medium filled between the first liquid passage port and the second liquid passage port.
The cell separation according to claim 8, wherein the container includes a switching mechanism, and the switching mechanism is configured to be able to move the arrangement of the first liquid passage port and / or the second liquid passage port. filter.
The production method according to claim 17, wherein in the recovery step, a dead end flow method is adopted by the switching mechanism, and the cell concentrate is recovered from the first liquid passage port or the second liquid passage port of the cell separation filter.
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