JP6422665B2 - Search method for odor control agent - Google Patents
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Description
本発明は、腋臭抑制剤の探索方法に関する。 The present invention relates to a method for searching for odor control agents.
近年、清潔志向の高まりに伴い、体臭を気にする人が増えている。体臭は全身の各部から発生するニオイの総称であり、主要な発生部位としては頭部、口腔、腋窩部、鼠径部、足の裏等がある。その中でも、腋臭（腋窩部のニオイ）は、全身的な体臭へ与える影響が大きい。 In recent years, with an increasing awareness of cleanliness, an increasing number of people are concerned about body odor. Body odor is a general term for odors generated from various parts of the whole body, and the main generation sites include the head, oral cavity, axilla, groin, and sole of the foot. Among them, vaginal odor (smell in the axilla) has a great influence on systemic body odor.
腋臭は、酸っぱく蒸れたニオイと、腋窩部に特有のニオイとからなる。酸っぱく蒸れたニオイは、炭素数２〜５の低級カルボン酸に起因するものであり、低級脂肪酸臭、又は単に酸臭と呼ばれる。腋窩部特有のニオイは、アポクリン汗腺から分泌されアポクリン汗が皮膚常在菌によって分解されて発生する臭いであり、アポクリン臭又は「わきが」などと呼ばれている。 The scent is composed of a sour odor and an odor peculiar to the axilla. The sour odor is attributed to a lower carboxylic acid having 2 to 5 carbon atoms, and is called a lower fatty acid odor or simply an acid odor. The odor peculiar to the axilla is an odor that is secreted from the apocrine sweat gland and is generated by decomposition of the apocrine sweat by the skin resident bacteria, and is called apocrine odor or “wakiga”.
特許文献１には、３−ヒドロキシ−３−メチルペンタン酸や３−ヒドロキシ−３−メチルヘキサン酸等の炭素数５〜８のヒドロキシアルキニルカルボン酸、及び３−メチル−２−ペンテン酸、３−メチル−２−ヘキセン酸、３−メチル−２−ヘプテン酸等の炭素数５〜８の二重結合を１つ有するアルケニルカルボン酸によりアポクリン臭を再現できることが記載されている。特許文献２には、３−メルカプト−３−メチルヘキサン−１−オール、３−メルカプトヘキサン−１−オール、３−メルカプトペンタン−１−オール、３−メルカプト−２−メチルブタン−１−オール、３−メルカプト−２−メチルペンタン−１−オール等の３−メルカプトアルコール化合物又はそのラセミ混合物によりアポクリン臭を再現できることが記載されている。特許文献３には、揮発性硫黄化合物、３−メチル−２−ヘキセン酸等の短鎖分岐脂肪酸、３−ヒドロキシ−３−メチルヘキサン酸等が腋窩の悪臭に関与する物質として知られていることが記載されている。特許文献４には、アポクリン臭原因物質として、３−メチル−３−ヒドロキシヘキサン酸、３−メチル−２−ヘキセン酸、３−メチル−３−スルホニルヘキサン−１−オール、および３−メルカプト−３−メチルヘキサン−１−オールが記載されている。 In Patent Document 1, a hydroxyalkynylcarboxylic acid having 5 to 8 carbon atoms such as 3-hydroxy-3-methylpentanoic acid and 3-hydroxy-3-methylhexanoic acid, 3-methyl-2-pentenoic acid, 3- It is described that apocrine odor can be reproduced by alkenyl carboxylic acid having one double bond of 5 to 8 carbon atoms such as methyl-2-hexenoic acid and 3-methyl-2-heptenoic acid. Patent Document 2 includes 3-mercapto-3-methylhexane-1-ol, 3-mercaptohexane-1-ol, 3-mercaptopentan-1-ol, 3-mercapto-2-methylbutan-1-ol, 3 It is described that an apocrine odor can be reproduced by a 3-mercaptoalcohol compound such as mercapto-2-methylpentan-1-ol or a racemic mixture thereof. Patent Document 3 discloses that volatile sulfur compounds, short-chain branched fatty acids such as 3-methyl-2-hexenoic acid, 3-hydroxy-3-methylhexanoic acid, and the like are known as substances involved in axillary odor. Is described. Patent Document 4 discloses 3-methyl-3-hydroxyhexanoic acid, 3-methyl-2-hexenoic acid, 3-methyl-3-sulfonylhexane-1-ol, and 3-mercapto-3 as apocrine odor-causing substances. -Methylhexane-1-ol is described.
従来の香料物質や消臭物質の開発においては、匂いの評価は専門家による官能試験によって行われてきた。しかし、官能試験には、匂いを評価できる専門家の育成が必要なことや、スループット性が低いなどの問題がある。 In the development of conventional fragrance substances and deodorant substances, odor evaluation has been carried out by sensory tests by experts. However, the sensory test has problems such as the need to train experts who can evaluate odors and low throughput.
ヒト等の哺乳動物においては、匂いは、鼻腔上部の嗅上皮に存在する嗅神経細胞上の嗅覚受容体に匂い分子が結合し、それに対する受容体の応答が中枢神経系へと伝達されることにより認識されている。ヒトの場合、嗅覚受容体は約４００個存在することが報告されており、これらをコードする遺伝子はヒトの全遺伝子の約２％にあたる。一般的に、嗅覚受容体と匂い分子は複数対複数の組み合わせで対応付けられている。すなわち、個々の嗅覚受容体は構造の類似した複数の匂い分子を異なる親和性で受容し、一方で、個々の匂い分子は複数の嗅覚受容体によって受容される。さらに、ある嗅覚受容体を活性化する匂い分子が、別の嗅覚受容体の活性化を阻害するアンタゴニストとして働くことも報告されている。これら複数の嗅覚受容体の応答の組み合わせが、個々の匂いの認識をもたらしている。 In mammals such as humans, the smell is bound to the olfactory receptor on the olfactory nerve cell located in the olfactory epithelium in the upper nasal cavity, and the response of the receptor is transmitted to the central nervous system. It is recognized by. In the case of humans, it is reported that there are about 400 olfactory receptors, and the genes encoding them are about 2% of all human genes. In general, olfactory receptors and odor molecules are associated with each other in a plurality of combinations. That is, each olfactory receptor receives a plurality of odor molecules with similar structures with different affinities, while each odorant receptor is received by a plurality of olfactory receptors. Furthermore, it has been reported that an odor molecule that activates one olfactory receptor acts as an antagonist that inhibits activation of another olfactory receptor. The combination of these multiple olfactory receptor responses has led to the recognition of individual odors.
したがって、同じ匂い分子が存在する場合でも、同時に他の匂い分子が存在すると、当該他の匂い分子によって受容体応答が阻害され、最終的に認識される匂いが全く異なることがある。このような仕組みを嗅覚受容体のアンタゴニズムと呼ぶ。この受容体アンタゴニズムによる匂いの変調は、香水や芳香剤等の別の匂いを付加することによる消臭方法と異なり、特定の悪臭の認識を特異的に失くしてしまうことができ、また芳香剤の匂いによる不快感が生じることもないことから、好ましい消臭手段である。特許文献５〜６には、嗅覚受容体の活性を指標として、嗅覚受容体アンタゴニズムによりヘキサン酸やスカトール等の悪臭を抑制する物質を探索することできることが記載されている。特許文献７にも、３−メチル−２−ヘキセン酸等の汗臭原因物質存在下での嗅覚受容体の活性を指標として、汗臭を抑制する物質を探索することが記載されている。特許文献８には、イソ吉草酸やその等価体の存在下で嗅覚受容体をコードするポリペプチドの活性を測定することで、当該ポリペプチドの機能を調節する薬剤を同定する方法が記載されている。特許文献９には、嗅覚受容体をコードするポリペプチドに特異的に結合する化合物を同定することにより、嗅覚の感覚に関連する化合物について化学物質のライブラリーをスクリーニングする方法が記載されている。 Therefore, even when the same odor molecule is present, if another odor molecule is present at the same time, the receptor response is inhibited by the other odor molecule, and the finally recognized odor may be completely different. This mechanism is called olfactory receptor antagonism. Unlike the deodorization method by adding another odor such as perfume or fragrance, the modulation of odor by this receptor antagonism can specifically lose recognition of specific bad odors. Since there is no discomfort due to the smell of the agent, this is a preferred deodorizing means. Patent Documents 5 to 6 describe that substances that suppress malodor such as hexanoic acid and skatole can be searched by olfactory receptor antagonism using the activity of olfactory receptor as an index. Patent Document 7 also describes searching for a substance that suppresses sweat odor by using the activity of an olfactory receptor in the presence of a sweat odor-causing substance such as 3-methyl-2-hexenoic acid as an index. Patent Document 8 describes a method for identifying a drug that regulates the function of a polypeptide by measuring the activity of the polypeptide encoding an olfactory receptor in the presence of isovaleric acid or its equivalent. Yes. Patent Document 9 describes a method of screening a library of chemical substances for compounds related to olfactory sensation by identifying a compound that specifically binds to a polypeptide encoding an olfactory receptor.
本発明は、嗅覚受容体の応答を指標として腋臭抑制剤を効率良く探索する方法を提供する。 The present invention provides a method for efficiently searching for a bad smell inhibitor using an olfactory receptor response as an index.
本発明者は、腋臭の主な原因物質である３−メルカプト−３−メチルヘキサノールのＳ体若しくはＲ体、３−ヒドロキシ−３−メチルヘキサン酸、又は３−メチル−２−ヘキセン酸に応答する嗅覚受容体を新たに同定することに成功した。また本発明者は、当該嗅覚受容体又はそれと同様の機能を有するポリペプチドの応答を指標とすることにより、嗅覚受容体アンタゴニズムによるマスキングによって腋臭を抑制する物質の評価及び選択が可能であることを見出した。 The present inventor responds to S- or R-form, 3-hydroxy-3-methylhexanoic acid, or 3-methyl-2-hexenoic acid of 3-mercapto-3-methylhexanol, which is a main causative substance of the stench A new olfactory receptor was successfully identified. In addition, the present inventor can evaluate and select a substance that suppresses odor by masking by olfactory receptor antagonism by using the response of the olfactory receptor or a polypeptide having the same function as an index. I found.
したがって本発明は、腋臭抑制剤の探索方法であって、以下：
ＯＲ１Ａ１、ＯＲ２Ｗ１、ＯＲ２Ｊ３、ＯＲ１０Ａ６、ＯＲ５１Ｂ２、ＯＲ５１Ｅ１、ＯＲ５１Ｉ２、及びこれらとアミノ酸配列において少なくとも８０％の同一性を有するポリペプチドからなる群より選択される少なくとも１種の嗅覚受容体ポリペプチドに、試験物質及び腋臭原因物質を添加すること；
該腋臭原因物質に対する該嗅覚受容体ポリペプチドの応答を測定すること；及び、
測定された応答に基づいて該嗅覚受容体ポリペプチドの応答を抑制する試験物質を同定すること、
を含む方法を提供する。
Accordingly, the present invention is a method for searching for a bad odor suppressor, which comprises the following:
A test substance comprising at least one olfactory receptor polypeptide selected from the group consisting of OR1A1, OR2W1, OR2J3, OR10A6, OR51B2, OR51E1, OR51I2, and a polypeptide having at least 80% identity with an amino acid sequence thereof And adding odor-causing substances;
Measuring the response of the olfactory receptor polypeptide to the odor-causing agent; and
Identifying a test substance that suppresses the response of the olfactory receptor polypeptide based on the measured response;
A method comprising:
本発明によれば、嗅覚受容体アンタゴニズムによるマスキングにより腋臭を選択的に消臭することができる腋臭抑制剤を、効率よく探索することができる。 According to the present invention, it is possible to efficiently search for an odor suppressing agent capable of selectively deodorizing an odor by masking with an olfactory receptor antagonism.
本明細書において、匂いに関する用語「マスキング」とは、目的の匂いを認識させなくするか又は認識を弱めるための手段全般を指す。「マスキング」は、化学的手段、物理的手段、生物的手段、及び感覚的手段を含み得る。例えば、マスキングとしては、目的の匂いの原因となる匂い分子を環境から除去するための任意の手段（例えば、匂い分子の吸着及び化学的分解）、目的の匂いが環境に放出されないようにするための手段（例えば、封じ込め）、香料や芳香剤などの別の匂いを添加して目的の匂いを認識しにくくする方法、などが挙げられる。 In this specification, the term “masking” relating to odor refers to all means for making the target odor unrecognized or weakening recognition. “Masking” may include chemical means, physical means, biological means, and sensory means. For example, as masking, any means for removing odor molecules that cause the target odor from the environment (for example, adsorption and chemical decomposition of odor molecules), to prevent the target odor from being released into the environment. (For example, containment), a method of adding another odor such as a fragrance or a fragrance to make it difficult to recognize the target odor, and the like.
本明細書における「嗅覚受容体アンタゴニズムによるマスキング」とは、上述の広義の「マスキング」の一形態であって、目的の匂い分子と他の匂い分子をともに適用することにより、当該他の匂い分子によって目的の匂い分子に対する受容体応答を阻害し、結果的に個体に認識される匂いを変化させる手段である。嗅覚受容体アンタゴニズムによるマスキングは、同様に他の匂い分子を用いる手段であっても、芳香剤等の、目的の匂いを別の強い匂いによって打ち消す手段とは区別される。嗅覚受容体アンタゴニズムによるマスキングの一例は、アンタゴニスト（拮抗剤）等の嗅覚受容体の応答を阻害する物質を使用するケースである。特定の匂いをもたらす匂い分子の受容体にその応答を阻害する物質を適用すれば、当該受容体の当該匂い分子に対する応答が抑制されるため、最終的に個体に知覚される匂いを変化させることができる。 In the present specification, “masking by olfactory receptor antagonism” is one form of the above-mentioned “masking” in a broad sense, and by applying the target odor molecule and other odor molecules together, It is a means of inhibiting the receptor response to a target odor molecule by a molecule and consequently changing the odor recognized by an individual. Masking by olfactory receptor antagonism is distinguished from means for canceling the target odor by another strong odor, such as a fragrance, even if the means uses other odor molecules. An example of masking by olfactory receptor antagonism is the case of using a substance that inhibits the response of the olfactory receptor, such as an antagonist (antagonist). If a substance that inhibits the response is applied to the receptor of the odor molecule that causes a specific odor, the response of the receptor to the odor molecule is suppressed, so that the odor finally perceived by the individual is changed. Can do.
本明細書において、「嗅覚受容体ポリペプチド」とは、嗅覚受容体又はそれと同等の機能を有するポリペプチドをいい、嗅覚受容体と同等の機能を有するポリペプチドとは、嗅覚受容体と同様に、細胞膜上に発現することができ、匂い分子の結合によって活性化し、かつ活性化されると、細胞内のＧαｓと共役してアデニル酸シクラーゼを活性化することで細胞内ｃＡＭＰ量を増加させる機能を有するポリペプチドをいう（Ｎａｔ．Ｎｅｕｒｏｓｃｉ．，２００４，５：２６３−２７８）。 In the present specification, “olfactory receptor polypeptide” refers to an olfactory receptor or a polypeptide having a function equivalent thereto, and a polypeptide having a function equivalent to an olfactory receptor is similar to an olfactory receptor. A function that increases the amount of intracellular cAMP by activating adenylate cyclase in combination with intracellular Gαs, which can be expressed on the cell membrane and activated by binding of odor molecules (Nat. Neurosci., 2004, 5: 263-278).
本明細書において、ヌクレオチド配列及びアミノ酸配列の同一性は、リップマン−パーソン法（Ｌｉｐｍａｎ−Ｐｅａｒｓｏｎ法；Ｓｃｉｅｎｃｅ，１９８５，２２７：１４３５−４１）によって計算される。具体的には、遺伝情報処理ソフトウェアＧｅｎｅｔｙｘ−Ｗｉｎ（Ｖｅｒ．５．１．１；ソフトウェア開発）のホモロジー解析（Ｓｅａｒｃｈ ｈｏｍｏｌｏｇｙ）プログラムを用いて、Ｕｎｉｔ ｓｉｚｅ ｔｏ ｃｏｍｐａｒｅ（ｋｔｕｐ）を２として解析を行うことにより算出される。 In the present specification, nucleotide sequence and amino acid sequence identity is calculated by the Lippman-Pearson method (Lipman-Pearson method; Science, 1985, 227: 1435-41). Specifically, using the homology analysis (Search homology) program of genetic information software Genetyx-Win (Ver. 5.1.1; software development), analysis is performed with Unit size to compare (ktup) as 2. Is calculated by
図１〜６に示すとおり、本発明者は、多くの嗅覚受容体の中から、ＯＲ１Ａ１、ＯＲ２Ｗ１、ＯＲ２Ｊ３、ＯＲ１０Ａ６、ＯＲ５１Ｂ２、ＯＲ５１Ｅ１、及びＯＲ５１Ｉ２を、各種腋臭原因物質に対して特異的に応答する嗅覚受容体として同定した。これらの嗅覚受容体はいずれも、腋臭原因物質に対して濃度依存的に応答する。したがって、ＯＲ１Ａ１、ＯＲ２Ｗ１、ＯＲ２Ｊ３、ＯＲ１０Ａ６、ＯＲ５１Ｂ２、ＯＲ５１Ｅ１若しくはＯＲ５１Ｉ２、又はこれらと同様の機能を有するポリペプチドの応答を抑制する物質は、嗅覚受容体アンタゴニズムに基づくマスキングにより、中枢における腋臭の認識に変化を生じさせ、結果として、腋臭を選択的に抑制することができる。 As shown in FIGS. 1 to 6, the present inventor specifically responds to various odor-causing substances from various olfactory receptors, OR1A1, OR2W1, OR2J3, OR10A6, OR51B2, OR51E1, and OR51I2. Identified as an olfactory receptor. All of these olfactory receptors respond to the odor-causing substance in a concentration-dependent manner. Therefore, a substance that suppresses the response of OR1A1, OR2W1, OR2J3, OR10A6, OR51B2, OR51E1 or OR51I2, or a polypeptide having a function similar to these can be used for recognition of a stinking odor in the center by masking based on olfactory receptor antagonism. As a result, the odor can be selectively suppressed.
したがって、本発明は、腋臭抑制剤の探索方法を提供する。当該方法は、ＯＲ１Ａ１、ＯＲ２Ｗ１、ＯＲ２Ｊ３、ＯＲ１０Ａ６、ＯＲ５１Ｂ２、ＯＲ５１Ｅ１、ＯＲ５１Ｉ２、及びこれらとアミノ酸配列において少なくとも８０％の同一性を有するポリペプチドからなる群より選択される少なくとも１種の嗅覚受容体ポリペプチドに、試験物質及び腋臭原因物質を添加すること；該腋臭原因物質に対する該嗅覚受容体ポリペプチドの応答を測定すること；及び、測定された応答に基づいて該嗅覚受容体ポリペプチドの応答を抑制する試験物質を同定すること、を含む。同定された試験物質は、腋臭抑制剤として選択される。当該本発明の方法は、ｉｎ ｖｉｔｒｏ又はｅｘ ｖｉｖｏで行われる方法であり得る。 Therefore, this invention provides the search method of a bad smell inhibitor. The method comprises at least one olfactory receptor polypeptide selected from the group consisting of OR1A1, OR2W1, OR2J3, OR10A6, OR51B2, OR51E1, OR51I2, and a polypeptide having at least 80% identity in amino acid sequence with these. Adding a test substance and an odor-causing substance; measuring the response of the olfactory receptor polypeptide to the odor-causing substance; and suppressing the response of the olfactory receptor polypeptide based on the measured response Identifying a test substance to perform. The identified test substance is selected as an odor control agent. The method of the present invention may be a method performed in vitro or ex vivo.
上記本発明の方法において、腋臭原因物質としては、３−メルカプト−３−メチルヘキサノール（本明細書において（Ｒ）−３−メルカプト−３−メチルヘキサノール、（Ｓ）−３−メルカプト−３−メチルヘキサノール、及びそれらの混合物を包含する）、３−ヒドロキシ−３−メチルヘキサン酸、及び３−メチル−２−ヘキセン酸からなる群より選択される少なくとも１種が好適に使用される。 In the above-described method of the present invention, as the odor-causing substance, 3-mercapto-3-methylhexanol (in this specification, (R) -3-mercapto-3-methylhexanol, (S) -3-mercapto-3-methyl is used. (Including hexanol and mixtures thereof), at least one selected from the group consisting of 3-hydroxy-3-methylhexanoic acid and 3-methyl-2-hexenoic acid is preferably used.
したがって、本発明の別の実施形態は、３−メルカプト−３−メチルヘキサノール臭抑制剤の探索方法である。当該方法は、ＯＲ１Ａ１、ＯＲ２Ｗ１、ＯＲ２Ｊ３、及びこれらとアミノ酸配列において少なくとも８０％の同一性を有するポリペプチドからなる群より選択される少なくとも１種の嗅覚受容体ポリペプチドに、試験物質及び３−メルカプト−３−メチルヘキサノール（ここで、該３−メルカプト−３−メチルヘキサノールは、（Ｒ）−３−メルカプト−３−メチルヘキサノール、（Ｓ）−３−メルカプト−３−メチルヘキサノール、又はそれらの混合物である）を添加すること；該３−メルカプト−３−メチルヘキサノールに対する該嗅覚受容体ポリペプチドの応答を測定すること；及び、測定された応答に基づいて該嗅覚受容体ポリペプチドの応答を抑制する試験物質を同定すること、を含む。同定された試験物質は、３−メルカプト−３−メチルヘキサノール臭抑制剤として選択される。 Therefore, another embodiment of the present invention is a method for searching for a 3-mercapto-3-methylhexanol odor inhibitor. The method comprises subjecting a test substance and 3-mercapto to at least one olfactory receptor polypeptide selected from the group consisting of OR1A1, OR2W1, OR2J3, and a polypeptide having at least 80% identity in amino acid sequence thereto. -3-methylhexanol (wherein the 3-mercapto-3-methylhexanol is (R) -3-mercapto-3-methylhexanol, (S) -3-mercapto-3-methylhexanol, or a mixture thereof) Measuring the response of the olfactory receptor polypeptide to the 3-mercapto-3-methylhexanol; and inhibiting the response of the olfactory receptor polypeptide based on the measured response Identifying a test substance to perform. The identified test substance is selected as a 3-mercapto-3-methylhexanol odor inhibitor.
本発明のさらに別の実施形態は、３−ヒドロキシ−３−メチルヘキサン酸臭抑制剤の探索方法である。当該方法は、ＯＲ１０Ａ６及びこれとアミノ酸配列において少なくとも８０％の同一性を有するポリペプチドからなる群より選択される少なくとも１種の嗅覚受容体ポリペプチドに、試験物質及び３−ヒドロキシ−３−メチルヘキサン酸を添加すること；３−ヒドロキシ−３−メチルヘキサン酸に対する該嗅覚受容体ポリペプチドの応答を測定すること；及び、測定された応答に基づいて該嗅覚受容体ポリペプチドの応答を抑制する試験物質を同定すること、を含む。同定された試験物質は、３−ヒドロキシ−３−メチルヘキサン酸臭抑制剤として選択される。 Yet another embodiment of the present invention is a method for searching for a 3-hydroxy-3-methylhexanoic acid odor inhibitor. The method comprises subjecting a test substance and 3-hydroxy-3-methylhexane to at least one olfactory receptor polypeptide selected from the group consisting of OR10A6 and a polypeptide having at least 80% identity in amino acid sequence with OR10A6. Adding an acid; measuring the response of the olfactory receptor polypeptide to 3-hydroxy-3-methylhexanoic acid; and a test for suppressing the response of the olfactory receptor polypeptide based on the measured response Identifying the substance. The identified test substance is selected as a 3-hydroxy-3-methylhexanoic acid odor inhibitor.
本発明のさらに別の実施形態は、３−メチル−２−ヘキセン酸臭抑制剤の探索方法である。当該方法は、ＯＲ１Ａ１、ＯＲ２Ｗ１、ＯＲ１０Ａ６、ＯＲ５１Ｂ２、ＯＲ５１Ｅ１、ＯＲ５１Ｉ２、及びこれらとアミノ酸配列において少なくとも８０％の同一性を有するポリペプチドからなる群より選択される少なくとも１種の嗅覚受容体ポリペプチドに、試験物質及び３−メチル−２−ヘキセン酸を添加すること；３−メチル−２−ヘキセン酸に対する該嗅覚受容体ポリペプチドの応答を測定すること；及び、測定された応答に基づいて該嗅覚受容体ポリペプチドの応答を抑制する試験物質を同定すること、を含む。同定された試験物質は、３−メチル−２−ヘキセン酸臭抑制剤として選択される。 Yet another embodiment of the present invention is a method for searching for a 3-methyl-2-hexenoic acid odor inhibitor. The method comprises OR1A1, OR2W1, OR10A6, OR51B2, OR51E1, OR51I2, and at least one olfactory receptor polypeptide selected from the group consisting of polypeptides having at least 80% identity in amino acid sequence with these, Adding a test substance and 3-methyl-2-hexenoic acid; measuring the response of the olfactory receptor polypeptide to 3-methyl-2-hexenoic acid; and based on the measured response, the olfactory receptor Identifying a test substance that suppresses the response of the body polypeptide. The identified test substance is selected as a 3-methyl-2-hexenoic acid odor inhibitor.
上記本発明の方法においては、上記腋臭原因物質に応答性を有する嗅覚受容体ポリペプチドに、試験物質と該腋臭原因物質とが添加される。 In the method of the present invention, the test substance and the odor-causing substance are added to the olfactory receptor polypeptide responsive to the odor-causing substance.
本発明の方法に使用される試験物質は、腋臭抑制剤として使用することを所望する物質であれば、特に制限されない。試験物質は、天然に存在する物質であっても、化学的若しくは生物学的方法等で人工的に合成した物質であってもよく、又は化合物であっても、組成物若しくは混合物であってもよい。 The test substance used in the method of the present invention is not particularly limited as long as it is a substance desired to be used as a odor suppressor. The test substance may be a naturally occurring substance, a substance artificially synthesized by a chemical or biological method, etc., or may be a compound, a composition or a mixture. Good.
本発明の方法に使用される嗅覚受容体ポリペプチドは、ＯＲ１Ａ１、ＯＲ２Ｗ１、ＯＲ２Ｊ３、ＯＲ１０Ａ６、ＯＲ５１Ｂ２、ＯＲ５１Ｅ１、ＯＲ５１Ｉ２、及びこれらとアミノ酸配列において少なくとも８０％の同一性を有するポリペプチドからなる群より選択される少なくとも１種である。 The olfactory receptor polypeptide used in the method of the present invention is selected from the group consisting of OR1A1, OR2W1, OR2J3, OR10A6, OR51B2, OR51E1, OR51I2, and a polypeptide having at least 80% identity in amino acid sequence with these. Is at least one kind.
ＯＲ１Ａ１、ＯＲ２Ｗ１、ＯＲ２Ｊ３、ＯＲ１０Ａ６、ＯＲ５１Ｂ２、ＯＲ５１Ｅ１、及びＯＲ５１Ｉ２は、いずれもヒト嗅細胞で発現している嗅覚受容体である。ＯＲ１Ａ１は、ＧｅｎＢａｎｋにＧＩ：２８９５４７６２２として登録されている。ＯＲ１Ａ１は、配列番号１で示されるヌクレオチド配列を有する遺伝子にコードされる、配列番号２で示されるアミノ酸配列からなるタンパク質である。ＯＲ２Ｗ１は、ＧｅｎＢａｎｋにＧＩ：１６９２３４７８８として登録されている。ＯＲ２Ｗ１は、配列番号３で示されるヌクレオチド配列を有する遺伝子にコードされる、配列番号４で示されるアミノ酸配列からなるタンパク質である。ＯＲ２Ｊ３は、ＧｅｎＢａｎｋにＧＩ：５０７５８８２４５として登録されている。ＯＲ２Ｊ３は、配列番号５で示されるヌクレオチド配列を有する遺伝子にコードされる、配列番号６で示されるアミノ酸配列からなるタンパク質である。ＯＲ１０Ａ６は、ＧｅｎＢａｎｋにＧＩ：５２２１８８３５として登録されている。ＯＲ１０Ａ６は、配列番号７で示されるヌクレオチド配列を有する遺伝子にコードされる、配列番号８で示されるアミノ酸配列からなるタンパク質である。ＯＲ５１Ｂ２は、ＧｅｎＢａｎｋにＧＩ：１５７７３８６２２として登録されている。ＯＲ５１Ｂ２は、配列番号９で示されるヌクレオチド配列を有する遺伝子にコードされる、配列番号１０で示されるアミノ酸配列からなるタンパク質である。ＯＲ５１Ｅ１は、ＧｅｎＢａｎｋにＧＩ：２０５２７７３７７として登録されている。ＯＲ５１Ｅ１は、配列番号１１で示されるヌクレオチド配列を有する遺伝子にコードされる、配列番号１２で示されるアミノ酸配列からなるタンパク質である。ＯＲ５１Ｉ２は、ＧｅｎＢａｎｋにＧＩ：２８４１７２４３５として登録されている。ＯＲ５１Ｉ２は、配列番号１３で示されるヌクレオチド配列を有する遺伝子にコードされる、配列番号１４で示されるアミノ酸配列からなるタンパク質である。 OR1A1, OR2W1, OR2J3, OR10A6, OR51B2, OR51E1, and OR51I2 are all olfactory receptors expressed in human olfactory cells. OR1A1 is registered in GenBank as GI: 289547622. OR1A1 is a protein consisting of an amino acid sequence represented by SEQ ID NO: 2 encoded by a gene having a nucleotide sequence represented by SEQ ID NO: 1. OR2W1 is registered with GenBank as GI: 16234788. OR2W1 is a protein consisting of an amino acid sequence represented by SEQ ID NO: 4 encoded by a gene having a nucleotide sequence represented by SEQ ID NO: 3. OR2J3 is registered with GenBank as GI: 5075888245. OR2J3 is a protein consisting of an amino acid sequence represented by SEQ ID NO: 6 encoded by a gene having a nucleotide sequence represented by SEQ ID NO: 5. OR10A6 is registered as GI: 52218835 in GenBank. OR10A6 is a protein consisting of an amino acid sequence represented by SEQ ID NO: 8 encoded by a gene having a nucleotide sequence represented by SEQ ID NO: 7. OR51B2 is registered in GenBank as GI: 15778622. OR51B2 is a protein consisting of an amino acid sequence represented by SEQ ID NO: 10 encoded by a gene having a nucleotide sequence represented by SEQ ID NO: 9. The OR51E1 is registered in GenBank as GI: 205277377. OR51E1 is a protein consisting of an amino acid sequence represented by SEQ ID NO: 12 and encoded by a gene having a nucleotide sequence represented by SEQ ID NO: 11. OR51I2 is registered in GenBank as GI: 284172435. OR51I2 is a protein consisting of an amino acid sequence represented by SEQ ID NO: 14 encoded by a gene having a nucleotide sequence represented by SEQ ID NO: 13.
ＯＲ１Ａ１とアミノ酸配列において少なくとも８０％の同一性を有するポリペプチドとしては、配列番号２で示されるアミノ酸配列と少なくとも８０％、例えば８０％以上、好ましくは８５％以上、より好ましくは９０％以上、さらに好ましくは９５％以上、さらにより好ましくは９８％以上、なお好ましくは９９％以上の同一性を有するアミノ酸配列からなり、かつ３−メルカプト−３−メチルヘキサノール又は３−メチル−２−ヘキセン酸に応答性を有するポリペプチドが挙げられる。 The polypeptide having at least 80% identity in the amino acid sequence with OR1A1 is at least 80%, for example, 80% or more, preferably 85% or more, more preferably 90% or more, further with the amino acid sequence represented by SEQ ID NO: 2. Preferably 95% or more, even more preferably 98% or more, still more preferably 99% or more of the amino acid sequence and responds to 3-mercapto-3-methylhexanol or 3-methyl-2-hexenoic acid A polypeptide having sex.
ＯＲ２Ｗ１とアミノ酸配列において少なくとも８０％の同一性を有するポリペプチドとしては、配列番号４で示されるアミノ酸配列と少なくとも８０％、例えば８０％以上、好ましくは８５％以上、より好ましくは９０％以上、さらに好ましくは９５％以上、さらにより好ましくは９８％以上、なお好ましくは９９％以上の同一性を有するアミノ酸配列からなり、かつ３−メルカプト−３−メチルヘキサノール又は３−メチル−２−ヘキセン酸に応答性を有するポリペプチドが挙げられる。 The polypeptide having at least 80% identity in the amino acid sequence with OR2W1 includes at least 80%, for example, 80% or more, preferably 85% or more, more preferably 90% or more, more than the amino acid sequence represented by SEQ ID NO: 4. Preferably 95% or more, even more preferably 98% or more, still more preferably 99% or more of the amino acid sequence and responds to 3-mercapto-3-methylhexanol or 3-methyl-2-hexenoic acid A polypeptide having sex.
ＯＲ２Ｊ３とアミノ酸配列において少なくとも８０％の同一性を有するポリペプチドとしては、配列番号６で示されるアミノ酸配列と少なくとも８０％、例えば８０％以上、好ましくは８５％以上、より好ましくは９０％以上、さらに好ましくは９５％以上、さらにより好ましくは９８％以上、なお好ましくは９９％以上の同一性を有するアミノ酸配列からなり、かつ（Ｓ）−３−メルカプト−３−メチルヘキサノールに応答性を有するポリペプチドが挙げられる。 The polypeptide having at least 80% identity in the amino acid sequence with OR2J3 includes at least 80%, for example, 80% or more, preferably 85% or more, more preferably 90% or more, more preferably the amino acid sequence represented by SEQ ID NO: 6. A polypeptide comprising an amino acid sequence having preferably 95% or more, still more preferably 98% or more, and still more preferably 99% or more, and having a response to (S) -3-mercapto-3-methylhexanol Is mentioned.
ＯＲ１０Ａ６とアミノ酸配列において少なくとも８０％の同一性を有するポリペプチドとしては、配列番号８で示されるアミノ酸配列と少なくとも８０％、例えば８０％以上、好ましくは８５％以上、より好ましくは９０％以上、さらに好ましくは９５％以上、さらにより好ましくは９８％以上、なお好ましくは９９％以上の同一性を有するアミノ酸配列からなり、かつ３−ヒドロキシ−３−メチルヘキサン酸又は３−メチル−２−ヘキセン酸に応答性を有するポリペプチドが挙げられる。 The polypeptide having at least 80% identity in the amino acid sequence with OR10A6 is at least 80%, for example, 80% or more, preferably 85% or more, more preferably 90% or more, and the amino acid sequence represented by SEQ ID NO: 8, Preferably 95% or more, still more preferably 98% or more, still more preferably 99% or more of amino acid sequence, and 3-hydroxy-3-methylhexanoic acid or 3-methyl-2-hexenoic acid. Examples include responsive polypeptides.
ＯＲ５１Ｂ２とアミノ酸配列において少なくとも８０％の同一性を有するポリペプチドとしては、配列番号１０で示されるアミノ酸配列と少なくとも８０％、例えば８０％以上、好ましくは８５％以上、より好ましくは９０％以上、さらに好ましくは９５％以上、さらにより好ましくは９８％以上、なお好ましくは９９％以上の同一性を有するアミノ酸配列からなり、かつ３−メチル−２−ヘキセン酸に応答性を有するポリペプチドが挙げられる。 The polypeptide having at least 80% identity in the amino acid sequence with OR51B2 is at least 80%, for example, 80% or more, preferably 85% or more, more preferably 90% or more, further with the amino acid sequence represented by SEQ ID NO: 10. Preferred is a polypeptide having an amino acid sequence having 95% or more, still more preferably 98% or more, and still more preferably 99% or more, and responsiveness to 3-methyl-2-hexenoic acid.
ＯＲ５１Ｅ１とアミノ酸配列において少なくとも８０％の同一性を有するポリペプチドとしては、配列番号１２で示されるアミノ酸配列と少なくとも８０％、例えば８０％以上、好ましくは８５％以上、より好ましくは９０％以上、さらに好ましくは９５％以上、さらにより好ましくは９８％以上、なお好ましくは９９％以上の同一性を有するアミノ酸配列からなり、かつ３−メチル−２−ヘキセン酸に応答性を有するポリペプチドが挙げられる。 The polypeptide having at least 80% identity in the amino acid sequence with OR51E1 is at least 80%, for example, 80% or more, preferably 85% or more, more preferably 90% or more, further with the amino acid sequence represented by SEQ ID NO: 12. Preferred is a polypeptide having an amino acid sequence having 95% or more, still more preferably 98% or more, and still more preferably 99% or more, and responsiveness to 3-methyl-2-hexenoic acid.
ＯＲ５１Ｉ２とアミノ酸配列において少なくとも８０％の同一性を有するポリペプチドとしては、配列番号１４で示されるアミノ酸配列と少なくとも８０％、例えば８０％以上、好ましくは８５％以上、より好ましくは９０％以上、さらに好ましくは９５％以上、さらにより好ましくは９８％以上、なお好ましくは９９％以上の同一性を有するアミノ酸配列からなり、かつ３−メチル−２−ヘキセン酸に応答性を有するポリペプチドが挙げられる。 The polypeptide having at least 80% identity in amino acid sequence with OR51I2 is at least 80%, for example, 80% or more, preferably 85% or more, more preferably 90% or more, further with the amino acid sequence represented by SEQ ID NO: 14. Preferred is a polypeptide having an amino acid sequence having 95% or more, still more preferably 98% or more, and still more preferably 99% or more, and responsiveness to 3-methyl-2-hexenoic acid.
本発明の方法では、上述した嗅覚受容体ポリペプチドから選択される少なくとも１種を使用すればよいが、いずれか２種以上を組み合わせて使用してもよい。本発明の方法において、腋臭原因物質が３−メルカプト−３−メチルヘキサノールであるか又はそれを含む場合、嗅覚受容体ポリペプチドとしては、好ましくは、ＯＲ１Ａ１又はこれとアミノ酸配列において少なくとも８０％の同一性を有するポリペプチド、ＯＲ２Ｗ１又はこれとアミノ酸配列において少なくとも８０％の同一性を有するポリペプチド、及びＯＲ２Ｊ３又はこれとアミノ酸配列において少なくとも８０％の同一性を有するポリペプチドからなる群より選択される少なくとも１種が使用され、より好ましくはＯＲ１Ａ１又はこれとアミノ酸配列において少なくとも８０％の同一性を有するポリペプチド、及びＯＲ２Ｗ１又はこれとアミノ酸配列において少なくとも８０％の同一性を有するポリペプチドのいずれか又は両方が使用され、さらに好ましくは、ＯＲ１Ａ１又はこれとアミノ酸配列において少なくとも８０％の同一性を有するポリペプチド、ＯＲ２Ｗ１又はこれとアミノ酸配列において少なくとも８０％の同一性を有するポリペプチド、及びＯＲ２Ｊ３又はこれとアミノ酸配列において少なくとも８０％の同一性を有するポリペプチドが組み合わせて使用され、なお好ましくは、ＯＲ１Ａ１、ＯＲ２Ｗ１及びＯＲ２Ｊ３が組み合わせて使用される。 In the method of the present invention, at least one selected from the above-described olfactory receptor polypeptides may be used, but any two or more may be used in combination. In the method of the present invention, when the odor causing substance is 3-mercapto-3-methylhexanol or contains it, the olfactory receptor polypeptide is preferably at least 80% identical in amino acid sequence to OR1A1 or this. At least 80% selected from the group consisting of a polypeptide having sex, a polypeptide having at least 80% identity in amino acid sequence with OR2W1, and a polypeptide having at least 80% identity in amino acid sequence with OR2J3 One is used, more preferably either or both of OR1A1 or a polypeptide having at least 80% identity in amino acid sequence and OR2W1 or a polypeptide having at least 80% identity in amino acid sequence with OR2W1 Used More preferably, OR1A1 or a polypeptide having at least 80% identity in amino acid sequence with OR1A1, or a polypeptide having at least 80% identity in amino acid sequence with OR2W1, or OR2J3 or amino acid sequence with this Polypeptides having at least 80% identity are used in combination, more preferably OR1A1, OR2W1 and OR2J3 are used in combination.
本発明の方法において、腋臭原因物質が３−ヒドロキシ−３−メチルヘキサン酸であるか又はそれを含む場合、嗅覚受容体ポリペプチドとしては、好ましくは、ＯＲ１０Ａ６及び／又はこれとアミノ酸配列において少なくとも８０％の同一性を有するポリペプチドが使用され、より好ましくはＯＲ１０Ａ６が使用される。 In the method of the present invention, when the odor-causing substance is 3-hydroxy-3-methylhexanoic acid or contains it, the olfactory receptor polypeptide is preferably at least 80 in OR10A6 and / or its amino acid sequence. Polypeptides with% identity are used, more preferably OR10A6.
本発明の方法において、腋臭原因物質が３−メチル−２−ヘキセン酸であるか又はそれを含む場合、嗅覚受容体ポリペプチドとしては、好ましくは、ＯＲ１Ａ１又はこれとアミノ酸配列において少なくとも８０％の同一性を有するポリペプチド、ＯＲ２Ｗ１又はこれとアミノ酸配列において少なくとも８０％の同一性を有するポリペプチド、ＯＲ１０Ａ６又はこれとアミノ酸配列において少なくとも８０％の同一性を有するポリペプチド、ＯＲ５１Ｂ２又はこれとアミノ酸配列において少なくとも８０％の同一性を有するポリペプチド、ＯＲ５１Ｅ１又はこれとアミノ酸配列において少なくとも８０％の同一性を有するポリペプチド、及びＯＲ５１Ｉ２又はこれとアミノ酸配列において少なくとも８０％の同一性を有するポリペプチドからなる群より選択される少なくとも１種が使用される。より好ましくは、ＯＲ１Ａ１又はこれとアミノ酸配列において少なくとも８０％の同一性を有するポリペプチド、ＯＲ２Ｗ１又はこれとアミノ酸配列において少なくとも８０％の同一性を有するポリペプチド、ＯＲ１０Ａ６又はこれとアミノ酸配列において少なくとも８０％の同一性を有するポリペプチド、ＯＲ５１Ｂ２又はこれとアミノ酸配列において少なくとも８０％の同一性を有するポリペプチド、及びＯＲ５１Ｅ１又はこれとアミノ酸配列において少なくとも８０％の同一性を有するポリペプチドからなる群より選択される少なくとも１種、さらに好ましくは少なくとも２種、さらに好ましくは少なくとも３種、さらに好ましくは少なくとも４種、さらに好ましくは全部が組み合わせて使用される。なお好ましくは、ＯＲ１Ａ１、ＯＲ２Ｗ１、ＯＲ１０Ａ６、ＯＲ５１Ｂ２及びＯＲ５１Ｅ１が組み合わせて使用される。 In the method of the present invention, when the odor-causing substance is 3-methyl-2-hexenoic acid or contains it, the olfactory receptor polypeptide is preferably OR1A1 or at least 80% identical in amino acid sequence to this. A polypeptide having sex, OR2W1 or polypeptide having at least 80% identity in amino acid sequence with OR2A1, or polypeptide having at least 80% identity in amino acid sequence with OR10A6, OR51B2 or at least amino acid sequence in this A polypeptide having 80% identity, OR51E1 or a polypeptide having at least 80% identity in amino acid sequence and OR51I2 or a polypeptide having at least 80% identity in amino acid sequence with OR51I2 At least one is used is selected from the group. More preferably, OR1A1 or a polypeptide having at least 80% identity in the amino acid sequence thereof, OR2W1 or polypeptide having at least 80% identity in the amino acid sequence, OR10A6 or at least 80% in amino acid sequence thereof Selected from the group consisting of OR51B2 or a polypeptide having at least 80% identity in amino acid sequence, and OR51E1 or a polypeptide having at least 80% identity in amino acid sequence with OR51B2. At least one, more preferably at least 2, more preferably at least 3, more preferably at least 4, more preferably all are used in combination. Preferably, OR1A1, OR2W1, OR10A6, OR51B2, and OR51E1 are used in combination.
本発明の方法において、上記嗅覚受容体ポリペプチドは、上記腋臭原因物質に対する応答性を失わない限り、任意の形態で使用され得る。例えば、当該嗅覚受容体ポリペプチドは、生体から単離された嗅覚受容器若しくは嗅細胞等の、当該嗅覚受容体ポリペプチドを天然に発現する組織や細胞、又はそれらの培養物；当該嗅覚受容体ポリペプチドを担持した嗅細胞の膜；当該嗅覚受容体ポリペプチドを発現するように遺伝的に操作された組換え細胞又はその培養物；当該嗅覚受容体ポリペプチドを有する当該組換え細胞の膜；当該嗅覚受容体ポリペプチドを有する人工脂質二重膜、などの形態で使用され得る。これらの形態は全て、本発明で使用される嗅覚受容体ポリペプチドの範囲に含まれる。 In the method of the present invention, the olfactory receptor polypeptide can be used in any form as long as it does not lose responsiveness to the odor-causing substance. For example, the olfactory receptor polypeptide is a tissue or cell that naturally expresses the olfactory receptor polypeptide, such as an olfactory receptor or olfactory cell isolated from a living body, or a culture thereof; the olfactory receptor A membrane of an olfactory cell carrying a polypeptide; a recombinant cell or culture thereof genetically engineered to express the olfactory receptor polypeptide; a membrane of the recombinant cell having the olfactory receptor polypeptide; It can be used in the form of an artificial lipid bilayer membrane having the olfactory receptor polypeptide. All of these forms fall within the scope of the olfactory receptor polypeptide used in the present invention.
好ましい態様においては、嗅覚受容体ポリペプチドとしては、嗅細胞等の上記嗅覚受容体ポリペプチドを天然に発現する細胞、又は当該嗅覚受容体ポリペプチドを発現するように遺伝的に操作された組換え細胞、あるいはそれらの培養物が使用される。当該組換え細胞は、当該嗅覚受容体ポリペプチドをコードする遺伝子を組み込んだベクターを用いて細胞を形質転換することで作製することができる。 In a preferred embodiment, the olfactory receptor polypeptide is a cell that naturally expresses the olfactory receptor polypeptide such as an olfactory cell, or a recombinant genetically engineered to express the olfactory receptor polypeptide. Cells or cultures thereof are used. The recombinant cell can be produced by transforming the cell using a vector incorporating a gene encoding the olfactory receptor polypeptide.
好適には、嗅覚受容体ポリペプチドの細胞膜発現を促進するために、当該嗅覚受容体ポリペプチドをコードする遺伝子とともに、ＲＴＰ（ｒｅｃｅｐｔｏｒ−ｔｒａｎｓｐｏｒｔｉｎｇ ｐｒｏｔｅｉｎ）をコードする遺伝子を細胞に導入する。好ましくは、ＲＴＰ１Ｓをコードする遺伝子を、当該嗅覚受容体ポリペプチドをコードする遺伝子とともに細胞に導入する。ＲＴＰ１Ｓの例としては、ヒトＲＴＰ１Ｓが挙げられる。ヒトＲＴＰ１Ｓは、ＧｅｎＢａｎｋにＧＩ：５０２３４９１７として登録されており、配列番号１５で示されるヌクレオチド配列を有する遺伝子にコードされる、配列番号１６で示されるアミノ酸配列からなるタンパク質である。 Preferably, in order to promote cell membrane expression of the olfactory receptor polypeptide, a gene encoding RTP (receptor-transporting protein) is introduced into the cell together with the gene encoding the olfactory receptor polypeptide. Preferably, a gene encoding RTP1S is introduced into a cell together with a gene encoding the olfactory receptor polypeptide. An example of RTP1S includes human RTP1S. Human RTP1S is a protein consisting of the amino acid sequence represented by SEQ ID NO: 16, which is registered in GenBank as GI: 50234917 and is encoded by a gene having a nucleotide sequence represented by SEQ ID NO: 15.
本発明の方法によれば、上記嗅覚受容体ポリペプチドへの試験物質及び上記腋臭原因物質の添加に続いて、該腋臭原因物質に対する該嗅覚受容体ポリペプチドの応答が測定される。測定は嗅覚受容体の応答を測定する方法として当該分野で知られている任意の方法、例えば、細胞内ｃＡＭＰ量測定等によって行えばよい。例えば、嗅覚受容体は、匂い分子によって活性化されると、細胞内のＧαｓと共役してアデニル酸シクラーゼを活性化することで、細胞内ｃＡＭＰ量を増加させることが知られている（Ｎａｔ．Ｎｅｕｒｏｓｃｉ．，２００４，５：２６３−２７８）。したがって、匂い分子添加後の細胞内ｃＡＭＰ量を指標にすることで、上記嗅覚受容体ポリペプチドの応答を測定することができる。ｃＡＭＰ量を測定する方法としては、ＥＬＩＳＡ法やレポータージーンアッセイ等が挙げられる。上記嗅覚受容体ポリペプチドの応答を測定する他の方法としては、カルシウムイメージング法が挙げられる。 According to the method of the present invention, following the addition of the test substance and the odor-causing substance to the olfactory receptor polypeptide, the response of the olfactory receptor polypeptide to the odor-causing substance is measured. The measurement may be performed by any method known in the art as a method for measuring the response of the olfactory receptor, for example, measurement of intracellular cAMP amount. For example, when the olfactory receptor is activated by an odor molecule, it is known to increase the amount of intracellular cAMP by activating adenylate cyclase in combination with intracellular Gαs (Nat. Neurosci., 2004, 5: 263-278). Therefore, the response of the olfactory receptor polypeptide can be measured by using the amount of intracellular cAMP after addition of the odor molecule as an index. Examples of the method for measuring the amount of cAMP include an ELISA method and a reporter gene assay. Other methods for measuring the response of the olfactory receptor polypeptide include calcium imaging.
次いで、測定された上記嗅覚受容体ポリペプチドの応答に基づいて、上記腋臭原因物質への応答に対して試験物質が及ぼす作用を評価し、当該応答を抑制する試験物質を同定する。試験物質による作用の評価は、試験物質を添加した該嗅覚受容体ポリペプチドの該腋臭原因物質に対する応答を、対照群における該腋臭原因物質に対する応答と比較することによって行うことができる。対照群としては、異なる濃度の試験物質を添加した該嗅覚受容体ポリペプチド、試験物質を添加しなかった該嗅覚受容体ポリペプチド、対照物質を添加した該嗅覚受容体ポリペプチド、試験物質を添加する前の該嗅覚受容体ポリペプチドなどを挙げることができる。 Next, based on the measured response of the olfactory receptor polypeptide, the effect of the test substance on the response to the odor-causing substance is evaluated, and the test substance that suppresses the response is identified. The effect of the test substance can be evaluated by comparing the response of the olfactory receptor polypeptide to which the test substance has been added to the odor causing substance in the control group. As a control group, the olfactory receptor polypeptide to which the test substance of different concentration was added, the olfactory receptor polypeptide to which the test substance was not added, the olfactory receptor polypeptide to which the control substance was added, and the test substance were added. Examples of the olfactory receptor polypeptide may be mentioned.
例えば、上記嗅覚受容体ポリペプチドの応答に対して試験物質が及ぼす作用は、より高濃度の試験物質添加群とより低濃度の試験物質添加群との間、試験物質添加群と非添加群との間、試験物質添加群と対照物質添加群との間、又は試験物質添加前後で、上記腋臭原因物質に対する該嗅覚受容体ポリペプチドの応答を比較することによって評価することができる。試験物質添加により、又はより高濃度の試験物質の添加により該嗅覚受容体ポリペプチドの応答が抑制される場合、当該試験物質を、該嗅覚受容体ポリペプチドの該腋臭原因物質に対する応答を抑制する物質として同定することができる。 For example, the effect of the test substance on the response of the olfactory receptor polypeptide is between the test substance addition group of the higher concentration and the test substance addition group of the lower concentration, the test substance addition group and the non-addition group. , By comparing the response of the olfactory receptor polypeptide to the odor-causing substance between the test substance addition group and the control substance addition group, or before and after the test substance addition. When the response of the olfactory receptor polypeptide is suppressed by adding a test substance or by adding a higher concentration of the test substance, the test substance suppresses the response of the olfactory receptor polypeptide to the odor-causing substance. It can be identified as a substance.
例えば、上記の手順で測定された試験物質添加群における嗅覚受容体ポリペプチドの応答が、対照群と比較して好ましくは６０％以下、より好ましくは５０％以下、さらに好ましくは２５％以下に抑制されていれば、当該試験物質を、上記腋臭原因物質に対する該嗅覚受容体ポリペプチドの応答を抑制する物質として同定することができる。あるいは、上記の手順で測定された試験物質添加群における嗅覚受容体ポリペプチドの応答が、対照群と比較して統計学的に有意に抑制されていれば、当該試験物質を、上記腋臭原因物質に対する該嗅覚受容体ポリペプチドの応答を抑制する物質として同定することができる。 For example, the response of the olfactory receptor polypeptide in the test substance addition group measured by the above procedure is preferably suppressed to 60% or less, more preferably 50% or less, and even more preferably 25% or less compared to the control group. If so, the test substance can be identified as a substance that suppresses the response of the olfactory receptor polypeptide to the odor-causing substance. Alternatively, if the response of the olfactory receptor polypeptide in the test substance addition group measured by the above procedure is statistically significantly suppressed as compared to the control group, the test substance is added to the odor causing substance. It can be identified as a substance that suppresses the response of the olfactory receptor polypeptide to.
上記の手順で同定された試験物質は、上記腋臭原因物質に対する嗅覚受容体の応答を抑制することによって、個体による腋臭の認識を抑制することができる物質である。したがって、上記手順で同定された試験物質は、腋臭抑制剤として選択することができる。本発明の方法によって腋臭抑制剤として選択された物質は、上記腋臭原因物質に対する嗅覚受容体の応答抑制に基づく嗅覚マスキングによって、腋臭を抑制することができる。 The test substance identified by the above procedure is a substance that can suppress the recognition of the odor by the individual by suppressing the response of the olfactory receptor to the odor-causing substance. Therefore, the test substance identified by the above procedure can be selected as a bad smell inhibitor. The substance selected as the odor suppressing agent by the method of the present invention can suppress the odor by olfactory masking based on the suppression of the response of the olfactory receptor to the odor causing substance.
したがって、一実施形態において、本発明の方法によって選択された物質は、腋臭抑制剤の有効成分であり得る。あるいは、本発明の方法によって選択された物質は、腋臭を抑制するための化合物又は組成物に、腋臭を抑制するための有効成分として含有され得る。またあるいは、本発明の方法によって選択された物質は、腋臭の抑制剤の製造のため、又は腋臭を抑制するための化合物若しくは組成物の製造のために使用することができる。 Therefore, in one embodiment, the substance selected by the method of the present invention may be an active ingredient of a bad smell inhibitor. Or the substance selected by the method of this invention can be contained in the compound or composition for suppressing a bad smell as an active ingredient for suppressing a bad smell. Alternatively, the substance selected by the method of the present invention can be used for the production of a musty odor inhibitor or for the production of a compound or composition for suppressing a musty odor.
本発明の例示的実施形態として、さらに以下の組成物、製造方法、用途あるいは方法を本明細書に開示する。ただし、本発明はこれらの実施形態に限定されない。 As exemplary embodiments of the present invention, the following compositions, production methods, uses or methods are further disclosed herein. However, the present invention is not limited to these embodiments.
＜１＞腋臭抑制剤の探索方法であって、以下：
ＯＲ１Ａ１、ＯＲ２Ｗ１、ＯＲ２Ｊ３、ＯＲ１０Ａ６、ＯＲ５１Ｂ２、ＯＲ５１Ｅ１、ＯＲ５１Ｉ２、及びこれらとアミノ酸配列において少なくとも８０％の同一性を有するポリペプチドからなる群より選択される少なくとも１種の嗅覚受容体ポリペプチドに、試験物質及び腋臭原因物質を添加すること；
該腋臭原因物質に対する該嗅覚受容体ポリペプチドの応答を測定すること；及び、
測定された応答に基づいて該嗅覚受容体ポリペプチドの応答を抑制する試験物質を同定すること、
を含む方法。
<1> A method for searching for odor control agents, which is as follows:
A test substance comprising at least one olfactory receptor polypeptide selected from the group consisting of OR1A1, OR2W1, OR2J3, OR10A6, OR51B2, OR51E1, OR51I2, and a polypeptide having at least 80% identity with an amino acid sequence thereof And adding odor-causing substances;
Measuring the response of the olfactory receptor polypeptide to the odor-causing agent; and
Identifying a test substance that suppresses the response of the olfactory receptor polypeptide based on the measured response;
Including methods.
＜２＞３−メルカプト−３−メチルヘキサノール臭抑制剤の探索方法であって、以下：
ＯＲ１Ａ１、ＯＲ２Ｗ１、ＯＲ２Ｊ３、及びこれらとアミノ酸配列において少なくとも８０％の同一性を有するポリペプチドからなる群より選択される少なくとも１種の嗅覚受容体ポリペプチドに、試験物質及び３−メルカプト−３−メチルヘキサノール（ここで、該３−メルカプト−３−メチルヘキサノールは、（Ｒ）−３−メルカプト−３−メチルヘキサノール、（Ｓ）−３−メルカプト−３−メチルヘキサノール、又はそれらの混合物である）を添加すること；
該３−メルカプト−３−メチルヘキサノールに対する該嗅覚受容体ポリペプチドの応答を測定すること；及び、
測定された応答に基づいて該嗅覚受容体ポリペプチドの応答を抑制する試験物質を同定すること、
を含む方法。
<2> A method for searching for 3-mercapto-3-methylhexanol odor inhibitor, which is as follows:
At least one olfactory receptor polypeptide selected from the group consisting of OR1A1, OR2W1, OR2J3, and a polypeptide having at least 80% identity in amino acid sequence with the test substance and 3-mercapto-3-methyl Hexanol (wherein the 3-mercapto-3-methylhexanol is (R) -3-mercapto-3-methylhexanol, (S) -3-mercapto-3-methylhexanol, or a mixture thereof). Adding;
Measuring the response of the olfactory receptor polypeptide to the 3-mercapto-3-methylhexanol; and
Identifying a test substance that suppresses the response of the olfactory receptor polypeptide based on the measured response;
Including methods.
＜３＞３−ヒドロキシ−３−メチルヘキサン酸臭抑制剤の探索方法であって、以下：
ＯＲ１０Ａ６及びこれとアミノ酸配列において少なくとも８０％の同一性を有するポリペプチドからなる群より選択される少なくとも１種の嗅覚受容体ポリペプチドに、試験物質及び３−ヒドロキシ−３−メチルヘキサン酸を添加すること；
３−ヒドロキシ−３−メチルヘキサン酸に対する該嗅覚受容体ポリペプチドの応答を測定すること；及び、
測定された応答に基づいて該嗅覚受容体ポリペプチドの応答を抑制する試験物質を同定すること、
を含む方法。
<3> A method for searching for a 3-hydroxy-3-methylhexanoic acid odor inhibitor, comprising:
A test substance and 3-hydroxy-3-methylhexanoic acid are added to OR10A6 and at least one olfactory receptor polypeptide selected from the group consisting of polypeptides having at least 80% identity in amino acid sequence with OR10A6 about;
Measuring the response of the olfactory receptor polypeptide to 3-hydroxy-3-methylhexanoic acid; and
Identifying a test substance that suppresses the response of the olfactory receptor polypeptide based on the measured response;
Including methods.
＜４＞３−メチル−２−ヘキセン酸臭抑制剤の探索方法であって、以下：
ＯＲ１Ａ１、ＯＲ２Ｗ１、ＯＲ１０Ａ６、ＯＲ５１Ｂ２、ＯＲ５１Ｅ１、ＯＲ５１Ｉ２、及びこれらとアミノ酸配列において少なくとも８０％の同一性を有するポリペプチドからなる群より選択される少なくとも１種の嗅覚受容体ポリペプチドに、試験物質及び３−メチル−２−ヘキセン酸を添加すること；
３−メチル−２−ヘキセン酸に対する該嗅覚受容体ポリペプチドの応答を測定すること；及び、
測定された応答に基づいて該嗅覚受容体ポリペプチドの応答を抑制する試験物質を同定すること、
を含む方法。
<4> A method for searching for a 3-methyl-2-hexenoic acid odor inhibitor, which is as follows:
At least one olfactory receptor polypeptide selected from the group consisting of OR1A1, OR2W1, OR10A6, OR51B2, OR51E1, OR51I2 and a polypeptide having at least 80% identity in amino acid sequence with the test substance and 3 -Adding methyl-2-hexenoic acid;
Measuring the response of the olfactory receptor polypeptide to 3-methyl-2-hexenoic acid; and
Identifying a test substance that suppresses the response of the olfactory receptor polypeptide based on the measured response;
Including methods.
＜５＞上記＜１＞記載の方法であって、好ましくは、上記腋臭原因物質が、（Ｒ）−３−メルカプト−３−メチルヘキサノール、（Ｓ）−３−メルカプト−３−メチルヘキサノール、それらの混合物、３−ヒドロキシ−３−メチルヘキサン酸、及び３−メチル−２−ヘキセン酸からなる群より選択される少なくとも１種である、方法。 <5> The method according to <1> above, wherein preferably the odor causing substance is (R) -3-mercapto-3-methylhexanol, (S) -3-mercapto-3-methylhexanol, or A method of at least one selected from the group consisting of 3-hydroxy-3-methylhexanoic acid and 3-methyl-2-hexenoic acid.
＜６＞上記＜１＞〜＜５＞のいずれか１に記載の方法であって、好ましくは、
上記ＯＲ１Ａ１が配列番号２で示されるアミノ酸配列からなるタンパク質であり、
上記ＯＲ２Ｗ１が配列番号４で示されるアミノ酸配列からなるタンパク質であり、
上記ＯＲ２Ｊ３が配列番号６で示されるアミノ酸配列からなるタンパク質であり、
上記ＯＲ１０Ａ６が配列番号８で示されるアミノ酸配列からなるタンパク質であり、
上記ＯＲ５１Ｂ２が配列番号１０で示されるアミノ酸配列からなるタンパク質であり、
上記ＯＲ５１Ｅ１が配列番号１２で示されるアミノ酸配列からなるタンパク質であり、
上記ＯＲ５１Ｉ２が配列番号１４で示されるアミノ酸配列からなるタンパク質である、方法。
<6> The method according to any one of <1> to <5> above, preferably
OR1A1 is a protein consisting of the amino acid sequence represented by SEQ ID NO: 2,
The OR2W1 is a protein consisting of the amino acid sequence represented by SEQ ID NO: 4,
OR2J3 is a protein consisting of the amino acid sequence represented by SEQ ID NO: 6,
The OR10A6 is a protein consisting of the amino acid sequence represented by SEQ ID NO: 8,
The OR51B2 is a protein consisting of the amino acid sequence represented by SEQ ID NO: 10,
The OR51E1 is a protein consisting of the amino acid sequence represented by SEQ ID NO: 12,
The method, wherein the OR51I2 is a protein consisting of the amino acid sequence represented by SEQ ID NO: 14.
＜７＞上記＜１＞〜＜６＞のいずれか１に記載の方法であって、
上記ＯＲ１Ａ１とアミノ酸配列において少なくとも８０％の同一性を有するポリペプチドが、配列番号２で示されるアミノ酸配列と、好ましくは８０％以上、より好ましくは８５％以上、さらに好ましくは９０％以上、さらにより好ましくは９５％以上、なお好ましくは９８％以上、なおより好ましくは９９％以上の同一性を有するアミノ酸配列からなり、かつ好ましくは３−メルカプト−３−メチルヘキサノール又は３−メチル−２−ヘキセン酸に応答性を有するポリペプチドであり、
上記ＯＲ２Ｗ１とアミノ酸配列において少なくとも８０％の同一性を有するポリペプチドが、配列番号４で示されるアミノ酸配列と、好ましくは８０％以上、より好ましくは８５％以上、さらに好ましくは９０％以上、さらにより好ましくは９５％以上、なお好ましくは９８％以上、なおより好ましくは９９％以上の同一性を有するアミノ酸配列からなり、かつ好ましくは３−メルカプト−３−メチルヘキサノール又は３−メチル−２−ヘキセン酸に応答性を有するポリペプチドであり、
上記ＯＲ２Ｊ３とアミノ酸配列において少なくとも８０％の同一性を有するポリペプチドが、配列番号６で示されるアミノ酸配列と、好ましくは８０％以上、より好ましくは８５％以上、さらに好ましくは９０％以上、さらにより好ましくは９５％以上、なお好ましくは９８％以上、なおより好ましくは９９％以上の同一性を有するアミノ酸配列からなり、かつ好ましくは（Ｓ）−３−メルカプト−３−メチルヘキサノールに応答性を有するポリペプチドであり、
上記ＯＲ１０Ａ６とアミノ酸配列において少なくとも８０％の同一性を有するポリペプチドが、配列番号８で示されるアミノ酸配列と、好ましくは８０％以上、より好ましくは８５％以上、さらに好ましくは９０％以上、さらにより好ましくは９５％以上、なお好ましくは９８％以上、なおより好ましくは９９％以上の同一性を有するアミノ酸配列からなり、かつ好ましくは３−ヒドロキシ−３−メチルヘキサン酸又は３−メチル−２−ヘキセン酸に応答性を有するポリペプチドであり、
上記ＯＲ５１Ｂ２とアミノ酸配列において少なくとも８０％の同一性を有するポリペプチドが、配列番号１０で示されるアミノ酸配列と、好ましくは８０％以上、より好ましくは８５％以上、さらに好ましくは９０％以上、さらにより好ましくは９５％以上、なお好ましくは９８％以上、なおより好ましくは９９％以上の同一性を有するアミノ酸配列からなり、かつ好ましくは３−メチル−２−ヘキセン酸に応答性を有するポリペプチドであり、
上記ＯＲ５１Ｅ１とアミノ酸配列において少なくとも８０％の同一性を有するポリペプチドが、配列番号１２で示されるアミノ酸配列と、好ましくは８０％以上、より好ましくは８５％以上、さらに好ましくは９０％以上、さらにより好ましくは９５％以上、なお好ましくは９８％以上、なおより好ましくは９９％以上の同一性を有するアミノ酸配列からなり、かつ好ましくは３−メチル−２−ヘキセン酸に応答性を有するポリペプチドであり、
上記ＯＲ５１Ｉ２とアミノ酸配列において少なくとも８０％の同一性を有するポリペプチドが、配列番号１４で示されるアミノ酸配列と、好ましくは８０％以上、より好ましくは８５％以上、さらに好ましくは９０％以上、さらにより好ましくは９５％以上、なお好ましくは９８％以上、なおより好ましくは９９％以上の同一性を有するアミノ酸配列からなり、かつ好ましくは３−メチル−２−ヘキセン酸に応答性を有するポリペプチドである、
方法。
<7> The method according to any one of <1> to <6> above,
A polypeptide having at least 80% identity in amino acid sequence with the OR1A1 is preferably 80% or more, more preferably 85% or more, still more preferably 90% or more, even more, with the amino acid sequence represented by SEQ ID NO: 2. Preferably consisting of an amino acid sequence having an identity of 95% or more, more preferably 98% or more, even more preferably 99% or more, and preferably 3-mercapto-3-methylhexanol or 3-methyl-2-hexenoic acid A polypeptide responsive to
The polypeptide having at least 80% identity in the amino acid sequence with OR2W1 is preferably 80% or more, more preferably 85% or more, still more preferably 90% or more, even more, with the amino acid sequence represented by SEQ ID NO: 4. Preferably consisting of an amino acid sequence having an identity of 95% or more, more preferably 98% or more, even more preferably 99% or more, and preferably 3-mercapto-3-methylhexanol or 3-methyl-2-hexenoic acid A polypeptide responsive to
The polypeptide having at least 80% identity in the amino acid sequence with OR2J3 is preferably 80% or more, more preferably 85% or more, still more preferably 90% or more, even more, with the amino acid sequence represented by SEQ ID NO: 6. Preferably consists of amino acid sequences with 95% or more, more preferably 98% or more, even more preferably 99% or more, and preferably responsiveness to (S) -3-mercapto-3-methylhexanol A polypeptide,
A polypeptide having at least 80% identity in amino acid sequence with the OR10A6 is preferably 80% or more, more preferably 85% or more, still more preferably 90% or more, even more, with the amino acid sequence represented by SEQ ID NO: 8 Preferably 95% or more, more preferably 98% or more, still more preferably 99% or more of the amino acid sequence, and preferably 3-hydroxy-3-methylhexanoic acid or 3-methyl-2-hexene A polypeptide responsive to an acid;
The polypeptide having at least 80% identity in the amino acid sequence with OR51B2 is preferably 80% or more, more preferably 85% or more, still more preferably 90% or more, even more, with the amino acid sequence represented by SEQ ID NO: 10. Preferably, it is a polypeptide comprising an amino acid sequence having an identity of 95% or more, more preferably 98% or more, still more preferably 99% or more, and preferably responsive to 3-methyl-2-hexenoic acid ,
The polypeptide having at least 80% identity in the amino acid sequence with OR51E1 is preferably 80% or more, more preferably 85% or more, still more preferably 90% or more, more preferably the amino acid sequence represented by SEQ ID NO: 12. Preferably, it is a polypeptide comprising an amino acid sequence having an identity of 95% or more, more preferably 98% or more, still more preferably 99% or more, and preferably responsive to 3-methyl-2-hexenoic acid ,
The polypeptide having at least 80% identity in amino acid sequence with the OR51I2 is preferably 80% or more, more preferably 85% or more, still more preferably 90% or more, even more, with the amino acid sequence represented by SEQ ID NO: 14. Preferably, it is a polypeptide comprising an amino acid sequence having 95% or more, more preferably 98% or more, and even more preferably 99% or more identity, and preferably responsive to 3-methyl-2-hexenoic acid ,
Method.
＜８＞上記＜１＞〜＜７＞のいずれか１に記載の方法であって、上記腋臭原因物質が３−メルカプト−３−メチルヘキサノールであるか又はそれを含む場合、上記ＯＲ１Ａ１、ＯＲ２Ｗ１、ＯＲ２Ｊ３、ＯＲ１０Ａ６、ＯＲ５１Ｂ２、ＯＲ５１Ｅ１、ＯＲ５１Ｉ２、及びこれらとアミノ酸配列において少なくとも８０％の同一性を有するポリペプチドからなる群より選択される少なくとも１種の嗅覚受容体ポリペプチドが、
好ましくは、ＯＲ１Ａ１又はこれとアミノ酸配列において少なくとも８０％の同一性を有するポリペプチド、ＯＲ２Ｗ１又はこれとアミノ酸配列において少なくとも８０％の同一性を有するポリペプチド、及びＯＲ２Ｊ３又はこれとアミノ酸配列において少なくとも８０％の同一性を有するポリペプチドからなる群より選択される少なくとも１種であり、
より好ましくは、ＯＲ１Ａ１又はこれとアミノ酸配列において少なくとも８０％の同一性を有するポリペプチド、及びＯＲ２Ｗ１又はこれとアミノ酸配列において少なくとも８０％の同一性を有するポリペプチドのいずれか又は両方であり、
さらに好ましくは、ＯＲ１Ａ１又はこれとアミノ酸配列において少なくとも８０％の同一性を有するポリペプチド、ＯＲ２Ｗ１又はこれとアミノ酸配列において少なくとも８０％の同一性を有するポリペプチド、及びＯＲ２Ｊ３又はこれとアミノ酸配列において少なくとも８０％の同一性を有するポリペプチドの組み合わせであり、
なお好ましくは、ＯＲ１Ａ１、ＯＲ２Ｗ１及びＯＲ２Ｊ３の組み合わせである、
方法。
<8> The method according to any one of <1> to <7> above, wherein the odor-causing substance is 3-mercapto-3-methylhexanol or includes the OR1A1, OR2W1, At least one olfactory receptor polypeptide selected from the group consisting of OR2J3, OR10A6, OR51B2, OR51E1, OR51I2, and a polypeptide having at least 80% identity in amino acid sequence thereto,
Preferably, OR1A1 or a polypeptide having at least 80% identity in amino acid sequence with OR1A1, a polypeptide having at least 80% identity in amino acid sequence with OR2W1, and at least 80% in amino acid sequence with OR2J3 or this Is at least one selected from the group consisting of polypeptides having the same identity
More preferably, it is either or both of OR1A1 or a polypeptide having at least 80% identity in amino acid sequence with OR1W1, and a polypeptide having at least 80% identity in amino acid sequence with OR2W1.
More preferably, OR1A1 or a polypeptide having at least 80% identity in amino acid sequence with OR1A1, a polypeptide having at least 80% identity in amino acid sequence with OR2W1, and OR2J3 or at least 80 in amino acid sequence with OR2J3 A combination of polypeptides having% identity,
Preferably, it is a combination of OR1A1, OR2W1, and OR2J3.
Method.
＜９＞上記＜１＞〜＜７＞のいずれか１に記載の方法であって、上記腋臭原因物質が３−ヒドロキシ−３−メチルヘキサン酸であるか又はそれを含む場合、上記ＯＲ１Ａ１、ＯＲ２Ｗ１、ＯＲ２Ｊ３、ＯＲ１０Ａ６、ＯＲ５１Ｂ２、ＯＲ５１Ｅ１、ＯＲ５１Ｉ２、及びこれらとアミノ酸配列において少なくとも８０％の同一性を有するポリペプチドからなる群より選択される少なくとも１種の嗅覚受容体ポリペプチドが、
好ましくは、ＯＲ１０Ａ６及び／又はこれとアミノ酸配列において少なくとも８０％の同一性を有するポリペプチドであり、
より好ましくはＯＲ１０Ａ６である、
方法。
<9> The method according to any one of <1> to <7> above, wherein the odor-causing substance is 3-hydroxy-3-methylhexanoic acid or contains the same, OR1A1, OR2W1 OR2J3, OR10A6, OR51B2, OR51E1, OR51I2, and at least one olfactory receptor polypeptide selected from the group consisting of polypeptides having at least 80% identity in amino acid sequence,
Preferably, it is OR10A6 and / or a polypeptide having at least 80% identity in amino acid sequence with this,
More preferably, it is OR10A6.
Method.
＜１０＞上記＜１＞〜＜７＞のいずれか１に記載の方法であって、上記腋臭原因物質が３−メチル−２−ヘキセン酸であるか又はそれを含む場合、上記ＯＲ１Ａ１、ＯＲ２Ｗ１、ＯＲ２Ｊ３、ＯＲ１０Ａ６、ＯＲ５１Ｂ２、ＯＲ５１Ｅ１、ＯＲ５１Ｉ２、及びこれらとアミノ酸配列において少なくとも８０％の同一性を有するポリペプチドからなる群より選択される少なくとも１種の嗅覚受容体ポリペプチドが、
好ましくは、ＯＲ１Ａ１又はこれとアミノ酸配列において少なくとも８０％の同一性を有するポリペプチド、ＯＲ２Ｗ１又はこれとアミノ酸配列において少なくとも８０％の同一性を有するポリペプチド、ＯＲ１０Ａ６又はこれとアミノ酸配列において少なくとも８０％の同一性を有するポリペプチド、ＯＲ５１Ｂ２又はこれとアミノ酸配列において少なくとも８０％の同一性を有するポリペプチド、ＯＲ５１Ｅ１又はこれとアミノ酸配列において少なくとも８０％の同一性を有するポリペプチド、及びＯＲ５１Ｉ２又はこれとアミノ酸配列において少なくとも８０％の同一性を有するポリペプチドからなる群より選択される少なくとも１種であり、
より好ましくは、ＯＲ１Ａ１又はこれとアミノ酸配列において少なくとも８０％の同一性を有するポリペプチド、ＯＲ２Ｗ１又はこれとアミノ酸配列において少なくとも８０％の同一性を有するポリペプチド、ＯＲ１０Ａ６又はこれとアミノ酸配列において少なくとも８０％の同一性を有するポリペプチド、ＯＲ５１Ｂ２又はこれとアミノ酸配列において少なくとも８０％の同一性を有するポリペプチド、及びＯＲ５１Ｅ１又はこれとアミノ酸配列において少なくとも８０％の同一性を有するポリペプチドからなる群より選択される少なくとも１種であり、
さらに好ましくは、ＯＲ１Ａ１又はこれとアミノ酸配列において少なくとも８０％の同一性を有するポリペプチド、ＯＲ２Ｗ１又はこれとアミノ酸配列において少なくとも８０％の同一性を有するポリペプチド、ＯＲ１０Ａ６又はこれとアミノ酸配列において少なくとも８０％の同一性を有するポリペプチド、ＯＲ５１Ｂ２又はこれとアミノ酸配列において少なくとも８０％の同一性を有するポリペプチド、及びＯＲ５１Ｅ１又はこれとアミノ酸配列において少なくとも８０％の同一性を有するポリペプチドの組み合わせであり、
なお好ましくは、ＯＲ１Ａ１、ＯＲ２Ｗ１、ＯＲ１０Ａ６、ＯＲ５１Ｂ２、及びＯＲ５１Ｅ１の組み合わせである、
方法。
<10> The method according to any one of <1> to <7> above, wherein the odor-causing substance is 3-methyl-2-hexenoic acid or contains it, the OR1A1, OR2W1, At least one olfactory receptor polypeptide selected from the group consisting of OR2J3, OR10A6, OR51B2, OR51E1, OR51I2, and a polypeptide having at least 80% identity in amino acid sequence thereto,
Preferably, OR1A1 or a polypeptide having at least 80% identity in amino acid sequence with OR1A1, or a polypeptide having at least 80% identity in amino acid sequence with OR2W1, OR10A6 or at least 80% in amino acid sequence with this Polypeptide having identity, OR51B2 or polypeptide having at least 80% identity in amino acid sequence, OR51E1 or polypeptide having at least 80% identity in amino acid sequence, and OR51I2 or amino acid sequence thereof At least one selected from the group consisting of polypeptides having at least 80% identity in
More preferably, OR1A1 or a polypeptide having at least 80% identity in the amino acid sequence thereof, OR2W1 or polypeptide having at least 80% identity in the amino acid sequence, OR10A6 or at least 80% in amino acid sequence thereof Selected from the group consisting of OR51B2 or a polypeptide having at least 80% identity in amino acid sequence, and OR51E1 or a polypeptide having at least 80% identity in amino acid sequence with OR51B2. At least one kind,
More preferably, OR1A1 or a polypeptide having at least 80% identity in the amino acid sequence thereof, OR2W1 or a polypeptide having at least 80% identity in the amino acid sequence, OR10A6 or at least 80% in amino acid sequence thereof A polypeptide having at least 80% identity in the amino acid sequence with OR51B2, or a polypeptide having at least 80% identity in the amino acid sequence with OR51E1, or
Preferably, it is a combination of OR1A1, OR2W1, OR10A6, OR51B2, and OR51E1.
Method.
＜１１＞上記＜１＞〜＜１０＞のいずれか１に記載の方法であって、
好ましくは、対照群における上記腋臭原因物質に対する応答を測定することをさらに含み、かつ該対照群が、以下：
上記試験物質を添加しなかった上記嗅覚受容体ポリペプチド；
対照物質を添加した上記嗅覚受容体ポリペプチド；又は
上記試験物質添加前の上記嗅覚受容体ポリペプチド
である、方法。
<11> The method according to any one of <1> to <10> above,
Preferably, the method further comprises measuring a response to the odor-causing substance in the control group, and the control group includes the following:
The olfactory receptor polypeptide to which the test substance has not been added;
The olfactory receptor polypeptide to which a control substance is added; or the olfactory receptor polypeptide before the addition of the test substance.
＜１２＞上記＜１１＞記載の方法であって、好ましくは、
上記試験物質を添加した上記嗅覚受容体ポリペプチドの上記腋臭原因物質に対する応答が、上記対照群における該腋臭原因物質に対する応答と比べて統計学的に有意に抑制されていた場合に、該試験物質を該腋臭原因物質に対する該嗅覚受容体ポリペプチドの応答を抑制する物質として同定すること、
をさらに含む、方法。
<12> The method according to <11> above, preferably
When the response of the olfactory receptor polypeptide to which the test substance is added to the odor causing substance in the control group is statistically significantly suppressed as compared to the response to the odor causing substance in the control group, the test substance Identifying as a substance that suppresses the response of the olfactory receptor polypeptide to the odor-causing substance,
Further comprising a method.
＜１３＞上記＜１１＞記載の方法であって、好ましくは、
上記試験物質を添加した上記嗅覚受容体ポリペプチドの上記腋臭原因物質に対する応答が、上記対照群における該腋臭原因物質に対する応答に対して好ましくは６０％以下、より好ましくは５０％以下、さらに好ましくは２５％以下に抑制されていた場合に、該試験物質を該腋臭原因物質に対する該嗅覚受容体ポリペプチドの応答を抑制する物質として同定すること、
をさらに含む、方法。
<13> The method according to <11> above, preferably
The response of the olfactory receptor polypeptide to which the test substance is added to the odor-causing substance in the control group is preferably 60% or less, more preferably 50% or less, more preferably, to the response to the odor-causing substance in the control group. Identifying the test substance as a substance that suppresses the response of the olfactory receptor polypeptide to the odor-causing substance when it is suppressed to 25% or less;
Further comprising a method.
＜１４＞上記＜１＞、＜５＞〜＜１３＞のいずれか１に記載の方法であって、好ましくは、上記嗅覚受容体ポリペプチドの上記腋臭原因物質に対する応答を抑制する試験物質を、腋臭抑制剤として選択することをさらに含む、方法。 <14> The method according to any one of <1> and <5> to <13>, preferably a test substance that suppresses a response of the olfactory receptor polypeptide to the odor causing substance, The method further comprising selecting as a foul odor suppressor.
＜１５＞上記＜２＞、＜６＞〜＜１３＞のいずれか１に記載の方法であって、好ましくは、上記嗅覚受容体ポリペプチドの３−メルカプト−３−メチルヘキサノールに対する応答を抑制する試験物質を、３−メルカプト−３−メチルヘキサノール臭抑制剤として選択することをさらに含む、方法。 <15> The method according to any one of <2> and <6> to <13>, preferably suppressing a response of the olfactory receptor polypeptide to 3-mercapto-3-methylhexanol. The method further comprising selecting the test substance as a 3-mercapto-3-methylhexanol odor inhibitor.
＜１６＞上記＜３＞、＜６＞〜＜１３＞のいずれか１に記載の方法であって、好ましくは、上記嗅覚受容体ポリペプチドの３−ヒドロキシ−３−メチルヘキサン酸に対する応答を抑制する試験物質を、３−ヒドロキシ−３−メチルヘキサン酸臭抑制剤として選択することをさらに含む、方法。 <16> The method according to any one of <3> and <6> to <13>, wherein the response of the olfactory receptor polypeptide to 3-hydroxy-3-methylhexanoic acid is preferably suppressed. The method further comprises selecting a test substance to be selected as a 3-hydroxy-3-methylhexanoic acid odor inhibitor.
＜１７＞上記＜４＞、＜６＞〜＜１３＞のいずれか１に記載の方法であって、好ましくは、上記嗅覚受容体ポリペプチドの３−メチル−２−ヘキセン酸に対する応答を抑制する試験物質を、３−メチル−２−ヘキセン酸臭抑制剤として選択することをさらに含む、方法。 <17> The method according to any one of <4> and <6> to <13>, wherein the response of the olfactory receptor polypeptide to 3-methyl-2-hexenoic acid is preferably suppressed. The method further comprising selecting the test substance as a 3-methyl-2-hexenoic acid odor inhibitor.
＜１８＞上記＜１＞〜＜１７＞のいずれか１に記載の方法であって、
好ましくは、上記ＯＲ１Ａ１、ＯＲ２Ｗ１、ＯＲ２Ｊ３、ＯＲ１０Ａ６、ＯＲ５１Ｂ２、ＯＲ５１Ｅ１、ＯＲ５１Ｉ２、及びこれらとアミノ酸配列において少なくとも８０％の同一性を有するポリペプチドからなる群より選択される少なくとも１種の嗅覚受容体ポリペプチドが、該嗅覚受容体ポリペプチドを発現するように遺伝的に操作された組換え細胞上に発現されている、
方法。
<18> The method according to any one of <1> to <17> above,
Preferably, at least one olfactory receptor polypeptide selected from the group consisting of OR1A1, OR2W1, OR2J3, OR10A6, OR51B2, OR51E1, OR51I2, and a polypeptide having at least 80% identity in amino acid sequence with these. Is expressed on a recombinant cell that has been genetically engineered to express the olfactory receptor polypeptide,
Method.
＜１９＞上記＜１８＞記載の方法であって、上記組換え細胞が、
好ましくは、上記嗅覚受容体ポリペプチドをコードする遺伝子と、ＲＴＰ１Ｓをコードする遺伝子とを導入された細胞であり、
より好ましくは、上記嗅覚受容体ポリペプチドをコードする遺伝子と、配列番号１６で示されるアミノ酸配列からなるヒトＲＴＰ１Ｓをコードする遺伝子とを導入された細胞である、
方法。
<19> The method according to <18> above, wherein the recombinant cell is
Preferably, a cell into which a gene encoding the olfactory receptor polypeptide and a gene encoding RTP1S are introduced,
More preferably, a cell into which a gene encoding the olfactory receptor polypeptide and a gene encoding human RTP1S consisting of the amino acid sequence represented by SEQ ID NO: 16 have been introduced.
Method.
＜２０＞上記＜１＞〜＜１７＞のいずれか１に記載の方法であって、
好ましくは、上記ＯＲ１Ａ１、ＯＲ２Ｗ１、ＯＲ２Ｊ３、ＯＲ１０Ａ６、ＯＲ５１Ｂ２、ＯＲ５１Ｅ１、ＯＲ５１Ｉ２、及びこれらとアミノ酸配列において少なくとも８０％の同一性を有するポリペプチドからなる群より選択される少なくとも１種の嗅覚受容体ポリペプチドとして、上記＜１８＞又は＜１９＞記載の組換え細胞又はその培養物が使用される、
方法。
<20> The method according to any one of <1> to <17> above,
Preferably, at least one olfactory receptor polypeptide selected from the group consisting of OR1A1, OR2W1, OR2J3, OR10A6, OR51B2, OR51E1, OR51I2, and a polypeptide having at least 80% identity in amino acid sequence with these. As described above, the recombinant cell according to <18> or <19> or a culture thereof is used.
Method.
＜２１＞上記＜１＞〜＜２０＞のいずれか１に記載の方法であって、
好ましくは、上記嗅覚受容体ポリペプチドの応答の測定が、ＥＬＩＳＡ若しくはレポータージーンアッセイによる細胞内ｃＡＭＰ量測定、又はカルシウムイメージングによる測定である、方法。
<21> The method according to any one of <1> to <20> above,
Preferably, the measurement of the response of the olfactory receptor polypeptide is measurement of intracellular cAMP amount by ELISA or reporter gene assay, or measurement by calcium imaging.
以下、実施例を示し、本発明をより具体的に説明する。 EXAMPLES Hereinafter, an Example is shown and this invention is demonstrated more concretely.
実施例１ 腋臭原因物質に応答する嗅覚受容体の同定
１）ヒト嗅覚受容体遺伝子のクローニング
ヒト嗅覚受容体はＧｅｎＢａｎｋに登録されている配列情報を基に、ｈｕｍａｎ ｇｅｎｏｍｉｃ ＤＮＡ ｆｅｍａｌｅ（Ｇ１５２１：Ｐｒｏｍｅｇａ）を鋳型としたＰＣＲ法によりクローニングした。ＰＣＲ法により増幅した各遺伝子をｐＥＮＴＲベクター（Ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎ）にマニュアルに従って組み込み、ｐＥＮＴＲベクター上に存在するＮｏｔＩ、ＡｓｃＩサイトを利用して、ｐＭＥ１８Ｓベクター上のＦｌａｇ−Ｒｈｏタグ配列の下流に作製したＮｏｔＩ、ＡｓｃＩサイトへと組換えた。
Example 1 Identification of Olfactory Receptor Responding to odor-causing Substance 1) Cloning of Human Olfactory Receptor Gene Human olfactory receptor is a human genomic DNA female (G1521: Promega) based on sequence information registered in GenBank. Cloning was performed by PCR using a template. Each gene amplified by the PCR method is incorporated into a pENTR vector (Invitrogen) according to the manual, and NotI and AscI prepared downstream of the Flag-Rho tag sequence on the pME18S vector using the NotI and AscI sites present on the pENTR vector. Recomposed to the site.
２）ｐＭＥ１８Ｓ−ヒトＲＴＰ１Ｓベクターの作製
ＲＴＰ１Ｓ（配列番号１６）をコードするＲＴＰ１Ｓ遺伝子（配列番号１５）をｐＭＥ１８ＳベクターのＥｃｏＲＩ、ＸｈｏＩサイトへ組み込んだ。
2) Preparation of pME18S-human RTP1S vector The RTP1S gene (SEQ ID NO: 15) encoding RTP1S (SEQ ID NO: 16) was incorporated into the EcoRI and XhoI sites of the pME18S vector.
３）嗅覚受容体発現細胞の作製
ヒト嗅覚受容体４１７種をそれぞれ発現させたＨＥＫ２９３細胞を作製した。表１に示す組成の反応液を調製しクリーンベンチ内で１５分静置した後、９６ウェルプレート（ＢＤ）の各ウェルに添加した。次いで、ＨＥＫ２９３細胞（３×１０5細胞／ｃｍ2）を１００μＬずつ各ウェルに播種し、３７℃、５％ＣＯ2を保持したインキュベータ内で２４時間培養した。
3) Preparation of olfactory receptor-expressing cells HEK293 cells each expressing 417 types of human olfactory receptors were prepared. A reaction solution having the composition shown in Table 1 was prepared and allowed to stand in a clean bench for 15 minutes, and then added to each well of a 96-well plate (BD). Next, 100 μL of HEK293 cells (3 × 10 5 cells / cm 2 ) were seeded in each well and cultured in an incubator maintained at 37 ° C. and 5% CO 2 for 24 hours.
４）ルシフェラーゼアッセイ
ＨＥＫ２９３細胞に発現させた嗅覚受容体は、細胞内在性のＧαｓと共役しアデニル酸シクラーゼを活性化することで、細胞内ｃＡＭＰ量を増加させる。本研究での匂い応答測定には、細胞内ｃＡＭＰ量の増加をホタルルシフェラーゼ遺伝子（ｆｌｕｃ２Ｐ−ＣＲＥ−ｈｙｇｒｏ）由来の発光値としてモニターするルシフェラーゼレポータージーンアッセイを用いた。また、ＣＭＶプロモータ下流にウミシイタケルシフェラーゼ遺伝子を融合させたもの（ｈＲｌｕｃ−ＣＭＶ）を同時に遺伝子導入し、遺伝子導入効率や細胞数の誤差を補正する内部標準として用いた。
上記３）で作製した培養物から、培地を取り除き、ＣＤ２９３培地（Ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎ）で調製した匂い物質（（Ｒ）若しくは（Ｓ）−３−メルカプト−３−メチルヘキサノール３００μＭ、３−ヒドロキシ−３−メチルヘキサン酸３ｍＭ、又は３−メチル−２−ヘキセン酸３ｍＭ）を含む溶液を７５μＬ添加した。細胞をＣＯ2インキュベータ内で２．５時間培養し、ルシフェラーゼ遺伝子を細胞内で十分に発現させた。ルシフェラーゼの活性測定には、Ｄｕａｌ−ＧｌｏTMｌｕｃｉｆｅｒａｓｅ ａｓｓａｙ ｓｙｓｔｅｍ（Ｐｒｏｍｅｇａ）を用い、製品の操作マニュアルに従って測定を行った。匂い物質刺激により誘導されたホタルルシフェラーゼ由来の発光値を、匂い物質刺激を行わない細胞での発光値で割った値をｆｏｌｄ ｉｎｃｒｅａｓｅとして算出し、応答強度の指標とした。
4) Luciferase assay The olfactory receptor expressed in HEK293 cells increases the amount of intracellular cAMP by coupling with intracellular Gαs and activating adenylate cyclase. For the measurement of odor response in this study, a luciferase reporter gene assay was used which monitors the increase in intracellular cAMP level as a luminescence value derived from the firefly luciferase gene (fluc2P-CRE-hygro). In addition, a renilla luciferase gene fused to the downstream of the CMV promoter (hRluc-CMV) was introduced at the same time, and used as an internal standard for correcting errors in gene transfer efficiency and cell number.
From the culture prepared in 3) above, the medium was removed and the odorant ((R) or (S) -3-mercapto-3-methylhexanol 300 μM, 3-hydroxy-3-methyl prepared in CD293 medium (Invitrogen). 75 μL of a solution containing 3 mM hexanoic acid or 3 mM 3-methyl-2-hexenoic acid was added. The cells were cultured for 2.5 hours in a CO 2 incubator to fully express the luciferase gene in the cells. Measuring the activity of luciferase, using the Dual-Glo TM luciferase assay system ( Promega), was measured in accordance with the product of the operation manual. A value obtained by dividing the luminescence value derived from firefly luciferase induced by odor substance stimulation by the luminescence value in cells not subjected to odor substance stimulation was calculated as a fold increase, and used as an index of response intensity.
５）結果
４１７種類の嗅覚受容体について（Ｒ）又は（Ｓ）−３−メルカプト−３−メチルヘキサノール３００μＭに対する応答を測定した結果、（Ｒ）体に対してはＯＲ１Ａ１及びＯＲ２Ｗ１が、（Ｓ）体に対してはＯＲ１Ａ１、ＯＲ２Ｗ１及びＯＲ２Ｊ３が応答を示した（図１）。ＯＲ１Ａ１、ＯＲ２Ｗ１及びＯＲ２Ｊ３の３−メルカプト−３−メチルヘキサノールに対する応答は、濃度依存的であった（図２）。ＯＲ１Ａ１、ＯＲ２Ｗ１及びＯＲ２Ｊ３は、これまで３−メルカプト−３−メチルヘキサノールに応答することが見出されていない、新規の３−メルカプト−３−メチルヘキサノール受容体である。
5) Results As a result of measuring the response to (R) or (S) -3-mercapto-3-methylhexanol 300 μM for 417 types of olfactory receptors, OR1A1 and OR2W1 are (S) for (R) body. For the body, OR1A1, OR2W1, and OR2J3 responded (FIG. 1). The response of OR1A1, OR2W1 and OR2J3 to 3-mercapto-3-methylhexanol was concentration dependent (FIG. 2). OR1A1, OR2W1 and OR2J3 are novel 3-mercapto-3-methylhexanol receptors that have not previously been found to respond to 3-mercapto-3-methylhexanol.
同様に、４１７種類の嗅覚受容体について３−ヒドロキシ−３−メチルヘキサン酸３ｍＭに対する応答を測定した結果、ＯＲ１０Ａ６が応答し、この応答は濃度依存的であった（図３、４）。ＯＲ１０Ａ６は、これまで３−ヒドロキシ−３−メチルヘキサン酸に応答することが見出されていない、新規の３−ヒドロキシ−３−メチルヘキサン酸受容体である。 Similarly, as a result of measuring responses to 3 mM 3-hydroxy-3-methylhexanoic acid for 417 types of olfactory receptors, OR10A6 responded, and this response was concentration-dependent (FIGS. 3 and 4). OR10A6 is a novel 3-hydroxy-3-methylhexanoic acid receptor that has not previously been found to respond to 3-hydroxy-3-methylhexanoic acid.
同様に、４１７種類の嗅覚受容体について３−メチル−２−ヘキセン酸３ｍＭに対する応答を測定した結果、ＯＲ１Ａ１、ＯＲ２Ｗ１、ＯＲ１０Ａ６、ＯＲ５１Ｂ２、ＯＲ５１Ｅ１、及びＯＲ５１Ｉ２が応答を示した（図５）。これらの嗅覚受容体の３−メチル−２−ヘキセン酸に対する応答は、濃度依存的であった（図６）。ＯＲ１Ａ１、ＯＲ２Ｗ１、ＯＲ１０Ａ６、ＯＲ５１Ｂ２、及びＯＲ５１Ｅ１は、これまで３−メチル−２−ヘキセン酸に応答することが見出されていない、新規の３−メチル−２−ヘキセン酸受容体である。 Similarly, as a result of measuring responses to 3 mM 3-methyl-2-hexenoic acid for 417 types of olfactory receptors, OR1A1, OR2W1, OR10A6, OR51B2, OR51E1, and OR51I2 showed responses (FIG. 5). The response of these olfactory receptors to 3-methyl-2-hexenoic acid was concentration-dependent (FIG. 6). OR1A1, OR2W1, OR10A6, OR51B2, and OR51E1 are novel 3-methyl-2-hexenoic acid receptors that have not previously been found to respond to 3-methyl-2-hexenoic acid.
Claims (7)
嗅覚受容体ポリペプチドに、試験物質及び腋臭原因物質を添加すること、
該腋臭原因物質に対する該嗅覚受容体ポリペプチドの応答を測定すること；及び、
測定された応答に基づいて該嗅覚受容体ポリペプチドの応答を抑制する試験物質を同定すること、
を含み、
該嗅覚受容体ポリペプチドが、ＯＲ１Ａ１、ＯＲ２Ｗ１、配列番号２で示されるアミノ酸配列と９０％以上の同一性を有するアミノ酸配列からなりかつ３−メルカプト−３−メチルヘキサノール又は３−メチル−２−ヘキセン酸に応答性を有するポリペプチド、及び配列番号４で示されるアミノ酸配列と９０％以上の同一性を有するアミノ酸配列からなりかつ３−メルカプト−３−メチルヘキサノール又は３−メチル−２−ヘキセン酸に応答性を有するポリペプチドからなる群より選択される少なくとも１種であって、かつ、該腋臭原因物質が３−メルカプト−３−メチルヘキサノール又は３−メチル−２−ヘキセン酸であるか；
該嗅覚受容体ポリペプチドが、ＯＲ２Ｊ３、及び配列番号６で示されるアミノ酸配列と９０％以上の同一性を有するアミノ酸配列からなりかつ（Ｓ）−３−メルカプト−３−メチルヘキサノールに応答性を有するポリペプチドからなる群より選択される少なくとも１種であって、かつ、該腋臭原因物質が（Ｓ）−３−メルカプト−３−メチルヘキサノールであるか；
該嗅覚受容体ポリペプチドが、ＯＲ１０Ａ６、及び配列番号８で示されるアミノ酸配列と９０％以上の同一性を有するアミノ酸配列からなりかつ３−ヒドロキシ−３−メチルヘキサン酸又は３−メチル−２−ヘキセン酸に応答性を有するポリペプチドからなる群より選択される少なくとも１種であって、かつ、該腋臭原因物質が３−ヒドロキシ−３−メチルヘキサン酸又は３−メチル−２−ヘキセン酸であるか；又は
該嗅覚受容体ポリペプチドが、ＯＲ５１Ｂ２、ＯＲ５１Ｅ１、配列番号１０で示されるアミノ酸配列と９０％以上の同一性を有するアミノ酸配列からなりかつ３−メチル−２−ヘキセン酸に応答性を有するポリペプチド、及び配列番号１２で示されるアミノ酸配列と９０％以上の同一性を有するアミノ酸配列からなりかつ３−メチル−２−ヘキセン酸に応答性を有するポリペプチドからなる群より選択される少なくとも１種であって、かつ、該腋臭原因物質が３−メチル−２−ヘキセン酸である、
方法。 A method for searching for odor control agents, which is as follows:
The olfactory receptor polypeptide, adding a test substance and underarm odor causative agent,
Measuring the response of the olfactory receptor polypeptide to the odor-causing agent; and
Identifying a test substance that suppresses the response of the olfactory receptor polypeptide based on the measured response;
Including
The olfactory receptor polypeptide comprises OR1A1, OR2W1, an amino acid sequence having 90% or more identity with the amino acid sequence represented by SEQ ID NO: 2, and 3-mercapto-3-methylhexanol or 3-methyl-2-hexene A polypeptide comprising an acid-responsive polypeptide, and an amino acid sequence having 90% or more identity with the amino acid sequence represented by SEQ ID NO: 4, and 3-mercapto-3-methylhexanol or 3-methyl-2-hexenoic acid Whether it is at least one selected from the group consisting of responsive polypeptides and the odor-causing substance is 3-mercapto-3-methylhexanol or 3-methyl-2-hexenoic acid;
The olfactory receptor polypeptide is composed of OR2J3 and an amino acid sequence having 90% or more identity with the amino acid sequence represented by SEQ ID NO: 6, and is responsive to (S) -3-mercapto-3-methylhexanol Is at least one selected from the group consisting of polypeptides and the odor-causing substance is (S) -3-mercapto-3-methylhexanol;
The olfactory receptor polypeptide comprises OR10A6 and an amino acid sequence having 90% or more identity with the amino acid sequence represented by SEQ ID NO: 8, and 3-hydroxy-3-methylhexanoic acid or 3-methyl-2-hexene Whether the odor causing substance is 3-hydroxy-3-methylhexanoic acid or 3-methyl-2-hexenoic acid, which is at least one selected from the group consisting of polypeptides responsive to acids Or
A polypeptide comprising the olfactory receptor polypeptide, OR51B2, OR51E1, an amino acid sequence having 90% or more identity with the amino acid sequence represented by SEQ ID NO: 10 and responsive to 3-methyl-2-hexenoic acid, And at least one selected from the group consisting of a polypeptide consisting of an amino acid sequence having 90% or more identity with the amino acid sequence shown in SEQ ID NO: 12 and responsive to 3-methyl-2-hexenoic acid. And the odor-causing substance is 3-methyl-2-hexenoic acid,
Method.
前記ＯＲ２Ｗ１が配列番号４で示されるアミノ酸配列からなるタンパク質であり、
前記ＯＲ２Ｊ３が配列番号６で示されるアミノ酸配列からなるタンパク質であり、
前記ＯＲ１０Ａ６が配列番号８で示されるアミノ酸配列からなるタンパク質であり、
前記ＯＲ５１Ｂ２が配列番号１０で示されるアミノ酸配列からなるタンパク質であり、
前記ＯＲ５１Ｅ１が配列番号１２で示されるアミノ酸配列からなるタンパク質である、
請求項１記載の方法。 OR1A1 is a protein consisting of the amino acid sequence represented by SEQ ID NO: 2,
OR2W1 is a protein consisting of the amino acid sequence represented by SEQ ID NO: 4,
OR2J3 is a protein consisting of the amino acid sequence represented by SEQ ID NO: 6,
OR10A6 is a protein consisting of the amino acid sequence represented by SEQ ID NO: 8,
The OR51B2 is a protein consisting of the amino acid sequence represented by SEQ ID NO: 10,
The OR51E1 is a protein consisting of the amino acid sequence represented by SEQ ID NO: 12,
The method of claim 1.
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