JP6688790B2 - リンカー及びａｄｃへのその応用 - Google Patents

Description

本発明は、細胞傷害性薬剤と抗体とを結合する、従来または新型のリソソーム酵素によって溶解できるペプチド構造単位によって置換されるアミドを含むリンカーに関する。本発明は、またこれらのアミノ置換リンカーの誘導体ＡＤＣ（抗体−薬物複合体）が、癌の治療における応用を開示する。

抗体−薬物複合体（ＡＤＣ）は、標的特異性として期待でき、また有効にある疾患、例えば、細菌性感染症及び癌を治療することができ、同時に薬物の有毒な副作用を低下させることができる。

標的特異性抗体と細胞傷害性化合物とを結合する概念は、非常に単純で優れている。周知のように、抗体は、特定の方法により抗原を認識することができるが、免疫応答の細胞殺傷活性は、しばしば十分ではなく、それの治療の潜在的な能力が制限されている。一方、細胞傷害性化合物は、癌の治療に広く用いられているが、関連する非特異性の全身有害事象によって、それらの化合物の高用量使用が妨げられていて、使用効果が低下させられる。そこで、抗体と細胞傷害性化合物との組み合わせは、抗体薬物の治療効果を増強させ、細胞傷害性薬剤の有毒な副作用を低下させることで、抗体の標的特異性の送達、及び正常な組織の薬物曝露を最少化させることにつながる。

抗体−薬物複合体（ＡＤＣ）の成功の一つの鍵は、血液循環中に一定の安定性を有するが、標的細胞に到着した後は、切断された細胞傷害性化合物を急速に放出するリンカーの特定化である。アドセトリス（Ａｄｃｅｒｔｒｉｓ、悪性リンパ腫治療剤）は、証明された成功した例であり、そのリンカーにはリソソームの酵素により切断可能なペプチド成分を組み込んでいる。標的細胞に入った後、リンカーのＣ−末端のアミド結合がリソソーム酵素によって、容易に切断されるのは、必須な薬物放出メカニズムである。一方、リンカー上の他のアミド結合が早期に切断されると、望ましくない副作用を引き起こす可能性がある（式Ｂ−１）。

本出願は、アミド置換物で、リソソーム酵素により容易に切断可能なペプチドのＮ末端のアミド結合を置換することを開示する（式Ｂ−２）。このような修飾を行うことで、血液循環体系でのＡＤＣの安定性を、更に改善することができる。

本発明の目的は、式（Ｉ）に示される薬物を抗体に結合させるためのリンカーを提供することであり、

ここで、
Ｒは、ＣＦ_２Ｈ、ＣＦ_３、ＣＦ_２ＣＦ_３、ＰｈＳＯ_２Ｍｅから選ばれ、
Ｑは、

から選ばれ、
Ｌ^１は、−（ＣＲ^１Ｒ^２）_ｍ−（ＣＲ^３Ｒ^４）−（ＣＲ^１Ｒ^２）_ｎ−、−（ＣＲ^１Ｒ^２）_ｍ−（ＣＲ^３Ｒ^４）−Ｏ−（ＣＲ^１Ｒ^２）_ｎ−及び−[（ＣＲ^１Ｒ^２）（ＣＲ^１Ｒ^２）×]_ｐ−（ＣＲ^１Ｒ^２）_ｑ−から選ばれ、
ｍは、１、２、３または４であり、
ｎは、１、２、３または４であり、
ｐは、１、２、３、４、５または６であり、
ｑは、１または２であり、
Ｒ^１は、Ｈ、または任意に選んだ１〜３個のハロゲン、ＯＨ、ＮＨ_２、ＮＨＭｅまたはＮＭｅ_２で置換されたＣ_１−３アルキル基から選ばれ、
Ｒ^２は、Ｈ、または任意に選んだ１〜３個のハロゲン、ＯＨ、ＮＨ２、ＮＨＭｅまたはＮＭｅ_２で置換されたＣ１−３アルキル基から選ばれ、
Ｒ^３は、Ｈ、または任意に選んだ１〜３個のハロゲン、ＯＨ、ＮＨ_２、ＮＨＭｅまたはＮＭｅ_２で置換されたＣ_１−３アルキル基から選ばれ、
Ｒ^４は、Ｈ、ＯＨ、ＮＲ^５Ｒ^６、ＣＯ_２Ｈ、Ｐ（Ｏ）（ＯＨ）_２、ＳＯ_３Ｈ、または任意に選んだ１〜３個のハロゲン、ＯＨ、ＮＨ_２、ＮＨＭｅまたはＮＭｅ_２で置換されたＣ_１−３アルキル基Ｃ_１−３アルキル基から選ばれ、
Ｒ^５は、Ｈ、または任意に選んだ１〜３個のハロゲン、ＯＨ、ＮＨ_２、ＮＨＭｅまたはＮＭｅ_２で置換されたＣ_１−３アルキル基から選ばれ、
Ｒ^６は、Ｈ、または任意に選んだ１〜３個のハロゲン、ＯＨ、ＮＨ_２、ＮＨＭｅまたはＮＭｅ_２で置換されたＣ_１−３アルキル基から選ばれ、
Ｘは、ＮＲ^７、Ｏ、及びＳ（Ｏ）_ｒから選ばれ、
ｒは、０、１または２であり、
Ｒ^７は、Ｈ、または任意に選んだ１〜３個のハロゲン、ＯＨ、ＮＨ_２、ＮＨＭｅまたはＮＭｅ_２で置換されたＣ_１−３アルキル基から選ばれ、
Ｌ^２は、ジペプチド構造単位であり、

から選ばれ、
Ｒ^８は、メチル基、プロピル基、イソプロピル基、ｓｅｃ-ブチル基、ベンジル基、及び

から選ばれ、
Ｒ^９は、（ＣＨ_２）_４ＮＨ_２、（ＣＨ_２）_３ＮＨＣＯＮＨ_２、（ＣＨ_２）_３ＮＨＣ（＝ＮＨ）ＮＨ_２、

から選ばれ、
ｓは、０、１、２、３または４から選ばれ、
Ｌ^３は、自己分解のできる構造単位であり、

から選ばれ、
Ｒ^１０は、Ｈ、または任意に選んだ１〜３個のハロゲン、ＯＨ、ＮＨ_２、ＮＨＭｅまたはＮＭｅ_２で置換されたＣ_１−３アルキル基から選ばれ、
各Ｒ^１１は、それぞれ独立的にＨ、または任意に選んだ１〜３個のハロゲン、ＯＨ、ＮＨ_２、ＮＨＭｅまたはＮＭｅ_２で置換されたＣ_１−３アルキル基から選ばれ、
同一のＣに結合された二つのＲ^１１は、同一の炭素原子に任意に結合して、３〜６員環を形成することができ、
隣接する二つの位置でのＲ^１１は、同一の炭素原子に任意に結合して、５〜７員環を形成することができ、
Ｒ^１２は、Ｈ、または任意に選んだ１〜３個のハロゲン、ＯＨ、ＮＨ_２、ＮＨＭｅまたはＮＭｅ_２で置換されたＣ_１−３アルキル基から選ばれ、
Ｒ^１３は、Ｈ、または任意に選んだ１〜３個のハロゲン、ＯＨ、ＮＨ_２、ＮＨＭｅまたはＮＭｅ_２で置換されたＣ_１−３アルキル基から選ばれる。

本発明の他の目的は、式（ＩＩ）に示される薬物リンカー共役体を提供することであり、

ここで、
Ｑ’は、

から選ばれ、
Ｍは、薬物であり、
他の変数は、前記のように定義される。

本発明の別の目的は、式（ＩＩＩ）に示される抗体−薬物複合体を提供することであり、

ここで、
Ｙは、抗体であり、
ａは、１〜８の整数または小数であり、
Ｍは、薬物であり、
他の変数は、前記のように定義される。

本発明の一態様において、ａは、１、２、３、３.４、３.５、４、４.２、５、６、７または８から選ばれる。

本発明の一態様において、前記抗体は、標的細胞に優先的に結合する、再表面化されたモノクローナル抗体、再表面化された単鎖モノクローナル抗体、または再表面化されたモノクローナル抗体断片から選択される。

本発明の一態様において、前記抗体は、ヒト化モノクローナル抗体、ヒト化単鎖モノクローナル抗体、またはヒト化モノクローナル抗体断片から選択される。

本発明の一態様において、前記抗体は、キメラ抗体、キメラ抗体断片、ドメイン抗体またはドメイン抗体断片から選択される。

本発明の一態様において、前記抗体は、ＭＹ９、ａｎｔｉ−Ｂ４、ＥｐＣＡＭ、ＣＤ２、ＣＤ３、ＣＤ４、ＣＤ５、ＣＤ６、ＣＤ１１、ＣＤ１９、ＣＤ２０、ＣＤ２２、ＣＤ２６、ＣＤ３０、ＣＤ３３、ＣＤ３７、ＣＤ３８、ＣＤ４０、ＣＤ４４、ＣＤ５６、ＣＤ７９、ＣＤ１０５、ＣＤ１３８、ＥｐｈＡ受容体、ＥｐｈＢ受容体、ＥＧＦＲ、ＥＧＦＲｖＩＩＩ、ＨＥＲ２、ＨＥＲ３、メソテリン、ｃｒｉｐｔｏ、ａｌｐｈａ_ｖｂｅｔａ_３、ａｌｐｈａ_ｖｂｅｔａ_５、ａｌｐｈａ_ｖｂｅｔａ_６インテグリンまたはＣ２４２から選択される。

本発明の一態様において、前記抗体は、Ｍｙ９−６、Ｂ４、Ｃ２４２、Ｎ９０１、ＤＳ６、ＥｐｈＡ２受容体、ＣＤ３８、ＩＧＦ−ＩＲ、ＣＮＴＯ９５、Ｂ−Ｂ４、トラスツズマブ、テルツズマブ、ベバツズマブ、シブロツヅマ、リツキシマブ及びアダリムマブから選択される。

本発明の一態様において、前記抗体は、ハーセプチンとエルビタックスから選択される。

本発明の一態様において、前記抗体に結合された標的細胞は、腫瘍細胞、ウイルス感染細胞、微生物感染細胞、寄生虫感染細胞、自己免疫細胞、活性化細胞、骨髄系細胞、活性化Ｔ細胞、Ｂ細胞、メラニン細胞から選ばれ、または１以上のＩＧＦ−ＩＲ、ＣａｎＡｇ、ＥＧＦＲ、ＭＵＣＩ、ＭＵＣＩ６、ＶＥＧＦ、ＴＦ、ＭＹ９、ａｎｔｉ−Ｂ４、ＥｐＣＡＭ、ＣＤ２、ＣＤ３、ＣＤ４、ＣＤ５、ＣＤ６、ＣＤ１１、ＣＤ１１ａ、ＣＤ１８、ＣＤ１９、ＣＤ２０、ＣＤ２２、ＣＤ２６、ＣＤ３０、ＣＤ３３、ＣＤ３７、ＣＤ３８、ＣＤ４０、ＣＤ４４、ＣＤ５６、ＣＤ７０、ＣＤ７９、ＣＤ１０５、ＣＤ１３８、ＥｐｈＡ受容体、ＥｐｈＢ受容体、ＥＧＦＲｖＩＩＩ、ＨＥＲ２/ｎｅｕ、ＨＥＲ３、メソテリン、ｃｒｉｐｔｏ、ａｌｐｈａｖｂｅｔａ３インテグリン、ａｌｐｈａｖｂｅｔａ５インテグリン、ａｌｐｈａｖｂｅｔａ６インテグリン、Ａｐｏ２、またはＣ２４２抗原を発現することができる細胞であり、またはインスリン様成長因子受容体、上皮成長因子受容体、葉酸受容体を発現できる細胞である。

本発明の一態様において、前記腫瘍細胞は、乳癌細胞、前立腺がん細胞、卵巣癌細胞、直腸癌細胞、胃癌細胞、扁平上皮癌、小細胞肺癌細胞、精巣癌細胞から選ばれる。

本発明の一態様において、前記薬物は、細胞傷害性薬剤から選ばれる。

本発明の一態様において、前記薬物は、メイタンシノイド、ＤＮＡ結合薬物およびその類似体、カリケアミシン、ドキソルビシンおよびその類似体、ビンカアルカロイド、クリプトフィシン、ドラスタチン、オーリスタチンおよびその類似体、チューブリシン、エポチロン、タキソイド、ｓｉＲＮＡから選ばれる。

本発明の一態様において、前記ＤＮＡ結合薬物は、ＣＣ−１０６５から選ばれる。

本発明の一態様において、前記Ｍは、

から選ばれる。

本発明の一態様において、前記薬物は、診断試薬または検出試薬である。

本発明の一態様において、前記薬物は、放射性標識化合物から選ばれる。

本発明の一態様において、前記薬物は、^３Ｈ、^１８Ｆ、^１１Ｃ、^１３Ｎ、^１５Ｏ、^２０１Ｔｌ、^３２Ｐ、^５１Ｃｒ、^６７Ｇａ、^１２３Ｉ、^１２５Ｉ、^１３１Ｉ、^１３２Ｉ、^１３１Ｃｓ、^１１３×ｅ、^１３３×ｅ、^１６９Ｙｂ、^１９８Ａｕ、^２０３Ｈｇ、^９９ｍＴｃ、^１１３ｍＩｎ、^１３３ｍＩｎ、^７５Ｓｅ、^１８６Ｒｅ、^１５３Ｓｍ、^８９Ｓｒで標識される。

本発明の一態様において、前記Ｌ^１は、

から選ばれる。

本発明の一態様において、前記Ｌ^２は、

から選ばれる。

本発明の一態様において、前記Ｌ^２は、

から選ばれる。

本発明の一態様において、前記同一の炭素原子に結合された二つのＲ^１１または隣接する二つのＲ^１１が結合されて形成された環は、シクロヘキシルである。

本発明の一態様において、前記Ｌ^３は、

から選ばれる。

本発明の一態様において、前記構造単位である

は、

から選ばれる。

本発明の一態様において、前記構造単位である

は、

から選ばれる。

本発明の一態様において、前記リンカーは、

から選ばれる。

本発明の一態様において、前記リンカーは、

から選ばれる。

本発明の一態様において、前記共役体は、

から選ばれる。

本発明の一態様において、前記共役体は、

から選ばれる。

本発明の一態様において、前記抗体−薬物複合体は、

から選ばれ、
Ｙは、抗体であり、ａは、１〜８から選ばれる整数または小数であり、具体的に、ａは、１、２、３、３.４、３.５、４、４.２、５、６、７または８から選ばれる。

本発明の一態様において、前記抗体−薬物複合体は、

から選ばれ、
Ｙは、抗体であり、ａは、１〜８から選ばれる整数または小数であり、具体的に、ａは、１、２、３、３.４、３.５、４、４.２、５、６、７または８から選ばれる。

本発明の一態様において、前記抗体−薬物複合体は、

から選ばれ、
ａは、２〜６から選ばれる整数または小数であり、具体的に、ａは、１、２、３、３.４、３.５、４、４.２、５、または６から選ばれる。

本発明の一態様において、前記抗体−薬物複合体は、

から選ばれ、
ａは、２〜６から選ばれる整数または小数であり、具体的に、ａは、１、２、３、３.４、３.５、４、４.２、５、または６から選ばれる。

本発明の別の目的は、式（ＩＩ）に示される薬物リンカー共役体または式（ＩＩＩ）に示される抗体−薬物複合体を合成して調製するための中間体を提供することであり、

が含まれる。

本発明の別の目的は、治療有効量の抗体−薬物複合体またはその薬学に許容される担体、希釈剤または賦形剤を含む薬物組成物を提供することである。

本発明の別の目的は、前記リンカー、共役体、抗体−薬物複合体または組成物が、癌の治療のための薬物の調製への応用を提供することである。

本発明の別の目的は、前記抗体−薬物複合体または前記薬学的組成物の有効量を投与することを含む癌の治療または診断の方法を提供することである。

（定義と説明）
Ｃ_１−６は、Ｃ_１、Ｃ_２、Ｃ_３、Ｃ_４、Ｃ_５及びＣ_６から選ばれ、Ｃ_３−６は、Ｃ_３、Ｃ_４、Ｃ_５及びＣ_６から選ばれる。

Ｃ_１−６アルキル基、Ｃ_１−６ヘテロアルキル基、Ｃ_３−６シクロヒドロカルビル基、Ｃ_３−６ヘテロシクロヒドロカルビル基、Ｃ_３−６シクロヒドロカルビル基またはＣ_３−６ヘテロシクロヒドロカルビル基により置換されたＣ_１−６アルキル基またはＣ_１−６ヘテロアルキル基は、メチル基、エチル基、ｎ−プロピル基、イソプロピル基、−ＣＨ_２Ｃ（ＣＨ_３）（ＣＨ_３）（ＯＨ）、シクロプロピル基、シクロブチル基、プロピルメチレン基、シクロプロピルアシル基、ベンジルオキシル基、シクロプロピルアルキレン基、トリフルオロメチル基、アミノメチル基、ヒドロキシメチル基、メチルオキシル基、メチルアシル基、メチルオキシカルボニル基、メチルスルホニル基、メチルスルフィニル基、エチルオキシル基、エチルアシル基、エチルスルホニル基、エチルオキシカルボニル基、ジメチルアミノ基、ジエチルアミノ基、ジメチルアミノカルボニル基、ジエチルアミノカルボニル基、及び、Ｎ（ＣＨ_３）_２、ＮＨ（ＣＨ_３）、−ＣＨ_２ＣＦ_３、−ＣＨ_２ＣＨ_２ＣＦ_３、−ＣＨ_２ＣＨ_２Ｆ、−ＣＨ_２ＣＨ_２Ｓ（＝Ｏ）_２ＣＨ_３、−ＣＨ_２ＣＨ_２ＣＮ、

−ＣＨ_２ＣＨ（ＯＨ）（ＣＨ_３）_２、−ＣＨ_２ＣＨ（Ｆ）（ＣＨ_３）_２、−ＣＨ_２ＣＨ_２Ｆ、−ＣＨ_２ＣＦ_３、−ＣＨ_２ＣＨ_２ＣＦ_３、−ＣＨ_２ＣＨ_２ＮＨ_２、−ＣＨ_２ＣＨ_２ＯＨ、−ＣＨ_２ＣＨ_２ＯＣＨ_３、−ＣＨ_２ＣＨ_２ＣＨ_２ＯＣＨ_３、−ＣＨ_２ＣＨ_２Ｎ（ＣＨ_３）_２、−Ｓ（＝Ｏ）_２ＣＨ_３、−ＣＨ_２ＣＨ_２Ｓ（＝Ｏ）_２ＣＨ_３、

が含まれるが、これに限定されない。

「置換された」とは、特定の原子上の何れかまたは複数の水素原子が、特定の原子の原子価が通常であり、また置換後の化合物が安定である限り、重水素と水素のバリアント（ｖａｒｉａｎｔ）を含む置換基によって置換されることを意味する。置換基がケト基（即ち、＝Ｏ）であるときは、二つの水素原子が置換されることを意味する。ケトンの置換は、芳香族基では存在しない。「任意に置換された」という用語は、置換されることもできるし、置換されないこともできて、特に言及しない限り、置換基の種類と数が化学的に実現できる基では、任意であることができる。

何れかの変数（例えば、Ｒ）が、化合物の組成または構造に一回以上出現する場合、それぞれの場合での定義は、すべて独立である。したがって、例えば、一つのグループが０〜２個のＲによって置換されると、前記グループは、任意にせいぜい二つのＲによって置換されることができ、またそれぞれの状況下のＲは、すべて独立のオプションを有する。なお、置換基及び／またはその変形の組み合わせは、このような組み合わせが安定な化合物が生成する場合にのみ、許容される。

ある置換基の結合が、一つの環での二つの原子にまたがって結合されるとき、この置換基は、この環上のいずれの原子と結合することができる。挙げられた置換基に、どの原子を介して、化学構造式に含まれるが具体的に言及していない化合物に結合されるかを指定していない場合、このような置換基は、そのいずれかの原子を介して結合することができる。置換基及び／またはその変形の組み合わせは、このような組み合わせが安定な化合物が生成する場合にのみ、許容される。

アルキル基とヘテロアルキル基の原子団の置換基を、通常は、「アルキル基置換基」といい、それらは以下のグループの中の一つまたは複数を選択するが、限定されず、−Ｒ’、−ＯＲ’、＝Ｏ、＝ＮＲ’、＝Ｎ−ＯＲ’、−ＮＲ’Ｒ''、−ＳＲ’、ハロゲン、−ＳｉＲ’Ｒ''Ｒ''’、ＯＣ（Ｏ）Ｒ’、−Ｃ（Ｏ）Ｒ’、−ＣＯ_２Ｒ’、−ＣＯＮＲ’Ｒ''、−ＯＣ（Ｏ）ＮＲ’Ｒ''、−ＮＲ''Ｃ（Ｏ）Ｒ’、ＮＲ’Ｃ（Ｏ）ＮＲ''Ｒ''’、−ＮＲ''Ｃ（Ｏ）_２Ｒ’、−ＮＲ''''’−Ｃ（ＮＲ’Ｒ''Ｒ’''）＝ＮＲ''''、ＮＲ''''Ｃ（ＮＲ’Ｒ''）＝ＮＲ’''、−Ｓ（Ｏ）Ｒ’、−Ｓ（Ｏ）_２Ｒ’、−Ｓ（Ｏ）_２ＮＲ’Ｒ''、ＮＲ''ＳＯ_２Ｒ’、−ＣＮ、−ＮＯ_２、−Ｎ_３、−ＣＨ（Ｐｈ）_２、フルオロ（Ｃ_１−Ｃ_４）アルコキシ基及びフルオロ（Ｃ_１−Ｃ_４）アルキル基であり、置換基の数が０〜（２ｍ’＋１）であり、ここで、ｍ’は、ラジカルの中の炭素原子の合計である。Ｒ'、Ｒ''、Ｒ'''、Ｒ’’’’及びＲ’’’’’のそれぞれが独立的に水素、置換または未置換ヘテロアルキル基、置換または未置換アリール基（例えば、１〜３個のハロゲンによりアリール基が置換される）、置換または未置換アルキル基、アルコキシ基、チオアルコキシ基の官能基またはアリールアルキル基から好ましくは選択される。本発明の化合物が、一つ以上のＲ基を含む場合、例えば、Ｒ基ごとに独立的に選択された、たとえ一つ以上のＲ'、Ｒ''、Ｒ'''、Ｒ''''及びＲ''''’基が存在するような場合の各官能基である。Ｒ'及びＲ''が同じ窒素原子に付着された場合、それらは当該窒素原子と結合して、５−、６−または７−員環を形成することができる。例えば、−ＮＲ'Ｒは、１−ピロリジニルおよび４−モルホリニルを含むが、それに限定されないことを意味する。前記の置換基に関する検討の中で、当業者が理解できるのは、「アルキル基」という用語は、炭素原子が非水素グループに結合されて形成されたグループである、例えば、ハロアルキル基（例えば、−ＣＦ_３、−ＣＨ_２ＣＦ_３）及びアシル基（例えば、−Ｃ（Ｏ）ＣＨ_３、−Ｃ（Ｏ）ＣＦ_３、−Ｃ（Ｏ）ＣＨ_２ＯＣＨ_３等）を含むことを意味する。

上述したアルキル基ラジカルの置換基と同様に、一般に、アリール基とヘテロアリール基の置換基を「アリール基置換基」と総称し、例えば、−Ｒ’、−ＯＲ’、−ＮＲ’Ｒ''、−ＳＲ’、ハロゲン、−ＳｉＲ’Ｒ''Ｒ''’、ＯＣ（Ｏ）Ｒ’、−Ｃ（Ｏ）Ｒ’、−ＣＯ_２Ｒ’、−ＣＯＮＲ’Ｒ''、−ＯＣ（Ｏ）ＮＲ’Ｒ''、−ＮＲ''Ｃ（Ｏ）Ｒ’、ＮＲ’Ｃ（Ｏ）ＮＲ''Ｒ''’、−ＮＲ''Ｃ（Ｏ）_２Ｒ’、−ＮＲ''''’−Ｃ（ＮＲ’Ｒ''Ｒ''’）＝ＮＲ''''、ＮＲ''''Ｃ（ＮＲ’Ｒ''）＝ＮＲ''’、−Ｓ（Ｏ）Ｒ’、−Ｓ（Ｏ）_２Ｒ’、−Ｓ（Ｏ）_２ＮＲ’Ｒ''、ＮＲ''ＳＯ_２Ｒ’、−ＣＮ、−ＮＯ_２、−Ｎ_３、−ＣＨ（Ｐｈ）_２及びフルオロ（Ｃ_１−Ｃ_４）アルコキシ基とフルオロ（Ｃ_１−Ｃ_４）アルキル基等、置換基の数が０から芳香族環で開放された原子価の合計の間であり、ここで、Ｒ’、Ｒ''、Ｒ''’、Ｒ''''が独立的に水素、置換または未置換アルキル基、置換または未置換ヘテロアルキル基、置換または未置換アリール基と、置換または未置換ヘテロアリール基から好ましく選択される。本発明の化合物が一つ以上のＲ基を含む場合、例えば、Ｒ基毎に独立的に選択できる、たとえば一つ以上のＲ’、Ｒ''、Ｒ''’、Ｒ''''及びＲ''''’基である場合のそれぞれのようなグループである。

アリール基またはヘテロアリール基環の隣接する原子上の二つの置換基は、任意に一般式がＴ−Ｃ（Ｏ）−（ＣＲＲ’）ｑ−Ｕ−で表される置換基により置換することができ、ここでＴとＵは、独立的に−ＮＲ−、−Ｏ−、ＣＲＲ'−または単結合から選択することができ、ｑは、０から３までの整数である。選択的に、アリール基またはヘテロアリール基環で、隣接する原子上の二つの置換基が、任意に一般式が、−Ａ（ＣＨ_２）ｒＢ−の置換基によって置換されることができ、ここで、ＡとＢは、独立的に−ＣＲＲ’−、−Ｏ−、−ＮＲ−、−Ｓ−、−Ｓ（Ｏ）−、Ｓ（Ｏ）_２−、−Ｓ（Ｏ）_２ＮＲ’−または単結合から選択することができ、ｒは、１から４までの整数である。新しく形成された環の一つの単結合は、任意に二重結合に置換されることができる。選択的に、アリール基またはヘテロアリール基上の隣接する原子上の二つの置換基は、任意に式−（ＣＲＲ’）ｓ−Ｘ−（ＣＲ''Ｒ''’）ｄ−で表される置換基によって置換されることができ、ここで、ｓとｄは、それぞれ独立的に０から３までの整数であり、Ｘは、−Ｏ−、−ＮＲ’−、−Ｓ−、−Ｓ（Ｏ）−、−Ｓ（Ｏ）_２−または−Ｓ（Ｏ）_２ＮＲ’−から選択することができる。Ｒ、Ｒ’、Ｒ''またはＲ''’それぞれ独立的に好ましくＨ、置換または未置換Ｃ_１−６アルキル基から選択することができる。

「ハロ」または「ハロゲン」は、それ自体として、または別の置換基の部分として、特に言及がないかぎり、フッ素、塩素、臭素、またはヨウ素原子を意味する。なお、「ハロアルキル基」は、モノハロアルキルと、ポリハロアルキルを含むことを意味する。例えば、「ハロ（Ｃ_１−Ｃ_４）アルキル基」は、トリフルオロメチル基、２,２,２−トリフルオロエチルエステル、４−クロロブチル、３−ブロモプロピル、及び他のものを含むがそれに限定されない。

ハロアルキル基の例は、トリフルオロメチル、トリクロロメチル、ペンタフルオロエチル、及びペンタクロロエチルを含むが、それに限定されない。「アルコキシ基」は、以上で定義された、酸素橋を介して特定数の炭素原子に結合された、いずれかのアルキル基である。Ｃ_１−６アルコキシ基は、Ｃ_１、Ｃ_２、Ｃ_３、Ｃ_４、Ｃ_５及びＣ_６を含むアルコキシ基を意味する。アルコキシ基の例は、メトキシ、エトキシ、ｎ−プロポキシ、イソプロポキシ、ｎ−ブトキシ、ｓｅｃ−ブトキシ、ｔｅｒｔ−ブトキシ、ｎ−ペンチルオキシ、ｓ−ペントキシを含むが、それに限定されない。「シクロアルキル基」は、飽和環、例えば、シクロプロピル基、シクロブチル基、またはシクロペンチル基を意味する。３−７シクロアルキル基は、Ｃ３、Ｃ４、Ｃ５、Ｃ６、及びＣ７を含むシクロアルキル基を意味する。「アルケニル基」は、直鎖または分岐鎖の炭化水素鎖を意味し、同時に一つまたは一つ以上の不飽和Ｃ−Ｃ結合が、鎖上の任意のいずれの安定な位置に存在することができ、例えば、ビニル基とプロペニル基である。

ここで使用された「ハロ」または「ハロゲン」は、フルオロ、クロロ、ブロモ、ヨードを意味する。

ここでの「ヘテロ」は、特例の状況がない限り、「ヘテロ原子」または「ヘテロラジカル」（即ち、ヘテロ原子を含むラジカル）、炭素原子と水素原子以外の全ての原子を含み、同時に前記ヘテロ原子を含むラジカルを含む。例としては、酸素（Ｏ）、窒素（Ｎ）、硫黄（Ｓ）、ケイ素（Ｓｉ）、ゲルマニウム（Ｇｅ）、アルミニウム（Ａｌ）及びホウ素（Ｂ）を含み、同時に任意に置換された−Ｃ（＝Ｏ）Ｎ（Ｈ）−、−Ｎ（Ｈ）−、−Ｃ（＝ＮＨ）−、−Ｓ（＝Ｏ）_２Ｎ（Ｈ）−、または−Ｓ（＝Ｏ）Ｎ（Ｈ）−も含むことができる。

本文で使用される「環」は、置換または未置換シクロアルキル基、置換または未置換ヘテロシクロアルキル基、置換または未置換シクロアルケニル基、置換または未置換ヘテロシクロアルケニル基、置換または未置換シクロアルキニル基、置換または未置換ヘテロシクロアルキニル基、置換または未置換アリール基、または、置換または未置換ヘテロアリール基を意味する。環は、単環、二環、スピロ環、縮合環、架橋環を含む。環上での原子の数は、通常環の員数と定義されていて、例えば、「５〜７員環」は、５〜７個の原子が環状に配置されることを示す。特に制限がない限り、当該環は、任意に１〜３個のヘテロ原子を含む。従って、「５〜７員環」は、例えば、フェニル基、ピリジニル及ピペリジニルを含み、一方、「５〜７員ヘテロシクロアルキル基環」という用語は、ピリジニルとピペリジニルを含むが、フェニル基を含まない。「環」という用語は、少なくとも一個の環の環系も含み、ここでのそれぞれの「環」は、独立的に前記定義に符合される。

本文で使用されるように、「複素環」または「複素環基」は、安定なヘテロ原子またはヘテロラジカルを含む単環式、二環式または三環式を意味し、これらは飽和であるか、または部分的に不飽和であるか、または不飽和（芳香環）であり、炭素原子と１、２、３または４個の独立的にＮ、Ｏ及びＳから選択されたヘテロ原子、ここで任意の前記の複素環は、上記定義によるヘテロ環が一つのベンゼン環に縮合した二環式を含む。窒素と硫黄ヘテロ原子は、任意に酸化される（即ち、ＮＯ及びＳ（Ｏ）ｐ）ことができる。窒素原子は、置換または未置換である（即ち、ＮまたはＮＲ、ここでＲは、Ｈまたは本文で定義された他の置換基である）。当該複素環は、ヘテロ原子または炭素原子のいずれかのペンダント基に付着して、安定な構造を形成することができる。たとえば生成した化合物が安定であれば、本文の前記の複素環は、炭素または窒素上の置換が可能である。複素環中の窒素原子は、任意に四級化される。好ましくは、複素環中のＳ及びＯ原子の合計が１を超える時、これらのヘテロ原子は互いに隣接しない。好ましくは、複素環中のＳ及びＯ原子の合計は、１を超えない。本文で使用されるように、「芳香族複素環基」または「ヘテロアリール基」という用語は、安定な５、６、７員単環式または二環式または７、８、９または１０員二環式複素環基の芳香族環を意味し、炭素原子と１、２、３または４個の独立的にＮ、Ｏ及びＳから選択されたヘテロ原子からなる。窒素原子は、置換または未置換である（即ち、ＮまたはＮＲ、ここでＲは、Ｈまたは本文で定義された他の置換基である）。窒素と硫黄ヘテロ原子は、任意に酸化される（即ち、ＮＯ及びＳ（Ｏ）ｐ）から選択されることができる。注意すべきは、芳香複素環上のＳとＯ原子の合計は、１を超えない。架橋環も、複素環の定義に含まれている。一つまたは一つ以上の多数の原子（すなわち、Ｃ、Ｏ、ＮまたはＳ）が二つの隣接しない炭素原子または窒素原子を結合する時に架橋環が形成される。好ましくは、架橋環は、一つの炭素原子、二つの炭素原子、一つの窒素原子、二つの窒素原子及び一つの炭素−窒素基を含むが、これに限定されない。注意すべきは、一つの架橋は、いつも単環式を三環式に転換させる。環が架橋されたとき、環の上の置換基も架橋に出現することができる。

複素環化合物の実例は、アクリジニル、アゾシニル、ベンズイミダゾリル、ベンゾフラニル、ベンゾチオフラニル、ベンゾチオフェニル、ベンゾオキサゾリル、ベンゾオキサゾリニル、ベンズチアゾリル、ベンズトリアゾリル、ベンズテトラゾリル、ベンズイソキサゾリル、ベンゾイソチアゾリル、ベンズイミダゾリニル、カルバゾリル、４ａＨ−カルバゾリル、カルボリニル、クロマニル、クロメニル、シノリニル、デカヒドロキノリニル、２Ｈ，６Ｈ−１，５,２−ジチアジニル、ジヒドロフロ[２,３−ｂ]テトラヒドロフラン、フラニル、フラザニル、イミダゾリジニル、イミダゾリニル、イミダゾリル、１Ｈ−インダゾリル、インドレニル、インドリル、インドリジニル、インドリル、３Ｈ−インドリル、イソチノイル、イソベンゾフラニル、イソクロマニル、イソインドリニル、イソインドリル、イソキノリニル、イソチアゾリル、イソキサゾリル、メチレンジオキシフェニル、モルホリニル、ナフチリジニル、オクタヒドロイソキノリニル、オキサジアゾリル、１，２，３−オキサジアゾリル、１，２，４−オキサジアゾリル、１，２，５−オキサジアゾリル、１，３，４−オキサジアゾリル、オキサゾリジニル、オキサゾリル、オキシインドリル、ピリミジニル、フェナントリジニル、フェナントロリニル、フェナジニル、フェノチアジニル、フェノキサチニル、フェノキサジニル、フタラジニル、ピペラジニル、ピペリジニル、ピペリドニル、４−ピペリドニル、ピペロニル、プテリジニル、プリニル、ピラニル、ピラジニル、ピリミジニル、ピロリジニル、ピロリニル、２Ｈ−ピロリル、ピロリル、キナゾリニル、キノリニル、４Ｈ−キノリジニル、キノキサリニル、キヌクリジニル、テトラヒドロフラニル、テトラヒドロイソキノリニル、テトラヒドロキノリニル、テトラゾニル、６Ｈ−１，２，５−チアジアジニル、１，２，３−チアジアゾリル、１，２，４−チアジアゾリル、１，２，５−チアジアゾリル、１，３，４−チアジアゾリル、チアトレニル、チアゾリル、チエニル、チエノチアゾリル、チエノオキサゾリル、チエノイミダゾリル、チオフェニル、トリアジニル、１，２，３−トリアゾリル、１，２，４−トリアゾリル、１，２，５−トリアゾリル、１，３，４−トリアゾリル及びキサンテニルを含むが、これに限定されない。また、縮合環及びスピロ化合物も含まれる。

「ヒドロカルビル基」またはその下位概念（例えば、アルキル基、アルケニル基、アルキニル基、フェニル基等）自体または別の置換基の一部分として示す、直鎖、分岐鎖または環状の炭化水素ラジカルまたはその組み合わせは、完全に飽和、モノまたはポリ不飽和であることができ、二価または多価ラジカルを含むことができ、指定された数の炭素原子（例えば、Ｃ１−Ｃ１０が示す１ないし１０個の炭素）を有する。「ヒドロカルビル基」は、脂肪族ヒドロカルビル基および芳香族ヒドロカルビル基を含むが、これに限定されず、前記脂肪族ヒドロカルビル基は、鎖状と環状を含み、具体的に、アルキル基、アルケニル基、アルキニル基を含むが、これに限定されず、前記芳香族ヒドロカルビル基は、６−１２員環の芳香ヒドロカルビル基、例えば、ベンゼン、ナフタレン等を含むが、これに限定されない。いくつかの実施形態の中で、「アルキル基」という用語は、直鎖または分岐鎖のラジカルまたはそれらの組み合わせは、完全に飽和であり、モノまたはポリ不飽和であることができ、二価と多価ラジカルを含むことができる。飽和炭化水素ラジカルの例は、メチル基、エチル基、ｎ−プロピル、イソプロピル基、ｎ−ブチル、ｔｅｒｔ−ブチル、イソブチル、ｓeｃ-ブチル基、シクロヘキシル、（シクロヘキシル）メチル基、シクロプロピルメチル基、及びｎ−ペンチル、ｎ−ヘキシル、ｎ−ヘプチル、オクチルなどのラジカルの同族体または異性体である。不飽和アルキル基は、一つまたは多数の二重結合または三重結合を有し、その例は、ビニル基、２−プロペニル、クロチル基、２−イソペンテニル基、２−（ブタジエニル）、２，４−ペンタジエニル基、３−（１，４−ペンタジエニル基）、エチニル基、１−および３−プロピニル基、３−ブチニル基、及び更に高級の同族体または異性体である。

特に制限がない限り、「ヘテロヒドロカルビル基」またはその下位概念（例えば、ヘテロアルキル基、ヘテロアルケニル基、ヘテロアルキニル基、ヘテロアリール基等）自体または別の用語と組み合わせて示す、安定な直鎖、分岐鎖または環状の炭化水素ラジカルまたはその組み合わせは、一定数の炭素原子と少なくとも一つのヘテロ原子により形成される。いくつかの実施形態の中で、用語「ヘテロアルキル基」自体または別の用語と組み合わせて示す、安定な直鎖、分岐鎖の炭化水素ラジカルまたはその組み合わせは、一定数の炭素原子と少なくとも一つのヘテロ原子から組成される。一つの典型的な例において、ヘテロ原子は、Ｂ、Ｏ、Ｎ及びＳから選択され、そこで、窒素と硫黄原子は、任意に酸化され、窒素ヘテロ原子は、任意に四級化される。ヘテロ原子Ｂ、Ｏ、Ｎ及びＳは、ヘテロヒドロカルビル基のいずれの内部位置（当該ヒドロカルビル基が分子の残りの部分の位置に付着される）に配置されることができる。例としては、−ＣＨ_２−ＣＨ_２−Ｏ−ＣＨ_３、−ＣＨ_２−ＣＨ_２−ＮＨ−ＣＨ_３、−ＣＨ_２−ＣＨ_２−Ｎ（ＣＨ_３）−ＣＨ_３、−ＣＨ_２−Ｓ−ＣＨ_２−ＣＨ_３、−ＣＨ_２−ＣＨ_２、−Ｓ（Ｏ）−ＣＨ_３、−ＣＨ_２−ＣＨ_２−Ｓ（Ｏ）_２−ＣＨ_３、−ＣＨ＝ＣＨ−Ｏ−ＣＨ_３、−ＣＨ_２−ＣＨ＝Ｎ−ＯＣＨ_３及び−ＣＨ_２−ＣＨ＝Ｎ（ＣＨ_３）−ＣＨ_３を含むが、これらに限定されない。多くとも二つのヘテロ原子が、連続的であることができ、例えば、−ＣＨ_２−ＮＨ−ＯＣＨ_３である。

「アルコキシ基」、「アルキルアミノ基」及び「アルキルチオ基」（またはチオアルコキシ基）は、慣用的な表現であり、それぞれ一つの酸素原子、アミノ基または硫黄原子を通じて、分子の残りの部分のアルキル基グループに結合される。

「シクロヒドロカルビル基」、「ヘテロシクロヒドロカルビル基」またはその下位概念（例えば、アリール基、ヘテロアリール基、シクロアルキル基、ヘテロシクロアルキル基、シクロアルケニル基、ヘテロシクロアルケニル基、シクロアルキニル基、ヘテロシクロアルキニル基等）自身または他の用語と組み合わせてそれぞれ環化した「ヒドロカルビル基」、「ヘテロヒドロカルビル基」を示している。なお、ヘテロヒドロカルビル基またはヘテロシクロヒドロカルビル基（例えば、ヘテロアルキル基、ヘテロシクロアルキル基）において、ヘテロ原子は、当該複素環において分子の残余部分の位置を占めることができる。シクロアルキル基の例は、シクロペンチル、シクロヘキシル、１−シクロヘキセニル、３−シクロヘキセニル、シクロヘプチル等を含むが、これらに限定されない。複素環基の限定されない例は、１−（１，２，５，６−テトラヒドロピリジル）、１−ピペリジニル、２−ピペリジニル、３−ピペリジニル、４−モルホリニル、３−モルホリニル、テトラヒドロフラン−２−イル、テトラヒドロフラン−３−イル、テトラヒドロチオフェン−２−イル、テトラヒドロチオフェン−３−イル、１−ピペラジニル及び２−ピペラジニルを含む。

用語「アリール基」は、多不飽和の芳香族炭化水素置換基を示し、単環式または多環（好ましくは、１ないし３個の環）であることができ、縮合または共価で結合することができる。用語「ヘテロアリール基」は、１ないし４個のヘテロ原子を有するアリール基（または環）を示す。一実施形態の中で、ヘテロ原子は、Ｂ、Ｎ、Ｏ及びＳから選ばれ、ここで窒素と硫黄原子は、任意に酸化され、窒素原子は、任意に四級化される。ヘテロアリール基は、ヘテロ原子を通じて分子の他の部分に結合することができる。アリール基、ヘテロアリール基の限定されない例は、フェニル、１−ナフチル、２−ナフチル、４−ビフェニル基、１−ピロリル、２−ピロリル、３−ピロリル、３−ピラゾリル、２−イミダゾリル、４−イミダゾリル、ピラジニル、２−オキサゾリル、４−オキサゾリル、２−フェニル−４−オキサゾリル、５−オキサゾリル、３−イソキサゾリル、４−イソキサゾリル、５−イソキサゾリル、２−チアゾリル、４−チアゾリル、５−チアゾリル、２−フラニル、３−フラニル、２−チエニル、３−チエニル、２−ピリジニル、３−ピリジニル、４−ピリジニル、２−ピリミジニル、４−ピリミジニル、５−ベンズチアゾリル、プリニル、２−ベンズイミダゾリル、５−インドリル、１−イソキノリニル、５−イソキノリニル、２−キノキサリニル、５−キノキサリニル、３−キノリニルおよび６−キノリニルを含む。前記任意の一つのアリール基とヘテロアリール基の環系の置換基は、以下において前記の許容可能な置換基である。

便宜のため、アリール基が、他の用語と組み合わせて使用されるとき（例えば、アリールオキシ基、アリールチオ基、アリールアルキル基）、上記のように定義されたアリール基とヘテロアリール基環を含む。従って、用語「アリールアルキル基」は、アリール基がアルキル基のラジカル（例えば、ベンジル基、フェネチル基、ピリジニルメチル基等）に結合されたことを意味し、その中での炭素原子（例えば、メチレン基）が、例えば、酸素原子によって置換されたアルキル基、例えば、フェノキシメチル基、２−ピリジルオキシメチル、３−（１−ナフチルオキシ）プロピル基等を含むことを意味する。

用語「脱離基」とは、別の官能基または原子が置換反応（例えば、求核置換反応）によって、置換されることができる官能基または原子を意味する。例えば、代表的な脱離基は、トリフルオロメタンスルホネート、塩素、臭素、ヨウ素、スルホネート基、例えば、メタンスルホネート、トルエンスルホネート、ｐ−ブロモベンゼンスルホネート、ｐ−トルエンスルホネートなど；アシルオキシ、例えば、アセトキシ基、トリフルオロアセトキシ等を含む。

用語「保護基」は、「アミノ保護基」、「ヒドロキシ保護基」または「メルカプト保護基」を含むが、これに限定されない。用語「アミノ保護基」とは、アミノ窒素位での副反応を防ぐための保護基を意味する。代表的なアミノ保護基は、ホルミル基、アシル基、例えば、アルカノイル基（例えば、アセチル基、トリクロロアセチル基、またはトリフルオロアセチル基）、アルコキシカルボニル、例えば、ｔｅｒｔ−ブトキシカルボニル（Ｂｏｃ）、アリールメトキシカルボニル基、例えば、ベンジルオキシカルボニル（Ｃｂｚ）および９−フルオレニルメトキシカルボニル基（Ｆｍｏｃ）、アリールメチル基、例えば、ベンジル基（Ｂｎ）、トリチル基（Ｔｒ）、１，１−ジ−（４'−メトキシフェニル）メチル基；シリル基、例えば、トリメチルシリル基（ＴＭＳ）とｔｅｒｔ−ブチルジメチルシリル（ＴＢＳ）等を含むが、これに限定されない。用語「ヒドロキシ保護基」は、ヒドロキシ副反応を防ぐための保護基を意味する。代表的なヒドロキシ保護基は、アルキル基、例えば、メチル基、エチル基、ｔｅｒｔ−ブチル基、アシル基、例えば、アルカノイル基（例えば、アセチル基）、アリールメチル基、例えば、ベンジル基（Ｂｎ）、ｐ−メトキシベンジル基（ＰＭＢ）、９−フルオレニルメチル基（Ｆｍ）、ジフェニルメチル基（ベンズヒドリル基、ＤＰＭ）、シリル基、例えば、トリメチルシリル基（ＴＭＳ）、ｔｅｒｔ−ブチルジメチルシリル基（ＴＢＳ）等を含むが、これに限定されない。

「抗体」は細胞結合剤であり、抗体は、膜貫通分子（例えば、受容体）またはリガンド（例えば、増殖因子）である、ポリペプチドである抗原と結合する。

例示的な抗原は、分子（例えば、レニン）、増殖ホルモン（ヒト増殖ホルモンとウシ成長ホルモンを含む）、増殖ホルモン放出因子、甲状腺ホルモン、甲状腺刺激ホルモン、リポタンパク質、α−１−抗トリプシン；インスリンＡ鎖、インスリンＢ鎖、プロインスリン；卵胞刺激ホルモン、カルシトニン、黄体化ホルモン、グルカゴン、凝固因子（例えば、因子ｖｍｃ、因子ＩＸ、組織因子（ＴＦ）とフォンヴィレブラント因子（ｖｏｎ Ｗｉｌｌｅｂｒａｎｄｓ ｆａｃｔｏｒ））、抗凝固因子、例えば、プロテインＣ、心房性ナトリウム利尿因子、肺界面活性剤、プラスミノーゲン活性化因子（例えば、ウロキナーゼまたはヒト尿または組織プラスミノーゲン活性化因子（ｔ−ＰＡ））、ボンベシン、トロンビン、造血成長因子、腫瘍壊死因子−αと−β、エンケファリナーゼ、ＲＡＮＴＥＳ（通常のＴ細胞の発現および分泌活性化に対する調節）、ヒトマクロファージ炎症性タンパク質（ＭＩＰ−１−α）、血清アルブミン（例えば、ヒト血清アルブミン）、ミュラー阻害物質（Ｍｕｅｌｌｅｒｉａｎ−ｉｎｈｉｂｉｔｉｎｇ ｓｕｂｓｔａｎｃｅ）、リラキシンＡ鎖、リラキシンＢ鎖、プロリラキシン、マウスゴナドトロピン関連ペプチド、微生物タンパク質（例えば、β-ラクタマーゼ）、ＤＮａｓｅ、ＩｇＥ；細胞傷害性Ｔリンパ球関連抗原（ＣＴＬＡ）、例えば、ＣＴＬＡ−４、インヒビン、アクチビン、血管内皮成長因子（ＶＥＧＦ）、ホルモンまたは増殖因子受容体、タンパク質ＡまたはＤ、リウマチ性因子、神経栄養因子（例えば、骨由来神経栄養因子（ＢＤＮＦ）、ニューロトロフィン−３、−４、−５または−６（ＮＴ−３、ＮＴ４、ＮＴ−５またはＮＴ−６））、または神経増殖因子（例えば、ＮＧＦ−β）、血小板由来増殖因子（ＰＤＧＦ）、線維芽細胞増殖因子（例えば、ａＦＧＦ和ｂＦＧＦ）、表皮成長因子（ＥＧＦ）、トランスフォーミング成長因子（ＴＧＦ）、例えば、ＴＧＦ−αおよびＴＧＦ−β、ＴＧＦ−β１、ＴＧＦ−β２、ＴＧＦ−β３、ＴＧＦ−β４またはＴＧＦ−β５を含み、インスリン様増殖因子−Ｉおよび−ＩＩ（ＩＧＦ−ＩおよびＩＧＦ−ＩＩ）、ｄｅｓ（１−３）−ＩＧＦ−Ｉ（脳ＩＧＦ−Ｉ）、インシュリン様増殖因子結合蛋白、ＥｐＣＡＭ、ＧＤ３、ＦＬＴ３、ＰＳＭＡ、ＰＳＣＡ、ＭＵＣ１、ＭＵＣ１６、ＳＴＥＡＰ、ＣＥＡ、ＴＥＮＢ２、ＥｐｈＡ受容体、ＥｐｈＢ受容体、葉酸受容体、ＦＯＬＲ１、メソテリン、ｃｒｉｐｔｏ、αｖβ６、インテグリン、ＶＥＧＦ、ＶＥＧＦＲ、トランスフェリン受容体、ＩＲＴＡ１、ＩＲＴＡ２、ＩＲＴＡ３、ＩＲＴＡ４、ＩＲＴＡ５、ＣＤタンパク、例えば、ＣＤ２、ＣＤ３、ＣＤ４、ＣＤ５、ＣＤ６、ＣＤ８、ＣＤ１１、ＣＤ１４、ＣＤ１９、ＣＤ２０、ＣＤ２１、ＣＤ２２、ＣＤ２３、ＣＤ２５、ＣＤ２６、ＣＤ２８、ＣＤ３０、ＣＤ３３、ＣＤ３６、ＣＤ３７、ＣＤ３８、ＣＤ４０、ＣＤ４４、ＣＤ５２、ＣＤ５５、ＣＤ５６、ＣＤ５９、ＣＤ７０、ＣＤ７９、ＣＤ８０、ＣＤ８１、ＣＤ１０３、ＣＤ１０５、ＣＤ１３４、ＣＤ１３７、ＣＤ１３８、ＣＤ１５２、エリスロポエチン、骨誘導性因子、免疫毒素、骨形成タンパク質（ＢＭＰ）、インターフェロン、例えば、インターフェロン−α、−β及び−γ、コロニー刺激因子（ＣＳＦ）（例えば、Ｍ−ＣＳＦ、ＧＭ−ＣＳＦおよびＧ−ＣＳＦ）、インターロイキン（ＩＬ）、例えば、ＩＬ−１ないしＩＬ−１０、スーパーオキシドジスムターゼ、Ｔ細胞受容体、表面膜タンパク質、崩壊加速因子、ウイルス抗原、例えば、ＨＩＶエンベロープの一部、輸送タンパク質、ホーミング受容体、アドレシン、調節タンパク質、インテグリン、例えばＣＤ１１ａ、ＣＤ１１ｂ、ＣＤ１１ｃ、ＣＤ１８、ＩＣＡＭ、ＶＬＡ−４とＶＣＡＭ、腫瘍関連抗原、例えば、ＨＥＲ２、ＨＥＲ３またはＨＥＲ４受容体、及びいずれの以上で挙げられたポリペプチドの断片、抗体モデルＡｄｎｅｃｔｉｎｓ（米国特許出願公開第２００７／００８２３６５号明細書）、または米国特許出願公開第２００８／０１７１０４０号明細書または米国特許第２００８／０３０５０４４号明細書に開示された一つまたは多種の腫瘍に関連する抗原または細胞表面受容体の抗体が含まれるが、前記米国公報は、引用する方式で全体を本文に援用する。

本発明は、抗体の好ましい抗原が含むＣＤタンパク質、例えば、ＣＤ２、ＣＤ３、ＣＤ４、ＣＤ５、ＣＤ６、ＣＤ８、ＣＤ１１、ＣＤ１４、ＣＤ１８、ＣＤ１９、ＣＤ２０、ＣＤ２１、ＣＤ２２、ＣＤ２５、ＣＤ２６、ＣＤ２７、ＣＤ２８、ＣＤ３０、ＣＤ３３、ＣＤ３６、ＣＤ３７、ＣＤ３８、ＣＤ４０、ＣＤ４４、ＣＤ５２、ＣＤ５５、ＣＤ５６、ＣＤ７０、ＣＤ７９、ＣＤ８０、ＣＤ８１、ＣＤ１０３、ＣＤ１０５、ＣＤ１３４、ＣＤ１３７、ＣＤ１３８およびＣＤ１５２、ＥｒｂＢ受容体のファミリの構成体、例えば、ＥＧＦ受容体、ＨＥＲ２、ＨＥＲ３またはＨＥＲ４受容体、細胞付着分子、例えば、ＬＦＡ−Ｉ、Ｍａｃｌ、ｐｉ５０.９５、ＶＬＡ−４、ＩＣＡＭ−Ｉ、ＶＣＡＭ、ＥｐＣＡＭ、α４/β７インテグリンとαｖ/β３インテグリンであり、そのαまたはβサブクラス（例えば、抗ＣＤ１１ａ、抗ＣＤ１８または抗ＣＤ１１ｂ抗体）、増殖因子、例えば、ＶＥＧＦ、組織因子（ＴＦ）、ＴＧＦ−β、αインターフェロン（α−ＩＦＮ）、インターロイキン、例えば、ＩＬ−８、ＩｇＥ、血型抗原Ａｐｏ２、死亡受容体、ｆｌＫ２／ｆｌｔ３受容体、肥満（ＯＢ）受容体；ｍｐｌ受容体、ＣＴＬＡ−４、タンパク質Ｃ等を含む。

本文で、最も好ましい標的は、ＩＧＦ−ＩＲ、ＣａｎＡｇ、ＥｐｈＡ２、ＭＵＣｌ、ＭＵＣｌ６、ＶＥＧＦ、ＴＦ、ＣＤ１９、ＣＤ２０、ＣＤ２２、ＣＤ２７、ＣＤ３３、ＣＤ３７、ＣＤ３８、ＣＤ４０、ＣＤ４４、ＣＤ５６、ＣＤ１３８、ＣＡ６、Ｈｅｒ２／ｎｅｕ、ＥｐＣＡＭ、ＣＲＩＰＴＯ（大部分の人の乳癌細胞中で高レベルで生成するタンパク質）、ｄａｒｐｉｎｓ、αｖ/β３インテグリン、αｖ/β５インテグリン、αｖ/β６インテグリン、ＴＧＦ−β、ＣＤ１１ａ、ＣＤ１８、Ａｐｏ２とＣ２４２または米国特許出願公開第２００８／０１７１０４０号明細書または米国特許出願公開第２００８／０３０５０４４号明細書に開示された一種または多種の腫瘍関連抗原または細胞表面受容体結合の抗体であり、前記米国公報は引用した方式で全般を本文に援用させた。

好ましくは、本発明が含まれる抗体の抗原は、ＣＤタンパク、例えばＣＤ３、ＣＤ４、ＣＤ８、ＣＤ１９、ＣＤ２０、ＣＤ２７、ＣＤ３４、ＣＤ３７、ＣＤ３８、ＣＤ４６、ＣＤ５６、ＣＤ７０およびＣＤ１３８、ＥｒｂＢ受容体のファミリの構成体、例えば、ＥＧＦ受容体、ＨＥＲ２、ＨＥＲ３またはＨＥＲ４受容体、細胞接着分子、例えば、ＬＦＡ−Ｉ、Ｍａｃｌ、ｐ１５０.９５、ＶＬＡ−４、ＩＣＡＭ−Ｉ、ＶＣＡＭ、ＥｐＣＡＭ、α４/β７インテグリンとαｖ/β３インテグリン、そのαまたはβサブクラス（例えば、抗ＣＤ１１ａ、抗ＣＤ１８または抗ＣＤ１１ｂ抗体）、増殖因子、例えば、ＶＥＧＦ、組織因子（ＴＦ）、ＴＧＦ−β、αインターフェロン（α−ＩＦＮ）、インターロイキン、例えば、ＩＬ−８、ＩｇＥ、血型抗原Ａｐｏ２、死亡受容体、ｆｌＫ２/ｆｌｔ３受容体、肥満（ＯＢ）受容体、ｍｐｌ受容体；ＣＴＬＡ−４、プロテインＣなどを含む。本文において最も好ましいは、ＩＧＦ−ＩＲ、ＣａｎＡｇ、ＥＧＦ−Ｒ、ＥＧＦ−ＲｖＩＩＩ、ＥｐｈＡ２、ＭＵＣ１、ＭＵＣ１６、ＶＥＧＦ、ＴＦ、ＣＤ１９、ＣＤ２０、ＣＤ２２、ＣＤ２７、ＣＤ３３、ＣＤ３７、ＣＤ３８、ＣＤ４０、ＣＤ４４、ＣＤ５６、ＣＤ７０、ＣＤ１３８、ＣＡ６、Ｈｅｒ２／ｎｅｕ、ＣＲＩＰＴＯ（大部分の人の乳癌細胞中で高レベルで生成するタンパク質）、αｖ/β３インテグリン、αｖ/β５インテグリン、ＴＧＦ−β、ＣＤ１１ａ、ＣＤ１８、Ａｐｏ２、ＥｐＣＡＭとＣ２４２を含む。

モノクローナル抗体技術は、モノクローナル抗体の形で特異性細胞結合剤を生産することを許容している。本分野において特別に熟知されていることは、研究された抗原（例えば、完全標的細胞、標的細胞から分離された抗原、全ウイルス、弱毒化した全ウイルスとウイルスタンパク質（例えば、ウイルスコートタンパク質））を用いて、マウス、ラット、ハムスターまたは任意の他の哺乳動物に免疫させるモノクローナル抗体の調製技術である。感作ヒト細胞を使用してもよい。別のモノクローナル抗体の調製方法は、ｓＦｖ（単鎖可変区）を用いることで、特にヒトｓＦｖのファージライブラリー（例えば、Ｇｒｉｆｆｉｔｈｓ等、米国特許第５,８８５,７９３号明細書、ＭｃＣａｆｆｅｒｔｙ等、国際公開第９２／０１０４７号、Ｌｉｍｉｎｇ等、国際公開第９９／０６５８７号）を用いる。

適当な細胞結合剤の選択は、標的の特定細胞群体の選択事項に依存し、一般的には、好ましくは、モノクローナル抗体とそのエピトープ結合断片である（もし適当なものが使用できる場合）。

例えば、モノクローナル抗体Ｍｙ９は、マウスＩｇＧ２ａ抗体であり、それは急性骨髄性白血病（ＡＭＬ）細胞で発現したＣＤ３３抗原に特異性（Ｒｏｙ等、Ｂｌｏｏｄ、７７：２４０４−２４１２（１９９１））を有し、またＡＭＬ患者を治療するために使用することができる。同様に、モノクローナル抗体抗Ｂ４はマウスＩｇＧｉであり、それはＢ細胞上のＣＤ１９抗原と結合（Ｎａｄｌｅｒ等、J．Ｉｍｍｕｎｏｌ.１３１：２４４−２５０（１９８３））し、たとえ標的細胞がＢ細胞または非ホジキンリンパ腫または慢性リンパ芽球性白血病で、その抗原の患病の細胞を発現すると、前記抗体を使用することができる。抗体Ｎ９０１は、マウスモノクローンＩｇＧｉ抗体であり、それは小細胞肺癌細胞と神経内分泌起源の他の腫瘍の細胞上で発現されたＣＤ５６と結合（Ｒｏｙ等、J．Ｎａｔ.Ｃａｎｃｅｒ Ｉｎｓｔ.８８：１１３６−１１４５（１９９６））し、ｈｕＣ２４２はＣａｎＡｇ抗原と結合する抗体であり、トラスツズマブは、ＨＥＲ２／ｎｅｕと結合する抗体であり、及び抗ＥＧＦ受容体抗体は、ＥＧＦ受容体と結合する。

薬物単位（Ｄ）は、いずれかの細胞傷害性薬剤、細胞増殖抑制剤または免疫抑制剤薬物であることができ、本明細書においては、細胞毒性剤、細胞増殖抑制剤または免疫抑制剤とも称することができる。薬剤の例としては、放射活性アイソトープ、化学療法剤、小分子毒素や、バクテリア、真菌、植物または動物由来の酵素活性毒素などの毒素があり、合成アナログや誘導体が含まれる。薬物単位は、リンカーユニットと一つの結合を形成しうる原子を有する。ある例において、薬物単位Ｄは、リンカーユニットと一つの結合を形成し得る窒素原子を有する。他の例において、薬物単位Ｄは、リンカーユニットと一つの結合を形成しうるカルボン酸を有する。他の例において、薬物単位Ｄは、リンカーユニットと一つの結合を形成しうるメルカプト基を有する。他の例において、薬物単位Ｄは、リンカーユニットと一つの結合を形成しうるヒドロキシ基またはケトンを有する。

これらに適用できる細胞毒性剤または免疫抑制剤は、例えば、微管蛋白剤、オーリスタチン、ＤＮＡ副溝結合剤、ＤＮＡ複製阻害剤、アルキル化剤（例えば、プラチナ錯体、例えば、シスプラチン、モノ（プラチナ）、ビス（プラチナ）及トリニューラールプラチナ錯体及びカルボプラチン）、アントラサイクリン、抗生物質、抗葉酸剤、代謝抵抗物、化学療法増感剤、デュオカルマイシン、エトポシド（ｅｔｏｐｏｓｉｄｅ）、フッ化ピリミジン、イオン担体、レキシトロプシン、ニトロソウレア、プラチナロール（ｐｌａｔｉｎｏｌ）、予形成化合物、プリン代謝抵抗物質、ピューロマイシン（ｐｕｒｏｍｙｃｉｎｅ）、放射線増感剤、ステロイド、タキサン、トポイソメラーゼ阻害剤、ビンカアルカロイドまたはその類似物を含む。特に、細胞毒性剤に有用なこれらの例は、例えば、ＤＮＡ副溝結合剤、ＤＮＡアルキル化剤及びチューブリン阻害剤を含む。細胞毒性剤の例は、例えば、オーリスタチン、カンプトテシン、デュオカルマイシン、エトポシド、メイタンシン（ｍａｙｔａｎｓｉｎｅ）及びメイタンシノイド（例えば、ＤＭ１及びＤＭ４）、タキソイド、ベンゾジアゼピン（例えば、ピロロ[１,４]ベンゾジアゼピン（ＰＢＤ）、インドリノベンゾジアゼピン及びオキサゾリルベンゾジアゼピン）及びビンカアルカロイドが含まれる。ベンゾジアゼピンが含まれている薬物の記述は、国際公開第２０１０／０９１１５０号、国際公開第２０１２／１１２７０８号、国際公開第２００７／０８５９３０号、及び国際公開第２０１１／０２３８８３号にある。

各細胞毒性剤または免疫抑制剤は、例えば、アンドロゲン、アントラマイシン（ａｎｔｈｒａｍｙｃｉｎ）（ＡＭＣ）、アスパラギナーゼ、５−アザシチジン、アザチオプリン、ブレオマイシン（ｂｌｅｏｍｙｃｉｎ）、ブスルファン（ｂｕｓｕｌｆａｎ）、ブチオニン（ｂｕｔｈｉｏｎｉｎｅ）スルホキシイミン、カリケアミシン、カンプトテシン、カルボピアチン、カルムスティーン（ｃａｒｍｕｓｔｉｎｅ）（ＢＳＮＵ）、ＣＣ−１０６５、クロラムブシル、シスプラチン、コルヒチン、シクロホスファミド、シタラビン、シチジンアラビノシド、サイトカラシンＢ、ダカルバジン（ｄａｃａｒｂａｚｉｎｅ）、ダクチノマイシン（以前は、アクチノマイシン）、ダウノルビシン（ｄａｕｎｏｒｕｂｉｃｉｎ）、ダカルバジン、ドセタキセル（ｄｏｃｅｔａｘｅｌ）、ドキソルビシン、エトポシド、エストロゲン、５−フルオロデオキシウリジン、５−フルオロウラシル、ゲムシタビン（ｇｅｍｃｉｔａｂｉｎｅ）、グラミシジンＤ、ヒドロキシ尿素、イダルビシン（ｉｄａｒｕｂｉｃｉｎ）、イフォスファミド、イリノテカン（ｉｒｉｎｏｔｅｃａｎ）、ロムスチン（ｌｏｍｕｓｔｉｎｅ）（ＣＣＮＵ）、メイタンシン、メクロレタミン、メルファラン（ｍｅｌｐｈａｌａｎ）、６−メルカプトプリン、メソトレキサート、ミスラマイシン、ミトミシンＣ、ミトキサントロン、ニトロイミダゾール、パクリタキセル、パリトキシン、プリカマイシン、プロカルビジン、リゾキシン、ストレプトゾトシン、テニポシド、６−チオグアニン、チオテパ（ｔｈｉｏＴＥＰＡ）、トポテカン（ｔｏｐｏｔｅｃａｎ）、ビンブラスチン、ビンクリスチン、ヴィノレルビン（ｖｉｎｏｒｅｌｂｉｎｅ）、ＶＰ−１６及びＶＭ−２６を含む。

典型的な実施例の中で、細胞毒性剤に適合するのは、例えば、ＤＮＡ副溝結合剤（例えば、エンジイン及びラクシュトセン、ＣＢＩ化合物、米国特許第６１３０２３７号明細書を参照）、デュオカルマイシン（米国特許出願公開第２００６／００２４３１７号明細書を参照）、タキサン（例えば、パクリタキセル及びドセタキセル）、ピューロマイシン、ビンカアルカロイド、ＣＣ−１０６５、ＳＮ−３８、トポテカン、（Ｎ−モルホリニル）−ドキソルビシン、リゾキシン、シアノ（Ｎ−モルホリニル）−ドキソルビシン、エキノマイシン、コンブレタスタチン（ｃｏｍｂｒｅｔａｓｔａｔｉｎ）、ネトロプシン、エポチロン（ｅｐｏｔｈｉｌｏｎｅ）Ａ及びＢ、エストラムスチン（ｅｓｔｒａｍｕｓｔｉｎｅ）、クリプトフィシン（ｃｒｙｐｔｏｐｈｙｓｉｎ）、セマドチン（ｃｅｍａｄｏｔｉｎ）、メイタンシノイド、ディスコデルモライド（ｄｉｓｃｏｄｅｒｍｏｌｉｄｅ）、エレウテロビン（ｅｌｅｕｔｈｅｒｏｂｉｎ）及ミトキサントロン（ｍｉｔｏｘａｎｔｒｏｎｅ）を含む。

いくつかの実施形態の中で、薬物単位が抗チューブリン剤である。抗チューブリン剤の例は、タキソイド（例えば、Ｔａｘｏｌ（登録商標）（パクリタキセル）、Ｔａｘｏｔｅｒｃ（商品名）（ドセタキセル））、Ｔ６７（ＴｕｌａｒｉＫ）及びビンカアルカロイド（例えば、ビンクリスチン、ビンブラスチン、ビンデシン（ｖｉｎｄｅｓｉｎｅ）及びビノレルビン）がある。他の抗チューブリン剤は、例えば、バッカチン誘導体、タキソイド類似物（例えば、エポチロンＡ及びＢ）、ノコダゾール（ｎｏｃｏｄａｚｏｌｅ）、コルヒチン及びコルシミッド（ｃｏｌｃｉｍｉｄ）、エストラムスティーン、クリプトプフェン、セマドチン、メイタンシノイド、コンブレタスタチン、ディスコデルモライド及エリュテロビンを含む。

いくつかの実施例の中で、細胞毒性剤は、メイタンシンまたはメイタンシノイド（他のグループの抗チューブリン剤）である。（ＩｍｍｕｏＧｅｎ、Ｉｎｃ.；Ｃｈａｉ等、１９９２、Ｃａｎｃｅｒ Ｒｅｓ．５２:１２７−１３１及び米国特許第８１６３８８８号）。

いくつかの実施例の中で、薬物単位は、オーリスタチンである。オーリスタチンは、ＡＥ、ＡＦＰ、ＡＥＢ、ＡＥＶＢ、ＭＭＡＦ及びＭＭＡＥを含むが、これらに限定されない。オーリスタチンの合成及び構造は、米国特許出願公開第２００３／００８３２６３号明細書、米国特許出願公開第２００５／０２３８６４９号明細書、米国特許出願公開第２００５／０００９７５１号明細書、米国特許出願公開第２００９／０１１１７５６号明細書及び米国特許出願公開第２０１１／００２０３４３号明細書、国際公開第０４／０１０９５７号、国際公開第０２／０８８１７２号及び米国特許第７６５９２４１号明細書及び米国特許第８３４３９２８号明細書に記述されていて、それぞれ全体を通して引用の形式で、全ての目的を込めて本文に援用する。本発明のオーリスタチンの例はチューブリンに結合し、細胞株に対して細胞毒性または細胞増殖抑制の作用を発揮する。

例示的なオーリスタチン薬物単位は、以下の式またはその薬学上において許容できる塩を用いて、その中で、波線部分は結合剤単位の結合の位置を示している：

いくつかの実施例の中で、薬物は、ベンゾジアゼピン（薬物を含むベンゾジアゼピン、例えば、ピロロ[１,４]ベンゾジアゼピン（ＰＢＤ）、インドリノベンゾジアゼピン及及びオキサゾリジノベンゾジアゼピンが含まれる）。ＰＢＤは、以下のような構造の一般式を有する。

置換基の数、種類及び位置は、その芳香族Ａ環、ピロロＣ環、シクロヒドロカルビル基Ｃ環の飽和度が異なり得る。Ｂ環の中で、Ｎ１０−Ｃ１１位置において、イミン（Ｎ＝Ｃ）、メタノールアミノ（ＮＨ−ＣＨ（ＯＨ））またはカルビノールアミンメチルエーテル（ＮＨ−ＣＮ（ＯＭｅ））が存在し、それは、アルキル化ＤＮＡの求電子中心である。全ての既知の天然化合物は、キラルＣ１１ａ位置には、全てが（Ｓ）立体配置であり、Ｃ環からＡ環に向かって見ると、当該（Ｓ）立体配置は、右利きのひねりとなる。これは、Ｂ型ＤＮＡ副溝の等螺旋性の適当な３次元構造を提供することで、結合の位置点で緊密に結合するようになる。ＰＢＤが、副溝で付加物を形成して、ＤＮＡの合成を阻害するので、腫瘍抵抗剤として使用される。このらの分子の生物活性は、例えば、二つのＰＢＤ単位をＣ８/Ｃ−ヒドロキシ基により一つのフレキシブルなアルキレンリンカーへの結合を介して、増強できる。ＰＢＤダイマーは、パリンドロームの５'−Ｐｕ−ＧＡＴＣ−Ｐｙ−３'インターストランドなどの配列選択的ＤＮＡ損傷を形成すると考えられ、それらの生物学的活性を主に担うと考えられている架橋結合である。

リンカー、薬物結合共役体と、抗体−薬物複合体の調製方法の一般式は、以下のようである。

アミノアルコール１と、例えば、トリフルオロアセトアルデヒドメチルヘミアセタールなどのヘミアセタールとが、トルエンなどの溶媒の中で還流温度で反応するとともに脱水して、オキサゾリジン中間体２を生成する。その後、オキサゾリジン２が、グリニャール試薬または適当な前駆体から得られる塩基と反応して、アミノアルコール中間体３が生成する。中間体３は、適当な酸化剤、例えば、ジョーンズ試薬または過ヨウ素酸が三酸化クロムの触媒により酸化され、そしてエステル化を経てエステル中間体４が生成する。中間体４の官能基に対して適当な置換または操作を行って、更に転化される適合な位置を含む中間体５が得られる。

方法１におけるアミノアルコール３は、同様に、Ｇｏｓｓｅｌｉｎ，Ｆ．，ｅｔ．ａｌ．，Ｏｒｇ．Ｌｅｔｔ．２００４，６，６４１およびＲｏｙ，Ａ．，ｅｔ．ａｌ．，J．Ｏｒｇ．Ｃｈｅｍ．２００６，７１，４３２０によって、ジアステレオ選択方法で調製することで、高いジアステレオ選択性で３ａが得られる。

方法１由来の中間体５と、方法３由来の中間体８とを適切な条件下で反応させて、中間体１０を得る。中間体１０は、その後の反応を経て、中間体１１として４−ニトロフェニルカーボネートを得る。

方法４由来の中間体１１は、適当な条件の下で、ＭＭＡＥと反応させて、薬物リンカー中間体１２を得る。

中間体１２は、対応する実験セクションに記載された適切な条件の下で、標的抗体と結合される。

ハーセプチン薬物とリンカー中間体との結合の一般的な調製方法：
ステップ１：抗体ジスルフィド結合の還元と精製
２４０ｍｇの抗体−薬物複合体を得るために、８.９５５ｍｌのハーセプチン（２６.８ｍｇ／ｍｌ、約３０ｍｇ／ｍｌ）を８.９５μＬの０.５ＭのＴＣＥＰ（反応液中のＴＣＥＰの最終濃度は、０.５ｍＭである）と混合させ、室温で２時間反応させた。その後、反応液を１ｍｌのプロテインＡアフィニティーカラムで分離し、残留ＴＣＥＰと他の非モノクローナル抗体不純物を除去した。精製後、１ＭのＴｒｉｓで溶出液のｐＨを６.０程度に調整し、分光光度計でモノクローナル抗体の濃度を測定した。溶液の最終体積は、約２０ｍｌであり、モノクローナル抗体の濃度は、約１１.６ｍｇ／ｍｌであった。

ステップ２:薬物リンカーと抗体との結合
溶液を均等に２本の試験管（１０ｍｌずつ）に分け、各試験管に薬物リンカー中間体のＤＭＳＯ溶液を１ｍｌ（２５ｍｇ／ｍｌ）入れた。薬物リンカーと当該クローン抗体の比率は、６:１であった。室温で約１２時間反応させた。反応終了後、二つの試験管の溶液を併せてから、５０００ｒｐｍ／分の条件の下で５分間遠心分離し、遠心分離溶液をプロテインＡアフィニティーカラムで精製して、未反応の薬物コンジュゲート中間体を除去した。１ＭのＴｒｉｓの緩衝液で溶出液のｐＨを６.０に調整した。薬物抗体比（ＤＡＲ）は、疎水性相互作用クロマトグラフィー（ＨＩＣ）ＨＰＬＣにて決定した。

本発明では、実施例によって更なる説明を行い、以下の実施例は、単に本発明の更なる説明を提供するためのものであり、本発明を限定するものではない。本発明の化合物は、当業者が熟知する多様な合成方法により調製することができ、以下で例示された具体的な実施形態、それが他の化学合成方法と組み合わされて行われた実施形態及び本技術領域においての技術者にとって熟知の均等の代替方法を含み、好ましい実施形態は含まれるが本発明の実施例に限定されない。

本発明で使用されている全ての溶媒は市販であり、精製することなく用いる。反応は、一般的には、不活性窒素の下で、無水溶剤の中で行う。プロトン核磁気共鳴のデータは、ＢｒｕＫｅｒ Ａｖａｎｃｅ ＩＩＩ ４００ （４００ＭＨｚ）スペクトロメータ上で記録され、化学シフトは、テトラメチルシランの低磁場における（ｐｐｍ）として表される。質量スペクトルは、Ａｇｉｌｅｎｔ１２００シリーズおよび６１１０（＆１９５６Ａ）で測定された。ＬＣ／ＭＳ、またはＳｈｉｍａｄｚｕ ＭＳは、ＤＡＤ：ＳＰＤ−Ｍ２０Ａ（ＬＣ）およびＳｈｉｍａｄｚｕ Ｍｉｃｒｏｍａｓｓ ２０２０検出器からなる。質量分析計は、正または負のモードで操作されるエレクトロスプレーイオン源（ＥＳＩ）を備えている。

本発明において、以下のような略称が用いられている。即ち、ＡＤＣは抗体−薬物複合体を、ａｑは水を、ｍＡｂは、モノクローナル抗体を表し、ＭＴＭＨは、１−マレイミド−６−トリフルオロメチルヘキシル−６−イルを表しており、その構造は、

であり、（Ｓ）−ＭＴＭＨは、

を表し、（Ｒ）−ＭＴＭＨは、

を表し、ＰＡＢＯ（ＣＯ）は、

を表し、ＡＢＡは、

を代表し、ＭＭＡＥは、

を代表し、Ｆｍｏｃ−Ｃｌは、９−フルオレニルメチルクロロホルメートを表し、ＤＩＡＤは、アゾビスイソブチロニトリルを表し、Ｚ−Ｇｌｕ−ＯＭｅは、（Ｓ）−４−（（（ベンジル）カルボニル）アミノ）−５−メチルオキシル−５−オキソペンタン酸を表し、ＨＡＴＵは、１−[Ｂｉｓ（ｄｉｍｅｔｈｙｌａｍｉｎｏ）ｍｅｔｈｙｌｅｎｅ]−１Ｈ−１，２，３−ｔｒｉａｚｏｌｏ[４，５−ｂ]ｐｙｒｉｄｉｎｉｕｍ３−ｏｘｉｄｈｅｘａｆｌｕｏｒｏｐｈｏｓｐｈａｔｅであり、ＥＤＣＩは、１−Ｅｔｈｙｌ−３−（３−ｄｉｍｅｔｈｙｌａｍｉｎｏｐｒｏｐｙｌ）ｃａｒｂｏｄｉｉｍｉｄｅであり、ＤＭＳＯは、ジメチルスルホキシド（Ｄｉｍｅｔｈｙｌ ｓｕｌｆｏｘｉｄｅ）であり、ＨＯＢＴは、Ｈｙｄｒｏｘｙｂｅｎｚｏｔｒｉａｚｏｌｅであり、ＤＣＭは、ジクロロメタン（ｄｉｃｈｌｏｒｏｍｅｔｈａｎｅ）であり、ＰＥは、石油エーテル（ｐｅｔｒｏｌｅｕｍ ｅｔｈｅｒ）であり、ＤＭＦは、Ｎ，Ｎ−ジメチルホルムアミド（Ｎ，Ｎ−ｄｉｍｅｔｈｙｌｆｏｒｍａｍｉｄｅ）であり、ＥｔＯＡｃは、酢酸エチルであり、ＥｔＯＨは、エタノールであり、ＭｅＯＨは、メタノールであり、Ｃｂｚは、ｂｅｎｚｙｌｏｘｙｃａｒｂｏｎｙｌで、アミノ基の保護基であり、ＢＯＣは、ｔｅｒｔ−ブチルカルボニル基で、アミノ基の保護基であり、ＨＯＡｃは酢酸であり、ＮａＢＨ（ＯＡｃ）_３は、ｓｏｄｉｕｍ ｔｒｉａｃｅｔｏｘｙｂｏｒｏｈｙｄｒｉｄｅであり、ｒ.ｔ.は、室温であり、ＴＨＦは、テトラヒドロフランであり、Ｂｏｃ_２Ｏは、二炭酸ジ−ｔｅｒｔ−ブチルであり、ＴＦＡは、トリフルオロ酢酸であり、ＤＩＰＥＡは、ジイソプロピルエチルアミンであり、Ｐｄ（ｄｐｐｆ）Ｃｌ_２は、[１，１′−Ｂｉｓ（ｄｉｐｈｅｎｙｌｐｈｏｓｐｈｉｎｏ）ｆｅｒｒｏｃｅｎｅ]ｄｉｃｈｌｏｒｏｐａｌｌａｄｉｕｍ（ＩＩ）であり、ＰＯＣｌ_３は、オキシ塩化リンであり、ＮａＨは、水素化ナトリウムであり、ＬＡＨは、水素化アルミニウムリチウムであり、Ｐｄ（ＯＡｃ）_２は、酢酸パラジウム（ＩＩ）であり、Ｐｄ_２（ｄｂａ）_３は、トリス(ジベンジリデンアセトン)ジパラジウム（０）であり、Ｐｄ（ＰＰｈ_３）_４は、テトラキス（トリフェニルホスフィン）パラジウムであり、Ｅｔ_３ＳｉＨは、トリエチルシランであり、ＰＰｈ_３は、トリフェニルホスフィンであり、ｘａｎｔｐｈｏｓは、４，５−ビス(ジフェニルホスフィノ)-９，９-ジメチルキサンテンであり、ＭｅＳＯ_３Ｈは、メタンスルホン酸であり、ｘｐｈｏｓは、２−Ｄｉｃｙｃｌｏｈｅｘｙｌｐｈｏｓｐｈｉｎｏ−２′，４′，６′−ｔｒｉｉｓｏｐｒｏｐｙｌｂｉｐｈｅｎｙｌであり、Ｌａｗｅｓｓｏｎ’ｓ ｒｅａｇｅｎｔは、２，４−Ｂｉｓ（４−ｍｅｔｈｏｘｙｌｐｈｅｎｙｌ）−１，３−ｄｉｔｈｉａ−２，４−ｄｉｐｈｏｓｐｈｅｔａｎｅ−２，４−ｄｉｓｕｌｆｉｄｅであり、ＮＢＳは、Ｎ−ブロモスクシンイミドであり、ｔ−ＢｕＯＫは、カリウムｔｅｒｔ−ブトキシドであり、化合物名は、手動で、またはＣｈｅｍＤｒａｗ（登録商標）を使用して命名し、または市販されていれば市販カタログ名を使用している。

ハーセプチンと、異なるＡＤＣの抗癌細胞増殖の特性を示している。その結果は、ＡＤＣ００１（実施例９）及び対照ＡＤＣ−ＨＡは、乳癌細胞系ＨＣＣ１９５４の体外増殖を阻害する活性を有し、本実験ではハーセプチンを単独では効果がないことを示している。 各グループの腫瘍の成長曲線を示す。結果は、ＡＤＣ００１（実施例９）及び対照ＡＤＣ−ＨＡが、ＨＣＣ１９５４移植腫瘍モデルの腫瘍成長阻害と似た活性を示すことを表している。 ハーセプチンとＡＤＣ（ＡＤＣ００２、ＡＤＣ００３、実施例１０、１１）の抗癌細胞増殖の特性を示す。結果は、研究対象であるＡＤＣ及び対照ＡＤＣ−ＨＡは、抑制乳癌細胞系ＨＣＣ１９５４の体外増殖と類似の活性を有し、本実験ではハーセプチン単独では効果がなかったことを示している。 ハーセプチンとＡＤＣ（ＡＤＣ００４−ＡＤＣ００６、実施例１２−１４）の抗癌細胞増殖の特性を示す。結果は、研究対象であるＡＤＣ及び対照ＡＤＣ−ＨＡは、抑制乳癌細胞系ＨＣＣ１９５４の体外増殖と類似の活性を有し、本実験ではハーセプチン単独では効果がなかったことを示している。 対照ＡＤＣ−ＨＡの作用下の腫瘍増殖曲線を示している。 ＡＤＣ００２（実施例１０）の作用下の腫瘍増殖曲線を示している。 ＡＤＣ００３（実施例１１）の作用下の腫瘍増殖曲線を示している。 ＡＤＣ００４（実施例１２）の作用下の腫瘍増殖曲線を示している。 ＡＤＣ００５（実施例１３）の作用下の腫瘍増殖曲線を示している。 ＡＤＣ００６（実施例１４）の作用下の腫瘍増殖曲線を示している。 対照ＡＤＣ−ＨＡとＡＤＣ（ＡＤＣ００２−ＡＤＣ００６）の作用下の試験終了時の腫瘍体積の比較を示している。 エルビタックス、対照ＡＤＣ−ＥＡ、ＡＤＣ００７（実施例１５）及びＡＤＣ００８（実施例１６）の抗癌細胞増殖の特性を示している。 対照ＡＤＣ−ＥＡ、ＡＤＣ００７（実施例１５）及びＡＤＣ００８（実施例１６）の作用下の腫瘍増殖曲線を示している。

以下の実施例は、本発明をより詳細に説明するためのものであるが、本発明は、これに制限されない。

（２Ｓ）−２，５−ジオキソピロリジン−１−イル−２−｛［７−｛２，５−ジオキソ−２，５−ジヒドロ−１Ｈ−ピロール−１−イル｝−１，１，１−トリフルオロ−ヘプタン−２−イル］アミノ｝−３−メチルブタン酸メチル

ステップ１：（２Ｓ）−３−メチル−２−[（１，１，１−トリフルオロオクト−７−エン−２−イル）アミノ]ブタン−１−オール

６−ブロモヘキサ−１−エン（２２.８ｇ、１４０ｍｍｏｌ）を、４０ｍｌの無水テトラヒドロフラン溶液に溶解させた。まずは、攪拌条件下のＭｇ（１０.２ｇ、４２０ｍｍｏｌ）と少量の触媒ヨウ素のテトラヒドロフラン懸濁液（８０ｍｌ）に、一部の６−ブロモヘキサ−１−エンのテトラヒドロフラン溶液を加えた。反応が始まったら、残りの６−ブロモヘキサ−１−エンテトラヒドロフラン溶液を緩やかに反応液に滴下することで、反応液が緩やかに還流するようにした。滴下終了後、反応液を、７０℃で１時間加熱した。得られたグリニャール試薬（約１２０ｍｌ）は、直接、次の段階の反応に用いた。
前記グリニャール試薬を−７８℃に冷却し、そこに（４Ｓ）−４−イソプロピル−２−（トリフルオロメチル）オキサゾリジン（１７ｇ、９３.４ｍｍｏｌ）のＴＨＦ（４０ｍＬ）溶液を滴下した。得られた反応液を０℃まで加温して１.５時間攪拌した。飽和ＮＨ_４Ｃｌ水溶液（５０ｍＬ）を加えて反応をクエンチさせて、酢酸エチルで抽出した（４×１００ｍＬ）。有機相は、硫酸ナトリウム上で乾燥させた後、ろ過し、ろ過液を濃縮させた。残渣を、フラッシュカラムクロマトグラフィーで精製し、移動相として石油エーテル／酢酸エチル（０−４％）使用し、黄色の油状物である表題化合物（１１.５ｇ、４６％）を得た。

ステップ２：（２Ｓ）−３−メチル−２−[（１，１，１−トリフルオロオクト−７−エン−２−イル）アミノ]ブタン酸

ＣｒＯ_３（４８６ｍｇ、４.８６ｍｍｏｌ）をＨ_５ＩＯ_６（３３.２ｇ、１４５.８ｍｍｏｌ）の無水アセトニトリル（１００.０ｍＬ）に加えて、室温で１時間攪拌した。反応液を０℃に冷却し、（２Ｓ）−３−メチル−２−[（１，１，１−トリフルオロオクト−７−エン−２−イル）アミノ]−ブタン−１−オール（６.５ｇ、２４.３ｍｍｏｌ、２０ｍｌのアセトニトリルに溶解）を滴下し、０℃で１.５時間攪拌してから、Ｋ２ＨＰＯ４（１６.３ｇを５０ｍＬの水に溶解）を加えて反応をクエンチし、反応液を、酢酸エチル（３×１００ｍＬ）で抽出した。有機相を併せし、飽和食塩水で洗浄し、硫酸ナトリウム上で乾燥させてから濃縮した。残渣は、フラッシュカラムクロマトグラフィー（溶出剤：石油エーテル／酢酸エチル（０−４％−１０％））で溶出して精製し、黄色の油状物である表題化合物（１.０４ｇ、１２.７％）を得た。

ステップ３：（２Ｓ）−３−メチル−２−[（１，１，１−トリフルオロオクト−７−エン−２−イル）アミノ]ブタノエート

（２Ｓ）−３−メチル−２−[（１，１，１−トリフルオロオクト−７−エン−２−イル）アミノ]ブタン酸（６５０ｍｇ、２.３ｍｍｏｌ）の酢酸ｔｅｒｔ−ブチル（１０.０ｍＬ）溶液に、７０％ＨＣｌＯ_４（３９８ｍｇ、２.８ｍｍｏｌ）溶液を滴下し、０℃で１時間攪拌した。反応液の温度を室温まで上げ、１６時間攪拌し、反応液を酢酸エチル（５０ｍＬ）に注いでから、続いて水（３０ｍＬ）、炭酸水素ナトリウム水溶液（３０ｍｌ）、飽和食塩水で洗浄し、その後硫酸ナトリウム上で乾燥し、ろ過し、ろ過液を濃縮させた。残渣は、フラッシュカラムクロマトグラフィー（溶出剤：石油エーテル／酢酸エチル（０〜２％〜５％〜１０％））で溶出して精製し、無色の油状物である表題化合物（０.５６ｇ、７２％）を得た。

ステップ４：（２Ｓ）− ３−メチル−２−[（１，１，１−トリフルオロ−７−ヒドロキシヘプタ−２−イル）アミノ]ブタノエート

（２Ｓ）−３−メチル−２−[（１，１，１−トリフルオロオクト−７−エン−２−イル）アミノ］−ブタノエート（１.４ｇ、４.２ｍｍｏｌ）の無水ＤＣＭ（６ｍＬ）とメタノール（６ｍＬ）溶液を−７８℃まで冷却し、溶液に２分間Ｏ_３を通した。反応液を０℃まで加温し、ＮａＢＨ_４（４８１ｍｇ、１２.７ｍｍｏｌ）を加え、得られた反応液を２時間攪拌した。その後、ＮＨ_４Ｃｌ水溶液（４ｍＬ）を加えて、反応をクエンチさせ、反応液は、硫酸ナトリウム上で乾燥した後ろ過を行い、ろ過液を濃縮した。残渣は、フラッシュカラムクロマトグラフィー（溶出剤：石油エーテル／酢酸エチル（４％〜１０％））で溶出して精製し、無色の油状物である表題化合物（１.０５ｇ、７２％）を得た。

^１Ｈ ＮＭＲ （ＣＤＣｌ_３）δ３.６３（ｔ，Ｊ＝６.５Ｈｚ，２Ｈ），３.０６（ｄ，Ｊ＝６.０Ｈｚ，１Ｈ），３.０１（ｄ，J＝４.６Ｈｚ，１Ｈ），２.９０−２.７９（ｍ，１Ｈ），１.９２−１.８０（ｍ，１Ｈ），１.６７−１.５５（ｍ，５Ｈ），１.４４（ｓ，８Ｈ），１.４２−１.３１（ｍ，３Ｈ），０.９５−０.８３（ｍ，６Ｈ）．

ステップ５：（２Ｓ）−２−（（７−（２,５−ジオキソ−２,５−ジヒドロ−１Ｈ−ピロール−１−イル）−１,１,１−トリフルオロヘプタン−２−イル）アミノ）−３−メチルブタノエート

窒素存在下、−７８℃で、トリフェニルホスフィン（８４５ｍｇ、３.２ｍｍｏｌ）のＴＨＦ（３５ｍＬ）溶液にＤＩＡＤ（６５１ｍｇ、３.２ｍｍｏｌ）を滴下して添加し、得られた黄色の混合液は、−７８℃で５分間攪拌してから、（２Ｓ）−３−メチル−２−[（１，１，１−トリフルオロ−７−ヒドロキシヘプタン−２−イル）アミノ]ブタノエート（１.１ｇ、３.２２ｍｍｏｌ）のＴＨＦ（５ｍＬ）溶液に添加した。再び５分間攪拌した後、反応液にネオペンチルアルコール（１４２ｍｇ、１.６１ｍｍｏｌ）と１Ｈ−ピロール−２,５−ジオン（３１３ｍｇ、３.２２ｍｍｏｌ）の固体を加えた。室温で、反応液を一晩攪拌してから濃縮した。残渣は、フラッシュカラムクロマトグラフィー（溶出剤：石油エーテル／酢酸エチル（０〜１５％））で溶出して精製し、無色の油状物である表題化合物（５５０ｍｇ、４０.７％）を得た。

^１Ｈ ＮＭＲ（ＣＤＣｌ_３）δ６.６９（ｓ，２Ｈ），３.５２（ｔ，Ｊ＝７.２Ｈｚ，２Ｈ），３.０６−３.０１（ｍ，１Ｈ），２.８４−２.８２（ｍ，１Ｈ），１.８９−１.８７（ｍ，１Ｈ），１.６６−１.５２（ｍ，８Ｈ），１.５０−１.２５（ｍ，９Ｈ），０.９５−０.８６（ｍ，６Ｈ）．

ステップ６：（２Ｓ）−２，５−ジオキソピロール−１−イル−２−｛［７−（２，５−ジオキソ−２，５−ジヒドロ−１Ｈ−ピロール−１−イル）−１，１，１−トリフルオロ−ヘプタン−２−イル］アミノ｝−３−メチルブタノエート

窒素存在下、０℃で、２−（（７−（２，５−ジオキソ−２，５−ジヒドロ−１Ｈ−ピロール−１−イル）−１，１，１−トリフルオロヘプタン−２−イル）アミノ）−３−メチルブタノエート（３５０ｍｇ、０.８４ｍｍｏｌ）の無水ジクロロメタン（６ｍＬ）溶液にＴＦＡ（６ｍＬ）を滴下し、得られた混合液を、室温条件下で２時間攪拌してから、濃縮し、トルエン（２×１０ｍＬ）で共沸してＴＦＡを除去した。窒素存在下、０℃で、残渣を無水ＴＨＦ（５ｍＬ）の中に溶解させて、順次にＤＣＣ（１７１ｍｇ、０.８３ｍｍｏｌ）とトリエチルアミン（２５１ｍｇ、２.４９２ｍｍｏｌ）を加えた。室温で５分間攪拌した後、Ｎ−ヒドロキシスクシンイミド（９６ｍｇ、０.８３ｍｍｏｌ）を加えた。反応液を、室温で１６時間攪拌し、ろ過した後、濃縮した表題化合物の粗生成物（２６０ｍｇ）は、精製段階なしに直接に次の段階の反応に用いた。

（Ｓ）−２−（（（Ｒ）−７−（２，５−ジオキソ−２，５−ジヒドロ−１Ｈ−ピロール−１−イル）−１，１，１−トリフルオロヘプタン−２−イル）アミノ）−３−メチル−ブタン酸、（Ｒ）−ＭＴＭＨ−バリン、および（Ｓ）−２−（（（Ｓ）−７−（２，５−ジオキソ−２，５−ジヒドロ−１水素−ピロール−１−イル）−１，１，１−トリフルオロヘプタン−２−イル）アミノ）−３−メチル−ブタン酸、（Ｓ）−ＭＴＭＨ−バリン

ステップ１:（４Ｓ）−４−イソプロピル２−（トリフルオロメチル）オキサゾリジン

窒素存在下、室温で、一度に（Ｓ）−２−アミノ−３−イソペンタン−１−オール（８５ｇ、８２４ｍｍｏｌ、１.０当量）と２，２，２−トリフルオロ−１−メチルオキシル−エタノール（７５ｇ、５７７ｍｍｏｌ、０.７当量）のトルエン溶液（１.５Ｌ）に、ｐ−トルエンスルホン酸ピリジニウム（１０.４ｇ、４１.２ｍｍｏｌ、０.０５当量）を加えた。混合物を３時間還流させ、Ｄｅａｎ−Ｓｔａｒｋトラップを用いて共沸でメタノールと水を除去した。薄層クロマトグラフィーで反応終了を確認した後、反応物を室温まで冷却させ、ろ過し、ろ過液を濃縮して８６ｇの黄色の油状の表題粗生成物を得た。

ステップ２:（２Ｓ）−３−メチル−２−[（１，１，１−トリフルオロメチル−７−エン−２−イル）アミノ]ブタン

窒素存在下、２０℃で、マグネシウム粉末（１８.２ｇ、７５０ｍｍｏｌ、１.５当量）と触媒のヨウ素のテトラヒドロフラン（５００ｍＬ）混合物の中に、６−ブロモヘキサ−１−エン（８１.５ｇ、４９９.８ｍｍｏｌ、１.０当量）のテトラヒドロフラン（５００ｍＬ）溶液を３０分間以上かけて滴下した。滴下中に、反応温度を６０℃まで加温させた。続いて、６０℃で１.５時間攪拌しながら反応させた後、反応液を室温まで冷却させ、精製なしに直接に次の段階の反応に用いた。
窒素存在下、−７８℃で、前記グリニャール試薬であるブロモ（ヘキサ−５−エニル）マグネシウム（０.５Ｍ、５００ｍＬ、１.２５当量）に、（４Ｓ）−４−イソプロピル−２−トリフルオロメチルオキサゾリジン（３６.６ｇ、２００ｍｍｏｌ、１.００当量）のテトラヒドロフラン（３００ｍＬ）溶液を滴下した。反応液を、−７８℃で３０分間攪拌した後、２０℃まで昇温させ、続いて４.５時間攪拌した。薄層クロマトグラフィー（石油エーテル：酢酸エチル＝５：１）により、反応が終了したのを確認した。混合物は、飽和塩化アンモニウム溶液（５００ｍＬ）でクエンチして、酢酸エチル（１０００ｍＬ×３）で抽出した。併せた有機相は、飽和食塩水（５００ｍＬ×２）で洗浄し、無水硫酸ナトリウム上で乾燥し、ろ過してから、濃縮した。残渣を、シリカゲルカラムクロマトグラフィー（石油エーテル：酢酸エチル＝２０：１）で精製して、１９ｇ（収率３５.５％）の黄色の油状の表題生成物を得た。

ステップ３:（２Ｓ）−３−メチル−２−[（１，１，１−トリフルオロメチル−７−エン−２−イル）]ブタン酸

０℃で、（２Ｓ）−３−メチル−２−[（１，１，１−トリフルオロオクト−７−エン−２−イル）アミノ]ブタン−１−オール（１９ｇ、７１ｍｍｏｌ、１.０当量）のアセトニトリル（５１５ｍＬ）混合液に順次、過ヨウ素酸（４８.６ｇ、２１３.２ｍｍｏｌ、３当量）、三酸化クロム（１４２ｍｇ、１.４ｍｍｏｌ、０.０２当量）と水を加えた。混合物は、０℃で４時間攪拌した。薄層クロマトグラフィーで反応が終了したのを確認した。混合物は、減圧濃縮して乾燥させ、残渣を、シリカゲルカラムクロマトグラフィー（石油エーテル：酢酸エチル＝１０：１）で精製し、黄色の油状の表題化合物（１６ｇ、収率８０％）を得た。

ステップ４:（２Ｓ）−ｔｅｒｔ−ブチル ３−メチル−２−[（１，１，１−トリフルオロメチル−７−エン−２−イル）アミノ]ブタノエート

窒素存在下、３０℃で、（２Ｓ）−３−メチル−２−[（１，１，１−トリフルオロメチル−７−エン−２−イル）アミノ]ブタン酸（７ｇ、２４.９ｍｍｏｌ、１.０当量）の酢酸ｔｅｒｔ−ブチル（２００ｍＬ）の溶液に、一度に７０％過塩素酸（７.５ｇ、７４.７ｍｍｏｌ、３当量）を加えた。混合物は、３０℃で、３時間攪拌した。薄層クロマトグラフィーで反応が終了したのを確認した。酢酸エチル（４００ｍＬ）で混合物を希釈し、４００ｍＬの水で洗浄した。有機相は、無水硫酸ナトリウム上で乾燥させた後、濃縮した。残渣は、シリカゲルカラムクロマトグラフィーで精製（石油エーテル：酢酸エチル＝６０：１）して黄色の油状の表題化合物（７ｇ、収率８３.４％）を得た。

ステップ５:（２Ｓ）−ｔｅｒｔ−ブチル ３−メチル−２−[（１，１，１−トリフルオロメチル−７−ヒドロキシヘプタン−２−イル）アミノ]ブタノエート

−７８℃で、（２Ｓ）−ｔｅｒｔ−ブチル ３−メチル−２−[（１，１，１−トリフルオロメチル−７−エン−２−イル）アミノ]ブタノエート（１４.０ｇ、４１.５ｍｍｏｌ、１当量）のジクロロメタン（１００ｍＬ）とメタノール（１００ｍＬ）混合溶液に、オゾンを３分間通した。窒素で余分なオゾンを除去した後、水素化ホウ素ナトリウム（４.７ｇ、１２４.５ｍｍｏｌ、３当量）を前記反応液の中に加えた。反応液は、２０℃で３時間攪拌した。薄層クロマトグラフィーで、原料が完全に消費されたことを確認した。混合物は、飽和塩化アンモニウム溶液（５０ｍＬ）でクエンチした後、酢酸エチル（２００ｍＬ）で抽出した。有機相の濃縮後に粗生成物を得、シリカゲルカラムクロマトグラフィーで精製（石油エーテル：酢酸エチル＝２０：１）して、黄色の油状の表題化合物（１１ｇ、収率７７.７％）を得た。

ステップ６：（２Ｓ）−ｔｅｒｔ−ブチル ２−（（７−（２,５−ジオキソ−２,５−ジヒドロ−１Ｈ−ピロール−１−イル）−１，１，１−トリフルオロヘプタン−２−イル）アミノ）−３−メチルブタノエート

窒素存在下、−７８℃で、トリフェニルホスフィン（４.６１ｇ、１７.５７ｍｍｏｌ、１.５０当量）のテトラヒドロフラン（４０ｍＬ）溶液に、アゾジカルボン酸ジイソプロピル（３.５５ｇ、１７.５７ｍｍｏｌ、１.５０当量）を滴下して添加した。−７８℃で、５分間攪拌した後、（２Ｓ）−ｔｅｒｔ−ブチル ３−メチル−２−[（１，１，１−トリフルオロメチル−７−ヒドロキシヘプタン−２−イル）アミノ］ブタノエート（４.０ｇ、１１.７ｍｍｏｌ、１当量）のテトラヒドロフラン（５ｍＬ）溶液を、前記反応液の中に添加した。５分間攪拌した後、順次、２，２−ジメチルプロパン−１−オール（７７４.６ｍｇ、８.８ｍｍｏｌ、０.７５当量）と１Ｈ−ピロール−２,５−ジオン（１.７ｇ、１７.６ｍｍｏｌ、１.５当量）を前記反応液に加えた。３０℃で反応液を３時間攪拌した。薄層クロマトグラフィーで反応が終了したことを確認し、反応液を濃縮して乾燥させ、残渣を、シリカゲルカラムクロマトグラフィーで精製（石油エーテル：酢酸エチル＝１０：１）して、白色固体の表題化合物（４.０ｇ、９.５１ｍｍｏｌ、収率８１.１７％）を得た。

ステップ７：（Ｓ）−２−（（（Ｒ）−７−（２，５−ジオキソ−２，５−ジヒドロ−１Ｈ−ピロール−１−イル）−１，１，１−トリフルオロヘプタン−２−イル）アミノ）−３−メチル−ブタン酸、（Ｒ）−ＭＴＭＨ−バリン及び（Ｓ）−２−（（（Ｓ）−７−（２，５−ジオキソ−２，５−ジヒドロ−１Ｈ−ピロール−１−イル）−１，１，１−トリフルオロヘプタン−２−イル）アミノ）−３−メチル−ブタン酸、（Ｓ）−ＭＴＭＨ−バリン

３０℃で、（２Ｓ）−ｔｅｒｔ−ブチル ２−（（７−（２,５−ジオキソ−２，５−ジヒドロ−１Ｈ−ピロール−１−イル）−１，１，１−トリフルオロヘプタン−２−イル）アミノ）−３−メチルブタノエート（６.０ｇ、１４.３ｍｍｏｌ、１当量）のジクロロメタン（４０ｍＬ）溶液と、トリフルオロ酢酸（４０ｍＬ）の混合物を、１２時間攪拌した。反応液を濃縮し、残渣を、高速液体クロマトグラフィーで精製（Ｓｈｉｍａｄｚｕ ｐｕｍｐ ＬＣ−２０Ａ、カラム：ＳＹＮＥＲＧＩ ２００×５０ １０μｍ、移動相：Ａは水（０.７５‰のＴＦＡ，ｖ/ｖ）、Ｂはアセトニトリル、勾配：Ｂ ３０−６０％、勾配時間：３０分、保持時間：２５−３０分、流速：８０ｍＬ／分）して、ピーク１の区画：白色の固体の中間体２（３.２０ｇ、８.７８ｍｍｏｌ、収率６１.５５％）とピーク２の区画：黄色の油状の中間体３（１.１０ｇ、３.０２ｍｍｏｌ、収率２１.１６％）とを得た。

中間体２、（Ｒ）−ＭＴＭＨ−バリン：^１Ｈ ＮＭＲ（ＣＤＣｌ_３）δ６.７２（ｓ，２Ｈ），３.５４（ｔ，２Ｈ），３.３０（ｄ，１Ｈ），３.００（ｍ，１Ｈ），２.１３（ｍ，１Ｈ），１.７５−１.２５（ｍ，８Ｈ），１.０３（ｄ，３Ｈ），０.９８（ｄ，３Ｈ）． ＬＣＭＳ：３６５.１（ＭＨ^＋）。
中間体２、（Ｓ）−ＭＴＭＨ−バリン：^１Ｈ ＮＭＲ（ＣＤＣｌ_３）δ６.７２（ｓ，２Ｈ），３.５４（ｔ，２Ｈ），３.３３（ｄ，２Ｈ），２.９７（ｍ，１Ｈ），２.０２（ｍ，１Ｈ），１.７５−１.２５（ｍ，８Ｈ），１.０３（ｄ，３Ｈ），０.９９（ｄ，３Ｈ）． ＬＣＭＳ：３６５.１（ＭＨ^＋）。

中間体４

Ｃｉｔ−ＰＡＢ−ＯＨ
ステップ１：Ｆｍｏｃ−Ｃｉｔ

窒素存在下、０℃で、Ｆｍｏｃ−Ｃｌ（３５.４０ｇ、１３６.８４ｍｍｏｌ、１.２０当量）の１，４−ジオキサン（１００ｍＬ）溶液を、Ｌ−シトルリン（２０.００ｇ、１１４.１６ｍｍｏｌ、１.００当量）の１０％の炭酸ナトリウム（２００ｍＬ）溶液に、少なくとも５分間かけて滴下した。反応液を２０℃まで昇温させ、４時間攪拌した。薄層クロマトグラフィーで原料が完全に消費されたことを確認した。反応液に水（５０ｍＬ）を入れ、水相は、２Ｍの塩酸（５０ｍＬ）でｐＨが２−３になるまで調整し、酢酸エチル（１５０ｍＬ×３）で抽出し、併せた有機相は、飽和食塩水で洗浄（１００ｍＬ×２）して、無水硫酸ナトリウム上で乾燥し、ろ過、濃縮してから、白色固体の表題化合物（４０.００ｇ、１００.６５ｍｍｏｌ、収率８８.１７％）を得た。ＬＣＭＳ（ＥＳＩ）：３９８.１（ＭＨ^＋）。

ステップ２:Ｆｍｏｃ−Ｃｉｔ−ＰＡＢ−ＯＨ

窒素存在下、２０℃で、３０分かけて、ＥＥＤＱ（４９.７８ｇ、２０１.３０ｍｍｏｌ、２.０当量）のメタノール（５００ｍＬ）溶液を、Ｆｍｏｃ−ｃｉｔ（４０.００ｇ、１００.６５ｍｍｏｌ、１.００当量）と４−アミノベンジルアルコール（１４.８７ｇ、１２０.７８ｍｍｏｌ、１.２当量）のジクロロメタン（１０００ｍＬ）溶液に滴下した。２０℃で、反応液を１６時間攪拌した。薄層クロマトグラフィー（メタノール：酢酸エチル＝１:１０）で、原料が完全に消費されたことを確認した。反応液を濃縮し、残渣を、ｔｅｒｔ−ブチルメチルエーテル（２００ｍＬ×３）で洗浄し、ろ過し、乾燥した固体を集めて白色の固体の表題化合物（４５.００ｇ、８９.５４ｍｍｏｌ、収率８８.９６％）を得た。

ステップ３:Ｃｉｔ−ＰＡＢ−ＯＨ

２０℃で、１０分かけて、ピペリジン（２１.９３ｇ、２５７.５８ｍｍｏｌ、８.６３当量）のＤＭＦ（２０ｍＬ）溶液を、Ｆｍｏｃ−ｃｉｔ−ＰＡＢ−ＯＨ（１５.００ｇ、２９.８５ｍｍｏｌ、１.００当量）のＤＭＦ（１２４.５ｍＬ）溶液に１０分かけて滴下した。反応液は、２０℃で３時間攪拌し、薄層クロマトグラフィー（ジクロロメタン：メタノール＝５：１）で原料が完全に消費されたことを確認した。反応液は、ＤＭＦ（３０ｍＬ×２）で洗浄した。反応液を乾燥するまで濃縮し、残渣を、高速液体クロマトグラフィー（ギ酸系）で精製して白色の固体の表題化合物（７.５０ｇ、２６.７６ｍｍｏｌ、収率８９.６３％）を得た。ＬＣＭＳ（ＥＳＩ）：２１８.１（ＭＨ^＋）。

ステップ１：（Ｓ）−メチル２−（（ベンジルオキシカルボニル）アミノ）−５−モルホリノ−５−オキソペンタノアート

Ｚ−Ｇｌｕ−ＯＭｅ（１０ｇ、３３.８７ｍｍｏｌ）の無水ＤＭＦ（１００ｍＬ）溶液に、ジイソプロピルエチルアミン（１３.１３ｇ、１０１.６０ｍｍｏｌ）、ＨＡＴＵ（１５.４５ｇ、４０.６４ｍｍｏｌ）及びモルホリン（４.４３ｇ、５０.８ｍｍｏｌ）を加えた。混合物は、２０℃で１６時間攪拌した後、２００ｍＬの水と５００ｍＬの酢酸エチルの混合液に加えた。有機相を分離し、水（１００ｍＬ×２）、飽和食塩水（１００ｍＬ）で洗浄し、無水硫黄酸ナトリウム上で乾燥させ、ろ過し、濃縮した後、油状の表題化合物（１１ｇ）の粗生成物を得た。ＭＳ：３６５（ＭＨ^＋）

ステップ２：(Ｓ）−メチル２−（（ベンジルオキシカルボニル）アミノ）−５−モルホリノペンタノアート

０℃で、（Ｓ）−メチル−２−（（ベンジルオキシカルボニル）アミノ）−５−モルホリン−５−オキソペンタノアート（３ｇ、８.２ｍｍｏｌ）の無水テトラヒドロフラン（４０ｍＬ）溶液に、１０Ｍのボランジメチルスルフィド錯体のテトラヒドロフラン溶液（４ｍＬ）を加えて、混合物を１６℃まで昇温させ、１６時間攪拌させた。反応は、順次、メタノールと、４０ｍＬ、１Ｍの塩酸でクエンチし、混合物を９０℃で３０分間攪拌した。減圧蒸留で溶剤を除去し、残渣を、１００ｍＬの水に溶解し、水酸化ナトリウム溶液でｐＨを１０に調整し、酢酸エチル（１００ｍＬ×３）で抽出し、有機相を併せて、水（１００ｍＬ）、飽和食塩水（５０ｍＬ×２）で洗浄した後、無水硫酸ナトリウム上で乾燥し、ろ過して、減圧濃縮を行った。残渣は、カラムクロマトグラフィー（ジクロロメタン：メタノール＝１０：１）で精製して、油状の表題化合物（５.５ｇ、収率４７.７％）を得た。ＭＳ：３５１（ＭＨ^＋）。

ステップ３：（Ｓ）−２−（（ベンジルオキシカルボニル）アミノ）−５−モルホリンペンタン酸

０℃で、水酸化リチウム一水和物（１.３２ｇ、３１.３９ｍｍｏｌ）を（Ｓ）−メチル−（（ベンジルオキシカルボニル）アミノ）−５−モルホリノペンタノアート（５.５ｇ、１５.７０ｍｍｏｌ）のテトラヒドロフラン（５０ｍＬ）溶液中に加えた。０℃で２時間攪拌した後、減圧蒸留で溶剤を除去して表題化合物の粗生成物（５ｇ）を得た。

ステップ４：（Ｓ）−ベンジル（１−（（４−（ヒドロキシメチル）フェニル）アミノ）−５−モルホリン−１−オキソペンタン−２−イル）カーバメート

（Ｓ）−２−（（ベンジルオキシカルボニル）アミノ）−５−モルホリンペンタン酸（３.００ｇ、８.９２ｍｍｏｌ）の無水ＤＭＦ（２００ｍＬ）溶液に、順次、ＨＯＢｔ（１.２１ｇ、８.９２ｍｍｏｌ）、ＥＤＣＩ（１.７１ｇ、８.９２ｍｍｏｌ）、４−アミノベンジルアルコール（１.６５ｇ、１３.３８ｍｍｏｌ）を加えて、混合物を０℃で６時間攪拌した後、１００ｍＬの水と１５０ｍＬの酢酸エチルの混合溶媒に注いだ。有機相を分離し、順に、水（５０ｍＬ×２）、飽和食塩水（５０ｍＬ）で洗浄し、無水硫酸ナトリウム上で乾燥してから、減圧濃縮を行った。残渣は、カラムクロマトグラフィー（ジクロロメタン：メタノール＝１０：１）で精製して表題生成物（１.２ｇ、収率３０.４７）を得た。ＭＳ：４４２（ＭＨ^＋）。

ステップ５:（Ｓ）−２−アミノ−Ｎ−（４−（ヒドロキシメチル）フェニル）−５−モルホリンペンタンアミド

窒素存在下、（Ｓ）−ベンジル（１−（（４−（ヒドロキシメチル）フェニル）アミノ）−５−モルホリン−１−オキソペンタン−２−イル）カーバメート（６００ｍｇ、１.３６ｍｍｏｌ）のメタノール（５０ｍＬ）の溶液の中に、パラジウム炭素（２００ｍｇ）を加えた。懸濁物を真空条件下で脱気し、水素置換を数回行った。反応液は、２５℃で、１５ｐｓｉの水素の圧力下で、０.５時間攪拌しながら反応させた。触媒をろ過し、ろ過液を濃縮して、表題化合物の粗生成物（３５０ｍｇ）を得た。ＭＳ：３０８（ＭＨ^＋）

ｔｅｒｔ−ブチル（（トランス−４−（２−アミノ−３−（（４−（ヒドロキシメチル）フェニル）アミノ）−３−オキソプロピル）シクロメチル）カルバメート

ステップ１:トランス−４−（（（ｔｅｒｔ−ブトキシカルボニル）アミノ）メチル）シクロヘキサンカルボン酸

窒素存在下、１５℃で、トランス−４−（アミノメチル）シクロヘキサンカルボン酸（５０ｇ、３１８ｍｍｏｌ）とＢｏｃ_２Ｏ（６９.４ｇ、３１８ｍｍｏｌ）混合物の水（５００ｍＬ）溶液に水酸化ナトリウム（１２.７ｇ、３１８ｍｍｏｌ）の水溶液（５００ｍＬ）を加えた。反応液は、１５℃で１６時間攪拌してから、薄層クロマトグラフィーで、原料が完全に消費されたことを確認した。反応液は、酢酸（４０ｍＬ）によりｐＨを３に調整し、酢酸エチルで抽出（４００ｍＬ×３）した。併せた有機相は、無水硫酸ナトリウム上で乾燥し、ろ過し、濃縮した後、白色固体の表題化合物の粗生成物（７７ｇ）を得た。

^１Ｈ ＮＭＲ（ＣＤＣｌ_３）δ４.６２（ｍ，１Ｈ），２.９８（ｍ，２Ｈ），２.２５（ｍ，１Ｈ），２.０４（ｄ，２Ｈ），１.８３（ｄ，２Ｈ），１.４３８−１.３７（ｍ，１２Ｈ），０.９６（ｍ，２Ｈ）

ステップ２：ｔｅｒｔ−ブチル（（トランス−４−（ヒドロキシメチル）シクロヘキシル）メチル）カーバメート

窒素存在下、０℃で、トランス−４−（（（ｔｅｒｔ−ブトキシカルボニル）アミノ）メチル）シクロヘキサンカルボン酸（３７.０ｇ、１４３.８ｍｍｏｌ）のテトラヒドロフラン溶液（１Ｌ）に、ＬｉＡｌＨ_４を添加（８.２ｇ、２１５.７ｍｍｏｌ）した。混合物は、１５℃で１６時間攪拌した後、薄層クロマトグラフィーで反応が終了したことを確認した。反応液は、順次、水（８.２ｍＬ）、１５％水酸化ナトリウム水溶液（８.２ｍＬ）、水（２４.６ｍＬ）でクエンチし、ろ過した。ろ過液は、濃縮して乾燥させ、残渣をシリカゲルカラムクロマトグラフィーで精製して（石油エーテル：酢酸エチル＝２：１）、白色固体の表題化合物（１９.０ｇ、収率５４.３％）を得た。

^１ＨＮＭＲ（ＣＤＣｌ_３）δ４.６１（ｂｒ ｓ，１Ｈ），３.４５（ｄ，２Ｈ），２.９８（ｔ，２Ｈ），１.８１（ｍ，４Ｈ），１.４４（ｍ，１１Ｈ），０.９５（ｍ，４Ｈ）

ステップ３：ｔｅｒｔ−ブチル（（トランス−４−ホルミルシクロヘキシ）メチル）カーバメート

窒素存在下、−６５℃で、塩化オキサリル（１１.９ｇ、９３.７ｍｍｏｌ）のジクロロメタン（３７５ｍＬ）溶液に、ジメチルスルホキシド（１１.０ｇ、１４０.５ｍｍｏｌ）のジクロロメタン（６７５ｍＬ）溶液を加えた。反応液を、−６５℃で、３０分間反応した後、ｔｅｒｔ−ブチル（（トランス−４−（ヒドロキシメチル）シクロヘキシル）メチル）カーバメート（１９.００ｇ、７８.０８ｍｍｏｌ）のジクロロメタン（１５０ｍＬ）溶液に滴下して添加し、混合物を、−６５℃で３０分間攪拌した。薄層クロマトグラフィーでほとんどの原料が消費されたことを確認した。トリエチルアミン（１９.４ｇ、１９１.３ｍｍｏｌ）のジクロロメタン（７５ｍＬ）溶液を添加して、続いて−６５℃、３０分間攪拌を行った。反応液を２０℃に昇温させ、飽和塩化アンモニウム溶液（１５０ｍＬ）でクエンチし、ジクロロメタン（３００ｍＬ×３）で抽出した。有機相を併せて、無水硫酸ナトリウム上で乾燥し、ろ過し、濃縮して黄色油状の表題化合物の粗生成物（１９ｇ）を得た。

ステップ４：メチル ２−（（ベンジルオキシカルボニル）アミノ）−３−（トランス−４−（（（ｔｅｒｔ−ブトキシカルボニル）アミノ）メチル）シクロヘキシル）アクリレート

窒素存在下、２０℃で、ｔｅｒｔ−ブチル（（トランス−４−ホルミルシクロヘキシル）メチル）カーバメート（１９.０ｇ、７８.７ｍｍｏｌ）およびメチル ２−（（ベンジルオキシカルボニル）アミノ）−２−（ジメトキシホスホリル）酢酸エステル（２８.７ｇ、８６.６ｍｍｏｌ）のジクロロメタン（６００ｍＬ）溶液に、一回でＤＢＵ（１８.０ｇ,１１８.１ｍｍｏｌ）を加え、反応液を２０℃で２時間攪拌した。薄層クロマトグラフィーで、反応が終了したことを確認した。反応液を飽和炭酸水素ナトリウム水溶液（３００ｍＬ×２）で洗浄した。有機相を濃縮し、残渣をシリカゲルカラムクロマトグラフィーで精製（石油エーテル：酢酸エチル＝３：１）し、無色透明油状の表題化合物（２０ｇ、収率５６.９％）を得た。

^１Ｈ ＮＭＲ（ＣＤＣｌ_３）δ７.３５（ｍ，５Ｈ），６.４５（ｄ，１Ｈ），６.０８（ｂｒ ｓ，１Ｈ），５.１５（ｓ，２Ｈ），４.６０（ｂｒ ｓ，１Ｈ），３.７４（ｓ，３Ｈ），２.９７（ｍ，２Ｈ），２.３２（ｍ，１Ｈ），１.７７（ｍ，４Ｈ），１.４５（ｓ，９Ｈ），１.１２（ｍ，２Ｈ），０.９５（ｍ，３Ｈ）。

ステップ５：２−（（（ベンジルオキシ）カルボニル）アミノ）−３−（トランス−４−（（（ｔｅｒｔ−ブトキシカルボニル）アミノ）メチル）シクロヘキシル）アクリル酸

窒素存在下、２５℃で、メチル ２−（（ベンジルオキシカルボニル）アミノ）−３−（トランス−４−（（（ｔｅｒｔ−ブトキシカルボニル）アミノ）メチル）シクロヘキシル）アクリレート（２０.０ｇ、４４.８ｍｍｏｌ）のメタノール（１５０ｍＬ）溶液に、水酸化リチウム一水和物（５.６ｇ、１３４.４ｍｍｏｌ）の水溶液（５０ｍＬ）を加えた。混合物を、２５℃で１６時間攪拌した。薄層クロマトグラフィーで反応が終了したことを確認し、酢酸でｐＨを３に調整し、濃縮してメタノールを除去した。水相を、酢酸エチル（５０ｍＬ×３）で抽出し、併せた有機相を、無水硫酸ナトリウム上で乾燥させ、ろ過、濃縮して、無色で透明な表題化合物の粗生成物（１８.００ｇ）を得た。

ステップ６：ベンジル（１−（トランス−４−（（（ｔｅｒｔ−ブトキシカルボニル）アミノ）メチル）シクロヘキシル）−３−（（４−（ヒドロキシメチル）フェニル）アミノ）−３−オキソプロプ−１−エン−２−イル）カーバメート

窒素存在下、２５℃で、２−（（ベンジルオキシカルボニル）アミノ）−３−（トランス−４−（（（ｔｅｒｔ−ブトキシカルボニル）アミノ）メチル）シクロヘキシル）アクリル酸（１８ｇ、４１.６ｍｍｏｌ）、４−アミノベンジルアルコール（７.７ｇ、６２.４ｍｍｏｌ）、ＨＡＴＵ（２３.７ｇ、６２.４ｍｍｏｌ）とジイソプロピルエチルアミン（１６.１ｇ、１２４.９ｍｇ）のＤＭＦ（６００ｍＬ）混合物を、１６時間攪拌した。薄層クロマトグラフィーで反応が終了したことを確認し、反応液を、酢酸エチル（６００ｍＬ）で希釈して、飽和塩化アンモニウム溶液（６００ｍＬ×３）で洗浄した。有機相を分離し、無水硫酸ナトリウム上で乾燥し、ろ過、濃縮を行った。残渣を、シリカゲルカラムクロマトグラフィー（石油エーテル：酢酸エチル＝１:１）で精製し、褐色固体の表題化合物（１４.００ｇ、２６.０４ｍｍｏｌ、収率:６２.５６％）を得た。ＭＳ：５３８（ＭＨ^＋）

ステップ７：ｔｅｒｔ−ブチル（（トランス−４−（２−アミノ−３−（（４−（ヒドロキシメチル）フェニル）アミノ）−３−オキソプロピル）シクロヘキシル）メチル）カーバメート

窒素存在下、ベンジル（１−（トランス−４−（（（ｔｅｒｔ−ブトキシカルボニル）アミノ）メチル）シクロヘキシル）−３−（（４−（ヒドロキシメチル）フェニル）アミノ）−３−オキソプロピル−１−エン−２−イル）カーバメート（７.０ｇ、１３.０ｍｍｏｌ）のメタノール（１００ｍＬ）溶液に、１０％パラジウム炭素（１.０ｇ）を加えた。懸濁液を、真空条件下で脱気し、水素置換を数回行った。混合物を２５℃で攪拌しながら、２０分間水素化（１５ｐｓｉ）を行った。薄層クロマトグラフィーで原料が完全に消費されたことを確認した後、ろ過し、ろ過液を濃縮した。残渣を分取高速液体クロマトグラフィーで精製して、白色固体の表題化合物（１.４ｇ、収率：２６.３％）を得た。ＭＳ：４０６（ＭＨ^＋）

Ｃｉｔ−ＡＢＡ−ＰＡＢ−ＯＨ
ステップ１：４−（（（（９Ｈ−フルオレン−９−イル）メチルオキシル）カルボニル）アミノ）ブタン酸

窒素存在下、０℃で、４−アミノブタン酸（５.０ｇ、４８.５ｍｍｏｌ、１当量）の１０％炭酸ナトリウム（１６.５ｇ、１５５.７ｍｍｏｌ、３.２当量、水１５０ｍＬ）水溶液の中に、（９Ｈ−フルオレン−９−イル）メチルカルボニルクロリデート（１３.８ｇ、５３.３ｍｍｏｌ、１.１当量）の１，４−ジオキサン（１００ｍＬ）溶液を１０分かけて滴下した。混合物は、２０℃で４時間攪拌した後、薄層クロマトグラフィーで反応が終了したことを確認し、反応液を、２Ｍの塩酸溶液でｐＨを２−３に調整し、酢酸エチル（２５０ｍＬｘ３）で抽出し、有機相を併せて、飽和食塩水で洗浄（１５０ｍＬ×２）を行い、無水硫酸ナトリウム上で乾燥させた後、ろ過し、真空濃縮して白色固体の表題化合物の粗生成物（１６ｇ）を得た。ＬＣＭＳ：３２６.１（ＭＨ^＋）。

ステップ２：（９Ｈ−フルオレン−９−イル）メチル（４−（（４−（ヒドロキシメチル）フェニル）アミノ）−４−オキソブチル）カーバメート

２０℃で、４−（（（（９Ｈ−フルオレン−９−イル）メトキシ）カルボニル）アミノ）ブタン酸（１６.０ｇ、４９ｍｍｏｌ、１当量）のＤＭＦ（２００ｍＬ）溶液の中に、順次、ＨＡＴＵ（２０.６ｇ、５４.１ｍｍｏｌ、１.１当量）、ジイソプロピルエチルアミン（１９.１ｇ、１４７.５ｍｍｏｌ、３当量）を加えて、３０分間攪拌した後、４−アミノベンジルアルコール（７.３ｇ、５９.０ｍｍｏｌ、１.２当量）を一回で当該反応液の中に添加した。混合物を、２０℃で１６時間攪拌した。薄層クロマトグラフィーで反応が終了したことを確認した後、反応液を真空下で濃縮し、残渣を、ｔｅｒｔ−ブチルメチルエーテル（３００ｍＬ×３）で洗浄した後、ろ過し、ろ過液を濃縮して、黄色固体の表題化合物の粗生成物（１５ｇ）を得た。ＬＣＭＳ:４３１.２（ＭＨ^＋）。

ステップ３：４−アミノ−Ｎ−（４−（ヒドロキシメチル）フェニル）ブタンアミド

２０℃で、（９Ｈ−フルオレン−９−イル）メチル（４−（（４−（ヒドロキシメチル）フェニル）アミノ）−４−オキソブチル）カーバメート（５.０ｇ、１１.６ｍｍｏｌ、１当量）のＤＭＦ（４０ｍＬ）溶液に、一回でピペリジン（７.９ｇ、９２.９ｍｍｏｌ、８当量）を加えた。混合物を２０℃で３時間攪拌し、薄層クロマトグラフィー（ジクロロメタン：メタノール＝５:１）で原料が完全に消費されたことを確認した後、反応液を濃縮し、黄色固体の表題化合物の粗生成物（５ｇ）を得た。ＬＣＭＳ：２０９.１（ＭＨ^＋）。

ステップ４：Ｆｍｏｃ−Ｃｉｔ−ＡＢＡ−ＰＡＢ−ＯＨ

２０℃で、４−アミノ−Ｎ−（４−（ヒドロキシメチル）フェニル）ブタンアミド（６００ｍｇ、２.９ｍｍｏｌ、１当量）とＦｍｏｃ−ｃｉｔ（１.３ｇ、３.２ｍｍｏｌ、１.１当量）のジクロロメタン（８ｍＬ）溶液に、ＥＥＤＱ（１.４ｇ、５.８ｍｍｏｌ、２当量）のメタノール（８ｍＬ）溶液を滴下し、反応液を２０℃で１６時間攪拌した。薄層クロマトグラフィー（ジクロロメタン：メタノール＝５:１）で反応がしたことを確認した後、反応液を濃縮し、残渣を分取用薄層クロマトグラフィー（ジクロロメタン：メタノール＝５:１）で精製し、白色固体の表題化合物（４４０ｍｇ、収率：２６％）を得た。ＬＣＭＳ：５８８.３（ＭＨ^＋）

ステップ５：Ｃｉｔ−ＡＢＡ−ＰＡＢ−ＯＨ

２０℃で、Ｆｍｏｃ−Ｃｉｔ−ＡＢＡ−ＰＡＢ−ＯＨ（４４０ｍｇ、７４９μｍｏｌ、１当量）のＤＭＦ（１０ｍＬ）溶液に、一回でピペリジン（５１０ｍｇ、６ｍｍｏｌ、８当量）を加え、反応液を２０℃で３時間攪拌した。薄層クロマトグラフィー（ジクロロメタン：メタノール＝５:１）で反応が終了したことを確認した後、反応液を濃縮し、残渣を分取用薄層クロマトグラフィー（ＳｉＯ_２，ジクロロメタン：メタノール＝
５: １）で精製し、白色固体の表題化合物の粗生成物（３２０ｍｇ）を得た。ＬＣＭＳ: ３６６.２（ＭＨ^＋）

実施例１

ＭＴＭＨ−Ｖａｌ−Ｃｉｔ−ＰＡＢＯ（ＣＯ）−ＭＭＡＥ

ステップ１：ＭＴＭＨ−Ｖａｌ−Ｃｉｔ−ＰＡＢ−ＯＨ

窒素存在下、（２Ｓ）−２,５−ジオキソピロリジン−１−イル−２−{[７−（２,５−ジオキソ−２,５−ジヒドロ−１Ｈ−ピロール−１−イル）−１，１，１−トリフルオロヘプタン−２−イル]アミノ}−３−メチルブタノエート（中間体１）（０.５６ｍｍｏｌ）のＤＭＦ（５ｍＬ）溶液に、Ｃｉｔ−ＰＡＢ−ＯＨ（中間体４）（０.５６ｍｍｏｌ）を加えて、混合物を室温で１６時間攪拌した。減圧で溶媒を除去し、ねばねばする油状残渣を、ｔｅｒｔ−ブチルメチルエーテル（１０ｍＬ×２）で洗浄し、表題化合物の粗生成物を得、精製せずにに次の段階の反応に用いた。ＬＣＭＳ（ＥＳＩ）：６２７.３（ＭＨ^＋）。

ステップ２：ＭＴＭＨ−バリン−Ｃｉｔ−ＰＡＢ（４−ニトロフェニル）カーボネート

ＭＴＭＨ−Ｖａｌ−Ｃｉｔ−ＰＡＢ−ＯＨ（粗生成物２６０ｍｇ、０.５６ｍｍｏｌ）のＤＭＦ（３ｍＬ）溶液に、ビス（４−ニトロフェニル）カーボネート（３４０ｍｇ、１.１２ｍｍｏｌ）とジイソプロピルエチルアミン（１０８ｍｇ、０.８４ｍｍｏｌ）を加え、反応液を室温で１時間攪拌した後、濃縮した。残渣をｔｅｒｔ−ブチルメチルエーテル（１０ｍＬ×２）で洗浄し、表題化合物を得、精製することなく次の段階の反応に用いた。ＬＣＭＳ（ＥＳＩ）：７９２.３（ＭＨ^＋）。

ステップ３：ＭＴＭＨ−Ｖａｌ−Ｃｉｔ−ＰＡＢＯ（ＣＯ）−ＭＭＡＥ

ＭＭＡＥ（０.２８ｍｍｏｌ）とＭＴＭＨ−Ｖａｌ−Ｃｉｔ−ＰＡＢ（４−ニトロフェニル）カーボネート（０.５６ｍｍｏｌ）の無水ＤＭＦ（２.５ｍＬ）溶液中に、ＨＯＢｔ（２３ｍｇ、０.１７ｍｍｏｌ）を加えて、混合物を室温で２分間攪拌させた後、０.５ｍＬのピリジンを加え、室温で１６時間攪拌した後、反応液を濃縮した。残渣を高速液体クロマトグラフィーで精製し、白色固体の表題化合物（４０ｍｇ、収率：１０.４％）を得た。ＬＣＭＳ（ＥＳＩ）：＝６８５.９[（Ｍ/２）Ｈ^＋]。

実施例２

（Ｓ）−ＭＴＭＨ−Ｖａｌ−Ｃｉｔ−ＰＡＢＯ（ＣＯ）−ＭＭＡＥ
ステップ１：（Ｓ）−ＭＴＭＨ−Ｖａｌ−Ｃｉｔ−ＰＡＢ−ＯＨ

３０℃で、（Ｓ）−ＭＴＭＨ−Ｖａｌ（中間体３）（３００ｍｇ、８２３μｍｏｌ、１当量）と、ＨＯＢｔ（１３３.５ｍｇ、９８８μｍｏｌ、１.２０当量）と、ＥＤＣＩ（１８９ｍｇ、９８８μｍｏｌ、１.２０当量）と、ＤＩＰＥＡ（４２６ｍｇ、３.３ｍｍｏｌ、４当量）及びＣｉｔ−ＰＡＢ−ＯＨ（中間体４）（２７７ｍｇ、９８８μｍｏｌ、１.２０当量）のＤＭＦ（１０ｍＬ）混合物を６時間攪拌させた。薄層クロマトグラフィーで反応が終了したことを確認した後、減圧濃縮した。残渣を分取用薄層クロマトグラフィー（酢酸エチル：メタノール＝
１０：１）で精製し、白色固体の表題化合物（４１０ｍｇ、収率５２.３％）を得た。ＬＣＭＳ（ＥＳＩ）：６２７（ＭＨ^＋）

ステップ２：（Ｓ）−ＭＴＭＨ−Ｖａｌ−Ｃｉｔ−ＰＡＢ（４−ニトロフェニル）カーボネート

窒素存在下、２５℃で、（Ｓ）−ＭＴＭＨ−Ｖａｌ−Ｃｉｔ−ＰＡＢ−ＯＨ（２５０ｍｇ５、３９９μｍｏｌ、１当量）のＤＭＦ（１０ｍＬ）の溶液に、一回でジイソプロピルエチルアミン（７７ｍｇ、５９８μｍｏｌ、１.５当量）とビス（４−ニトロフェニル）カーボネート（２４３ｍｇ、７９８μｍｏｌ、２.０当量）を加えた。２５℃で反応液を１５時間攪拌させた後、ＬＣＭＳ測定で反応が終了したことを確認し、反応液を真空濃縮した。残渣を分取用薄層クロマトグラフィー（酢酸エチル）で精製し、白色固体の表題化合物（１８５ｍｇ、収率５８.６％）を得た。ＬＣＭＳ（ＥＳＩ）: ７９２（ＭＨ^＋）

ステップ３：（Ｓ）−ＭＴＭＨ−Ｖａｌ−Ｃｉｔ−ＰＡＢＯ（ＣＯ）−ＭＭＡＥ

窒素存在下、２５℃で、ＭＭＡＥ（２００ｍｇ、２７９μｍｏｌ、１当量）と（Ｓ）−ＭＴＭＨ−Ｖａｌ−Ｃｉｔ−ＰＡＢ（４−ニトロフェニル）カーボネート（２５０ｍｇ、３１６μｍｏｌ、１.１３当量）の無水ＤＭＦ（１０ｍＬ）の溶液に、一度にＨＯＢｔ（２５ｍｇ、１８５μｍｏｌ、０.６６当量）とピリジン（９８０ｍｇ、１２.４ｍｍｏｌ、４４.５当量）を加え、反応液を１５時間攪拌した。ＬＣＭＳ測定で反応が終了したことを確認した後、反応液を、酢酸エチル（２００ｍＬ）で希釈し、水（１５０ｍＬ×３）で洗浄し、有機相を濃縮した。残渣を高速液体クロマトグラフィー（ギ酸系）で精製し、白色固体の表題化合物（１０９ｍｇ、収率３０％）を得た。ＬＣＭＳ（ＥＳＩ）：６８６[（Ｍ／２）Ｈ^＋]

実施例３

（Ｒ）−ＭＴＭＨ−Ｖａｌ−Ｃｉｔ−ＰＡＢＯ（ＣＯ）−ＭＭＡＥ
表題化合物の調製方法は、上述した（Ｓ）−ＭＴＭＨ−Ｖａｌ−Ｃｉｔ−ＰＡＢＯ（ＣＯ）−ＭＭＡＥ（実施例２）と同様に、（Ｒ）−ＭＴＭＨ−Ｖａｌ（中間体２）とＣｉｔ−ＰＡＢ−ＯＨ（中間体４）から、ステップ１から３の反応を行って調製した。ＬＣＭＳ（ＥＳＩ）:６８６.１[（Ｍ／２）Ｈ^＋]

実施例４

（Ｒ）−ＭＴＭＨ−ＤＰ１−ＰＡＢＯ（ＣＯ）−ＭＭＡＥ
ステップ１：（Ｒ）−ＭＴＭＨ−ＤＰ１−ＰＡＢ−ＯＨ

窒素存在下、（Ｓ）−ＭＴＭＨ−Ｖａｌ（中間体２）（３５０ｍｇ、０.９６ｍｍｏｌ）のＤＭＦ（１５ｍＬ）溶液に、ＨＯＢｔ（１５５.７５ｍｇ、１.１５ｍｍｏｌ）、ＥＤＣＩ（２２０.９７ｍｇ、１.１５ｍｍｏｌ）、ジイソプロピルエチルアミン（４９６.５９ｍｇ、３.８４ｍｍｏｌ）と（Ｓ）−２−アミノ−Ｎ−（４−（ヒドロキシメチル）フェニル）−５−モルホリノペンタンアミド（中間体５）（３９０ｍｇ、１.１ｍｍｏｌ）を加、２５℃で６時間攪拌した後、濃縮した。残渣をカラムクロマトグラフィー精製（酢酸エチル：メタノール＝１０:１）し、表題化合物（４００ｍｇ、収率６３.７％）を得た。ＭＳ:６５４（ＭＨ^＋）

ステップ２：（Ｒ）−ＭＴＭＨ−ＤＰ１−ＰＡＢ（４−ニトロフェニル）カーボネート

窒素存在下、（Ｒ）−ＭＴＭＨ−Ｖａｌ−Ｃｉｔ−ＰＡＢ−ＯＨのＤＭＦ（１０ｍＬ）溶液に、ジイソプロピルエチルアミン（７７.１０ｍｇ、０．５９７ｍｍｏｌ）とビス（４−ニトロフェニル）カーボネート（３４９ｍｇ、１.１５ｍｍｏｌ）を加え、２５℃で１６時間攪拌しした後、濃縮した。残渣を分取用薄層クロマトグラフィー（酢酸エチル）で精製して表題化合物（３００ｍｇ、収率７９.８４％）を得た。ＭＳ：８１９（ＭＨ^＋）

ステップ３：（Ｒ）−ＭＴＭＨ−ＤＰ１−ＰＡＢＯ（ＣＯ）−ＭＭＡＥ

窒素存在下、（Ｒ）−ＭＴＭＨ−ＤＰ１−ＰＡＢ（４−ニトロフェニル）カーボネート（２００ｍｇ、０.２４４ｍｍｏｌ）のＤＭＦ（４ｍＬ）溶液の中に、ＭＭＡＥ（２００ｍｇ、０.２７８ｍｍｏｌ）と、ＨＯＢｔ（１０ｍｇ、０.０７４ｍｍｏｌ）と、ピリジン（０.８ｍＬ）を加え、２５℃で１６時間攪拌た後、酢酸エチル（５０ｍＬ）で希釈し、水（２０ｍＬ×２）、飽和食塩水（２０ｍＬ）で洗浄し、有機相を濃縮した。残渣を高速液体クロマトグラフィー（ギ酸系）で精製し、白色固体の表題化合物（１６０ｍｇ、収率４６.８７％）を得た。ＬＣＭＳ（ＥＳＩ）:６９９.５[（Ｍ／２）Ｈ^＋]

実施例５

（Ｒ）−ＭＴＭＨ−ＤＰ２−ＰＡＢＯ（ＣＯ）−ＭＭＡＥ
表題化合物は、（Ｒ）−ＭＴＭＨ−ＤＰ１−ＰＡＢ（ＣＯ）−ＭＭＡＥ（実施４）と同様であるが、中間体５のモルホリンを、ピペリジンによって置換し、対応する中間体を得た。ＬＣＭＳ（ＥＳＩ）:６９８.６[（Ｍ／２）Ｈ^＋]

実施例６

（Ｒ）−ＭＴＭＨ−ＤＰ３−ＰＡＢＯ（ＣＯ）−ＭＭＡＥ
ステップ１：（Ｒ）−ＭＴＭＨ−Ｂｏｃ−ＤＰ３−ＰＡＢ−ＯＨ

窒素存在下、２５℃で、（Ｓ）−ＭＴＭＨ−Ｖａｌ（中間体２）（２２５.０ｍｇ、６１７.５μｍｏｌ）のＤＭＦ（１２ｍＬ）の溶液にＨＯＢｔ（１０８.５ｍｇ、８０２.８μｍｏｌ）、ＥＤＣＩ（１５３.９ｍｇ、８０２.８μｍｏｌ）及びジイソプロピルエチルアミン（２３９.４ｍｇ、１.９ｍｍｏｌ）を加え、５分間攪拌した後、ｔｅｒｔ−ブチル（（トランス−４−（２−アミノ−３−（（４−（ヒドロキシメチル）フェニル）アミノ）−３−オキソプロピル）シクロヘキシル）メチル）カルバメート（中間体６）（３００.５ｍｇ、７４１μｍｏｌ）を前記反応液の中に加えて、２５℃で４時間攪拌した。薄層クロマトグラフィーで、大部分の原料が消費されたことを確認した。反応液を、酢酸エチル（２０ｍＬ）で希釈し、飽和塩化アンモニウム溶液（３０ｍＬ×３）で洗浄し、有機相を濃縮した。残渣を分取用薄層クロマトグラフィーで精製し、さらにキラルカラムで分離して、白色固体の表題化合物（成分１：１４０ｍｇ、収率３０％）を得た。

ステップ２：（Ｒ）−ＭＴＭＨ−Ｂｏｃ−ＤＰ３−ＰＡＢＯ（ＣＯ）−ＭＭＡＥ

表題化合物の調製は、上述した（Ｓ）−ＭＴＭＨ−Ｖａｌ−Ｃｉｔ−ＰＡＢＯ（ＣＯ）−ＭＭＡＥ（実施例２）のステップ２からステップ３と同様であり、（Ｒ）−ＭＴＭＨ−Ｂｏｃ−ＤＰ３−ＰＡＢ−ＯＨから得た。ＬＣＭＳ[（（Ｍ−１００）／２）Ｈ^＋]：６９８.５

ステップ３：（Ｒ）−ＭＴＭＨ−ＤＰ３−ＰＡＢ−ＭＭＡＥ

２５℃で、（Ｒ）−ＭＴＭＨ−Ｂｏｃ−ＤＰ３−ＰＡＢＯ（ＣＯ）−ＭＭＡＥ（２００.００ｍｇ、１３３.７０μｍｏｌ）のアセトニトリル（４.２５ｍＬ）−水（０.２５ｍＬ）溶液に、一度にトリフルオロ酢酸（０.５ｍＬ）を加え、２５−２９℃で１６時間攪拌した。ＬＣＭＳ測定で反応が終了したことを確認した後、反応液を４０℃で減圧濃縮した。残渣を高速液体クロマトグラフィー（ギ酸系）で精製し、得られた溶液を濃縮させずに凍結乾燥させ、白色固体の表題化合物（１０５ｍｇ、収率５６.３％）を得た。ＬＣＭＳ:６９８.７[（Ｍ／２）Ｈ^＋]

実施例７

（Ｓ）−ＭＴＭＨ−Ｖａｌ−Ｃｉｔ−ＰＡＢＯ（ＣＯ）−ＡＢＡ−ＭＭＡＥ
ステップ１:（Ｓ）−ＭＴＭＨ−Ｖａｌ−Ｃｉｔ−ＰＡＢＯ（ＣＯ）−ＡＢＡ

窒素存在下、２０℃で、（Ｓ）−ＭＴＭＨ−Ｖａｌ−Ｃｉｔ−ＰＡＢ （４−ニトロフェニル）カーボネート（４２０ｍｇ、５３１μｍｏｌ、１当量）と４−アミノブタン酸（１０９ｍｇ、１.１ｍｍｏｌ、２当量）のＤＭＦ（８ｍＬ）溶液に一度にジイソプロピルエチルアミン（２０５ｍｇ、１.６ｍｍｏｌ、３当量）を加え、２０℃で１２時間攪拌した。薄層クロマトグラフィー（ジクロロメタン：メタノール＝１０:１）で反応が終了したことを確認した後、反応液を酢酸エチル（５０ｍＬ）で希釈してから、水（５０ｍＬ）で洗浄し、有機相を減圧濃縮し、残渣を分取用薄層クロマトグラフィーで精製（ジクロロメタン：メタノール＝１０:１）して、白色固体の表題化合物（２３６ｍｇ、収率４６.４７％、純度約７９％）を得た。ＭＳ:７５６.３（ＭＨ^＋）

ステップ２：（Ｓ）−ＭＴＭＨ−Ｖａｌ−Ｃｉｔ−ＰＡＢＯ（ＣＯ）−ＡＢＡ−ＭＭＡＥ
窒素存在下、１０℃で、（Ｓ）−ＭＴＭＨ−Ｖａｌ−Ｃｉｔ−ＰＡＢＯ（ＣＯ）−ＡＢＡ（５０ｍｇ、６６μｍｏｌ、１当量）とジイソプロピルエチルアミン（２６ｍｇ、１９８μｍｏｌ、３当量）のＤＭＦ（３ｍＬ）溶液中に、一度にＨＡＴＵ（３０ｍｇ、７９μｍｏｌ、１.２当量）を加え、３０分攪拌した後、ＭＭＡＥ（４７.５ｍｇ、６６μｍｏｌ、１当量）を加え、２８℃で１２時間攪拌した。ＬＣＭＳ測定で反応が終了したことを確認した後、反応液を濃縮した。残渣を分取用高速液体クロマトグラフィーで精製（カラム：Ｐｈｅｎｏｍｅｎｅｘ Ｓｙｎｅｒｇｉ Ｃ１８、１５０×２５×１０μｍ、条件：０.２２５％ギ酸−ＣＡＮ、Ｂ相初期濃度：４５、Ｂ相終了濃度：７５、勾配時間：１０分、１００％Ｂ保持時間：２分、流速：２５ｍＬ／分））して、白色固体の表題化合物（２５ｍｇ、収率２６％）を得た。ＬＣＭＳ:７２８.７[（Ｍ／２）Ｈ^＋]

実施例８

（Ｓ）−ＭＴＭＨ−Ｖａｌ−Ｃｉｔ−ＡＢＡ−ＰＡＢＯ（ＣＯ）−ＭＭＡＥ
ステップ１:（Ｓ）−ＭＴＭＨ−Ｖａｌ−Ｃｉｔ−ＡＢＡ−ＰＡＢ−ＯＨ

窒素存在下、２０℃で、（Ｓ）−ＭＴＭＨ−Ｖａｌ（中間体３）（３８３ｍｇ、１.０５ｍｍｏｌ、１.２当量）のＤＭＦ（８ｍＬ）溶液中に、一度にジイソプロピルエチルアミン（４５３ｍｇ、３.５０ｍｍｏｌ、４当量）、ＨＯＢｔ（１４２ｍｇ、１.０５ｍｍｏｌ、１.２当量）、ＥＤＣＩ（２０２ｍｇ、１.０５ｍｍｏｌ,１.２当量）を加え、２０℃で１０分間攪拌した後、一度にＣｉｔ−ＡＢＡ−ＰＡＢ−ＯＨ（中間体７）（３２０ｍｇ、８７６μｍｏｌ、１当量）を加え、２０℃で１６時間攪拌した。薄層クロマトグラフィー（ジクロロメタン：メタノール＝５:１）で反応が終了したことを確認した後、反応液を濃縮した。残渣を分取用薄層クロマトグラフィー（シリカ、ジクロロメタン：メタノール＝１０: １）で精製して表題化合物の粗生成物（３７０ｍｇ）を得た。ＬＣＭＳ:７１２.２（ＭＨ^＋）

ステップ２：（Ｓ）−ＭＴＭＨ−Ｖａｌ−Ｃｉｔ−ＡＢＡ−ＰＡＢ
（４−ニトロフェニル）カーボネート

窒素存在下、２０℃で、（Ｓ）−ＭＴＭＨ−Ｖａｌ−Ｃｉｔ−ＡＢＡ−ＰＡＢ−ＯＨ（３７０ｍｇ、５２０μｍｏｌ、１当量）のＤＭＦ（１０ｍＬ）溶液中に、ジイソプロピルエチルアミン（８０.６ｍｇ、６２４μｍｏｌ、１.２当量）とビス（４−ニトロフェニル）カーボネート（２０６ｍｇ、６７６μｍｏｌ、１.３当量）を加え、２０℃で１６時間攪拌した。薄層クロマトグラフィー（ジクロロメタン：メタノール＝１０:１）で原料が完全に消費されたことを確認した後、反応液を濃縮した。残渣を分取用薄層クロマトグラフィー（シリカ、ジクロロメタン：メタノール＝１０: １）で精製して、黄色油状の表題化合物（７０ｍｇ、７９.８３μｍｏｌ、収率１５.３６％）を得た。ＬＣＭＳ:８７７.３（ＭＨ^＋）

ステップ３:（Ｓ）−ＭＴＭＨ−Ｖａｌ−Ｃｉｔ−ＡＢＡ−ＰＡＢＯ（ＣＯ）−ＭＭＡＥ

２０℃で、（Ｓ）−ＭＴＭＨ−Ｖａｌ−Ｃｉｔ−ＡＢＡ−ＰＡＢ（４−ニトロフェニル）カーボネート（７０ｍｇ、８０μｍｏｌ、１当量）及びＭＭＡＥ（５７.３ｍｇ、７９.８μｍｏｌ、１当量）のＤＭＦ（６ｍＬ）溶液に、ＨＯＢｔ（５.４ｍｇ、３９.９μｍｏｌ、０.５当量）と、ピリジン（６３.１ｍｇ、７９８μｍｏｌ、１０当量）を加え、２０℃で１６時間攪拌した。薄層クロマトグラフィー（ジクロロメタン：メタノール＝１０:１）で反応が終了したことを確認した後、反応液を真空下で濃縮した。残渣を分取用高速液体クロマトグラフィーで精製（ギ酸系、カラム：Ｐｈｅｎｏｍｅｎｅｘ Ｓｙｎｅｒｇｉ Ｍａｘ−ＲＰ ２５０×８０ １０ｕ、条件：０.２２５％のギ酸−ＣＡＮ、Ｂ相初期濃度：４０、Ｂ相終了濃度：７０）して、白色固体の表題化合物（４０.８ｍｇ、収率４８.６％）を得た。ＬＣＭＳ:７２８.５[（Ｍ／２）Ｈ^＋]

実施例９

ハーセプチン（２４０ｍｇ）と薬物−リンカー中間体ＭＴＭＨ−Ｖａｌ−Ｃｉｔ−ＰＡＢ−ＯＨ（１１.３ｍｇ）（実施例１）とを、ハーセプチンの薬物−リンカー結合中間体の一般的な調製法によってカップリングさせし、上記ＡＤＣ００１（１６８ｍｇ、７０％）を得た。

他のハーセプチン系ＡＤＣは、実施例９と同様の方法で調製した：

他のエルビタックス系ＡＤＣは、実施例９と同様の方法で調製した：

薬物−リンカー中間体としての適切なジペプチド単位のスクリーニング
薬物−リンカー中間体に用いられる適切なジペプチド単位を特定するための便利な方法を見出した下記の通りである。パラ−アミノベンジルカルボニル断片を介して蛍光タグ（７−アミノ−４−メチルクラミン、７−ＡＭＣ）に結合されたＣｂｚ−保護ジペプチドは、スキーム１に示すような、標準的なペプチド化学調製法はによって調製した。Ｄｕｂｏwｃｈｉｋ（Ｂｉｏｒｇ．Ｍｅｄ．Ｃｈｅｍ．Ｌｅｔｔ．１９９８，８，３３４１−３３４６）の文献に記載された方法と同様の条件下で、これらのジペプチド基質をウシカテプシンＢとインキュベーションした。そのウシカテプシンＢの加水分解速度は、７−ＡＭＣ（表３）の放出により測定した。基質Ａより遅いも加水分解速度が遅い新規ジペプチドは除いた。ＦＳ−９、ＦＳ−１０及びＦＳ−１１の三つのジペプチド単位が、追加のジペプチド単位として選択されて、薬物−リンカー中間体の調製に用いた。

スキーム１．ｃｂｚ−保護ジペプチド蛍光基質の合成

表３．ウシカテプシンＢとのインキュベーション下での加水分解速度

Ｉｎ ｖｉｔｒｏ細胞毒性試験
（ａ）乳癌細胞系ＨＣＣ１９５４
乳癌細胞系ＨＣＣ１９５４は、１０％ＦＢＳを含むＲＰＭＩ１６４０培地を用い、３７℃、５％ＣＯ_２の加湿インキュベーター内で培養を行った。
投薬する前日に、細胞を収集して、ウェル当たり２０００細胞の密度で、９６ウェルプレートに播種した。２日目に、ハーセプチンと本発明のＡＤＣを、所定の濃度（１、０.３３３３、０.１１１１、０.０３７、０.０１２３、０.００４１、０.００１４、０.０００４６および０.０００１５μｇ／ｍｌ）に希釈して、細胞に添加した。各薬物濃度で３回実施した。
投薬して７２時間後、Ｃｅｌｌ Ｔｉｔｅｒ−Ｇｌｏキット（Ｐｒｏｍｅｇａ）の取扱説明書に従って、該キットを用いて細胞活性を測定した。
本試験は対照ＡＤＣ（ＡＤＣ−ＨＡ）との比較で行った。対照ＡＤＣは、その構造中の通常のアミド結合が、その炭素中心に一つのトリフルオロメチル基を有する。

（ｂ）Ａ−４３１細胞系
皮膚がん細胞系Ａ−４３１は、１０％ＦＢＳを含むＤＭＥＭ培地を使用して、３７℃、５％ＣＯ_２の加湿インキュベーター内で培養を行った。
投薬する前日に、細胞を収集して、ウェル当たり２０００細胞の密度で、９６ウェルプレートに播種した。２日目に、エルビタックスと本発明のＡＤＣを、所定の濃度（１０、３.３３、１.１１、０.３７、０.１２３、０.０４１、０.０１４、０.００４６および０.００１５μｇ／ｍｌ）に希釈して、細胞に添加した。各薬物濃度で３回実施した。
投薬して７２時間後、Ｃｅｌｌ Ｔｉｔｅｒ−Ｇｌｏキット（Ｐｒｏｍｅｇａ）の取扱説明書に従って、該キットを用いて細胞活性を測定した。
本試験は対照ＡＤＣ（ＡＤＣ−ＥＡ）との比較で行った。対照ＡＤＣは、その構造中の通常のアミド結合が、その炭素中心に一つのトリフルオロメチル基を有する。

Ｉｎ ｖｉｖｏ有効性試験
（ａ）ＨＣＣ１９５４異種移植マウスモデル
７−８週齢のメスのＮＯＤ−ＳＣＩＤマウスに、ＨＣＣ１９５４細胞を皮下接種した。接種から７日後、腫瘍塊の平均体積が１５３ｍｍ^３に達したと推定されたところで投与を開始した。腫瘍の体積及びマウスの体重によって、マウスをランダムにグループ化（一グループ当たり８匹である）した。本発明のＡＤＣ（１５ｍｐＫ）、ハーセプチン（１５ｍｐＫ）及び溶媒対照を、グループ化した後の０日目と１５日目にマウスに対して投与した。投与開始から２８日後、対照群マウスの腫瘍塊の体積が１０９２ｍｍ^３に達した後、マウスに対して安楽死を実施した。

（ｂ）Ａ４３１異種移植マウスモデル
６−８週齢のメスのＢａｌｂ／ｃマウスに、Ａ−４３１細胞を皮下接種した。接種から１０日後、腫瘍塊の平均体積が、１７２ｍｍ^３に達したと推定されたところで投与を開始した。腫瘍の体積及びマウスの体重によって、マウスをランダムにグループ化（一グループ当たり８匹である）した。本発明のＡＤＣ（１０ｍｐＫ）、エルビタックス（１０ｍｐＫ）及び溶媒対照を、グループ化した後の０日目と１５日目にマウスに対して投与した。投与開始から２５日後、対照群マウスの腫瘍塊の体積が２０００ｍｍ^３に達した後、マウスに対して安楽死を実施した。

Claims (3)

1. 下記化合物の群から選択される抗体−薬物複合体。
   

   

   
   

   
2. 請求項１に記載の抗体−薬物複合体の治療有効量、および、薬学に許容される担体、希釈剤または賦形剤を含む薬物組成物。
3. 請求項１に記載の抗体−薬物複合体または請求項２に記載の組成物の、癌の治療のための薬物の調製においての使用。
   

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