JP6371225B2 - 網膜変性の処置のための組成物及び方法 - Google Patents
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Description
本発明は、医学の分野、特に網膜変性、特に繊毛機能障害に関連する網膜変性の処置に関する。
網膜変性は、繊毛病、一次繊毛(ヒトの体において偏在的に発現されるオルガネラ)における欠損から生じる稀な遺伝的障害の群における非常に一般的な臨床的特徴である。光受容体細胞は、修飾された繊毛(効率的な光検出及び形質導入のために要求される2つの節間でのタンパク質輸送を許すタンパク質ハイウェイとして作用する、いわゆる結合繊毛)により結合された2つの節を伴い構築される。繊毛病は、従って、内節から外節へまた逆方向のタンパク質輸送に影響を及ぼし、網膜色素変性症を誘導する。発症は、通常、早期の幼児期の間であり、毎日の生活及び社会的統合に対する主要な影響を伴う、主要な視覚障害の早期発症に導く。
網膜繊毛病は、遺伝性疾患のクラスを表し、それにおいて、光受容体の結合繊毛は欠損している。遺伝的由来のこの欠損は、生合成的に活性な内節と光感受性の外節の間での効率的なタンパク質輸送を妨げる。この繊毛渋滞は、光受容体の内節におけるタンパク質蓄積に起因する小胞体(ER)ストレスを誘導することが報告されている(Lin et al., 2007; Yang et al., 2007)。ERストレスが協調応答経路を誘導する:アンフォールドタンパク質応答(UPR)(Griciuc et al., 2011; Walter and Ron, 2011)。UPRは、2つのバランスの取れた応答(保護応答及びアポトーシス応答)の活性化により、タンパク質フォールディングストレスを検出及び管理する。
世界中で網膜色素変性症(RP)は、遺伝的に決定された失明の最もよく見られる原因である。バルデ・ビードル症候群(BBS、OMIM290900)は、光受容細胞喪失に起因する症候性RPを含む遺伝性疾患である。BBSは、RPの早期発症、多指症、肥満、腎機能障害、性機能低下、及び認知障害により特徴付けられる(Mockel et al., 2011)。BBSは、現在までに同定された少なくとも17の遺伝子を伴う異種状態である:BBS1からBBS17。全てのBBS遺伝子は、繊毛生合成及び/又は機能に関連している(Fliegauf et al., 2007)。機能的には、7つのBBSタンパク質(BBS1、2、4、5、7、8、及び9)が、繊毛膜への小胞輸送において含まれるBBSomeと名付けられた安定な複合体を形成している(Nachry et al., 2007)。BBS6、10、及び12(シャペロニン様BBSタンパク質)を含むシャペロニン複合体は、BBSome組み立てを媒介する(Seo et al., 2010)。光受容体の結合繊毛(CC)は、修飾された一次繊毛である。それは、生合成的に活性な内節(IS)を、光感受性の外節(OS)へ連結する。結合繊毛は外節の成長及び維持のために必須である。なぜなら、OSにおいて必要とされる機能及び構造タンパク質のための唯一の輸送通路であるからである。
− 繊毛機能障害に関連する網膜変性の処置における使用のための本発明の医薬組成物;好ましくは、医薬組成物は、eIF2αの阻害剤、好ましくはグアナベンズ、ならびに、タンパク質BiPの発現及び/又は活性を増加させる化合物、好ましくはバルプロ酸、ならびに、場合により、カスパーゼ12の阻害剤、好ましくはペプチドAla−Thr−Ala−Asp(OMe)フルオロメチルケトンを含む;
− 繊毛病により誘導された小胞体ストレスを防止又は低下させるための使用のための本発明の医薬組成物;
− 繊毛機能障害に関連する網膜変性の処置のための薬物の製造のための、eIF2αの阻害剤、好ましくはグアナベンズ、及び、場合により、医薬的に許容可能な担体の使用;
− 繊毛機能障害に関連する網膜変性の処置のための薬物の製造のための、タンパク質BiPの発現及び/又は活性を増加させる化合物、好ましくはバルプロ酸、ならびに、場合により、医薬的に許容可能な担体の使用;
− 繊毛機能障害に関連する網膜変性の処置のための薬物の製造のための、カスパーゼ12の阻害剤、好ましくはペプチドAla−Thr−Ala−Asp(OMe)フルオロメチルケトン、及び、場合により、医薬的に許容可能な担体の使用;
− 繊毛機能障害に関連する網膜変性の処置のための薬物の製造のための、eIF2αの阻害剤、好ましくはグアナベンズ、タンパク質BiPの発現及び/又は活性を増加させる化合物、好ましくはバルプロ酸、及び、カスパーゼ12の阻害剤、好ましくはペプチドAla−Thr−Ala−Asp(OMe)フルオロメチルケトン、ならびに、場合により、医薬的に許容可能な担体の使用;
− 繊毛機能障害に関連する網膜変性の処置のための薬物の製造のための、eIF2αの阻害剤、好ましくはグアナベンズ、ならびに、タンパク質BiPの発現及び/又は活性を増加させる化合物、好ましくはバルプロ酸、場合により、カスパーゼ12の阻害剤、好ましくはペプチドAla−Thr−Ala−Asp(OMe)フルオロメチルケトン、ならびに、場合により、医薬的に許容可能な担体の使用;
− 繊毛病により誘導された小胞体ストレスを防止又は低下させるための薬物の製造のための上に記載する通りの使用;
− 特に、繊毛機能障害に関連する網膜変性の処置における同時、別々、又は連続使用のための組み合わせた製剤として、(a)eIF2αの阻害剤、好ましくはグアナベンズ、(b)タンパク質BiPの発現及び/又は活性を増加させる化合物、好ましくはバルプロ酸、ならびに(c)カスパーゼ12の阻害剤、好ましくはペプチドAla−Thr−Ala−Asp(OMe)フルオロメチルケトンからなる群より選択される少なくとも2つの化合物を含む生成物又はキット;
− 特に、繊毛機能障害に関連する網膜変性の処置における同時、別々、又は連続使用のための組み合わせた製剤として、(a)eIF2αの阻害剤、好ましくはグアナベンズ、ならびに(b)タンパク質BiPの発現及び/又は活性を増加させる化合物、好ましくはバルプロ酸、ならびに、場合により、(c)カスパーゼ12の阻害剤、好ましくはペプチドAla−Thr−Ala−Asp(OMe)フルオロメチルケトンを含む生成物又はキット;
− 特に、繊毛機能障害に関連する網膜変性の処置における同時、別々、又は連続使用のための組み合わせた製剤として、(a)eIF2αの阻害剤、好ましくはグアナベンズ、(b)タンパク質BiPの発現及び/又は活性を増加させる化合物、好ましくはバルプロ酸、ならびに(c)カスパーゼ12の阻害剤、好ましくはペプチドAla−Thr−Ala−Asp(OMe)フルオロメチルケトンを含む生成物又はキット;
− 特に、繊毛病により誘導された小胞体ストレスを防止又は低下させるための、同時、別々、又は連続使用のため組み合わせた製剤としての、上に記載する通りの生成物又はキット;
− それを必要とする被験者において、治療的に効率的な量の本発明の医薬組成物を投与することを含む、繊毛機能障害に関連する網膜変性を処置するための方法;好ましくは、医薬組成物は、eIF2αの阻害剤、好ましくはグアナベンズ、ならびに、タンパク質BiPの発現及び/又は活性を増加させる化合物、好ましくはバルプロ酸、ならびに、場合により、カスパーゼ12の阻害剤、好ましくはペプチドAla−Thr−Ala−Asp(OMe)フルオロメチルケトンを含む;
− それを必要とする被験者において、治療的に効率的な量の本発明の医薬組成物を投与することを含む、繊毛病により誘導された小胞体ストレスを防止又は低下させるための方法;好ましくは、医薬組成物は、eIF2αの阻害剤、好ましくはグアナベンズ、ならびに、タンパク質BiPの発現及び/又は活性を増加させる化合物、好ましくはバルプロ酸、ならびに、場合により、カスパーゼ12の阻害剤、好ましくはペプチドAla−Thr−Ala−Asp(OMe)フルオロメチルケトンを含む。
− それを必要とする被験者において、治療的に効率的な量の上に記載する通りの本発明の生成物又はキットを投与することを含む、繊毛機能障害に関連する網膜変性を処置するための方法;好ましくは、生成物又はキットは、eIF2αの阻害剤、好ましくはグアナベンズ、ならびに、タンパク質BiPの発現及び/又は活性を増加させる化合物、好ましくはバルプロ酸、ならびに、場合により、カスパーゼ12の阻害剤、好ましくはペプチドAla−Thr−Ala−Asp(OMe)フルオロメチルケトンを含む;
− それを必要とする被験者において、治療的に効率的な量の上に記載する通りの本発明の生成物又はキットを投与することを含む、繊毛病により誘導された小胞体ストレスを防止又は低下させるための方法;好ましくは、生成物又はキットは、eIF2αの阻害剤、好ましくはグアナベンズ、ならびに、タンパク質BiPの発現及び/又は活性を増加させる化合物、好ましくはバルプロ酸、ならびに、場合により、カスパーゼ12の阻害剤、好ましくはペプチドAla−Thr−Ala−Asp(OMe)フルオロメチルケトンを含む。
1.eIF2αの阻害剤ならびに/あるいはカスパーゼ12の阻害剤ならびに/あるいはタンパク質BiPの発現及び/又は活性を増加させる化合物を含む医薬組成物。
材料及び方法
網膜外植片
野生型動物は、C57BL/6バックグラウンド上であった。網膜外植片培養手順を、以前に記載された通りに行った(Reidel et al., 2006)。簡単には、15日齢のマウスを、断頭により屠殺し、眼を除去し、トリプシン(カタログ#25200−072、Gibco、Invitrogen、Paris、France)中で10分間にわたり37℃でインキュベートした。消化を、眼をDMEM + 10%ウシ胎仔血清(カタログ#31885−023及び10500−064、Gibco)中に移し、10分間にわたる4℃でのインキュベーションにより停止させた。眼を、6.5g/Lグルコースを添加したAme培地(カタログ#15230−097、Gibco)中で解剖した。最初に、強膜を慎重に除去し、眼球に付着した網膜色素上皮(RPE)を残した。角膜の縁を切開し、角膜、レンズ、及び硝子体を除去した。次に、4つの放射状切開を、網膜中に作り、十字形状を得た。網膜を、RPE側を下にしたニトロセルロース培養膜(カタログ#PICMORG50、Millipore、Molsheim、France)上に移し、B27添加剤(カタログ#17504−044、Gibco)、L−グルタミン(カタログ#35050−061、Gibco)、及び/又はペニシリン/ストレプトマイシン(カタログ#15240;Gibco)を添加したNeurobasal A培地(カタログ#108888−022, Gibco)中で培養した。外植片を、37℃の加湿5% CO2で維持した。Bbs12、Perk、Hri、又はロドプシンについてのshRNA配列を保有するレンチウイルスを使用した特異的な遺伝子サイレンシング(SantaCruz Biotechnology、Tebu Bio、Yvelines、France)を、全培地交換前に、培養培地中の20μlのウイルス懸濁液(1×105感染単位)を加えることにより、一晩実施した。感染した外植片を、次に、3日間にわたり、毎日の半培地交換を伴い、培養した。外植片を、より長く培養中で維持せず、異なる網膜層における非特異的なアポトーシスを回避した。薬理学的処置のために、2mMバルプロ酸(エタノール100%中に溶解したVPA;カタログ番号4543;Sigma-Aldrich)、25μMグアナベンズ(Me2SO中に溶解したGBZ;カタログ番号0889;Tocris Bioscience、Ellisville、MO)、10μMカスパーゼ12阻害剤(Me2SO中に溶解したINHと名付けた。合成ペプチドZ−Ala−Thr−Ala−Asp(O−メチル)−フルオロメチル−ケトン;カタログ番号PK−CA577−1079−100;Promokine、Heidelberg、Germany)を、単一処置のために、組み合わせ処置:GIV(GBZ 2.5μM + 1μM INH + 0.2mM VPA)又はGV(2.5μM GBZ + 0.2mM VPA)のために10倍希釈で加えた。薬物を、培養培地へのウイルス感染と同時に加えた。
光適応実験を、37℃で、外植片上で、遺伝子ノックダウンを許すための3日間の培養後に実施した。明暗実験のために、外植片を、4時間にわたり暗適応し、次に、発光ダイオードにより、30分間にわたり200ルクスに曝露した。明暗条件のために、外植片を、45分間にわたる暗適応前に、15分間にわたり200ルクスに曝露した。処置後、外植片を、使用した照明条件において、4%ホルムアルデヒドを用いて固定した。
Bbs12-/-マウスを、以前に記載された通りに生成した。Bbs12-/-マウスを、ヘテロ接合体動物を交配することにより得た。マウスを、12時間明/12時間暗サイクルの湿度及び温度が制御された部屋に収容し、適宜、餌及び水を用いた。抗アポトーシス処置のために、動物を、点眼を用いて、2〜4週齢で1日1回処置し、点眼は、GBZ 7.5μm及びカスパーゼ阻害剤500μmを左眼について含み、5%DMSOを右眼について含む。3〜4週齢に、離乳後、VPA又はGBZを、それぞれ5mg/mL及び50μmの濃度で飲料水中に加えた。点眼処置は2〜4週齢で達成され、全身処置は3〜4週齢で達成された。4週齢で、電気生理学的分析を実施し、網膜を分子分析のために回収した。
マウスを、記録前の12時間にわたり暗適応させた。それらの実験は、暗い赤色ライト下で実施した。マウスを、上のセクションにおいて記載する同じ麻酔混合物を用いて麻酔した。瞳孔を、アトロピン0.3%の点眼(カタログ# Atropine Alcon 0.3%、Alcon、Rueil-Malmaison、France)を用いて拡張させた。動物を、制御された加熱パッド上に置き、手順の間に37℃で維持した。参照電極を、頭部皮膚下に置き、バックグラウンド電極を、動物の尾中に挿入した。測定電極を角膜上に置き、角膜と金電極の間での接触を最適化した。1滴のメチルセルロースゲル(カタログ#Ocry-gel、TVM laboratories、Lempdes、France)を加えた。フラッシュを、最大出力318cd/m2を伴う発光ダイオード(Siem Biomedicale、Nimes、France)を備えた全体野を通じて送達した。暗順応ERGのために、フラッシュ時間が3〜5msまで変動し、最終的なフラッシュ出力は0.001〜1cd*s/m2であった。応答が、増幅、ろ過(1−300Hzバンドパス)、及びデジタル化した(Visiosystem;Siem Biomedicale)。a及びb波を、1−75Hzバンドパスを使用することにより測定し、振動電位をフィルタリングした。
全RNAを、Trizol(カタログ#15596−018、Invitrogen)を用いて抽出した。1μgの全RNAを、TURBO DNA-free Kit(カタログ#AM1907、Applied Biosystems、Villebon-sur-Yvette、France)を使用してDNAse処理し、次に、iScript cDNA合成キット(カタログ#170−8891、BioRad、Marne-la-coquette、France)を使用して逆転写した。プライマー(補足方法においてリストする)を、Qiagen(Courtaboeuf、France)から購入した。定量的PCRを、SYBR Green PCR Mix(カタログ#4367659、Applied Biosystems)を使用して、BioRad CFX96システム上で実施した。mRNA発現を、Gapdh RNA含量と比べて、BioRad CFXマネージャーソフトウェアを使用して表した。小胞体ストレスアレイのために、Custom TaqMand Array 96を、Applied Biosystemsから購入し、全てのテストされた遺伝子を、補足方法においてリストする。
RNAを、上に記載する通りに抽出し、逆転写した。cDNAを、以下のプライマーを使用したXbp1の非スプライス及びスプライス変異体の両方のPCR増幅のために使用した:5’−TTACGGGAGAAAACTCACGGC−3’(配列番号1)及び5’−GGGTCCAACTTGTCCAGAATGC−3’(配列番号2)(Lin et al., 2007)。PCRを、RedTaq DNAポリメラーゼ(カタログ# D4309−50UN、Sigma-Aldrich)を使用し、以下のサイクリングを使用して行った:5分間にわたる95℃−[1分間にわたる95℃−30秒間にわたる58℃−30秒間にわたる72℃]35サイクル−5分間にわたる72℃。
タンパク質を、Protease Inhibitors Complete Mini EDTA free(カタログ#11836 170001、Roche、Boullogne-Billancourt、France)、1mM NaVO4、及び25mM NaF(カタログ#S6508及びS7920、Sigma-Aldrich)を添加したRIPA緩衝液(150mM NaCl、50mM TrisHCl pH 8、0.1% Tween20、カタログ#P7653、T3253、93773、Sigma−Aldrich)中での溶解により得た。ダウンスホモジナイザーを使用した網膜解離後、サンプルを超音波処理し、タンパク質濃度を、Bradford試薬(カタログ#500−0006、BioRad)を使用して決定した。ウエスタンブロッティングのために、80μgの全タンパク質抽出物を、1レーン当たりに負荷し、ポンソーS染色を、シグナル定量化のための負荷対照として使用した。抗体結合を、SuperSignal West Femto Maximum Sensitivity Substrate(カタログ#34095、ThermoFisher)を使用して、Versadoc装置(BioRad)上で可視化した。シグナル定量化は、BioRadからのQuantityOneソフトウェアを使用して評価した。
サンプルを、カルノフスキー固定液中で固定し、1重量%容積の四酸化オスミウムを含む0.1Mカコジル酸緩衝液内で1時間にわたり4℃で後固定した。サンプルを、次に、等級アルコールを通して脱水し、Epon812樹脂中に包埋した。70nmの超薄切片を切り、酢酸ウラニル及びクエン酸鉛を用いて対比した。切片の写真を、Philips Morgagni 268D透過型電子顕微鏡を使用して作った。
使用した一次抗体:ウサギポリクローナル抗BBS10(カタログ#12421、ProteinTech)、マウスポリクローナル抗BBS12(カタログ#H00166369−Bo1P、Abnova、Colmar、France)、マウスモノクローナル抗ロドプシンRho−4D2(Hicks et al., 1986)、ウサギモノクローナル抗切断PARP、マウスモノクローナル抗eIF2アルファ、ウサギモノクローナル抗ホスホeIF2アルファ、ウサギモノクローナル抗BIP、マウスモノクローナル抗CHOP10(それぞれ、カタログ# 9544、#2103、#3597、#3177、#2895、全てを、Cell Signaling、Ozyme、Saint-Quentin-Yveline、Franceから購入)、マウスモノクローナル抗βチューブリン(カタログ# TUB−2A2、Euromedex、Souffeliweyersheim、France)、マウスモノクローナル抗γチューブリン(カタログ# ab11316−100、Abcam、Paris、France)、マウスモノクローナル抗アセチル化αチューブリン(カタログ#32−2700 Zymed laboratories、Invitrogen)。異なる二次抗体を、免疫蛍光実験のために使用した:ヤギ抗マウスFITC(カタログ#81−6511、Zymed laboratories)、ロバ抗ウサギTexas Red(カタログ# ab6800、Abcam)、抗マウスAlexa 594、抗ウサギFITC、ロバ抗ヤギIG−TR(カタログ#sc−2783、Santa Cruz)、ロバ抗ウサギIg−FITC(カタログ# sc−2090、Santa Cruz)、ウサギ抗マウスAlexa 488、ヤギ抗マウスFluor 594(カタログ# A−11059及びA−10032、Molecular Probes、Invitrogen)。
処置のために、マウスに、10週間にわたり、VPA 5mg/ml又はGBZ 50μM又は対照としてのDMSO 0.003%のいずれかを添加した水を用いて自由摂取で与えた。10週間の処置後、Hallemeesch et al., 2001において発表された通り、尿素合成の速度を測定した。簡単には、動物を、25μl/10グラム体重の麻酔混合物(100ml Domitor(カタログ# Domitor 1mg/ml、Janssen-Cilag、Issy-les-Moulineaux、France)+ 314mlケタミン(カタログ# Ketamine 1000、Virbac、Carros、France)+ 4ml 0.9% NaCl溶液)を用いて麻酔した。マウスを、制御された加熱パッド上に置き、手順の間、37℃で維持した。頸静脈内カテーテルを固定し、標識した尿素溶液を、初速4ml/時間で7分間にわたり、0.5ml/時間で次の2時間にわたり注入した。溶液は、24μmol NaHCO3(カタログ#S5761、Sigma-Aldrich)及び3.6μmol標識尿素(カタログ# COLM−4861−0.5、Cambridge Isotope Laboratories、Andover、USA)/10グラム体重を添加した0.9% NaClである。2時間の灌流後、血液を、大静脈(caveal vein)尾側から腎臓まで採取した。血液サンプルを12 000gで12分間にわたり遠心し、80μlの血漿を、尿素濃縮及びアミノ酸濃度のさらなる分析のために、6.4mgのスルホサリチル酸(カタログ# S7422、Sigma-Aldrich)を用いて沈殿した。血漿アミノ酸濃度を、o−フタルアルデヒド(o−phatalaldehyde)(Pierce)及び3−メルカプトプロピオン酸(Sigma-Aldrich)、Omnisphere3 C18カラム(Varian)、及び蛍光検出(Van Eijk et al., 1993)を用いたプレカラム誘導を伴う勾配逆相高速液体クロマトグラフィーにより測定した。血漿尿素濃度を、540nmでの吸光度測定を用いた製造業者の指示に従って、Sigma完全試薬キット血液尿素窒素テストを使用した比色法を使用して決定した。トレーサーを、タンデム液体クロマトグラフィー質量分析法を使用して、25μl血漿を分析することにより測定した。濃縮は、安定同位体の天然存在度について補正した、トレーサー−トレーシー比率として与える。検出は親断片化に基づいていた−質量及び電荷に関するイオン化及び娘検出。
網膜外植片におけるBbs12枯渇は、光受容体の異形に導く。
組織学的試験では、Bbs12-/-マウスが光受容体変性を提示することが明らかになった(図4a)。10週齢では、変異マウスにおいて、ONLはより薄く、重度に破壊されたOSが、TEMを使用して観察された。残存外節片が、正常な9+0構造を伴うディスク拡張及び稀な残留結合繊毛を有するように見えた。暗順応網膜電図(ERG)記録は、a及びb波の両方の振幅における有意な減少を4週齢という早期に証明した。10週齢での同じ記録は、フォトニック刺激への応答の全くの非存在をもたらした(図4b)。ロドプシン(図4c)及びアレスチン(図12)の両方が、ONL及びISにおいて誤って局在化され、Bbs12-/-網膜におけるICT欠損を描写している。本発明者らは、ヌル網膜においてERストレス遺伝子発現を測定した。カスパーゼ3及びカスパーゼ12ならびにChop10がBbs12-/-網膜において上方調節された(図4d)。これは、光受容体細胞におけるER嚢拡大(図4c)により伴われた。
網膜変性は、出生後4週まで順調に進んでいた。Bbs12+/+及びBbs12-/-マウスにおけるアポトーシス核の存在量における発生上の変化を試験することにより、本発明者らは、最初に、生後12〜14日目の間での細胞死におけるBBS12依存的な増加を観察した。さらに、カスパーゼ3、カスパーゼ6、カスパーゼ12、Bip、及びChop10 mRNAの発現は、生後14日目のBbs12-/-網膜において上方調節され、それは、Bbs12-/-網膜におけるBiP及びCHOP10タンパク質含量の増加と相関した。これらのデータでは、ERストレスが、BBS12枯渇網膜において活性化されるとのエクスビボでの知見を検証する。
網膜外植片を使用して、本発明者らは、Bbs12の非存在において光受容体アポトーシスに導く機構を分析した。このモデルは、ISにおけるOS分子蓄積を提示し、光受容体における大量のICT欠損を強調する。ISにおけるタンパク質蓄積は、本発明者らが、ERストレスを検討することに導き、それは、ERの内腔におけるタンパク質の病理学的蓄積により誘発されることが公知である。3つの異なるトランスデューサーが、異なる経路を介してUPRを媒介しうる(Walter et al., 2011):転写調節によるATF6(活性化転写因子6)、タンパク質負荷の減少によるPERK、及びmRNA分解によるIRE1(イノシトール要求酵素1)。本発明者らのモデルにおいて、UPR応答がPERKにより駆動され、本発明者らが、PERK媒介性UPR応答からの特異的な、eIF2αリン酸化を強調した通りである。しかし、他の細胞ストレスが、eIF2αリン酸化を誘導することができる:4つのキナーゼが公知である(EIF2AK 1−4と名付けられ、また、PERK、HRI、PKR、及びGCN2として公知である)。PERKはUPRに関連し(Harding et al., 2000)、GCN2はアミノ酸飢餓及びUV損傷条件において活性化され(Harding et al., 2000)、酸化ストレス及びヘム欠乏中のHRI(Berlanga et al., 1998)及びPKR活性化がウイルス感染により誘導された(Lu et al., 1999)。shCtl及びshBbs12外植片は、両方とも、同じウイルス力価を用いて処置したため、本発明者らは、PKRが含まれるキナーゼではないと仮定した。培養条件はGCN2の活性化を除外した。なぜなら、培地は、アミノ酸飢餓を回避するために十分に富んでいたからである。本発明者らは、光受容体細胞死の由来である酸化的ストレスを除外することができなかった。本発明者らは、Bbs12及びHriのダブルノックダウンを実施したが、評価した遺伝子又はアポトーシス率における有意な変化は観察されなかった(図9)。反対では、本発明者らは、PERK不活化が、ERストレス媒介を抑止することを実証したが、UPR誘導性eIF2αリン酸化を描写している。
Claims (5)
- 繊毛機能障害に関連する網膜変性の処置における使用のための、eIF2αの阻害剤であるグアナベンズ、タンパク質BiPの発現及び/又は活性を増加させる化合物であるバルプロ酸、ならびに医薬的に許容可能な担体及び/又は賦形剤を含む、医薬組成物。
- 網膜変性が、バルデ・ビードル症候群、シニア−ローケン症候群、ジュベール症候群、サルディーノマインツァー症候群、センセンブレナー症候群、ジュンヌ症候群、メッケル−グルーバー症候群、アルストレーム症候群、MORM症候群、繊毛遺伝子中の変異により起こされるレーバー先天性黒内障、及びRPGR遺伝子中の変異により起こされるX連鎖網膜色素変性症からなる群より選択される繊毛病により誘導される、請求項1記載の医薬組成物。
- 繊毛機能障害に関連する網膜変性の処置における同時、別々、又は連続使用のための組み合わせた製剤として、eIF2αの阻害剤であるグアナベンスならびにタンパク質BiPの発現及び/又は活性を増加させる化合物であるバルプロ酸を含む製剤。
- 局所、経口、皮内、非経口、及び/又は眼内投与のために適した、請求項1又は2記載の医薬組成物又は請求項3記載の製剤。
- 眼投与に、好ましくは局所眼又は眼周囲投与に適した、請求項1又は2記載の医薬組成物又は請求項3記載の製剤。
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