JP6626448B2 - 核酸含有混合物のデコンボリューション法 - Google Patents
核酸含有混合物のデコンボリューション法 Download PDFInfo
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- G16B—BIOINFORMATICS, i.e. INFORMATION AND COMMUNICATION TECHNOLOGY [ICT] SPECIALLY ADAPTED FOR GENETIC OR PROTEIN-RELATED DATA PROCESSING IN COMPUTATIONAL MOLECULAR BIOLOGY
- G16B30/00—ICT specially adapted for sequence analysis involving nucleotides or amino acids
Description
z−a−a−d−d−e−a−a−d−d−e−a−d−e
を用い、所定アルゴリズムXによってスキャンされ、デコンボリュートされる。
番号(=配列番号) TNS−コード ラウンドNo.
1 GCGATGAGACATGT 0
2 ATCATATACGTATA 1
3 TAGACATCATAGAG 2
4 TATGTGCTCGCGAG 3
5 AGATGCTATGTCAC 4
6 TCTCGTAGTCTCGT 5
7 TCGATGATCACTCT 6
8 GCTCAGCTGTGCAG 7
9 CTCGAGATCGCTGC 8
10 CGCACTAGATGCGT 9
11 GCTCGCGCGAGCAC 10
12 AGCGTGAGTCTCAG 11
13 CTCGACTATCAGAC 12
14 CGATGCTCATAGTA 14
15 ATCGACGCATGCAG 15
16 GAGTGCGATCAGAG 17
17 CTACACTCACTACA 18
18 TATCGTCGATGATA 20
19 TCTGTATATCTCAC 21
20 GATCACTCGTATCA 23
21 AGCATAGCGACGTA 24
22 TCTGAGCGATAGTA 25
23 ATATCTCTGACGTG 27
24 GAGTCTAGACTCAG 29
25 GAGTGTAGTGTACA 30
26 GCTGTGCTGAGATA 31
27 CTACGTATGTATCT 32
28 TATCGCGACGTATA 34
29 GAGACTCGTGCGTG 36
30 TATCGCTCACAGAC 37
31 TATCGCTACAGCGT 40
32 CTCACTCTCAGCAG 41
33 GATCAGCTCACTGT 47
34 AGCGTGCTGTATGT 50
35 CGACGCGCGACGAG 52
36 TCGATAGACAGATG 53
37 GCGATGCTGTATCA 54
38 CTACGCGATGCTGC 55
39 CGCACAGCACAGTG 56
40 GCGTCAGATGCTCA 57
41 TAGTCTCGATGCGC 59
42 ATCACAGCATGACA 60
43 CTATGCTACACGAC 68
44 CGCACAGATGTCGT 72
45 AGACAGATGAGACT 74
46 ATATCATCGTATGT 79
47 GATGTAGCACTACT 84
48 TATGTATCGACTCT 88
49 CGACAGAGACAGTG 92
50 CTCGTAGATCATGT 99
51 CGACGTCTCGTCGT 100
52 TAGTGCGACGCTCT 105
53 GAGACAGACACTGT 108
54 GCGACTCGATGACA 109
55 AGACACGCGTGATA 114
56 ATCATATCACTCAG 118
57 GATGTATCATATGC 122
58 GCTCGTCGTCAGTA 124
59 CGATGTATCACGTA 139
60 CTATGCTCGTGACT 140
61 TATGTGAGACTATA 147
62 CTCGTGAGTCAGTA 148
63 TCTGACGCGAGACT 155
64 TAGTCTATGACTGC 161
65 CGCGACTATGCTGT 163
66 GATCGTATGTGCGC 167
67 AGATCATACAGACT 168
68 TATGAGCGTGCTGC 170
69 TCGATATATGCTGC 177
70 AGCACTCTCGTATG 185
71 CTATCATATGCGTA 187
72 TCGTGTCGTGCTGT 197
73 GCTGTAGCGTAGTG 198
74 TCTGTGCGTGTACT 202
75 GAGATATCGTGATA 209
76 TCGACTAGACAGTA 235
77 GCGACATATCAGTG 239
78 CGCACTATGTAGTA 245
79 AGCGACGACAGCGT 261
80 CTCATATCGTGCGC 263
81 GAGACTATGAGATG 270
82 GCTCGCTACGTCAG 295
83 CGCACTCGTGCTCA 299
84 GCGTGCTACAGACA 311
85 AGCATGCTCACGAC 322
86 TCGTCAGACACGAC 325
87 AGCGTAGCATAGAC 330
88 TATCAGAGATGCGT 342
89 TCGTCTATCGTCGT 344
90 CTCGACGACACGTA 360
91 AGACACGACGCTCA 362
92 CTATCTCGTCTCAC 368
93 TCTCACTATCATGC 380
94 GCTGAGATCACGAC 381
95 ATATGCGATCATCT 386
96 GCGTGCTCATATCT 401
97 TCTCGTATCGCGTG 405
98 AGATCTCTGTGACA 414
99 GAGATATACGCGAG 424
100 ATCGTGAGATGATG 437
101 TCTCACGCACTATG 440
102 GCGATGCGTGTCAC 445
103 TCGTGTCGATAGAG 458
104 GATCACTATGCGTA 484
105 CTACGTAGTCTATA 535
106 GAGTGCGCACTCGT 541
107 TCGTGCTATGTATG 542
108 AGATGTAGACTACT 581
109 ATACAGAGATATGC 594
110 CTACAGCTCGTATA 596
111 CGACGTCTGAGATG 608
112 CTCGAGCGATGCGC 625
113 TAGATAGATCATCA 664
114 AGCATGCGACTACA 669
115 CGCGAGCTGACTCA 680
116 GATGTAGACGTCGC 756
117 CGCATGATCAGATG 779
118 GCGTCATCGAGCGC 790
119 CTACAGCGTCATCT 817
120 ATACGCGCACTCAC 893
121 CTATGTATGAGCAC 899
122 CTCGTGATGACGAG 951
123 CGCGACGCACATGC 997
124 CTATCAGACGTCAG 1049
125 ATACAGAGTGCGAG 1112
126 ATACGTATCACTGC 1251
127 CGACAGCTCAGCAC 1311
128 CTATCAGCGAGATG 1355
129 ATCACTCGATAGTG 1376
130 CGCATATCATATCT 1399
131 CGCGAGAGTGTACA 1525
132 GAGATGCTGAGCGC 1568
133 AGCATGAGTGCTGT 1589
134 CGCGTAGCGAGCAG 1778
135 AGATCATCATGCAC 1890
136 TCTGTATACACGTA 1909
137 TCTGTATCATGACA 2169
138 TCGTCTCTCAGATA 2196
139 ATACACGATGTATG 2609
140 ATACGCTCGACTCA 2833
141 TCTGACGATGCGAG 2857
142 GATGAGCGTCAGAG 2910
143 GAGTCTCGTCATCT 3395
144 ATACGTAGATGCAG 3415
145 GATCACGATCTCAC 3428
146 ATCACTAGTCATGC 3651
147 TAGTGCGCGTGATG 3680
148 GCTCAGATCGTACT 4170
149 GCTGACTACACTCT 4243
150 AGCGAGAGACATCT 4391
151 TCTCGTCTGACTCT 4568
152 GATGACGCACAGTA 5440
153 ATCACAGATGCGAC 5554
154 GCGACTCTCGCTGC 5938
155 CGACAGCGATGACA 7003
156 AGATCAGCACATCA 7229
157 GCTGTGAGATGCAC 7364
158 GCGATAGCATGCAG 8343
159 GATCGTAGTGCGAC 8520
160 CTCACATACGCTCT 8522
161 CGATGTCGATATGT 8744
162 ATCACTATGACTCT 8809
163 TCGATAGCGTATGT 8963
164 ATACACTCGTAGAG 9308
165 GCGTGTATGTGACT 9847
166 TATCAGATGACGTA 10090
167 GAGACTCTGTAGAC 10629
168 GCGTGCGCGACGTA 10690
169 TAGTCAGATCTCGC 11570
170 AGACAGCGACTCGT 12132
171 CGATCAGATCAGAC 12906
172 GATGACGACAGATG 13442
173 AGCGAGATGTGCAC 13445
174 GCGTCAGCACTATA 13898
175 AGCGTATACACTGC 14072
176 CTCATGCTGTGACT 15131
177 GAGATGATCGTATA 15693
178 TATGACTATCTACT 16035
179 TAGATGATGTAGTG 17311
180 TCGACATCACTCGT 19265
181 GCTGACTCACTCGC 19811
182 GAGTGTCTCGTCAC 19988
183 CGACACTCGAGCGT 21276
184 TATCACGCGACTGC 21882
185 AGATGTATGTAGAG 21955
186 AGACGTCGACAGAC 22214
187 ATCGAGCTCGTCAG 22328
188 TCTGAGATGTATGC 25668
189 AGCGACTCGACGAC 25671
190 GAGACATATGTACT 31084
191 GCTGTGAGTGCGTG 34906
192 CTCATGCGTCTCGT 34923
193 TATGACTCGTGCAC 42593
194 AGACGCTCACATGT 43050
195 CGCGTAGATGCGTG 48624
196 CTACACGACAGACT 50109
197 CGATGTCGTGCGAG 66603
198 TAGATGCGACAGAC 93912
Claims (13)
- 核酸を含む混合物のデコンボリューションのための方法であって、
a)最初のステップにおいて、互いに異なる、N0〜Nn配列位置を有する、複数の標的ヌクレオチド配列(TNS)(A1〜An、B1〜Bn、…、Zn)が、所定アルゴリズムに従って複数のヌクレオチド(A、C、G、T/U)から生成されるものであって、先ず、形成されるTNSの全長が前記配列位置の仕様によって確立され、次いで演算z、a、dまたはeが、各配列位置N 0 〜N 13 に対して規定され、演算zが規定された第1配列位置N 0 において、ヌクレオチド(A、C、G、T/U)に対する制限は規定されず、形成されるTNS(A 1 〜A n 、B 1 〜B n 、…、Z n )の各配列位置N 0+1 〜N n において、先行する配列位置のヌクレオチド(A、C、G、T/U)に関する制限が、それぞれ少なくとも1つのヌクレオチド(A、C、G、T/U)について規定され、
b)次に、少なくとも1つの前記TNS(A1〜An、B1〜Bn、…、Zn)が、それぞれ少なくとも1つの物質または物質組合せに割り当てられると共に、後者と化学的に結合し、
c)さらに、分析される少なくとも1つの混合物が、その中に含有された少なくとも2つの異なるTNS(A1〜An、B1〜Bn、…、Zn)またはTNS結合物質と共に調整され、前記少なくとも1つの混合物は、配列決定法に従って配列決定され、前記混合物中に含有される前記TNS(A1〜An、B1〜Bn、…、Zn)の全てが、共通の配列スペクトルにおいて同時に検出され、
d)これと同時又は略同時に、前記配列スペクトルにおいて重ね合わされた前記配列は、前記所定アルゴリズムに従って前記配列位置N0〜Nnをスキャンすることによってデコンボリュートされ、かつそれらの割当てに従って物質又は物質組合せとして同定され、前記配列位置N 0 〜N n でのヌクレオチド(A、C、G、T/U)のシグナル強度は、前記配列位置N 0 〜N n でのヌクレオチド(A、C、G、T/U)の頻度に相当するものであり、前記ヌクレオチド(A、C、G、T/U)のシグナル強度は、前記配列位置N 0 〜N n にて、少なくとも5%増大した場合に有意であると判断され、個々のヌクレオチド(A、C、G、T/U)の前記シグナル強度が有意に増大した配列位置N 0 〜N n が、所定アルゴリズムに従ってスキャンされ、
形成されるTNS(A1〜An、B1〜Bn、…、Zn)の前記配列位置N0〜Nnでのヌクレオチド(A、C、G、T/U)についてのヌクレオチド占有が、前記所定アルゴリズムに従って確立され、かつ少なくとも1つの更なる配列位置のヌクレオチド占有に関連がある条件によって規定される方法。 - 前記配列スペクトルにおいて個々のヌクレオチド(A、C、G、T/U)のシグナル強度が有意に増大した配列位置N0〜Nnが、前記所定アルゴリズムに従ってスキャンされることを特徴とする、請求項1に記載の方法。
- 前記配列スペクトルにおける個々のヌクレオチド(A、C、G、T/U)の有意に増大したシグナル強度を、多くとも1つのヌクレオチド(A、C、G、T/U)の全配列位置N0〜Nnにおいて検出可能最小強度に到達するまで段階的に減少させ、それによって得られた前記減算スペクトルは、それぞれ少なくとも配列部分または配列フラグメントを有し、前記所定アルゴリズムに従って前記配列位置N0〜Nnにおいてスキャンされることを特徴とする、請求項1または2に記載の方法。
- 前記TNS(A1〜An、B1〜Bn、…、Zn)は、少なくとも2つの配列位置において、および/または少なくとも5つの配列位置からなる少なくとも1つのヌクレオチド配列によって、互いに異なることを特徴とする、請求項1から3のいずれか一項に記載の方法。
- 前記TNS(A1〜An、B1〜Bn、…、Zn)は、全長が少なくとも5つの配列位置で形成されることを特徴とする、請求項1から4のいずれか一項に記載の方法。
- 配列差異が少なくとも50%であるTNS(A1〜An、B1〜Bn、…、Zn)が、互いに最も大きな構造的および/または機能的差異を有する物質にそれぞれ割り当てられることを特徴とする、請求項1から5のいずれか一項に記載の方法。
- 物質グループ、物質サイズ、曝露位置または日付のジオ座標をコード化する少なくとも1つの配列部分を有するTNS(A1〜An、B1〜Bn、…、Zn)が形成されることを特徴とする、請求項1から6のいずれか一項に記載の方法。
- 前記TNS(A1〜An、B1〜Bn、…、Zn)は、少なくとも1つの配列部分を有し、これによってTNSとして同定されることを特徴とする、請求項1から7のいずれか一項に記載の方法。
- 前記TNS(A1〜An、B1〜Bn、…、Zn)は、一本鎖または二本鎖のRNA分子またはDNA分子であることを特徴とする、請求項1から8のいずれか一項に記載の方法。
- 前記TNS(A1〜An、B1〜Bn、…、Zn)および/またはTNS(A1〜An、B1〜Bn、…、Zn)の配列部分は、互いに組み合わされることを特徴とする、請求項1から9のいずれか一項に記載の方法。
- 前記TNS(A1〜An、B1〜Bn、…、Zn)は、前記割り当てられた物質と共有結合することを特徴とする、請求項1から10のいずれか一項に記載の方法。
- 前記TNS(A1〜An、B1〜Bn、…、Zn)の少なくとも1つおよび/または少なくとも1つのTNS結合物質の選択のための少なくとも1つの方法工程を実施し、分析される混合物が、液体移動相、および/または静止相の液体溶出によって提供されることを特徴とする、請求項1から11のいずれか一項に記載の方法。
- 前記分析される混合物は、蛍光標識化ジデオキシヌクレオチド、少なくとも1つのポリメラーゼ、および少なくとも1つのTNS(A1〜An、B1〜Bn、…、Zn)の配列部分と相補的である少なくとも1つのプライマーを用いて配列決定されることを特徴とする、請求項1から12のいずれか一項に記載の方法。
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