JP6710850B1 - 液体サンプルからバイオマーカーを単離するための流体密封性フローシステム - Google Patents
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Abstract
Description
本願は、2017年4月20日付けで出願の米国特許仮出願第62/487,690号の利益およびそれへの優先権を主張する、2018年4月20日付けで出願の「FLUID−TIGHT FLOW SYSTEM TO ISOLATE BIOMARKERS FROM A LIQUID SAMPLE(液体サンプルからバイオマーカーを単離するための流体密封性フローシステム)」と題する特許協力条約出願第PCT/US2018/028611号の日本国内段階出願であり、該出願のそれぞれの内容は、参照によって全体が本明細書に組み込まれる。
本発明は概して、新規な流体密封性(fluid−tight)フローシステムと、リアルタイムフィードバック制御を用いた新規な流体密封性フローシステムに関する。
従来の液体取扱いシステムは、大量の液体を輸送し、かつ、大量の液体に対して影響を与えるために用いられる。例えば、液体取扱いシステムにおける容器(例えば、マイクロウェルプレートまたはバイアル)には、1つ以上の液体サンプルが提供されてもよい。液体取扱いシステムは、1つ以上のピペッターを含んでいてもよく、該1つ以上のピペッターは、容器からサンプルの一部を除去すること(例えば、吸引することによって)、および/または、容器中のサンプルに材料を追加すること(例えば、分配することによって)に用いられる。標準的なピペット操作(pipetting;ピペッティング)システムは、サンプルを分配または収集するのに一度に1つのピペットを用いるのみである。
ような別個のポンプシステムと一体化したフローサイトメーター(米国特許第7,858,040号明細書)のようなマクロスケールの流体システムの中へと直接注入して流体フローを制御するために、液体取扱い器具が用いられてもよい。マイクロ流体チップに関して、液体患者サンプルをマイクロ流体チップへと送達するのに、シリンジポンプまたは別個の圧力供給デバイスと併せてキャピラリーコネクターが典型的に用いられる(Elveflowマイクロ流体フロー制御システムにあるように)。
ように構成された複数の単離チャンネル、バイオマーカー細胞に結合するように構成された固体支持体、または、バイオマーカー細胞用のサイズに基づくセパレーターとして構成されたフィルター基板を有する。いくつかの実施形態では、フィルター基板はマイクロキャビティアレイである。いくつかの実施形態では、固体支持体は、ピラー、ビーズまたはレジンである。いくつかの実施形態では、複数の単離チャンネルは、循環性腫瘍細胞または循環性白血病細胞を単離するように構成されている。
ゼーションシークエンシングモジュールであり、該ハイブリダイゼーションシークエンシングモジュールは、ヌクレオチド配列をプローブに曝露し、かつ、ハイブリダイズされたプローブを検出するように構成されている。いくつかの実施形態では、診断モジュールは、単一分子もしくはヌクレオチドを検出または識別するように構成されている。いくつかの実施形態では、診断モジュールは、蛍光in situハイブリダイゼーション用に構成されている。いくつかの実施形態では、診断モジュールは、タンパク質結晶化または質量分析用に構成されている。
本発明が多くの異なる形態で具現化されてもよい一方で、本開示は本発明の原理の例を提供するものとして考慮されるべきであり、かつ、かかる例は本発明を、本明細書に記載され、かつ/または、本明細書で説明される好ましい実施形態に限定することを意図しないという理解のもと、本明細書には多数の説明的な実施形態が記載される。請求される主題はまた、その他の現在または将来の技術とともに、本書に記載のものと同様の異なるステップまたは要素を含むその他の方式で具現化されてもよい。さらに、用語「ステップ」は、本明細書では、採用される方法の異なる態様を含むものとして用いられてもよいが、該用語は、個別のステップの順番が明示的に記載されていなければ、本明細書で開示される種々のステップの間のいかなる特定の順番をもほのめかすものとして解釈されるべきではない。
端部317を有し、該ピペット先端部317は、出口ポート403に連結されている。一実施形態では、ピペット先端部316および317は、それぞれ入口ポート402および出口ポート403に同時に連結されている。一実施形態では、ピペット先端部316および317は、使い捨てピペット先端部である。2つの自動化されたピペット操作チャンネル312および313は、ピペット先端部316からであり、かつ、入口ポート402、捕捉床406(図2cに示されている)および出口ポート403を介してマイクロ流体チップ400を通る液体サンプルの流体フローを制御するように構成され、かつ、有効である。液体サンプルは、マイクロ流体チップを通って、第2の自動化されたピペット313のピペット先端部317またはサンプル容器(図示せず)の中へと流れてもよい。
(カバープレートは図示せず)。マイクロ流体チップ400は、入口ポート402と、給送チャンネル408と、捕捉床406と、出口チャンネル408と、出口ポート403を有し;捕捉床406は複数の単離チャンネルを有し、給送チャンネルは単離チャンネルと交差し、かつ、出口チャンネルは単離チャンネルと交差する。一実施形態では、捕捉床は複数の単離チャンネルを有し、該複数の単離チャンネルは、循環性腫瘍細胞、循環性白血病細胞、cfDNAまたはエキソソームを単離するように構成されている。
ーは、ピペット先端部が液体サンプルと接触したときに吸引または分配するように構成されている。本明細書に記載の流体密封性フローシステムは、マイクロ流体チップを通る液体サンプルのフローを制御するための同期されたポンプとしてのピペット操作チャンネルの使用を可能にし、該使用は、ピペット先端部と接触していない液体サンプルを吸引もしくは引き寄せ、または、ピペット先端部ともはや接触していない(すなわち、液体サンプルが完全にマイクロ流体チップの中に入ったとき)液体サンプルを分配もしくは押し出すためのピペット操作チャンネルの使用を含む。第3に、本明細書で開示されるシステムおよび方法は、マイクロ流体チップを通る流量を、低流量から極低流量に制御することを可能にし;したがって、希少バイオマーカー(例えば、DNA、RNA、エキソソーム)の捕捉および単離において利点を提供する。
からのズレが、ピペット先端部の機能に関連したエラー(例えば、血塊についての圧力閾値に基づく吸引の最中の先端部の詰まり、および、ピペット先端部における不十分な液体についての圧力閾値に基づくピペット先端部の中への液体サンプルの不完全な吸引)を検出し得る。
エンコードされてもよい。
なストレージ媒体のような有形媒体に具現化されたプログラムコード(すなわち、指令)の形態をとってもよく、プログラムコードが機械(例えば、コンピューター)にロードされ、かつ、該機械によって実行されるときには、該機械は、本明細書で開示される主題を実行するための装置になる。プログラマブルコンピューター上でのプログラムコード実行の場合、コンピューターは概して、プロセッサーと、プロセッサーによって読み取り可能なストレージ媒体(揮発性および不揮発性メモリーならびに/またはストレージ素子)と、少なくとも1つの入力デバイスと、少なくとも1つの出力デバイスを含むであろう。好ましくは、コンピューターシステムと通信するための高度に手続的またはオブジェクト指向のプログラミング言語において、1つ以上のプログラムが実装される。しかしながら、プログラムは、所望されれば、アセンブリーまたは機械言語において実装され得る。いずれの場合も、言語は、コンパイラ型言語またはインタープリタ型言語であってもよく、かつ、ハードウェア実装と組み合されてもよい。
Claims (15)
- 流体密封性フローシステムであって、当該流体密封性フローシステムは:
マイクロ流体チップを有し、該マイクロ流体チップは、出口ポートと流体連通した入口ポートを有し;
第1の自動化されたピペット操作チャンネルを有し、該第1の自動化されたピペット操作チャンネルは、第1のポンプと第1のピペット先端部を有し、該第1のピペット先端部は、液体サンプルを含有しており、かつ、前記入口ポートに連結されており;
第2の自動化されたピペット操作チャンネルを有し、該第2の自動化されたピペット操作チャンネルは、第2のポンプと第2のピペット先端部を有し、該第2のピペット先端部は、前記出口ポートに連結されており;かつ、
非一時的なコンピューター読取可能媒体を有し、該非一時的なコンピューター読取可能媒体は、前記の第1のポンプおよび前記の第2のポンプと連絡しており、かつ、前記の第1の自動化されたピペット操作チャンネルの前記の第1のポンプおよび前記の第2の自動化されたピペット操作チャンネルの前記の第2のポンプに、前記マイクロ流体チップを通る前記液体サンプルのフローを制御するように命令するようにプログラムされている、
前記流体密封性フローシステム。 - 前記の第1のポンプまたは前記の第2のポンプが、プランジャーと、ピペット操作駆動モーターを有する、請求項1に記載の流体密封性フローシステム。
- 前記の第1のポンプまたは前記の第2のポンプが、前記の第1のピペット先端部内に含有されたピストンと、ピペット操作駆動モーターを有する、請求項1に記載の流体密封性フローシステム。
- 当該システムがさらに、閉ループフィードバック制御を有し:
前記の第1の自動化されたピペット操作チャンネルがさらに、第1の圧力センサーを有し;
前記の第2の自動化されたピペット操作チャンネルがさらに、第2の圧力センサーを有し;かつ、
前記の非一時的なコンピューター読取可能媒体がさらに、前記の第1の圧力センサーおよび第2の圧力センサーと連絡しており;前記の非一時的なコンピューター読取可能媒体がさらに、リアルタイムで前記の第1の圧力センサーからデータを受け取り、かつ、リアルタイムで前記の第2の圧力センサーからデータを受け取り、かつ、少なくとも前記の第1のピペット操作チャンネルの前記の第1のポンプまたは前記の第2のピペット操作チャンネルの前記の第2のポンプの命令を調整して、前記の第1の圧力センサーおよび前記の第2の圧力センサーからの前記データに基づくリアルタイムフィードバックを用いて前記マイクロ流体チップを通るフローを調整するようにプログラムされている、
請求項1に記載の流体密封性フローシステム。 - 前記の第1の圧力センサーおよび前記の第2の圧力センサーからの前記データに基づく前記リアルタイムフィードバックが、圧力閾値もしくは流量閾値における検出、圧力閾値もしくは流量閾値より上の検出、または、圧力閾値もしくは流量閾値より下の検出を有する、請求項4に記載の流体密封性フローシステム。
- 前記液体サンプルが体液である、請求項1に記載の流体密封性フローシステム。
- 前記体液が、血液、唾液、リンパ液、流体に懸濁された細胞、滑液、精液、尿、脳脊髄液または羊水である、請求項6に記載の流体密封性フローシステム。
- 前記マイクロ流体チップがさらに、前記入口および前記出口ポートと流体連通した、細胞選別モジュール、血漿単離モジュールまたは固相抽出モジュールを有する、請求項1に記載の流体密封性フローシステム。
- 前記マイクロ流体チップが細胞選別モジュールを有し、かつ、前記細胞選別モジュールが、前記入口ポートおよび前記出口ポートと流体連通した捕捉床を有する、請求項8に記載の流体密封性フローシステム。
- 前記捕捉床が、前記液体サンプルからバイオマーカー細胞を単離するように構成された複数の単離チャンネル、バイオマーカー細胞に結合するように構成された固体支持体、または、バイオマーカー細胞用のサイズに基づくセパレーターとして構成されたフィルター基板を有する、請求項9に記載の流体密封性フローシステム。
- 前記フィルター基板がマイクロキャビティアレイである、請求項10に記載の流体密封性フローシステム。
- 前記固体支持体が、ピラー、ビーズまたはレジンである、請求項10に記載の流体密封性フローシステム。
- 前記の複数の単離チャンネルが、循環性腫瘍細胞または循環性白血病細胞を単離するように構成されている、請求項10に記載の流体密封性フローシステム。
- 液体サンプルからバイオマーカー細胞を単離する方法であって、当該方法は:
請求項10に記載のシステムを提供することを有し、前記の第1の自動化されたピペット操作チャンネルの前記の第1のポンプおよび前記の第2の自動化されたピペット操作チャンネルの前記の第2のポンプに前記マイクロ流体チップを通る前記液体サンプルのフローを制御するように命令するようにプログラムされた前記の非一時的なコンピューター読取可能媒体が、前記細胞選別モジュールを通る前記液体サンプルのフローを制御するプログラミングを有し;
前記細胞選別モジュールを通る前記液体サンプルのフローを制御することを有し;かつ、
前記液体サンプルからバイオマーカー細胞を単離することを有する、
前記方法。 - 前記バイオマーカー細胞が循環性腫瘍細胞である、請求項14に記載の方法。
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