JP6436654B2 - リン脂質ヒドロペルオキシド依存性細胞死の検出方法及びキット、リン脂質ヒドロペルオキシド依存性細胞死の抑制剤、並びにリン脂質ヒドロペルオキシド依存性細胞死が関連する疾患の予防又は治療剤 - Google Patents
リン脂質ヒドロペルオキシド依存性細胞死の検出方法及びキット、リン脂質ヒドロペルオキシド依存性細胞死の抑制剤、並びにリン脂質ヒドロペルオキシド依存性細胞死が関連する疾患の予防又は治療剤 Download PDFInfo
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Description
(1)細胞中の、CDK4、MEK、ERK、Cdadc1homolog、C87436及びAbhd2からなる群より選択される少なくとも1つの因子の活性化状態を検出する工程を有する、リン脂質ヒドロペルオキシド依存性細胞死の検出方法。
(2)前記検出は、前記因子の細胞内の局在状態を測定すること、前記因子のmRNAレベルでの発現量を測定すること、前記因子のタンパク質レベルでの発現量を測定すること、前記因子のリン酸化率を測定すること及び上記因子の発現抑制による細胞死の抑制を測定することからなる群より選択される少なくとも1つにより行われる、(1)に記載の方法。
(3)リン酸化した又はリン酸化していない、CDK4、MEK、ERK、Cdadc1homolog、C87436又はAbhd2に対する抗体;CDK4、MEK、ERK、Cdadc1homolog、C87436又はAbhd2のmRNA増幅用プライマー;あるいは、CDK4、MEK、ERK、Cdadc1homolog、C87436又はAbhd2に対する、siRNA、shRNA、リボザイム又はアンチセンス核酸;を含む、リン脂質ヒドロペルオキシド依存性細胞死の検出用キット。
(4)配列番号1のアミノ酸配列からなるタンパク質、又は配列番号1のアミノ酸配列において1若しくは数個のアミノ酸が欠失、置換若しくは付加されたアミノ酸配列からなり、かつ、発現量を低下させるとリン脂質ヒドロペルオキシド依存性細胞死が抑制されるタンパク質。
(5)配列番号2の塩基配列からなる核酸、又は配列番号2の塩基配列と80%以上の相同性を有し、かつ、発現量を低下させるとリン脂質ヒドロペルオキシド依存性細胞死が抑制されるタンパク質をコードする核酸。
(6)配列番号3のアミノ酸配列からなるタンパク質、又は配列番号3のアミノ酸配列において1若しくは数個のアミノ酸が欠失、置換若しくは付加されたアミノ酸配列からなり、かつ、発現量を低下させるとリン脂質ヒドロペルオキシド依存性細胞死が抑制されるタンパク質。
(7)配列番号4の塩基配列からなる核酸、又は配列番号4の塩基配列と80%以上の相同性を有し、かつ、発現量を低下させるとリン脂質ヒドロペルオキシド依存性細胞死が抑制されるタンパク質をコードする核酸。
(8)配列番号5のアミノ酸配列からなるタンパク質、又は配列番号5のアミノ酸配列において1若しくは数個のアミノ酸が欠失、置換若しくは付加されたアミノ酸配列からなり、かつ、発現量を低下させるとリン脂質ヒドロペルオキシド依存性細胞死が抑制されるタンパク質。
(9)配列番号6の塩基配列からなる核酸、又は配列番号6の塩基配列と80%以上の相同性を有し、かつ、発現量を低下させるとリン脂質ヒドロペルオキシド依存性細胞死が抑制されるタンパク質をコードする核酸。
(10)ビタミンE又はその誘導体を有効成分とする、リン脂質ヒドロペルオキシド依存性細胞死の抑制剤。
(11)CDK4阻害剤又はCDK4に対する、siRNA、shRNA、リボザイム若しくはアンチセンス核酸を有効成分とする、リン脂質ヒドロペルオキシド依存性細胞死の抑制剤。
(12)MEK阻害剤又はMEKに対する、siRNA、shRNA、リボザイム若しくはアンチセンス核酸を有効成分とする、リン脂質ヒドロペルオキシド依存性細胞死の抑制剤。
(13)ERK阻害剤又はERKに対する、siRNA、shRNA、リボザイム若しくはアンチセンス核酸を有効成分とする、リン脂質ヒドロペルオキシド依存性細胞死の抑制剤。
(14)Cdadc1homolog、C87436又はAbhd2に対する、siRNA、shRNA、リボザイム若しくはアンチセンス核酸を有効成分とする、リン脂質ヒドロペルオキシド依存性細胞死の抑制剤。
(15)ビタミンE又はその誘導体を有効成分とする、リン脂質ヒドロペルオキシド依存性細胞死が関連する疾患の予防又は治療剤。
(16)CDK4阻害剤又はCDK4に対する、siRNA、shRNA、リボザイム若しくはアンチセンス核酸を有効成分とする、リン脂質ヒドロペルオキシド依存性細胞死が関連する疾患の予防又は治療剤。
(17)MEK阻害剤又はMEKに対する、siRNA、shRNA、リボザイム若しくはアンチセンス核酸を有効成分とする、リン脂質ヒドロペルオキシド依存性細胞死が関連する疾患の予防又は治療剤。
(18)ERK阻害剤又はERKに対する、siRNA、shRNA、リボザイム若しくはアンチセンス核酸を有効成分とする、リン脂質ヒドロペルオキシド依存性細胞死が関連する疾患の予防又は治療剤。
(19)Cdadc1homolog、C87436又はAbhd2に対する、siRNA、shRNA、リボザイム若しくはアンチセンス核酸を有効成分とする、リン脂質ヒドロペルオキシド依存性細胞死が関連する疾患の予防又は治療剤。
(20)前記リン脂質ヒドロペルオキシド依存性細胞死が関連する疾患は、心不全である、(15)〜(19)のいずれかに記載の予防又は治療剤。
1実施形態において、本発明は、細胞中の、CDK4、MEK、ERK、Cdadc1homolog、C87436及びAbhd2からなる群より選択される少なくとも1つの因子の活性化状態を検出する工程を有する、リン脂質ヒドロペルオキシド依存性細胞死の検出方法を提供する。
1実施形態において、本発明は、リン酸化した又はリン酸化していない、CDK4、MEK、ERK、Cdadc1homolog、C87436又はAbhd2に対する抗体;CDK4、MEK、ERK、Cdadc1homolog、C87436又はAbhd2のmRNA増幅用プライマー;あるいは、CDK4、MEK、ERK、Cdadc1homolog、C87436又はAbhd2に対する、siRNA、shRNA、リボザイム又はアンチセンス核酸;を含む、リン脂質ヒドロペルオキシド依存性細胞死の検出用キットを提供する。
1実施形態において、本発明は、配列番号1のアミノ酸配列からなるタンパク質、又は配列番号1のアミノ酸配列において1若しくは数個のアミノ酸が欠失、置換若しくは付加されたアミノ酸配列からなり、かつ、発現量を低下させるとリン脂質ヒドロペルオキシド依存性細胞死が抑制されるタンパク質を提供する。ここで、1若しくは数個とは、例えば、1〜20個、1〜10個、1〜5個を意味する。
1実施形態において、本発明は、配列番号3のアミノ酸配列からなるタンパク質、又は配列番号3のアミノ酸配列において1若しくは数個のアミノ酸が欠失、置換若しくは付加されたアミノ酸配列からなり、かつ、発現量を低下させるとリン脂質ヒドロペルオキシド依存性細胞死が抑制されるタンパク質を提供する。ここで、1若しくは数個とは、例えば、1〜20個、1〜10個、1〜5個を意味する。
1実施形態において、本発明は、配列番号5のアミノ酸配列からなるタンパク質、又は配列番号5のアミノ酸配列において1若しくは数個のアミノ酸が欠失、置換若しくは付加されたアミノ酸配列からなり、かつ、発現量を低下させるとリン脂質ヒドロペルオキシド依存性細胞死が抑制されるタンパク質を提供する。ここで、1若しくは数個とは、例えば、1〜20個、1〜10個、1〜5個を意味する。
(ビタミンE又はその誘導体)
1実施形態において、本発明は、ビタミンE又はその誘導体を有効成分とする、リン脂質ヒドロペルオキシド依存性細胞死の抑制剤を提供する。
医薬組成物における製剤化の例としては、必要に応じて糖衣を施した錠剤、カプセル剤、エリキシル剤、マイクロカプセル剤として経口的に使用されるものが挙げられる。また、水若しくは水以外の薬学的に許容される液体との無菌性溶液、又は懸濁液剤の注射剤の形で非経口的に使用されるものが挙げられる。更には、薬理学上許容される担体若しくは媒体、具体的には、滅菌水、生理食塩水、植物油、乳化剤、懸濁剤、界面活性剤、安定剤、香味剤、賦形剤、ベヒクル、防腐剤、結合剤等と適宜組み合わせて、一般に認められた製薬実施に要求される単位用量形態で混和することによって製剤化されたものが挙げられる。
1実施形態において、本発明は、CDK4阻害剤又はCDK4に対する、siRNA、shRNA、リボザイム若しくはアンチセンス核酸を有効成分とする、リン脂質ヒドロペルオキシド依存性細胞死の抑制剤を提供する。
1実施形態において、本発明は、MEK阻害剤又はMEKに対する、siRNA、shRNA、リボザイム若しくはアンチセンス核酸を有効成分とする、リン脂質ヒドロペルオキシド依存性細胞死の抑制剤を提供する。
1実施形態において、本発明は、ERK阻害剤又はERKに対する、siRNA、shRNA、リボザイム若しくはアンチセンス核酸を有効成分とする、リン脂質ヒドロペルオキシド依存性細胞死の抑制剤を提供する。本実施形態において、ERKは、ERK1であってもERK2であってもよい。
1実施形態において、本発明は、Cdadc1homolog、C87436又はAbhd2に対する、siRNA、shRNA、リボザイム若しくはアンチセンス核酸を有効成分とする、リン脂質ヒドロペルオキシド依存性細胞死の抑制剤を提供する。
(ビタミンE又はその誘導体)
1実施形態において、本発明は、ビタミンE又はその誘導体を有効成分とする、リン脂質ヒドロペルオキシド依存性細胞死が関連する疾患の予防又は治療剤を提供する。
1実施形態において、本発明は、CDK4阻害剤又はCDK4に対する、siRNA、shRNA、リボザイム若しくはアンチセンス核酸を有効成分とする、リン脂質ヒドロペルオキシド依存性細胞死が関連する疾患の予防又は治療剤を提供する。
1実施形態において、本発明は、MEK阻害剤又はMEKに対する、siRNA、shRNA、リボザイム若しくはアンチセンス核酸を有効成分とする、リン脂質ヒドロペルオキシド依存性細胞死が関連する疾患の予防又は治療剤を提供する。
1実施形態において、本発明は、ERK阻害剤又はERKに対する、siRNA、shRNA、リボザイム若しくはアンチセンス核酸を有効成分とする、リン脂質ヒドロペルオキシド依存性細胞死が関連する疾患の予防又は治療剤を提供する。
1実施形態において、本発明は、Cdadc1homolog、C87436又はAbhd2に対する、siRNA、shRNA、リボザイム若しくはアンチセンス核酸を有効成分とする、リン脂質ヒドロペルオキシド依存性細胞死が関連する疾患の予防又は治療剤を提供する。
(タモキシフェン誘導型PHGPx欠損MEF細胞株の樹立)
PHGPx欠損細胞死のメカニズムを明らかにするために、タモキシフェン誘導型PHGPx欠損MEF細胞株を樹立した。この細胞は、タモキシフェンを培地に加えると24時間以内にCre−loxPシステムによりPHGPxゲノム遺伝子が欠失する。
(タモキシフェン誘導型PHGPx欠損MEF細胞株へのタモキシフェンの投与)
タモキシフェン誘導型PHGPx欠損MEF細胞株の培地に終濃度1μMのタモキシフェンを添加した。続いて、タモキシフェン添加から0、24及び48時間後の細胞を回収し、抗PHGPx抗体を用いたウエスタンブロッティングにより、各細胞サンプル中のPHGPxタンパク質の量を測定した。
(PHGPx欠損細胞におけるリン脂質ヒドロペルオキシドの検出)
タモキシフェン誘導型PHGPx欠損MEF細胞株の培地に終濃度1μMのタモキシフェンを添加し、生成されるリン脂質ヒドロペルオキシドを検出した。検出には、液体クロマトグラフィー(LC)−エレクトロスプレーイオン化質量分析(ESI−MS)/質量分析(MS)を用いた。
(PHGPx欠損細胞のMTTアッセイ)
タモキシフェン誘導型PHGPx欠損MEF細胞株の培地に終濃度1μMのタモキシフェンを添加し、MTTアッセイにより、細胞の生存率を測定した。また、タモキシフェンと同時に終濃度200μMのビタミンE添加群についても同様の検討を行った。
(リン脂質ヒドロペルオキシド依存性細胞死とアポトーシスとの比較)
リン脂質ヒドロペルオキシド依存性細胞死(PHGPx欠損による細胞死)が、アポトーシスによる細胞死経路を介しているのか否かについて詳細に検討した。
(リン脂質ヒドロペルオキシド依存性細胞死とネクローシスとの比較)
リン脂質ヒドロペルオキシド依存性細胞死が、ネクローシスによるものか否かについて詳細に検討した。
(リン脂質ヒドロペルオキシド依存性細胞死とオートファジー性細胞死との比較)
リン脂質ヒドロペルオキシド依存性細胞死が、オートファジー性細胞死によるものか否かについて詳細に検討した。オートファジー性細胞死を起こすためにはATG5遺伝子が必須であることが知られている。
(リン脂質ヒドロペルオキシド依存性細胞死とネクトローシスとの比較)
リン脂質ヒドロペルオキシド依存性細胞死が、ネクトローシスによるものか否かについて詳細に検討した。ネクトローシスは、プログラムされたネクローシスとして知られる細胞死の1形態である。また、receptor−interacting protein kinase 1(Rip1)のノックダウンにより、ネクトローシスが顕著に抑制されることが知られている。
(リン脂質ヒドロペルオキシド依存性細胞死を抑制可能な化合物のスクリーニング)
約300種類の既知の酵素に対する阻害剤ライブラリー(文科省科研費・新学術領域・がん支援・化学療法基盤支援活動班・標準阻害剤キット)を用い、タモキシフェン誘導型PHGPx欠損MEF細胞株に、タモキシフェンを終濃度1μMで添加した場合の、72時間後の細胞死を抑制できる化合物をスクリーニングした。その結果、cyclin−dependent kinase 4(CDK4)の阻害剤である、3−ATA及びNSC625987、並びにmitogen−activated protein kinase kinase(MEK1/2)の阻害剤である、U−0126及びMEK inhibitorIの4種類の化合物が、リン脂質ヒドロペルオキシド依存性細胞死を抑制できることを見出した。一方、p38及びJNKの阻害剤では、リン脂質ヒドロペルオキシド依存性細胞死を抑制することができなかった。
(CDK4、MEK1/2の阻害剤を使用した、リン脂質ヒドロペルオキシド依存性細胞死の抑制)
図9(a)は、CDK4の阻害剤である3−ATAを使用した、リン脂質ヒドロペルオキシド依存性細胞死の抑制の結果を示すグラフである。図9(b)は、MEK1/2の阻害剤であるU−0126を使用した、リン脂質ヒドロペルオキシド依存性細胞死の抑制の結果を示すグラフである。
(CDK4のキナーゼ活性がリン脂質ヒドロペルオキシド依存性細胞死に必要である)
レトロウイルス感染系でshRNAをタモキシフェン誘導型PHGPx欠損MEF細胞に発現させることにより、CDK4のノックダウン細胞を作成し、リン脂質ヒドロペルオキシド依存性細胞死を抑制できるか否かを検討した。
上記実験例において、CDK4をノックダウンしたタモキシフェン誘導型PHGPx欠損MEF細胞は、次のようにして作製した。
再発現実験に用いたレトロウイルス感染系の高発現ベクターとしては、図34に示すpMXs−IRベクターを用いた。pMXs−IRベクターは、東京大学医科学研究所 北村俊雄先生に頂いた。後述する、CDK4以外の遺伝子の発現も同様の方法により行った。
shRNAベクター及びpMXs−IRベクターからのレトロウイルスの調製には、PlatE細胞を使用した。PlatE細胞とは、ヒト胎児由来腎臓上皮細胞である293T細胞に、gag−pol遺伝子及びenv遺伝子が組み込まれた細胞である。
続いて、培養上清を15mLチューブ(CORNING)に移し、3,000rpm、5分、4℃の条件で遠心した。上清を新しいチューブに移し、ウイルス液とした。
ウイルス感染させる前日にタモキシフェン誘導型PHGPx欠損細胞を6cm シャーレ(CORNING)に1×105cells/シャーレでまき、1日培養した。最終濃度が8μg/mLになるようにPolybrene(商標)(Hexadimethrine bromide、SIGMA、カタログ番号H9268)を加えたウイルス液5mLを、細胞の培地を置き換えることにより感染させ、24時間培養後に培地を交換した。なお、Polybrene(商標)は、クリーンベンチ内において、滅菌水で10mg/mLとなるように溶解してフィルター滅菌し、使用時に希釈して用いた。
(MEK1のキナーゼ活性がリン脂質ヒドロペルオキシド依存性細胞死に必要である)
レトロウイルスでshRNAを発現させることにより、MEK1のノックダウン細胞を作成し、リン脂質ヒドロペルオキシド依存性細胞死を抑制できるか否かを検討した。
(MEK1/2及びERKのリン酸化は、タモキシフェン添加後36時間以降で亢進する)
リン脂質ヒドロペルオキシド依存性細胞死の過程で、いつMEKのリン酸化及びその基質であるERKのリン酸化が起きるのかについて検討した。
(ERK2のノックダウンはリン脂質ヒドロペルオキシド依存性細胞死を抑制する)
レトロウイルスでshRNAを発現させることにより、ERK2のノックダウン細胞を作成し、リン脂質ヒドロペルオキシド依存性細胞死を抑制できるか否かを検討した。
(リン脂質ヒドロペルオキシド依存性細胞死経路において、リン脂質ヒドロペルオキシドの生成及びCDK4は、MEK1/2の上流で機能している)
タモキシフェンの添加から39時間後に生じるMEK及びERKのリン酸化が、タモキシフェンの添加から24時間後に生じるリン脂質ヒドロペルオキシドの生成やCDK4の活性化の下流で機能しているか否かを検討した。具体的には、タモキシフェン誘導型PHGPx欠損MEF細胞株の培地に、脂質酸化抑制剤である、ビタミンE誘導体のトロロックス(終濃度400μM)、及びCDK4阻害剤である3−ATA(終濃度10μM)を、終濃度1μMのタモキシフェンと同時に添加し、タモキシフェンの添加から39時間後に生じるMEKとERK2のリン酸化を、ウエスタンブロッティングにより検討した。
(リン脂質ヒドロペルオキシド依存性細胞死経路において、CDK4は、リン脂質ヒドロペルオキシドの生成の下流で機能している)
CDK4及びMEK1の活性化が、リン脂質ヒドロペルオキシドの生成の下流で機能しているか否かをフローサイトメトリーにより検討した。
(レンチウイルスshRNAライブラリーを用いた、リン脂質ヒドロペルオキシド依存性細胞死の実行因子の同定)
リン脂質ヒドロペルオキシド依存性細胞死の実行因子を同定するために、レンチウイルス網羅的shRNAライブラリー(SBI社)を用いたスクリーニングを行った。このシステムでは、shRNAの配列が、Genechip(商品名、アフィメトリクス社)に結合するように作成されているため、shRNAの配列の同定にGenechipを利用することができる。
(レトロウイルス感染系を用いた単独shRNAの発現による、リン脂質ヒドロペルオキシド依存性細胞死の実行因子の候補遺伝子の確定)
同定されたリン脂質ヒドロペルオキシド依存性細胞死の実行因子の候補遺伝子151遺伝子それぞれをノックダウンし、リン脂質ヒドロペルオキシド依存性細胞死の抑制効果を検討した。
(Cdadc1homologは、リン脂質ヒドロペルオキシド依存性細胞死の実行因子である)
上述した候補遺伝子の中から、Cdadc1homolog遺伝子(配列番号2)を見出した。本遺伝子は、新規遺伝子であった。ホモロジー検索の結果から、Cdadc1homologは、Cdcadc1の新しいバリアントであることが予想された。しかしながら、Cdadc1も機能未知の遺伝子であった。Cdadc1は、シチジンdCMPデアミナーゼドメインを2つ有すると推定されたが、Cdadc1homologは、シチジンdCMPデアミナーゼドメインを1つのみ有していると推定された。また、Cdadc1homologは、C末端の5つのアミノ酸以外はCdadc1と同一のアミノ酸配列を有していた。Cdadc1homologのアミノ酸配列を配列番号1に示す。図19(a)は、Cdadc1homolog遺伝子及びCdadc1 variant−2(Cdadc1 tv2)遺伝子の構造を示す図である。
(C87436は、リン脂質ヒドロペルオキシド依存性細胞死の実行因子である)
上述した候補遺伝子の中から、C87436遺伝子(配列番号4)を見出した。C87436遺伝子は、cDNAが報告されているのみの機能未知の遺伝子であった。
(Abhd2は、リン脂質ヒドロペルオキシド依存性細胞死の実行因子である)
上述した候補遺伝子の中から、Abhd2遺伝子を見出した。Abhd2遺伝子はalpha/beta hydrolaseドメイン構造を有する加水分解酵素であると考えられているが、その基質は明らかにされていない。
(Cdadc1homolog、C87436及びAbhd2は、アポトーシス、ネクローシスには関与しない)
リン脂質ヒドロペルオキシド依存性細胞死が抑制されたCdadc1homologのノックダウン細胞、C87436のノックダウン細胞及びAbhd2のノックダウン細胞が、アポトーシス又はネクローシスを抑制できるか否かについて検討した。
(Cdadc1homolog及びC87436は、ERKリン酸化の上流で機能し、Abhd2は、ERKリン酸化の下流で機能する)
タモキシフェン誘導型PHGPx欠損MEF細胞株に、終濃度1μMのタモキシフェンを添加し、抗リン酸化ERK抗体で蛍光染色すると、タモキシフェンの添加から36時間後以降では、ERKのリン酸化が亢進した細胞を検出することができる。
(Cdadc1homologは、PHGPx欠損によるリン脂質ヒドロペルオキシドの生成に関与する)
タモキシフェン誘導型PHGPx欠損MEF細胞株のCdadc1homolog、C87436又はAbhd2をノックダウンし、培地に終濃度1μMのタモキシフェンを添加した場合のPHGPx欠損によるリン脂質ヒドロペルオキシドの生成について検討した。
(PHGPx欠損によるリン脂質ヒドロペルオキシドの生成は鉄を介さない)
従来、リン脂質の酸化反応は鉄を介したフェントン反応により生じたヒドロキシラジカルを介しておきると考えられてきた。そこで、鉄のキレーターであるデフェロキサミンを用いてPHGPx欠損によるリン脂質ヒドロペルオキシドの生成が抑制できるか否かについて検討した。
(フェントン反応の抑制がリン脂質ヒドロペルオキシド依存性細胞死に及ぼす影響)
フェントン反応を抑制すると考えられる、Manganese(III)tetrakis(4−carboxyphenyl)porphyrin(Mn−TBAP)、N−アセチルシステイン(NAC)、デフェロキサミン(DFO)をタモキシフェン誘導型PHGPx欠損MEF細胞株の培地に添加することにより、リン脂質ヒドロペルオキシド依存性細胞死を抑制することができるか否かについて検討した。
(心筋特異的PHGPx欠損マウスは発生過程の17.5日で心筋細胞死により致死となる)
PHGPx欠損マウスは、発生過程の7.5日で致死になることが知られている。ここでは、心臓特異的にPHGPxを欠損させたマウスを作製し、その影響を解析した。まず、PHGPx+/−マウスと、心臓特異的プロモーターである筋肉クレアチンキナーゼプロモーター(Muscle creatine kinase)の下流にCre遺伝子を有するマウス(Cre+/+)との交配を繰り返し、Cre+/+PHGPx+/−マウスを得た。
(CDK4阻害剤3−ATAの母親マウス腹腔への投与は、心臟特異的PHGPx欠損マウス18.5日胎仔の致死を抑制する)
CDK4阻害剤3−ATAを母親マウス腹腔に投与することにより、心臟特異的PHGPx欠損マウスの致死を抑制することができるか否かについて検討した。
(心臓特異的PHGPx欠損マウスはビタミンE添加食により正常に育つが、通常食に変えると10日前後で突然死を引きおこす)
心臟特異的PHGPx欠損マウスの胎仔期において、母親にビタミンE添加食を与えると、致死が完全に抑制された。また、誕生した心臟特異的PHGPx欠損マウスにビタミンE添加食(50mgビタミンE/100g餌)を毎日与え続けると、正常に生育することが明らかとなった。
(CDK4阻害剤3−ATAは、ビタミンE添加食から通常食に変えて起きる心臟特異的PHGPx欠損マウスの心不全による突然死を延命することができる)
ビタミンE添加食を与えた心臟特異的PHGPx欠損マウスの食餌を通常食に変えた後、CDK4阻害剤3−ATAを投与した場合の影響を検討した。
(MEK阻害剤U−0126は、ビタミンE添加食から通常食に変えて起きる心臟特異的PHGPx欠損マウスの心不全による突然死を延命することができる)
ビタミンE添加食を与えた心臟特異的PHGPx欠損マウスの食餌を通常食に変えた後、MEK阻害剤U−0126を投与した場合の影響を検討した。
Claims (5)
- 細胞サンプル中の、リン脂質ヒドロペルオキシドの生成及びCDK4タンパク質の活性化を検出する工程を有する、リン脂質ヒドロペルオキシド依存性細胞死の検出方法。
- リン脂質ヒドロペルオキシドの生成を検出する試薬及びCDK4タンパク質の活性化を検出する試薬を含む、リン脂質ヒドロペルオキシド依存性細胞死の検出用キット。
- CDK4阻害剤又はCDK4に対する、siRNA、shRNA、リボザイム若しくはアンチセンス核酸を有効成分とする、リン脂質ヒドロペルオキシド依存性細胞死の抑制剤。
- CDK4阻害剤又はCDK4に対する、siRNA、shRNA、リボザイム若しくはアンチセンス核酸を有効成分とする、心不全又は不整脈性突然死の予防又は治療剤。
- CDK4阻害剤又はCDK4に対する、siRNA、shRNA、リボザイム若しくはアンチセンス核酸を有効成分とする、心不全の予防又は治療剤。
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