JP6476436B2 - 細胞および少なくとも２０個の炭素原子を有する多価不飽和脂肪酸（ｌｃ−ｐｕｆａ）を含んでなる組成物 - Google Patents

Description

発明の詳細な説明

本発明は、細胞および少なくとも２０個の炭素原子を有する多価不飽和脂肪酸（ＬＣ−ＰＵＦＡ）を含んでなる組成物と、細胞およびＬＣ−ＰＵＦＡを含んでなる組成物を乾燥させる方法と、細胞およびＬＣ−ＰＵＦＡを含んでなる組成物から、ＬＣ−ＰＵＦＡまたはＬＣ−ＰＵＦＡを含有する油を得る方法に関する。

ＬＣ−ＰＵＦＡは、発酵過程において微小生物によって産生され得る。ＬＣ−ＰＵＦＡはまた、植物中で産生され得る。次にＬＣ−ＰＵＦＡを含有する微生物または植物部位を前処理し得て、その後、ＬＣ−ＦＵＦＡまたはＬＣ−ＰＵＦＡを含有する油を単離し得る。

例えば国際公開第２００６／０８５６７２号パンフレットは、ＬＣ−ＰＵＦＡを微生物バイオマスから単離する方法を記載する。湿潤細胞は、二段階乾燥工程で乾燥される。１２０℃以上の乾燥温度が使用され、水分含量が１〜２重量％である乾燥細胞が得られる。

ＬＣ−ＰＵＦＡ含有組成物が生成した直後に、それからＬＣ−ＰＵＦＡおよび／またはＬＣ−ＰＵＦＡを含有する油を単離することが可能である。しかし実際には、ＬＣ−ＰＵＦＡ含有組成物は、ＬＣ−ＰＵＦＡおよび／またはＬＣ−ＰＵＦＡを含有する油の単離などのさらなる用途に先だって、保存および／または輸送されることが多い。

ＬＣ−ＰＵＦＡ含有組成物は、自己発熱を起こしやすいことが今や判明した。すなわち保存中に温度が自発的に上昇し得て、最終的に思わぬ爆発および火災をもたらす。この自己発熱性は、ＬＣ−ＰＵＦＡ含量の増大とＬＣ−ＰＵＦＡの二重結合数の増大に伴って、増大することもさらに判明した。

本発明の目的は、（ｉ）ＬＣ−ＰＵＦＡおよび（ｉｉ）細胞を含んでなる、より安全した組成物を提供することである。

本発明は今や、（ｉ）少なくとも２０個の炭素原子を有する多価不飽和脂肪酸（ＬＣ−ＰＵＦＡ）と（ｉｉ）細胞を含んでなる組成物を提供し、組成物は４０℃で＞２４時間の熱誘導時間（Ｔ．Ｉ．Ｔ．）を有する。

本発明に従った組成物は、その安全性が改善されており、自発的温度上昇、意外な破裂および火災の危険性が低減されている利点を有する。本発明の組成物のさらなる利点は、組成物の保存が、ＬＣ−ＰＵＦＡまたはＬＣ−ＰＵＦＡを含有する油の質に悪影響を与えず、または少なくとも質に与える影響がより小さいことである。

本発明に従った組成物は、４０℃で＞２４時間の熱誘導時間（Ｔ．Ｉ．Ｔ．）を有する。組成物のＴ．Ｉ．Ｔ．は、Ｒｅｃｏｍｍｅｎｄａｔｉｏｎｓ ｏｎ ｔｈｅ Ｔｒａｎｓｐｏｒｔ ｏｆ Ｄａｎｇｅｒｏｕｓ Ｇｏｏｄｓ，Ｍａｎｕａｌ ｏｆ Ｔｅｓｔｓ ａｎｄ Ｃｒｉｔｅｒｉａ，Ｓｅｃｔｉｏｎ ２８．４．４，Ｔｅｓｔ Ｈ．４，Ｕｎｉｔｅｄ Ｎａｔｉｏｎｓ，Ｎｅｗ Ｙｏｒｋ，１９９９に記載される熱蓄積試験を使用して、以下の適合と規格を用いて測定される。内径５７ｍｍで高さ２１０ｍｍの０．５Ｌガラス製デュワー瓶を使用する。デュワー瓶の熱損失は１６ｍＷ／Ｋである。サンプルサイズはデュワー瓶容量の７５％である。デュワー瓶に高さおよそ５０ｍｍのゴム栓をして、通気するように緩く締める。蓋の中央にある孔を通じて、熱電対をデュワー瓶に挿入する。初期温度２０℃のサンプルを収容するデュワー瓶を４０℃で制御されるチャンバーに入れ、熱電対を使用してサンプル温度をモニターする。熱誘導時間は、サンプル温度がチャンバー温度よりも２℃低い温度（したがって３８℃）に達した時点から、サンプル温度がチャンバー温度を２℃超える温度（したがって４２℃）に達する時点の間に経過する時間と定義される。Ｔ．Ｉ．Ｔ．の測定を図１に示す。

好ましくは本発明に従った組成物は、４０℃における測定で、少なくとも２日間（４８時間）、好ましくは少なくとも３日間（７２時間）、好ましくは少なくとも４日間（９６時間）、好ましくは少なくとも５日間のＴ．Ｉ．Ｔ．を有する。Ｔ．Ｉ．Ｔ．は、４０℃における測定で、例えば少なくとも１０日間など、少なくとも８日間であってもよい。Ｔ．Ｉ．Ｔ．に特定の上限はない。Ｔ．Ｉ．Ｔ．は、４０℃における測定で、例えば２０日間未満など、２５日間未満であってもよい。

本発明に従ったＴ．Ｉ．Ｔ．が増大している組成物は、本発明によって提供される教示に基づいて得られ得る。

組成物は、乾燥組成物であってもよい。乾燥温度が低下すると、Ｔ．Ｉ．Ｔ．は増大することが分かった。組成物中のＬＣ−ＰＵＦＡ含量、またはＬＣ−ＰＵＦＡの二重結合数が高い場合は、乾燥温度を低くすることが有利であることもさらに分かった。

例えば乾燥温度は、４０℃未満、好ましくは３５℃未満、より好ましくは３３°未満、より好ましくは３０℃未満、より好ましくは２５℃未満であってもよい。本明細書で使用するとき、乾燥温度とは、乾燥機内の製品温度を指す。例えば乾燥機が流動床乾燥機であれば、乾燥温度は床温度を指す。

したがって本発明は、組成物を４０℃未満、好ましくは３５℃未満、好ましくは３３℃未満、好ましくは３０℃未満、好ましくは２５℃未満の温度で乾燥させるステップを含んでなる、細胞およびＬＣ−ＰＵＦＡを含んでなる組成物を乾燥する方法もまた提供する。

乾燥は、任意の適切な方法によることもできる。乾燥は、任意の適切な乾燥機内で実施してもよい。ホットスポットの形成を防止または最小化する乾燥機を使用することが好ましい。好ましい実施形態では、乾燥は流動床乾燥機を使用して行われる。

乾燥時間の短縮と共に、Ｔ．Ｉ．Ｔ．は増大することが分かった。

好ましい実施形態では、乾燥は調整空気を使用して行われる。露点が＜１５℃、好ましくは＜１０℃、好ましくは＜５℃である空気を使用することが好ましい。露点を低下させることは、好ましい（低）乾燥温度で、好ましい水分含量を効率的に達成させる利点がある。

したがって本発明は、組成物を＜１５℃、好ましくは＜１０℃、好ましくは＜５℃の露点を好ましくは有する調整空気に接触させるステップを含んでなる、細胞およびＬＣ−ＰＵＦＡを含んでなる組成物を乾燥させる方法もまた提供する。乾燥は、上述の好ましい乾燥温度で行うことが好ましい。

組成物の水分含量が増大すると、Ｔ．Ｉ．Ｔ．が増大することもさらに分かった。（例えば乾燥）組成物は、水分含量が少なくとも１重量％、好ましくは少なくとも２重量％、好ましくは少なくとも３重量％、好ましくは少なくとも４重量％であることが好ましい。水分含量に特定の上限はない。組成物は、水分含量が例えば１５重量％未満、例えば１２重量％未満、例えば１０重量％未満、例えば９重量％未満など、２０重量％未満であってもよい。水分含量を好ましい値未満に低下させると、組成物の微生物安定性が増大することが分かった。

本明細書で使用するとき、水分含量は、湿潤重量を基準にして、すなわち（乾燥物質、油、および水分を含めた）組成物総重量に基づいて計算される。これおよびは、当業者によって、例えば１０５℃の温度で水を蒸発させ、蒸発した水分重量を測定することにより求められ得る。

好ましい本発明の実施形態では、本明細書で開示される組成物の乾燥が、本明細書で開示される好ましい水分含量をもたらす。

組成物の処理中にフリーラジカルの形成を避けることが、Ｔ．Ｉ．Ｔ．値を増大し得ることもさらに分かった。この見識に基づいて、当業者は、フリーラジカル形成をもたらす工程を回避できる。したがって例えば高温および／または酸素への曝露など、フリーラジカル形成を促進し得る状況への細胞の曝露を最小化することが、一般に好ましい。

細胞が微生物細胞である場合、発酵ブロス中に存在することもできる酵素を十分に根絶するように、細胞を含有する発酵ブロスを加熱することが有利である。好ましい加熱プロトコルは、参照によって本明細書に援用する、国際公開第９７／０３７０３２号パンフレットおよび国際公開第２００４／００１０２１号パンフレットに記載される。例えば＜１０ｐｐｍ、例えば＜５ｐｐｍ、例えば＜２ｐｐｍ、例えば＜１ｐｐｍなどの低い溶解酸素含量を有する発酵ブロスを加熱することが好ましい。特に上で言及されているプロトコルを使用した酵素の根絶は、Ｔ．Ｉ．Ｔ．値の増大をもたらすこともある。

好ましい実施形態では、本発明に従った組成物は、油含量が、例えば少なくとも２０重量％、例えば少なくとも３０重量％、例えば少なくとも４０重量％など、少なくとも１０重量％である。油含量は、例えば６０重量％未満など、７０重量％未満であってもよい。油含量は、当業者に知られている方法によって測定されてもよい。 本明細書で使用する組成物の油含量を測定する適切な方法は、溶剤としてｎ−ヘキサンを使用するソックスレー抽出の使用であり、抽出対象の組成物の水分含量は＜１５重量％であり、組成物および細胞は（確実に全ての油が細胞から放出され溶剤に溶解され得るように）微粉砕される。本明細書で使用するとき、油含量は、乾燥ベースで、すなわち組成物の総乾燥重量（乾燥物質および油を含むが、水分を除く）に基づいて計算される。

好ましい実施形態では、本発明に従った組成物は、油含量が上で定義されるとおりであり、油組成は下述の好ましい実施形態のとおりである。

好ましい実施形態では、組成物は油を含んでなり、油は、油中の総脂肪酸を基準にして、例えば少なくとも２０重量％、例えば少なくとも３０重量％、例えば少なくとも４０重量％など、少なくとも１０重量％の少なくとも３つの二重結合があるＰＵＦＡ、油中の総脂肪酸を基準にして、例えば８０重量％未満、例えば７０重量％未満、例えば６０重量％未満の少なくとも３つの二重結合があるＰＵＦＡを含んでなる。本明細書で使用するとき、少なくとも３つの二重結合があるＰＵＦＡの重量％は、少なくとも３つの二重結合がある全てのＰＵＦＡの合計を指す。

好ましい実施形態では、組成物は油を含んでなり、油は、油中の総脂肪酸を基準にして、例えば少なくとも２０重量％、例えば少なくとも３０重量％、例えば少なくとも４０重量％など、少なくとも１０重量％のアラキドン酸（ＡＲＡ）、油中の総脂肪酸を基準にして、例えば８０重量％未満、例えば７０重量％未満、例えば６０重量％未満のＡＲＡを含んでなる。

好ましい実施形態では、組成物は油を含んでなり、油は、油中の総脂肪酸を基準にして、例えば少なくとも２０重量％、例えば少なくとも３０重量％、例えば少なくとも４０重量％など、少なくとも１０重量％のドコサヘキサエン酸（ＤＨＡ）、油中の総脂肪酸を基準にして、例えば８０重量％未満、例えば７０重量％未満、例えば６０重量％未満のＤＨＡを含んでなる。

本明細書で使用するとき、油組成を判定する適切な方法は、上述のようにｎ−ヘキサンを使用するソックスレー抽出を使用して組成物から油を抽出し、抽出された油の脂肪酸組成を判定することである。

油含量および／または二重結合数が比較的高い場合は、乾燥機内でより低い乾燥温度とより短い滞留時間を選択することが望ましい。

本明細書の教示に基づいて、油含量の高い組成物および／または少なくとも３つの二重結合があるＰＵＦＡの濃度が高い油を含有する組成物においてさえも、高いＴ．Ｉ．Ｔ．値が実現可能である。

本明細書では、以下の略語を本明細書全体を通じて使用する。
ＰＵＦＡは多価不飽和脂肪酸を指す。
ＬＣ−ＰＵＦＡ（長鎖多価不飽和脂肪酸）は少なくとも２０個の炭素原子を有するＰＵＦＡを指す。
ＨＵＦＡ（高度不飽和脂肪酸）は、少なくとも３つの二重結合を有するＰＵＦＡを指す。
ＬＣ−ＨＵＦＡ（長鎖高度不飽和脂肪酸）は、少なくとも２０個の炭素原子と少なくとも３つの二重結合を有する多価不飽和脂肪酸を指す。

本発明は、特定のＬＣ−ＰＵＦＡに限定されるものではない。本発明の実施形態では、ＬＣ−ＰＵＦＡは少なくとも３つの二重結合を有する。本発明のさらなる実施形態では、ＬＣ−ＰＵＦＡは少なくとも４つの二重結合を有する。自己加熱に対する感受性は二重結合数の増大に伴って増大するため、本発明の利点は、二重結合数が増大しているＬＣ−ＰＵＦＡでなおもより明白である。

ＬＣ−ＰＵＦＡは、ω３ ＬＣ−ＰＵＦＡまたはω６ ＬＣ−ＰＵＦＡであってもよい。
ＬＣ−ＰＵＦＡとしては、例えば、
ジホモ−γ−リノレン酸（ＤＧＬＡ、２０：３ ω−６）
アラキドン酸（ＡＲＡ、２０：４ ω−６）
エイコサペンタエン酸（ＥＰＡ、２０：５ ω−３）
ドコサペンタエン酸（ＤＰＡ、２２：５ ω−３、またはＤＰＡ２２：５、ω−６）、
ドコサヘキサエン酸（ＤＨＡ：２２：６ ω−３）
が挙げられる。

好ましいＬＣ−ＰＵＦＡとしては、アラキドン酸（ＡＲＡ）およびドコサヘキサエン酸（ＤＨＡ）が挙げられる。特にＡＲＡが好ましい。

本発明に従った組成物は、細胞を含んでなる。細胞は、ＬＣ−ＰＵＦＡを含有するおよび／またはそれを産生した任意の細胞であってもよい。

本発明の実施形態では、細胞は微生物細胞（微生物）である。

微生物細胞の例としては、酵母細胞、細菌細胞、真菌細胞、および藻類細胞が挙げられる。真菌が好ましく、好ましくはケカビ目（Ｍｕｃｏｒａｌｅｓ）の真菌である。実例は、モルティエラ属（Ｍｏｒｔｉｅｒｅｌｌａ）、ヒゲカビ属（Ｐｈｙｃｏｍｙｃｅｓ）、ブラケスレア属（Ｂｌａｋｅｓｌｅａ）、アスペルギルス属（Ａｓｐｅｒｇｉｌｌｕｓ）、スラウストキトリウム属（Ｔｈｒａｕｓｔｏｃｈｙｔｒｉｕｍ）、クサレカビ属（Ｐｙｔｈｉｕｍ）またはハエカビ属（Ｅｎｔｏｍｏｐｈｔｈｏｒａ）である。好ましいアラキドン酸（ＡＲＡ）源は、モルティエラ・アルピナ（Ｍｏｒｔｉｅｒｅｌｌａ ａｌｐｉｎａ）である。藻類は渦鞭毛藻類であり得て、および／またはチノリモ（Ｐｏｒｐｈｙｒｉｄｉｕｍ）、ニッチア（Ｎｉｔｓｚｃｈｉａ）、またはクリプテコジニウム（Ｃｒｙｐｔｈｅｃｏｄｉｎｉｕｍ）（例えばクリプテコジニウム・コーニイ（Ｃｒｙｐｔｈｅｃｏｄｉｎｉｕｍ ｃｏｈｎｉｉ））が挙げられる。酵母としては、ピキア・シフェリイ（Ｐｉｃｈｉａ ｃｉｆｅｒｉｉ）などのピキア属（Ｐｉｃｈｉａ）またはサッカロミセス属（Ｓａｃｃｈａｒｏｍｙｃｅｓ）の酵母が挙げられる。細菌は、プロピオニバクテリウム属（Ｐｒｏｐｉｏｎｉ）の細菌であり得る。

本発明の実施形態では、組成物は、モルティエラ属（Ｍｏｒｔｉｅｒｅｌｌａ）の真菌、好ましくはモルティエラ・アルピナ（Ｍｏｒｔｉｅｒｅｌｌａ ａｌｐｉｎａ）種の真菌を含んでなり、好ましくはＬＣ−ＰＵＦＡは、ＡＲＡまたはＤＧＬＡである。

本発明の実施形態では、組成物は、例えばスラウストキトリウム属（Ｔｈｒａｕｓｔｏｃｈｙｔｒｉｕｍ）またはシゾキトリウム属（Ｓｃｈｉｚｏｃｈｙｔｒｉｕｍ）の真菌などのヤブレツボカビ目（Ｔｈｒａｕｓｔｏｃｈｙｔｒｉａｌｅｓ）の真菌を含んでなり、好ましくはＬＣ−ＰＵＦＡは、ＤＨＡおよび／またはＥＰＡである。

本発明の実施形態では、組成物は、クリプテコジニウム属（Ｃｒｙｐｔｈｅｃｏｄｉｎｉｕｍ）の藻類、好ましくはクリプテコジニウム・コーニイ（Ｃｒｙｐｔｈｅｃｏｄｉｎｉｕｍ ｃｏｈｎｉｉ）種である藻類を含んでなり、好ましくはＬＣ−ＰＵＦＡはＤＨＡである。

別の本発明の実施形態では、細胞は植物細胞である。細胞は、遺伝子導入植物の植物細胞であってもよい。

適切な植物および種子は、例えばその内容を参照によって本明細書に援用する、国際公開第２００５／０８３０９３号パンフレット、国際公開第２００８／００９６００号パンフレット、および国際公開第２００９／１３０２９１号パンフレットに記載される。本発明で使用し得るその他の植物および種子は、例えば、その内容を参照によって本明細書に援用する、国際公開第２００８／１００５４５号パンフレット、国際公開第２００８／１２４８０６号パンフレット、国際公開第２００８／１２４０４８号パンフレット、国際公開第２００８／１２８２４０号パンフレット、国際公開第２００４／０７１４６７号パンフレット、国際公開第２００５／０５９１３０号パンフレットで開示される。これらの種子は、（導入遺伝子）ダイズまたは（導入遺伝子）カノーラ種子であってもよい。植物は、（導入遺伝子）ダイズ植物または（導入遺伝子）カノーラ植物であってもよい。

好ましい実施形態では、植物は、例えばアブラナ属（Ｂｒａｓｓｉｃａ）などのアブラナ科（Ｂｒａｓｓｉｃａｃｅａｅ）の、アマナズナ属（Ｃａｍｅｌｉｎａ）、メラノシナピス属（Ｍｅｌａｎｏｓｉｎａｐｉｓ）、シナピス属（Ｓｉｎａｐｉｓ）、アラビドプシス属（Ａｒａｂｉｄｏｐｓｉｓ）、例えばシロガラシ（Ｂｒａｓｓｉｃａ ａｌｂａ）、アビシニアガラシ（Ｂｒａｓｓｉｃａ ｃａｒｉｎａｔａ）シロガラシ（Ｂｒａｓｓｉｃａ ｈｉｒｔａ）、セイヨウアブラナ（Ｂｒａｓｓｉｃａ ｎａｐｕｓ）、カブ（Ｂｒａｓｓｉｃａａ ｒａｐａ）種、ノハラガラシ（Ｓｉｎａｐｉｓ ａｒｖｅｎｓｉｓ）、カラシナ（Ｂｒａｓｓｉｃａ ｊｕｎｃｅａ）、カラシナ・ユンケア変種（Ｂｒａｓｓｉｃａ ｊｕｎｃｅａ ｖａｒ．ｊｕｎｃｅａ）、カラシナ・クリスピフォラ変種（Ｂｒａｓｓｉｃａ ｊｕｎｃｅａ ｖａｒ．ｃｒｉｓｐｉｆｏｌｌａ）カラシナ・フォリオザ変種（Ｂｒａｓｓｉｃａ ｊｕｎｃｅａ ｖａｒ．ｆｏｌｉｏｓａ）、クロガラシ（Ｂｒａｓｓｉｃａ ｎｉｇｒａ）、ブラシカ・シナピオイデス（Ｂｒａｓｓｉｃａ ｓｉｎａｐｉｏｉｄｅｓ）、ナガミノアマナズナ（Ｃａｍｅｌｉｎａ ｓａｔｉｖａ）、メラノシナピス・コミュニス（Ｍｅｌａｎｏｓｉｎａｐｉｓ ｃｏｍｍｕｎｉｓ）、キャべツ（Ｂｒａｓｓｉｃａ ｏｌｅｒａｃｅａ）、またはシロイヌナズナ（Ａｒａｂｉｄｏｐｓｉｓ ｔｈａｌｉａｎａ）などの属および種の（遺伝子導入）植物である。

組成物は、ＬＣ−ＰＵＦＡを含んでなる任意のバイオマスであってもよい。組成物は、本明細書で開示される乾燥方法によって得られる、または得られ得る（乾燥）組成物であることが好ましい。

組成物は、微生物およびＬＣ−ＰＵＦＡを含んでなる、微生物バイオマスであってもよい。好ましい微生物およびＬＣ−ＰＵＦＡについては、上で言及されている。

実現可能な本発明の実施形態では、本発明に従った微生物（微生物細胞）を含んでなる組成物は、微生物細胞を含んでなる発酵ブロスを加熱するステップ（低温殺菌または滅菌とも称される）と、例えば濾過によって微生物細胞を脱水するステップと、上述の方法で微生物細胞を乾燥するステップを含んでなる方法で得られる。好ましい実施形態では、脱水された微生物細胞は、好ましくは押し出しによって乾燥前に顆粒化される。顆粒化、例えば押出しは、２５℃未満の温度で実施されることが好ましい。好ましい方法は、本明細書に参照によって援用する、国際公開第９７／０３７０３２号パンフレットに記載される。

本発明の実施形態では、組成物はＬＣ−ＰＵＦＡを含んでなる種子を含んでなり、および／または組成物は種子の形態であってもよく、前記種子は４０℃で＞２４時間の熱誘導時間（Ｔ．Ｉ．Ｔ．）を有する。種子は、上で言及されている植物の種子であることが好ましい。

損傷種子の百分率を低く保つことは、Ｔ．Ｉ．Ｔ．の増大をもたらすことが分かった。

１２％未満の種子が総損傷種子であることが好ましく、好ましくは８％未満、好ましくは５％未満、好ましくは３％未満の種子が総損傷種子である。

６％未満の種子が際立って未熟な種子であることが好ましく、好ましくは４％未満、好ましくは２％未満、好ましくは１％未満の種子が際立って未熟な種子である。

０．５％未満の種子が加熱された種子であることが好ましく、好ましくは０．３％未満、好ましくは０．１％未満、好ましくは０．０５％未満の種子が加熱された種子である。

好ましい実施形態では、８％未満の種子が総損傷種子であり、４％未満の種子が際立って未熟な種子であり、０．３％未満の種子が加熱された種子である。別の好ましい実施形態では、５％未満の種子が総損傷種子であり、２％未満の種子が際立って未熟な種子であり、０．１％未満の種子が加熱された種子である。別の好ましい実施形態では、３％未満の種子が総損傷種子であり、１％未満の種子が際立って未熟な種子であり、０．０５％未満の種子が加熱された種子である。

本明細書で使用する、総損傷種子、際立って未熟な種子、および加熱された種子の百分率は、Ｃａｎａｄｉａｎ Ｇｒａｉｎ ＣｏｍｍｉｓｓｉｏｎのＯｆｆｉｃｉａｌ Ｇｒａｉｎ Ｇｒａｄｉｎｇ Ｇｕｉｄｅ，２００１（カノーラおよびナタネ用）に従って判定される。

総損傷種子、際立って未熟な種子、および／または加熱された種子の百分率が好ましい種子は、収穫後の種子の適切な選択によって得られ得る。

本発明のさらなる態様では、本発明はＬＣ−ＰＵＦＡを含んでなる種子を提供し、種子は、総損傷種子、際立って未熟な種子および／または加熱された種子の百分率が、上で開示されるとおりである。

好ましくは種子は、種子中の総脂肪酸を基準にして、少なくとも５重量％、好ましくは少なくとも１０重量％、好ましくは少なくとも１５重量％、好ましくは少なくとも２０重量％のＬＣ−ＰＵＦＡを含む（例えば本明細書に記載されるＬＣ−ＰＵＦＡ。

好ましくは種子は、種子中の総脂肪酸を基準にして、少なくとも５重量％、好ましくは少なくとも１０重量％、好ましくは少なくとも１５重量％、好ましくは少なくとも２０重量％のω−６ ＬＣ−ＰＵＦＡを含む。

好ましくは種子は、種子中の総脂肪酸を基準にして、少なくとも５重量％、好ましくは少なくとも１０重量％、好ましくは少なくとも１５重量％、好ましくは少なくとも２０重量％のＡＲＡを含む。

好ましくは種子は、種子中の総脂肪酸を基準にして、少なくとも５重量％、好ましくは少なくとも１０重量％、好ましくは少なくとも１５重量％、好ましくは少なくとも２０重量％のω−３ ＬＣ−ＰＵＦＡを含む。

好ましくは種子は、種子中の総脂肪酸を基準にして、少なくとも５重量％、好ましくは少なくとも１０重量％、好ましくは少なくとも１５重量％、好ましくは少なくとも２０重量％のＤＨＡを含む。

好ましくは種子は、種子中の総脂肪酸を基準にして、２重量％未満、好ましくは１重量％未満、好ましくは０．５重量％未満のエルカ酸を含む。

本発明に従った組成物は、さらなる使用および／または加工に先だって、適切に保存してもよい。

組成物を１０℃未満、好ましくは５℃未満、好ましくは０℃未満、好ましくは零下５℃未満、好ましくは零下１０℃未満の温度で保存することが有利である。保存温度に特定の下限はない。一般に組成物は、零下３０℃を超える温度で保存される。

組成物が種子を含んでなり、または種子の形態である場合、種子は、水分含量が、例えば１２重量％未満、例えば１０重量％未満、例えば９．５重量％未満、例えば６重量％を超え、例えば７重量％を超え、例えば８重量％を超えるなど、１５重量％未満であることが好ましい。水分含量は、例えば６〜１５重量％、例えば７〜１２重量％、例えば８〜１０重量％であってもよい。好ましい水分含量は、上で述べたように種子を乾燥することで得られ得る。

組成物は、任意の適切な期間にわたり保存されてもよい。組成物は、例えば少なくとも１日間、例えば少なくとも１週間、例えば少なくとも２週間、例えば少なくとも１ヶ月間、例えば少なくとも３ヶ月間保存されてもよい。保存期間に特定の上限はない。組成物は、例えば１２ヶ月間未満、例えば６ヶ月間未満保存されてもよい。

本発明は、本発明に従った組成物から、または本発明に従った方法によって得られるまたは得られ得る組成物から、前記ＬＣ−ＰＵＦＡまたはＬＣ−ＰＵＦＡを含んでなる油を単離するステップを含んでなる、ＬＣ−ＰＵＦＡまたはＬＣ−ＰＵＦＡを含んでなる油を得る方法をさらに含んでなる。

脂質ＬＣ−ＰＵＦＡまたはＬＣ−ＰＵＦＡを含んでなる油は、好ましくは溶剤抽出によって、組成物から、ＬＣ−ＰＵＦＡまたはＬＣ−ＰＵＦＡを含んでなる油を抽出することにより得られてもよい。例えばＣ_１〜１０アルキルエステル（例えば酢酸エチルまたは酢酸ブチル）、トルエン、Ｃ_１〜３アルコール（例えばメタノール、プロパノール）、Ｃ_３〜６アルカン（例えばヘキサン）または超臨界流体（例えば液体ＣＯ_２または超臨界プロパン）などの任意の適切な溶剤を使用してもよい。溶剤は、例えばＣ_３〜Ｃ_８アルカン（好ましくはヘキサン）などの非極性溶剤、または超臨界流体（好ましくは超臨界ＣＯ_２または超臨界プロパン）であることが好ましい。好ましい抽出手順は、国際公開第９７／０３７０３２号パンフレットに記載される。

組成物が種子を含んでなり、または種子の形態である場合、ＬＣ−ＰＵＦＡおよび／またはＬＣ−ＰＵＦＡを含んでなる油は、次のようにして単離されてもよい。

種子および／または種子を含んでなる組成物は、粉砕および／または圧扁してもよい。これにより、ＬＣ−ＰＵＦＡまたはＬＣ−ＰＵＦＡを含有する油の回収を促進することもできる。次に粉砕および／または圧扁種子、および／または種子を含んでなる組成物を、例えば６０℃を超える温度で加熱してもよい。加熱は比較的低温であってもよい。例えば種子および／または種子を含んでなる組成物を、例えば６０〜８０℃などの５０〜９０℃の温度で、好ましくは２〜６０分間にわたり、好ましくは５〜３０分間加熱してもよい。温度の増大を選択する場合は、加熱継続時間を短縮することが好ましい。

種子および／または種子を含んでなる組成物は、高速に加熱してもよい。方法は、例えばそれにより温度が１分未満、好ましくは３０秒未満、好ましくは２０秒未満で、４０℃から７０℃になる、種子または種子を含んでなる組成物を加熱するステップを含んでなってもよい。方法は、例えばそれにより温度が１分未満、好ましくは３０秒未満、好ましくは２０秒未満で、４０℃から１００℃になる、種子および／または種子を含んでなる組成物を加熱するステップを含んでなってもよい。

本発明に従った方法は、種子および／または種子を含んでなる組成物を、過熱蒸気を使用して加熱するステップを含んでなってもよい。本発明に従った方法は、例えば種子および／または種子を含んでなる組成物を、過熱蒸気に接触させるステップを含んでなってもよい。

好ましくは本発明に従った方法は、種子および／または種子を含んでなる組成物を、例えば１２０〜１６０℃などの比較的高温で、比較的短時間加熱するステップを含んでなる。方法は、例えば種子および／または種子を含んでなる組成物を、例えば５分未満、例えば３分未満、例えば２分未満など、８分未満にわたり、例えば１６０℃未満などの１２０℃を超える温度に保つステップを含んでなる。種子および／または種子を含んでなる組成物を、例えば１６０℃以下などの１２０〜の温度に保つステップは、少なくとも５秒間、好ましくは少なくとも１０秒間にわたってもよい。

種子および／または種子を含んでなる組成物を、比較的高速に冷却することが好ましい。種子および／または種子を含んでなる組成物の温度を、６０分未満、好ましくは３０分未満、好ましくは１５分未満で、最大温度から４０℃の温度に低下させることが好ましい。

プロトコルを別々に、または組み合わせて使用してもよい。例えば高速に加熱することを、種子または種子を含んでなる組成物を比較的短時間にわたり好ましい温度に保つこと、および／または迅速な冷却速度と組み合わせてもよい。

加熱は、特定の加工段階に限定されない。加熱は、種子の微粉砕（例えば粉砕または圧扁）の前または後に行ってもよい。さらなる態様では、本発明はＬＣ−ＰＵＦＡを含んでなる種子を加熱する方法を提供し、それによって種子は上で開示されるように加熱される。

種子または種子を含んでなる組成物を圧搾することによって、油画分を得てもよい。油画分を放出させる種子の圧搾は、当該技術分野で知られている技術を使用して実施してもよい。スクリュープレスを使用してもよい。好ましい実施形態では、本発明は、例えば冷却されるスクリュープレスを使用して、種子または種子を含んでなる組成物を圧搾し、油を放出するステップを含んでなる。

上述の圧搾後に得られるプレスケーキから、溶剤抽出によってさらなる油画分を得てもよい。

油の精製は、脱ガム、精製、漂白および／または脱臭を含んでなってもよい。これら既知の工程であり、当業者によって実施され得る。好ましい実施形態では、脱臭は、２００℃未満、好ましくは１９０℃未満、好ましくは１８５℃未満の温度で行われる。脱臭温度を好ましい値未満に低下させることは、油の品質を改善する。

本発明は、本発明に従った組成物からＬＣ−ＰＵＦＡまたはＬＣ−ＰＵＦＡを含んでなる油を得るステップと、前記ＬＣ−ＰＵＦＡまたは前記ＬＣ−ＰＵＦＡを含んでなる油を前記食品に組み込むステップを含んでなる、特に乳児用調製粉乳である食品を得る方法をさらに提供する。

さらなる好ましい態様、実施形態、および特徴は、特許請求の範囲で開示される。

本発明の一実施形態および／または態様の好ましい特徴および特質は、変更すべきところは変更して、別の実施形態に当てはまる。本明細書で使用するとき、ＬＣ−ＰＵＦＡの好ましい特徴および特質は、本発明の全ての態様および実施形態中のＬＣ−ＰＵＦＡに当てはまる。

それに限定されない以下の実施例に言及して、本発明をさらに詳しく開示する。

［実施例］
［実施例１］
８日間の発酵後に得られたモルティエラ・アルピナ（Ｍｏｒｔｉｅｒｅｌｌａ ａｌｐｉｎａ）の発酵ブロスを７０℃で１時間低温殺菌した。低温殺菌ブロスを濾過して、水分含量５０重量％の濾過ケークを得た。濾過ケークを崩し、１５℃未満の温度で押し出した。押し出し物（直径３ｍｍ）を３つのゾーンがある連続流動床乾燥機内で、水分含量７％に乾燥させた。第１のゾーンでは床温度は３２℃であり、空気温度は５０℃であった（Ｔ_{ｄｅｗ ｐｏｉｎｔ}＝１５℃）。
第１のゾーン：床温度３２℃、空気温度５０℃（Ｔ_{ｄｅｗ ｐｏｉｎｔ}＝１５℃）：４５分間
第２のゾーン：床温度３２℃、空気温度３５℃（Ｔ_{ｄｅｗ ｐｏｉｎｔ}＝１℃）：４５分間
第３のゾーン：床温度１５℃、空気温度１５℃（Ｔ_{ｄｅｗ ｐｏｉｎｔ}＝１℃）：３０分間
乾燥バイオマスの油含量は３９％であった。ＡＲＡ含量は、油中の総脂肪酸を基準にして４６％であった。

４０℃で測定された熱誘導時間（Ｔ．Ｉ．Ｔ．）：９日間

［比較実験Ａ］
発酵および低温殺菌を繰り返す。連続脱水機を使用して湿潤細胞を回収し、破壊して、次に振動流動床を用いて熱風乾燥（熱風温度１２０℃）により乾燥を実施し、水分含量１重量％に乾燥させる。室温の空気を流動床に供給して、乾燥細胞を冷却する。ＡＲＡおよび油含量は、実施例１と同様である。

４０℃で測定された熱誘導時間（Ｔ．Ｉ．Ｔ．）：＜１２時間

［実施例２］
国際公開第２００８００９６００号パンフレットに記載される手順を使用して、形質転換された遺伝子導入アブラナ属（Ｂｒａｓｓｉｃａ）植物から、１９％アラキドン酸（総脂肪酸基準）を含有する種子を得る。

種子は以下の規格を有する（Ｃａｎａｄｉａｎ Ｇｒａｉｎ ＣｏｍｍｉｓｓｉｏｎのＯｆｆｉｃｉａｌ Ｇｒａｉｎ Ｇｒａｄｉｎｇ Ｇｕｉｄｅ，２００１に従って測定される）。際立って未熟な種子＜２％、全損傷種子＜５％。

水分含量１７重量％の種子を、流動床乾燥機を使用して乾燥させる。床温度は２８℃である。露点が１０℃の調整空気を使用する。乾燥種子の水分含量は８．５重量％である。油含量は３５重量％である。

４０℃で測定された熱誘導時間（Ｔ．Ｉ．Ｔ．）：１４日間

熱誘導時間（Ｔ．Ｉ．Ｔ．）の測定の概略図を示す。

Claims (34)

1. （ｉ）少なくとも２０個の炭素原子を有する多価不飽和脂肪酸（ＬＣ−ＰＵＦＡ）および（ｉｉ）細胞を含んでなる組成物であって、
   １〜２０重量％の水分含量を有し、
   少なくとも３０重量％の油含量を有し、
   油中の総脂肪酸を基準にして、少なくとも４０重量％の少なくとも３つの二重結合があるＰＵＦＡを含んでなる油を含んでなり、
   前記細胞が微生物細胞であり、
   ４０℃で＞２４時間の熱誘導時間（Ｔ．Ｉ．Ｔ．）を有する、組成物。
2. ２〜１５重量％の水分含量を有する、請求項１に記載の組成物。
3. ３〜１２重量％の水分含量を有する、請求項１に記載の組成物。
4. ３．５〜１０重量％の水分含量を有する、請求項１に記載の組成物。
5. ４〜９重量％の水分含量を有する、請求項１に記載の組成物。
6. ７０重量％未満の油含量を有する、請求項１〜５の何れか一項に記載の組成物。
7. 少なくとも４０重量％の油含量を有する、請求項６に記載の組成物。
8. ６０重量％未満の油含量を有する、請求項６に記載の組成物。
9. 油中の総脂肪酸を基準にして、８０重量％未満の少なくとも３つの二重結合があるＰＵＦＡを含んでなる油を含んでなる、請求項１〜８の何れか一項に記載の組成物。
10. 油中の総脂肪酸を基準にして、７０重量％未満の少なくとも３つの二重結合があるＰＵＦＡを含んでなる油を含んでなる、請求項９に記載の組成物。
11. 油中の総脂肪酸を基準にして、６０重量％未満の少なくとも３つの二重結合があるＰＵＦＡを含んでなる油を含んでなる、請求項９に記載の組成物。
12. 前記ＬＣ−ＰＵＦＡが少なくとも３つの二重結合を有する、請求項１〜１１の何れか一項に記載の組成物。
13. 前記ＬＣ−ＰＵＦＡがω−３またはω−６ ＰＵＦＡである、請求項１〜１２の何れか一項に記載の組成物。
14. 前記ＬＣ−ＰＵＦＡが、ジホモ−ｙ−リノレン酸（ＤＧＬＡ、２０：３ ω−６）、アラキドン酸（ＡＲＡ、２０：４ ω−６）、エイコサペンタエン酸（ＥＰＡ、２０：５ ω−３）、ドコサヘキサエン酸（ＤＨＡ：２２：６ ω−３）、ドコサペンタエン酸（ＤＰＡ ２２：５ ω−３、またはＤＰＡ ２２：５、ω−６）から選択される、請求項１〜１３の何れか一項に記載の組成物。
15. 前記ＬＣ−ＰＵＦＡがＡＲＡまたはＤＨＡである、請求項１〜１４の何れか一項に記載の組成物。
16. 前記微生物細胞が、酵母細胞、細菌細胞、真菌細胞、または藻類細胞である、請求項１〜１５の何れか一項に記載の組成物。
17. 前記組成物が、モルティエラ（Ｍｏｒｔｉｅｒｅｌｌａ）属の微生物を含んでなり、前記ＬＣ−ＰＵＦＡがＡＲＡである、請求項１〜１６の何れか一項に記載の組成物。
18. 前記組成物が、モルティエラ・アルピナ（Ｍｏｒｔｉｅｒｅｌｌａ ａｌｐｉｎａ）種の微生物を含んでなる、請求項１７に記載の組成物。
19. 前記組成物が、ヤブレツボカビ（Ｔｈｒａｕｓｔｏｃｈｙｔｒｉａｌｅｓ）目の微生物を含んでなり、前記ＬＣ−ＰＵＦＡがＤＨＡまたはＥＰＡである、請求項１〜１６の何れか一項に記載の組成物。
20. 前記組成物が、スラウストキトリウム（Ｔｈｒａｕｓｔｏｃｈｙｔｒｉｕｍ）属またはシゾキトリウム（Ｓｃｈｉｚｏｃｈｙｔｒｉｕｍ）属の微生物を含んでなる、請求項１９に記載の組成物。
21. 前記組成物が、クリプテコジニウム（Ｃｒｙｐｔｈｅｃｏｄｉｎｉｕｍ）属の微生物を含んでなり、前記ＬＣ−ＰＵＦＡがＤＨＡである、請求項１〜１６の何れか一項に記載の組成物。
22. 前記組成物が、クリプテコジニウム・コーニイ（Ｃｒｙｐｔｈｅｃｏｄｉｎｉｕｍ ｃｏｈｎｉｉ）種の微生物を含んでなる、請求項２１に記載の組成物。
23. 請求項１〜２２の何れか一項に記載の組成物を製造する方法であって、
    細胞およびＬＣ−ＰＵＦＡを含んでなる組成物を、４０℃未満の温度で乾燥させるステップを含んでなる、方法。
24. 乾燥温度が３５℃未満である、請求項２３に記載の方法。
25. 乾燥温度が３３℃未満である、請求項２３に記載の方法。
26. 乾燥温度が３０℃未満である、請求項２３に記載の方法。
27. 乾燥温度が２５℃未満である、請求項２３に記載の方法。
28. 前記組成物を≦１５℃の露点を有する調整空気に接触させるステップを含んでなる、請求項２３〜２７の何れか一項に記載の方法。
29. 前記露点が＜１０℃である、請求項２８に記載の方法。
30. 前記露点が＜５℃である、請求項２８に記載の方法。
31. 前記組成物を、流動床乾燥機を使用して乾燥させるステップを含んでなる、請求項２３〜３０の何れか一項に記載の方法。
32. 請求項１〜２２の何れか一項に記載の組成物から、あるいは請求項２３〜３１の何れか一項に記載の方法によって得られるまたは得られ得る組成物から、前記ＬＣ−ＰＵＦＡまたはＬＣ−ＰＵＦＡを含んでなる油を単離するステップを含んでなる、ＬＣ−ＰＵＦＡまたはＬＣ−ＰＵＦＡを含んでなる油を得る方法。
33. 請求項３２に記載の方法に従ってＬＣ−ＰＵＦＡまたはＬＣ−ＰＵＦＡを含んでなる油を得るステップと、前記ＬＣ−ＰＵＦＡまたは前記ＬＣ−ＰＵＦＡを含んでなる油を食品に組み込むステップを含んでなる、食品を得る方法。
34. 請求項３２に記載の方法に従ってＬＣ−ＰＵＦＡまたはＬＣ−ＰＵＦＡを含んでなる油を得るステップと、前記ＬＣ−ＰＵＦＡまたは前記ＬＣ−ＰＵＦＡを含んでなる油を乳児用調製粉乳に組み込むステップを含んでなる、乳児用調製粉乳を得る方法。

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