JP6675704B2 - Method for producing high-purity cerebroside - Google Patents
Method for producing high-purity cerebroside Download PDFInfo
- Publication number
- JP6675704B2 JP6675704B2 JP2013103928A JP2013103928A JP6675704B2 JP 6675704 B2 JP6675704 B2 JP 6675704B2 JP 2013103928 A JP2013103928 A JP 2013103928A JP 2013103928 A JP2013103928 A JP 2013103928A JP 6675704 B2 JP6675704 B2 JP 6675704B2
- Authority
- JP
- Japan
- Prior art keywords
- cerebroside
- component
- unit packed
- raw material
- material liquid
- Prior art date
- Legal status (The legal status is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the status listed.)
- Active
Links
- 229930183167 cerebroside Natural products 0.000 title claims description 102
- JSPNNZKWADNWHI-PNANGNLXSA-N (2r)-2-hydroxy-n-[(2s,3r,4e,8e)-3-hydroxy-9-methyl-1-[(2r,3r,4s,5s,6r)-3,4,5-trihydroxy-6-(hydroxymethyl)oxan-2-yl]oxyoctadeca-4,8-dien-2-yl]heptadecanamide Chemical compound CCCCCCCCCCCCCCC[C@@H](O)C(=O)N[C@H]([C@H](O)\C=C\CC\C=C(/C)CCCCCCCCC)CO[C@@H]1O[C@H](CO)[C@@H](O)[C@H](O)[C@H]1O JSPNNZKWADNWHI-PNANGNLXSA-N 0.000 title claims description 95
- RIZIAUKTHDLMQX-UHFFFAOYSA-N cerebroside D Natural products CCCCCCCCCCCCCCCCC(O)C(=O)NC(C(O)C=CCCC=C(C)CCCCCCCCC)COC1OC(CO)C(O)C(O)C1O RIZIAUKTHDLMQX-UHFFFAOYSA-N 0.000 title claims description 95
- 238000004519 manufacturing process Methods 0.000 title claims description 18
- 238000001179 sorption measurement Methods 0.000 claims description 71
- 239000007788 liquid Substances 0.000 claims description 61
- 239000002994 raw material Substances 0.000 claims description 60
- 239000003795 chemical substances by application Substances 0.000 claims description 39
- 238000011084 recovery Methods 0.000 claims description 37
- 239000000741 silica gel Substances 0.000 claims description 29
- 229910002027 silica gel Inorganic materials 0.000 claims description 29
- LFQSCWFLJHTTHZ-UHFFFAOYSA-N Ethanol Chemical compound CCO LFQSCWFLJHTTHZ-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 23
- 239000012530 fluid Substances 0.000 claims description 19
- 238000000034 method Methods 0.000 claims description 12
- 239000003463 adsorbent Substances 0.000 claims description 8
- 150000001784 cerebrosides Chemical class 0.000 claims description 7
- 235000019774 Rice Bran oil Nutrition 0.000 claims description 4
- 239000008165 rice bran oil Substances 0.000 claims description 4
- 125000001564 cerebroside group Chemical group 0.000 description 19
- 241000894007 species Species 0.000 description 11
- 238000013375 chromatographic separation Methods 0.000 description 9
- 239000000243 solution Substances 0.000 description 7
- 230000007423 decrease Effects 0.000 description 6
- 235000014113 dietary fatty acids Nutrition 0.000 description 5
- 239000000194 fatty acid Substances 0.000 description 5
- 229930195729 fatty acid Natural products 0.000 description 5
- 240000007594 Oryza sativa Species 0.000 description 4
- 235000007164 Oryza sativa Nutrition 0.000 description 4
- 230000000694 effects Effects 0.000 description 4
- 150000004665 fatty acids Chemical class 0.000 description 4
- 239000000047 product Substances 0.000 description 4
- 235000009566 rice Nutrition 0.000 description 4
- 210000003491 skin Anatomy 0.000 description 4
- 150000003410 sphingosines Chemical class 0.000 description 4
- 238000011144 upstream manufacturing Methods 0.000 description 4
- XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N water Substances O XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 4
- 241000196324 Embryophyta Species 0.000 description 3
- OKKJLVBELUTLKV-UHFFFAOYSA-N Methanol Chemical compound OC OKKJLVBELUTLKV-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- VYPSYNLAJGMNEJ-UHFFFAOYSA-N Silicium dioxide Chemical compound O=[Si]=O VYPSYNLAJGMNEJ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- HEMHJVSKTPXQMS-UHFFFAOYSA-M Sodium hydroxide Chemical compound [OH-].[Na+] HEMHJVSKTPXQMS-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 3
- 229930182558 Sterol Natural products 0.000 description 3
- 238000004458 analytical method Methods 0.000 description 3
- 239000002537 cosmetic Substances 0.000 description 3
- 239000003921 oil Substances 0.000 description 3
- 235000019198 oils Nutrition 0.000 description 3
- 150000003432 sterols Chemical class 0.000 description 3
- 235000003702 sterols Nutrition 0.000 description 3
- 235000000346 sugar Nutrition 0.000 description 3
- 235000001674 Agaricus brunnescens Nutrition 0.000 description 2
- 241000283690 Bos taurus Species 0.000 description 2
- YBSQGNFRWZKFMJ-UHFFFAOYSA-N Cerebroside B Natural products CCCCCCCCCCCCCCC(O)C(=O)NC(C(O)C=CCCC=C(C)CCCCCCCCC)COC1OC(CO)C(O)C(O)C1O YBSQGNFRWZKFMJ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 244000068988 Glycine max Species 0.000 description 2
- 235000010469 Glycine max Nutrition 0.000 description 2
- VEXZGXHMUGYJMC-UHFFFAOYSA-N Hydrochloric acid Chemical compound Cl VEXZGXHMUGYJMC-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- KFZMGEQAYNKOFK-UHFFFAOYSA-N Isopropanol Chemical compound CC(C)O KFZMGEQAYNKOFK-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- LRHPLDYGYMQRHN-UHFFFAOYSA-N N-Butanol Chemical compound CCCCO LRHPLDYGYMQRHN-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 235000021307 Triticum Nutrition 0.000 description 2
- 241000209140 Triticum Species 0.000 description 2
- 239000007864 aqueous solution Substances 0.000 description 2
- 235000013339 cereals Nutrition 0.000 description 2
- 239000010779 crude oil Substances 0.000 description 2
- 238000010586 diagram Methods 0.000 description 2
- 238000001704 evaporation Methods 0.000 description 2
- 230000008020 evaporation Effects 0.000 description 2
- 238000000855 fermentation Methods 0.000 description 2
- 230000004151 fermentation Effects 0.000 description 2
- 235000013305 food Nutrition 0.000 description 2
- ZXEKIIBDNHEJCQ-UHFFFAOYSA-N isobutanol Chemical compound CC(C)CO ZXEKIIBDNHEJCQ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 150000002632 lipids Chemical class 0.000 description 2
- 239000011259 mixed solution Substances 0.000 description 2
- 239000000203 mixture Substances 0.000 description 2
- BSAIUMLZVGUGKX-UHFFFAOYSA-N non-2-enal Chemical compound CCCCCCC=CC=O BSAIUMLZVGUGKX-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- BDERNNFJNOPAEC-UHFFFAOYSA-N propan-1-ol Chemical compound CCCO BDERNNFJNOPAEC-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 238000000926 separation method Methods 0.000 description 2
- 150000008163 sugars Chemical class 0.000 description 2
- 244000247812 Amorphophallus rivieri Species 0.000 description 1
- 235000001206 Amorphophallus rivieri Nutrition 0.000 description 1
- 244000105624 Arachis hypogaea Species 0.000 description 1
- 241000219310 Beta vulgaris subsp. vulgaris Species 0.000 description 1
- 206010012438 Dermatitis atopic Diseases 0.000 description 1
- 241000233866 Fungi Species 0.000 description 1
- WQZGKKKJIJFFOK-GASJEMHNSA-N Glucose Natural products OC[C@H]1OC(O)[C@H](O)[C@@H](O)[C@@H]1O WQZGKKKJIJFFOK-GASJEMHNSA-N 0.000 description 1
- 240000001080 Grifola frondosa Species 0.000 description 1
- 235000007710 Grifola frondosa Nutrition 0.000 description 1
- 102000011782 Keratins Human genes 0.000 description 1
- 108010076876 Keratins Proteins 0.000 description 1
- 229920002752 Konjac Polymers 0.000 description 1
- 241001465754 Metazoa Species 0.000 description 1
- 244000046052 Phaseolus vulgaris Species 0.000 description 1
- 235000010627 Phaseolus vulgaris Nutrition 0.000 description 1
- 244000000231 Sesamum indicum Species 0.000 description 1
- 244000300264 Spinacia oleracea Species 0.000 description 1
- 235000009337 Spinacia oleracea Nutrition 0.000 description 1
- 235000021536 Sugar beet Nutrition 0.000 description 1
- 240000008042 Zea mays Species 0.000 description 1
- 235000005824 Zea mays ssp. parviglumis Nutrition 0.000 description 1
- 235000002017 Zea mays subsp mays Nutrition 0.000 description 1
- LEBBDRXHHNYZIA-LDUWYPJVSA-N [(2s,3r,4s,5r,6r)-3,4,5-trihydroxy-6-(hydroxymethyl)oxan-2-yl] n-[(z)-1,3-dihydroxyoctadec-4-en-2-yl]carbamate Chemical group CCCCCCCCCCCCC\C=C/C(O)C(CO)NC(=O)O[C@@H]1O[C@H](CO)[C@H](O)[C@H](O)[C@H]1O LEBBDRXHHNYZIA-LDUWYPJVSA-N 0.000 description 1
- 238000010521 absorption reaction Methods 0.000 description 1
- 239000002253 acid Substances 0.000 description 1
- 230000002378 acidificating effect Effects 0.000 description 1
- 230000032683 aging Effects 0.000 description 1
- 150000001298 alcohols Chemical class 0.000 description 1
- 150000001414 amino alcohols Chemical class 0.000 description 1
- 125000003277 amino group Chemical group 0.000 description 1
- 238000000149 argon plasma sintering Methods 0.000 description 1
- 201000008937 atopic dermatitis Diseases 0.000 description 1
- 210000004556 brain Anatomy 0.000 description 1
- 125000004432 carbon atom Chemical group C* 0.000 description 1
- 125000001549 ceramide group Chemical group 0.000 description 1
- 239000003153 chemical reaction reagent Substances 0.000 description 1
- WORJEOGGNQDSOE-UHFFFAOYSA-N chloroform;methanol Chemical compound OC.ClC(Cl)Cl WORJEOGGNQDSOE-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 208000011444 chronic liver failure Diseases 0.000 description 1
- 239000006103 coloring component Substances 0.000 description 1
- 239000000470 constituent Substances 0.000 description 1
- 235000005822 corn Nutrition 0.000 description 1
- 239000012043 crude product Substances 0.000 description 1
- 201000010099 disease Diseases 0.000 description 1
- 208000037265 diseases, disorders, signs and symptoms Diseases 0.000 description 1
- 239000003814 drug Substances 0.000 description 1
- -1 fatty acids Chemical compound 0.000 description 1
- 239000012527 feed solution Substances 0.000 description 1
- 235000013312 flour Nutrition 0.000 description 1
- 230000037406 food intake Effects 0.000 description 1
- 235000021588 free fatty acids Nutrition 0.000 description 1
- 235000013376 functional food Nutrition 0.000 description 1
- 229930182830 galactose Natural products 0.000 description 1
- 210000001035 gastrointestinal tract Anatomy 0.000 description 1
- 239000011521 glass Substances 0.000 description 1
- 239000008103 glucose Substances 0.000 description 1
- 125000002791 glucosyl group Chemical group C1([C@H](O)[C@@H](O)[C@H](O)[C@H](O1)CO)* 0.000 description 1
- 150000002305 glucosylceramides Chemical class 0.000 description 1
- 150000004676 glycans Chemical class 0.000 description 1
- 238000004128 high performance liquid chromatography Methods 0.000 description 1
- 239000000252 konjac Substances 0.000 description 1
- 235000010485 konjac Nutrition 0.000 description 1
- 238000000622 liquid--liquid extraction Methods 0.000 description 1
- 150000004668 long chain fatty acids Chemical group 0.000 description 1
- 230000014759 maintenance of location Effects 0.000 description 1
- 239000000463 material Substances 0.000 description 1
- 239000012528 membrane Substances 0.000 description 1
- 235000013336 milk Nutrition 0.000 description 1
- 239000008267 milk Substances 0.000 description 1
- 210000004080 milk Anatomy 0.000 description 1
- 230000007935 neutral effect Effects 0.000 description 1
- YTJSFYQNRXLOIC-UHFFFAOYSA-N octadecylsilane Chemical compound CCCCCCCCCCCCCCCCCC[SiH3] YTJSFYQNRXLOIC-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 239000002245 particle Substances 0.000 description 1
- 235000020232 peanut Nutrition 0.000 description 1
- 230000035790 physiological processes and functions Effects 0.000 description 1
- 229920001282 polysaccharide Polymers 0.000 description 1
- 239000005017 polysaccharide Substances 0.000 description 1
- 239000004810 polytetrafluoroethylene Substances 0.000 description 1
- 229920001343 polytetrafluoroethylene Polymers 0.000 description 1
- 239000011148 porous material Substances 0.000 description 1
- 239000002244 precipitate Substances 0.000 description 1
- 230000003134 recirculating effect Effects 0.000 description 1
- 150000003839 salts Chemical class 0.000 description 1
- 239000008159 sesame oil Substances 0.000 description 1
- 235000011803 sesame oil Nutrition 0.000 description 1
- 125000005372 silanol group Chemical group 0.000 description 1
- 230000008591 skin barrier function Effects 0.000 description 1
- 239000007787 solid Substances 0.000 description 1
- 239000002904 solvent Substances 0.000 description 1
- 150000003408 sphingolipids Chemical class 0.000 description 1
- 210000000434 stratum corneum Anatomy 0.000 description 1
- 210000001519 tissue Anatomy 0.000 description 1
- 235000013311 vegetables Nutrition 0.000 description 1
- 230000037303 wrinkles Effects 0.000 description 1
Images
Description
本発明は、高純度セレブロシドの製造方法に関する。 The present invention relates to a method for producing high-purity cerebroside.
セレブロシドはスフィンゴ脂質の一種であり、長鎖アミノアルコールであるスフィンゴイド塩基のアミノ基に長鎖脂肪酸が結合したセラミド骨格を基本とし、糖が結合したグルコセレブロシドのような形態で存在する。セレブロシドは動物、植物、真菌などに広く存在し、グルコースが結合したグルコセレブロシドおよびガラクトースが結合したガラクトセレブロシドなどが存在する。また、スフィンゴイド塩基はジヒドロキシ型、トリヒドロキシ型、２重結合の有無と、そのシストランス型が異なるものが１０種程度、存在する。脂肪酸は炭素数１４〜２６の２−ヒドロキシ脂肪酸からなる。セレブロシドは構成する糖、スフィンゴイド塩基、脂肪酸の組み合わせにより多種多様に存在する（非特許文献１参照）。 Cerebroside is a type of sphingolipid, and is based on a ceramide skeleton in which a long-chain fatty acid is bonded to an amino group of a sphingoid base, which is a long-chain amino alcohol, and exists in a form like glucocerebroside in which a sugar is bonded. Cerebroside is widely found in animals, plants, fungi, and the like, and includes glucocerebroside bound to glucose, galactocerebroside bound to galactose, and the like. In addition, there are about 10 sphingoid bases having different dihydroxy type, trihydroxy type, double bond presence and different cis-trans type. Fatty acids consist of 2-hydroxy fatty acids having 14 to 26 carbon atoms. Cerebroside exists in a wide variety depending on the combination of constituent sugars, sphingoid bases, and fatty acids (see Non-Patent Document 1).
セレブロシドは細胞組織の生体膜成分として普遍的に存在し、特に皮膚角質層に高濃度で存在し、皮膚のバリア機能、水分保持機能の役割を担っている。皮膚角質のセレブロシドは加齢と共に減少し、しわ、肌荒れの原因となる他、アトピー性皮膚炎患者でも減少していることが報告されており（非特許文献２参照）、セレブロシド量が減少するとバリア機能が低下することが知られている（非特許文献３参照）。セレブロシドをヒトの乾燥落屑性皮膚へ塗布することにより水分保持機能改善効果、経口摂取による経皮水分蒸発量の低減効果を有することが報告されており、化粧品や機能性食品の原料として注目されている。これらセレブロシドは消化管において糖、脂肪酸、スフィンゴイド塩基に分解された後、体内に吸収され効力を発揮すると考えられている。 Cerebroside is ubiquitously present as a biomembrane component of cell tissues, and is present particularly at a high concentration in the stratum corneum of the skin, and plays a role of skin barrier function and moisture retention function. It has been reported that cerebroside in the skin keratin decreases with aging, causes wrinkles and rough skin, and also decreases in patients with atopic dermatitis (see Non-Patent Document 2). It is known that the function is reduced (see Non-Patent Document 3). It has been reported that applying cerebroside to dry desquamable skin of humans has an effect of improving the water retention function and reducing the amount of transepidermal water evaporation by oral ingestion, and has attracted attention as a raw material for cosmetics and functional foods I have. It is considered that these cerebrosides are decomposed into sugars, fatty acids, and sphingoid bases in the digestive tract and then absorbed into the body to exert their effects.
セレブロシドの種類によって吸収率、効力が異なると考えられており分子種毎による効果の解析により、今後、セレブロシドの分子種、由来による差別化がされると考えられている。このほか、近年ではセレブロシドのセカンドメッセンジャーとしての生理機能が明らかになりつつあり、セレブロシドを総量全体としてではなく、クラス別・分子種別の機能が重要であると認識され、今後の医薬品等への展開も期待されている。 It is thought that the absorption rate and efficacy differ depending on the type of cerebroside, and it is thought that the analysis by the effect of each molecular species will differentiate in the future by the molecular type and origin of cerebroside. In addition, in recent years, the physiological function of cerebroside as a second messenger has been clarified, and it has been recognized that the function of cerebroside as a class and molecular type is important, not as a whole, and will be applied to pharmaceuticals in the future. Is also expected.
産業的にかつては、牛脳由来のセレブロシドが主であったが、狂牛病による安全性に不安があることから、現在は米、コムギ、トウモロコシ、大豆、コンニャク、甜菜などの穀類や、マイタケ、タモギダケなどのキノコ類、牛乳などに由来するセレブロシドが製造されている。これらは、原料の一部または全体、その一次加工、二次加工品などを弱アルカリ分解する方法（特許文献１参照）、アルカリ性アルコール溶液などの溶媒によって抽出し、液液分配を行う方法（特許文献２参照）、クロロホルム−メタノール混液を用いてシリカゲルにより精製する方法（非特許文献４，５，特許文献２参照）、多糖体による吸着等の処理により濃縮する方法（特許文献３参照）などがあった。 In the past, cerebroside derived from bovine brain was mainly used in the industry, but due to concerns about the safety of mad cow disease, cereals such as rice, wheat, corn, soybean, konjac, and sugar beet, and maitake And cerebrosides derived from mushrooms such as ash mushrooms and milk. These methods include a method of weakly decomposing a part or the whole of a raw material, a primary processing thereof, a secondary processing product thereof, and the like (see Patent Document 1), a method of extracting with a solvent such as an alkaline alcohol solution, and performing a liquid-liquid distribution (Patent). Reference 2), a method of purifying with silica gel using a chloroform-methanol mixed solution (see Non-patent Literatures 4 and 5, and Patent Literature 2), and a method of concentrating by treatment such as adsorption with a polysaccharide (see Patent Literature 3). there were.
しかし、原料中のセレブロシドの含有量は少なく、分離物中のセレブロシドの濃度は０．１〜１０質量％程度のものが主流であり、産業適用が可能な高純度な製品は存在しなかった。現状の粗精製品は中性脂質、遊離脂肪酸、ステロールなどを大量に含み、またノネナールなどの悪臭成分や、脂肪酸などの着色成分が含まれていることから食品・化粧品用途に使用するには問題があった。また、現状でも高純度のセレブロシド、さらに分子種毎に精製されたセレブロシドは存在するが、コストが非常に高く研究用途の標準試薬を目的としたもので（特許文献３参照）、食品、化粧品等への産業適用可能なものはなかった。 However, the content of cerebroside in the raw material is small, and the concentration of cerebroside in the separated product is about 0.1 to 10% by mass, and there is no high-purity product applicable for industrial use. At present, crude products contain large amounts of neutral lipids, free fatty acids, sterols, etc., and also contain malodorous components such as nonenal and coloring components such as fatty acids, making them difficult to use in food and cosmetic applications. was there. At present, high-purity cerebroside and cerebroside purified for each molecular species still exist, but the cost is extremely high and aimed at a standard reagent for research use (see Patent Document 3), and food, cosmetics, etc. There was no industrial applicability to.
したがって、高純度の天然セレブロシド、さらにはその使用目的に応じ、特定の分子種（群）のセレブロシドを、低コストで製造する方法が切望されていた。 Therefore, there has been a long-felt need for a method for producing cerebroside of a specific molecular species (group) at low cost according to the purpose of using natural cerebroside of high purity.
従来の分離法では、セレブロシドの分離効率が不十分であり、高純度のセレブロシドまたは複数の分子種のセレブロシドの高純度混合物（以下では、複数の分子種のセレブロシドを総じて「セレブロシド群」と呼ぶ場合がある。）を得ることが困難であった。また、従来の分離法では、セレブロシドまたはセレブロシド群の分離に多数の複雑な工程を必要とし、製造コストの増大に至っていた。 In the conventional separation method, the separation efficiency of cerebroside is insufficient, and a high-purity cerebroside or a high-purity mixture of cerebrosides of a plurality of molecular species (hereinafter, cerebrosides of a plurality of molecular species are collectively referred to as a “cerebroside group” Is difficult to obtain. In addition, in the conventional separation method, a large number of complicated steps are required for separating cerebroside or cerebroside group, which leads to an increase in production cost.
本発明は上記課題に鑑みてなされたものであり、単純で作業性が優れた処理により高純度のセレブロシドまたはセレブロシド群を製造すると共に、製造コストを低減することを目的とする。 The present invention has been made in view of the above problems, and has as its object to produce a high-purity cerebroside or cerebroside group by a simple and excellent workability, and to reduce the production cost.
一実施形態は、
吸着剤としてＯＤＳ−シリカゲルを充填した複数の単位充填塔を無端直列に接続し、内部を流体が循環可能または任意の位置で遮断可能に構成された循環流路に対し、（ａ）１成分以上のセレブロシド、（ｂ）前記セレブロシドよりも前記ＯＤＳ−シリカゲルに対する親和性が強い第１の成分、および（ｃ）前記セレブロシドよりも前記ＯＤＳ−シリカゲルに対する親和性が弱い第２の成分を含有する原料液を通流することにより、前記原料液からセレブロシドを分離・回収する、高純度セレブロシドの製造方法であって、
前記原料液が米糠油由来のものであり、
下記第１工程および第２工程を有するサイクルを複数回、繰り返すことを特徴とする高純度セレブロシドの製造方法に関する。
One embodiment is:
A plurality of unit packed towers filled with ODS-silica gel as an adsorbent are connected endlessly in series, and a fluid is circulated inside or can be shut off at any position. , A raw material liquid comprising: (b) a first component having a higher affinity for the ODS-silica gel than the cerebroside; and (c) a second component having a lower affinity for the ODS-silica gel than the cerebroside. A method for producing high-purity cerebroside by separating and recovering cerebroside from the raw material liquid,
The raw material liquid is derived from rice bran oil,
The present invention relates to a method for producing high-purity cerebroside, comprising repeating a cycle having the following first step and second step a plurality of times.
第１工程；前記第１の成分が富化された第１の吸着帯域、前記セレブロシドが富化された第２の吸着帯域および前記第２の成分が富化された第３の吸着帯域を分けて形成している系に対し、前記第２と第３の吸着帯域の単位充填塔間の接続部分で前記系の循環を遮断しながら、前記第３の吸着帯域に原料液を供給すると共に、前記第３の吸着帯域以外の系内に脱離剤としてアルコールを供給した後、前記第２の吸着帯域から高純度セレブロシドを回収する工程、
第２工程；原料液を供給することなく、前記循環流路内に脱離剤としてアルコールを供給して循環流路内の流体を通流させながら、前記第１および第３の吸着帯域のうち少なくとも一方の吸着帯域から成分の回収を行い、かつ前記循環流路内の流体の通流に伴う第１から第３の吸着帯域の移動に合わせて前記循環流路内の脱離剤の供給位置と前記成分の回収位置を順次、循環流の下流側に移動させる工程。
A first step; a first adsorption zone enriched in the first component, a second adsorption zone enriched in the cerebroside, and a third adsorption zone enriched in the second component. While supplying the raw material liquid to the third adsorption zone while shutting off the circulation of the system at the connection between the unit packed towers of the second and third adsorption zones, Recovering high-purity cerebroside from the second adsorption zone after supplying alcohol as a desorbing agent into a system other than the third adsorption zone ;
2nd step: without supplying the raw material liquid, while supplying alcohol as a desorbing agent into the circulation flow path and allowing the fluid in the circulation flow path to flow, the first and third adsorption zones A component is recovered from at least one of the adsorption zones, and the supply position of the desorbing agent in the circulation channel in accordance with the movement of the first to third adsorption zones accompanying the flow of the fluid in the circulation channel. And sequentially moving the recovery position of the component to the downstream side of the circulation flow.
高純度のセレブロシドまたはセレブロシド群を製造すると共に、製造コストを低減することができる。 A high-purity cerebroside or cerebroside group can be produced, and the production cost can be reduced.
本発明の高純度セレブロシドの製造方法の一例では、吸着剤としてＯＤＳ−シリカゲルを充填した複数の単位充填塔を無端直列に接続し、内部を液が循環可能または任意の位置で遮断可能に構成された循環流路を使用する。この循環流路に対して、（ａ）１成分以上のセレブロシド、（ｂ）セレブロシドよりもＯＤＳ−シリカゲルに対する親和性が強い第１の成分、および（ｃ）セレブロシドよりもＯＤＳ−シリカゲルに対する親和性が弱い第２の成分を含有する原料液を通流する。これにより、原料液からセレブロシドを分離・回収する。具体的には、下記第１工程および第２工程を有するサイクルを複数回、繰り返す。 In one example of the method for producing a high-purity cerebroside of the present invention, a plurality of unit packed towers filled with ODS-silica gel as an adsorbent are connected in an endless series, and the inside can be circulated or shut off at an arbitrary position. Use a recirculating flow path. For this circulation channel, (a) one or more components of cerebroside, (b) a first component having a higher affinity for ODS-silica gel than cerebroside, and (c) an affinity for ODS-silica gel than cerebroside. A feed solution containing a weak second component is passed. Thereby, cerebroside is separated and recovered from the raw material liquid. Specifically, a cycle having the following first step and second step is repeated a plurality of times.
すなわち、第１工程では、予め第１の成分が富化された第１の吸着帯域、セレブロシドが富化された第２の吸着帯域および第２の成分が富化された第３の吸着帯域を分けて形成している系に対し、第２と第３の吸着帯域の間で系の循環を遮断する。また、第３の吸着帯域に原料液を供給すると共に、第２の吸着帯域から、最終的に得たい高純度セレブロシドを回収する。ここで、２サイクル目以降では、前のサイクルの第２工程によって第１から第３の吸着帯域が形成される。一方、１サイクル目の第１工程では前のサイクルがないため、予め第１から第３の吸着帯域は形成されていない。このため、１サイクル目の第１工程の前処理として、予め循環流路内に第１から第３の吸着帯域を形成する工程を設けても良い。また、第１工程では、任意の吸着帯域から循環流路内に脱離剤を供給しても良い。更に、第1工程では、セレブロシドに加えて、第１の成分、第２の成分または第1と第２の成分の両方を回収することもできる。 That is, in the first step, the first adsorption zone enriched in the first component, the second adsorption zone enriched in cerebroside, and the third adsorption zone enriched in the second component are formed in advance. For a separately formed system, the circulation of the system is shut off between the second and third adsorption zones. In addition, the raw material liquid is supplied to the third adsorption zone, and the high-purity cerebroside desired to be finally obtained is recovered from the second adsorption zone. Here, after the second cycle, the first to third adsorption zones are formed by the second step of the previous cycle. On the other hand, in the first step of the first cycle, since there is no previous cycle, the first to third adsorption zones are not formed in advance. Therefore, as a pretreatment of the first step in the first cycle, a step of forming first to third adsorption zones in the circulation channel may be provided in advance. In the first step, a desorbing agent may be supplied from an arbitrary adsorption zone into the circulation channel. Further, in the first step, in addition to cerebroside, the first component, the second component, or both the first and second components can be recovered.
第２工程では、原料液を供給することなく、循環流路内に脱離剤を供給して循環流路内の流体を通流させながら、第１および第３の吸着帯域のうち少なくとも一方の吸着帯域から成分の回収を行う。また、第２工程では、循環流路内の流体の通流に伴う第1から第３の吸着帯域の移動に合わせて循環流路内の脱離剤の供給位置と成分の回収位置を順次、循環流の下流側に一単位充填塔分づつ間欠的に複数回、移動させる。この第２工程では、「擬似移動床の方法」に従って、第１および第２の成分のうち少なくとも一方の成分を各別に系外に回収する操作を行なう。また、これと共に、第１の吸着帯域、第２の吸着帯域および第３の吸着帯域を分けて形成する系を形成する。第２工程では、第１の吸着帯域から第１の成分のみを回収しても良いし、第３の吸着帯域から第２の成分のみを回収しても良いし、第１と第３の吸着帯域から第１と第２の成分の両方を回収しても良い。 In the second step, at least one of the first and third adsorption zones is supplied without supplying the raw material liquid and supplying the desorbing agent into the circulation flow path to allow the fluid in the circulation flow path to flow. The components are recovered from the adsorption zone. In the second step, the supply position of the desorbing agent and the component recovery position in the circulation flow path are sequentially set in accordance with the movement of the first to third adsorption zones accompanying the flow of the fluid in the circulation flow path. It is intermittently moved to the downstream side of the circulating flow a plurality of times for each unit packed tower. In the second step, an operation of separately recovering at least one of the first and second components out of the system is performed according to the “simulated moving bed method”. In addition, a system for separately forming the first adsorption zone, the second adsorption zone, and the third adsorption zone is formed. In the second step, only the first component may be recovered from the first adsorption zone, only the second component may be recovered from the third adsorption zone, or the first and third adsorption zones may be recovered. Both the first and second components may be recovered from the zone.
なお、サイクルを行う回数は複数回であれば特に限定されず、使用する原料液の総量や、回収したいセレブロシドの量に応じて適宜、サイクルの数を設定することができる。また、典型的には第１〜第３の吸着帯域はそれぞれ、１以上の整数個の単位充填塔から構成されるが、単位充填塔の部分的な領域から構成されても良い。 The number of cycles is not particularly limited as long as it is a plurality of times, and the number of cycles can be appropriately set according to the total amount of the raw material liquid to be used and the amount of cerebroside to be collected. Further, typically, each of the first to third adsorption zones is constituted by one or more integer number of unit packed columns, but may be constituted by a partial area of the unit packed column.
本発明の方法によれば、上記（ａ）〜（ｃ）の３以上の成分を含む原料液から、疑似移動床の方法を利用して簡易な装置で連続的に高純度のセレブロシドの回収を行うことができる。このため、製造コストを低減することができる。原料液中にセレブロシドが単一の分子種としてしか存在しない場合、高純度で単一の分子種のセレブロシドを回収することができる。また、原料液中に複数の分子種のセレブロシドを含む場合、高純度のセレブロシド群として回収することができるし、単一の分子種ごとのセレブロシドに分けて高純度で回収することもできる。単一の分子種のセレブロシドごとに分けて回収する場合には例えば、第１の工程においてセレブロシドの回収を行うタイミングを複数回に分けて回収を行えば良い。分子種が異なる各セレブロシドは各々、ＯＤＳ−シリカゲルに対する親和性が若干、異なるため、第２の吸着帯域の中でそれぞれ、異なる吸着帯域を形成する。従って、セレブロシドを回収するタイミングを複数回に分けることにより、それぞれの回収時に、回収口に位置する分子種のセレブロシドを回収することができる。また、セレブロシド群として回収する場合、回収したセレブロシド群に対して更に分離処理を行うことにより、単一の分子種のセレブロシドごとに分けて回収することができる。 According to the method of the present invention, high-purity cerebroside is continuously recovered from a raw material liquid containing three or more of the above-mentioned components (a) to (c) by a simple apparatus using a pseudo moving bed method. It can be carried out. For this reason, manufacturing costs can be reduced. When cerebroside exists only as a single molecular species in the raw material liquid, cerebroside of a single molecular species with high purity can be recovered. When the raw material liquid contains cerebrosides of a plurality of molecular species, the cerebrosides can be recovered as a high-purity cerebroside group, or can be separated into single cerebrosides of a single molecular species and recovered at a high purity. In the case of recovering the cerebroside separately for each cerebroside of a single molecular species, for example, the timing of recovering cerebroside in the first step may be performed in a plurality of times. Since each cerebroside having a different molecular species has a slightly different affinity for ODS-silica gel, each forms a different adsorption zone in the second adsorption zone. Therefore, by dividing the timing of recovering cerebroside into a plurality of times, it is possible to recover cerebroside of the molecular species located at the recovery port at each recovery. When the cerebroside group is collected, the collected cerebroside group is further subjected to a separation treatment, whereby the cerebroside group can be separately collected for each cerebroside of a single molecular species.
また、第１の成分は、セレブロシドよりもＯＤＳ−シリカゲルに対する親和性が強い成分であれば１成分であっても多成分であっても良い。同様に、第２の成分は、セレブロシドよりもＯＤＳ−シリカゲルに対する親和性が弱い成分であれば１成分であっても多成分であっても良い。 The first component may be a single component or a multi-component as long as it has a higher affinity for ODS-silica gel than cerebroside. Similarly, the second component may be a single component or a multi-component as long as it has a lower affinity for ODS-silica gel than cerebroside.
脱離剤としては例えば、水、水酸化ナトリウム水溶液等の塩基性水溶液、塩酸水溶液等の酸性水溶液、メタノール、エタノール、ｎ−プロパノール、イソプロパノール、ブタノール、イソブタノール等のアルコール類等を挙げることができる。脱離剤は、これらの一種を単独で脱離剤としても良いし、二種以上を混合した混合溶液を脱離剤としても良い。また、脱離剤は、酸、塩基、緩衝剤、塩を含んでいても良い。これらの脱離剤の中でも、セレブロシドの分離特性に優れるため、水および炭素数Ｃ１〜Ｃ３のアルコールから選ばれる一種または二種以上の親水性溶液を用いることが好ましく、エタノールを用いることがより好ましい。 Examples of the desorbing agent include water, a basic aqueous solution such as an aqueous sodium hydroxide solution, an acidic aqueous solution such as an aqueous hydrochloric acid solution, and alcohols such as methanol, ethanol, n-propanol, isopropanol, butanol, and isobutanol. . As the release agent, one of these may be used alone, or a mixed solution of two or more types may be used as the release agent. Further, the releasing agent may include an acid, a base, a buffer, and a salt. Among these releasing agents, it is preferable to use one or two or more hydrophilic solutions selected from water and an alcohol having C 1 to C 3 , because ethanol has excellent separation characteristics of cerebroside, and it is preferable to use ethanol. More preferred.
本明細書中、「下流」とは、基点に対して相対的に流体の循環方向の下流であることを意味する。「上流」とは、基点に対して相対的に流体の循環方向の上流であることを意味する。「下流」および「上流」の範囲は特に限定されず、吸着剤の種類や、分離対象とする成分等に応じて適宜、その範囲を定めることができる。 In this specification, “downstream” means downstream in the direction of circulation of the fluid relative to the base point. "Upstream" means upstream of the fluid circulation direction relative to the base point. The ranges of “downstream” and “upstream” are not particularly limited, and the ranges can be appropriately determined according to the type of the adsorbent, the component to be separated, and the like.
原料液としてはセレブロシド、第１および第２の成分を含むものであれば特に限定されない。原料液が例えば、セレブロシド、ステロールおよびセレブロシドよりもＯＤＳ−シリカゲルへの親和性が弱い成分、を含む溶液の場合、ステロールが第１の成分、セレブロシドよりもＯＤＳ−シリカゲルへの親和性が弱い成分が第２の成分を構成し、第１工程において第２の吸着帯域からセレブロシドが回収される。 The raw material liquid is not particularly limited as long as it contains cerebroside and the first and second components. When the raw material liquid is, for example, a solution containing cerebroside, sterol, and a component having a lower affinity to ODS-silica gel than cerebroside, sterol is a first component, and a component having a lower affinity to ODS-silica gel than cerebroside is a component. The second component is constituted and cerebroside is recovered from the second adsorption zone in the first step.
原料液を得るための植物原料としては特に限定されないが、例えば、小麦、米等の穀類、大豆、ピーナツなどの豆類、ほうれん草等の葉菜、ゴマ等の種子、米糠油が挙げられる。セレブロシドの含有率が高く、本発明の方法を効果的に適用できるため、原料液は米糠油由来のものであることが好ましい。この場合、原料液は例えば、米糠に搾油処理を行うことにより原油を得た後、原油に対して脱ガム処理を行い油さいを得る。次に、油さいのエタノール抽出を行い、セレブロシドを含む内容成分の濃縮を行うことにより、原料液を調整することができる。 The plant raw material for obtaining the raw material liquid is not particularly limited, and includes, for example, cereals such as wheat and rice, beans such as soybeans and peanuts, leafy vegetables such as spinach, seeds such as sesame, and rice bran oil. Since the cerebroside content is high and the method of the present invention can be applied effectively, the raw material liquid is preferably derived from rice bran oil. In this case, the raw material liquid is obtained, for example, by subjecting rice bran to an oil squeezing process to obtain a crude oil, and then subjecting the crude oil to a degumming treatment to obtain a grit. Next, the oil solution is extracted with ethanol, and the content component containing cerebroside is concentrated, whereby the raw material liquid can be adjusted.
複数の単位充填塔のうち、セレブロシドが実質的に吸着せず、かつ第１の成分が吸着した１以上の単位充填塔を第１区画、
セレブロシドが吸着した１以上の単位充填塔を第２区画、
セレブロシドが実質的に吸着せず、かつ第２の成分が吸着した単位充填塔を第３区画とし、
第1、第２および第３の区画における流体速度（各区画を構成する単位充填塔内を流れる流体の速度）をそれぞれ、Ｕ１、Ｕ２、Ｕ３とし、
吸着剤の擬似的移動速度ＵＳを（単位充填塔の長さ）／（第２工程における脱離剤の供給位置と成分の回収位置を移行させる時間）としたとき、
第２工程では、Ｕ１〜Ｕ３を下記（１）〜（３）の条件に設定することが好ましい。
（１）第１の区画において１．０＜Ｕ1／ＵS＜１０．０、
（２）第２の区画において０．３＜Ｕ2／ＵS＜３．０、
（３）第３の区画において０．０＜Ｕ3／ＵS＜２．０。
Among the plurality of unit packed towers, one or more unit packed towers in which cerebroside is not substantially adsorbed and the first component is adsorbed are formed in a first compartment,
One or more unit packed towers to which cerebroside is adsorbed,
A unit packed tower in which cerebroside is not substantially adsorbed and the second component is adsorbed is defined as a third compartment,
The fluid velocities in the first, second, and third compartments (the velocities of the fluid flowing in the unit packed towers constituting each compartment) are U 1 , U 2 , and U 3 , respectively.
When the pseudo moving speed U S of the adsorbent is (length of the unit packed column) / (time for shifting the supply position of the desorbent and the recovery position of the component in the second step),
In the second step, U 1 to U 3 are preferably set to the following conditions (1) to (3).
(1) 1.0 In the first compartment <U 1 / U S <10.0 ,
(2) 0.3 <U 2 / U S <3.0 in the second compartment,
(3) 0.0 <U 3 / U S <2.0 in the third section.
Ｕ1／ＵSが１．０以下であるとＯＤＳ−シリカゲルからの第１の成分の脱離が十分に行われず、循環流路内に第１の成分が蓄積して第２の区画にも入り込み、回収するセレブロシドの純度が低下する場合がある。Ｕ1／ＵSが１０．０以上であるとＯＤＳ−シリカゲルから第１の成分を脱離させるのに必要な脱離液量が増加して、製造コストが増加する場合がある。 If U 1 / U S is 1.0 or less, the first component is not sufficiently desorbed from the ODS-silica gel, and the first component accumulates in the circulation flow path and is also present in the second compartment. The purity of the cerebroside that enters and recovers may decrease. If U 1 / U S is 10.0 or more, the amount of desorbing solution required for desorbing the first component from ODS-silica gel increases, and the production cost may increase.
Ｕ２／ＵSが０．３以下であると循環流路内での第２の成分の移動速度が遅くなるため第２の区画にも入り込み、回収するセレブロシドの純度が低下する場合がある。Ｕ２／ＵSが３．０以上であると循環流路内でのセレブロシドの移動速度が速くなり第３の区画に入り込み、セレブロシドの回収率が低下する場合がある。 If U 2 / U S is 0.3 or less, the moving speed of the second component in the circulation channel becomes slow, so that the second component may enter the second compartment, and the purity of the recovered cerebroside may decrease. When U 2 / U S is 3.0 or more, the moving speed of cerebroside in the circulation channel is increased, and the cerebroside moves into the third compartment, and the recovery rate of cerebroside may decrease.
Ｕ３／ＵSが０．０以下であると脱離液の使用量が増加して、製造コストが増加する場合がある。Ｕ３／ＵSが２．０以上であると循環流路内での第２の成分の移動速度が速くなるため第２の区画にも入り込み、回収するセレブロシドの純度が低下する場合がある。 When U 3 / U S is 0.0 or less, the use amount of the desorbing liquid increases, and the production cost may increase. When U 3 / U S is 2.0 or more, the moving speed of the second component in the circulation flow path is increased, so that the second component may enter the second compartment, and the purity of the collected cerebroside may decrease.
なお、第１〜第３区画はそれぞれ、１以上の単位充填塔から構成される。セレブロシドが吸着して、その全領域または一部の領域にセレブロシドが実質的に存在する単位充填塔は「第２区画」に相当する。セレブロシドが吸着せず実質的に存在しない単位充填塔であって、第１の成分が吸着したものは「第１区画」に相当する。セレブロシドが吸着せず実質的に存在しない単位充填塔であって、第２の成分が吸着したものは「第３区画」に相当する。 Each of the first to third sections is composed of one or more unit packed towers. A unit packed column in which cerebroside is adsorbed and cerebroside is substantially present in all or a part of the area corresponds to the “second section”. A unit packed column in which cerebroside is not adsorbed and substantially absent, and in which the first component is adsorbed, corresponds to a “first section”. A unit packed column in which cerebroside does not adsorb and substantially does not exist, and in which the second component is adsorbed, corresponds to a “third section”.
また、第２工程では、Ｕ１〜Ｕ３を下記（１）’〜（３）’の条件に設定することがより好ましい。
（１）’第１の区画において２．０＜Ｕ1／ＵS＜５．０、
（２）’第２の区画において０．５＜Ｕ2／ＵS＜１．０、
（３）’第３の区画において０．０＜Ｕ3／ＵS＜１．０。
In the second step, U 1 to U 3 are more preferably set to the following conditions (1) ′ to (3) ′.
(1) '2.0 <U 1 / U S <5.0 in the first section,
(2) '0.5 <U 2 / U S <1.0 in the second section;
(3) ′ 0.0 <U 3 / U S <1.0 in the third section.
上記（１）〜（３）および上記（１）’〜（３）’の条件に設定することにより、更に高純度、高濃度、高い回収率でセレブロシドまたはセレブロシド群を回収することができる。なお、上記（１）〜（３）の条件および（１）’〜（３）’の条件は、吸着剤としてＯＤＳ−シリカゲルを使用し、原料液として植物原料由来のもの、脱離液としてエタノールを使用した場合に特に顕著な効果を発揮する。 By setting the conditions (1) to (3) and the conditions (1) 'to (3)', cerebroside or a cerebroside group can be recovered with higher purity, higher concentration, and higher recovery. The conditions (1) to (3) and the conditions (1) ′ to (3) ′ are as follows. ODS-silica gel is used as an adsorbent, a raw material liquid is derived from plant raw materials, and a desorbing liquid is ethanol. The effect is particularly remarkable when is used.
（第１実施形態）
本発明の一実施形態に係る、高純度セレブロシドまたはセレブロシド群の製造方法について以下に説明する。図１は、高純度セレブロシドまたはセレブロシド群の製造に使用するクロマト分離装置１００の模式図である。図１に示すとおり、クロマト分離装置１００は、吸着剤としてＯＤＳ−シリカゲルを充填した４本の単位充填塔１５ａ〜１５ｄが配管２１ａ〜２１ｄにより直列に連結され、循環経路１６が形成された擬似移動層方式のクロマト分離装置である。「ＯＤＳ−シリカゲル」とは、シリカゲルの極性を下げるように、その表面に分布するシラノール基にオクタデシルシラン（Ｏｃｔａ Ｄｅｃｙｌ Ｓｉｌａｎｅ）化したものを表す。
(1st Embodiment)
A method for producing high-purity cerebroside or cerebroside group according to one embodiment of the present invention will be described below. FIG. 1 is a schematic diagram of a
単位充填塔１５ａは、遮断弁Ｚ１を介して配管２１ｂにより単位充填塔１５ｂと接続され、単位充填塔１５ｂは、遮断弁Ｚ２を介して配管２１ｃにより単位充填塔１５ｃと接続されている。単位充填塔１５ｃは、遮断弁Ｚ３を介して配管２１ｄにより単位充填塔１５ｄと接続され、単位充填塔１５ｄは、遮断弁Ｚ４を介して配管２１ａにより単位充填塔１５ａと接続されている。こうして、単位充填塔１５ａ〜１５ｄ、配管２１ａ〜２１ｄと、遮断弁Ｚ１〜Ｚ４とにより、循環流路１６が構成されている。遮断弁Ｚ１〜Ｚ４を開とし、循環ポンプ１３を駆動することにより循環経路１６内を矢印の方向に流体が循環可能となり、遮断弁Ｚ１〜Ｚ４の何れかを閉とすることにより循環経路１６内の所定の位置で流体が遮断可能となっている。
The unit packed
原料液タンク１には、ＯＤＳ−シリカゲルに対する親和性が中程度のセレブロシド又はセレブロシド群と、ＯＤＳ−シリカゲルに対する親和性が強い第１の成分と、ＯＤＳ−シリカゲルに対する親和性が弱い第２の成分を含有する原料液が貯蔵されている。原料液タンク１には、原料液供給ポンプ２が接続され、ポンプ２によって原料液タンク１から原料液が供給されるようになっている。原料液タンク１から供給された原料液はプレカラム３を通った後、原料液供給ライン４を通って各単位充填塔１５ａ〜１５ｄに供給されるようになっている。すなわち、原料液供給ライン４は、配管２２ａ〜２２ｄに分岐している。単位充填塔１５ａには、配管２２ａと供給弁Ｆ１を介して接続された配管２１ａから原料液が供給される。単位充填塔１５ｂには配管２２ｂと供給弁Ｆ２を介して接続された配管２１ｂから原料液が供給され、単位充填塔１５ｃには配管２２ｃと供給弁Ｆ３を介して接続された配管２１ｃから原料液が供給され、単位充填塔１５ｄには配管２２ｄと供給弁Ｆ４を介して接続された配管２１ｄから原料液が供給される。そして、原料液タンク１、ポンプ２、プレカラム３、原料液供給ライン４、配管２１ａ〜２１ｄの一部、２２ａ〜２２ｄ、供給弁Ｆ１〜Ｆ４により、原料液の供給手段が構成されている。
The raw material liquid tank 1 contains a cerebroside or cerebroside group having a medium affinity for ODS-silica gel, a first component having a strong affinity for ODS-silica gel, and a second component having a weak affinity for ODS-silica gel. The contained raw material liquid is stored. A source liquid supply pump 2 is connected to the source liquid tank 1, and the source liquid is supplied from the source liquid tank 1 by the pump 2. The raw material liquid supplied from the raw material liquid tank 1 passes through the
脱離剤タンク５には、脱離剤が貯蔵されている。脱離剤としては、原料液中の各成分を単位充填塔１５ａ〜１５ｄ内に流下させ、かつ、分離対象とする成分を適切に分離できるものであれば特に限定されず、目的に応じて決定することができる。 The release agent tank 5 stores a release agent. The desorbing agent is not particularly limited as long as it allows each component in the raw material liquid to flow down into the unit packed towers 15a to 15d and can appropriately separate the component to be separated, and is determined according to the purpose. can do.
脱離剤タンク５には脱離剤供給ライン７が接続され、脱離剤供給ポンプ６によって脱離剤タンク５から各単位充填塔１５ａ〜１５ｄに脱離剤が供給されるようになっている。すなわち、脱離剤供給ライン７は、配管２３ａ〜２３ｄに分岐している。単位充填塔１５ａには、配管２３ａと供給弁Ｄ１を介して接続された配管２１ａから脱離剤が供給される。単位充填塔１５ｂには配管２３ｂと供給弁Ｄ２を介して接続された配管２１ｂから脱離剤が供給され、単位充填塔１５ｃには配管２３ｃと供給弁Ｄ３を介して接続された配管２１ｃから脱離剤が供給され、単位充填塔１５ｄには配管２３ｄと供給弁Ｄ４を介して接続された配管２１ｄから脱離剤が供給される。そして、脱離剤タンク５、脱離剤供給ポンプ６、脱離剤供給ライン７、配管２１ａ〜２１ｄの一部、２３ａ〜２３ｄ、供給弁Ｄ１〜Ｄ４により、脱離剤の供給手段が構成されている。
The release agent supply line 7 is connected to the release agent tank 5, and the release agent is supplied from the release agent tank 5 to each of the unit packed towers 15 a to 15 d by the release
各単位充填塔１５ａ〜１５ｄ間を接続する配管２１ａ〜２１ｄはそれぞれ、分岐しており、各単位充填塔１５ａ〜１５ｄからセレブロシドまたはセレブロシド群、第１および第２の成分を回収できるようになっている。すなわち、配管２１ｂは回収弁Ｃ１を介して配管２４ａと、回収弁Ａ１を介して配管２５ａに分岐している。同様に、配管２１ｃは回収弁Ｃ２を介して配管２４ｂと、回収弁Ａ２を介して配管２５ｂに分岐している。配管２１ｄは回収弁Ｃ３を介して配管２４ｃと、回収弁Ａ３を介して配管２５ｃに分岐している。配管２１ａは回収弁Ｃ４を介して配管２４ｄと、回収弁Ａ４を介して配管２５ｄと、回収弁Ｂ４を介して配管２６に分岐している。配管２４ａ〜２４ｄは回収ライン８に接続されており、ポンプ９により矢印の方向に流れて第１の成分（図１中に「Ｃ」として表示）が回収されるようになっている。配管２５ａ〜２５ｄは回収ライン１１に接続されており、ポンプ１２により矢印の方向に流れて第２の成分（図１中に「Ａ」として表示）が回収されるようになっている。
Each of the
また、配管２１ａは弁Ｂ４を介して配管２６に分岐しており、配管２６は回収ライン１０に接続されている。回収ライン１０は、背圧弁１７を介して矢印の方向にセレブロシドまたはセレブロシド群を回収できるようになっている。
The
以下では、図１のクロマト分離装置１００を用いた、セレブロシドまたはセレブロシド群の製造方法について説明する。本実施形態における製造方法は、循環流路１６に対してセレブロシドまたはセレブロシド群、並びに第１および第２の成分を含む原料液を通流することにより、原料液から高純度のセレブロシドまたはセレブロシド群を分離・回収する。本実施形態の製造方法では、第１および第２工程を有するサイクルを複数回、繰り返す。以下では、第１および第２工程について詳細に説明する。
Hereinafter, a method for producing cerebroside or a cerebroside group using the
（１）第１工程
第１工程では、予め第１から第３の吸着帯域を分けて形成した系に対し、第２と第３の吸着帯域の間で系の循環を遮断しながら、第３の吸着帯域に原料液を供給すると共に第２の吸着帯域から高純度セレブロシドを回収する。
(1) First Step In the first step, the third system is divided into the first to third adsorption zones in advance, and the third system is operated while shutting off the circulation of the system between the second and third adsorption zones. And supplying high-purity cerebroside from the second adsorption zone.
具体的には、第１工程の開始前に予め、単位充填塔１５ａに原料液を通流させることにより、第１から第３の吸着帯域を分けて形成する。すなわち、第１工程の開始時には概ね、単位充填塔１５ａが第２の成分で富化された第３の吸着帯域を構成し、単位充填塔１５ｃが第１の成分で富化された第１の吸着帯域を構成し、単位充填塔１５ｄがセレブロシドで富化された第２の吸着帯域を構成する。第２と第３の吸着帯域の間に位置する遮断弁Ｚ４を閉とし、系内の流体の循環を遮断する。
Specifically, before the start of the first step, the first to third adsorption zones are formed separately by previously flowing the raw material liquid through the unit packed
次に、原料液供給ポンプ２により原料タンク１から原料液を供給する。供給された原料液は、原料液供給ライン４および供給弁Ｆ１を開とした配管２２ａ内を通流し、配管２１ａ内を通って単位充填塔１５ａ内に供給される。また、脱離剤供給ポンプ６により脱離剤タンク５から脱離剤を供給する。供給された脱離剤は、脱離剤供給ライン７および供給弁Ｄ３を開とした配管２３ｃ内を通流して、配管２１ｃ内を通って単位充填塔１５ｃ内に供給される。
Next, the raw material liquid is supplied from the raw material tank 1 by the raw material liquid supply pump 2. The supplied raw material liquid flows through the raw material liquid supply line 4 and the
そして、遮断位置の上流側に位置する第２の吸着帯域に相当する単位充填塔１５ｄの下流側の回収弁Ｂ４を開とし、セレブロシドまたはセレブロシド群を回収する。回収されたセレブロシドまたはセレブロシド群は、背圧弁１７を開とした回収ライン１０を経由して流出する。また、第３の吸着帯域に相当する単位充填塔１５ａの下流側の回収弁Ａ１を開とし、第２の成分を回収する。回収された第２の成分は、回収ポンプ１２により回収ライン１１を経由して流出する。
Then, the recovery valve B4 on the downstream side of the unit packed
（２）第２工程
第２工程では、循環流路１６内に脱離剤を供給して循環流路１６内の流体を通流させながら、第１から第３の吸着帯域を移動させる。そして、第１の吸着帯域からの第１の成分の回収、第３の吸着帯域からの第２の成分の回収、または第１および第３の吸着帯域からの第１および第２の成分の回収を行う。また、第１から第３の吸着帯域の移動に合わせて循環流路１６内の脱離剤の供給位置と各成分の回収位置を順次、循環流の下流側に移動させる。具体的には、第２工程は、下記工程（２−１）〜（２−４）からなる。
(2) Second Step In the second step, the first to third adsorption zones are moved while supplying the desorbing agent into the
（２−１）第２工程ではまず、遮断弁Ｚ４を開とし、循環ポンプ１３を駆動させることにより循環流路１６内の流体を通流させる。次に、第１の吸着帯域が単位充填塔１５ｄ内の下部（配管２１ａ近傍）に到達し、第３の吸着帯域が単位充填塔１５ｂ内の下部（配管２１ｃ近傍）に到達した時点で、弁Ｄ４を開とした配管２３ｄおよび配管２１ｄを介して、脱離剤を単位充填塔１５ｄ内に供給する。また、回収ポンプ９により弁Ｃ４を開とした配管２４ｄおよび回収ライン８を通って第１の成分を回収すると共に、回収ポンプ１２により弁Ａ２を開とした配管２５ｂおよび回収ライン１１を通って第２の成分を回収する。
(2-1) In the second step, first, the shutoff valve Z4 is opened and the
（２−２）次に、所定時間経過後、弁Ａ２、Ｃ４およびＤ４を閉とした後、第１から第３の吸着帯域の移動に伴い、第１の吸着帯域が単位充填塔１５ａ内の下部（配管２１ｂ近傍）に到達し、第３の吸着帯域が単位充填塔１５ｃ内の下部（配管２１ｄ近傍）に到達した時点で、弁Ｄ１を開とした配管２３ａおよび配管２１ａを介して、脱離剤を単位充填塔１５ａ内に供給する。また、弁Ｃ１を開とした配管２４ａおよび回収ライン８を通って第１の成分を回収すると共に、弁Ａ３を開とした配管２５ｃおよび回収ライン１１を通って第２の成分を回収する。
(2-2) Next, after a lapse of a predetermined time, the valves A2, C4, and D4 are closed, and the first to third adsorption zones move along with the movement of the first to third adsorption zones. When it reaches the lower part (near the
（２−３）次に、所定時間経過後、弁Ａ３、Ｃ１およびＤ１を閉とした後、第１から第３の吸着帯域の移動に伴い、第１の吸着帯域が単位充填塔１５ｂ内の下部（配管２１ｃ近傍）に到達し、第３の吸着帯域が単位充填塔１５ｄ内の下部（配管２１ａ近傍）に到達した時点で、弁Ｄ２を開とした配管２３ｂおよび配管２１ｂを介して、脱離剤を単位充填塔１５ｂ内に供給する。また、弁Ｃ２を開とした配管２４ｂおよび回収ライン８を通って第１の成分を回収すると共に、弁Ａ４を開とした配管２５ｄおよび回収ライン１１を通って第２の成分を回収する。
(2-3) Next, after a lapse of a predetermined time, after closing the valves A3, C1, and D1, the first adsorption zone is moved in the unit packed
（２−４）次に、所定時間経過後、弁Ａ４、Ｃ２およびＤ２を閉とした後、第１から第３の吸着帯域の移動に伴い、第１の吸着帯域が単位充填塔１５ｃ内の下部（配管２１ｄ近傍）に到達し、第３の吸着帯域が単位充填塔１５ａ内の下部（配管２１ｂ近傍）に到達した時点で、遮断弁Ｚ４を閉とし循環ポンプ１３の駆動を停止することにより、循環流路１６内の流体の循環を停止させる。これにより、第２工程は終了し、第１および第２サイクルからなる１サイクルが完了する。
(2-4) Next, after a lapse of a predetermined time, the valves A4, C2, and D2 are closed, and the first adsorption zone moves in the unit packed
この状態で更に次サイクルの第１工程、第２工程を順次、実施する。そして、必要な回数のサイクルを実施後、装置の操作を終了する。 In this state, the first step and the second step of the next cycle are sequentially performed. Then, after the necessary number of cycles are performed, the operation of the apparatus is terminated.
なお、図１では単位充填塔が４つ、接続されたクロマト分離装置１００を示したが、使用する単位充填塔の数は複数であれば、４つに限定されない、例えば、５つ以上の単位充填塔を接続したクロマト分離装置とする時、各吸着帯域が複数の単位充填塔にわたって形成される場合がある。
Although FIG. 1 shows the
（実施例１）
図１の装置を使用し、単位充填塔１５ａ〜１５ｄにはＯＤＳ−シリカゲル（ＦＳ１８３０ＦＭＴ−３０；平均細孔径７０Å、粒径３０μｍ）を充填した内径１０ｍｍ，長さ５００ｍｍのカラムを用いた。また、脱離剤には、９５質量％のエタノール、５質量％の水を含む醗酵エタノールを使用した。また、図１の装置を用いて、（第１実施形態）に記載の通りに第１工程、第２工程を順次、実施した。操作条件は、カラム内の温度を４０℃に維持し、Ｕ1／ＵS＝３．６、Ｕ2／ＵS＝１．８、Ｕ3／ＵS＝１．１とし、原料液供給量を０．０４（Ｌ／Ｌ−Ｒ／ｈ）とした。
(Example 1)
Using the apparatus shown in FIG. 1, a column packed with ODS-silica gel (FS1830FMT-30; average pore diameter 70 °, particle diameter 30 μm) having an inner diameter of 10 mm and a length of 500 mm was used for the unit packed towers 15a to 15d. Fermentation ethanol containing 95% by mass of ethanol and 5% by mass of water was used as a desorbing agent. Further, the first step and the second step were sequentially performed as described in (First Embodiment) using the apparatus of FIG. The operating conditions were as follows: the temperature in the column was maintained at 40 ° C., U 1 / U S = 3.6, U 2 / U S = 1.8, U 3 / U S = 1.1, and the raw material liquid supply amount Was set to 0.04 (L / LR-h).
なお、（第１実施形態）の（２−１）の工程では、単位充填塔１５ｄが第１区画、単位充填塔１５ａおよび１５ｂが第２区画、単位充填塔１５ｃが第３区画に相当する。（第１実施形態）の（２−２）の工程では、単位充填塔１５ａが第１区画、単位充填塔１５ｂおよび１５ｃが第２区画、単位充填塔１５ｄが第３区画に相当する。（第１実施形態）の（２−３）の工程では、単位充填塔１５ｂが第１区画、単位充填塔１５ｃおよび１５ｄが第２区画、単位充填塔１５ａが第３区画に相当する。（第１実施形態）の（２−４）の工程では、単位充填塔１５ｃが第１区画、単位充填塔１５ｄおよび１５ａが第２区画、単位充填塔１５ｂが第３区画に相当する。また、（Ｌ／Ｌ−Ｒ／ｈ）は、Ｌ（原料液の供給量）／Ｌ−Ｒ（クロマト分離装置１００内に充填されているＯＤＳ−シリカゲルの量）／ｈ（１サイクルの時間）を意味し、ＯＤＳ−シリカゲルの単位量当たりかつ単位時間あたりに供給される原料液の量を表す。（Ｌ／Ｌ−Ｒ／ｈ）で表される原料液供給量が大きいほど、装置の生産性が高いことを表す。
In step (2-1) of the first embodiment, the unit packed
原料液は、米脱ガム油由来グルコシルセラミド（日本製粉株式会社製）を真空乾固後、醗酵エタノールで５質量％に調整し、４℃でウィンタリング処理にかけた。次に、４０℃に昇温後、澱をグラスフィルタ（ＧＡ２００）、次いでＰＴＦＥ膜（０．５μｍ）濾過したものを固形分濃度５％Ｗ／Ｖに調整することで得た。原料液の組成の分析結果を表１に示す。なお、組成の分析には、ＨＰＬＣ−ＥＳＬＤ（蒸発光散乱検出器）を使用した。ＨＰＬＣ条件は、東北大学宮澤氏らの報告（Ｌｉｐｉｄ， Ｖｏｌ．３４， Ｎｏ．１１， ｐ．１２３２〜１２３７（１９９９年））に準じて行った。 As the raw material liquid, glucosylceramide derived from rice degumming oil (manufactured by Nippon Flour Milling Co., Ltd.) was vacuum-dried, adjusted to 5% by mass with fermentation ethanol, and subjected to a wintering treatment at 4 ° C. Next, after the temperature was raised to 40 ° C., the precipitate was filtered through a glass filter (GA200) and then filtered through a PTFE membrane (0.5 μm) to obtain a solid content concentration of 5% W / V. Table 1 shows the analysis results of the composition of the raw material liquid. In addition, HPLC-ESLD (evaporation light scattering detector) was used for the composition analysis. HPLC conditions were determined according to the report of Miyazawa et al. Of Tohoku University (Lipid, Vol. 34, No. 11, p. 1232-1237 (1999)).
表１の中で、「d18:2-20:0h」がセレブロシド群に該当し、ＯＤＳ−シリカゲルに対する親和性は表１の左側から右側に向かって順に強くなっている。すなわち、親和性は、Others1＜SG＜d18:2-18:0h＜d18:1-20:0h＜d18:2-20:0h＜Others2＜d18:2-22:0h＜d18:1-24:0h＜d18:2-24:0hとなる。 In Table 1, “d18: 2-20: 0h” corresponds to the cerebroside group, and the affinity for ODS-silica gel increases from left to right in Table 1. That is, the affinity is as follows: Others1 <SG <d18: 2-18: 0h <d18: 1-20: 0h <d18: 2-20: 0h <Others2 <d18: 2-22: 0h <d18: 1-24: 0h <d18: 2-24: 0h.
図１の装置に、この原料液を導入して、第１工程および第２工程からなるサイクルを複数回、実施したところ、図１の回収ライン１０からd18:2-20:0hであるセレブロシド群を高純度で回収することができた。
When this raw material liquid was introduced into the apparatus shown in FIG. 1 and a cycle consisting of the first step and the second step was performed a plurality of times, a cerebroside group having d18: 2-20: 0h from the
１ 原料液タンク
２ 原料液供給ポンプ
３ プレカラム
４ 原料液供給ライン
５ 脱離剤タンク
６ 脱離剤供給ポンプ
７ 脱離剤供給ライン
８、１０、１１ 回収ライン
９、１２ ポンプ
１３ 循環ポンプ
１５ａ、１５ｂ、１５ｃ、１５ｄ 単位充填塔
１６ 循環経路
１７ 背圧弁
２１ａ、２１ｂ、２１ｃ、２１ｄ、２２ａ、２２ｂ、２２ｃ、２２ｄ、２３ａ、２３ｂ、２３ｃ、２３ｄ、２４ａ、２４ｂ、２４ｃ、２４ｄ、２５ａ、２５ｂ、２５ｃ、２５ｄ、２６ 配管
１００ クロマト分離装置
Ａ１、Ａ２、Ａ３、Ａ４ 第２の成分の回収弁
Ｂ４ セレブロシドの回収弁
Ｃ１、Ｃ２、Ｃ３、Ｃ４ 第１の成分の回収弁
Ｄ１、Ｄ２、Ｄ３、Ｄ４ 脱離剤の供給弁
Ｆ１、Ｆ２、Ｆ３、Ｆ４ 原料液の供給弁
Ｚ１、Ｚ２、Ｚ３、Ｚ４ 遮断弁
REFERENCE SIGNS LIST 1 raw material liquid tank 2 raw material
Claims (3)
前記原料液が米糠油由来のものであり、
下記第１工程および第２工程を有するサイクルを複数回、繰り返すことを特徴とする高純度セレブロシドの製造方法。
第１工程；前記第１の成分が富化された第１の吸着帯域、前記セレブロシドが富化された第２の吸着帯域および前記第２の成分が富化された第３の吸着帯域を分けて形成している系に対し、前記第２と第３の吸着帯域の単位充填塔間の接続部分で前記系の循環を遮断しながら、前記第３の吸着帯域に原料液を供給すると共に、前記第３の吸着帯域以外の系内に脱離剤としてアルコールを供給した後、前記第２の吸着帯域から高純度セレブロシドを回収する工程、
第２工程；原料液を供給することなく、前記循環流路内に脱離剤としてアルコールを供給して循環流路内の流体を通流させながら、前記第１および第３の吸着帯域のうち少なくとも一方の吸着帯域から成分の回収を行い、かつ前記循環流路内の流体の通流に伴う第１から第３の吸着帯域の移動に合わせて前記循環流路内の脱離剤の供給位置と前記成分の回収位置を順次、循環流の下流側に移動させる工程。 A plurality of unit packed towers filled with ODS-silica gel as an adsorbent are connected endlessly in series, and a fluid is circulated inside or can be shut off at any position. , A raw material liquid comprising: (b) a first component having a higher affinity for the ODS-silica gel than the cerebroside; and (c) a second component having a lower affinity for the ODS-silica gel than the cerebroside. A method for producing high-purity cerebroside by separating and recovering cerebroside from the raw material liquid,
The raw material liquid is derived from rice bran oil,
A method for producing high-purity cerebroside, comprising repeating a cycle having the following first step and second step a plurality of times.
A first step; a first adsorption zone enriched in the first component, a second adsorption zone enriched in the cerebroside, and a third adsorption zone enriched in the second component. While supplying the raw material liquid to the third adsorption zone while shutting off the circulation of the system at the connection between the unit packed towers of the second and third adsorption zones, Recovering high-purity cerebroside from the second adsorption zone after supplying alcohol as a desorbing agent into a system other than the third adsorption zone ;
2nd step: without supplying the raw material liquid, while supplying alcohol as a desorbing agent into the circulation flow path and allowing the fluid in the circulation flow path to flow, the first and third adsorption zones A component is recovered from at least one of the adsorption zones, and the supply position of the desorbing agent in the circulation channel in accordance with the movement of the first to third adsorption zones accompanying the flow of the fluid in the circulation channel. And sequentially moving the recovery position of the component to the downstream side of the circulation flow.
前記セレブロシドが吸着した１以上の単位充填塔を第２区画、
前記セレブロシドが実質的に吸着せず、かつ第２の成分が吸着した単位充填塔を第３区画とし、
前記第１、第２および第３の区画における流体速度をそれぞれ、Ｕ１、Ｕ２、Ｕ３とし、
吸着剤の擬似的移動速度ＵＳを（単位充填塔の長さ）／（前記第２工程における脱離剤の供給位置と前記成分の回収位置を移行させる時間）としたとき、
前記第２工程では、Ｕ１〜Ｕ３を下記（１）〜（３）の条件に設定することを特徴とする請求項１に記載の高純度セレブロシドの製造方法。
（１）第１区画において１．０＜Ｕ１／ＵＳ＜１０．０、（２）第２区画において０．３＜Ｕ２／ＵＳ＜３．０、（３）第３区画において０．０＜Ｕ３／ＵＳ＜２．０。 A first compartment in which one or more unit packed towers in which the cerebroside is not substantially adsorbed and the first component is adsorbed,
One or more unit packed towers to which the cerebroside is adsorbed,
The unit packed tower in which the cerebroside is not substantially adsorbed and the second component is adsorbed is a third compartment,
The fluid velocities in the first, second and third compartments are respectively U 1 , U 2 , U 3 ,
When the pseudo moving speed U S of the adsorbent is (length of the unit packed column) / (time for shifting the supply position of the desorbent and the recovery position of the component in the second step),
In the second step, high-purity cerebrosides method according to claim 1, characterized in that setting the U 1 ~U 3 the following conditions (1) to (3).
(1) 1.0 <U 1 / U S <10.0 in the first compartment, (2) 0.3 <U 2 / U S <3.0 in the second compartment, 0 (3) third compartment 0.0 <U 3 / U S <2.0.
（１）’第１区画において２．０＜Ｕ１／ＵＳ＜５．０、（２）’第２区画において０．５＜Ｕ２／ＵＳ＜１．０、（３）’第３区画において０．０＜Ｕ３／ＵＳ＜１．０。 In the second step, high-purity cerebrosides method according to claim 2, characterized in that setting the U 1 ~U 3 the following conditions (1) 'to (3)'.
(1) '2.0 in the first compartment <U 1 / U S <5.0 , (2)' second compartment at 0.5 <U 2 / U S < 1.0, (3) ' Third in compartment 0.0 <U 3 / U S < 1.0.
Priority Applications (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| JP2013103928A JP6675704B2 (en) | 2013-05-16 | 2013-05-16 | Method for producing high-purity cerebroside |
Applications Claiming Priority (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| JP2013103928A JP6675704B2 (en) | 2013-05-16 | 2013-05-16 | Method for producing high-purity cerebroside |
Publications (2)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| JP2014224063A JP2014224063A (en) | 2014-12-04 |
| JP6675704B2 true JP6675704B2 (en) | 2020-04-01 |
Family
ID=52123052
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| JP2013103928A Active JP6675704B2 (en) | 2013-05-16 | 2013-05-16 | Method for producing high-purity cerebroside |
Country Status (1)
| Country | Link |
|---|---|
| JP (1) | JP6675704B2 (en) |
Families Citing this family (3)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| JP6546808B2 (en) * | 2015-08-14 | 2019-07-17 | オルガノ株式会社 | Chromatographic separation method and chromatographic separation system |
| CN110746472B (en) * | 2019-10-11 | 2023-05-12 | 上海交通大学 | Method for separating and purifying cerebroside B from edible fungi |
| CN114437150A (en) * | 2022-01-20 | 2022-05-06 | 辽宁省海洋水产科学研究院 | Method for separating and extracting stichopus japonicus cerebroside from stichopus japonicus |
Family Cites Families (9)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| JP3090851B2 (en) * | 1994-08-29 | 2000-09-25 | 理研ビタミン株式会社 | Method for producing tocopherol |
| JP2002030093A (en) * | 2000-03-13 | 2002-01-29 | Nof Corp | Method for purifying glycosylceramide |
| JP2003002835A (en) * | 2001-06-21 | 2003-01-08 | Unitika Ltd | Functional food |
| JP2002153702A (en) * | 2000-11-21 | 2002-05-28 | Japan Organo Co Ltd | Preparative chromatography for tocotrienol |
| JP2003221592A (en) * | 2002-02-01 | 2003-08-08 | Unitika Ltd | Method for purifying sphingoglycolipid |
| JP2007064944A (en) * | 2005-09-02 | 2007-03-15 | Japan Organo Co Ltd | Chromatography |
| JP4938728B2 (en) * | 2008-06-02 | 2012-05-23 | オルガノ株式会社 | Chromatographic separation method |
| JP5060400B2 (en) * | 2008-06-05 | 2012-10-31 | オルガノ株式会社 | Chromatographic separation device |
| CN102603818B (en) * | 2012-02-19 | 2014-09-03 | 浙江大学 | Preparation method and use of cerebroside compounds |
-
2013
- 2013-05-16 JP JP2013103928A patent/JP6675704B2/en active Active
Also Published As
| Publication number | Publication date |
|---|---|
| JP2014224063A (en) | 2014-12-04 |
Similar Documents
| Publication | Publication Date | Title |
|---|---|---|
| Damodaran et al. | Off-flavor precursors in soy protein isolate and novel strategies for their removal | |
| Kendel et al. | Seasonal composition of lipids, fatty acids, and sterols in the edible red alga Grateloupia turuturu | |
| JPH023498A (en) | Salad/cooking oil well-balanced for healthy purpose | |
| JP6675704B2 (en) | Method for producing high-purity cerebroside | |
| Sabudak | Fatty acid composition of seed and leaf oils of pumpkin, walnut, almond, maize, sunflower and melon | |
| KR20090045930A (en) | Non-allergenic ingredients and food products | |
| Hanuš et al. | Plasmalogens, fatty acids and alkyl glyceryl ethers of marine and freshwater clams and mussels | |
| BR112014000152B1 (en) | chromatographic separation process | |
| Cheong et al. | Extraction and enrichment of n-3 polyunsaturated fatty acids and ethyl esters through reversible π–π complexation with aromatic rings containing ionic liquids | |
| Niknam et al. | Valorization of olive mill solid residue through ultrasound-assisted extraction and phenolics recovery by adsorption process | |
| Zhang et al. | The immunoenhancement effects of sea buckthorn pulp oil in cyclophosphamide-induced immunosuppressed mice | |
| KR102289238B1 (en) | Method for chromatographic purification of a fatty acid | |
| WO2015164020A1 (en) | Nutritional compositions directed to subjects having cow's milk protein allergies | |
| Yu et al. | Concurrent enhancement of CO2 fixation and productivities of omega-3 fatty acids and astaxanthin in Haematococcus pluvialis culture via calcium-mediated homeoviscous adaptation and biomineralization | |
| Gerasimenko et al. | Effects of the season and growth stage on the contents of lipids and photosynthetic pigments in brown alga Undaria pinnatifida | |
| El-Shafay | Biochemical composition of some seaweed from Hurghada coastal along Red Sea coastal, Egypt | |
| US20110033595A1 (en) | Fatty acid fractionation process, fatty acid products and use thereof | |
| Setyawardhani et al. | Separating poly-unsaturated fatty acids from vegetable oil using urea complexation: The crystallisation temperature effects | |
| Hadiyanto et al. | Response surface optimization of lipid and protein extractions from Spirulina platensis using ultrasound assisted osmotic shock method | |
| Nekrasov et al. | Fatty acid composition of gametophytes of Matteuccia struthiopteris (L.) Tod.(Onocleaceae, Polypodiophyta) | |
| Ramadan et al. | Phospholipid composition of niger (Guizotia abyssinica Cass.) seed oil | |
| Galanakis | Separation of Functional Molecules in Food by Membrane Technology | |
| Guil‐Guerrero et al. | One‐step extraction and concentration of polyunsaturated fatty acids from fish liver | |
| JP6467426B2 (en) | Purification of fatty acids by chromatographic methods. | |
| Gupta et al. | Fatty acid composition of new hybrid varieties of minor millets seed |
Legal Events
| Date | Code | Title | Description |
|---|---|---|---|
| A521 | Request for written amendment filed |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A523 Effective date: 20130528 |
|
| A521 | Request for written amendment filed |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A523 Effective date: 20130529 |
|
| RD04 | Notification of resignation of power of attorney |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A7424 Effective date: 20140418 |
|
| A621 | Written request for application examination |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A621 Effective date: 20160331 |
|
| A521 | Request for written amendment filed |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A821 Effective date: 20160331 |
|
| A131 | Notification of reasons for refusal |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A131 Effective date: 20170425 |
|
| A131 | Notification of reasons for refusal |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A131 Effective date: 20171212 |
|
| A601 | Written request for extension of time |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A601 Effective date: 20180208 |
|
| A521 | Request for written amendment filed |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A523 Effective date: 20180405 |
|
| A02 | Decision of refusal |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A02 Effective date: 20181002 |
|
| A521 | Request for written amendment filed |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A523 Effective date: 20181228 |
|
| A911 | Transfer to examiner for re-examination before appeal (zenchi) |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A911 Effective date: 20190110 |
|
| A912 | Re-examination (zenchi) completed and case transferred to appeal board |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A912 Effective date: 20190315 |
|
| A521 | Request for written amendment filed |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A523 Effective date: 20191017 |
|
| A61 | First payment of annual fees (during grant procedure) |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A61 Effective date: 20200302 |
|
| R150 | Certificate of patent or registration of utility model |
Ref document number: 6675704 Country of ref document: JP Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: R150 |
|
| S533 | Written request for registration of change of name |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: R313533 |
|
| R350 | Written notification of registration of transfer |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: R350 |
|
| R250 | Receipt of annual fees |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: R250 |
|
| R250 | Receipt of annual fees |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: R250 |